Name: Behandeling van bloedplaatjes Producten met riboflavine en UV-licht: Effectiviteit tegen hoge titer bacteriële besmetting (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-08-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 32 s
Description: Leer hoe riboflavine en UV-licht bacteriële besmetting in bloedplaatjesproducten vermindert. Deze methode behoudt de kwaliteit van bloedcomponenten en verhoogt de veiligheid van transfusies.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs hebben geen erkenningen.

1. Bacteriën Suspension Voorbereiding: <ol><li> Vanuit een weggeschoten cultuur plaat, aseptisch te enten een enkele kolonie in een 250 ml steriele fles met 100 ml van de geschikte groeimedia (tabel 1) door middel van een steriele entnaald. </li><li> Plaats de fles in een orbitale schudincubator bij geschikte omstandigheden (tabel 1) gedurende 1-2 dagen groei periodiek controleren. Stel de shaker snelheid 140 RPM. </li><li> Aseptisch overbrengen van de bacteriële suspensie in twee steriele 50 ml conische buis en gecentrifugeerd bij 3000 xg buizen gedurende 20 min bij 23 ° C. </li><li> Zuig het supernatant en resuspendeer elke bacteriële pellet met 15 ml steriel peptonwater. Vortex nodig. Combineer de geschorste bacteriën cultuur in één buis / container. </li><li> Titer de voorraad cultuur in drievoud per hoofdstuk 4 om de voorraad cultuur titer te bepalen. </li><li> Koelkast voor maximaal 2 weken bij 477; 2 ° C totdat het nodig is. Re-titer van de cultuur op het moment van gebruik, zie stap 4.8. </li></ol> 2. Bloedplaatjes Verwerking: <ol><li> Verzamel een standaard aferese humane bloedplaatjes product bij een erkende bloedbank. De bloedplaatjes product moet voldoen aan de volgende collectie specificaties: 90-360 ml volume en 0,8 -3,8 x 10 6 bloedplaatjes / ul concentratie. <ol><li> Controleer of de bloedplaatjesproduct moet daarna minimaal 2 uur vóór de verwerking voor pathogeenreductie. Bewaar de producten bij 22 ± 2 ° C in een incubator bloedplaatjes zonder roeren gedurende deze 2 uur. Na twee uur zorgen bloedplaatjesproduct wordt geroerd bij 22 ± 2 ° C in een incubator bloedplaatjes. Gebruik het product voor tot 22 uur na collectie. </li></ol></li><li> Met een spuit 3 ml ontslaan 2 ml monster om de pH van het 22C bloedplaatjesproduct meten. Gebruik een bloed gas analyzer om het product te waarborgen heeft een pH&gt; 6.6. Gebruik hetzelfde monster de plaatjesconcentratie van het bloedplaatjesproduct met een hematologische analyse te meten. Zorg ervoor dat het product voldoet aan de 0,80-3,8 x 10 6 bloedplaatjes / ul collectie concentratie eis. </li><li> Visueel evalueren van de werveling van de bloedplaatjes product. Als het product een &quot;0&quot; zwenk het product worden verwijderd. </li><li> Houd de bloedplaatjes zak onder een direct wit-lichtbron en knijp de bloedplaatjes zak kort. Visueel waarnemen de wervelende patroon van de bloedplaatjes monster. Scoren het product met behulp van de volgende schaal. NB: 2 - Positieve Swirl: Wervelende inhomogeniteit in de gehele zak zichtbaar met sterk contrast. 1 - Intermediate Swirl: Sommige inhomogeniteit zichtbaar, maar slechts op een paar plaatsen en met een slechte contrast. 0 - Negatieve Swirl: Troebele homogeniteit blijven voor en na knijpen de bloedplaatjes zak </li></ol> 3. riboflavine en UV-licht Proces: <ol><li> TranSfer de bloedplaatjes product naar een riboflavine en UV-licht verlichting en opbergtas met een steriele buis dockingapparaat. Na overdracht verwijder de lege bloedplaatjes eenheid collectie zak met behulp van een slang sealer en de lege zak als biologisch gevaarlijk afval weggooien. </li><li> Verwijderen van een 35 ml zakje van 500 uM riboflavine voorraad oplossing van zijn lichte beschermende buitenste wrap. Steriele dock de riboflavine kit op de inlaat lijn van de behandeling en opslag zak. De inhoud kan afwateren in de bloedplaatjes unit. </li><li> Hang de riboflavine zakje / behandeling en opbergtas ingesteld van de riboflavine zakje en voorzichtig uitdrukken resterende lucht uit de behandeling en opslag zak en in de riboflavine zak. Zorgen voor een kleine hoeveelheid bloedplaatjesproduct komt ook tot uitdrukking in de riboflavine buidel om het resterende riboflavine spoel in het bloedplaatjesproduct. Laat de riboflavine en bloedplaatjes oplossing afvoer terug in de behandeling en de opslag zak en vervolgens klem de inlaat lijn. Verwijder de lege riboflavine zak onsing een slang sealer en de lege zak als biologisch gevaarlijk afval weggooien. </li><li> Steriele dock een 6 &quot;slang lijn met vrouwelijke spuit aansluiting op de inlaat lijn van de verlichting en opbergtas. Bevestig een 10 ml spuit (verwijder de zuiger) op de vrouwelijke spuit connector. </li><li> Aseptisch voeg 5 ml van de bacteriën in de spuit via een pipet. Open de klem op de toevoerleiding en laat de bacteriën afwateren in bloedplaatjes product. Spoel de injectiespuit doordat sommige bloedplaatjesproduct terugstroomt in de 10 ml spuit. Verwijder de 10 ml spuit. </li><li> Aseptisch een injectiespuit 30 ml en spoel de inlaatpoort minste twee maal te zorgen voor de voorraad bacteriën gemengd in het bloedplaatjesproduct. Nadat het product goed gemengd is, gebruik dan een schone 5-10 ml spuit en verwijderen van een 2 ml voorbehandeling monster. Met behulp van een nieuwe spuit zorgen elke lucht die uit de enting stap of bemonstering stap wordt verwijderd. <ol><li> Titer de voorbehandeling monster per sectie 4. </li></ol></li><li> Verwijder de inlaat lijn van de behandeling en opslag zak en weegt het product. </li><li> Plaats het product in het belichtingstoestel en volgt de commando scherm om een ​​standaard bloedplaatjes behandeling te starten. <ol><li> Voer in Operator ID. </li><li> Beveiligen en monteer de zak om de Illuminator glasplaat. </li><li> Voer de monster-ID in de Illuminator met behulp van de barcode-lezer of de handmatige invoer toetsenbord. </li><li> Scan het type product. </li><li> Sluit de kwarts klem. </li><li> De verlichting apparaat wordt automatisch leveren 6,24 J / ml energie. De typische behandeling duurt 5-10 minuten. </li></ol></li><li> Na behandeling steriele dock een 6 &quot;slang lijn met vrouwelijke spuit connector op het monster bol lijn van de behandeling en opslag zak. Zorg ervoor dat het product goed gemengd en bevestig een injectiespuit van 5 ml en verwijderen van een 2 ml nabehandeling monster. <ol><li> Titer de nabehandeling samPLE per sectie 4. </li></ol></li></ol> 4. Bacteriële Titer <ol><li> Schat de titer van de voorbehandeling en nabehandeling monsters en voorbereiden juiste aantal 5 ml verdunningsbuizen nodig is om een ​​seriële eindpunt verdunning van elk monster uitvoeren. Aseptisch vullen de benodigde buizen met 1,8 ml peptonwater. </li><li> Titer elk monster onder toepassing van een 10-voudige seriële verdunning regeling. Aseptisch overbrengen 0,2 ml van het verdunde monster naar de eerste verdunning buis (10 -1). Vortex deze verdunning tube en de overdracht 0,2 ml naar de volgende verdunning buis. Blijven de seriële verdunning door het vereiste aantal verdunningen. <ol><li> Aseptische overdracht 100 pi van elke verdunning wordt uitgeplaat op een geschikte agar plaat (Tabel 1). </li></ol></li><li> Met behulp van een steriele cel spreader gelijkmatig het monster te verdelen op elke agarplaat. </li><li> Inverteer en incubeer de platen bij de geschikte omstandigheden ( <strong&gt; Tabel 1) voor 1-2 dagen controleren op groei periodiek. </li><li> Telling platen met 30-300 kolonies. Platen met meer dan 300 kolonies worden beschouwd als te veel om op te tellen (TNTC). Platen met minder dan 30 kolonies worden geacht onder de grens (LOQ). </li><li> Bereken de titer van elk monster en noteer de resultaten als CFU / ml. <ol><li> Gebruik de volgende vergelijking om CFU / ml te berekenen: <img alt="Vergelijking 1" fo:content-width="2.5in" src="/files/ftp_upload/52820/52820eq1.jpg" width="250" /></li><li> Als er geen kolonies op de laagste verdunning plaat, gebruik maken van de volgende vergelijking tot de detectiegrens (LOD) te berekenen: <img alt="Vergelijking 2" fo:content-width="1in" src="/files/ftp_upload/52820/52820eq2.jpg" width="100" /> en <img alt="Vergelijking 3" fo:content-width="1in" src="/files/ftp_upload/52820/52820eq3.jpg" width="100" /> Waar: N = laagste aantal deeltjes (CFU) in product die kunnen worden gedetecteerd met vertrouwen tegemoet. P = waarschijnlijkheid dat een micro-organisme onopgemerkt zijn; een zekerheid van een micro-organisme 95%, P = 0,05. V = totaal volume product in ml v = volume verzilverd (ml) x verdunning niveau van de plaat </li></ol></li><li> Voor negatieve controle plaat 0,5 ml van de peptonwater die wordt gebruikt voor de seriële verdunningen op elk van twee agarplaten. Gebruik hetzelfde type plaat als de monsters worden getest. Omkeren en incubeer de plaat op de juiste voorwaarden voor 1-2 dagen controleren op groei periodiek. <ol><li> Als de groei wordt waargenomen aan beide agar plaat, moet de fles peptonwater gebruik worden weggegooid; De resultaten van het onderzoek worden eveneens ongeldig. </li></ol></li><li> Voor positieve controle, re-titer de voorraad cultuur van bacteriën die werd gebruikt. Omkeren en incubeer de platen op de juiste voorwaarden voor 1-2 dagen controleren op groei periodiek. De titer moet ± 1,0 log CFU / ml van het recorded voorraad titer (zie paragraaf 1.5) voor de studie geldig te maken. </li></ol>

<ol><li>Brecher, M. E., Hay, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+contamination+of+blood+components%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Microbiol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Bacterial contamination of blood components.</a> Clin. Microbiol. Rev. 18 (1), 195-204 (2005).</li>
<li>Brecher, M. E., Holland, P. V., Pineda, A. A., Tegtmeier, G. E., Yomtovian, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+of+bacteria+in+inoculated+platelets%3A+implications+for+bacteria+detection+and+the+extension+of+platelet+storage%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Growth of bacteria in inoculated platelets: implications for bacteria detection and the extension of platelet storage.</a> Transfusion. 40 (11), 1308-1312 (2000).</li>
<li>Cardo, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogen+inactivation+of+Leishmania+donovani+infantum+in+plasma+and+platelet+concentrates+using+riboflavin+and+ultraviolet+light%5BTitle%5D)+AND+%22Vox+Sang%22%5BJournal%5D)">Pathogen inactivation of Leishmania donovani infantum in plasma and platelet concentrates using riboflavin and ultraviolet light.</a> Vox Sang. 90 (2), 85-91 (2006).</li>
<li>Cardo, L. J., Salata, J., Mendez, J., Reddy, H., Goodrich, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogen+inactivation+of+Trypanosoma+cruzi+in+plasma+and+platelet+concentrates+using+riboflavin+and+ultraviolet+light%5BTitle%5D)+AND+%22Transfus.+Apher.+Sci%22%5BJournal%5D)">Pathogen inactivation of Trypanosoma cruzi in plasma and platelet concentrates using riboflavin and ultraviolet light.</a> Transfus. Apher. Sci. 37 (2), 131-137 (2007).</li>
<li>Dodd, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+viral+risks+of+blood+and+blood+products%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Med%22%5BJournal%5D)">Current viral risks of blood and blood products.</a> Ann. Med. 32 (7), 469-474 (2000).</li>
<li>Dodd, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+contamination+and+transfusion+safety%3A+experience+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Transfus.+Clin.+Biol%22%5BJournal%5D)">Bacterial contamination and transfusion safety: experience in the United States.</a> Transfus. Clin. Biol. 10 (1), 6-9 (2003).</li>
<li>Dumont, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Screening+of+single-donor+apheresis+platelets+for+bacterial+contamination%3A+the+PASSPORT+study+results%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Screening of single-donor apheresis platelets for bacterial contamination: the PASSPORT study results.</a> Transfusion. 50 (3), 589-599 (2010).</li>
<li>Goodrich, R. P., Gilmour, D., Hovenga, N., Keil, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+laboratory+comparison+of+pathogen+reduction+technology+treatment+and+culture+of+platelet+products+for+addressing+bacterial+contamination+concerns%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">A laboratory comparison of pathogen reduction technology treatment and culture of platelet products for addressing bacterial contamination concerns.</a> Transfusion. 49 (6), 1205-1216 (2009).</li>
<li>Greco-Stewart, V. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serratia+marcescens+strains+implicated+in+adverse+transfusion+reactions+form+biofilms+in+platelet+concentrates+and+demonstrate+reduced+detection+by+automated+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Vox+Sang%22%5BJournal%5D)">Serratia marcescens strains implicated in adverse transfusion reactions form biofilms in platelet concentrates and demonstrate reduced detection by automated culture.</a> Vox Sang. 102 (3), 212-220 (2012).</li>
<li>Keil, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inactivation+of+Plasmodium+spp.+in+plasma+and+platelet+concentrates+using+riboflavin+and+ultraviolet+light%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Inactivation of Plasmodium spp. in plasma and platelet concentrates using riboflavin and ultraviolet light.</a> Transfusion. 53 (10), 2278-2286 (2013).</li>
<li>Kleinman, S., Chan, P., Robillard, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risks+associated+with+transfusion+of+cellular+blood+components+in+Canada%5BTitle%5D)+AND+%22Transfus.+Med+Rev%22%5BJournal%5D)">Risks associated with transfusion of cellular blood components in Canada.</a> Transfus. Med Rev. 17 (2), 120-162 (2003).</li>
<li>Larsen, C. P., Ezligini, F., Hermansen, N. O., Kjeldsen-Kragh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Six+years%27+experience+of+using+the+BacT%2FALERT+system+to+screen+all+platelet+concentrates%2C+and+additional+testing+of+outdated+platelet+concentrates+to+estimate+the+frequency+of+false-negative+results%5BTitle%5D)+AND+%22Vox+Sang%22%5BJournal%5D)">Six years' experience of using the BacT/ALERT system to screen all platelet concentrates, and additional testing of outdated platelet concentrates to estimate the frequency of false-negative results.</a> Vox Sang. 88 (2), 93-97 (2005).</li>
<li>Mundt, J. M., Rouse, L., Van den Bossche, J., Goodrich, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+and+Biological+Mechanisms+of+Pathogen+Reduction+Technologies%5BTitle%5D)+AND+%22Photochem.+Photobiol%22%5BJournal%5D)">Chemical and Biological Mechanisms of Pathogen Reduction Technologies.</a> Photochem. Photobiol. , (2014).</li>
<li>Murphy, W. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Screening+platelet+concentrates+for+bacterial+contamination%3A+low+numbers+of+bacteria+and+slow+growth+in+contaminated+units+mandate+an+alternative+approach+to+product+safety%5BTitle%5D)+AND+%22Vox+Sang%22%5BJournal%5D)">Screening platelet concentrates for bacterial contamination: low numbers of bacteria and slow growth in contaminated units mandate an alternative approach to product safety.</a> Vox Sang. 95 (1), 13-19 (2008).</li>
<li>Brien, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+incidence+and+residual+risk+of+HIV%2C+HBV+and+HCV+at+Canadian+Blood+Services%5BTitle%5D)+AND+%22Vox+Sang%22%5BJournal%5D)">Current incidence and residual risk of HIV, HBV and HCV at Canadian Blood Services.</a> Vox Sang. 103 (1), 83-86 (2012).</li>
<li>Pearce, S., Rowe, G. P., Field, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Screening+of+platelets+for+bacterial+contamination+at+the+Welsh+Blood+Service%5BTitle%5D)+AND+%22Transfus.+Med%22%5BJournal%5D)">Screening of platelets for bacterial contamination at the Welsh Blood Service.</a> Transfus. Med. 21 (1), 25-32 (2011).</li>
<li>Ramirez-Arcos, S., Kou, Y., Perkins, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+a+universal+point-of-issue+assay+for+bacterial+detection+in+buffy+coat+platelet+components%5BTitle%5D)+AND+%22Vox+Sang%22%5BJournal%5D)">Evaluation of a universal point-of-issue assay for bacterial detection in buffy coat platelet components.</a> Vox Sang. 107 (2), 192-195 (2014).</li>
<li>Reddy, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxicity+testing+of+a+novel+riboflavin-based+technology+for+pathogen+reduction+and+white+blood+cell+inactivation%5BTitle%5D)+AND+%22Transfus.+Med.+Rev%22%5BJournal%5D)">Toxicity testing of a novel riboflavin-based technology for pathogen reduction and white blood cell inactivation.</a> Transfus. Med. Rev. 22 (2), 133-153 (2008).</li>
<li>Ruane, P. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photochemical+inactivation+of+selected+viruses+and+bacteria+in+platelet+concentrates+using+riboflavin+and+light%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Photochemical inactivation of selected viruses and bacteria in platelet concentrates using riboflavin and light.</a> Transfusion. 44 (6), 877-885 (2004).</li>
<li>Tonnetti, L., Proctor, M. C., Reddy, H. L., Goodrich, R. P., Leiby, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+Mirasol+pathogen+reduction+technology+system+against+Babesia+microti+in+apheresis+platelets+and+plasma%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the Mirasol pathogen reduction technology system against Babesia microti in apheresis platelets and plasma.</a> Transfusion. 50 (5), 1019-1027 (2010).</li>
<li>Vanlandingham, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photochemical+inactivation+of+chikungunya+virus+in+plasma+and+platelets+using+the+Mirasol+pathogen+reduction+technology+system%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Photochemical inactivation of chikungunya virus in plasma and platelets using the Mirasol pathogen reduction technology system.</a> Transfusion. 53 (2), 284-290 (2013).</li>
<li>Walther-Wenke, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+bacterial+contamination+of+blood+components+in+Germany%3A+effect+of+contamination+reduction+measures%5BTitle%5D)+AND+%22Vox+Sang%22%5BJournal%5D)">Monitoring bacterial contamination of blood components in Germany: effect of contamination reduction measures.</a> Vox Sang. 100 (4), 359-366 (2011).</li>
</ol>

Alle auteurs van dit artikel zijn momenteel werkzaam bij Terumo BCT, ontwikkelaar en fabrikant van het Mirasol PRT-systeem. Publicatie vergoedingen voor deze video-artikel zijn betaald door Terumo BCT.

Bacteriële screening is gemeengoed geworden in het bloed bankinstellingen en voor vele locaties het dient als de primaire methode om transfusie van bacterieel besmette bloedplaatjes te voorkomen. Hoewel bacteriële screening dwangsom doorgaans het merendeel van de snel groeiende Gram-negatieve bacteriën zoals S. marcescens, E. coli en E. cloacae, dat worstelt om langzaam groeiende Gram-positieve bacteriën zoals S. detecteren aureus, Streptococcus spp. en S. epidermidis 8. Helaas zijn deze drie Gram-positieve bacteriën die betrokken zijn bij ruim 50% van alle besmette bloedplaatjes eenheden en de transfusie van bloedplaatjes producten die deze drie organismen heeft geleid tot de patiënt sterfte 1. Bacteriële screening berust op het bacteriële titer in een trombocytenproduct voldoende hoog zijn zodat ten minste één organisme is opgenomen in de typische 4-8 ml monster screening. Als de bacteriële titer niet voldoende hoog is om een ​​bacterie te worden meegenomen in de 4-8 ml monstervolume, wordt het apparaat foutief gemarkeerd als negatief en deze wordt vrijgegeven voor transfusie. Een alternatieve benadering voor bacteriële screening zou kunnen zijn om een ​​proactief proces dat kan worden uitgevoerd op alle eenheden bloedplaatjes en dat de verontreinigende organismen als niet-functionele achterhaald is dienst. In deze studie werden hoge titers bacteriën doelbewust toegevoegd aan bloedplaatjes eenheden aan de totale capaciteitsverlaging van riboflavine en UV-licht pathogenen reductieproces testen. Hoewel de bacteriële belasting getest in deze studie veel groter dan die normaal in bloedproducten ten tijde van schenking deze studie helpt te tonen dat de riboflavine en UV-licht proces kan de titer van levende bacteriën aanzienlijk verminderen verontreinigde bloedplaatjes eenheid door 2,6-5,4 log (99,7-99,9996% vermindering van verontreinigende bacteriën) (Figuur 2). Om een ​​Accura verkrijgente log reductie waarde, is het essentieel dat de exploitant goede aseptische techniek samen met een precieze pipetteren vaardigheden bij het uitvoeren van de bacteriële titer stappen. Onnauwkeurige pipetteren bij het uitvoeren van seriële verdunningen kan leiden tot een opeenhoping van fouten, waardoor een onnauwkeurige meting titer. De in deze studie verzamelde gegevens ondersteunt eerdere werk met riboflavine en UV-licht, waardoor het systeem uitgedaagd tegen lage niveau, klinisch relevante bacteriëmie (&lt;20 CFU / eenheid). De vorige studie werd ontworpen om een ​​echte klinische besmetting evenement na te bootsen en de resultaten toonden aan riboflavine en UV-licht effectief in het voorkomen van de groei van bacteriën op de 7-daagse bloedplaatjes opslagperiode was. Modellering op basis van de gegevens van de vorige studie suggereert dat de huidige risicoschattingen bacteriële besmetting van bloedplaatjes producten kunnen worden verminderd met wel 98% van het huidige niveau 8. De riboflavine en UV-licht proces steekt gunstig af bij bacteriële scherming, die alleen toonde een 66% efficiëntie voor bacteriële verontreinigingen te detecteren in eenheden bloedplaatjes bij provocatie met klinisch relevante bacteriële verontreiniging 8. Zoals met alle technologieën, PRT behandeling van bloedplaatjes producten aan complicaties in verband met bacterieel besmette bloedplaatjes eenheden heeft zijn beperkingen te voorkomen. PRT-systemen zijn niet effectief tegen bacteriële sporen en niet inactiveren endotoxine, dus zelfs als er een PRT-systeem hoge titers van Gram-negatieve bacteriën kan inactiveren de resterende endotoxine kan nog steeds leiden tot een septische shock bij de ontvanger. PRT wordt het best uitgevoerd vroeg tijdens opslag voor de bacteriën kunnen doorgeven aan hoge titers. Concluderend, zoals blijkt uit de combinatie van deze twee studies, de riboflavine en UV-licht proces is effectief in het verminderen van de bacteriële lading van zowel Gram-negatieve en Gram-positieve organismen en kan een alternatief voor bacteriële screening bieden. Routinematig treating bloedplaatjes producten met riboflavine en UV-licht heeft ook het extra voordeel van het verminderen van de mogelijke overdracht van andere bloed overdraagbare stoffen zoals virussen en parasieten.

Transfusie van bloedplaatjes, plasma, verpakte rode bloedcellen en bloed producten spelen een belangrijke rol in de moderne geneeskunde en kan worden gebruikt voor de behandeling van diverse medische aandoeningen, vervangt vitale vloeistoffen en uiteindelijk levens redden. Bloedplaatjes zijn een cellulair product die ofwel geïsoleerd uit volbloed en samengevoegd in een transfusable dosis of worden verzameld door het proces van bloedplaatjes aferese. De belangrijkste rol van bloedplaatjes in het lichaam te stoppen met bloeden op wondplaatsen en om hemostase te handhaven. Patiënten die lijden aan een laag aantal bloedplaatjes cel (trombocytopenie) zijn spontaan bloeden gebeurtenissen en zijn transfusie met bloedplaatjes te brengen hun bloedplaatjes celgetal weer in een normale bereik. Verzamelde bloedplaatjes opgeslagen maximaal 5-7 dagen worden bewaard bij 22 ± 2 ° C terwijl constant werd geroerd. Ondanks de levensreddende eigenschappen van bloedplaatjes transfusies is er een klein risico voor transfusie ontvangers als gevolg van co blijftntamination van deze producten met parasieten, bacteriën en virussen 11. De uitvoering van viraal nucleïnezuur test (NAT) is aanzienlijk verminderd risico van virusoverdracht grote bloed overdraagbare middelen, zoals hepatitis C virus (HCV), hepatitis B-virus (HBV) en humaan immunodeficiëntie virus (HIV) 5. Een recente publicatie van de Canadese Blood Services schat het resterende risico voor deze middelen zijn 1 per 8.000.000 donaties voor HIV, 1 per 6.700.000 donaties voor HCV en 1 per 1.700.000 donaties voor HBV 15. Hoewel bacteriën Garner typisch minder aandacht in de bevolking, is de frequentie van bacteriële besmetting in trombocytenproducten geschat op zo hoog als 1: 1000 7 en door miljoenen bloedplaatjesproducten transfusie jaarlijks veel ontvangers blootgesteld aan potentieel levensbedreigende complicaties zoals sepsis 6. Uit onderzoek blijkt dat de bacteriële verontreiniging ten tijdevan verontreiniging laag, &lt;100 kolonievormende eenheden (CFU) / product 2,16, maar de voedingsrijke milieu kamertemperatuur opslag maakt besmettende bacteriën prolifereren gevaarlijk hoge titers voorafgaand aan transfusie. Momenteel is de enige goedgekeurde methoden ter voorkoming bacterieel verontreinigde producten van het bereiken van een bloedplaatjes ontvanger door middel van kweek systemen en snelle point of care tests. Kort cultuur gebaseerde systemen bloedplaatjesproducten worden opgeslagen op een roerder bij 22 ° C gedurende 12-24 uur om de bacteriën te laten groeien in het product, waarop een 4-8 ml monster uit het product bloedplaatjes en geïnoculeerd in een fles bevattende voedingsmedia. De fles wordt geplaatst in een instrument dat de fles voor bacteriële groei controleert. Indien het instrument bacteriegroei in de fles detecteert wordt gemarkeerd en de bijbehorende bloedplaatjes eenheid wordt weggegooid. Terwijl dit proces is redelijk succesvol in het opsporen van fast growing organismen vele langzaam groeiende soorten groeien niet op een voldoende hoge titer te detecteren, waardoor de kans op vals-negatieve eenheden worden vrijgegeven voor transfusie 7,12,14,16,22. In tegenstelling tot de cultuur gebaseerde detectiesystemen, snelle point of care testen wordt meestal later in de bloedplaatjes opslagperiode uitgevoerd wanneer de bacteriële verontreiniging aanzienlijk is toegenomen. De hogere titers zijn verplicht sinds point of care tests zijn minder gevoelig dan de cultuur gebaseerde systemen, en alleen betrouwbaar detecteren bacteriën als ze eenmaal een titer ≥1 x 10 3 CFU / ml 17 bereiken. Maar dergelijke tests kunnen resultaten binnen 1 uur bemonstering verschaffen. Variabiliteit in de uitvoering van deze testen hebben geleid tot de introductie van een vals negatief product, waardoor een fatale septische reactie in de ontvanger 9. Een alternatieve manier om het probleem van de bacteriële besmetting van bloedplaatjes producten te bestrijden is door het routinematig gebruik van een pathogeenreductie process dat vervuilende bacteriën kan inactiveren in plaats van te proberen om ze op te sporen. Met behulp van riboflavine als fotosensibilisator, in combinatie met UV-licht, is aangetoond dat de infectiviteit van een brede range van pathogene bloed overgedragen verontreinigingen te verminderen, waaronder bacteriën 3,4,8,10,19-21 .Het gebruik van riboflavine en UV licht voor pathogeenreductie is niet-toxisch en niet-mutageen en riboflavine en UV-licht behandelde componenten zijn getoond veilig voor transfusie ontvangers en voor degenen die omgaan bloedproducten 18 zijn. In het kort kan riboflavine molecules associëren met de nucleïnezuren (DNA en RNA) bacteriën, parasieten, virussen of kernhoudende cellen (bijvoorbeeld witte bloedcellen). Blootstelling aan UV-licht activeert riboflavine, waardoor een chemische verandering aan functionele groepen van de nucleïnezuren (voornamelijk guanine basen), waardoor het voorkomen van de replicatie en / of transcriptie van nucleïnezuren en het verlaten van het organisme geïnactiveerd 13. Kernloze cellen zoals plaattermijn en rode bloedcellen worden niet beïnvloed door de riboflavine chemie door het ontbreken van nucleïnezuur. Eerdere werk met riboflavine en UV-licht technologie geëvalueerd een selecte groep van bacteriën met behulp van een experimenteel design bedoeld om een product bloedplaatjes verontreinigd met een klinisch relevante bacteriële belasting (&lt;20 CFU / product) 8 na te bootsen. Het doel van deze studie was de riboflavine en UV-licht proces tegen hoge titer bacteriële verontreiniging te evalueren (&gt; 1,0 x 10 5 CFU / ml) in trombocytenproducten behandeld plasma teneinde meet de totale bacteriële capaciteitsverlaging van het systeem. Gebaseerd op gegevens verzameld uit hemovigilantie studies 1, werd een panel van voorkomende gram-negatieve en gram-positieve organismen geselecteerd voor de evaluatie in dit onderzoek en onder meer de volgende soorten: Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, Streptococcus mitis, Streptococcus pyogenes, Serratia marcescens, Yersinia enterocolitica ,Brucella neotomae, Bacillus cereus (vegetatieve vorm), Esherichia coli, Pseudomonas aeruginosa en Klebsiella pneumoniae. Alle organismen, behalve B. cereus, werden verkregen van ATCC en een prioriteit is op het verkrijgen van bacteriestammen die waren geïdentificeerd als zijnde geïsoleerd van bloedcomponenten geplaatst. De B. cereus onderzocht met dit onderzoek een klinische stam geïsoleerd uit een inwendig verontreinigde bloedplaatjes product.

<table><tbody><tr><td>Mirasol Illuminator</td><td>Terumo BCT</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Mirasol Treatment/Storage Bag</td><td>Terumo BCT</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Hematology Analyzer</td><td>Beckman-Coulter</td><td>Ac&bull;T diff&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Blood Gas Analyzer</td><td>Siemens</td><td>RapidLab 1265&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Docking Device</td><td>Terumo BCT</td><td>TSCD</td><td></td></tr><tr><td>Platelet Incubator</td><td>Helmer</td><td>PC2200</td><td></td></tr><tr><td>Orbital Incubator Shaker</td><td>Lab-Line</td><td>4628</td><td></td></tr><tr><td>Dry Incubator</td><td>Fisher</td><td>Iso-temp</td><td></td></tr><tr><td>Class II A/B3 Biosafety Cabinet</td><td>Thermo-forma</td><td>1286</td><td></td></tr><tr><td>Tubing Sealer</td><td>Sebra</td><td>Smart Sealer II</td><td></td></tr><tr><td>Table Top Centrifuge</td><td>IEC</td><td>Centra GP8R</td><td></td></tr><tr><td>10 ml Syringe</td><td>BD</td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>30 ml Syringe</td><td>BD</td><td>309650</td><td></td></tr><tr><td>5 ml Dilution Tube</td><td>VWR</td><td>211-0058</td><td></td></tr><tr><td>50 ml Conical Tube</td><td>Corning</td><td>430290</td><td></td></tr><tr><td>Micropipette</td><td>Gilson</td><td>P-200</td><td></td></tr><tr><td>Micropipette</td><td>Rainin</td><td>R-200</td><td></td></tr><tr><td>Repeat Pipette</td><td>Eppendorf</td><td>4780</td><td></td></tr><tr><td>1-200 &micro;l Filter Tip</td><td>Costar</td><td>4810</td><td></td></tr><tr><td>25 ml Disposable Serrological Pipette</td><td>Costar</td><td>4489</td><td></td></tr><tr><td>5 ml Disposable Serrological Pipette</td><td>Costar</td><td>4487</td><td></td></tr><tr><td>35 ml 500 &micro;M Riboflavin</td><td>Terumo BCT</td><td>35 mL 500 &micro;M&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Brucella Agar with 5% Horse Blood</td><td>BBL</td><td>221547</td><td></td></tr><tr><td>Brain Heart Infusion</td><td>Teknova</td><td>B9993</td><td></td></tr><tr><td>Peptone Water</td><td>BD</td><td>257087</td><td></td></tr><tr><td>Trypticase Soy Broth</td><td>BD</td><td>299113</td><td></td></tr><tr><td>Trypticase Soy Agar</td><td>Remel</td><td>R01917</td><td></td></tr><tr><td>Heat Inactivated Horse Serum</td><td>Gibco</td><td>26050</td><td></td></tr></tbody></table>

behandeling van bloedplaatjes producten met riboflavine en uv-licht: effectiviteit tegen hoge titer bacteriële besmetting

Treatment of Platelet Products with Riboflavin and UV Light: Effectiveness Against High Titer Bacterial Contamination

Besmetting van bloedplaatjes eenheden door bacteriën is al lang erkend als een belangrijke transfusie risico als gevolg van hun post-donatie bewaarcondities. Producten worden routinematig bewaard bij 22 ° C op een schudder roeren, een aandoening die bacteriegroei bevorderen. Hoewel het totale aantal bacteriën verondersteld worden geïntroduceerd in een trombocytenproduct is extreem laag, kunnen deze bacteriën vermenigvuldigen tot hoge titer vóór transfusie, kunnen leiden tot ernstige bijwerkingen. Het doel van deze studie was om riboflavine techniek pathogenen reductieproces tegen een panel van bacteriën die zijn geïdentificeerd als voorkomende verontreinigingen van bloedplaatjesproducten evalueren. Dit paneel onder meer de volgende organismen: S. epidermidis, S. aureus, S. mitis, S. pyogenes, S. marcescens, Y. enterocolitica, B. neotomae, B. cereus, E. coli, P. aeruginosa en K. pneumoniae. Elke unit bloedplaatjes werd geïnoculeerd met een hoge bacteriologische belasting en monsters werden verwijderd both voor en na behandeling. Een kolonie vormende assay met behulp van een eindpunt verdunning schema werd gebruikt om de voorbehandeling en nabehandeling bacteriële titers te bepalen. Log vermindering werd berekend door de nabehandeling titer van de voorbehandeling titer. De volgende verminderingen log werden waargenomen: S. epidermidis 4,7 log (99,998%), S. aureus 4,8 log (99,998%), S. mitis 3,7 log (99,98%), S. pyogenes 2,6 log (99,7%), S. marcescens 4,0 log (99,99%), Y. enterocolitica 3,3 log (99,95%), B. neotomae 5,4 log (99,9996%), B. cereus 2,6 log (99,7%), E. coli ≥5.4 log (99,9996%), P. aeruginosa 4,7 log (99,998%) en K . pneumoniae 2,8 log (99,8%). De resultaten van deze studie suggereren dat de werkwijze zou kunnen helpen het risico van ernstige bijwerkingen transfusie geassocieerd met bacteriële contaminatie te verlagen.

De vermindering van elf verschillende bacteriesoorten werd geëvalueerd met de riboflavine en UV-licht op basis PRT proces. Deze agenten zijn enkele van de meest voorkomende verontreinigingen van bloedplaatjes producten en omvatten vijf Gram-positieve en zes Gram-negatieve organismen. Ten minste zes bloedplaatjesproducten geëvalueerd per organisme en elk product werd geënt met voldoende bacteriën&gt; 1,0 x 10 5 CFU / ml uiteindelijke titer van bacteriën op in het bloedplaatjesproduct. Voorafgaand aan de behandeling werd een monster verwijderd om de voorbehandeling titer, waarna het bloedplaatjesproduct onmiddellijk behandeld met riboflavine en UV kunnen bepalen. Na de behandeling van de bloedplaatjes producten de volgende verminderingen log werden waargenomen: S. epidermidis 4,7 log (99,998%), S. aureus 4,8 log (99,998%), S. mitis 3,7 log (99,98%), S. pyogenes 2,6 log (99,7%), S. marcescens 4,0 log (99,99%), Y. enterocolitica 3,3 log (99,95%), B.neotomae 5,4 log (99,9996%), B. cereus 2,6 log (99,7%), E. coli ≥ 5,4 log (99,9996%), P. aeruginosa 4,7 log (99,998%) en K. pneumoniae 2,8 log (99,8%) (figuur 2). Alle eenheden voldoen aan de systeemspecificaties zoals hierboven voor de riboflavine en UV-proces verklaard. Bijkomende vermindering test werd uitgevoerd met S. pyogenes gebruiken buffy coat verkregen bloedplaatjes. Geen significant verschil werd waargenomen in de afname van S. pyogenes in buffy coat bloedplaatjes afgeleide versus aferesebloedplaatjes (gegevens niet getoond). <img alt="Tabel 1" src="/files/ftp_upload/52820/52820table1.jpg" /> Tabel 1: Groei voorwaarden voor bacteriesoorten geëvalueerd met behulp van riboflavine en UV-licht. Een panel van zowel Gram-negatieve en Gram-positieve bacteriën die zijn aangetoond bloedplaatjesproducten verontreinigen werden voor dit onderzoek geselecteerd. De groeiomstandigheden (temperatuur en media-type) gebruikt voor het verspreiden en titer organismen getoond. <img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/52820/52820fig1.jpg" /> Figuur 1: riboflavine en UV-licht pathogeenreductie proces. Riboflavine werd opgelost in 0,9% zoutoplossing bij een nominale concentratie van 500 uM. De oplossing werd steriel verbonden en afgevoerd in elk trombocytenproduct. Bacteriën werd aseptisch toegevoegd aan elke eenheid bloedplaatjes en vervolgens behandeld met 6,2 J / ml UV energie (ongeveer 6-10 min). In deze in vitro studie van de nabehandeling bloedplaatjes eenheid werd bemonsterd om de uiteindelijke bacteriële titer te bepalen. <img alt="Figuur 2" src="/files/ftp_upload/52820/52820fig2.jpg" /> Figuur 2: Reductie van verschillende bacteriesoorten bij behandeling met riboflavine en UV-licht riboflavine en UV licht werd gebruikt om de bacteriële ladingen voorkomende bacteriële verontreinigingen van bloedplaatjes verminderen.. De log 10 vermindering is het verschiltussen de gemiddelde voorbehandeling titer en de gemiddelde nabehandeling titer. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52820/52820fig2highres.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>

De opslagomstandigheden van bloedplaatjesproducten creëren een ideale omgeving voor bacteriële verontreinigingen om zich te vermenigvuldigen tot gevaarlijke niveaus. Het doel van deze studie was om een koloniaal vormingstest te gebruiken om een riboflavine-gebaseerd ziekteverwekkerreductieproces te evalueren tegen bacteriële besmetting met hoge titer in humane bloedplaatjesproducten.

Behandeling van bloedplaatjes Producten met riboflavine en UV-licht: Effectiviteit tegen hoge titer bacteriële besmetting

Contamination of platelet units by bacteria has long been acknowledged as a significant transfusion risk due to their post-donation storage conditions. ...

Het algemene doel van deze procedure is om de reductie van veelvoorkomende bacteriële contaminanten in bloedplaatjesproducten te evalueren met behulp van een pathogeanreductieproces op basis van riboflavine en UV. Dit wordt bereikt door eerst een voorraad bacteriën met een hoge titer voor te bereiden. De tweede stap is het verkrijgen van een menselijk bloedplaatjesproduct en het evalueren van de kwaliteit van de eenheidscellen.Vervolgens wordt de bloedplaatjesunit gedoseerd met riboflavine en geïnoculeerd met een bekende concentratie bacteriën. De laatste stap is de behandeling van de unit met UV-licht. Uiteindelijk wordt de bacteriële reductie gemeten door monsters van vóór en na de behandeling te vergelijken op levensvatbare bacteriën, gemeten via een endpoint-verdunningsplaatmethode.Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden, zoals bacteriële screening, is dat riboflavine en UV-licht andere pathogenen zoals H-I-V-H-C-V, malaria en Babesia kunnen inactiveren. De implicaties van deze technologie reiken verder dan bloedoverdraagbare pathogenen, omdat de technologie ook in staat is om witte bloedcellen en gedoneerde bloedproducten te inactiveren. Deze zijn geassocieerd met ongunstige transfusiegebeurtenissen, zoals transfusie-geassocieerde graft-versus-hostziekte.Ik kwam voor het eerst op het idee om deze methode te gebruiken voor het inactiveren van pathogenen in bloed via onderzoeken die ik deed naar de interactie van verbindingen, fotochemische verbindingen, met nucleïnezuren. De techniek maakt gebruik van het feit dat pathogenen, in tegenstelling tot rode bloedcellen, bloedplaatjes en plasmaproteïnen, genomische nucleïnezuren bevatten die essentieel zijn voor de replicatie en voor de overdracht van ziekten. Door dus de chemie van nucleïnezuren in het milieu van de aanwezige bloedproducten aan te pakken, kunnen we de pathogenen selectiever inactiveren terwijl de kwaliteit van de bestanddelen van rode cellen, bloedplaatjes en plasmaproteïnen behouden blijft. Demonstratie van de procedure.Vandaag worden we vergezeld door Nick HOA, laboratoriumwetenschapper, en Denise Gilmore, laboratoriumtechnicus. Bereid eerst een steriele fles van 250 milliliter voor die 100 milliliter groeimedium bevat, specifiek voor de bacterie waarin geïnteresseerd wordt. Inoculeer met een steriele inoculatielus een enkele bacteriële kolonie van een uitstrijkplaat in het medium.Plaats de fles vervolgens in een orbitale schudincubator. Stel de schudsnelheid in op 140 RPM en incubeer de cultuur gedurende één tot twee dagen. Controleer de cultuur periodiek op bacteriële groei.Breng na incubatie de bacteriële suspensie over in twee steriele conische buizen van 15 milliliter. Centrifugeer de buizen 20 minuten lang bij 3000 ×g en 23 °C. Aspireer vervolgens het supernatant en resuspendeer de bacteriële pellet in 15 milliliter steriel peptidewater.Vortex de buisjes om de suspensie te bevorderen en voeg vervolgens de geresuspendeerde bacteriële culturen samen om de stamcultuur te concentreren. Vul verdunningsbuisjes van vijf milliliter elk met 1,8 milliliters peptidewater. Breng 200 microliters van het onverdunde monster over in het eerste buisje, vortex het buisje en breng vervolgens 200 microliters over naar het volgende buisje.Herhaal dit tot de juiste verdunning is bereikt. Breng 100 µL van elke verdunning over naar een geschikte agri-plaat. Verdeel de monsterinhoud gelijkmatig over het AER met behulp van een steriele celspreider voor een negatieve controleplaat.Breng 500 µL van het peptidewater aan op twee agarplaten. Verdeel de monsterhoeveelheid gelijkmatig over het oppervlak met een steriele celspreider, keer alle platen om en incubeer deze gedurende één tot twee dagen bij de juiste temperatuur. Indien er groei wordt waargenomen op een van de negatieve controleplaten, is het peptidewater gecontamineerd en is de titer ongeldig.Indien de negatieve controleplaten negatief zijn, tel dan de koloniën op alle platen met 30 tot 300 koloniën. Bereken vervolgens de titer van elk testmonster en noteer de resultaten om het aantal per milliliter te bepalen. Bewaar de bacteriële culturen gekoeld tot twee weken bij vier graden Celsius.Bepaal voor de nauwkeurigheid opnieuw de titer van de cultuur vóór gebruik. Gebruik een standaard aferese menselijk trombocytenproduct van 90 tot 360 milliliter met een concentratie van 0,80 tot 3,8 miljoen trombocyten per microliter. Laat de zak ten minste twee uur rusten in een trombocytenincubator bij 22 graden Celsius en agiteer vervolgens voorzichtig bij 60 RPM tot aan gebruik.Neem een monster van twee milliliter van het trombocytenproduct en gebruik een bloedgasanalyser bij 22 °C om te controleren of de pH boven 6,6 ligt. Meet met hetzelfde monster de trombocytenconcentratie met een hematologische analyzer om te bevestigen dat deze binnen het gewenste bereik valt. Inspecteer vervolgens de trombocytenzak visueel door deze onder een directe witte lichtbron te houden.Knijp kort in de zak en observeer het wervelpatroon van het monster. Als er voor en na het knijpen in de zak een troebele homogeniteit blijft bestaan, mogen de bloedplaatjes niet met een tubing docking device worden gebruikt. Overbreng de bloedplaatjes naar een bewaarzak voor riboflavine- en uv-lichtbestraling.Verwijder de lege bloedplaatjeszak met een slangdichter en gooi deze weg als biologisch gevaarlijk afval. Verwijder vervolgens de lichtbeschermende buitenverpakking van de steriele 500 micromolar riboflavine-stamloplossing. Koppel de riboflavinezak aan de inlaatlijn van de behandel- en bewaarzak en laat de inhoud in de bloedplaatjesunit lopen.Hang vervolgens de set van de pouch en de behandelzak op aan de riboflavine-pouch. Druk voorzichtig de resterende lucht uit de behandelzak in de riboflavine-zak. Spoel eventuele resterende riboflavine in de plaatjes-pouch met een kleine hoeveelheid plaatjesproduct.Laat de riboflavine- en bloedplaatjesoplossing terugvloeien in de behandelzak. Klem vervolgens de toevoerlijn af. Verwijder de lege riboflavinezak met de slangafdichter en gooi de lege zak op de juiste wijze weg. Steriel.Koppel een slang van zes inch met een vrouwelijke spuitconnector aan de inlaatlijn van de verlichtings- en opslagzak. Bevestig een spuitcilinder van 10 milliliter aan de slang. Voeg vervolgens vijf milliliter van de bacteriële stelsuspensie toe aan de spuitcilinder.Open vervolgens de klem van de inlaatlijn en laat de bacteriën in het bloedplaatjesproduct lopen. Spoel de spuitcilinder door een kleine hoeveelheid bloedplaatjesproduct terug te laten stromen. Verwijder na het spoelen de spuitcilinder.Bevestig een spuit van 30 milliliter en spoel de inlaatpoort ten minste twee keer door nadat het product goed is gemengd. Gebruik een schone spuit van vijf milliliter en neem een voorbehandelingsmonster van twee milliliter op. Gebruik een nieuwe spuit om eventuele lucht die in de zak is gekomen te verwijderen.Verwijder vervolgens de toevoerleiding uit de behandelzak en weeg de plaatjesoplossing. Begin de plaatjesbehandeling door eerst de ID van de operator in te voeren en plaats de zak vervolgens op het platform van de illuminator. Voer daarna de monster-ID in met behulp van een barcodelezer.Voer het producttype en het gewicht hiervan in de software in. Sluit vervolgens de kwartsklem om automatisch 6,24 joule per milliliter ultraviolette energie toe te dienen. Een typische behandeling duurt vijf tot 10 minuten.Titre ondertussen het voorbehandelingsmonster na UV-behandeling, titreer een monster na behandeling om de bacteriële overleving te bepalen en titreer vervolgens de bacteriële stamcultuur als positieve controle. De titer van de stamcultuur moet binnen één log-eenheid CFU per milliliter van de geregistreerde titer liggen. De reductie van 11 verschillende bacteriële soorten werd geëvalueerd met behulp van riboflavine en een proces voor pathogeenreductie op basis van UV-licht.Er werden ten minste zes bloedplaatjesproducten per organisme geëvalueerd en elk hiervan werd geïnoculeerd. Met een voldoende bacteriële load, waarbij een uiteindelijke titer van meer dan 10.000 CFU per milliliter werd bereikt, werden monsters genomen voorafgaand aan de behandeling, evenals direct na de behandeling met riboflavine en UV, vergeleken met de oplossingen vóór de behandeling. Alle bacteriële loads werden met ten minste 2,6 log-eenheden gereduceerd, wat ongeveer een 400-voudige afname was door behandeling met riboflavine en UV-licht.Na deze studies met bacteriën met een hoog titer kunnen aanvullende studies worden uitgevoerd met klinisch relevantere spike-titers. Deze vertegenwoordigen feitelijk de niveaus van bacteriën die op het moment van donatie in producten aanwezig kunnen zijn. Het doel van deze studies met spiking van een laag titer is om de methode te evalueren om de groei van bacteriën te voorkomen en ervoor te zorgen dat ze cultuurnegatief blijven tijdens de bewaarperiode, inclusief verlengde bewaarperioden bij kamertemperatuur.Sinds de introductie van deze technologie kunnen onderzoekers en medische professionals deze gebruiken om het vermogen om een breed spectrum aan pathogenen te inactiveren te evalueren en om de verspreiding van transfusieoverdraagbare ziekten te voorkomen. Na het bekijken van deze video zou u een goed inzicht moeten hebben in hoe u de log-reductie van bacteriën meet in een sterk besmet bloedplaatjesproduct dat is behandeld met riboflavine en UV-licht.

treatment-platelet-products-with-riboflavin-uv-light-effectiveness

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Dit artikel beschrijft het proces wordt gebruikt door Örebro University Hospital om een ​​dubbele dosis buffy coat bloedplaatjesconcentraten bereid uit volbloed donaties en behandeld met het INTERCEPT Blood System voor pathogeeninactivatie produceren.

Voorbereiding en pathogeeninactivatie van Double Dose Buffy Coat bloedplaatjesproducten met behulp van het INTERCEPT Blood System

Source: Cheng, C., et al. Inactivation of Pathogens via Visible-Light Photolysis of Riboflavin-5′-Phosphate. J. Vis. Exp. (2022)This video demonstrates a method for evaluating the phototoxic effects of flavin mononucleotide (FMN) on pathogenic bacteria. Bacterial cultures are exposed to increasing concentrations of FMN and illuminated with visible light to generate reactive oxygen species (ROS) that damage cellular components. The surviving bacteria are then quantified to assess the...

Inactivation of Bacteria Using Light-Activated Flavin Mononucleotide

Source: Cheng, C., et al. Inactivation of Pathogens via Visible-Light Photolysis of Riboflavin-5′-Phosphate. J. Vis. Exp. (2022).In this video, a buffered reaction mixture containing L-methionine, nitro blue tetrazolium (NBT), and flavin mononucleotide (FMN) is irradiated with violet light to induce reactive oxygen species (ROS) production. This leads to bacterial inactivation and the formation of spectrometrically detectable formazan.

Quantification of Light-Induced Bacterial Inactivation Through Reactive Oxygen Species Generation

Source: Zhao, K., et al. An In Vitro Model to Study the Effect of 5-Aminolevulinic Acid-mediated Photodynamic Therapy on Staphylococcus aureus Biofilm. J. Vis. Exp. (2018)The video demonstrates a photodynamic therapy protocol to assess antibacterial effects on Gram-positive bacterial biofilms. Biofilms are divided into four groups: two receive a photosensitizer precursor, and two receive a buffer. All are incubated in the dark, followed by red light exposure to one precursor-treated group and...

Light-Activated Treatment of Bacterial Biofilms Using a Photosensitizer Precursor

This video demonstrates the riboflavin and UV light-based pathogen reduction process against high-titer bacterial contamination in human platelet products. This process could help to lower the risk of severe adverse transfusion events associated with bacterial contamination.

A Riboflavin and UV Light Treatment of Platelet Products to Eliminate Bacteria

Implantaat-geassocieerde infectie is een significante klinische complicatie. Deze studie beschrijft een aanpak met bloedplaatjes-rijk plasma (PRP) van het implantaat-geassocieerde infecties, presenteert het protocol voor het bereiden PRP met constante concentratie van bloedplaatjes en rapporteert de nieuw geïdentificeerde antimicrobiële eigenschappen van PRP en bijbehorende protocollen voor de behandeling van dergelijke antimicrobiële...

PRP als een nieuwe aanpak om infectie te voorkomen: Voorbereiding en<em&gt; In vitro</em&gt; Antimicrobiële eigenschappen van PRP

Hier presenteren we een protocol voor de beoordeling van de resultaten van de toepassing van het rood licht op de groei van Candida albicans biofilm. Een niet-coherente rood licht apparaat met de golflengte van 635 nm en dichtheid van de energie van 87.6 J·cm-2 werd toegepast in de groei van Candida albicans biofilms gedurende 48 uur.

Dagelijkse fototherapie met rood licht te reguleren Candida albicans Biofilm groei

Hier presenteren we een protocol om pathogene bacteriën te inactiveren met reactieve zuurstofsoorten geproduceerd tijdens fotolyse van flavine mononucleotide (FMN) onder blauwe en violette lichtbestraling van lage intensiteit. FMN-fotolyse is aangetoond als een eenvoudige en veilige methode voor sanitaire processen.

Inactivatie van pathogenen via zichtbaar-licht fotolyse van riboflavine-5′-fosfaat

De vorming van procoagulerende bloedplaatjes is gecorreleerd met een verhoogd risico op trombose. Hier wordt een nauwkeurig protocol gepresenteerd voor het isoleren van gewassen bloedplaatjes uit menselijk bloed, bedoeld om de blootstelling aan fosfatidylserine en de afgifte van microvesikels te kwantificeren, die onderscheidende kenmerken zijn van procoagulerende bloedplaatjes.

Karakterisering van procoagulerende bloedplaatjes door meting van de blootstelling aan fosfatidylserine en de afgifte van microblaasjes uit menselijke gezuiverde bloedplaatjes

Dit protocol beschrijft een eenvoudige en economische methode voor het evalueren van de effectiviteit van potentiële fotosensibilisatoren bij antibacteriële fotodynamische inactivatie (aPDI), met behulp van een plaatformaat met 96 putjes in combinatie met een lichtbron van een LED-paneel. Deze benadering maakt het mogelijk om meerdere experimentele omstandigheden gelijktijdig te testen, waaronder verschillende concentraties, verbindingen en bacteriestammen.

LED-gebaseerde in-vitroscreening voor het beoordelen van fotoactiveerbare moleculen bij bacteriële fotodynamische inactivatie

Leer hoe riboflavine en UV-licht bacteriële besmetting in bloedplaatjesproducten vermindert. Deze methode behoudt de kwaliteit van bloedcomponenten en verhoogt de veiligheid van transfusies.

Behandeling van bloedplaatjes Producten met riboflavine en UV-licht: Effectiviteit tegen hoge titer bacteriële besmetting

Meer video's verkennen