Name: Denver papillen Protocol voor objectieve analyse van Fungiform papillen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-08T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 50 s
Description: Leer het Denver Papillen Protocol voor objectieve analyse van fungiforme papillen met behulp van een dichotome sleutel. Deze methode standaardiseert tellingen en vermindert subjectiviteit in smaakonderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd deels gefinancierd door Science Education Partnership Award (SEPA) R25 RR025066 tussen 2008-2012 van de National Institutes of Health en het National Center for Research Resources. Dank aan collega&#39;s in het veld smaak voor nadenkende bespreking van de literatuur, onze resultaten en feedback op het gebruik van DPP in verschillende laboratoria scenario: John Hayes, Sue Coldwell, Paul Breslin, Carla Schubert. Dank ook aan leiderschap op het Denver Museum of Nature &amp; Science en het personeel ter ondersteuning van de burger de wetenschap binnen de Genetica van de Smaak Lab binnen Expedition Health. Tot slot, ik dank u voor al onze vrijwilligers burger wetenschappers voor hun tijd en toewijding aan de ontwikkeling en het gebruik van dit protocol, met inbegrip van: Bear Aragon, Mike Archer, Su Ataman, Michael Bagley, A&#39;nette Bertrand, Diana Boyles, Wendy Covert, Sasha Dooley , Patty Drever, Jessica Ern, Laura Harmacek, Sean Hibbard, Joyce Hutchens, Matt Joo, Leta Keane, Willem Leenhouts, Stephania Lukjan, Ashley Matthews, Mike Mauser, Stephanie Miller, Hallie Morgan-Rodriguez, Griffin Scherma, Alyssa Schickedanz, Terri Simon, Dylan Thomas, Rudy Torres, Tyler Wilson, Diane Woltkamp.

De beelden scoorde in deze studie werden verzameld als onderdeel van een grotere smaak studie uitgevoerd in de genetica van de Smaak Lab aan het Denver Museum of Nature &amp; Science (het museum) 10. Onderwerpen van de grotere studie waren museumbezoekers (n = 1195), variërend in de leeftijd 18-93. Hoewel patiënten kwamen uit zes van de zeven continenten deelnemers voornamelijk van Europese afkomst. Gegevens Elk onderwerp werd verzameld in een 30 min lab sessie. De Westerse Institutional Review Board goedkeuring van het protocol, geïnformeerde schriftelijke toestemming werd gegeven, en onderwerpen zich vrijwillig hun tijd en werden niet gecompenseerd voor hun deelname aan het onderzoek. 1. Data Collection <ol><li> Image Capture <ol><li> Show onderwerpt een foto van hoe zich te vormen (figuur 1) en wat het vastgelegde beeld eruit zal zien. <img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig1.jpg" /> Figuur 1: Image Capture Pose. </strong&gt; Dit is het aangetoond dat proefpersonen in de GoT Lab om volledig te kunnen poseren voor hun tong foto fotograaf. </li><li> Direct onderwerpen om hun tong te drogen met een papieren handdoek en laat de tong uitsteekt uit hun mond. </li><li> Breng ongeveer 3 ml van blauwe voedselkleurstof in een 01:36 concentratie van de apex van de tong met een steriele, rayon applicator met een 1-inch tip. Heb onderwerpen terug tong om hun mond en slikken om overtollige kleurstof te verwijderen. </li><li> Laat mensen zelf vormen zoals getoond in figuur 1, met de kin op handen en ellebogen gestut op een lijst voor stabiliteit. Direct onderwerpen om hun tong te verlengen een comfortabele afstand en zet het voorzichtig tussen hun tanden. </li><li> Plak een 2,5 cm stuk filtreerpapier met een 10 mm diameter ronde uitsparing geslagen in het aan de punt van de voorste van de linkerkant van de tong gewenste middellijn (zie figuur 1). </li><li> Neem ten minste drie close-up beelden van de tong, capturing de volledige 10 mm ronde uitsparing voor visualisatie van alle FP binnen dat gebied te waarborgen. Gebruik de macro-instelling van een hoogwaardige digitale point en shoot camera op een statief voor stabiliteit. <ol><li> Zoom in op de mate dat de gehele uitsparing is gefotografeerd, terwijl nog steeds binnen aanbevolen zoombereik van de camera. Zorg ervoor dat het vlak van de cameralens is evenwijdig aan het vlak van de tong en de uitsnijding weergegeven circulaire de foto plaats van langwerpig. Bekijk foto&#39;s om ervoor te zorgen dat ze zijn van hoge kwaliteit en nuttig voor het tellen. </li></ol></li></ol></li><li> Afbeelding Selectie en voorbereiding <ol><li> Upload de foto&#39;s naar de computer. </li><li> Van de foto&#39;s genomen van de tong hetzelfde onderwerp, selecteert u slechts één voor verdere analyse op basis van duidelijke definitie tussen structuren op de tong op het hoogste zoom en de minst vervormde hoek, zodat de tong is breed en plat in de richting van de camera. </li><li> Open de geselecteerde RAW-beeld in de open source dusftware, ImageJ. Klik op &quot;Plugins&quot; en in het dropdown menu scroll naar &quot;Analyseren&quot; en klik op &quot;Cell Counter.&quot; Toen de cel teller opent, klikt u op &quot;Initialiseren&quot; om het beeld te koppelen aan de cel teller. Opmerking: Hier, gebruik ImageJ 1.45 sec met 32-bits Java 1.6.0_10-versie. <ol><li> Gebruik een standaardvergroting van 50% samenhang tussen scorers en voor gebruik in daaropvolgende stappen te scoren FP. Verplaats het beeld naar de linkerkant van het scherm naast de cel teller. Dit beeld zal worden aangeduid als Copy A (zie figuur 2, de linkerkant van het scherm). </li></ol></li></ol></li><li> Open een tweede exemplaar van het RAW-beeld (copy B) voor het meten van de diameters van de papillen worden gekwantificeerd. Zoom in en uit als nodig is om de voorkeur van de individuele scorer gedurende het scoren proces. Verplaats deze kopie aan de rechterkant van het scherm, zodat de twee exemplaren zijn niet per ongeluk in de war. (Zie figuur 2, rechtsscreen) </li><li> Klik op de lijn tool. Met kopiëren B, zoom in zo veel als nodig is om nauwkeurig te tekenen een diameter over de 10 mm binnenste cirkel van de filter papier op elke hoek en klik op &quot;Analyze&quot; en &quot;Set Scale.&quot; Vul de &quot;bekende afstand&quot; te zijn &quot;10 . &quot;Controleer de schaal correct is door het meten van een alternatieve hoek is en zorgen voor het diameterbereik is tussen 9,8-10,2 mm. Als het niet, herhaal deze stap. </li></ol><img alt="Figuur 2" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig2.jpg" /> Figuur 2: Copy A en B. Copy Copy A (links) is gekoppeld aan de celgetalmeter raam en blijft op 50% vergroting voor consistentie van scorer tot topscorer terwijl exemplaar B (rechts) kan worden ingezoomd op de voorkeur van het individu. 2. Scoren FP Met de Denver papillen Protocol Dichotoom Key <ol><li> Voor elke kandidaat Papilla, gebruikt u de volgende dichotome sleutel (stap 2,2-2,5) waarin de criteria om te bepalen of het een FP. Zie Figuur 3 voor een visuele papillen die zijn geclassificeerd als FP en degenen die bij elke stap van de werkwijze worden afgewezen. <img alt="Figuur 3" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig3.jpg" /> Figuur 3: FP vs. Afgewezen papillen. Figuur 3a is een tong met een aantal kwalificatie FP terwijl 3b-3e hebben omcirkeld gebieden die elke regel overtreden. (3b) gebied is amorf; (3c) papillen zijn te klein; 3d) papil blue vergelijking met die eromheen, (3e) papilla uitgespaard vergeleken met die omheen. </li><li> Vorm <ol><li> Bepaal of de kandidaat papilla amorf (vormloos). Bij 50% zoom te zien of er een algemeen erkende geometrische vorm (ovaal, kubusvormige, rond). </li><li> Als er een geometrische vorm (zie figuur 3a), ga naar stap 2.3. </li><li> Als there is geen geometrische vorm (zie figuur 3b), ga dan naar de cel teller venster en klik op &quot;Type 1.&quot; Op exemplaar A (50% zoom), klikt u op de kandidaat papilla te markeren als amorfe en niet een FP. Klikken op types 1-4 in deze en volgende stappen maakt scorers te weten dat ze hebben alle kandidaat papillen aangepakt en categoriseert die regel werd geschonden bij de afwijzing van een structuur die zal helpen bij de discussie in stap 2.7.2. </li></ol></li><li> Kleur <ol><li> Zie A op 50% kopievergroting en bepalen of er enige kleurendifferentiatie over het oppervlak van de tong. Zo ja, dan verder met de volgende 2.3.2. Zo niet, dan niet van kleur als een bepalende factor te gebruiken; ga naar stap 2.4. </li><li> Bepaal of de kandidaat papilla is lichter dan het weefsel of papillen eromheen (zie figuur 3a). Indien een deel van het gegadigde papilla pink gebleven of gebeitst lichter, ga naar stap 2.4. </li><li> Als de kandidaat papilla is blauw en de omliggende papillen zijnlichter (zie figuur 3c), ga dan naar de cel teller venster en klik op &quot;Type 2&quot; op de cel toonbank. Op exemplaar A, klikt u op de kandidaat om als te blauw en niet een FP markeren. </li></ol></li><li> Grootte <ol><li> Met kopiëren B, opnieuw in om de afstand waar men gemakkelijk kan zien de omtrek van de kandidaat papilla. </li><li> Klik op de line tool en meet over de langste afmeting van de kandidaat papilla. Klik op &quot;Analyseren&quot; en vervolgens &quot;maatregel.&quot; Als de gemeten lengte is 0,5 mm of groter (zie figuur 3a), te verplaatsen naar stap 2.5. </li><li> Als de gemeten lengte 0,499 mm of minder, gemeten keer om nauwkeurigheid te garanderen. Als het nog steeds 0,499 mm of minder (zie F igure 3d), klikt u op &quot;Type 3&quot; op de cel teller raam en op exemplaar A, klikt u op de kandidaat papilla het als te klein en niet een FP te markeren. </li></ol></li><li> Recessie <ol><li> Met behulp van copy A, beoordelen of de kandidaat papilla is ofwel uniform hijechts met de rest van de tong of verhoogde. Als de papil in een spleet bepaalt de hoogte ten opzichte van de andere structuren in de spleet, het oppervlak van de tong. Als de papilla lager is dan de papillen eromheen (zie figuur 3e), gebruik &quot;type 4&quot; en copy A op de kandidaat papilla te markeren als verzonken en geen FP. </li><li> Indien de kandidaat papilla ofwel uniforme hoogte met de rest van de tong of verhoogde (zie figuur 3a), gebruik &quot;Type 5&quot; te klikken en merken dat dit een FP. Dit type 5 totaal is de ruwe FP score. Laat de kopieën niet te sluiten op dit punt als ImageJ niet de scores op de celgetalmeter noch de gekleurde vlekken van types 1-5 besparen op exemplaar A. </li></ol></li><li> Saving Copy A <ol><li> Noteer in notebook ruwe FP score. </li><li> Op de cel teller venster, klikt u op &quot;Exporteren Image.&quot; Sla met de gewenste naamgeving systeem van het lab. Dit zal de opening van de agent toestaany A in de toekomst om de gekleurde markeringen van types 1-5 te behouden. Het zal niet de ruwe FP score op te slaan. </li></ol></li><li> Kwaliteitscontrole <ol><li> Score elke foto door twee individuele scorers en vergelijk 7. </li><li> Als de hogere FP ruwe score ligt binnen 10% van de lagere FP ruwe score, het gemiddelde van de twee scores bij elkaar voor een consensus FP score. Als de twee FP ruwe scores verschillen met meer dan 10%, trek scoorden beiden foto&#39;s op het scherm. <ol><li> Gebruik types teller 1-4 om te helpen bij de bespreking van discrepanties en overleggen over een definitieve consensus score. Als er geen consensus tijdens de discussie kan worden bereikt, neem een ​​pauze van de lijn halen. Op een later tijdstip, rescore het beeld en bespreken. Als er nog steeds geen consensus kan worden bereikt, trekt in een derde doelpuntenmaker. Vraag hen om de score van de afbeelding en de dialoog met de andere twee. </li></ol></li></ol></li></ol> 3. Training Scorers te gebruiken DPP <ol><li> Achtergrondinformatie over Training <ol><li> Hebben twee scorers telt een verscheidenheid van beelden,scoren individueel en regelmatig verlenen om ervoor te zorgen dat ze met behulp van dezelfde criteria. Alleen als individuele graven waren constant binnen 10% van elkaar voor elk van de beelden toen scoorde was de methode (boven afgerond) aanvaardbaar geacht en genoemd DPP. </li><li> Kies 15 officiële beelden en 15 training beelden (Aanvullende Cijfers 2-17) in volgorde te scoren. Als een afbeelding ontelbaar werd geacht tijdens de selectie, slaat u de afbeelding en kies volgende afbeelding sequentiële. Let op: Deze beelden verschillen in kwaliteit en grootte als ze werden gekozen, terwijl de Lab was nog het beheersen van de juiste fotografie techniek. Een van de geselecteerde afbeeldingen ontelbaar werd geacht door dit primair telproces, maar werd in de linker om ervoor te zorgen dat de scorers in staat waren om dat nummer te bellen als dat nodig is. Daarom zijn er 16 beelden gegeven aan trainees hoewel slechts 15 scoorde beelden. </li><li> Met behulp van DPP, hebben de bovengenoemde scorers tellen 15 training beelden en het creëren van een consensusscore voor elk. </li><li> Geef trainees de 15 officiële beelden en vraag om te scoren met behulp van Miller &amp; Reedy om een ​​baseline te maken. Record scores. Voer een groepstraining die stap 3.2 gevolgd. Zodra stap 3.2 werd afgerond, hebben de scorers de score van de 15 officiële beelden opnieuw en nemen hun scores. </li></ol></li><li> Training Latere Scorers op DPP <ol><li> Geef training scorers imago van de eerste training en demonstreren DPP voor een paar papillen op deze afbeelding. Bespreek redenering voor het selecteren of verwerpen elke papilla als een FP. Laat trainees te blijven oefenen scoren voor de rest van die foto en overleggen met de consensus nummer (voor de GoT Lab consensus aantal en type 1-5 markers, zie aanvullende Figuur 1). Voor deze foto bespreken discrepanties ongeacht de 10% te begrijpen DPP waarborgen. </li><li> Geef daaropvolgende scorers imago van de tweede training en hebben ze te scoren met DPP. </li><li> Als de cursist ruwe FP score binnen tienprocent van de gevestigde consensus te tellen uit paragraaf 3.1.3., laat trainee te gaan naar de volgende opname en herhaal de stappen. </li><li> Als de score is buiten de tien procent bereik, gebruik gekleurde markeringen van de stagiair die types 1-5 te begrijpen en identificeren van de inconsistentie en dan pakken discrepant begrip van DPP. </li><li> Geef de stagiair de mogelijkheid om het beeld rescore en controleer de nieuwe score eens te meer. Indien succesvol, stagiair verplaatst naar de volgende afbeelding totdat alle afbeeldingen zijn voltooid. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Miller, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+taste+bud+density+across+adult+age+groups%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gerontol%22%5BJournal%5D)">Human taste bud density across adult age groups.</a> J Gerontol. 43 (1), B26-B30 (1988).</li>
<li>Miller, I. J. Jr, Reedy, F. E. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+fungiform+papillae+and+taste+pores+in+living+human+subjects%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Senses%22%5BJournal%5D)">Quantification of fungiform papillae and taste pores in living human subjects.</a> Chem Senses. 15 (3), 281-294 (1990).</li>
<li>Miller, I. J. Jr, Reedy, F. E. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variations+in+Human+Taste+Bud+Density+and+Taste+Intensity+Perception%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Behav%22%5BJournal%5D)">Variations in Human Taste Bud Density and Taste Intensity Perception.</a> Physiol Behav. 47 (6), 1213-1219 (1990).</li>
<li>Shahbake, M., Hutchinson, I., Laing, D. G., Jinks, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+quantitative+assessment+of+fungiform+papillae+density+in+the+human+tongue%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Rapid quantitative assessment of fungiform papillae density in the human tongue.</a> Brain Res. 1052 (2), 196-201 (2005).</li>
<li>Bartoshuk, L. M., Duffy, V. B., Miller, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PTC%2FPROP+tasting%3A+anatomy%2C+psychophysics%2C+and+sex+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Behav%22%5BJournal%5D)">PTC/PROP tasting: anatomy, psychophysics, and sex effects.</a> Physiol Behav. 56 (6), 1165-1171 (1994).</li>
<li>Essick, G. K., Chopra, A., Guest, S., McGlone, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lingual+tactile+acuity%2C+taste+perception%2C+and+the+density+and+diameter+of+fungiform+papillae+in+female+subjects%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Behav%22%5BJournal%5D)">Lingual tactile acuity, taste perception, and the density and diameter of fungiform papillae in female subjects.</a> Physiol Behav. 80 (2-3), 289-302 (2003).</li>
<li>Delwiche, J. F., Buletic, Z., Breslin, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+of+papillae+number+to+bitter+intensity+of+quinine+and+PROP+within+and+between+individuals%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Behav%22%5BJournal%5D)">Relationship of papillae number to bitter intensity of quinine and PROP within and between individuals.</a> Physiol Behav. 74 (3), 329-337 (2001).</li>
<li>Kim, U. K., Jorgenson, E., Coon, H., Leppert, M., Risch, N., Drayna, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positional+cloning+of+the+human+quantitative+trait+locus+underlying+taste+sensitivity+to+phenylthiocarbamide%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Positional cloning of the human quantitative trait locus underlying taste sensitivity to phenylthiocarbamide.</a> Science. 299 (5610), 1221-1225 (2003).</li>
<li>Hayes, J. E., Bartoshuk, L. M., Kidd, J. R., Duffy, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Supertasting+and+PROP+bitterness+depends+on+more+than+the+TAS2R38+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Senses%22%5BJournal%5D)">Supertasting and PROP bitterness depends on more than the TAS2R38 gene.</a> Chem Senses. 33 (3), 255-265 (2008).</li>
<li>Garneau, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crowdsourcing+taste+research%3A+genetic+and+phenotypic+predictors+of+bitter+taste+perception+as+a+model%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Integr+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Crowdsourcing taste research: genetic and phenotypic predictors of bitter taste perception as a model.</a> Front Integr Neurosci. 8 (33), (2014).</li>
<li>Fox, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+relationship+between+chemical+constitution+and+taste%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">The relationship between chemical constitution and taste.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 18 (1), 115-120 (1932).</li>
<li>Tepper, B. J., Nurse, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fat+Perception+is+related+to+PROP+taster+status%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Behav%22%5BJournal%5D)">Fat Perception is related to PROP taster status.</a> Physiol Behav. 61 (6), 949-954 (1997).</li>
<li>Duffy, V. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bitter+receptor+gene+%28TAS2R38.%29%2C+6-n.-Propylthiouracil+%28PROP%29+bitterness+and+alcohol+intake%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol+Clin+Exp+Res%22%5BJournal%5D)">Bitter receptor gene (TAS2R38.), 6-n.-Propylthiouracil (PROP) bitterness and alcohol intake.</a> Alcohol Clin Exp Res. 28 (11), 1629-1637 (2004).</li>
<li>Yackinous, C., Guinard, J. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relation+between+PROP+taster+status+and+fat+perception%2C+touch%2C+and+olfaction%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Behav%22%5BJournal%5D)">Relation between PROP taster status and fat perception, touch, and olfaction.</a> Physiol Behav. 72 (3), 427-437 (2001).</li>
<li>Fischer, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+related+to+fungiform+papillae+density%3A+The+Beaver+Dam+Offspring+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Senses%22%5BJournal%5D)">Factors related to fungiform papillae density: The Beaver Dam Offspring Study.</a> Chem Senses. 38 (8), 669-677 (2013).</li>
<li>Feeney, E. L., Hayes, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regional+differences+in+suprathreshold+intensity+for+bitter+and+umami+stimuli%5BTitle%5D)+AND+%22Chemosens+Percept%22%5BJournal%5D)">Regional differences in suprathreshold intensity for bitter and umami stimuli.</a> Chemosens Percept. 7 (3-4), 147-157 (2014).</li>
<li>Saito, T., Narita, N., Yamada, T., Manabe, Y., Ito, T. Morphology of human fungiform papillae after severing chorda tympani nerve. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSaito%2C+T+%22Ann+Otol+Rhinol+Laryngol%22">Ann Otol Rhinol Laryngol</a>. 120 (5), 300-306 (2011).</li>
<li>Miller, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomy+of+the+peripheral+taste+system%5BTitle%5D)+AND+%22Handbook+of+Olfaction+and+Gustation%22%5BJournal%5D)">Anatomy of the peripheral taste system.</a> Handbook of Olfaction and Gustation. Doty, R. L. , Marcel Dekker. New York. 521-547 (1995).</li>
<li>Cheng, L. H. H., Robinson, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+distribution+of+fungiform+papillae+and+taste+buds+on+the+human+tongue%29%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Oral+Biol%22%5BJournal%5D)">The distribution of fungiform papillae and taste buds on the human tongue).</a> Arch Oral Biol. 36 (8), 583-539 (1991).</li>
<li>Cruickshanks, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+taste+impairment+in+epidemiologic+studies-The+Beaver+Dam+Offspring+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+N+Y+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Measuring taste impairment in epidemiologic studies-The Beaver Dam Offspring Study.</a> Ann N Y Acad Sci. 1170, 543-552 (2009).</li>
<li>McNamara, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetics+of+Taste+summative+evaluation+report+prepared+for+Denver+Museum+of+Nature+%26+Science%5BTitle%5D)+AND+%22Independent+Evaluator%22%5BJournal%5D)">Genetics of Taste summative evaluation report prepared for Denver Museum of Nature & Science.</a> Independent Evaluator. , Chicago IL. (2012).</li>
<li>Arvidson, K., Friberg, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+taste%3A+Response+and+taste+bud+number+in+fungiform+papillae%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Human taste: Response and taste bud number in fungiform papillae.</a> Science. 209 (4458), 807-808 (1980).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat ze geen concurrerende financiële belangen.

Met behulp van DPP, de variantie binnen het telt heel onafhankelijke scorers en binnen-scorer&#39;s telt aanzienlijk gedaald. Hoewel deze methode visuele FP dichtheidanalyse zonder videomicroscopie minder subjectieve, zij opgemerkt dat deze methode alleen scores FP. DPP kan niet garanderen dat de structuren geclassificeerd als FP hebben smaak poriën en zijn daarom smaakpapillen noch dat de graven zijn een afspiegeling is van echte vleesliefhebbers dichtheid 20,23 .De aard van deze methode is dat het vaststelt betrouwbaarheid door consistentie en precisie; het kan echter worden vertekenende resulteert in een constante richting. Om de nauwkeurigheid ten opzichte van andere werkwijzen testen met goede meting van smaakknop dichtheid (bijv videomicroscopie) zou uitstrekken buiten het bestek van deze study.However door karakterisering van de morfologie van FP stringenter en er een dichotome sleutel lost deze werkwijze Miller &amp; Reedy&#39;s kosten voor het veld dat meer karakterisering van FPmoet worden gedaan om consensus te bereiken over hun morfologie en kwantificering 2 hebben. Verder zij vermeld dat de kwalificatie kan &quot;blijkt een aantal verschillen tussen patiënten en uitleg enkele uiteenlopende resultaten tussen onderzoekers 2. &#39;Door een uniforme werkwijze voor kwantificering, veel van de verschillen over de rol van FP in smaak en voedings- gerelateerd onderzoek kunnen worden verholpen. De dichotome sleutel kan worden aangepast voor de verschillende beeldopname technieken. De bekende afstand voor de meetschaal kan eenvoudig worden ingesteld om de diameter die in elk lab en de recessie kan worden verdisconteerd indien saran wrap of glas over de tong voor het vastleggen van beelden werden geplaatst. In de Taiwanese Lab, bleek dat de neutrale tong voorwaarde dat de beste definitie van papillen. Dit kan te wijten zijn aan de hoeveelheid licht in het lab waarbij Saran Wrap of glas veroorzaakt aan het licht terug naar de camera tijdens het maken van een schittering die ezels maaktesment moeilijk. Sommige laboratoria hebben gezegd dat ze vinden de kleurstof meer uitdagende te tellen, maar de GoT Lab vond een verdunde blauwe voedsel kleurstof in een concentratie van 1:36 op voorwaarde dat de ideale contrast tussen fungiform en draadvormige papillen op de meerderheid van de tongen. De oprichting van een dichotome sleutel voor FP karakterisering zal zorgen voor onderzoekers in verschillende laboratoria, met behulp van een verscheidenheid van het beeld vast te leggen methoden, om consequent te analyseren structuren op de tong en hebben vertrouwen in de rapportage van de resultaten. Tot slot kan het gebruik van een dichotome sleutel oog op andere wetenschappelijke methoden waarbij eigenschappen van constructies of objecten leveren inconsistent nummers van onderzoek tot onderzoek.

Papillen zijn de zichtbare oneffenheden op het oppervlak van de tong. Er zijn vier soorten papillen: fungiform (FP), foliate, omwalde en filiform. Terwijl filiforme papillen zijn verspreid over het oppervlak van de tong worden omwalde gelokaliseerd alleen op de achterkant van de tong en nummeren bevinden zich aan de zijkanten. Daarentegen FP zich naar de voorkant van de tong. FP, foliate, en omwalde papillen worden beschouwd smaak omdat ze het potentieel hebben om smaakpapillen bevatten terwijl filiform niet. Smaakpapillen clusters van cellen die verantwoordelijk zijn voor het detecteren van chemische tastants en transduceren van de stimuli in een smaak signaal in de hersenen. Speeksel en voedsel moleculen treedt in de smaakpapillen via openingen genoemd smaak poriën, waar smaak moleculen hebben dan het potentieel van het activeren van smaak cellen. Interessant is dat er grote individuele verschillen in smaakknop dichtheid, zoals het eerst waargenomen in een histologische studie van tongenvanaf 18 kadavers (Miller, 1988) 1. Smaakpapillen zelf zijn niet zichtbaar op het oppervlak van de tong, maar de smaak poriën zijn zichtbaar bij het gebruik van de juiste vergroting, verlichting, en vlekken technieken die Miller &amp; Reedy (1990) leidde tot een methode om smaak poriën en fungiform papillen met videomicroscopie in levende identificeren ontwikkelen mens 2. Een aantal laboratoria hebben hun oorspronkelijke videomicroscopie techniek aangepast, met nog fotografie en weinig of geen vergroting. Aangezien fungiform papillen zijn veel gemakkelijker te visualiseren dan zijn poriën met deze laatstgenoemde technieken labs gedraaid tellen fungiform papillen in plaats van smaak poriën. Daarbij wordt aangenomen dat fungiform papilla dichtheid redelijk vervangende meting op smaak poriedichtheid, hoewel veel fungiform papillen geen smaak poriën of smaakpapillen 3; niet alleen zijn FP zichtbaarder en toegankelijker dan omwalde en foliate papillen, maar hun beeldopname minder time in beslag dan de smaak porie analyse door middel van de alternatieve methode van videomicroscopie 2,4. In 1990, Miller &amp; Reedy deze techniek om de smaak poriedichtheden gecorreleerd met OH dichtheden 3 dat verder werd bevestigd in Bartoshuk et al. 5 Naast deze anatomische relatie vinden Miller &amp; Reedy tevens dat de 8 individuen in het bovenste de helft van de smaak verdeling poriedichtheid ook beoordeeld sucrose, NaCl en propylthiouracil (PROP) als significant intenser dan wel de andere 8 individuen 3. Latere werk van Bartoshuk et al. (1994) zagen een correlatie tussen suprathreshold PROP smaak intensiteit en fungiform papilla dichtheid en smaak poriedichtheid, in 42 vakken 5. Deze handige methode leidde tot invloedrijke studies melden dat onderwerpen waarvan tongen hebben veel papillen uitlokken een sterkere reactie op vele tastants, waaronder de bittere tastants phenylthiocarbamide (PTC) en PROP 6,7. PTC en PROP zijn goed onderzocht tastants oft gebruikt vanwege het duidelijke verband tussen smaak gevoeligheid fenotype van een persoon en hun genotype. Populatie studies hebben aangetoond dat mensen die de homozygote recessieve diplotype van het gen, TAS2R38, een significant lagere gevoeligheid voor PROP dan dragers van de dominant of heterozygote variant van het gen 8-10. Deze erfelijke verschijnsel werd voor het eerst gemeld in 1932 toen Arthur L. Fox kondigde zijn ontdekking van &quot;de smaak blindheid&quot; te PTC 11. Onder de mensen in staat om deze bittere verbindingen te proeven, de intensiteit van de smaak gemeld kan overal van iets onaangenaam variëren tergend bitter 6. Ter compensatie voor variaties die niet kunnen worden verklaard door TAS2R38, werd de theorie naar voren gebracht dat het zou kunnen worden toegeschreven aan de dichtheid van FP op de tong 4. Als smaak onderzoek vorderde, de field was verdeeld in twee scholen van denken rond deze theorie over de rol van FP en bittere smaak gevoeligheid. Hoewel veel studies bevestigd de oorspronkelijke bewering dat FP dichtheid is een factor in PROP gevoeligheden 4,6,12,13, is er een kleine, maar belangrijke contingency dat is bewijs gevonden om het te weerleggen, het melden van een onvermogen om de rol 10 te repliceren, 14,15,16. Delwiche et al. (2001) gewaarschuwd dat de trend is zeer variabel; FP dichtheid niet gelijkmatig gehouden voor verschillen in gevoeligheid bitterheid over onderwerpen, en was slechts aantoonbaar voor patiënten met minstens een matige gevoeligheid om het faillissement van 7. Naast het gebruik van de minder strikt gedefinieerde Miller &amp; Reedy methode voor het kwantificeren FP, is het belangrijk op te merken dat met uitzondering van de Beaver Dam Offspring Study 15 uitgevoerd door Fischer et al., De meeste bovengenoemde studies had kleine steekproef groottes die ook kan bijdragen tot inconsistente bevindingende rol van FP smaak. Kortom, in Miller &amp; Reedy&#39;s rudimentaire methodologie papier (1990), de auteurs gekleurd tongen blauw te kwantificeren FP omdat FP blijven roze terwijl filiform papillen absorberen de kleurstof en blauw. Ze geclassificeerd FP als &quot;afgeronde roze structuren ongeveer 0,5 mm in diameter&quot; 2. Hoewel de auteurs geadviseerd dat voordat u deze methode voor het verdere analytische werk, FP kenmerken moeten meer strikt omschreven en geconcludeerd dat de variatie die al in de literatuur opgemerkt 2, &quot;zou kunnen worden toegeschreven aan verschillende onderwerp bevolking, verschillende methoden, en de verschillende onderzoekers worden&quot; hun onderzoek heeft geleid tot de algemeen aanvaarde kenmerken die FP zijn rond 17,18, large 2, roze of lichter gekleurd 2 en verhoogde 4. Op het eerste gezicht, deze kenmerken lijken zeer ongecompliceerd. In de Genetica van de Smaak Lab (GoT Lab of Lab), het gebruik van de ontmoetinghod werd bemoeilijkt door individuele pogingen van de scorers &#39;aan de kwalificatie en prioritering van het belang van de bovenstaande kenmerken bij sommige, maar niet alle, van de kenmerken aanwezig waren. Deze complicaties opgenomen kleine papillen dat roze in het midden van veel grotere papillen verscheen; de hele tong absorberen van de blauwe kleurstof en zodoende indeling op basis van de kleur variatie; langwerpige papillen plaats van rond; en tongen zonder hoogteverschil weergegeven, die alle bijgedragen tot scorers rapportage breed gevarieerd FP tellingen van dezelfde afbeelding. Deze variaties in de analyse leidde ons naar de literatuur herzien om de subjectiviteit te wijzen, uitzonderingen te identificeren aan de algemeen aanvaarde FP kenmerken en uiteindelijk bedenken een protocol om nauwkeurig en objectief te definiëren en te scoren FP. Eerst wordt FP vorm beschreven in de literatuur als een afgeronde, paddestoel-achtige structuur 17,18. Echter, opmerkelijke uitzonderingionen genoemd. Miller benadrukt dat de term &quot;fungiform&quot; is een verkeerde benaming en dat veel FP niet paddestoelvormige maar kan sterk variëren in grootte en morfologie 18. Melis et al. (2013) beschreef ook een aantal papillen die werden beschouwd &quot;vervormd&quot;, waar de FP diameter in een richting ten minste twee standaardafwijkingen langer dan in de andere richting 19. Bovendien Cheng &amp; Robinson vond dat bij het ​​geven van FP door kleuring, zij varieerden van afgeplatte tot langwerpig in uiterlijk 20. Wijzend op de bovenstaande uitzonderingen, de karakterisering van een FP zijn rond en paddestoelvormige verschijnt ook een definitie te beperken. Ten tweede wordt FP kleuren beschreven als &quot;roze cirkels tegen een blauwe achtergrond&quot; 7 na het kleuren van de tong met blauwe kleurstof. Hoewel vlekken lichter was de meest consistente criterium van FP in de hele literatuur was het nog niet een uniform qualifier. Cheng &amp;<html> ; Robinson opgemerkt dat FP waren niet altijd licht gekleurd, waardoor identificatie moeilijk en onzeker 20. Het blijkt dan dat tongen absorberen kleurstof anders en terwijl het contrast is duidelijk op vele tongen, sommige worden volledig blauw met geen onderscheid terwijl anderen onmiddellijk verliezen elk spoor van blauwe kleurstof 21. Het derde kenmerk, FP size was redelijk consistent onder papers, variërend van 0,5 mm tot 0,97 mm 6,18. In de literatuur Miller opgemerkt dat er twee groottebereiken papillen op het dorsale anterior van de tong. De papillae met grotere diameters waren voornamelijk fungiform en kegelvormige papillen, terwijl de papillen met een kleinere diameter waren meestal draadvormige 18. Echter, met uitzondering van de Beaver Dam Offspring Study 21, kwam niet lijken te bepalen of een structuur met OH in de literatuur, maar was voorzien papillae reeds als &quot;fungiform&quot;. _content &quot;&gt; Tot slot, de hoogte wordt genoemd als de vierde KP karakteristieke 4 al Miller wees erop dat onderscheid tussen filiform en fungiform papillen wordt moeilijk wanneer het gebruik van deze criteria in de buurt van de rand van de tong. Hij gaf twee voorbeelden van FP die sterk variëren in hoogte, waarvan een 0,8 mm hoog, terwijl andere minder dan 0,1 mm in hoogte, maar hadden nog steeds twee proeven poriën die duidelijk waargenomen 18. Deze waarneming was toegepast en bevestigd Shahbake et al. 4 Deze definities en uitzonderingen vermeld tonen dat het veld smaak lang erkend dat de inconsistentie in karakteriseren FP en de tekortkomingen van de gangbare protocol van Miller &amp; Reedy. Inderdaad, Miller &amp; Reedy spoorde het veld om de kenmerken van de FP 2 verder te definiëren. Onze hypothese was dat scorers gaven verschillende gewicht aan de kenmerken en anders prioriteren hun belang bij de papillae niet elke criterium, zoals wanneer een papilla was groot en paddestoelvormige ontmoeten, maar gekleurd blauw. Er werd geredeneerd dat de onderzoekers van de eerder gepubliceerde studies waarschijnlijk hetzelfde deed die in combinatie met kleine steekproeven, kan verantwoordelijk zijn voor de verschillende resultaten die uit het gebruik van deze methode. De GoT Lab gericht deze kloof in FP methodologie door het ontwikkelen van een richtlijn die elk kenmerk definieert het gebruik van objectieve metingen en prioriteert de kenmerken aan te geven welke voorrang heeft in de analyse. Deze methode is een dichotome sleutel met heldere en duidelijke kenmerken van FP om nauwkeurige en herhaalbare telt van digitale foto&#39;s van de tong zorgen voor de Denver papillen Protocol (DPP). DPP is een voorgestelde methode om de eerder gebruikte Miller &amp; Reedy methode, waardoor het verwijderen van individuele interpretatie en zorgen voor een meer consistente resultaten bij het analyseren van FP dichtheid te standaardiseren. Door dit te doen, kan DPP worden gebruikt om meer vertrouwen determine de rol van FP in de smaak. De tong beelden die van de proefpersonen werden geanalyseerd door de betrokkene onderzoekers (scoorders) van het Laboratorium die de echte onderwerpen van deze studie. Kern van de burger wetenschappers het Lab bestaat uit leden van de gemeenschap, variërend in leeftijd (jaar) van 16 tot medio jaren &#39;80. Een summatieve evaluatie rapport in opdracht van het museum in 2012 beschrijft burger wetenschappers als het hebben van een sterke interesse in de wetenschap en met tweederde heeft een diploma in een wetenschappelijke discipline 22 verdiend. Kandidaat burger wetenschappers zijn momenteel geworven via mond tot mond, moeten met succes te voltooien een interview proces met veteraan vrijwilligers bij het Museum, en ondergaan een proefperiode in permanente gezondheidszorg tentoonstelling van het museum, Expeditie Health, voordat ze de mogelijkheid om te solliciteren naar een functie in het Lab. Eenmaal geaccepteerd in het Lab, burger wetenschappers een 12-weekse training ondergaan om te worden gecertificeerd voor de menselijke onderwerp inschrijvens. Naar aanleiding van deze certificering, zijn ze in staat om modules voor opleidingen op diverse technieken in het Lab (bv papillen tellen, DNA-extractie) en de volgende bijkomende verklaringen en regelmatige kwaliteitscontrole maatregelen, deze burger wetenschappers hebben de mogelijkheid om actief deel te nemen in de data-analyse. Citizen wetenschappers vrijwillig hun tijd en worden niet vergoed voor hun bijdragen aan het museum.

<table><tbody><tr><td>Image J</td><td>National Institutes of Health</td><td><a href="http://rsb.info.nih.gov/ij">http://rsb.info.nih.gov/ij</a></td><td></td></tr><tr><td>Food dye, Deep Blue Shade</td><td>Esco</td><td>http://escofoods.com/blue-food-coloring.html</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Rayon Tipped OB/GYN Applicators</td><td>Puritan</td><td>25-808 1PR</td><td></td></tr><tr><td>Grade 1 Filter Paper</td><td>Whatman</td><td>Whatman No.: 1001-325</td><td></td></tr><tr><td>Coolpix P100 (10.3 megapixels) and P500 (12.1 megapixels)</td><td>Nikon</td><td>http://imaging.nikon.com/lineup/coolpix/</td><td>geen van de modellen lijkt nog beschikbaar te zijn op de website</td></tr><tr><td>Paper Hand Towels</td><td>Kleenex</td><td>https://www.kleenex.com/HandTowelsDetail.aspx</td><td></td></tr></tbody></table>

denver papillen protocol voor objectieve analyse van fungiform papillen

Denver Papillae Protocol for Objective Analysis of Fungiform Papillae

Het doel van de Denver papillen protocol is om een ​​dichotome sleutel te gebruiken om te definiëren en prioriteren van de kenmerken van fungiform papillen (FP) om consistente scoren tussen de scorers waarborgen. Dit protocol bouwt off van een behoefte die is ontstaan ​​uit de laatste twee decennia van de smaak onderzoek met behulp van FP als een proxy voor de smaak porie dichtheid. FP dichtheid is van oudsher geanalyseerd met behulp van Miller &amp; Reedy&#39;s 1990 karakteriseringen van hun morfologie: rond, gekleurd lichter, groot en verhoogde. In dit werk, de auteurs gewaarschuwd dat strengere definities van FP morfologie moest worden geschetst. Ondanks deze oproep tot actie, heeft de follow-up literatuur schaars geweest, met de meeste studies blijven Miller &amp; Reedy originele werk citeren. Bijgevolg hebben FP rapporten dichtheid zeer variabel geweest en, in combinatie met kleine steekproeven, kan bijdragen aan de afwijkende conclusies over de rol van de FP in smaak gevoeligheid. De Genetica van de Smaak Lab onderzocht deze schijnbare inconconsistentie in het tellen en vond dat scorers individueel werden prioriteit het belang van deze kenmerken anders en had geen leidraad voor wanneer een papilla had enkele, maar niet alle, van de gerapporteerde kwaliteiten van FP. Het resultaat van deze subjectiviteit is zeer variabel FP tellingen van het beeld hetzelfde tong. De Denver papillen protocol is ontwikkeld om deze consequentie te lossen door het gebruik van een dichotome sleutel die verder definieert en geeft prioriteit aan het belang van de kenmerken naar voren gebracht door Miller &amp; Reedy. De voorgestelde methode zou kunnen helpen creëren van een standaard manier om FP te kwantificeren voor onderzoekers op het gebied van smaak en voedingswaarde studies.

Hier wordt een representatieve foto gescoord door twee individuele scorers bij gebruik van de algemeen gebruikte Miller &amp; Reedy methodologie voor FP identificatie gebaseerd op het gebied van normen rond, groot, roze of gebeitst lichter en verheven, en dan is het dezelfde foto gescoord door twee scorers met behulp van DPP. De getoonde tellingen zijn representatief voor de grote variatie waargenomen met de oorspronkelijke methode in vergelijking met de lagere variantie bij DPP. <img alt="Figuur 4" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig4.jpg" /> Figuur 4:. Miller &amp; Reedy kwantificering versus DPP Kwantificatie De afbeelding links is vertegenwoordiger van tellingen twee scorers &#39;met behulp van de Miller &amp; Reedy Method. De afbeelding rechts vertegenwoordigt twee tellingen scorers &#39;met DPP. Rood is topscorer 1, Geel is topscorer 2, Groen is scorers 1 &amp; 2. Statistische betrouwbaarheid van DPP was eerder onderzocht met behulp van een gemengd lineair model van de variabiliteit 10 beoordelen. In het kort, om gegevens aan de DPP rol speelt in de consistentie van scores beoordelen genereren, werden vijftien beelden tweemaal scoorde. In de eerste partij van de scores, DPP naïeve scorers gebruikte Miller &amp; Reedy methode 2. De scorers werden vervolgens getraind om DPP gebruikt en de afbeeldingen werden afzonderlijk rescored zonder de laatste consensusfase in paragraaf 2.7 gedetailleerd Kwaliteitscontrole (figuur 5) beschreven. De FP score dataset werd vervolgens gebruikt in de gemengde model om de gecombineerde verschillen als gevolg van protocol (figuur 6), binnen-scorer variabiliteit en de interactie tussen de twee beoordelen. Dit model toonde een significant verschil in het scoren bij gebruik van de Miller &amp; Reedy methode vergeleken met DPP (p-waarde van &lt;1 x 10 -6) met DPP leidt tot een groter aantal van 6,99 (SE = 0,99); 5,2% van de variabiliteit in de score was te wijten aan training, 25,9% als gevolg van scorer, en de resterende als gevolgde variabiliteit specifiek voor de afbeelding 10. Vervolgens, genereren van gegevens binnen-scorer variabiliteit bepalen der- tig beelden in willekeurige volgorde werden gescoord door 11 individuen. Buiten medeweten van scorers, deze reeks beelden opgenomen drie beelden die werden herhaald. We zagen een drastische verschil in score variabiliteit verschillende beelden te vergelijken versusrepeated beelden. <img alt="Figuur 5" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig5.jpg" /> Figuur 5:. DPP-Naïve vs bericht DPP Training Panels zorgen boxplots van reviewer scores voor 15 foto&#39;s voor en na Denver papillen Protocol training. Voor elke boxplot, een ingevulde cirkel geeft het gemiddelde, terwijl een open cirkel wijzen op een uitschieter. <img alt="Figuur 6" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig6.jpg" /> Figuur 6:. Verandering in Scorer Variantie De grijze vertegenwoordigt tHij variantie voor individuele scorers voorafgaand aan DPP training. Black is hetzelfde scorer na de DPP training.

Hier presenteren we een protocol om fungiform papilla dichtheid van digitale foto&#39;s te meten. Deze methode bouwt prioritering en objectieve kenmerk metrics in de oorspronkelijke beschrijvende werk fungiform papillen door Miller &amp; Reedy (1990).

Denver papillen Protocol voor objectieve analyse van Fungiform papillen

The goal of the Denver Papillae Protocol is to use a dichotomous key to define and prioritize the characteristics of fungiform papillae (FP) to ensure ...

Het algemene doel van deze procedure is om schimmelvormige papillen op een consistente wijze te kwantificeren tussen verschillende scores en laboratoria door middel van een dichotomische sleutel. Dit wordt bereikt door eerst de tong van het subject blauw te kleuren met een voedingskleurstof en een filterpapier met een uitsparing van één centimeter op de tong te bevestigen. De tweede stap is het maken van een hoogwaardige detailopname van de tong van het subject.Vervolgens gebruikt de beoordelaar de dichotomische sleutel om de vorm, grootte, kleur en verhoging van de kandidaat-papil te onderzoeken. Een papil die niet amorf is, ten minste 0,5 millimeter rozer is dan de achtergrond en niet verzonken is, wordt gescoord als een fungi-vormige papil. De laatste stap is om de tellingen tussen twee scores te vergelijken en ervoor te zorgen dat de tellingen binnen 10% van elkaar liggen.Uiteindelijk wordt het Denver Papillae-protocol gebruikt om de kenmerken van schimmelvormige papillen te definiëren en te prioriteren, om zo een consistente telling over verschillende scores en laboratoria te waarborgen. Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden, zoals het Miller en Read-protocol, is dat het de subjectiviteit van scores vermindert bij het kwantificeren van schimmelvormige papillen. Dit wordt bereikt door een heldere definitie van elk kenmerk en door het gebruik van een dichotomische sleutel om ervoor te zorgen dat alle structuren die als schimmelvormige papillen worden geclassificeerd, aan elk van de criteria voldoen.Deze methode helpt bij het beantwoorden van kernvragen binnen het vakgebied van de smaak, zoals het definiëren van de rol die de dichtheid van fungi formm-papillen, indien aanwezig, speelt bij de smaakperceptie. We kwamen voor het eerst op het idee voor deze methode toen onze burgerwetenschappers fungi formm-papillen telden volgens de methode van Miller en Reading, waarbij we merkten dat de tellingen sterk varieerden voor dezelfde tongafbeelding. Gesprekken met de beoordelaars onthulden dat zij kenmerken verschillend prioriteerden en varieerden in de wijze waarop zij papillen telden die aan sommige, maar niet aan alle vereisten voldeden.De procedure wordt gedemonstreerd door Rudy Torres, een vrijwillige burgerwetenschapper in het laboratorium voor de genetica van smaak. Om de proefpersonen voor te bereiden op deze procedure, laat u hen een foto zien van de juiste houding en hoe het vastgelegde beeld eruit zal zien. Instrueer de proefpersoon om haar tong droog te maken met een papieren handdoek en de tong uit de mond te laten steken.Breng met een steriele rayon-applicator met een tip van één inch ongeveer drie milliliter blauwe voedingskleurstof met een concentratie van 1:36 aan op de tongpunt. Instrueer de proefpersoon om de tong terug in de mond te brengen en te slikken om overtollige kleurstof te verwijderen. Instrueer de proefpersoon vervolgens om de houding aan te nemen zoals getoond op de foto, met de kin op de handen en de ellebogen voor stabiliteit op een tafel ondersteund.Vraag de proefpersoon om haar tong tot een comfortabele afstand uit te steken en deze voorzichtig tussen de tanden te klemmen. Plak een stuk filterpapier van 2,5 centimeter, voorzien van een uitgestanste cirkelvormige opening met een diameter van 10 millimeter, op de punt van de binnenzijde van de linkerkant van de tong. Plaats een hoogwaardige digitale compactcamera naast de middellijn op een statief voor stabiliteit.Maak met de macro-instelling ten minste drie close-up opnames van de tong, waarbij de volledige cirkelvormige uitsnijding van 10 millimeter wordt vastgelegd om visualisatie van alle schimmels, vorm, papillen of FP binnen dat gebied te garanderen. Zoom in tot de volledige uitsnijding is gefotografeerd, terwijl u binnen het aanbevolen zoombereik van de camera blijft. Zorg ervoor dat het vlak van de cameralens parallel loopt aan het vlak van de tong en dat de uitsnijding cirkelvormig op de foto verschijnt.In plaats van langwerpige overzichtsfoto's, moet worden gegarandeerd dat de foto's van hoge kwaliteit zijn en bruikbaar zijn voor het tellen. Begin deze procedure door de gemaakte foto's van de tong van hetzelfde subject naar de computer te uploaden. Selecteer er slechts één voor verdere analyse op basis van een heldere definitie tussen de structuren op de tong bij de hoogste zoom en de minst vervormde hoek, zodat de tong breed en vlak naar de camera is gericht.Open de geselecteerde ruwe afbeelding in de opensource software ImageJ. Klik op plugins en scrol in het vervolgkeuzemenu naar analyze en klik op cell counter. Wanneer de cell counter opent, klikt u op initialize om de afbeelding aan de cell counter te koppelen. Gebruik een standaardvergroting van 50% voor consistentie tussen de scores en voor gebruik in opeenvolgende stappen.Om de fp te scoren, verplaatst u deze afbeelding naar de linkerkant van het scherm, naast de celteller. Deze afbeelding wordt aangeduid als Kopie a. Open een tweede kopie van de ruwe afbeelding om de diameters van de papillen die worden gekwantificeerd te meten. Verplaats deze kopie naar de rechterkant van het scherm, zodat de twee kopieën niet per ongeluk worden verward.De tweede afbeelding wordt aangeduid als kopie B. Zoom in of uit naar eigen voorkeur gedurende het hele scoreproces. Gebruik de lijngereedschap op kopie B. Zoom zoveel mogelijk in als nodig is om nauwkeurig een diameter in elke gewenste hoek over de binnenste cirkel van 10 millimeter van het filterpapier te trekken en klik op 'analyze and set scale'. Vul de bekende afstand in als 10.Verifieer of de schaal correct is door een alternatieve hoek te meten en zorg dat de diameter tussen 9,8 en 10,2 millimeter ligt. Het Denver PAPALE-protocol of DPP houdt rekening met de vorm, kleur, grootte en recessie van elke kandidaat-papil om te bepalen of het een fp is. De procedure voor het trainen van scores voor het gebruik van de dichotomische sleutel wordt niet in deze video getoond, maar is beschikbaar in de bijbehorende protocoltekst om te beginnen met de scoring.Bepaal bij 50% zoom of de kandidaat-papil amorf of vormloos is. Kijk of er een algemeen erkende geometrische vorm aanwezig is, zoals ovaal, kuboïdaal of rond. Als er geen geometrische vorm is, ga dan naar het venster van de celteller en klik op type één.Kopie A.Klik op de kandidaat-papil om deze als amorf en niet als een fp te markeren. Door in deze en volgende stappen op typen één tot en met vier te klikken, weten de beoordelaars dat ze alle kandidaat-papillen hebben behandeld en kan worden gecategoriseerd welke regel werd geschonden bij het verwerpen van een structuur. Als de kandidaat-papil een geometrische vorm heeft, ga dan door naar de volgende stap om de kleur te onderzoeken, raadpleeg kopie A en bepaal of er sprake is van kleurdifferentiatie over het tongoppervlak.Als er kleurdifferentiatie is, maar de kandidaatpapil blauw is en de omringende papillen lichter zijn, ga dan naar het venster van de celsteller en klik op type twee op de celsteller van kopie A. Klik op de kandidaat om deze te markeren als twee blauw en niet als een fp. Als er geen kleurdifferentiatie is, of als een deel van de kandidaatpapil roze is gebleven of lichter is gekleurd, ga dan door naar de volgende stap voor de bepaling van de grootte. Zoom met kopie B in op de afstand waarbij de omtrek van de kandidaatpapil comfortabel zichtbaar is.Klik op de lijntool en meet de langste dimensie van de kandidaat-papil. Klik, analyseer en bepaal vervolgens of de gemeten lengte 0,499 millimeter of minder is. Meet nogmaals om de nauwkeurigheid te waarborgen.Als de maat nog steeds 0,499 millimeter of minder is, klik dan op type drie in het venster van de celsteller en klik vervolgens op de kandidaat-papil om deze als te klein en niet als een fp te markeren. Als de gemeten lengte 0,5 millimeter of meer is, ga dan verder met het onderzoeken van de recessie met behulp van copy a om vast te stellen of de kandidaat-papil ofwel een uniforme hoogte heeft ten opzichte van de rest van de tong, of verhoogd is. Als de papil zich in een spleet bevindt, bepaal dan de hoogte in vergelijking met de andere structuren in de spleet, en niet ten opzichte van het tongoppervlak.Als de papil lager is dan de omliggende papillen, klik dan op type vier in het venster van de celsteller en klik op kopie A op de kandidaat-papil om deze te markeren als teruggetrokken en niet als een fp. Als de kandidaat-papil een uniforme hoogte heeft ten opzichte van de rest van de tong of verheven is, klik dan op type vijf en markeer dat dit een fp is. Dit totaal van type vijf is de ruwe FP-score.Noteer de ruwe FP-score in een notitieboek om een kopie te bewaren, klik op 'export image' in het venster van de celteller en sla dit op volgens het gewenste naamgevingssysteem van het laboratorium. Hiermee kan kopie A in de toekomst worden geopend, waarbij de gekleurde markeringen van type één tot vijf behouden blijven. De ruwe FP-score voor kwaliteitscontrole wordt hiermee niet opgeslagen.Elke foto moet door twee personen afzonderlijk worden gescoord en de scores moeten worden vergeleken. Als de hogere ruwe FP-score binnen 10% van het gemiddelde van de lagere ruwe FP-score ligt, vormen de twee scores samen een consensus FP-score. Als de twee ruwe FP-scores meer dan 10% verschillen, moeten beide gescorede foto's op het scherm worden geplaatst.Gebruik tellertypes één tot en met vier om te helpen bij de bespreking van discrepanties en om een definitieve consensusscore vast te stellen. Als er geen consensus kan worden bereikt, wordt een derde score opgevraagd om de afbeelding te scoren, gevolgd door overleg met de andere twee scores. Een representatieve foto werd eerst gescoord door twee individuele beoordelaars met behulp van de gangbare Miller- en 3D-methodologie voor FP-identificatie.Dezelfde foto werd vervolgens door twee beoordelaars gescoord met behulp van de DPP. Rood is beoordelaar één, geel is beoordelaar twee en groen zijn beoordelaar één en twee. De aantallen zijn representatief voor de hoge variantie die werd waargenomen bij het gebruik van de oorspronkelijke methode, vergeleken met de lagere variantie bij de DPPA-vergelijking van scores van varianten voor 11 individuele scores.De pre-DPP-training, weergegeven in grijs, en de post-DPP-training, weergegeven in zwart, onthulden een significante afname in de variantiescore na de DPP-training. Zodra deze techniek onder de knie is, kan deze in minder dan vijf minuten per afbeelding worden uitgevoerd. Bij het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om regelmatig pauzes te nemen om een frisse blik op elke foto te waarborgen en ervoor te zorgen dat elke kandidaat-papil wordt waargenomen.Na het bekijken van deze video zou u een goed inzicht moeten hebben in hoe u schimmels uit papillen op een consistente manier kunt kwantificeren met behulp van een dichotomische sleutel.

denver-papillae-protocol-for-objective-analysis-of-fungiform-papillae

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

Kennis van de moleculaire mechanismen die ten grondslag liggen smaak transductie heeft onlangs genoten van belangrijke vooruitgang, vooral door het gebruik van dierlijke modellen. Echter, de grote verscheidenheid in smaak sensitiviteit en specificiteit bij zoogdieren garandeert studies in menselijk weefsel. Beschrijven we een biopsie techniek om levende cellen te verzamelen smaak van de papillen op de menselijke tong.

Techniek om Fungiform (smaak) papillen verzamelen van Human Tongue

Ons doel was om een ​​reproduceerbare protocol voor het isoleren en onderhouden van lange termijn culturen van menselijke fungiform smaak papillen cellen te ontwikkelen. Cellen uit menselijk fungiform papillen, verkregen uit biopsie werden met succes gehandhaafd in cultuur voor meer dan acht passages (12 maanden) zonder verlies van levensvatbaarheid.

Isolatie en Cultuur van de Mens Fungiform Smaak papillen Cellen

In this video, we describe the isolation of circumvallate papillae (CVP) epithelium from a murine tongue.

Isolation of Circumvallate Papillae (CVP) Epithelium from Mouse Model: An Enzymatic Procedure to Separate CVP Epithelium from Mouse Tongue

Orale chemoreceptie van vetzuren en de associatie met een dieet en vet voedsel voorkeuren kan de identificatie van mechanismen die betrokken zijn bij de ontwikkeling van obesitas en waarom veranderingen in het dieet kan moeilijk zijn voor veel mensen zijn in staat.

Meten Oral Fatty Acid Drempels, Fat Perception, vet voedsel Liking en papillen Dichtheid bij de mens

Studies van gehemelte ontwikkeling worden gemotiveerd door de incidentie van gespleten gehemelte, een aangeboren afwijking die een enorme gezondheid last oplegt en kunnen verlaten blijvende verminking. We tonen hier een techniek om cultuur palatini die kunnen worden gebruikt om verschillende signaalwegen betrokken bij palatinale ontwikkeling en fusie bestuderen.

Wijze van Studeren Palatal Fusion met statische Organ Cultuur

Veranderingen in de mondelinge microbiome tijdens jeugd zijn van toenemende belangstelling. Vergelijking van verschillende microbiome studies blijkt een gebrek aan gestandaardiseerde bemonstering protocollen. Beperkte ruimte maakt het geluid subgingivale Sulcus (hersenanatomie) van kinderen uitdagende bemonstering. Papieren punt bemonstering wordt hier in detail gepresenteerd als de methode van keuze voor dit gebied.

Mondelinge Biofilm bemonstering voor analyse van de Microbiome bij gezonde kinderen

Dit protocol meet menselijke smaak reacties en omvat een korte anatomische beoordeling, een korte smaaktest en een validatiemethode wordt gebruikt die met behulp van de certificaathouder gerapporteerde sensatie en smaak receptor genotype.

Smaak examen: Een korte en gevalideerde Test

Dit artikel beschrijft methoden voor weefselvoorbereiding, kleuring en analyse van hele fungiforme, circumvallaat- en gehemelte-smaakpapillen die consequent hele en intacte smaakpapillen opleveren (inclusief de zenuwvezels die ze innerveren) en de relaties tussen structuren in smaakpapillen en de omliggende papilla onderhouden.

Whole-Mount kleuring, visualisatie en analyse van fungiforme, circumvallaat en gehemelte smaakpapillen

Dit artikel beschrijft in detail een protocol bij electroporate in utero de cerebrale cortex en de hippocampus bij E14.5 bij muizen. We tonen ook aan dat dit een waardevolle methode om dendrieten en stekels te bestuderen in deze twee cerebrale regio's.

Visualisatie en genetische manipulatie van dendrieten en stekels in de muis Cerebral cortex en de hippocampus met behulp van<em&gt; In utero</em&gt; Elektroporatie

Menselijke neuroprogenitor cellen (NPC) werden uitgebreid onder uitdijende omstandigheden. NPCs werden gedifferentieerd in neuron-rijke culturen in aanwezigheid van een combinatie van neurotrofinen. Neuronale merkers werden gedetecteerd door immunofluorescentie kleuring. Om een ​​zuivere populatie van neuronen te isoleren, werden NPCs gedifferentieerd PEN membraan glijbanen en lasermicrodissectie werd uitgevoerd.

Lasermicrodissectie van neuronen van Gedifferentieerd Human Neuroprogenitor Cellen in Cultuur

Leer het Denver Papillen Protocol voor objectieve analyse van fungiforme papillen met behulp van een dichotome sleutel. Deze methode standaardiseert tellingen en vermindert subjectiviteit in smaakonderzoek.

Denver papillen Protocol voor objectieve analyse van Fungiform papillen

Meer video's verkennen