Name: Mouse Model van Allo-immuun geïnduceerde Vascular Afwijzing en Transplant Aderverkalking (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 5 s
Description: Leer aortainterpositiegrafting bij muizen om vasculaire afstoting en transplantatie-arteriosclerose te bestuderen. Deze methode helpt onderzoekers immuun-gemedieerde afstoting te analyseren.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door subsidies van de Canadese Institutes of Health Research en Heart and Stroke Foundation van BC &amp; Yukon (JCC).

Alle protocollen die in deze studie werden beoordeeld en door de Simon Fraser University Dierverzorging ethische commissie goedgekeurd. Gebruik Balb / CYJ (H2 d) donor muizen en C57BL / 6 (H2 b) ontvangende muizen allogène reacties te onderzoeken. Muizen worden gebruikt voor experimenten in de leeftijd van 8-12 weken. Gebruik een vrouwelijke of mannelijke muizen. Syngene controles bestaan ​​uit aortische segmenten uit C57BL / 6 donors in C57BL / 6 ontvangers. 1. donor en ontvanger Voorbereiding Opmerking: Zowel de donor en ontvanger worden verdoofd en voorbereid voor de operatie ischemie van het transplantaat te beperken. Injecteerbare anesthetica worden gebruikt in het protocol bij obstructie van het dier te voorkomen door apparatuur die nodig is voor de levering van inhalatie anesthetica. Indien gewenst, inhalatie verdovingsmiddel een geschikt alternatief. Uit de eerste injectie van anesthesie, het hele procedure duurt ongeveer 90 minuten in beslag. Ischemische tijd van het transplantaat minder than 30 min. <ol><li> Verdoven de muis met intraperitoneale injecties van ketamine (100 mg / kg, 10 mg / ml) en xylazine (10 mg / kg, 1 mg / ml). De muis wordt verdoofd binnen 10 tot 15 min. Beoordeel de diepte van de anesthesie door knijpen de vette deel van het dier voet pad. Dien 1/3 van de oorspronkelijke dosis van het anestheticum cocktail, indien nodig, totdat het dier vertoont geen terugtrekking reflex. Bewaken van de ademfrequentie nauw na elke cocktail wordt toegediend. Tijdens de operatie, een beoordeling van de anesthesie elke 15 minuten door afklemmen van de voorste buikwand met een pincet. De muizen moeten blijven diep geanesthetiseerd 60 tot 90 min. </li><li> Smeer ogen van de muis met een oogzalf tot droog voorkomen terwijl onder narcose. </li><li> Scheer haar zo dicht mogelijk bij de huid mogelijk op de buik ventrale gebied van de midden-thorax aan het schaambeen. Wees vooral voorzichtig niet te nick elke huid. Laat ontharingscrème niet gebruiken omdat het ik kan worden geabsorbeerdnto de huid en inflammatoire zou kunnen zijn. </li><li> Plaats het dier in rugligging op een handdoek boven de verwarming tafel of pad. </li><li> Reinig de chirurgische site met een voorlopige scrub met 2% chloorhexidine. Bereid een grote werkruimte aan het chirurgische veld te maximaliseren. Begin schrobben in het midden van de operatieplaats en naar buiten in een lineaire of cirkelvormige wijze. Gooi het gaas. Herhaal deze procedure ten minste 5 keer. Breng een alcohol prep pad naar hetzelfde gebied. Zodra de alcohol droog is, de voorbereiding van de schone ruimte met Betadine-oplossing en laken met een steriel gaasje. </li></ol> 2. End-to-end Anastomosis Procedure <ol><li> Donor Operation <ol><li> Handhaaf aseptische techniek tijdens de gehele operatie. Maak alle aanrecht en chirurgische tafelbladen met 0,5% versnelde waterstofperoxideoplossing vóór gebruik. Wikkel en autoclaaf alle chirurgische instrumenten, gazen, gordijnen en jassen voor gebruik. Controleer steriliteit van de instrumenten met een stoomsterilisator indicator strip geplaatst in elke verpakking. Steriele chirurgische handschoenen worden gebruikt en weggegooid tussen ingrepen. Voor meerdere operaties, steriliseren de chirurgische instrumenten tussen toepassingen met de hete glaskraal sterilisator. </li><li> Plaats de donor muis in rugligging op een schone, dunne Plexiglas board omwikkeld met steriel laken onder de operationele microscoop bij 8-30X vergroting. </li><li> Na een adequate chirurgische anesthesie, zoals beschreven in paragraaf 1.1, doorgaan met de operatie. </li><li> Met behulp van een steriele schaar, maken een middellijn lagere longitudinale incisie in de buik van het schaambeen naar de xyphoid proces. </li><li> Met behulp van een kleine retractor, opent de buik muren om de holte bloot te leggen. </li><li> Met behulp van steriele wattenstaafje applicators, zachtjes trekken de darmen superieur aan het dier links en bedekken met een gaasje bevochtigd met een zoutoplossing. Beweeg de voortplantingsorganen inferiorly en zoek de infrarenale aorta en de vena cava inferior (IVC). Moistien van de blootgestelde weefsels periodiek met zoutoplossing. </li><li> De medische No. 5 forceps, scheid de aorta van de IVC, vanaf het niveau van de linker renale arterie naar de bifurcatie. Gebruik 10-0 polyamide monofilament hechtingen aan de kleine takken ligeren nabij de aorta. </li><li> Zodra aorta van de donor is gescheiden van de IVC, verzadigen het vat met een zoutoplossing, bedekken de blootgestelde holte met vochtig gaas en zet de donor apart op een steriele omgeving. De status van de donor (ademhalings- en cardiovasculaire functie, en de diepte van anesthesie) elke 15 min. Begin met die op de ontvanger, het isoleren van de aorta zoals hieronder beschreven (stappen 2.2.1 tot 2.2.7). </li><li> Wanneer de ontvanger aorta is gescheiden van de IVC en laat terug de donor onder de microscoop. Kruisklem (proximaal en distaal van het segment van belang) de donor aorta ongeveer 5 mm van elkaar, twee 4 mm microvasculaire klemmen. </li><li> Met behulp van de microscissors Vannas-Tübingen,doorsnijden een transplantaatsegment (3-4 mm lang) van de abdominale aorta. </li><li> Met behulp van een 25 G 08/05 naald bevestigd aan een injectiespuit, spoel de uitgesneden aorta met heparine (100 U / ml), zoutoplossing. Zorg ervoor dat de punt van de naald niet in contact komt met het vat komen. </li><li> Plaats aorta in heparine (100 U / ml) zoutoplossing op ijs en zet apart. Hoewel nog steeds onder diepe narcose, laat de microvasculaire klemmen. Euthanaseren de donor door verbloeding. </li><li> Implanteren de donor vaartuig binnen 30 min van uitsnijding. Hoewel het mogelijk is één donor vat voor meerdere ontvangers gebruikt door uitsnijden van een grotere lengte van de aorta, houdt de ischemische tot minder dan 30 min. </li></ol></li><li> Ontvanger Operation <ol><li> Handhaaf aseptische techniek tijdens de gehele operatie, zoals in donor operatie. </li><li> Plaats de ontvanger muis in rugligging op een dunne plexiglas bord omwikkeld met steriel laken onder de operationele microscoop bij 8-30X vergroting. </li><li> After adequate anesthesie, verder met operatie wanneer het dier vertoont geen terugtrekking reflex. </li><li> Met behulp van een steriele schaar, maken een middellijn lagere longitudinale incisie in de buik van het schaambeen naar de xyphoid proces. </li><li> Met behulp van een kleine retractor, opent de buik muren om de holte bloot te leggen. </li><li> Met behulp van steriele wattenstaafje applicators, zachtjes trekken de darmen superieur aan het dier links en bedekken met een gaasje bevochtigd met een zoutoplossing. Beweeg de voortplantingsorganen inferiorly en zoek de infrarenale aorta en IVC. Bevochtig de blootgestelde weefsels periodiek met zoutoplossing. </li><li> Scheid de aorta van de IVC, vanaf het niveau van de linker renale arterie naar de bifurcatie. Gebruik indien nodig 10-0 polyamide monofilament hechtingen aan de kleine takken in de buurt van de aorta afbinden. </li><li> Kruisklem (proximaal en distaal van het segment van belang) de aorta ongeveer 5 mm van elkaar, twee 4 mm microvasculaire klemmen. </li><li> De microscissors Vannas-Tübingen, maak een horizontale aortotomy en resectie een klein segment (niet meer dan 0,5 mm) van de abdominale aorta naar de donor aortaprothese tegemoet. </li><li> Spoel de uitgesneden aorta met heparine (100 U / ml), zoutoplossing. De donor aorta graft moeten van de juiste lengte zijn om doorsneden aorta uiteinden van de ontvanger aan te sluiten. </li><li> Plaats de donor aortaprothese in de orthotope positie en anastomoseren graft einde van de donor op het einde van de ontvanger, die overeenkomen met de respectieve implantaat anatomische oriëntatie het ontvangende organisme. </li><li> Voorzichtig grijpen van de tunica externa van het schip en Evert het iets met de medische No.5 tang. Met behulp van de tang, rijdt de naald naar 10-0 polyamide monofilament hechtmateriaal door de volledige dikte van de vaatwand teneinde de donor aorta-implantaat te bevestigen aan operatief weggenomen vaartuig de ontvanger. Let erop dat de opening vaartuig niet is afgesloten vanwege to onbedoelde stikken van de achterwand van het vat. </li><li> Voor continue hechtingen plaatst verblijf hechtingen om 9:00 in zowel de bovenste en onderste einden van het transplantaat. Vanaf het bovenste uiteinde van het transplantaat uit 03:00, anastomose de gereseceerd uiteinden met 2 hechtingen lopen en zet de hechting aan het verblijf hechtdraad. <ol><li> Flip het transplantaat over en blijven de lopende hechtdraad om een ​​deel van het schip dorsale, aan de oorsprong verblijf hechtdraad. Beveiligde zonder toepassing veel druk op het vat. Herhaal het hechten van de onderste anastomose. Opmerking: De onderbroken hechtingen begint net als de continue hechting behalve dat het vaartuig anastomose drie gescheiden hechtingen tussen het verblijf hechtingen. Anastomose is meestal 20 min. </li></ol></li><li> Zodra de anastomose is voltooid, laat de distale microvasculaire klem om retrograde bloed te laten stromen en te controleren op lekkage van de geanastomoseerd sites. Bij een lekkage, immediately plaats een steek om de defecte plaats te sluiten. Als er geen bloeden op de plaatsen, dan is de proximale klem los. </li><li> Onderzoek de transplantatie en controleer of er geen bloed obstructie in de graft, en de proximale en distale gedeelte van het schip van de ontvanger. Krachtige impuls patroon in vat zowel de donor en de ontvanger is een primaire indicatie dat het bloed vrij kan stromen. Met behulp van de pincet voorzichtig grijpen ene einde van het verblijf hechtingen en iets buiten keren vaartuig naar de achterwand van het vaartuig inspecteren. Opmerking: Er mag geen plooien van de vaatwand worden aan beide zijden van de anastomose plaatsen. Slechte doorbloeding na verwijdering van de klemmen is een teken van trombose. </li><li> Met behulp van wattenstaafje applicators, de terugkeer van de darmen in de buikholte. </li><li> Met de Castroviejo naaldhouder en Graefe pincet, sluit de buikwand met 5-0 polypropyleen hechtingen met een continue stiksels. Sluit de huidlaag met dezelfdehechtingen gebruikt subcutane afsluiting. </li><li> Dien Torbugesic (1 mg / kg) im onmiddellijk na beëindiging van het transplantaat. </li><li> Onmiddellijk geven, in de volgorde, Atipamezole (1 mg / kg), ketoprofen (5 mg / kg) en verwarmd Ringer-lactaatoplossing subcutaan. </li><li> Onmiddellijk na de operatie, plaatst muizen in een verwarmde kooi onder water deken &#39;s nachts (12 uur). Tijdens de narcose-herstelperiode, plaatst de dieren alleen in een schone, droge vrije ruimte. Lijn de kooi (geautoclaveerd) met schone papieren handdoeken en stel de temperatuur van het water deken ongeveer 20 tot 22 ° C. Zorg voor droge en natte brokjes ad libitum op de kooi vloer. Opmerking: Een belangrijk onderdeel van postoperatieve zorg is de observatie van de dieren en passende interventie, indien nodig, tijdens het herstel van de anesthesie en chirurgie. De noodzakelijke intensiteit van de controle varieert met het dier en kan groter zijn in de directe verdoving herstelperiode compared later in postoperatief herstel. </li><li> Voortdurend toezicht op dieren hebben ondergaan anesthesie gevolgd tot ze volledig te herstellen. Moet het dier in staat zijn om zonder hulp borstligging te behouden en het moet rustig en vrij van pijn verschijnen voordat het onbeheerd worden achtergelaten. </li><li> Geef Buprenorfine (0,1 mg / kg BID) en ketoprofen (5 mg / kg SID) gedurende drie dagen zowel subcutaan. </li><li> Monitor cardiovasculaire en respiratoire functie, lichaamstemperatuur en postoperatieve pijn of ongemak tijdens het herstel van anesthesie gedurende ten minste drie dagen. Extra zorg kan nodig zijn, zoals de administratie van analgetica en andere drugs, en parenterale vloeistoffen om uitdroging en elektrolyten verlies te minimaliseren. </li><li> Beoordelen van het succes van de transplantatie door het observeren van de motorische functie van de achterpoten. Compleet succes van de transplantatie omvat onbelemmerde bloedstroom naar de achterste ledematen en staart, die onmiddellijk na herstel van de anim moetal, en volledig herstel zonder verlamming van de achterpoten op de tweede dag </li></ol></li></ol> 3. Tissue Collection Opmerking: Vooraf bepaalde eindpunten variëren 3-60 dagen afhankelijk van het type analyse gewenst is en de aard van het antigeen mismatch. In het algemeen, intimale verdikking robuust op dag 30 na transplantatie over volledige MHC mismatch muizenstammen. <ol><li> Verdoven de muis met intraperitoneale injecties van ketamine (100 mg / kg, 10 mg / ml) en xylazine (10 mg / kg, 1 mg / ml). Beoordeel de diepte van de anesthesie door knijpen de vette deel van het dier voet pad. Ga verder met operatie wanneer het dier vertoont geen terugtrekking reflex. </li><li> Reinig de chirurgische site met water en eindigend met 70% alcohol. </li><li> Plaats het dier in rugligging op een dienblad vol met absorberende pad. </li><li> Open de buikholte met een grote middellijn longitudinale incisie. Plaats een self-behoud oprolmechanisme aan de holte bloot te leggen, de IVC eend de abdominale aorta. </li><li> Voorzichtig scheiden de getransplanteerde donor aortasegment van de naburige IVC met een paar medische No. 5 forceps. Wees vooral voorzichtig de adventitia van de getransplanteerde schip niet te strippen. </li><li> Maak de borstholte door snijden door de ribben langs beide zijden van de ribbenkast tot aan het borstingang. Weerspiegelen de voorste borstwand superieur aan het hartzakje bloot te leggen en te beveiligen de ribbenkast met een paar hemostaat. </li><li> Zodra het hart is blootgesteld Plaats een 25 G 08/05 naald (bevestigd aan een spuit) in de linker ventrikel en het spoelen met 0,1 ml van heparine (100 U / ml), zoutoplossing. </li><li> Met behulp van een schaar, verwijder het rechter atrium om het bloed, gehepariniseerde saline en fixatief om het lichaam tijdens perfusie verlaten. Perfuseren het dier met 5 ml 4% paraformaldehyde of totdat de vloeistof helder is. Verwijder het hart om euthanasie te garanderen. </li><li> Accijnzen getransplanteerd segment vat en onder te dompelen in 4% paraformaldehyde niet langer dan een uur. Stel de getransplanteerde schip in oktober (optimale snijden temperatuur) matrix en flash bevriezen. Sectie van het vaartuig onder een cryostaat ingesteld op 8 um dikte. Stain secties met Hematoxyline &amp; Eosine en / of Verhoeff-van Gieson (van Gieson) elastische vlek. </li></ol> 4. morfologische analyse van Enten Opmerking: TA wordt gekenmerkt door intimale verdikking 13. In dit model, intimale verdikking en een resulterende verkleining van de lumen reflecterend zijn van de ernst van de immuun-gemedieerde vasculaire verwonding. Syngraft controles worden gebruikt om de basislijn kenmerken van de vaartuigen te bepalen bij afwezigheid van allogene immuunresponsen. Deze controles ook in staat de evaluatie van arteriële schade die optreedt ten gevolge van de chirurgische procedure. Er mag geen intimale verdikking in syngrafts zijn. <ol><li> Om intimaverdikking en luminal occlusie onderzoeken, meet het gebied binnen de endotheelcellenlaag, interne elastische lamina (IEL) en externe elastische lamina (EEL) op elastiek van Gieson gekleurd slagader segmenten met een beeld analyse software. De volgende parameters kunnen worden gebruikt om arteriële veranderingen weerspiegelt TA bepalen. <ol><li> Meet de absolute intima gebied: gebied binnen de interne elastische lamina - het gebied binnen de endotheliale cellaag. Dit geeft een absolute meting van intimale groei, die kenmerkend is voor TA. </li><li> Meet de absolute mediale gebied: gebied binnen de externe elastische lamina - gebied binnen de interne elastische lamina. Dit geeft een absolute meting van mediale afbraak of groei, die soms kunnen optreden als gevolg van immuungemedieerde wijzigingen in dit gebied van de vaatwand. </li><li> Meet de totale vaartuig gebied als het gebied binnen de externe elastische lamina. Dit verschaft een meting van het vaartuig remodeling waarvan uitbreiding of vernauwing van de slagader als gevolg van immunologische schade omvat. </li><li> Maatregelde intima / media: (gebied binnen de interne elastische lamina - gebied binnen de endotheliale cellaag) / (gebied binnen de externe elastische lamina - gebied binnen de interne elastische lamina). Dit verschaft een relatieve maat voor intimale expansie en normaliseert verschillen in grootte vat. </li><li> Meet het% vernauwing van het lumen: [(gebied binnen de interne elastische lamina - gebied binnen de endotheliale cellaag) / gebied met de interne elastische lamina)] * 100. Dit verschaft een maat voor de omvang van luminale occlusie, ten gevolge van een combinatie van intimale groei en hermodellering (binnen of naar buiten) van de vaatwand. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Billingham, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Graft+coronary+disease%3A+the+lesions+and+the+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Graft coronary disease: the lesions and the patients.</a> Transplant Proc. 21, 3665-3666 (1989).</li>
<li>Foegh, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+rejection--graft+arteriosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Chronic rejection--graft arteriosclerosis.</a> Transplant Proc. 22, 119-122 (1990).</li>
<li>Libby, P., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Chronic rejection.</a> Immunity. 14, 387-397 (2001).</li>
<li>Tellides, G., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferon-gamma+axis+in+graft+arteriosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+research%22%5BJournal%5D)">Interferon-gamma axis in graft arteriosclerosis.</a> Circulation research. 100, 622-632 (2007).</li>
<li>Johnson, D. E., Gao, S. Z., Schroeder, J. S., DeCampli, W. M., Billingham, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+spectrum+of+coronary+artery+pathologic+findings+in+human+cardiac+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+heart+transplantation%22%5BJournal%5D)">The spectrum of coronary artery pathologic findings in human cardiac allografts.</a> The Journal of heart transplantation. 8, 349-359 (1989).</li>
<li>Gao, S. Z., Alderman, E. L., Schroeder, J. S., Silverman, J. F., Hunt, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+coronary+vascular+disease+in+the+heart+transplant+patient%3A+coronary+arteriographic+findings%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+College+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Accelerated coronary vascular disease in the heart transplant patient: coronary arteriographic findings.</a> Journal of the American College of Cardiology. 12, 334-340 (1988).</li>
<li>Mennander, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+rejection+in+rat+aortic+allografts.+An+experimental+model+for+transplant+arteriosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb%22%5BJournal%5D)">Chronic rejection in rat aortic allografts. An experimental model for transplant arteriosclerosis.</a> Arterioscler Thromb. 11, 671-680 (1991).</li>
<li>Choy, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Granzymes+and+perforin+in+solid+organ+transplant+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Differ%22%5BJournal%5D)">Granzymes and perforin in solid organ transplant rejection.</a> Cell Death Differ. 17, 567-576 (2010).</li>
<li>Johnson, P., Carpenter, M., Hirsch, G., Lee, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recipient+cells+form+the+intimal+proliferative+lesion+in+the+rat+aortic+model+of+allograft+arteriosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Recipient cells form the intimal proliferative lesion in the rat aortic model of allograft arteriosclerosis.</a> Am J Transplant. 2, 207-214 (2002).</li>
<li>Minami, E., Laflamme, M. A., Saffitz, J. E., Murry, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracardiac+progenitor+cells+repopulate+most+major+cell+types+in+the+transplanted+human+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Extracardiac progenitor cells repopulate most major cell types in the transplanted human heart.</a> Circulation. 112, 2951-2958 (2005).</li>
<li>Yu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AIP1+prevents+graft+arteriosclerosis+by+inhibiting+interferon-gamma-dependent+smooth+muscle+cell+proliferation+and+intimal+expansion%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">AIP1 prevents graft arteriosclerosis by inhibiting interferon-gamma-dependent smooth muscle cell proliferation and intimal expansion.</a> Circ Res. 109, 418-427 (2011).</li>
<li>Miller, C., DeWitt, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+and+humoral+responses+to+major+and+minor+histocompatibility+antigens%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Cellular and humoral responses to major and minor histocompatibility antigens.</a> Transplant Proc. 5, 303-305 (1973).</li>
<li>Tsutsui, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lumen+loss+in+transplant+coronary+artery+disease+is+a+biphasic+process+involving+early+intimal+thickening+and+late+constrictive+remodeling%3A+results+from+a+5-year+serial+intravascular+ultrasound+study%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Lumen loss in transplant coronary artery disease is a biphasic process involving early intimal thickening and late constrictive remodeling: results from a 5-year serial intravascular ultrasound study.</a> Circulation. 104, 653-657 (2001).</li>
<li>Rossum, A., Enns, W., Shi, P., MacEwan, G. E., Choy, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bim+regulates+allogeneic+immune+responses+and+transplant+arteriosclerosis+through+effects+on+T+cell+activation+and+death%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Bim regulates allogeneic immune responses and transplant arteriosclerosis through effects on T cell activation and death.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 34, 1290-1297 (2014).</li>
<li>Ho, M. K., Springer, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+distribution%2C+structural+characterization%2C+and+biosynthesis+of+Mac-3%2C+a+macrophage+surface+glycoprotein+exhibiting+molecular+weight+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Tissue distribution, structural characterization, and biosynthesis of Mac-3, a macrophage surface glycoprotein exhibiting molecular weight heterogeneity.</a> J Biol Chem. 258, 636-642 (1983).</li>
<li>Inoue, T., Plieth, D., Venkov, C. D., Xu, C., Neilson, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibodies+against+macrophages+that+overlap+in+specificity+with+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+international%22%5BJournal%5D)">Antibodies against macrophages that overlap in specificity with fibroblasts.</a> Kidney international. 67, 2488-2493 (2005).</li>
<li>Shi, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunologic+basis+of+transplant-associated+arteriosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Immunologic basis of transplant-associated arteriosclerosis.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 93, 4051-4056 (1996).</li>
<li>Skaro, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD8%2B+T+cells+mediate+aortic+allograft+vasculopathy+by+direct+killing+and+an+interferon-gamma-dependent+indirect+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">CD8+ T cells mediate aortic allograft vasculopathy by direct killing and an interferon-gamma-dependent indirect pathway.</a> Cardiovasc Res. 65, 283-291 (2005).</li>
<li>Tellides, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferon-gamma+elicits+arteriosclerosis+in+the+absence+of+leukocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Interferon-gamma elicits arteriosclerosis in the absence of leukocytes.</a> Nature. 403, 207-211 (2000).</li>
<li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferon-gamma+induces+human+vascular+smooth+muscle+cell+proliferation+and+intimal+expansion+by+phosphatidylinositol+3-kinase+dependent+mammalian+target+of+rapamycin+raptor+complex+1+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Interferon-gamma induces human vascular smooth muscle cell proliferation and intimal expansion by phosphatidylinositol 3-kinase dependent mammalian target of rapamycin raptor complex 1 activation.</a> Circ Res. 101, 560-569 (2007).</li>
<li>Soulez, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+perlecan+fragment+LG3+is+a+novel+regulator+of+obliterative+remodeling+associated+with+allograft+vascular+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">The perlecan fragment LG3 is a novel regulator of obliterative remodeling associated with allograft vascular rejection.</a> Circ Res. 110, 94-104 (2012).</li>
<li>Choy, J. C., Kerjner, A., Wong, B. W., McManus, B. M., Granville, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perforin+mediates+endothelial+cell+death+and+resultant+transplant+vascular+disease+in+cardiac+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Perforin mediates endothelial cell death and resultant transplant vascular disease in cardiac allografts.</a> Am J Pathol. 165, 127-133 (2004).</li>
<li>Choy, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Granzyme+B+induces+endothelial+cell+apoptosis+and+contributes+to+the+development+of+transplant+vascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Granzyme B induces endothelial cell apoptosis and contributes to the development of transplant vascular disease.</a> Am J Transplant. 5, 494-499 (2005).</li>
<li>Reis, E. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dramatic+remodeling+of+advanced+atherosclerotic+plaques+of+the+apolipoprotein+E-deficient+mouse+in+a+novel+transplantation+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+vascular+surgery%22%5BJournal%5D)">Dramatic remodeling of advanced atherosclerotic plaques of the apolipoprotein E-deficient mouse in a novel transplantation model.</a> Journal of vascular surgery. 34, 541-547 (2001).</li>
<li>Potteaux, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppressed+monocyte+recruitment+drives+macrophage+removal+from+atherosclerotic+plaques+of+Apoe-%2F-+mice+during+disease+regression%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Suppressed monocyte recruitment drives macrophage removal from atherosclerotic plaques of Apoe-/- mice during disease regression.</a> J Clin Invest. 121, 2025-2036 (2011).</li>
</ol>

Wij hebben een protocol beschreven voor aorta tussenplaatsing enting in muizen die bruikbaar zijn voor het bestuderen van immuungemedieerde vasculaire afstoting en TA is. Dit model kan worden gebruikt om de oorzaken van TA, alsook de ontwikkeling van nieuwe therapeutische strategieën onderzocht. Het werd in het verleden een essentiële rol adaptieve immuniteit, cytotoxische T-cel responsen, cytokine gemedieerde CD4 T cel effector responsen en antilichaam-gemedieerde graft schade vaststellen TA 14,17-21. Artery...

In de afgelopen 30 jaar, hebben de vooruitgang in de immunosuppressieve geneesmiddelen afstoting verminderd als gevolg van acute afstoting, maar chronische afstoting blijft een grote uitdaging. De belangrijkste manifestatie van chronische harttransplantaatafstoting is transplantatie arteriosclerose (TA) 1,2. Deze aandoening wordt gekenmerkt door intimale hyperplasie en vasomotorische disfunctie van allograft slagaders en ontwikkelt als gevolg van immunologische targeting van endotheliale en gladde spiercellen van de ontvanger immuunsysteem. De specifieke gerichtheid van de graft vasculatuur gevolg van opname van vreemd peptide-major histocompatibility complex (MHC) wordt benadrukt door de ontwikkeling van TA uitsluitend graft slagaders en spaart ontvangende vaartuigen 3. In overeenstemming hiermee is de waarneming dat TA niet experimenteel optreden wanneer de ontvanger genetisch identiek aan de donor of wanneer de ontvanger mist T- en B-cellen 4. Immuungemedieerde vasculaire letsel en dysfunction veroorzaakt de ontwikkeling van intimale verdikking en fibrose, alsook de afwijkende accumulatie van lipiden en ECM eiwitten in TA 5. Intimaverdikking neigt concentrische het gehele arteriële boom 6/4 is. Transplantaatverlies en overlijden doorgaans het gevolg zijn van progressieve ischemie gevolg van luminale occlusie van arteriën 4 allograft. In 1991, Mennander et al. 7 pionierde een aorta tussenkomst model in ratten tot model TA. Verschillende groepen zijn vervolgens aangepast deze procedure voor gebruik bij muizen. In dit model, allograft aorta segmenten ontwikkelen letsels die hebben eigenschappen vergelijkbaar TA waargenomen in klinische transplantaties. Dit omvat intimale verdikking gekenmerkt door de accumulatie van gladde spier-achtige cellen en leukocyten ontvanger 7. De laatste 2 decennia is dit model gebruikt om belangrijke inzicht in de mechanismen van vasculaire verwonding, afwijzing en TA genereren. Het kan onsed te vragen met betrekking tot het immuunsysteem en vasculaire reacties tijdens arteriële pathologie te onderzoeken. De keuze van het antigeen mismatch van invloed op de mogelijkheid om de juiste te pakken deze vragen. Transplantaties binnen volledige MHC-barrières maakt een uitgebreide evaluatie van immuunresponsen die bekend is dat ze betrokken zijn bij orgaantransplantatie afstoting. Dit omvat directe CD4 en CD8 T-cel herkenning en doelgerichtheid van de buitenlandse peptide-MHC door graft-afgeleide cellen, indirecte CD4 (en eventueel CD8) T-cel herkenning en doelgerichtheid van graft-afgeleide alloantigenen door ontvangende antigeen presenterende cellen en antilichaam gemedieerde opname van allo-antigenen op vasculaire celoppervlakken 8. Echter de vasculaire respons op verwonding in volledige MHC-mismatch experimenten anders dan die klinisch waargenomen worden. Johnson et al. 9 blijkt dat, bij aorta-interpositie grafts getransplanteerd over een volledige MHC mismatch barrière meestede neointimale cellen zijn van de ontvanger oorsprong en niet die van donor oorsprong. Dit is anders dan waargenomen in menselijke transplantaties waar de meeste intimale gladde spiercellen van donor oorsprong 9,10. Om rekening te houden met deze beperking, hebben alternatieve experimentele modellen die gepaard enten over minor histocompatibility antigen mismatches ontwikkeld dat vasculaire reacties die meer lijken op deze waargenomen in klinische transplantatie 11 triggeren. Hoewel deze alternatieve apparaten kan belangrijke conclusies worden getrokken ten aanzien van de vasculaire reacties die de ontwikkeling van TA, de immunologische processen die vasculaire afstoting bij minor histocompatibility antigen mismatched grafts veroorzaken niet volledig opnieuw overgeven die welke voorkomen in de klinische setting drijven. Zo worden kleine histocompatibiliteitsantigenen slecht herkend door graft reactieve antilichamen 12. Gezien de bovenstaande overwegingen, is het belangrijk om de pathologische questi overwegenop wordt onderzocht bij het kiezen van het type antigeen mismatch gebruikt in een aorta tussenkomst model. Hier beschrijven we een gedetailleerd protocol voor muizen aorta tussenkomst enten. We beschrijven tussenvoeging enten tussen volledige MHC-incompatibele muizen maar hetzelfde protocol wordt gebruikt voor enting tussen ander antigeen mismatched muizenstammen.

<table><tbody><tr><td>C57BL/6J (H-2b)</td><td>Jackson Laboratories, Bar Harbour ME</td><td>Strain# 000664</td><td></td></tr><tr><td>Balb/cBYJ</td><td>Jackson Laboratories, Bar Harbour ME</td><td>Strain# 001026</td><td></td></tr><tr><td>Ketamine Hydrochloride Injection USP 100 mg/ml</td><td>Ketalean</td><td>DIN 00612316</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Xylazine Injection 20 mg/ml</td><td>Rompum</td><td>DIN 02169592</td><td></td></tr><tr><td>Ketoprofen Injection 100 mg/ml</td><td>Anafen</td><td>DIN 01938126</td><td></td></tr><tr><td>Butorphanol Tartrate&nbsp;injection 10 mg/ml</td><td>Torbugesic</td><td>DIN 008450000</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine Injection 0.3 mg/ml</td><td>Reckitt Benckiser</td><td>B.N. 5241</td><td></td></tr><tr><td>Atipamezole hydrochloride sterile injectable solution</td><td>Antisedan</td><td>DIN 02237744</td><td></td></tr><tr><td>Heparin Sodium Injection, USP, 1,000 units/ml</td><td>McKesson Distribution</td><td>DIN 02264315</td><td></td></tr><tr><td>Tears naturale ophthalmic ointment</td><td>Alcon</td><td>DIN 02082519</td><td></td></tr><tr><td>Stereomicroscope</td><td>Leica</td><td>M80</td><td></td></tr><tr><td>0.9% Sodium Chloride, steriele</td><td>Baxter Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lactated Ringer&rsquo;s solution, steriele</td><td>Baxter Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>0.9% Sodium Chloride Injection, steriele, 10 ml</td><td>Baxter Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alcohol Prep Pads</td><td>Loris</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Povidone Iodine</td><td>Betadine</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Chlorohexidine Gluconate 4% w/v</td><td>Germi-Stat</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Black Polyamide Monofilament</td><td>AROSurgical Instruments</td><td>T4A10Q07</td><td></td></tr><tr><td>Suture, 10-0 suture, 70 microns</td><td>Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Blue monofilament suture 5-0, P3 needle</td><td>Ethicon</td><td>8698G</td><td></td></tr><tr><td>1 ml Syringe</td><td>BD</td><td>REF 309659</td><td></td></tr><tr><td>10 ml Syringe</td><td>BD</td><td>REF 309604</td><td></td></tr><tr><td>1cc TB insulin syringe with 28 G 1/2</td><td>BD</td><td>REF 309309</td><td></td></tr><tr><td>25 G 7/8, hypodermic needle</td><td>BD</td><td>REF 305124</td><td></td></tr><tr><td>27 G 1/2, hypodermic needle</td><td>BD</td><td>REF 305109</td><td></td></tr><tr><td>Colibri Retractor- 1.5 cm spread 4 cm</td><td>Fine Science Tools</td><td>17000-04</td><td></td></tr><tr><td>S&amp;T CAF-4 Clip applying forceps, without lock</td><td>Fine Science Tools</td><td>00072-14</td><td></td></tr><tr><td>Supergrip forceps, S&amp;T</td><td>Fine Science Tools</td><td>00632-11</td><td></td></tr><tr><td>Medical No.5 forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11253-20</td><td></td></tr><tr><td>Lexer Baby Scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>14078-10</td><td></td></tr><tr><td>Micro Adson forceps serrated</td><td>Fine Science Tools</td><td>11018-12</td><td></td></tr><tr><td>Vannas-Tubingen microscissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>15003-08</td><td></td></tr><tr><td>Micro clamps, b-1; 3.5mm x 1mm; 7mm length</td><td>Fine Science Tools</td><td>00396-01</td><td></td></tr><tr><td>Graefe-forceps, 10cm 1x2 teeth</td><td>Fine Science Tools</td><td>11054-10</td><td></td></tr><tr><td>Castroviejo with lock and tungsten jaws</td><td>Fine Science Tools</td><td>12565-14</td><td></td></tr><tr><td>Hot glass bead sterilizer</td><td>Inotech 250</td><td>IS-250 - Steri-250</td><td></td></tr><tr><td>Non-woven gauzes</td><td>Progene</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cotton Tipped Applicators</td><td>Puritan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Beard Trimmer</td><td>Wahl</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Heating pad</td><td>Sunbeam</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

mouse model van allo-immuun geïnduceerde vascular afwijzing en transplant aderverkalking

Mouse Model of Alloimmune-induced Vascular Rejection and Transplant Arteriosclerosis

Vasculaire afstoting die leidt tot transplantaatarteriosclerose (TA) is de belangrijkste vertegenwoordiger van chronische harttransplantatiefalen. Bij TA veroorzaakt het immuunsysteem van de ontvanger schade aan de arteriële wand en disfunctie van endotheelcellen en gladde spiercellen. Dit veroorzaakt een pathologische herstelreactie die wordt gekenmerkt door intimale verdikking en luminaal occluderen. Het begrijpen van de mechanismen waardoor het immuunsysteem vaatverwering en TA veroorzaakt, kan de ontwikkeling van nieuwe manieren om transplantaatfalen te behandelen, informeren. Hier beschrijven we een muis aorta interpositie model dat kan worden gebruikt om de pathogene mechanismen van vasculaire afstoting en TA te bestuderen. Het model omvat het inenten van een aortasegment van een donordier in een allogene ontvanger. Afstoting van het slagadersegment omvat allo-immuunreacties en resulteert in arteriële veranderingen die lijken op vasculaire afstoting. De basistechnische benadering die we beschrijven, kan worden gebruikt met verschillende muizenstammen en gerichte interventies om specifieke vragen met betrekking tot vasculaire afstoting en TA te beantwoorden.

In dit model wordt de abdominale aorta van een Balb / CYJ muis geplaatst in de infrarenale aorta van een C57BL / 6 ontvanger. Dit maakt een uitgebreide evaluatie van alloimmune reacties die allograft slagaders richten. Immuungemedieerde vasculaire schade in dit model initieert vasculaire herstellende reacties die leiden tot intimale verdikking luminale vernauwing en rekrutering van immuuncellen (figuren 1 en 2). Deze criteria dienen dan als een uitlezing voor de ernst van alloimmuun rea...

We beschrijven een protocol voor aortische interpositie-grafting bij muizen. Het doel van het protocol is om een model te bieden waarmee pathologische processen en therapeutische strategieën kunnen worden bestudeerd die relevant zijn voor allo-immuunreacties in slagaders en de resulterende arteriële veranderingen die bijdragen aan falen van orgaantransplantatie.

Mouse Model van Allo-immuun geïnduceerde Vascular Afwijzing en Transplant Aderverkalking

Vascular rejection that leads to transplant arteriosclerosis (TA) is the leading representation of chronic heart transplant failure. In TA, the immune ...

Het algemene doel van deze procedure is het uitvoeren van een end-to-end aortageeftransplantatie bij muizen om vasculaire afstoting en transplantatie-arteriosclerose te bestuderen. Dit wordt bereikt door eerst een segment van de abdominale aorta van de donormuis te oogsten. Vervolgens wordt dit segment orthotoop getransplanteerd in de intrarenale aorta van een allogene ontvanger die genetisch verschilt van de donor.In de laatste stap wordt het getransplanteerde vaatsegment weggesneden en geanalyseerd op de ontwikkeling van transplantatie-arteriosclerose. Uiteindelijk kan de mate van transplantatie-arteriosclerose en immuungemedieerde vasculair allograft-afstoting worden beoordeeld door de meting van de intimale verdikking en luminale vernauwing, evenals door immunohistochemische analyse van het weefsel op de accumulatie van immuuncellen.Over het algemeen hebben personen die nieuw zijn aan deze procedure tijd nodig om vertrouwd te raken met de microsurgische techniek, omdat het een hoog niveau van behendigheid en oefening vereist om deze te beheersen. Desalniettemin zou de methode voor de meeste onderzoekers bereikbaar moeten zijn met consistente oefening. De procedure wordt daarom gedemonstreerd door Ms. Winnie, een getalenteerde neurochirurg, en Adam Roso, een getalenteerde PhD-student in mijn lab. Begin met het plaatsen van de donormuis in rugligging op een schoon, dun plexiglas bord dat is omwikkeld met een steriel laken onder de operatiemicroscoop bij een 8,30 x vergroting.Bevestig eerst dat de chirurgische anesthesie adequaat is door middel van een knijptest bij de teen, en maak vervolgens met een steriele schaar een enkele mediane incisie van het schaambeen tot het ZipID-proces. Gebruik daarna een kleine retractor om de buikwand te openen en zo de buikholte bloot te leggen. Gebruik vervolgens steriele wattenstaafjes om de darmen voorzichtig superieur naar links van het dier te verschuiven.Bedek het weefsel met gaas bevochtigd met zoutoplossing en verschuif de voortplantingsorganen inferieur om de aorta infrarenalis en de vena cava inferior of VCI te lokaliseren. Gebruik nu medische pincetten nummer vijf om de aorta te scheiden van de VCI bij de linker nierslagader nabij de bifurcatie. Gebruik vervolgens 10-0 polyamide monofilament hechtingen om de kleine vertakkingen nabij de aorta af te binden.Wanneer de aorta en de vena cava inferior (VCI) van de donor zijn gescheiden, verzadigt u het vat met zoutoplossing, bedekt u de blootgelegde holte met vochtig gaas en plaatst u de donor in een steriel gebied. Plaats nu de recipiëntmuis onder de microscoop en scheid de aorta van de recipiënt van de VCI zoals zojuist is gedemonstreerd. Plaats vervolgens twee microvasculaire klemmen van vier millimeter, proximaal en distaal van het betreffende segment, met een onderlinge afstand van ongeveer vijf millimeter.Maak vervolgens met diverse buisvormige microscharen een enkele horizontale aortotomie en resecteer niet meer dan 0,5 millimeters van de abdominale aorta om plaats te maken voor het donor-aortagraft. Plaats de donor terug onder de microscoop en transecteer een graftsegment van drie tot vier millimeter, zoals zojuist gedemonstreerd. Gebruik daarna een 25 gauge 5/8 naald om de geëxcideerde aorta te spoelen met gehepariniseerde zoutoplossing.Zorg ervoor dat de naaldpunt het vat niet raakt en plaats het vat in een container met hepariene ijszoutoplossing op ijs. Plaats het donor-aortagraften binnen 30 minuten na de excisie in de orthotope positie bij de ontvanger, waarbij de respectieve anatomische oriëntatie van het graft wordt afgestemd op die van de ontvanger. Pak vervolgens voorzichtig de tunica externa van het vat vast en gebruik de pincet nummer vijf om deze lichtjes weg te buigen.Gebruik nu de pincet om een naald, bevestigd aan een 10-nul polyamide monofilament hechtmateriaal, door de volledige dikte van de vaatwand te drijven om het donor-aortagraft te fixeren aan het geresecteerde vat van de ontvanger voor het plaatsen van continue hechtingen. Positioneer fixatiehechtingen op negen uur aan zowel het bovenste als het onderste uiteinde van het graft. Begin vervolgens aan het bovenste uiteinde van het graft vanaf de anastomose op drie uur.Hecht de geresecteerde uiteinden met twee doorlopende hechtingen en bevestig de hechting aan de fixatiehechting. Draai vervolgens het transplantaat om en zet de doorlopende hechting voort naar het dorsale deel van het vat, tot aan de oorsprong.Zet de hechting vast. Bevestig de hechting zonder veel druk op het vat uit te oefenen en herhaal het hechten voor de onderste anastomose. Zodra de anastomose voltooid is.Laat de distale microvasculaire klem los om retrograde bloedstroom door het vat mogelijk te maken. Indien er geen bloeding wordt waargenomen, laat dan de proximale klem los. Indien er geen bloedobstructies worden waargenomen, gebruik dan een pincet om voorzichtig één uiteinde van de hechtingsdraden vast te pakken en het vat lichtjes opzij te bewegen om de achterwand van het vat te inspecteren.Er mag geen plooiing waarneembaar zijn. Indien een krachtig pulserend patroon wordt waargenomen in zowel de donor- als de recipiëntvaten, gebruik dan wattenstaafjes om de darmen terug in de buikholte te plaatsen. Sluit tenslotte de buikwand met een naaldhouder en grove pincetten met 5-0 polypropyleen hechtingen en een doorlopende hechting. Sluit de huidlaag met dezelfde hechtingen middels een subcuticulaire sluiting.De motorische functie van de achterpoten kan worden geobserveerd om het succes van de operatie te beoordelen. De mate van immuun-gemedieerde vasculaire schade aan het allograft wordt onderzocht door de intimale verdikking en luminale vernauwing in de gegrafted aortasegmenten te kwantificeren op dag 30 na transplantatie.Zoals waargenomen, ontwikkelen de allograft-arteriesegmenten aanzienlijke intimale verdikking en luminale occlusie, terwijl er geen veranderingen worden waargenomen in de ISO-graft-controlearteriesegmenten. Daarnaast kan de rekrutering van leukocyten in de allograft-arterie worden geëvalueerd door middel van immunohistochemie, door de accumulatie van CD4- en CD8-positieve T-cellen en macrofagen te onderzoeken. Zoals verwacht werden alle drie de typen immuuncellen aangetroffen binnen de intima van de donorarterieweefsels na ontwikkeling.Deze techniek maakte de weg vrij voor onderzoekers in het vakgebied van transport om allo-immuungemedieerde vasculaire reductie en transplantatie-arteriële sclerose te bestuderen.

mouse-model-alloimmune-induced-vascular-rejection-transplant

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Deze video toont de orthotope aorta transplantatie model als een eenvoudig model om de ontwikkeling van transplantatie vasculopathie (TVP) studie bij ratten.

Orthotope Aorta Transplantatie: Een Rat Model voor de ontwikkeling van chronische vasculopathie Study

We beschrijven een techniek waarbij een deel van de abdominale aorta van een muis getransplanteerd orthotopically is om net onder de nierslagaders in een allogene of syngene ontvanger. Deze techniek kan nuttig zijn in studies waarin transplantatie van grote slagaders van gelijke grootte is als voordelig.

Orthotope Aorta Transplantatie in Muizen voor de Studie van vasculaire aandoeningen

This video demonstrates a method for generating a mouse aortic interposition model to study alloimmune-induced vascular rejection. After placing an anesthetized donor mouse in the supine position, the infrarenal abdominal aorta (IAA) is carefully isolated from surrounding structures. Branching vessels are ligated, and both ends of the IAA are clamped to prevent blood flow before resection. Subsequently, the donor IAA is implanted into an allogeneic recipient mouse, and blood flow is restored...

A Mouse Aortic Interposition Model to Study Alloimmune-Induced Vascular Rejection

We beschrijven protocollen voor onze muis graft arteriosclerois (GA) modellen die tussenkomst van een muis bloedvatsegment betrekken in een ontvanger van dezelfde inteeltstam. Door terugkruisen extra genetische veranderingen in het vat donor kan het model het effect van specifieke genen op GA beoordelen.

Muismodellen voor Graft Arteriosclerosis

Hier presenteren we een protocol om de immunologie van afstoting te bestuderen. Het gepresenteerde chirurgische model rapporteert een korte operatietijd en een beknopte techniek. Afhankelijk van de donor-recipiënt stamcombinatie, kan de getransplanteerde nier acute cellulaire afstoting of chronische allotransplantaatbeschadiging ontwikkelen, gedefinieerd door interstitiële fibrose en tubulaire atrofie.

Muis Niertransplantatie: Modellen van transplantaatafstoting

Om gecombineerde transplantatie van vaste organen en vaatvoorziene samengestelde allogene transplantaten te bestuderen, beschrijven we een nieuw heterotopisch en bloc model voor borstwand-, thymus- en harttransplantatie bij muizen, waarbij gebruik wordt gemaakt van een cervicale niet-naadloze manchettechniek.

A Novel Microchirurgische Model voor Heterotope, En Bloc borstwand, Thymus, en harttransplantatie in Muizen

Dit nieuwe model voor orthotope achterste ledematen transplantatie in de muis, van een niet-hechtingsmanchet techniek voor super-microvasculaire anastomose, een krachtig hulpmiddel voor in vivo mechanistische immunologisch onderzoek naar gevasculariseerd samengestelde allotransplantatie (VCA).

Orthotope Hind Limb Transplantation in de muis

Hier presenteren we een protocol van heterotopische aorta transplantatie in muizen met behulp van de niet-hecht manchet techniek in een cervicale Murine model. Dit model kan worden gebruikt om de onderliggende pathologie van chronische transplantaat vasculopathie (CAV) te bestuderen en kan helpen bij het evalueren van nieuwe therapeutische middelen om de vorming ervan te voorkomen.

Murine cervicaal aorta transplantatie model met behulp van een gemodificeerde niet-hecht manchet techniek

Deze studie stelt twee gestandaardiseerde muisxenotransplantatiemodellen vast om specifiek acute cellulaire afstoting en acute antilichaam-gemedieerde afstoting te repliceren. Deze modellen dienen als een betrouwbaar platform voor het onderzoeken van mechanismen van immuunafstoting van xenograften, het evalueren van immunosuppressieve strategieën en het bevorderen van preklinisch xenotransplantatieonderzoek.

Een gestandaardiseerd muismodel met een werkwijze van drie personen voor het bestuderen van acute cellulaire en antilichaam-gemedieerde afstoting bij xenotransplantatie

De muis volledige stase model van de vena cava inferior trombose levert kwantificeerbare hoeveelheden aderwand weefsel en trombus. Het is nuttig gebleken voor het evalueren van interacties tussen de ader muur en de occlusieve trombus en bij de beoordeling van de progressie van acute naar chronische ontsteking.

Muis Compleet Stasis Model van Inferior Vena Cava trombose

Leer aortainterpositiegrafting bij muizen om vasculaire afstoting en transplantatie-arteriosclerose te bestuderen. Deze methode helpt onderzoekers immuun-gemedieerde afstoting te analyseren.

Mouse Model van Allo-immuun geïnduceerde Vascular Afwijzing en Transplant Aderverkalking

Meer video's verkennen