Name: Paw-slepen: a Novel, Gevoelig Analyse van de Muis Cilinder Test (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-04-29T16:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 14 s
Description: Leer een gevoelige analyse van pootslepen bij muizen in de cilindertest voor neurowetenschappelijk onderzoek naar hersenletsel. Deze methode detecteert motorische tekorten betrouwbaarder dan traditionele voorpootasymmetrie-analyse.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

We danken de heer John Crowell en de heer Terry Upshall om hun technische expertise en ondersteuning bij de fotografie en videografie. Dit werk werd ondersteund door exploitatiesubsidies voor JLV van de Canadese Institutes of Health Research en de Research en Development Corporation van Newfoundland en een Hart &amp; Stroke Foundation van Canada Canadese Partnership for Stroke Recovery Catalyst subsidie. RBR was een ontvanger van een Keith Griffiths Memorial Heart &amp; Stroke Foundation Graduate Scholarship.

Ethics statement: Alle experimenten werden goedgekeurd door Memorial Universiteit van Animal Care Ethische Commissie van Newfoundland&#39;s volgens de richtlijnen van de Canadese Raad van Animal Care. 1. Muizen <ol><li> Gebruik volwassen muizen. In deze studie werden volwassen mannelijke FVBN muizen (n = 10) tussen 2-4 maanden gebruikt. Huis muizen op een 12:12 hr omgekeerde licht-donker cyclus en bieden standaard knaagdieren chow en water ad libitum. </li></ol> 2. Materialen Vereist voor de Cilinder Test <ol><li> Zorg voor een tafel met een transparante top naar de cilinder testen filmen. De afmetingen van de tafel zijn irrelevant, de top moet plexiglas of glas zijn, en dat er genoeg ruimte een spiegel onder de tabel positie. Dit maakt de muis worden gefilmd van onderen. Gebruik een spiegel onder de tafel om het beeld door de cilinder te reflecteren. Als alternatief gebruikt een omgekeerd camera indien beschikbaar. De afmetingen van de tabel die in dit protocol zijn 54 x 56 x 66,5 cm (BxDxH) met een 51 x 51cm boven (bxl). </li><li> Zorg voor een spiegel. De afmetingen van de spiegel die in dit protocol zijn 34 x 58 cm (bxl). </li><li> Zorg voor een transparant / plexiglas cilinder voor de muis om in te voeren. De afmetingen van de cilinder die in dit protocol zijn 17,5 cm hoog, 8,8 cm ID, 9,5 cm OD met een wanddikte van 0.35cm. Een groter cilinder worden om bijvoorbeeld het actieve muizenstammen. </li><li> Plaats de cilinder op het tafelblad en filmen de reflectie in de onderstaande spiegel. </li><li> Een videocamera en statief vereist. Video&#39;s opnemen op ongeveer 650Kb / s, die ongeveer is 190MB per 5 min van de cilinder video. Zorg ervoor dat de camera een zoom-functie zodat de cilinder omvat het gehele gezichtsveld. OPMERKING: De videocamera gebruikt in dit protocol is een Sony DCR-SR42, 40x optische zoom, 2,000x digitale zoom, 680kpix die standaard definitie, NTSC interlaced video gebruikt). </li><li> Verkrijgen van software voor analyse - een media-player met video-ondersteuning en afspeelsnelheid modulatie. De mediaspeler gebruikt in dit protocol is de VLC Media Player v2.1.2. </li><li> Zorg voor een computer met een besturingssysteem kunnen draaien de mediaspeler en een monitor. </li><li> Elektronische opslag van video vereist. Download video&#39;s naar een externe harde schijf of kopiëren naar dvd&#39;s voor de lange termijn opslag. NB: Bij 190MB per video, zal 84 sessies past op een 16 GB SD-kaart en 168 sessies zal passen op een 32 GB SD-kaart. Door de relatieve inexpensiveness SD media en de onzekerheid in hoeveel tijd sommige muizen vereisen 20 rears voltooien, wordt een 32 GB kaart aanbevolen. In de huidige studie werden de video&#39;s gekopieerd van de camera naar een 2TB externe harde schijf en vervolgens gekopieerd naar dvd&#39;s als back-up. </li></ol> 3. experimentele opstelling van de Cilinder Test <ol><li> Bevestig spiegel onder de tafel in een hoek van 45 graden naar het tafelblad. Doe dit met behulp van twee steunbeugels aan de tafelpoten aan support de bovenkant en onderkant van de spiegel resp. Beugel locaties worden vermeld in een zij-aanzicht over de tafel (Figuur 1A) en een gezicht- aanzicht over de tafel (Figuur 1B). </li><li> Plaats de cilinder in het midden van de tafel. Trek vier equidistante lijnen waar de cilinder zit op de tafel met een zwarte marker (Sharpie), zodat de cilinder kan worden opgetild en weer in dezelfde positie (figuur 2). Uitwerking daarvan op de onderzijde van de transparante tafelblad kan het tafelblad te reinigen tussen dierproeven zonder oplossen van de marker inkt. </li><li> Bevestig de camera en statief. Richt de camera op de spiegel, zodat het beeld direct op zoek is door de loop van de cilinder. Controleer de volledige binnenwand van de cilinder zichtbaar en ongehinderd door de basis (figuur 3). Zie een zijdelingse weergave van de configuratie, inclusief de relatieve hoek van de camera en spiegel instelling, van boven (figuur 4A) en dehet niveau van de tafel, zoals een muis kweken (figuur 4B). </li><li> Bereid cue kaarten aan elke muis voorafgaand aan het filmen te identificeren. Zorg ervoor dat de kaarten omvatten gewoonlijk een identificatienummer voor elke muis, het tijdpunt van de test (bijv., 3 dagen na behandeling) en de datum van de filmen sessie. Laat de behandelde groep op de cue-kaart niet inbegrepen om ervoor te zorgen de experimentator wordt verblind. </li><li> Film in standaard indoor lichtomstandigheden als dit lichtniveau is nodig om duidelijk de muisbewegingen rond de cilinder. OPMERKING: Indien beschikbaar filmen in het donker met een rood licht camera kan volstaan, maar zou men eerst moeten testen of poot accenten en sleept zijn duidelijk zichtbaar voor de kwantificering. </li></ol> 4. Uitvoering <ol><li> Start filmen. Geef het juiste muis cue-kaart in de voorkant van de camera lens. </li><li> Laat de muis in de cilinder van de open top direct na het filmen van de cue-kaart. </li><li> Begin met het filmen van de muis. Ruis te minimaliseren in deze tijd, zoals muizen interesse kunnen verliezen in het verkennen als geschrokken. </li><li> Neem de muizen achterzijde naar de cilinder te verkennen. Vastleggen van de video totdat de muis voert een minimum van twintig opsteekt. OPMERKING: Een achterzijde ontstaat wanneer beide voorpoten verliest het contact met de vloer en de muis staat op zijn achterste benen. </li><li> Veeg tafelblad en cilinder met een geschikt reinigingsmiddel tussen elke muis te saneren en te verwijderen muis geuren. </li><li> Invriezen is wanneer muizen stoppen verkennen en blijven rustig zitten op handen en voeten voor ongeveer 5 min. Als muizen bevriest voor twintig rears voordoen, kan het noodzakelijk zijn ze uit de cilinder verwijderd voor 10-20 min vóór hervatting van de proef. Als muizen niet twintig steigert presteren, worden ze verwijderd uit de studie. LET OP: In onze ervaring, muizen hebben nooit moest worden uitgesloten als gevolg van het falen van de cilinder te verkennen. </li></ol> 5. Evaluatie van de Cilinder Test met behulp van Paw-SlepenAnalyse <ol><li> Speel de video op een snelheid van tussen 0,25x en 0,67 x normale snelheid, afhankelijk van hoe snel de muis verkent de cilinder. Gebruik een mediaspeler die langzamer afspelen snelheden biedt. </li><li> Kwantificeren van het totale aantal poot accenten. Paw raakt optreden wanneer de muis rears (figuur 5A), tegen de zijkant van de cilinder (figuur 5B), vervolgens stijgt af met beide poten tegelijkertijd (figuur 5C) en gebieden (figuur 5D). De poot kan al dan niet met de cilinderwand een volledige handpalm, maar enig contact met de cilinderwand moet plaatsvinden. Beoordelen poot raakt door het tellen van het aantal keren dat de muis maakt contact (hoe kort) met de cilinder wand met een of beide voorpoten terwijl je op zijn achterste benen tijdens een achterzijde. Merk op dat het contact met de cilinder wand wordt alleen geteld als een &#39;poot touch &quot;of&quot; poot-drag &quot;als de muis is in een achterste positie - staandop zijn achterste benen met beide voorpoten off van het tafelblad. Als de muis blijft in een 3-punts houding - zowel achterpoten en een voorpoot op het tafelblad en gaat aan de muur te raken met de gratis poot - dit wordt niet geteld als een poot touch. Muizen kunnen achter en raak de cilinderwand met een enkele voorpoot en deze wordt geteld als een poot touch. Let op: een muis kan ook zijn lichaam te bewegen rond de cilinder tijdens een achterste, het maken van meer dan twee contactpersonen. Deze contacten zijn geteld - één voor elke linker voorpoot aanraking en één voor elke juiste voorpoot touch. </li><li> Kwantificeren van het aantal poot-sleept. Paw-slepen gedrag is verschillend van normale poot accenten. <ol><li> Als de poot contact met de cilinder muur met een volledige open palm (figuur 6B), zal het langzaam weg te vallen van de muur, vaak met een lichte trilling. De beweging begint met de cijfers slepen tegen de cilinderwand hetzij in een mediale of neerwaartse richting (figuur 6C) voor afvallend completEly (figuur 6D). De muis zal dan demonteren met zijn onaangetast poot (figuur 6E) voor de landing op handen en voeten (figuur 6F). Dit wordt beschouwd als een poot-drag en moet worden geteld in een telling. </li><li> Als de poot niet raakt de cilinderwand met een volledig open palm, zal de cilinderwand met cijfers weid alvorens te vallen vanaf de cilinderwand. Evenzo kan een muis zijn poot te slepen tegen de cilinderwand, maar het niet helemaal loslaat voordat demontage. Deze worden zowel beschouwd poot-sleept evenals accenten en moet worden geteld als zowel in een telling. </li><li> De poot kan ook langs de cilinderwand slepen terwijl een muis verkent de cilinder. In dit geval wordt de poot het verdraaien van de romp van de muis volgen links of rechts van zijn oorspronkelijke positie (figuur 7A-D) onderzoekt Voor het uitbouwen (Figuur 7E). Dit wordt niet beschouwd als een poot-drag, omdat het afhankelijk is van de muis willekeurig te kiezeneen richting te verkennen en hangt niet af van welke corticale halfrond is beschadigd. </li></ol></li><li> Paw-sleept worden uitgedrukt als een percentage van de poot-sleept per totale aantal poot raakt tijdens een sessie. Express het aantal poot-sleept als een percentage van de totale poot contacten voor elke voorpoot afzonderlijk. </li><li> Touches resulteert in een poot-drag tellen als een poot-drag en een vleugje tegelijk. Dus als een muis sleept zijn poot telkens zijn poot in aanraking met de cilinderwand, wordt de poot slepen percentage uitgedrukt als 100%. </li></ol> 6. Extra Experimental Ontwerp Tips <ol><li> Om externe variabelen te minimaliseren: <ol><li> Test de muizen op hetzelfde moment op elke testdag. Test de muizen in hun kielzog cyclus. Het houden van muizen op een 12 hr omgekeerde lichtcyclus vergemakkelijkt prestaties. </li><li> Muizen kunnen aarzelen om de cilinder indien benadrukt hetzij door ruis of een nieuwe omgeving te verkennen. Het testen van muizen in hun dierlijke bedrijf of een kamer hebben ze bEen vertrouwd met stress vermindert. Dit kan gebeuren als de kamer is luidruchtig, als de muis is verdrongen voorafgaand aan het invoeren van de cilinder of als gevolg van gewenning. Opmerking: Het testen moet eenmaal vóór experimentele manipulatie worden uitgevoerd om te dienen als een nulmeting. Na manipulatie, het testen van dagen zijn naar keuze van de experimentator, maar het is aangeraden om een ​​te groot aantal van vorderingen op de cilinder over een korte periode van tijd te vermijden. </li><li> Muizen kunnen aarzelen om achter na 6-7 blootstellingen aan de cilinder te worden. Voor de huidige studie werden de muizen getest in de cilinder voor een totaal zeven keer, vóór ischemie en op dagen 1, 3, 7, 14, 21 en 28 na de operatie. LET OP: In deze studie gebruikten we de FVBN muizenstam. We hebben eerder geteste C57BL / 6 muizen in de cilinder en waargenomen-paw slepen gedrag na een ET-1 ischemisch letsel (data niet getoond). C57BL / 6-muizen waren actiever dan FVBN muizen, indien gehouden en regelmatig sprong op de rand van de cilindervoordat klimmen uit. Taller cilinders moet worden gebruikt als muizen proberen te ontsnappen door te springen. </li></ol></li></ol> 7. Endotheline-1 Chirurgie en Infarct Volume Metingen <ol><li> Voer Endotheline-1 operatie en infarct volume metingen volgens eerder gepubliceerde protocollen 4. Om de voorste voorpoot motorische cortex richten, moet elke muis drie ET-1 injecties op de volgende coördinaten: (i) 0,7 anteriorposterior (AP) of 1,5 mediaal-lateraal (ml) / - 1,2 dorsale-ventrale (DV), ( ii) 0,4 AP / 1,25 ml / - 1,2 DV en (iii) 0,1 AP / 1,75 ml / DV -1,2 4. </li></ol> 8. Statistische analyse <ol><li> Een twee-weg herhaalde metingen variantieanalyse (ANOVA) wordt aanbevolen om het percentage-paw slepen voor de getroffen en niet-aangetaste poten in verschillende tijdstippen geanalyseerd. </li></ol>

<ol><li>Schallert, T., Fleming, S. M., Leasure, J. L., Tillerson, J. L., Bland, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CNS+plasticity+and+assessment+of+forelimb+sensorimotor+outcome+in+unilateral+rat+models+of+stroke%2C+cortical+ablation%2C+parkinsonism+and+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">CNS plasticity and assessment of forelimb sensorimotor outcome in unilateral rat models of stroke, cortical ablation, parkinsonism and spinal cord injury.</a> Neuropharmacology. 39, 777-787 (2000).</li>
<li>Kolb, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+factor-stimulated+generation+of+new+cortical+tissue+and+functional+recovery+after+stroke+damage+to+the+motor+cortex+of+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Growth factor-stimulated generation of new cortical tissue and functional recovery after stroke damage to the motor cortex of rats.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 27 (5), 983-997 (2007).</li>
<li>Windle, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+analysis+of+four+different+methods+of+producing+focal+cerebral+ischemia+with+endothelin-1+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">An analysis of four different methods of producing focal cerebral ischemia with endothelin-1 in the rat.</a> Exp Neurol. 201 (2), 324-334 (2006).</li>
<li>Roome, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+reproducible+Endothelin-1+model+of+forelimb+motor+cortex+stroke+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">A reproducible Endothelin-1 model of forelimb motor cortex stroke in the mouse.</a> J Neurosci Methods. 233, 34-44 (2014).</li>
<li>Tennant, K. A., Jones, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensorimotor+behavioral+effects+of+endothelin-1+induced+small+cortical+infarcts+in+C57BL%2F6+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Sensorimotor behavioral effects of endothelin-1 induced small cortical infarcts in C57BL/6 mice.</a> J Neurosci Methods. 181 (1), 18-26 (2009).</li>
<li>Wang, Y., Jin, K., Greenberg, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurogenesis+associated+with+endothelin-induced+cortical+infarction+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Neurogenesis associated with endothelin-induced cortical infarction in the mouse.</a> Brain Res. 1167, 118-122 (2007).</li>
<li>Baskin, Y. K., Dietrich, W. D., Green, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+effective+behavioral+tasks+for+evaluating+sensorimotor+dysfunction+following+traumatic+brain+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Two effective behavioral tasks for evaluating sensorimotor dysfunction following traumatic brain injury in mice.</a> J Neurosci Methods. 129 (1), 87-93 (2003).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+behavioral+testing+after+focal+ischemia+in+the+mouse%3A+functional+recovery+and+the+effects+of+gender%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Chronic behavioral testing after focal ischemia in the mouse: functional recovery and the effects of gender.</a> Exp Neurol. 187 (1), 94-104 (2004).</li>
<li>Clarke, J., Ploughman, M., Corbett, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+qualitative+and+quantitative+analysis+of+skilled+forelimb+reaching+impairment+following+intracerebral+hemorrhage+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">A qualitative and quantitative analysis of skilled forelimb reaching impairment following intracerebral hemorrhage in rats.</a> Brain Res. , 204-212 (2007).</li>
<li>Montoya, C. P., Campbell-Hope, L. J., Pemberton, K. D., Dunnett, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+%27staircase+test%27%3A+a+measure+of+independent+forelimb+reaching+and+grasping+abilities+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">The 'staircase test': a measure of independent forelimb reaching and grasping abilities in rats.</a> J Neurosci Methods. 36 (2-3), 219-228 (1991).</li>
<li>Farr, T. D., Whishaw, I. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+and+qualitative+impairments+in+skilled+reaching+in+the+mouse+%28Mus+musculus%29+after+a+focal+motor+cortex+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Quantitative and qualitative impairments in skilled reaching in the mouse (Mus musculus) after a focal motor cortex stroke.</a> Stroke. 33 (7), 1869-1875 (2002).</li>
<li>Tennant, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+vermicelli+and+capellini+handling+tests%3A+simple+quantitative+measures+of+dexterous+forepaw+function+in+rats+and+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">The vermicelli and capellini handling tests: simple quantitative measures of dexterous forepaw function in rats and mice.</a> J Vis Exp. (41), (2010).</li>
<li>Clarkson, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AMPA+receptor-induced+local+brain-derived+neurotrophic+factor+signaling+mediates+motor+recovery+after+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">AMPA receptor-induced local brain-derived neurotrophic factor signaling mediates motor recovery after stroke.</a> J Neurosci. 31 (10), 3766-3775 (2011).</li>
<li>Clarkson, A. N., Huang, B. S., Macisaac, S. E., Mody, I., Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reducing+excessive+GABA-mediated+tonic+inhibition+promotes+functional+recovery+after+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Reducing excessive GABA-mediated tonic inhibition promotes functional recovery after stroke.</a> Nature. 468 (7321), 305-309 (2010).</li>
</ol>

De auteurs hebben geen concurrerende financiële belangen.

De belangrijkste punten om vast te stellen wanneer het kwantificeren-poot te slepen gedrag in de cilinder-test zijn de volgende: i) het kwantificeren van het aantal poot-sleept versus totale poot accenten voor elke poot vóór hersenletsel naar een basislijn vast te stellen; ii) kwantificeren van het aantal poot-sleept versus totale poot accenten voor elke poot na de ischemische verwonding; en iii) onderscheid te maken tussen een poot-slepen en de zijwaartse beweging van de poot langs de cilinderwand tijdens laterale rota...

Het doel van de neurale regeneratie strategieën is om zowel weefselherstel en functioneel herstel te tonen. Functioneel herstel wordt gewoonlijk geëvalueerd gedragstesten die functionele gebreken gemeten, in dit geval met motorische vaardigheden die op schade aan de specifieke hersengebieden. Traumatisch hersenletsel of ischemische schade aan de sensorimotorische voorpoot gebied van de cortex kan worden aangetoond door een aantal gedragstesten. Een dergelijke test wordt de cilinderproef veelvuldig gebruikt in ratten functionele gebreken beoordelen voorpoot activiteit 1. De test heeft een lage set-up kosten waarvoor slechts een cilinder, camera en een tafel met een transparante top. Het is gemakkelijk om te dienen als het is gebaseerd op de natuurlijke verkennende gedrag van knaagdieren, dus pre-training en voeding ontbering of beloningen zijn niet nodig. Ondanks deze vele voordelen, wordt de cilinder-test onderbenut te voorpoot tekorten beoordelen in muizen na focale verwondingen aan de voorpoot sensorimotor cortex, die wij toeschrijven aan de analyse van muis volledig in de cilinder proef. Voorpoot asymmetrie is de klassieke maatstaf voor de analyse van de cilinder-test. Wanneer geplaatst in de cilinder, knaagdieren natuurlijk de muren van de cilinder te verkennen met het grootbrengen op hun achterpoten en het aanraken van de cilinderwanden met hun voorpoot poten voor posturale balans. Het aantal poot raakt de wand bij elke voorpoot gemakkelijk gekwantificeerd door filmen knaagdieren tijdens deze verkenning van de cilinder. Forelimb asymmetrie ontstaat wanneer de aangetaste poot voorpoot maakt minder raakt met de wand dan de gezonde voorpoot poot en illustreert schade aan de contralaterale sensorimotorische cortex. Bij ratten intra-corticale injecties van de vasoconstrictieve agens, Endotheline (ET-1), in de voorpoot sensorimotorische cortex veroorzaakt een focale ischemische laesie waardoor gedragsgebreken in de contralaterale voorpoot. Tekorten in contralaterale voorpoot gebruik gemakkelijk worden gedetecteerd als veranderingen in de forelimb asymmetrie in de cilinder-test bij ratten 1-3. In tegenstelling tot ratten Veranderingen in voorpoot asymmetrie zijn variabel en minder consistent bij muizen na vergelijkbare ET-1 injecties 4-6. Hier laten we zien een nieuwe analyse van de voorpoot gedrag in de cilinder-test - analyse van de poot te slepen gedrag. We hebben eerder aangetoond dat paw slepen analyse is een gevoeligere maat voor beschadiging van de voorpoot sensorimotorische cortex in muizen dan de klassieke voorpoot asymmetrie analyse en derhalve is toepasbaar op verschillende focale corticale letsel modellen. Onderzoek van hoe de voorpoot contact met de cilinder wand volgende ischemische schade aan de voorpoot sensomotorische cortex bleek een roman gedrag in muizen - poot-slepen 4. Een poot-drag optreedt wanneer een muis staat op zijn achterste benen om de cilinderwand verkennen vervolgens sleept zijn getroffen (contra-letsels) poot langs de cilinderwand naar zijn middellijn of de muur, terwijlhaar onaangetast forepaw biedt posturale steun tegen de muur. Paw-sleept zelden in uninjured muizen dan ook het uiterlijk van een poot-drag is een positieve indicator van de schade aan de voorpoot sensomotorische cortex 4. We hebben eerder gekwantificeerd-paw slepen gedrag bij muizen na ET-1 ischemische schade aan de voorpoot sensorimotorische cortex en hebben aangetoond langdurige paw slepen gedrag in muizen tot twee weken na een beroerte 4. Hier laten we zien dat-poot te slepen gedrag wordt volgehouden tot vier weken na een beroerte. Analyse van-poot te slepen gedrag biedt een nieuwe en gevoelig instrument voor de beoordeling focale ischemische schade aan de voorpoot sensomotorische cortex bij muizen. Zijn goedkope set-up, gemak van toediening en scoren maken dit een eenvoudige, maar toch nuttig instrument om voorpoot behavioral tekorten snel evalueren in muizen.

<table><tbody><tr><td>Plexi-glass cylinder</td><td></td><td></td><td>17,5 cm hoog, 9,5 cm buitendiameter, 8,8 cm binnendiameter, wanddikte 0,35 cm (of 3,5 mm)</td></tr><tr><td>bekijktafel</td><td></td><td></td><td>54x56x66,5 cm (breedte x lengte x hoogte), tafelblad is een 51x51 cm plaat van plexiglas.</td></tr><tr><td>spiegel</td><td></td><td></td><td>34x58 cm spiegel</td></tr><tr><td>videocamera</td><td>Sony</td><td>DCR-SR42</td><td>Videocamera met ingebouwde opslag, SD functionaliteit, 40x optische zoom</td></tr><tr><td>computer</td><td>Dell</td><td>Optiplex 760</td><td>Processor: Intel, 3,0 GHz, Geheugen 4,00GB (RAM)&nbsp;</td></tr><tr><td>computermonitor</td><td>Samsung</td><td>S22C350H</td><td></td></tr><tr><td>Excel (Microsoft Office Professional Plus)</td><td>Microsoft</td><td>v14.0.7106.5003</td><td></td></tr><tr><td>VLC Media Player</td><td>Video LAN</td><td>v2.1.2</td><td>Mediaspeler met speeltempo modulatie en video ondersteuning</td></tr><tr><td>Externe harde schijf</td><td>Western Digital</td><td>WDBAAU0020HBK-01</td><td>2 TB</td></tr></tbody></table>

paw-slepen: a novel, gevoelig analyse van de muis cilinder test

Paw-Dragging: a Novel, Sensitive Analysis of the Mouse Cylinder Test

De cilinder test wordt routinematig gebruikt om focale ischemische schade aan de voorpoot motorische cortex bij knaagdieren voorspellen. Wanneer geplaatst in de cilinder, knaagdieren onderzoeken door het fokken en het aanraken van de muren van de cilinder met hun voorpoot poten voor posturale steun. Naar aanleiding van ischemische schade aan de voorpoot sensomotorische cortex, ratten rekenen zwaarder op hun onaangetast voorpoot poot voor posturale steun resulteert in minder aanrakingen met hun aangedane poot die wordt genoemd voorpoot asymmetrie. In tegenstelling, focale ischemische schade in de hersenen van muizen niet te resulteren in vergelijkbare consistente tekorten in voorpoot asymmetrie. Terwijl voorpoot asymmetrie tekorten zelden worden waargenomen, doen muizen een roman gedrag na een beroerte genoemd &quot;poot-slepen&quot; te tonen. Paw-slepen is de neiging om een ​​muis te slepen haar aangedane poot langs de cilinderwand in plaats van direct te duwen off van de muur bij het demonteren van een achterste naar een vier-legged houding. We hebben eerder aangetoond datpoot-slepen gedrag is zeer gevoelig voor kleine corticale ischemische verwondingen aan de voorpoot motorische cortex. Hier bieden we een gedetailleerd protocol voor-poot slepen analyse. We definiëren wat een poot-drag is en demonstreren hoe-poot te slepen gedrag te kwantificeren. De cilinder test is een eenvoudige en goedkope test te beheren en vereist geen pre-training of voedsel ontbering strategieën. Bij het gebruik van-poot te slepen analyse met de cilinder test, het vult een niche voor het voorspellen van corticale ischemische verwondingen zoals photothrombosis en endotheline-1 (ET-1) geïnduceerde ischemie - twee modellen die worden steeds populairder en produceren van kleinere focale blessures dan midden cerebrale slagader occlusie. Tenslotte meet-poot te slepen gedrag in de cilinder test zal studies van functioneel herstel na corticale letsel met behulp van een grote cohort van transgene muizenstammen, waar vorige voorpoot asymmetrie analyse heeft nagelaten om consistente tekorten op te sporen mogelijk te maken.

We hebben eerder aangetoond dat-poot te slepen gedrag verschijnt na een focale ischemische schade aan de voorpoot sensomotorische cortex en is een positieve indicator van schade 4. Intra-corticale injecties van ET-1 in de voorpoot sensorimotorische cortex werden gebruikt om een ischemisch letsel (figuur 8A, B) induceren. Deze studie onderzocht of-poot te slepen gedrag verlengd voor langer dan 14 dagen na het letsel voor zijn potentieel gebruik om functioneel herstel te evalueren. Muizen werde...

Klassieke voorpoot asymmetrie analyse van de cilinder test wordt routinematig gebruikt om behavioral tekorten in ratten na hersenletsel of een beroerte te beoordelen; echter niet consistent tekorten sporen bij muizen. Deze studie toont aan dat het kwantificeren van poot-slepen gedrag is een meer gevoelige analyse van hersenletsel bij muizen.

Paw-slepen: a Novel, Gevoelig Analyse van de Muis Cilinder Test

The cylinder test is routinely used to predict focal ischemic damage to the forelimb motor cortex in rodents. When placed in the cylinder, rodents explore ...

Hallo, ik ben dr. Jackie Vander Loot. Hi, en mijn naam is Brian Room. Vandaag bespreken we een gevoeligheidsanalyse van de cylinder test paw.Dragging.De cilindertest is een test voor de motorische functie van de vier ledematen bij knaagdieren. Bij deze test verkennen muizen een plexiglas cilinder door zich op te richten en hun vier poten te gebruiken voor posturale ondersteuning tegen de wand van de cilinder. Door het gebruik van de vier poten te onderzoeken terwijl de muis de cilinder verkent, kunnen we bepalen of de muis motorische tekorten heeft.Specifiek vergelijken we het gebruik van elke voorpoot voor en na het infarct. Na een infarct wordt de voorpoot aan de contralaterale zijde van het beschadigde hemisfeer minder vaak gebruikt. Deze verandering in het gebruik van de aangetaste voorpoot ten opzichte van de niet-aangetaste voorpoot is een maat voor de asymmetrie van de voorpoten.Momenteel wordt de analyse van asymmetrie van de vier ledematen bij muizen en ratten na grote ischemische letsels, zoals occlusie van de middelste cerebrale arterie, gebruikt als gedragsmatige indicator voor een beroerte. In tegenstelling tot grote letsels wordt asymmetrie van de vier ledematen niet

paw-dragging-a-novel-sensitive-analysis-of-the-mouse-cylinder-test

Research

JoVE Journal

Behavior

Gedrag

De Vermicelli en Capellini Handling Tests van de voorpoot behendigheid profiteren van de natuurlijke neiging van knaagdieren om voedsel items met behulp van bekwame voorpootje en cijfers bewegingen te manipuleren. Dieren zijn gefilmd bij het behandelen van korte strengen van ongekookte droge pasta. Slow motion afspelen van video zorgt voor de kwantificering van voorpootje aanpassingen.

De Vermicelli en Capellini Handling Tests: Eenvoudige kwantitatieve metingen van behendige voorpootje functie in ratten en muizen

Protocollen worden aangeboden voor twee gevestigde motorische coördinatie taken, het versnellen rotarod en horizontale balk, ook twee tests ontwikkeld in Oxford onlangs, de statische staven en parallelle staven. Deze tests kunnen detecteren motorische stoornissen potentieel van interesse in hun eigen recht, maar ook als mogelijke variabelen in testen van andere gebieden van gedrag.

Meten Coördinatie Motor in Muizen

Een muismodel voor amyotrofische lateraal sclerose (ALS) is klinisch en gedragsmatig onderzocht. Als voorwaarde voor een begeleidende immunohistologische analyse de voorbereiding van het ruggenmerg wordt afgebeeld in detail.

Klinisch onderzoek en het ruggenmerg verwijderen in een muismodel voor Amyotrofische Lateraal Sclerose (ALS)

De ziekte van Parkinson en bewegingsstoornissen in het algemeen, gevoelig en betrouwbaar gedrag assays zijn essentieel voor het testen van nieuwe potentiële geneesmiddelen. We beschrijven hier een beheersbare batterij sensorimotorische tests voor muizen die gevoelig zijn voor verschillende mate van schade aan het nigrostriatale systeem en nuttig voor preklinische studies.

Beoordeling van Sensorimotor Functie in muismodellen van de ziekte van Parkinson

G presenteerde een beknopt batterij van neonatale motorische muistests. Met behulp van deze tests kunnen neonatale motorische tekorten worden aangetoond in een verscheidenheid aan neonatale motorische stoornissen. Door een gestandaardiseerde reeks tests te hebben, kunnen resultaten van verschillende onderzoeken worden vergeleken, wat een betere en nauwkeurige rapportage tussen groepen mogelijk maakt.

Een batterij van Motor Tests in een neonatale muis-model van Cerebral Palsy

Om de pathofysiologie van beroerte te begrijpen, is het belangrijk betrouwbare modellen. Dit document zal een van de meest gebruikte takt modellen beschrijven in muizen, genaamd de middelste cerebrale slagader occlusie (MCAo) model (ook aangeduid als de intraluminale filament of hechtdraad model) met reperfusie.

Chirurgische Aanpak voor midden cerebrale slagader occlusie en reperfusie Induced Stroke in Muizen

De precieze evaluatie van pijn reactie in een neuropatische diermodel is cruciaal voor de pathofysiologie van pijn ziekten onderzoeken en ontwikkelen van nieuwe analgetica. Presenteren we een gevoelige en objectieve methode om te bepalen van de zintuiglijke functie van het knaagdier hind paw door een geautomatiseerde gait analysesysteem.

Geautomatiseerde ganganalyse in muizen met chronische vernauwing blessure

We beschrijven de oprichting van een lymfkliertest model voor de ziekte van Parkinson met behulp van MPTP en gedrags evaluaties met behulp van cilinder en open veldproeven voor het meten van de motorische functie. We gebruiken dan levodopa een voorbeeldfunctie te laten zien hoe dit model in de studie van PD drugs van toepassing.

Gedrags evaluaties van spontane voortbewegen in een lymfkliertest MPTP-geïnduceerde ziekte Parkinson's Model

Het protocol van het goedkope bestaande uit voetafdruk analyse en opknoping vak test nadat terughoudendheid stress handig is voor het evalueren van de bewegingsstoornissen van muismodel.

Low-cost Protocol van voetafdruk analyse en opknoping vak Test voor muizen toegepast de terughoudendheid van de chronische Stress

De mechanische conflictvermijdingstest wordt gebruikt als een niet-reflexieve uitlezing van pijngevoeligheid bij muizen die kan worden gebruikt om affectieve-motiverende reacties in verschillende muispijnmodellen beter te begrijpen.

Mechanische conflictvermijdingstest om pijngedrag bij muizen te meten

Dit artikel presenteert een protocol voor het uitvoeren van het zeer translationele en onafhankelijk bewezen muis Stroke Unit (mSU) concept bij muizen met een grote beroerte. Het biedt ook een gestandaardiseerd protocol voor het uitvoeren van de focale experimentele beroerteschaal bij muizen, die de gedetecteerde focale tekorten van een beroerte evalueert, zelfs op de lange termijn.

Het Mouse Stroke Unit Protocol met gestandaardiseerde neurologische scores voor translationele onderzoeken naar muisberoertes

Leer een gevoelige analyse van pootslepen bij muizen in de cilindertest voor neurowetenschappelijk onderzoek naar hersenletsel. Deze methode detecteert motorische tekorten betrouwbaarder dan traditionele voorpootasymmetrie-analyse.

Paw-slepen: a Novel, Gevoelig Analyse van de Muis Cilinder Test

Meer video's verkennen