Name: Functionele menselijke lever behoud en herstel door middel van Subnormothermic Machine perfusie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-04-27T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 54 s
Description: Leer subnormotherme machineperfusie van menselijke lever voor behoud en herstel van orgaanfunctie. Deze techniek maakt metabole beoordeling mogelijk bij 21 °C zonder hoge metabole eisen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De financiering van de Amerikaanse National Institutes of Health (verleent R01EB008678, R01DK096075, R01DK084053, R00DK088962 en F32 DK103500), Cimit Project No. 12-1732 en de Shriners Hospitals for Children is dankbaar erkend. We willen graag dankbaar erkennen de New England Organ Bank voor de ondersteuning van dit werk.

Het gebruik van menselijk weefsel moeten worden beoordeeld door een Institutional Review Board (IRB) of gelijkwaardig. De hier beschreven werk werd goedgekeurd en vrijgesteld van het Massachusetts General Hospital Institutional Review Board (No. 2011P001496) verklaard. 1. Oplossing Voorbereiding <ol><li> Aseptisch aanvullingen aan fenol rood-vrij Williams medium E zoals aangegeven in tabel 1. De oplossing moet vóór gebruik vers worden bereid. Insuline moet vlak voor gebruik worden toegevoegd. </li></ol> 2. Terug Tabel Voorbereiding van de lever <ol><li> Een-ijs gevulde orgel kom op een steriele, gedrapeerd oppervlak. Verwijder de lever van de doos, waardoor het in de zak koude preservatievloeistof. Houd de lever meestal ondergedompeld. </li><li> Identificeer de leverslagader (HA), die distale zal worden gevestigd aan de aorta-patch. Ontleden gratis de slagader naar verschillende cut takken langs de lengte met behulp van Metzenbaum schaar onthullen. Zorgvuldig dissect de gehele lengte van de arterie verbreken een vaartuig dat de lever levert voorkomen. Niet snijden of bind takken die niet beschikken over een zichtbare einde. </li><li> Bind alle arteriële takken niet verstrekken van de lever met behulp van zijden hechtdraad variërend van maat 0 tot 4-0, afhankelijk van de grootte van het schip. Sluiten takken die te kort te binden zijn of gaten in de slagader met een steek van 7-0 prolene. Stropdas en snijd de milt en linker maag slagaders dicht bij hun oorsprong op de coeliakie kofferbak. </li><li> Verwijder de aorta patch door het snijden van de coeliakie romp direct onder de patch. Canule coeliakie stam met de aorta canule. </li><li> Identificeer de poortader (PV) en botweg ontleden gratis. Afhechten dat takken en canule de PV met de voorbereide segment van de grootte 24 buizen. </li><li> Verwijder gedeelten van het membraan van de suprahepatic vena cava, zonder dat de ader zelf. Uitstroom uit de vena cava riool direct in de orgaankamer. </li><li> Snijd 2 full-omtrek tissue monsters (2-3 mm lengte) van het uiteinde van de galwegen; snap bevriezen één in vloeibare stikstof (bewaar bij -80 ° C) en bewaar de andere 10% gebufferde formaline, weefsels en histologische analyse, respectievelijk. Canule de galwegen met het schip de canule en een afvoerbuis gemaakt van membraanoxygenator buizen. </li><li> Identificeren en afbinden van de cystic duct met een 0 zijden stropdas. De galblaasbuis wordt gevonden tussen de galwegen en de galblaas. </li><li> Sluit de flush slangen ingesteld op ijskoud zakken van Ringerlactaat (LR) oplossing en prime de slang, het verwijderen van alle lucht. </li><li> Zet de stroom regulator op de flush slang aan op een trage straaltje. Voorafgaand aan het aansluiten van de flush slang aan op de poortader canule, af te sluiten de poortader met de vingers in de navel en vul de canule en ader met flush om de lucht uit de poortader te verwijderen. Niet verheffen de zak meer dan 20 cm boven de hoogte van de lever tijdens koude spoelen overdruk op het voorkomenader. </li><li> Tijdens de flush kort af te sluiten van de PV op het laagste punt. Onderzoek de PV op lekkage. Vaartuig takken kunnen worden afgesloten zoals hierboven beschreven. Spoel de lever door de PV met in totaal 2 liter ijskoud LR. </li><li> Herhaal stap 2.10, 2.11 voor de HA met 1 L LR. </li></ol> 3. Verzadiging van de SNMP-System <ol><li> Prime de perfusie apparaat door 2 L perfusievloeistof (21 ° C) het orgaan kom en begint het apparaat de slang te primen. Volg instructies van het apparaat voor te bereiden perfusie, het instellen van de temperatuur tot 21 ° C. Begin met drukken van 3 mmHg en 30 mmHg op de PV en HA, resp. Open de gastank en op een stroom van 3 l / min. </li><li> Neem een ​​bloedgas monster uit zowel de HA en PV instroom uit door een 0,3 ml monster van de monsterpoorten en actief in de bloedgasanalyse machine volgens de instructies van de fabrikant. Bevestig voldoende zuurstofverzadiging (pO 2&gt; 700 mmHg) en pH (7,35-7,45). </li><li> Voordat de lever is aangesloten eens 1,0 ml van het perfusaat per = 0 Meting een eppendorf buisje en bewaar bij -80 ° C. Snijd twee ± 250 mg wig biopten van de lever met behulp van een single-edged stalen blad; snap bevriezen één in vloeibare stikstof (bewaar bij -80 ° C) en bewaar de andere 10% gebufferde formaline. Weeg de lever voordat perfusie. </li></ol> 4. Menselijke leverperfusie <ol><li> Breng de lever het apparaat. Sluit de PV aanvoer naar de PV canule na het ontluchten van de PV zoals in stap 2.10. Sluit de HA soortgelijke wijze. Stel PV en HA druk 3 en 30 mmHg. De lever moet bijna worden overspoeld door perfusaat. Bedek elke droge oppervlakken, inclusief de instroom schepen, met natte steriel gaasje om uitdroging te voorkomen </li><li> Laat de gal buis drain in een opvangbak. Zorg ervoor dat de opening van de gal afvoer is ter hoogte van de lever of lager om gal te draaien out vrij. </li><li> Target stroomsnelheden respectievelijk 275-325 ml / min.kg en 50-100 ml / min.kg voor de PV en HA zodra de lever opgewarmd tot 21 ° C. Aangezien elke lever reageert anders op perfusie, het toezicht op de stroom nauw tijdens de eerste minuten. Verhogen of verlagen van de druk op een van de vaten als het doel debieten niet worden bereikt. Niet meer dan 50 mmHg op de HA en 5 mmHg op de PV. </li><li> Monsters worden genomen van het leverweefsel, perfusaat en gal bij de onderzoekers voorkeur. Wij raden aan om minimaal de volgende monstername regime tijdens perfusie. <ol><li> Weefselbiopten n = 2 x 250 mg, per uur. Opslag: snap bevriezen een in vloeibare stikstof en bewaar bij -80 ° C langdurig. Bovendien neemt een biopsie voor en na perfusie en oplossen in 10% gebufferde formaline (n = 1) </li><li> Perfusaatmonsters, n = 2 x 1 ml, elke 15 min gedurende het eerste uur en elke 30 minuten daarna. Monsters van de PV-inflage monster poort. Opslag: -80 ° C langdurig. </li><li> Bloed gas analyse van PV en HA instroom, en vena cava uitstroom. n = 3 x 0,3 ml, elke 30 min. Monsters van zowel de PV en HA monster poorten. Teken een 0,3 ml monster uit de vena cava door het invoegen van een spuit in de ader en direct uit te voeren in het bloed gas analyzer. Gebruik de uitgang om voldoende zuurstof en pH te verzekeren. </li><li> Bile productie, n = 1 x 1 ml, elk uur. Visueel kwantificeren gal productie elk uur en neem een ​​monster uit de collectie container. Vernieuw de container na de bemonstering. Opslag: droog ijs en -80 ° C op lange termijn. </li></ol></li><li> Verder perfusie gedurende 3 uur. Het bewaken van de druk, pH en de zuurstofvoorziening en het nemen van monsters in heel. Stel de pH door toevoeging hij natriumbicarbonaat aan het perfusaat. </li><li> Aan het einde van de perfusie neemt de eindmonsters terwijl de lever wordt geperfundeerd. Koppel de lever en verwijder de galwegen canule. Neem 2 post-perfusie weefselmonsters van degalgang zoals eerder beschreven voor opslag bij -80 ° C en in 10% gebufferde formaline. </li><li> Gooi de menselijke lever volgende juiste biohazard richtlijnen voor afvalverwerking. </li></ol>

<ol><li>Merion, R. M., Pelletier, S. J., Goodrich, N., Englesbe, M. J., Delmonico, F. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Donation+after+cardiac+death+as+a+strategy+to+increase+deceased+donor+liver+availability%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Surg%22%5BJournal%5D)">Donation after cardiac death as a strategy to increase deceased donor liver availability.</a> Ann Surg. 244 (4), 555-562 (2006).</li>
<li>Guarrera, J. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypothermic+machine+preservation+facilitates+successful+transplantation+of+%27orphan%27+extended+criteria+donor+livers%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Hypothermic machine preservation facilitates successful transplantation of 'orphan' extended criteria donor livers.</a> Am J Transplant. 15, 161-169 (2015).</li>
<li>Dutkowski, P., Schlegel, A., de Oliveira, M., Müllhaupt, B., Clavien, P. -A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HOPE+for+human+liver+grafts+obtained+from+donors+after+cardiac+death%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hepatol%22%5BJournal%5D)">HOPE for human liver grafts obtained from donors after cardiac death.</a> J Hepatol. 60 (4), 765-772 (2013).</li>
<li>Dutkowski, P., Clavien, P. -A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Solutions+to+Shortage+of+Liver+Grafts+for+Transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Surg%22%5BJournal%5D)">Solutions to Shortage of Liver Grafts for Transplantation.</a> Br J Surg. 101 (7), 739-774 (2014).</li>
<li>Vogel, T., Brockmann, J. G., Friend, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex-vivo+Normothermic+Liver+Perfusion%3A+An+Update%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Organ+Transplant%22%5BJournal%5D)">Ex-vivo Normothermic Liver Perfusion: An Update.</a> Curr Opin Organ Transplant. 15 (2), 167-172 (2010).</li>
<li>Monbaliu, D., Brassil, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Machine+Perfusion+of+the+Liver%3A+Past%2C+Present%2C+and+Future%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Organ+Transplant%22%5BJournal%5D)">Machine Perfusion of the Liver: Past, Present, and Future.</a> Curr Opin Organ Transplant. 15 (2), 160-166 (2010).</li>
<li>Matsuno, M., Uchida, K., Furukawa, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+Machine+Perfusion+Preservation+of+Liver+Grafts+From+Donation+After+Cardiac+Death%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Impact of Machine Perfusion Preservation of Liver Grafts From Donation After Cardiac Death.</a> Transplant Proc. 46 (4), 1099-1103 (2014).</li>
<li>Schlegel, A., Dutkowski, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+hypothermic+machine+perfusion+in+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Int%22%5BJournal%5D)">Role of hypothermic machine perfusion in liver transplantation.</a> Transplant Int. , (2014).</li>
<li>Op den Dries, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+vivo+normothermic+machine+perfusion+and+viability+testing+of+discarded+human+donor+livers%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Ex vivo normothermic machine perfusion and viability testing of discarded human donor livers.</a> Am J Transplant. 13, 1327-1335 (2013).</li>
<li>Bruinsma, B. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibiotic+prophylaxis+in+%28sub%29normothermic+organ+preservation%3A+In+vitro+efficacy+and+toxicity+of+cephalosporins%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Antibiotic prophylaxis in (sub)normothermic organ preservation: In vitro efficacy and toxicity of cephalosporins.</a> Transplantation. 95 (8), 1064-1069 (2013).</li>
<li>Post, I. C., Dirkes, M. C., Heger, M., Bezemer, R., van't Leven, J., van Gulik, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimal+flow+and+pressure+management+in+machine+perfusion+systems+for+organ+preservation%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Optimal flow and pressure management in machine perfusion systems for organ preservation.</a> Ann Biomed Eng. 40 (12), 2698-2707 (2012).</li>
<li>Post, I. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cell+preservation+at+hypothermic+to+normothermic+conditions+using+clinical+and+experimental+organ+preservation+solutions%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Endothelial cell preservation at hypothermic to normothermic conditions using clinical and experimental organ preservation solutions.</a> Exp Cell Res. 319 (17), 2501-2513 (2013).</li>
<li>Klein, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organ+Donation+and+Utilization+in+the+United+States%2C+1999-2008%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Organ Donation and Utilization in the United States, 1999-2008.</a> Am J Transplant. 10 (4), 973-986 (2010).</li>
<li>Jay, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Increased+Costs+of+Donation+After+Cardiac+Death+Liver+Transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Surg%22%5BJournal%5D)">The Increased Costs of Donation After Cardiac Death Liver Transplantation.</a> Ann Surg. 251 (4), 743-748 (2010).</li>
<li>Seehofer, D., Eurich, D., Veltzke-Schlieker, W., Neuhaus, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biliary+Complications+After+Liver+Transplantation%3A+Old+Problems+and+New+Challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Biliary Complications After Liver Transplantation: Old Problems and New Challenges.</a> Am J Transplant. 13, 253-265 (2013).</li>
<li>Morrissey, P., Monaco, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Donation+After+Circulatory+Death%3A+Current+Practices%2C+Ongoing+Challenges+and+Potential+Improvement%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Donation After Circulatory Death: Current Practices, Ongoing Challenges and Potential Improvement.</a> Transplantation. 97 (3), 258-264 (2014).</li>
<li>Verdonk, R., Buis, C., Porte, R., Haagsma, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biliary+complications+after+liver+transplantation%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Scand+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Biliary complications after liver transplantation: A review.</a> Scand J Gastroenterol. 41, Suppl 243. 89-101 (2006).</li>
<li>Pine, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+Transplantation+Following+Donation+After+Cardiac+Death%3A+An+Analysis+Using+Matched+Pairs%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Transpl%22%5BJournal%5D)">Liver Transplantation Following Donation After Cardiac Death: An Analysis Using Matched Pairs.</a> Liver Transpl. 15 (9), 1072-1082 (2009).</li>
<li>Sutton, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Criteria+for+viability+assessment+of+discarded+human+donor+livers+during+ex+vivo+normothermic+machine+perfusion%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Criteria for viability assessment of discarded human donor livers during ex vivo normothermic machine perfusion.</a> PLoS One. 11, e110642(2014).</li>
<li>Bruinsma, B. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subnormothermic+Machine+Perfusion+for+Ex+Vivo+Preservation+and+Recovery+of+the+Human+Liver+for+Transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Subnormothermic Machine Perfusion for Ex Vivo Preservation and Recovery of the Human Liver for Transplantation.</a> Am J Transplant. 14, 1400-1409 (2014).</li>
<li>Bruinsma, B. G., Yarmush, M. L., Uygun, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organomatics+and+organometrics%3A+Novel+platforms+for+long-term+whole-organ+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Technology%22%5BJournal%5D)">Organomatics and organometrics: Novel platforms for long-term whole-organ culture.</a> Technology. 02 (1), 13-22 (2014).</li>
<li>Berendsen, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simplified+subnormothermic+machine+perfusion+system+restores+ischemically+damaged+liver+grafts+in+a+rat+model+of+orthotopic+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Res%22%5BJournal%5D)">A simplified subnormothermic machine perfusion system restores ischemically damaged liver grafts in a rat model of orthotopic liver transplantation.</a> Transplant Res. 1 (1), 6(2012).</li>
</ol>

Drs. BE Uygun, K Uygun en Yarmush zijn uitvinders op een patent dat aan deze studie (WO / 2011 / 002.926), en drs relevant is. BE Uygun, K Uygun en Yarmush zijn uitvinders op een patent dat aan deze studie (WO / 2011/35223) relevant is. Drs. K Uygun en Bruinsma hebben een voorlopige octrooiaanvraag voor dit werk. Dr K Uygun en BE Uygun een financieel belang in Organ Solutions, een bedrijf dat zich toelegt op het ontwikkelen van preservatie technologie. Dr K Uygun en BE belangen Uygun&#39;s worden beheerd door de MGH en Partners HealthCare in overeenstemming met hun beleid van belangenverstrengeling.

In een poging levers gewond tijdens ischemie herstellen ontwikkelden we een SNMP systeem dat kan worden toegepast na een periode van koude opslag. Subnormothermic machine perfusie biedt een levensvatbaar alternatief voor de conventionele koude opslag, evenals onderkoeld en normotherme machine perfusie modaliteiten. Er bestaan ​​verschillende systemen; Alle bieden verschillende voordelen en nadelen 3,9,20. SNMP maakt perfusie zonder zuurstofdrager, metabolische zuurstofverbruik 21 ° C worden voldaan door actieve zuurstofvoorziening van het perfusaat. Hoewel verminderd onder subnormothermic omstandigheden, het metabolisme is aanzienlijk en vereist de steun van een voedselrijke perfusie oplossing. Traditionele perfusie-oplossingen, zoals de Belzer machine perfusievloeistof, algemeen minimaal samenstelling en zijn ontworpen voor koude perfusie. Williams Medium E is gebruikt als een hepatocyt kweekmedium voor vele jaren, en bevat CSPECTEN dat universeel voor de ondersteuning van cellulaire functie, in het bijzonder onder warme ex vivo omstandigheden zijn. Metingen tijdens machine perfusie weerspiegelt de werking van het orgaan. Direct waarneembare parameters zoals gal productie en zuurstofopname zijn realtime metingen die kunnen worden gebruikt om de lever pre-transplantatie beoordelen. Evenzo kunnen markers van celbeschadiging en ischemie (K +, lactaat release) direct worden gemeten in de perfusievloeistof kan erop wijzen orgaanfunctie 20 zijn. Als machine perfusie technologie zich verder ontwikkelt en realiseert meer wijdverspreid klinische toepassing, kan een nauwkeurige correlaties tussen ex vivo functie en klinische uitkomst worden gemaakt en perfusieparameters zal nuttig zijn in het helpen beslissingen te verplanten of marginale kwaliteit levers verwerpen. Bovendien, als point-of-care analytische instrumenten vooraf, meer verfijnde analyse zal beschikbaar komen direct in de machine Japanse productesie 21. In dit werk wordt aangetoond dat levers kunnen worden ondersteund in de SNMP systeem met minimale schade aan de lever, gereflecteerd door histologie en afgifte van ALT. Functioneel herstel van de lever het best blijkt uit ATP, waarvan is aangetoond dat zij de levensvatbaarheid lever en sterk suggestief succes transplantatie in diermodellen 22. Ex vivo en pre-transplantatie herstel van de lever transplantaten zou een aanzienlijke uitbreiding van de donor toestaan lever zwembad, het corrigeren van de kloof tussen vraag en aanbod van donorlevers bij transplantatie.

Levertransplantatie is de enige curatieve behandeling tienduizenden patiënten met eindstadium leverziekte. Om succesvolle transplantatie, optimaal behoud van de lever van de tijd die is verkregen van de donor tot de tijd wordt geïmplanteerd in de ontvanger nodig snelle verslechtering van het transplantaat te voorkomen vergemakkelijken. De huidige standaard voor leverpreservatie zogenaamde &quot;statische koude opslag&quot;: de lever wordt afgekoeld in een ijs-koude conserveringsoplossing, waarbij het metabolisme van de lever verminderen en vertragen van de schadelijke effecten van ischemie. Hoewel dit koude opslag techniek heeft het mogelijk gemaakt voor een succesvolle transplantatie, organen van marginale kwaliteit zoals DCD organen beschadigd door warme ischemie of steatose tonen inferieure patient outcomes 1. Er is een snel groeiende hoeveelheid bewijs dat ex vivo machine perfusie van de lever enten als alternatief behoud modaliteit kan potentieel imbewijzen de resultaten voor deze marginale organen 2,3. Levertransplantatie heeft een slachtoffer van zijn eigen succes geworden. Veel meer patiënten worden verwezen voor transplantatie dan er levers beschikbaar en duizenden sterven op de wachtlijst in de Verenigde Staten elk jaar. Gezien de realiteit van de donorlever tekort en het toenemende gebruik van de lever transplantaties van suboptimale kwaliteit voor behoeftige ontvangers, wordt algemeen geoordeeld dat ex vivo machine perfusie van de lever transplantaties vóór implantatie houdt de belofte van een paradigmaverschuiving in levertransplantatie. Er is een duidelijke toename van het onderzoek belangstelling voor dit onderwerp in de afgelopen jaren 4-8. In verschillende Europese en Noord-Amerikaanse centra hypotherme machine perfusie heeft gemaakt van een klinische introductie 8 en normotherme machine perfusie bij fysiologische temperaturen is onlangs toegepast op afgedankte menselijke lever en wordt vertaald naar de klinische gebruik, bij 9.Uitgebreide ontwikkeling heeft geleid tot de ontwikkeling van verschillende protocollen, terwijl continue optimalisatie identificeert de optimale perfusie parameters 10-12. Gebruik van marginale kwaliteit transplantaten toegenomen meer dan 10 keer in het afgelopen decennium 13. Vergeleken met de huidige norm voor leverpreservatie (statische koude opslag), ex vivo machine perfusie biedt talrijke voordelen, die leiden veelgevraagde uitbreiding van het orgaan en een potentieel verminderen van de incidentie van complicaties na transplantatie. Vooral de biliaire complicaties die momenteel pest suboptimale kwaliteit levertransplantatie transplantaten na transplantatie blijven belangrijk punt 14-18. Machine perfusie bij subnormothermic omstandigheden biedt een tijdsvenster om graft function objectief te beoordelen op geschiktheid voor transplantatie 19. Terwijl de lever wordt geperfuseerd in een ex vivo circuit zowel het perfusaat eennd de gal die tijdens perfusie kan worden bemonsterd voor het meten van merkers van orgaanfunctie. Op deze manier &#39;ernstig aangetast&#39; levers die worden weggegooid voor transplantatie onder de huidige criteria objectief kan worden beoordeeld op hun geschiktheid voor transplantatie. Levensvatbaarheidsbeoordeling mogelijk maakt veel van deze organen worden gebruikt voor transplantatie. Een even krachtige voordeel van de machine perfusie is reparatie en verbetering van levers die zijn beschadigd door warme / koude ischemie. ATP is zeer snel uitgeput tijdens warme en daaropvolgende koude ischemie en gedurende machine perfusie vóór implantatie van de lever 20 worden repleted. De lever, met zijn energie opslaat en metabole toestand bijgevuld, wordt geconditioneerd en beter voorbereid voor de schadelijke gevolgen van reperfusie schade na implantatie in de ontvanger. Dit werk beschrijft een methode voor ex vivo machine perfusie van menselijke lever grafts in het laboratorium, die nuttig voor onderzoekers die willen zowel de techniek en de gunstige effecten van ex vivo machine perfusie bestuderen zijn. Wij maken gebruik van menselijke donor levers die zijn afgenomen voor transplantatie en worden vervolgens toegewezen voor onderzoeksdoeleinden. Standaard lever inkoop techniek houdt in situ arteriële flush van de lever na aorta cross-klemmen in hersendode donoren (DBD) of na een circulatiestilstand in de bloedsomloop dood donoren (DCD), in meer detail elders 20 beschreven. Bovendien wordt de lever gekoeld tijdens de aanbesteding door het vullen van de buikholte van de donor met ijs. Flush oplossing voorkeuren verschillen tussen de regio&#39;s, met de meerderheid van aanbestedingen met behulp van de Universiteit van Wisconsin of histidine-tryptofaan-ketoglutarate (HTK) oplossing. Een extra back-tafel flush van de poortader verbetert de uitspoeling van de resterende bloed. Levers worden vaak aangeschaft waardoor er een aortasegment surhet afronden van de coeliakie kofferbak. De galblaas wordt ingesneden, gal wordt afgezogen en de galwegen wordt gespoeld. De levers worden verpakt in een steriele zakken met ijskoude behoud oplossing en in de aangewezen dozen of koelers vervoerd. Voor representatieve resultaten warme en koude ischemie tijd te beperken tot 60 min en 12 uur, respectievelijk. Ondanks de routinematige serologische screening voor overdraagbare ziekteverwekkers, moeten standaard voorzorgsmaatregelen worden genomen bij het overhandigen van menselijke organen, monsters verkregen uit menselijke organen, en eventuele afvalproducten. Het protocol beschrijft hier subnormothermic machine perfusie met behulp van een in de handel verkrijgbaar leverperfusie apparaat. Het gebruik van een dergelijke inrichting maakt snellere vertaling naar de klinische setting en kruisvalidatie van tussen onderzoeksgroepen en transplantatiecentra verschillende protocollen en apparaatinstellingen.

<table><tbody><tr><td>Liver Assist perfusieapparaat</td><td>Organ Assist B.V.</td><td>Liver Assist</td><td></td></tr><tr><td>Liver Assist dispositief set</td><td>Organ Assist B.V.</td><td>Liver Assist dispositief</td><td></td></tr><tr><td>Williams&rsquo; Medium E</td><td>Sigma</td><td>W1878&ndash;6x500ml</td><td></td></tr><tr><td>Insulin</td><td>Eli Lilly &amp; Co</td><td>Humulin R U-100</td><td></td></tr><tr><td>Penicilline/Streptomycine 5.000 U/ml</td><td>Life Technologies</td><td>15070-063</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamine</td><td>Invitrogen</td><td>25030-156</td><td></td></tr><tr><td>Hydrocortison</td><td>MGH apotheek</td><td>7750500</td><td></td></tr><tr><td>Carbogen gastank 95% O2/5% CO2</td><td>Airgas</td><td>ZO2OX9522000043</td><td></td></tr><tr><td>Speciale gasregelaar</td><td>Airgas</td><td>Y11244D580</td><td></td></tr><tr><td>Lactated Ringer&rsquo;s oplossing</td><td>Baxter</td><td>2B2324X</td><td></td></tr><tr><td>10% neutraal gebufferd formaline</td><td>Fischer Scientific</td><td>316-155</td><td></td></tr><tr><td>Getande Adson forceps</td><td>Roboz</td><td>RS-5234</td><td></td></tr><tr><td>Debakey weefselforceps, 7.75&rdquo;, 2.25 mm</td><td>Roboz</td><td>RS-7562</td><td></td></tr><tr><td>Metzenbaum schaar 7" gebogen SureCut Tungsten</td><td>Roboz</td><td>RS-6965SC</td><td></td></tr><tr><td>Castroviejo naaldhouder 5.5&ndash;7&rdquo;</td><td>Fine Science Tools</td><td>12565-14</td><td></td></tr><tr><td>0 zwart gevlochten zijden hechtdraad</td><td>Ethicon</td><td>SA66G</td><td></td></tr><tr><td>4-0 nylon hechtdraad, Nurolon RB1</td><td>Ethicon</td><td>C554D</td><td></td></tr><tr><td>Bloedgasanalyseapparaat</td><td>Siemens</td><td>RapidPoint 500</td><td></td></tr><tr><td>Balansweegschaal</td><td>Cole Parmer</td><td>EW-10000-12</td><td></td></tr><tr><td>Drukdisplaydoos</td><td>Medtronic</td><td>66000</td><td></td></tr><tr><td>Dispositief drukdisplaysets</td><td>Medtronic</td><td>61000</td><td></td></tr><tr><td>Handheld thermokoppelthermometer en sonde</td><td>Cole Parmer</td><td>EW-91500-04 en EW-08516-55</td><td></td></tr><tr><td>Vessel canule met eikeltip, 4 mm</td><td>Medtronic</td><td>30005</td><td></td></tr><tr><td>Spoelbuis voor irrigatieset</td><td>Hospira</td><td>06543-01</td><td></td></tr><tr><td>Mengkom, 4 L</td><td>Cole Parmer</td><td>EW-07300-40</td><td></td></tr></tbody></table>

functionele menselijke lever behoud en herstel door middel van subnormothermic machine perfusie

Functional Human Liver Preservation and Recovery by Means of Subnormothermic Machine Perfusion

Er is momenteel een ernstig tekort aan levertransplantaten. Nieuwe organenbehoudstechnieken zijn nodig om de pool van donorlevers uit te breiden. Machineperfusie van donorlevers is een alternatief voor de traditionele koude opslag van leveren en belooft veel als een modaliteit om de donororgaanpool uit te breiden. We hebben onlangs het potentiële voordeel beschreven van subnormotherme machineperfusie van menselijke leveren. Machinegeperfuseerde leveren vertoonden een verbeterende functie en herstel van weefsel ATP-niveaus. Bovendien maakt machineperfusie van levergrafts bij subnormotherme temperaturen een objectieve beoordeling van de functionaliteit en geschiktheid van een lever voor transplantatie mogelijk. Op deze manieren kunnen een groot aantal leveren die eerder zijn weggegooid vanwege hun suboptimale kwaliteit worden gered via de herstellende effecten van machineperfusie en worden gebruikt voor transplantatie. Hier beschrijven we deze techniek van subnormotherme machineperfusie in detail. Menselijke levergrafts toegewezen voor onderzoek worden geperfundeerd via de leverartery en de portale ader met een acellulair geoxygeneerd perfusatiemiddel bij 21 °C.

Een aantal observaties en analyses kunnen op de lever worden uitgevoerd tijdens perfusie, met inbegrip van directe real-time observaties, zoals debieten en gal productie; real-time metingen, zoals gas analyse van het perfusaat, en metingen post-hoc die zijn gemaakt na de monsterneming waaronder biochemische analyse van het perfusaat en weefsel en histologische analyse. De resultaten die hier genoemd zijn vanaf 22 geperfundeerde menselijke levers. Levers werden voor transplantatie om verschillende redenen, waaronder donor leeftijd, overmatig warm ischemische tijd, biopsie resultaten (steatose, ontsteking, fibrose) en om logistieke redenen afgewezen. 18 levers werden aangekocht na hartdood, en 4 na hersendood. In beide gevallen werden donoren voorbehandeld met 30.000 eenheden heparine en gespoeld in situ en op de rug tafel met UW-oplossing. Bedoel koude ischemische tijd was 531 ± 237 (SD) min en de gemiddelde warme ischemische tijd was 27 ± 10 (SD) min, gemeten vanaf de intrekking van het levensteun aan koude flush. Real time waarnemingen en metingen kunnen worden gebruikt om de lever te bepalen gedurende perfusie, terwijl metingen post hoc worden onthuld na perfusie. Real-time waarnemingen Stroom door de lever begint lager dan de doelstelling debieten als gevolg van een hogere weerstand in de koude lever. Met een druk van 3 mmHg aan het PV en 30 mmHg op de HA het doel stromen algemeen zodra de lever gebeurt is opgewarmd tot 21 &#160; ° C na 60 min van perfusie (Figuur 1A). Galstroom kan doorgaans worden waargenomen binnen 10 min perfusie en gestaag geproduceerd tijdens perfusie (Figuur 1B). Bile hoeveelheid is afhankelijk van de kwaliteit van de lever en varieert van 0,3 ml / uur / kg lever tot 18 ml / min / kg. In levers met een langere warme ischemische tijd zal galstroom neiging om afbouwen, terwijl kortere warme ischemie tijd resulteert in een stabiel of zelfs te verhogengal productie. Real-time metingen Directe en frequente meting van het perfusaat door bloed gas analyse essentieel voor zowel experimentele doeleinden alsmede het onderhouden van adequate perfusie voorwaarden, belangrijker zuurstof en pH. Opgeloste zuurstof partiële druk moet groter zijn dan 700 mmHg op de instroom van zowel de PV en HA. Uitstroom zuurstofdruk, gemeten in de vena cava, neemt in het algemeen met een langere perfusie, als gevolg van een toenemende zuurstofopname. Zuurstofopname prijs kan worden berekend zoals eerder beschreven 13 en varieerde 0,5-2,2 ml O2 / min / kg bij het ​​begin van de perfusie 2,4-9,7 ml O2 / min / kg bij t = 3 uur (figuur 1C). Een daling in pH wordt waargenomen in de eerste 30 min (figuur 1D), voornamelijk als gevolg van lactaat release in het perfusaat. Dit kan worden ondersteund door suppletie met 8,4% natrium- bicarbonate en na ongeveer 90 minuten de pH valt terug in het normale bereik. Gewoonlijk 30-50 ml van 8,4% natriumbicarbonaat vereist. Lactaatconcentratie neemt snel in de eerste 15-30 minuten, maar begint te overlijden na het eerste uur (figuur 1E). Metingen post-hoc Levertransaminasen zoals ALT kan worden gemeten in het perfusaat. In de eerste 30 minuten een grote toename van de ALT aangetroffen waarvan de uitspoeling van ALT dat tijdens ischemie (Figuur 1F) werd uitgebracht weerspiegelt. ALT bleek goed te correleren met warme ischemische tijd 13. Machine perfusie verhoogde ATP-gehalte 2,8-voudige, als gevolg van een herstel van energie-status (figuur 1G). H &amp; E histologische analyse blijkt geen extra letsel opgelopen tijdens machine perfusie (Figuur 1 H, I). Opgemerkt zij dat de biopsie regime in dit protocol voorgesteld voor research doeleinden en is niet toepasbaar voor klinische doeleinden. <img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/52777/52777fig1.jpg" /> Figuur 1:. Evaluatie van menselijke levers tijdens machine perfusie Stroming door de PV en HA tijdens SNMP (A), de productie van gal, gekwantificeerd per uur van perfusie (B), zuurstof uprate rate (ONS), berekend uit het verschil in instroom (PV + HA) en uitstroom (vena cava), onderbroken lijnen tonen partiële zuurstofdruk in de in- en uitstroom tijdens perfusie (C), pH en lactaat tijdens perfusie (D, E), afgifte van ALT in het perfusaat (F), ATP gehalte gemeten in weefsel van biopsies per uur (G) en H &amp; E vlekken van de lever (54 jaar oud DCD, 19 min warme ischemie, 559 min koude ischemie) voor (H) en na (I) perfusie. Resultaten worden weergegeven als gemiddelde ± SEM. <ahref = &quot;https://www.jove.com/files/ftp_upload/52777/52777fig1large.jpg&quot; target = &quot;_ blank&quot;&gt; Klik hier om een ​​grotere versie van deze afbeelding te bekijken.

We beschrijven een werkwijze voor ex vivo machine perfusie van menselijke lever transplantaten bij subnormothermic temperatuur (21 ° C).

Functionele menselijke lever behoud en herstel door middel van Subnormothermic Machine perfusie

There is currently a severe shortage of liver grafts available for transplantation.  Novel organ preservation techniques are needed to expand the pool of ...

Het algemene doel van deze procedure is het uitvoeren van een subnormothermische machineperfusie van de menselijke lever voor de bewaring, het herstel en de beoordeling van het orgaan. In een preklinische onderzoekssetting wordt dit bereikt door de lever eerst voor te bereiden voor aansluiting op het apparaat. In de tweede stap wordt het machineperfusiesysteem geprimed, waarna de lever in de laatste stap wordt aangesloten en de perfusie wordt gestart.De machine-geperfuseerde lever wordt functioneel actief bij een subnormale thermische toestand en produceert gal. Uiteindelijk kunnen monsters die tijdens de perfusie uit de lever zijn verzameld, worden geanalyseerd om het metabole herstel en de functie van het orgaan te bestuderen. Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande bewaarmethoden, zoals koude perfusie en normotherme perfusie, is dat subnormale thermische machine-perfusie functioneel herstel en beoordeling van de levensvatbaarheid van de lever mogelijk maakt, zonder dat er hoef te worden voldaan aan de hoge metabole eisen van perfusie bij lichaamstemperatuur.Veel aspecten van deze techniek vereisen ervaring of een demonstratie voor een succesvolle uitvoering. Zo kan een demonstratie van de preparatie van de lever op de instrumententafel, inclusief de dissectie van de arterie, vene en galgang, nuttig zijn voor onderzoekers zonder voorafgaande chirurgische training. Plaats bij ontvangst van de lever een met ijs gevulde organenkom op een steriel afgedekt oppervlak en haal de lever uit de transportbox, waarbij deze grotendeels ondergedompeld blijft in de zak met koude bewaaroplossing. Gebruik vervolgens een Metzenbaum-schaar om de verschillende vertakkingen langs de arteriële toevoer naar de lever vrij te leggen, van de aorta tot de arteria hepatica propria.Dissect vervolgens voorzichtig de rest van de arterie om te voorkomen dat vaten die de lever van bloed voorzien worden doorgesneden, zonder takken af te snijden of af te binden die geen zichtbaar uiteinde hebben. Wanneer de arterie is geïsoleerd, worden zijden hechtingen maat 0 tot 4-0 gebruikt om alle arteriële takken die de lever niet voorzien af te binden. Bind de milt- en maagslagaders af en snijd deze door dicht bij hun oorsprong op de truncus coeliacus.Snijd een aortapatch rond de truncus coeliacus. Gebruik vervolgens een arteriële perfusiecanule om de truncus coeliacus te canuleren. Ontleed nu de vena portae, waarbij eventuele zijtakken worden afgebonden of gaten in de vene worden gehecht, en canuleer deze met een vena portae-perfusiecanule.Verwijder delen van het diafragma van de vena cava suprahepatica zonder de ader zelf door te snijden. Snijd vervolgens twee weefselmonsters van twee tot drie millimeter lang met een volledige omtrek af van het uiteinde van de ductus choledochus. De monsters moeten voorzichtig worden behandeld.Bevries één monster snel in vloeibare stikstof voor bewaring bij -80 °C en bewaar het andere monster in 10% gebufferde formine. Cannuleer vervolgens de ductus choledochus met een vaatcannule en sluit hier een drainageslang van een kleine diameter aan. Ligeer daarna de ductus cysticus met een zijden hechtdraad maat 0.Sluit de spoelset aan op ijskoude zakken lactaatringeroplossing en vul de slang om de lucht te verwijderen. Stel de stroomregelaar van de spoelslang in op een langzame druppelstroom en occludeer de poortader bij de hilus om eventuele lucht in het vat te verwijderen. Vul nu de canule in de ader met spoelvloeistof om de lucht uit de poortader te verwijderen, waarbij u er zorg voor draagt dat de zak niet hoger dan 20 centimeter boven de hoogte van de lever wordt geplaatst om overmatige druk op de ader te voorkomen.Spoel de lever vervolgens door met in totaal twee liter ijskoude lactaat-Ringeroplossing. Occludeer tijdens het spoelen kortstondig de poortader op het laagste punt om te controleren op lekken, en herhaal vervolgens het spoelen van de leverarterie met één liter oplossing zoals zojuist gedemonstreerd; terwijl de lever wordt gespoeld, wordt het perfusiesysteem geprimed door twee liter perfusievloeistof op kamertemperatuur aan de orgaanbak toe te voegen en het apparaat te starten om de slangenset te primen. Stel de temperatuur in op 21 °C.Stel vervolgens een druk in van 3 mmHg op de poortader en 30 mmHg op de hepatische arterie. Open de carbogentank en stel deze in op een flow van 3 L/min. Neem daarna een bloedgasmonster af via de bemonsteringspoorten van de poortader en de instroom van de hepatische arterie, en analyseer de monsters in het bloedgasanalyseapparaat volgens de instructies van de fabrikant om een adequate oxygenatie en pH te bevestigen.Gebruik natriumbicarbonaat of waterstofchloride om de pH naar behoefte te corrigeren. Neem vervolgens, voordat de lever wordt aangesloten, een monster van 1 mL van het perfusaat als nulmeting en bewaar dit bij -80 °C. Gebruik op dit moment ook een enkelzijdig stalen mesje om twee wigbiopten van ongeveer 250 mg elk uit de lever te snijden.Vries één monster snel in vloeibare stikstof in voor bewaring bij -80 °C en fixeer het andere monster in 10% gebufferde formaline. Weeg de lever voordat u begint met de perfusie, breng het orgaan vervolgens over naar de organkamer van het apparaat en verwijder de lucht uit de canules. Zoals zojuist gedemonstreerd.Wanneer de canules zijn geplaatst, worden de instroom van de poortader en de leverarterie aangesloten op de betreffende canules. Start de perfusie en zorg ervoor dat de lever is ondergedompeld in perfusievloeistof door eventuele droge oppervlakken, inclusief de instroomvaten, te bedekken met vochtig steriel gaas. Om uitdroging te voorkomen, laat u de galbuis draineren in een opvangbakje.Zorg ervoor dat de opening van de galafvoer zich op het niveau van de lever of lager bevindt, zodat de gal vrij kan weglopen. Zodra de lever is opgewarmd tot 21 °C, moeten de stroomsnelheden worden ingesteld op respectievelijk 275 tot 325 en 50 tot 100 milliliters per minuut per kilogram voor de poortader en de leverarterie. Neem tijdens de perfusie, indien nodig, monsters van het geperfuseerde leverweefsel en de gal.Zet de perfusie drie uur voort, terwijl de druk, de pH en de oxygenatie worden gemonitord en de pH indien nodig wordt bijgesteld met natriumbicarbonaat. Verzamel aan het einde van de perfusie de laatste monsters, koppel de lever los en verwijder de galgangcannule. Neem tenslotte, zoals zojuist gedemonstreerd, twee weefselmonsters van de galgang na de perfusie en voer de menselijke lever af.Volg de juiste richtlijnen voor de afvoer van biologisch gevaarlijke materialen. De flow begint laag als gevolg van een hogere weerstand in de koude lever, gebruikmakend van een druk van 3 mmHg op de poortader en 30 mmHg op de leverarterie. De doelflows kunnen over het algemeen worden bereikt zodra de lever is opgewarmd tot 21 °C na 60 minuten perfusie. Regelmatige meting van het perfusaat via bloedgasanalyse is essentieel, zowel voor experimentele doeleinden als voor het handhaven van adequate perfusieomstandigheden.Bijvoorbeeld, de partiële druk van opgeloste zuurstof moet groter zijn dan 700 millimeters mercury bij de instroom van zowel de vena portae als de arteria hepatica. Terwijl de zuurstofdruk van de uitstroom, gemeten in de vena cava, over het algemeen zou moeten afnemen bij een langere perfusie, wat wijst op een toenemende zuurstofopname. Ook hepatische transaminases kunnen bijvoorbeeld worden gemeten in de PERFU eight.Een stijging van alanine-transaminase, of ALT, wordt over het algemeen waargenomen in de eerste 30 minuten van de perfusie, met een minimale verdere stijging gedurende de rest van de perfusie. Verdere evaluatie van de ATP-productie in machine-geperfundeerde levers onthult een 2,8-voudige toename in het ATP-gehalte van de lever, wat wijst op een herstellende energiestatus. Bovendien laat H&amp;E-histologische analyse geen aanvullende beschadigingen zien die tijdens de procedure zijn opgelopen.Het volgen van deze procedure maakt een uitgebreide analyse van de geïsoleerde lever mogelijk, wat unieke inzichten biedt in de hepatische fysiologie en pathologie. Na het bekijken van deze video zou u een goed begrip moeten hebben van hoe een menselijke lever in stand moet worden gehouden tijdens subthermische machineperfusie om de beoordeling van de functie buiten het lichaam te faciliteren.

functional-human-liver-preservation-recovery-means-subnormothermic

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Marginale enten, zoals vette levers, enten van oudere donoren, of levers teruggehaald na hartdood (DCD) tolereren conventionele, koude statische opslag alleen slecht. We ontwikkelden een nieuw model van subnormothermic ex vivo lever perfusie voor het behoud, de beoordeling, en de reparatie van marginale lever transplantaties voorafgaand aan de transplantatie.

Techniek van Subnormothermic<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Leverperfusie voor de opslag, Assessment, en reparatie van Marginal Lever Enten

Hier presenteren we een protocol dat de geoxygeneerde ex situ machineperfusie van donorlevergrafts beschrijft. Dit artikel bevat een stap voor stap protocol om het levergraft voor machineperfusie te verkrijgen en voor te bereiden, de perfusie vloeistof voor te bereiden, de perfusiemachine te primen en de geoxygeneerde normotherme machineperfusie van het levergraft uit te voeren.

Ex Situ normothermische machineperfusie van donorlevers

Er is een belangrijke donor van lever tekort, en criteria voor lever donoren hebben uitgebreid. Normothermic ex vivo lever perfusie (NEVLP) is ontwikkeld om te evalueren en wijzigen van orgaanfunctie. Deze studie toont een model van de rat van NEVLP en test het vermogen van gepegyleerde-katalase, te verzachten lever behoud letsel.

Een kleine diermodel van Ex Vivo Normothermic lever perfusie

Het varkensmodel van normotherme machineperfusie (NMP) in de lever, dat hier wordt beschreven, kan met succes worden gebruikt om NMP te bestuderen als een conserveringsstrategie, een hulpmiddel voor levensvatbaarheidsbeoordeling en een platform voor orgaanherstel. Het heeft een hoge translationele waarde, maar het is technisch uitdagend en arbeidsintensief.

Normothermische geïsoleerde leverperfusie bij varkens

Een normotherm ex vivo leverperfusie (NEVLP) systeem werd gecreëerd voor muizenlevers. Dit systeem vereist ervaring in microchirurgie, maar zorgt voor reproduceerbare perfusieresultaten. Het vermogen om muizenlevers te gebruiken vergemakkelijkt het onderzoek van moleculaire routes om nieuwe perfusaatadditieven te identificeren en maakt de uitvoering van experimenten gericht op orgaanherstel mogelijk.

Normothermic Ex Vivo Lever Machine Perfusie in Muis

Dit protocol schetst de methodologie voor het opstellen van een varkensmodel met behulp van variabele temperatuurgecontroleerde machineperfusie (MP) voor het behoud van de donorlever, gevolgd door orthotope levertransplantatie (OLTx). Het heeft tot doel het slagingspercentage van OLTx te bevorderen met behulp van donordonatie na overlijden in de bloedsomloop (DCD) lever en een stabiel model op te zetten.

Bewaring van varkensdonatie na overlijden van de bloedsomloop (DCD) lever door perfusie en orthotope levertransplantatie

Hier presenteren we een protocol voor een open-source, aanpasbaar normotherm ex vivo perfusiesysteem dat is ontworpen om de hoge kosten en beperkte flexibiliteit van bestaande platforms te overwinnen, waardoor een toegankelijker, kostenefficiënter en iteratiever gebruik in preklinisch biomedisch onderzoek mogelijk wordt.

Een open-source normothermisch perfusiesysteem ontworpen voor onderzoekswetenschappers

Het doel is om een ​​nieuwe methode, ademhaling-control elektrische stimulatie (BreEStim) voor het beheer van neuropathische pijn en spasticiteit.

Ademhaling-gecontroleerde elektrische stimulatie (BreEStim) voor beheer van neuropathische pijn en spasticiteit

De mechanismen die leiden tot de ontwikkeling van intimale hyperplasie (IH) en bypass falen nog steeds slecht begrepen. Deze studie beschrijft een ex vivo-systeem voor de menselijke aderen onder gecontroleerde flow en druk perfuseren. Verder is de efficiëntie van het extern wapeningsnet beperken de ontwikkeling van IH werd geëvalueerd.

Procedure for Human aderen Ex Vivo Perfusie en Externe Reinforcement

Hier presenteren we een protocol voor het uitvoeren van een geïsoleerde leverperfusie (IHP) met melfalaan en we bespreken ook IHP als een behandeloptie voor levermetastasen van uveaal melanoom.

Geïsoleerde leverperfusie voor de behandeling van leveruitzaaiingen van oogmelanoom

Leer subnormotherme machineperfusie van menselijke lever voor behoud en herstel van orgaanfunctie. Deze techniek maakt metabole beoordeling mogelijk bij 21 °C zonder hoge metabole eisen.

Functionele menselijke lever behoud en herstel door middel van Subnormothermic Machine perfusie

Meer video's verkennen