8 juni 2015
Omgevingsverrijking voor muizen vereist een complexe en uitdagende opstelling, evenals uitgebreide veehouderij- en hanteringstechnieken om robuuste metabolische en anti-kankereffecten bij de muizen te garanderen. Dit protocol geeft gedetailleerde procedures om de bovengenoemde effecten bij muizen te reproduceren.
Het doel van deze procedure is om details te verstrekken die nodig zijn voor huisvesting en onderhoud van dieren in een omgevingsverrijking, die robuuste metabolische en anti-kanker effecten produceert bij muizen. Dit wordt bereikt door eerst de verrijkte huisvestingsomgeving op te zetten in een grote bak met objecten zoals wielen, loopbronnen, hutjes, buizen, boomstammen en kooien. De tweede stap is om de dieren te introduceren in de nieuwe omgeving.
Vervolgens wordt de verrijkte omgeving onderhouden door de locatie en het type objecten in de bak te veranderen en regelmatig vers voedsel en water te verstrekken. De laatste stap is om de objecten die in de omgeving zijn vervangen schoon te maken, zodat ze klaar zijn om in de toekomst te worden uitgewisseld. Uiteindelijk, bij euthanasie en analyse van dierlijk weefsel.
Deze techniek van omgevingsverrijking vertoont verminderde adipositas, verhoogde energieverbruikweerstand tegen door dieet geïnduceerde obesitas en een fenotypische switch van wit naar bruin vet door activering van de hypothalamische sym neurale adipocyten-as. Deze methode beschrijft details over de opzet van een verrijkte omgeving voor laboratoriumknaagdieren die de weerstand tegen kanker en metabole ziekten verbetert. Eerst spuit en veegt u de binnenkant van een grote verrijkingsbak af met sporicidin-desinfectiemiddelen.
Volg de instructies van de fabrikant en veeg de bak af met 30% ethanol of met water doorweekt papier, handdoek en droog met een papieren handdoek om elke geur van het vorige desinfectiemiddel te verwijderen. Gebruik plastic buizen iglo's met SOR type wielen en andere verschillende plastic hutje-achtige speelgoedjes in de verrijkte omgeving. Was dit speelgoed zoals eerder, gebruik metalen loopwielen die eerder zijn gewassen.
Als de verf op het wiel begint te vervagen zodat het wiel lawaaierig wordt wanneer de dieren erop lopen, breng dan een kleine hoeveelheid petroleumgelei aan op de plek waar het wiel en de as elkaar ontmoeten. Gebruik houten boomstammen in de verrijkte omgeving. Maak de boomstammen schoon door met de hand eventuele strooisel of ander puin te verwijderen.
Steriliseer vervolgens de boomstammen door ze te autoclaven in een droge cyclus of textielcyclus, die een temperatuur van 121 graden Celsius gedurende 15 minuten bereikt. Gebruik schone voerkooien tussen de afmetingen van 29 centimeter bij 18 centimeter bij 12,5 centimeter en 30,5 centimeter bij 19 centimeter bij 14 centimeter om te houden. Een voer- en drinkdraadrek snijdt een gat van minimaal vijf centimeter in diameter uit de voorkant onderkant van de kooi voor de muizen om binnen te komen en te gaan.
Om te beginnen. Voor een kwart inch maïskolbevoer in de schone tot grote verrijkingsbak tot een diepte van twee tot 2,5 centimeter. Plaats vervolgens twee of drie van de vorige aorta clave boomstammen in een hoek van de bak om een gebied van ongeveer 1.225 centimeter vierkant af te zetten.
Plaats vervolgens in het door de boomstammen afgescheiden gebied drie lijmen met SOR wielen erop. Zorg ervoor dat de wielen de ruimte hebben om vrij te draaien. Verbind nu het plastic buiswerk zodat meerdere armen uit het centrale verbindingsstuk vertrekken.
Plaats dit buiswerk in het midden van de bak op twee hoeken van de bak. Plaats een voerkooi gevuld met hetzelfde beddengoed als de bak. Het gat aan de voorkant van elke voerkooi moet naar het midden van de bak kijken.
Plaats een voedsel- en waterdraad met muizenvoer op elke voerkooi. Voeg de waterfles toe. Plaats een wiel van 11,5 centimeter, een wiel van 20,5 centimeter en een wiel van 28 centimeter in de bak.
Plaats vervolgens vier tot vijf meer plastic hutje-achtige speelgoedjes of tunnels door de verrijkingsbak. Bedek de bak met micro-isolatiefilterpapier en gebruik binderclips om het filterpapier aan de bak te bevestigen. Wanneer dieren in de verrijkingsbak worden geplaatst vanuit een standaardkooi, plaats de kooi dan op zijn zij in de bak zodat de dieren vrij kunnen bewegen van de standaardkooi naar de verrijkingsbak.
Staat niet toe dat het nestmateriaal wordt overgebracht naar de verrijkingsbak. 10 tot 20 dieren met dezelfde leeftijd, geslacht en genetische stam kunnen tegelijkertijd in de verrijkte omgeving worden gehuisvest. Zorg ervoor dat de dieren dagelijks worden geobserveerd op tekenen van ziekte of stress.
Indien nodig, behandel de dieren voorzichtig om hun conditie twee keer per week verder te inspecteren. Controleer de voedsel- en waterniveaus en zorg ervoor dat het voedsel en water de komende twee dagen meegaan. Maak ook de loopwielen en verrijkingsspeelgoed recht, zodat ze verspreid zijn en gemakkelijk kunnen worden gebruikt.
Vervang elke week alle vervuilde verrijkingsartikelen, idealiter wanneer de muizen uit de omgeving worden verwijderd. Voor experimentele doeleinden, verwijder de voerkooien en draadrekken en vervang deze door schone kooien en rekken gevuld met vers voedsel. Vervang de waterflessen door schone waterflessen.
Herschik de verrijkingsartikelen op een cruciale manier zodat de belangrijkste aspecten van de opstelling behouden blijven, maar de verrijkingsartikelen anders worden geplaatst.Controleer de rest van de grote verrijkingsbak en maak hem schoon indien nodig. Door elke twee weken het vuile strooisel te scheppen en nieuw schoon beddengoed te verspreiden.
Bij het uitvoeren van het wekelijkse veehouderij, was de speelgoedjes met de hand of stuur ze door de kooiwas. Elke maand maakt u het grootste deel van het strooisel schoon door verrijkingsspeelgoed en voerkooien te verwijderen en het strooisel te scheppen. Vervang door vers strooisel en zorg ervoor dat er overal in de kooi twee centimeter beddengoed is, eens in de drie maanden of zoals vereist door uw dierprotocol, verwijder al het beddengoed en speelgoed en desinfecteer de verrijkingsbak door te wassen zoals eerder. Houd controlegroepdieren op dezelfde 12 uur lichtdonkercyclus.
Aangezien de muizen in de verrijkte omgeving in micro-
Dit protocol beschrijft de procedures voor het creëren van een verrijkte omgeving voor muizen, wat de metabole gezondheid bevordert en het risico op kanker vermindert. Het geeft gedetailleerde instructies voor de inrichting, het onderhoud en de monitoring van de omgeving om optimale omstandigheden voor de dieren te waarborgen.
Gestandaardiseerde protocollen voor omgevingsverrijking voor laboratoriummuizen zijn essentieel voor het genereren van reproduceerbare metabole en oncologische fenotypes in preklinisch onderzoek. Gecontroleerde verrijking maakt robuuste hypothesetoetsing mogelijk met betrekking tot energieverbruik, adipositeit en tumobiologie, wat een directe impact heeft op targetvalidatie en mechanistische risicoreductie. Een consistente implementatie ondersteunt de translationele continuïteit en het vertrouwen in de portfolio van metabole en kanker-modellen.
Protocollen voor omgevingsverrijking bevinden zich op het grensvlak van vroege ontdekking en de ontwikkeling van preklinische modellen, ter ondersteuning van zowel targetvalidatie als translationeel onderzoek.