Name: Bloedafname van de Lateral staartader van de Rat (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-18T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 11 s
Description: Leer een stressarme bloedafnamemethode via de laterale staartader bij ratten voor neurofysiologisch onderzoek. Deze techniek minimaliseert pijn en maakt herhaalde bemonstering mogelijk voor betrouwbare biomarkeranalyses.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Wij danken Virginia Doherty en Junmei Yao voor technische ondersteuning. Dit onderzoek werd gefinancierd door NiMH (R01 MH084966), en het Amerikaanse leger Bureau Onderzoek en de Defense Advanced Research Projects Agency (verlenen W911NF-10-1-0059) naar KAG.

Alle experimenten werden uitgevoerd met volwassen mannelijke Long-Evans ratten. Alle procedures waren in overeenstemming met de Amerikaanse National Institutes of Health (NIH) Gids voor de Zorg en gebruik van proefdieren en werden goedgekeurd door de Institutional Animal Care en gebruik Comite van de Massachusetts Institute of Technology en de Animal Care en gebruik Beoordeling Office of de USAMRMC. 1. Voorbereiding <ol><li> Heparinise de catheter en spuit door het plaatsen van de beschermde naald in een 500 pl buis met heparine (1000 USP eenheden / ml) en vervolgens opzuigen en uitstoten heparineoplossing door de naald. <ol><li> Bevestig een vlinder katheter aan de spuit. Houd het schild over de naald van de katheter aan de scherpe punt te beschermen tegen schade. </li><li> Intrekken hoeveelheid heparine die iets groter is dan het volume van bloed dat wordt opgevangen. Maak de spuit en vul deze met lucht. </li><li> Re-bevestig de spuit aan de catheter en gebruik delucht om overtollig heparine oplossing te verdrijven; garanderen dat alleen sporen achterblijven in de buis, naald en spuit. </li><li> Plaats de steriele katheter, met de spuit nog steeds verbonden, op een steriel oppervlak. </li></ol></li><li> Snel zet de rat in een schone doek ervoor te zorgen dat de voor- en achterpoten zijn in een comfortabele positie en de ademhaling is onbeperkt. <ol><li> Zet de wrap met klittenband; ervoor te zorgen dat de uitwendige geslachtsorganen niet worden vernauwd. </li><li> Laat een helper voorzichtig en stevig beteugelen van de rat (buik en de basis van de staart) op een solide werk oppervlak met de staart opknoping van de rand van de teller. </li></ol></li></ol> 2. Blood Sampling <ol><li> Dompel de staart in 42 ° C water gedurende 40-50 sec aan de bloedvaten verwijden en droog de staart met een papieren handdoek. Zoek de staart ader te worden ontlucht (draai het hele lichaam met de staart om te voorkomen dat het verdraaien van de staart). Opmerking: Voldoende opwarming van de staart is van cruciaal belang voor de snelle Collection van een bloedmonster. Als de vasculatuur wordt vernauwd, juiste plaatsing van de katheter is lastig, en de bloedstroom wordt sterk verminderd. Een verwarmingselement kan worden gebruikt als alternatief voor onderdompeling in water. </li><li> Identificeer het bemonsteringspunt. Opmerking: De slagader ligt langs de mid-dorsale aspect van de staart; Gebruik dit niet voor bemonstering. <ol><li> Richt de linker en rechter staartaders die lateraal van de slagader liggen. Pigmentatie van de staart, die verschilt per stam en stijgt met de leeftijd, kunnen obscure deel van het vaatstelsel. Target een gedeelte van de ader in het onderste gedeelte van de staart. </li><li> Veeg het doelgebied met 2% chloorhexidine antiseptische oplossing. </li></ol></li><li> Maak onderdruk in de spuit en catheter door terugtrekken van de zuiger van nul tot ongeveer 50 pl. </li><li> Houd de staart zacht en stevig in de buurt van de tip om de staart recht gehele monstername houden. Zorg ervoor dat de bloedstroom niet wordt afgesloten door een te strakke grip.</li><li> Langzaam steek de katheter in de ader onder een kleine hoek van ongeveer 5 cm vanaf de punt van de staart. Als de ader is doorgedrongen, zal bloed vloeien in de katheter. Trekken langzaam de zuiger van de spuit om het gewenste volume bij een constante snelheid te verzamelen (~ 20 ul per sec). <ol><li> Raadpleeg de veterinaire personeel voor informatie over de maximale bloed volume dat kan worden verzameld. De maximale hoeveelheid bloed die moeten worden verzameld is afhankelijk van het gewicht en de gezondheidstoestand van de rat. Niet trekken meer dan 15% van het totale volume bloed in een periode van 14 dagen. Opmerking: Bloed is veel moeilijker te verzamelen van dieren die acuut werden benadrukt in de minuten voorafgaand aan de collectie proeven omdat stresshormonen vernauwen de bloedvaten. Bijvoorbeeld: door de rat kooi op een nieuwe kamer, waarbij een aantal minuten aan het dier of herhaalde insertie van de catheter verpakken in een ader zijn waarschijnlijk een acute stressreactie veroorzaken. </li><li> Vergemakkelijken blood stroom door &#39;melken&#39; de ader. Voer een vinger langs de lengte van de ader van de basis naar de punt van de staart, maar nog meer dan 2 cm vanaf de punt van de ingebrachte naald of de katheter kan losraken van de ader worden. </li><li> Als het bloed niet met succes kan worden verzameld uit de eerste plaats van de katheter penetratie, opnieuw steek de naald verder de ader. Als er bloed werd verzameld op de eerste plaats, opnieuw onder druk van de naald door het loskoppelen en vervolgens weer aansluiten van de katheter en de injectiespuit voorafgaand aan de re-integratie in de ader. In het algemeen, vermijd extra penetraties. </li><li> Zoals meerdere penetraties staartader instorting, waarbij de bloedtoevoer naar de staart wordt afgesneden en het zachte staart weefsel raakt necrotized kan veroorzaken, euthanaseren de rat als er staartader instorten. </li></ol></li><li> Wanneer adequaat monster volume wordt verzameld, laat de druk in de spuit door het loskoppelen en opnieuw aansluiten van de katheter. Zuig licht via de zuigerstang (~ 50 &amp; #181; l), en de naald uit de ader te trekken. Let op: Als de naald wordt ingetrokken zonder eerst de druk vrijgeven in de spuit, zal bloed druppelen van de naald. </li><li> Kort druk uitoefenen op de plaats van inbrengen om het bloeden te stoppen, en veeg het gebied met antiseptische oplossing. Zet de rat aan zijn kooi. </li></ol> 3. Verwerking Het bloedmonster <ol><li> Zuig lucht om ervoor te zorgen geen bloed blijft in de katheter naald, en gebruik een schaar om de katheter buis te snijden net boven de naald. Verdrijf het bloed in een steriele 1,5 ml microcentrifugebuis. Opmerking: Als er bloed wordt geduwd door de naald, kan de afschuifkracht rode bloedcellen veroorzaken scheuren die kunnen interfereren met vele downstream assays. Verwijder de naald om hemolyse te vermijden. <ol><li> Verzamelen bloedplasma, gebruik buizen die EDTA bevatten als antistollingsmiddel (hier gebruikt 10 pl 0,1 M EDTA 200-400 gl bloed, waarborgen de concentratie van EDTA die niet interfereert wet de downstream-test) en plaats op ijs. <ol><li> Spin volbloedmonsters bij 2100 xg in een gekoelde centrifuge (4 ° C) gedurende 10 min op 10 min verzameld. Elueer het plasma, het vermijden van verstoring van de rode en witte bloedcellen lagen. </li></ol></li><li> Om bloedserum, plaats monsters (zonder antistollingsmiddel) bij kamertemperatuur verzamelen tot 30 minuten om stolling te schakelen. Draai de verzamelbuizen in een gekoelde centrifuge (4 ° C) bij 2000 x g. Het serum kan vervolgens worden geëlueerd. </li></ol></li><li> Gebruik monsters direct, of op te slaan bij -80 ° C gedurende maximaal een jaar. </li></ol>

<ol><li>Vausort, M., Wagner, D. R., Devaux, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long+Noncoding+RNAs+in+Patients+with+Acute+Myocardial+Infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Long Noncoding RNAs in Patients with Acute Myocardial Infarction.</a> Circ Res. 115 (7), 668-677 (2014).</li>
<li>Shah, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomarkers+for+Early+Detection+of+Colorectal+Cancer+and+Polyps%3A+Systematic+Review%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Epidemiol+Biomarkers+Prev%22%5BJournal%5D)">Biomarkers for Early Detection of Colorectal Cancer and Polyps: Systematic Review.</a> Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 23 (9), 1712-1728 (2014).</li>
<li>Chan, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+blood-based+protein+biomarker+strategies+in+the+study+of+psychiatric+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Applications of blood-based protein biomarker strategies in the study of psychiatric disorders.</a> Prog Neurobiol. , (2014).</li>
<li>Cao, L., Li, L., Lin, D., Zuo, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isoflurane+induces+learning+impairment+that+is+mediated+by+interleukin+1beta+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Isoflurane induces learning impairment that is mediated by interleukin 1beta in rodents.</a> PLoS One. 7 (12), e51431(2012).</li>
<li>Culley, D. J., Baxter, M. G., Yukhananov, R., Crosby, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+impairment+of+acquisition+of+a+spatial+memory+task+following+isoflurane-nitrous+oxide+anesthesia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Long-term impairment of acquisition of a spatial memory task following isoflurane-nitrous oxide anesthesia in rats.</a> Anesthesiology. 100 (2), 309-314 (2004).</li>
<li>Vahl, T. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+ACTH+and+corticosterone+sampling+methods+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of ACTH and corticosterone sampling methods in rats.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 289 (5), E823-E828 (2005).</li>
<li>Kalinichenko, L. S., Koplik, E. V., Pertsov, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokine+profile+of+peripheral+blood+in+rats+with+various+behavioral+characteristics+during+acute+emotional+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Bull+Exp+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">Cytokine profile of peripheral blood in rats with various behavioral characteristics during acute emotional stress.</a> Bull Exp Biol Med. 156 (4), 441-444 (2014).</li>
<li>McEwen, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+effects+of+stress+hormones+in+health+and+disease%3A+Understanding+the+protective+and+damaging+effects+of+stress+and+stress+mediators%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Central effects of stress hormones in health and disease: Understanding the protective and damaging effects of stress and stress mediators.</a> Eur J Pharmacol. 583 (2-3), 174-185 (2008).</li>
<li>Sanchez, A., Toledo-Pinto, E. A., Menezes, M. L., Pereira, O. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+norepinephrine+and+epinephrine+concentrations+in+adrenal+gland+of+the+rats+submitted+to+acute+immobilization+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Res%22%5BJournal%5D)">Changes in norepinephrine and epinephrine concentrations in adrenal gland of the rats submitted to acute immobilization stress.</a> Pharmacol Res. 48 (6), 607-613 (2003).</li>
<li>Meyer, R. M., Burgos-Robles, A., Liu, E., Correia, S. S., Goosens, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+ghrelin-growth+hormone+axis+drives+stress-induced+vulnerability+to+enhanced+fear%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">A ghrelin-growth hormone axis drives stress-induced vulnerability to enhanced fear.</a> Mol Psychiatry. , (2013).</li>
<li>Knoll, A. T., Carlezon, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynorphin%2C+stress%2C+and+depression%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Dynorphin, stress, and depression.</a> Brain Res. 1314 (56-73), (2010).</li>
<li>Harvey, B. H., Brand, L., Jeeva, Z., Stein, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cortical%2Fhippocampal+monoamines%2C+HPA-axis+changes+and+aversive+behavior+following+stress+and+restress+in+an+animal+model+of+post-traumatic+stress+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Behav%22%5BJournal%5D)">Cortical/hippocampal monoamines, HPA-axis changes and aversive behavior following stress and restress in an animal model of post-traumatic stress disorder.</a> Physiol Behav. 87 (5), 881-890 (2006).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

We beschrijven hier een snelle en eenvoudige werkwijze voor het verkrijgen van een bloedmonster uit een rat die aanzienlijke voordelen boven andere gebruikelijke technieken biedt. Ten eerste is het niet verdoving, in tegenstelling bemonstering van jugulaire ader of retro-orbitale sinus. Toediening van anesthetica wanneer bloedmonsters worden verzameld rond gedragsproblemen procedures is ongewenst omdat het kan interfereren met leren en geheugen 4,5. In de tweede plaats biedt de mogelijkheid om grotere volumes bloed dan andere venapunctie technieken, zoals het verzamelen van de vena of dorsale pedaal aders verzamelen. Met behulp van de hier beschreven techniek tot 1,5 ml bloed kan worden verzameld bij een rat op één tijdstip, een volume dat gemakkelijk kunnen meerdere assays parallel worden uitgevoerd. Tot slot, deze procedure minimaliseert de kans op weefselschade in vergelijking met staartpunt amputatie of retro-orbitale bloeden. Het gebruik van deze procedure vergemakkelijkt naleving van de Animal Welfare Act en de Gids voor de Zorg en gebruik van proefdieren, die vereist het minimaliseren van de pijn en het leed dat het gevolg zijn van het laboratorium procedures uitgevoerd op dieren. Het wordt aanbevolen dat de onderzoekers nieuwe aan deze methode de praktijk van de terughoudendheid en de staart bloeden technieken om de tijd die proefdieren zijn terughoudend te minimaliseren. Bloed in minder dan 3 min verzameld uit de inleiding van terughoudendheid zorgt voor optimale resultaten. De hier beschreven protocol kan worden gebruikt voor het bemonsteren van 1-4 maal per week, maar niet meer dan twee keer per dag. Terwijl herhaalde bloed collecties kan worden uitgevoerd, moet de verschillende bemonsteringsplaatsen naar boven beweegt vanaf de basis van de staart worden gebruikt, en de linker en rechter staart aderen moet worden afgewisseld als sampling sites. De totale bloedvolume van knaagdieren is 6-7% van hun lichaamsgewicht, en maximaal 15% van het totale bloedvolume te innen binnen 2 weken. Serumof plasma omvat circa 40-60% van het verzamelde monster volume. Bloedafname via de laterale staartaders kunnen ook in de muis worden uitgevoerd zoals hier beschreven, met enkele kleine modificaties. Ten eerste mag slechts kleine gauge (27 G) katheters worden gebruikt. Ten tweede, is het aanbevolen om een ​​buis restrainer, in plaats van een wikkel, om de muizen te immobiliseren. De hoeveelheid bloed die kunnen worden verkregen uit de muizen met behulp van de venapunctie submandibular vaatbundels (200-500 ul) groter is dan veilig kan worden verzameld uit de staartader (200 pi maximum). Omdat bemonstering bloed uit de submandibulaire vaatbundel vereist minimale beperking en kunnen meer bloed geven, dit is de aangewezen route voor bemonstering in de muis. De snelheid waarmee deze procedure kan worden uitgevoerd, dat ook een minimaal invasieve aard, minimaliseert tevens het potentieel verstoring van bloedtests maatregelen door de acute stressreactie 6. Deacute stressreactie kan veranderen circulerende niveaus van vele moleculen, waaronder interleukinen en andere immuun-actieve elementen 7, hormonen van de hypothalamus-hypofyse-bijnier-as 8, hormonen in het sympathische zenuwstelsel 9, ghreline 10 endogene Opioiden 11, dopamine, en serotonine 12. Als rustende circulerende acties van deze moleculen of andere geregeld door deze moleculen gewenst, is het belangrijk om de stressrespons, die in werking treedt op slechts een minuut na het begin van stressor blootstelling te minimaliseren. Stressresponsen niet alleen invloed op de samenstelling van het bloed, maar vertegenwoordigen ook een technische belemmering voor bloedafname door de vernauwing van bloedvaten door een grotere rijafstand van het sympathische zenuwstelsel. Het wordt toenemend moeilijk om constante bloedstroom van een rat die de montage van een acute stress respons te verkrijgen. Daarom moet leed het dier minim zijnseerd om monsters die de fysiologische toestand van belang weerspiegelen snel te verkrijgen.

Biomarkers verkregen uit bloed bieden nuttige diagnostische, voorspellende en stratificatie maatregelen in vele klinische context, met inbegrip van hart-en vaatziekten 1, kanker wetenschappen 2, en psychiatrische ziekte 3. Zij kunnen ook worden gebruikt met het fundamenteel onderzoek naar de &quot;toestand&quot; van een organisme te bepalen, inclusief de mate van honger, ontsteking of spanning aanwezig. Dergelijke maatregelen kunnen worden beïnvloed door variabelen die al dan niet kritisch voor de kwestie van belang, zoals de tijd dat het monster wordt verkregen en het geslacht van de patiënten te zijn. Het kan ook worden beïnvloed door stress geïnduceerd tijdens de procedures bloedafname zelf. Hormonen en de pijnperceptie kan snel veranderen de samenstelling van het bloed. Knaagdieren zijn de meest gebruikte proefdier en meerdere methoden ontwikkeld voor bloedafname. De ideale methode van bloedafname moet minimaal Physiologica hebbenl invloed op het dier, vereisen geen verdoving, laat een snelle en herhaalde bemonstering en voldoende bloedvolume voor tal van downstream-toepassingen. Populaire technieken voor het verzamelen van bloed, zoals catheterisatie van de halsader of staartpunt amputatie niet aan deze criteria. Het doel van dit protocol is een bloedafname techniek gebruiken concentratie bij ratten die minimaal stress, ofwel verdoving vereist, maakt meerdere bloedafnames op één onderwerp, en verschaft een relatief groot monstervolume, zodat meerdere assays kunnen worden uitgevoerd op een enkel monster. Het doel van deze methode is om bloedmonsters die minimaal worden beïnvloed door de acute stressreactie verkrijgen.

<table><tbody><tr><td>Sodium heparin (1,000 USP units/ml)</td><td>Patternson Veterinary Supply</td><td>25021040010</td><td></td></tr><tr><td>Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td><td>JT Taylor</td><td>JT2020-01</td><td></td></tr><tr><td>Dermachlor rinse-chlorhexadine</td><td>Butler Schein</td><td>6356</td><td>Topical antiseptic solution, 2% chlorhexidine gluconate</td></tr><tr><td>SURFLO Winged Infusion Sets, Terumo, butterfly catheters</td><td>VWR Scientific</td><td>TESV25BLK</td><td></td></tr><tr><td>BD Tuberculin 1 cc syringes</td><td>VWR Scientific</td><td>BD309659</td><td></td></tr><tr><td>1.5 ml microcentrifuge tubes</td><td>VWR Scientific</td><td>89202-682</td><td></td></tr><tr><td>500 &mu;l microcentrifuge tubes</td><td>VWR Scientific</td><td>21150-330</td><td></td></tr><tr><td>Scissors, stainless steel, 5"</td><td>VWR Scientific</td><td>82027-586</td><td></td></tr><tr><td>500 ml plastic beaker</td><td>VWR Scientific</td><td>414004-149</td><td></td></tr><tr><td>Clean cloth wrap</td><td>Butler Schein</td><td>2993</td><td></td></tr><tr><td>Velcro tape, 0.75 in width</td><td>Monoprice</td><td>B004AF9II6</td><td>Haak- en lusband</td></tr><tr><td>Timer</td><td>VWR Scientific</td><td>62344-641</td><td></td></tr></tbody></table>

bloedafname van de lateral staartader van de rat

Sampling Blood from the Lateral Tail Vein of the Rat

Bloedmonsters worden vaak verkregen in veel experimentele contexten om doelwitten van belang te meten, waaronder hormonen, immuunfactoren, groeifactoren, eiwitten en glucose, maar de samenstelling van het bloed wordt dynamisch gereguleerd en kan gemakkelijk worden verstoord. Een factor die de bloedsamenstelling kan veranderen, is de stressrespons die wordt veroorzaakt door de bemonsteringsprocedure, wat kan bijdragen aan variabiliteit in de metingen van belang. Hier beschrijven we een procedure voor het afnemen van bloed uit de laterale staartvene bij de rat. Deze procedure biedt aanzienlijke voordelen ten opzichte van andere meer gebruikelijke technieken. Het maakt snelle bemonstering mogelijk met minimale pijn of invasiviteit, zonder anesthesie of pijnstilling. Bovendien kan het worden gebruikt om monsters met een groot volume te verkrijgen (tot 1 ml bij sommige ratten) en het kan herhaaldelijk worden gebruikt over experimentele dagen. Door de stressrespons en pijn die het gevolg is van het afnemen van bloed te minimaliseren, kunnen metingen nauwkeuriger de ware basale toestand van het dier weerspiegelen, met minimale invloed van de bemonsteringsprocedure zelf.

Bloedplasma vanuit het laterale staartader zoals beschreven in het protocol geeft een plasmamonster dat doorzichtig en lichtgeel uiterlijk was. Zoals getoond in figuur 1, hemolyse in een monster verleent een rode tint aan het plasma. De acute stress respons kan snel veranderen van de samenstelling van het bloed. Bijvoorbeeld kan circuleren corticosteron concentratie duidelijke verhoging op 10 min van blootstelling stressor, zie figuur 2. De lage basale niveaus van corticosteron met deze werkwijze verkregen vóór blootstelling stressor onthullen dat de bemonsteringsprocedure zelf geen belangrijke bron van stress. <img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/52766/52766fig1.jpg" /> Figuur 1:. Monster uiterlijk (A) Een gehemolyseerd monster weergegeven. Na centrifugeren, het plasma of serum layer (oppervlak aangegeven met de zwarte arrij) verschijnt getint met roze of rood. Donkere tinten geven een grotere mate van hemolyse. (B) Na centrifugeren wordt een correct verzamelde monster een heldere, gelige uiterlijk aan de bovenste band (vlak aangegeven met de zwarte pijl), dat overeenkomt met de niet gehemolyseerde plasma of serum heeft. Bij het verwijderen van deze laag is het belangrijk om de onderliggende volbloed niet verstoren, ofwel door op de pipetpunt in het geheel bloed laag of door opzuigen enkele volbloed in de punt. Elke plasma of serum verontreinigd met volbloed moet worden weggegooid. <img alt="Figuur 2" src="/files/ftp_upload/52766/52766fig2.jpg" /> Figuur 2: plasma corticosteron wordt snel verhoogd na een stressvolle ervaring Bloed werd verkregen van de laterale staartader van volwassen vrouwelijke Long-Evans ratten voor en 10 minuten na blootstelling aan 4 tonen (10 sec, 2 kHz, 85 dB) co-eindigend. met footshocks (1 sec, 350 uA). Bloedplasma corticosterone bij aanvang (290,4 ± 138,8 pg / ml) was significant lager dan de niveaus waargenomen 10 minuten na de indiening van de voetschok stress (2204,8 ± 454,5 pg / ml, p = 0,02, n = 4), zoals vastgesteld door gepaarde t -test. *, P &lt;0,05

Bloedmonsters zijn nuttig voor het beoordelen van biomarkers van fysiologische toestanden of ziektes in vivo. Hier beschrijven we de methodologie om bloed te bemonsteren uit de laterale staarsafvoerende ader bij de rat. Deze methode levert snelle monsters met minimale pijn en invasiviteit.

Bloedafname van de Lateral staartader van de Rat

Blood samples are commonly obtained in many experimental contexts to measure targets of interest, including hormones, immune factors, growth factors, ...

Het algemene doel van deze procedure is om de stress bij het afnemen van bloed bij ratten te minimaliseren door middel van bemonstering via de laterale staartvene. Dit wordt bereikt door de rat eerst te fixeren en de staart te verwarmen. In de tweede stap wordt een vlindernaald in een van de gedilateerde laterale staartvenen geplaatst, waarna het bloed in de laatste stap wordt afgenomen.De katheter wordt verwijderd en de bloedstroom vanuit de punctieplaats wordt gestelpt. Uiteindelijk veroorzaakt het afnemen van bloed uit de laterale staartvene minimale stress bij de rat tijdens de bloedafname, waardoor de invloed van de acute stressrespons op de bloedsamenstelling wordt verminderd. De belangrijkste voordelen van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden zoals amputatie van de staartpunt zijn dat monstername uit de laterale staartvene veel minder belastend is voor het dier en dat het herhaalde monstername binnen hetzelfde subject mogelijk maakt.De procedure wordt gedemonstreerd door twee leden van mijn laboratorium, Graham Lee, een postdoc, en Elia Harmatz, een technicus. Bevestig eerst een vlindernaald aan de spuit, terwijl de spuitbeschermkap over de naald blijft om de punt te beschermen. Trek vervolgens een volume heparine op dat iets groter is dan het volume bloed dat verzameld zal worden. Koppel de spuit los en vul de spuit met lucht.Bevestig de spuit opnieuw aan de katheter en verdrijf alle heparinoplossing, behalve minimale sporen, uit de slang, de naald en de spuit. Plaats vervolgens de katheter en de spuit op een steriel oppervlak. Fixeer de rat nu snel in een schone doek, waarbij u erop let dat de voor- en achterpoten in een comfortabele positie zijn en dat de ademhaling niet wordt belemmerd.Zet de wikkel vast met klittenband. Laat vervolgens een assistent op een stevig werkoppervlak de rat voorzichtig maar stevig fixeren bij de buik en de basis van de staart, waarbij de staart over de rand van de tafel hangt om het bloedmonster te kunnen afnemen. Dilateer daarna de bloedvaten in de staart in water van 42 °C gedurende 40 tot 50 seconden.Droog vervolgens de staart af met een papieren handdoek en roteer het hele lichaam samen met de staart om de linker- of rechterstaartvene te lokaliseren, lateraal van de arterie voor de bloedafname. Richt u op een gedeelte van de vene in het onderste deel van de staart en reinig het gebied met een 2% chlorhexidine antiseptische oplossing. Trek daarna de zuiger van de spuit terug van nul naar ongeveer 50 microliters om een onderdruk in de spuit te creëren en houd de staart voorzichtig maar stevig vast nabij de punt om de staart recht te houden tijdens de monstername.Voer nu de katheter langzaam onder een flauwe hoek in de ader in, ongeveer vijf centimeter vanaf de staartpunt. Zodra de ader is gepenetreerd, zal er bloed in de katheter stromen; trek de zuiger van de spuit langzaam terug om het gewenste volume te verzamelen met een constante snelheid van ongeveer 20 microliters per seconde. Om de bloedstroom te vergemakkelijken, strijkt u met een vinger langs de lengte van de ader vanaf de basis richting de staartpunt, terwijl u op meer dan twee centimeter afstand van de punt van de ingebrachte naald blijft om het bloed te mobiliseren.Als er geen bloed succesvol kan worden afgenomen van de initiële plaats van de katheterpunctie, breng de naald dan verder in de ader aan. Wanneer een adequaat monstervolume is verzameld, ontkoppel en koppel de katheter opnieuw aan om de druk in de spuit te verlichten. Trek vervolgens de naald uit de ader en oefen kortstondig druk uit op de insteekplaats om het bloeden te stelpen.Veeg het gebied af met een antiseptische oplossing en plaats het dier terug in de thuiskooi. Om het bloedmonster te verwerken, wordt de lucht geaspireerd om er zeker van te zijn dat er geen bloed in de katheternaald achterblijft, waarna de katheterslang net boven de naald met een schaar wordt doorgeknipt. Verwijder de naald, verzamel vervolgens het bloedplasma en breng het bloed over in microcentrifugebuisjes met EDTA.Als antistollingsmiddel. Tik zachtjes tegen de buis om het antistollingsmiddel met het bloed te mengen en plaats de monsters vervolgens op ijs. Centrifugeer het volbloed binnen 10 minuten na afname en elueer het plasma, waarbij u er zorg voor draagt de lagen rode en witte bloedcellen niet te verstoren om het bloedserum op te vangen.Plaats het bloed bij kamertemperatuur gedurende maximaal 30 minuten in microcentrifugebuisjes zonder anticoagulans. Nadat het bloed is gestold, worden de opvangbuisjes gecentrifugeerd in een gekoelde centrifuge om het serum te elueren. Beide typen monsters kunnen vervolgens direct worden gebruikt of tot één jaar worden bewaard bij -80 °C.Bloedplasma dat is afgenomen uit de laterale staartvene zoals gedemonstreerd, resulteert in een plasmamonster dat doorschijnend en lichtgeel van kleur is. Als er hemolyse is opgetreden, krijgt het plasma een rode tint. Een acute stressreactie kan de samenstelling van een bloedmonster snel veranderen.Zo stijgt de circulerende corticosteronconcentratie bijvoorbeeld aanzienlijk binnen 10 minuten na blootstelling aan een stressor, zoals in dit representatieve experiment. Belangrijker is echter dat het lage basale corticosteronniveau dat met deze methode vóór blootstelling aan de stressor wordt verkregen, aantoont dat de bemonsteringsprocedure zelf geen significante bron van stress is. Wij raden u aan deze procedure te oefenen op geanestheseerde dieren totdat u de naaldinsertie en bloedafname onder de knie heeft.Zodra de techniek onder de knie is, kan deze in vijf minuten worden voltooid als deze correct wordt uitgevoerd. Tijdens het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om eventuele potentiële stressbronnen, zoals omgevingsgeluid, te minimaliseren en de procedure zo snel mogelijk af te ronden.

sampling-blood-from-the-lateral-tail-vein-of-the-rat

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Het bloed trekt nodig zijn in een groot aantal studies, bijvoorbeeld om de farmacokinetiek profiel van een verbinding studie. Hier laten we zien hoe om bloed te trekken uit ratten met behulp van twee technieken: het bloed te trekken uit de vena ader of door het hart doorboren.

Tekening Bloed van Ratten via de v. saphena en door Cardiac punctie

Hier beschrijven we een eenvoudige staart veneuze bloedmonsters methode bij niet-verdoofd ratten met behulp van een systeem van de buisjes opzuigen. Deze methode vermindert het risico van directe blootstelling aan bloed en vereenvoudigt meerdere bemonstering van een enkele Venapunctie.

Herhaald bloedinzameling van staart ader van niet-verdoofd ratten met een systeem voor het verzamelen van vacuüm bloed

Hier presenteren we een protocol voor het verzamelen van bloedmonsters van de rat subclavian ader.

Subclavian ader punctie als een alternatieve methode van bloed monster collectie bij ratten

Deze studie meldt bloedmonsters van staart ader in muizen met behulp van een systeem van de buisjes opzuigen met lenzenvloeistof vergrootglas. Onze methode is makkelijk om te oefenen en kan worden gebruikt voor herhalen bloedmonsters in muizen.

Gemodificeerde bloedinzameling uit staart aderen van muizen niet-verdoofd met een systeem voor het verzamelen van vacuüm bloed en lenzenvloeistof Vergrootglas

Het huidige protocol beschrijft een eenvoudige en efficiënte methode voor het verzamelen van bloed uit de subclavia-ader bij ratten. Het maakt snelle, tijdige en gemakkelijk identificeerbare bemonstering zonder anesthesie mogelijk en verkrijgt bloed van hoge kwaliteit door herhaalde monsterverzameling.

Repetitieve bloedafname uit de subclavia-ader van bewuste rat

Hier presenteren we een protocol om snelle, eenvoudige en betrouwbare alternatieven voor bloedafname te bieden voor het rattenmodel. We beschrijven drie verschillende bloedafnamemethoden, afhankelijk van de context: staartaderpunctie onder anesthesie of op een bewust dier en dorsale penisaderpunctie onder anesthesie.

Gemodificeerde staartader en penisaderpunctie voor bloedafname in het rattenmodel

Het protocol toont herhaalde cerebrospinale vocht- en bloedafname van epileptische ratten die parallel worden uitgevoerd met continue video-elektro-encefalogram (EEG)-monitoring. Deze zijn van groot belang voor het onderzoeken van mogelijke verbanden tussen veranderingen in verschillende lichaamsvloeistofmoleculen en epileptische activiteit.

Bemonstering van hersenvocht en bloed uit laterale staartader bij ratten tijdens EEG-opnames

Hier presenteren we een combinatie van effectieve rattenbeperking en subclavia-aderpunctiemethoden die snelle, veilige en herhaalde bloedafname bij ratten zonder verdoving mogelijk maken.

Bloedafname van subclavia-aderen bij bewuste ratten

Natural killer cellen zijn een kleine populatie van lymfocyten. Hier laten we zien hoe deze cellen uit menselijk bloed te isoleren door negatieve selectie, met behulp van een kit van StemCell Technologies. De verkregen cellen zijn levensvatbaar en onaangetast door antilichamen, en dus klaar om te worden gebruikt voor een aantal procedures.

Verrijking van NK-cellen uit menselijk bloed met de RosetteSep Kit van StemCell Technologies

De Amerikaanse degenkrab, Limulus polyphemus, is misschien wel de meest handige bron voor grote hoeveelheden bloed van een ongewervelde. Het bloed is eenvoudig in samenstelling, met slechts een cel-type in de algemene circulatie, de granulaire Amebocyte, en slechts drie overvloedige eiwitten in het plasma, hemocyanine, de C-reactieve proteïnen en α2-macroglobuline. Bloed wordt verzameld vanuit het hart en het bloed cellen en plasma worden gescheiden door centrifugeren.

Bloedafname van de Amerikaanse Horseshoe Crab, Limulus Polyphemus

Leer een stressarme bloedafnamemethode via de laterale staartader bij ratten voor neurofysiologisch onderzoek. Deze techniek minimaliseert pijn en maakt herhaalde bemonstering mogelijk voor betrouwbare biomarkeranalyses.

Bloedafname van de Lateral staartader van de Rat

Meer video's verkennen