Name: Eenvoudig en Computer-assisted Olfactorische testen voor Muizen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-15T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 40 s
Description: Leer een eenvoudige reukzintest voor muizen met computerondersteunde videonanalyse. Deze methode evalueert reukdiscriminatie, voorkeur en vermijdingsgedrag in een vertrouwde omgeving.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk wordt gefinancierd door de Swiss National Foundation (31_138429) en Synapsis Foundation voor de ondersteuning van onderzoek naar de ziekte van Alzheimer.

Alle dierlijke procedures het in overeenstemming zijn met de EU-Richtlijn 2010/63 / EU betreffende de bescherming van dieren die voor wetenschappelijke doeleinden worden gebruikt en zijn goedgekeurd door de lokale Animal Care Committee (kanton Fribourg, Zwitserland). 1. Dierlijke Voorbereiding <ol><li> Proefdieren <ol><li> Experimenten uitvoeren van mannelijke volwassen wildtype en transgene muizen (C57BL / 6 achtergrond) van 3-5 maanden. De drie groepen muizen overeen met wildtype nestgenoot controles (groep A, Jagged1 flox / flox 19) en twee voorwaardelijke KO muizenlijnen (groep B, en C Jagged1ncKO, Jagged1gcKO). </li><li> Huis muizen onder standaard laboratorium omstandigheden in een geventileerde ruimte, met een 12 hr gecontroleerde donker / licht-cyclus en zorgen voor voedsel en water ad libitum. </li></ol></li></ol> 2. Experimentele Setup <ol><li> Experimentele arena <ol><li> Voor de experimentele arena, gebruik dan een schone gesteriliseerde muis kooi (36 cm lengte x 20,5 cm breed x 13,5 cm hoog) (Figuur 1A). </li><li> Wijs elke muis aan een genummerde kooi met fris beddengoed, 3 cm hoog. Als kooien worden hergebruikt, zoals in de geur gevoeligheid test, de volgende maatregelen te nemen om kruisbesmetting tussen geuren en muizen te voorkomen. <ol><li> Markeer de waterzijde. </li><li> Reinig de smallere wanden van de kooien met twee tissuepapier besproeid met 70% ethanol, een voor elke zijde. </li><li> Stapel kooien volgens de genotype van de muizen en tijdelijk op te slaan onder een laminaire afzuigkap. </li></ol></li></ol></li><li> Camera <ol><li> Monteer een camera op een statief aangepast met het oog op 58 cm van de onderkant van de kooi (figuur 1A). Bevestig de positie van het statief en de kooi en bakenen met markeringen om de camera te centreren op de bovenkant van de kooi. </li><li> Record video&#39;s bij 320 pixels x 240 pixels, 15.08 frames per seconde als MOV-bestanden. </li></ol></li><li> Geuren <ol><li> Resuspendeer de scents, op indicatie, in het oplosmiddel waarin zij oplosbaar zijn. </li><li> Voor de voorkeur testen gebruik pindakaas. Resuspendeer de pindakaas pinda olie (10% w / v). </li><li> Ter vermijding testgebruik pure 2-methylboterzuur (2-MB) acid (98%). </li><li> Voor de gevoeligheidstest Gebruik female urine uit dezelfde muizenkolonie en achtergrond (C57BL / 6). <ol><li> Gemakshalve verzamelen van de urine 1-2 dagen voorafgaand aan het olfactorische proef. Restrain en houd de muis onder de kap met zijn buik boven de kooi net. Onder de kooi rooster plaatst een plastic petrischaal met de druppels urine te verzamelen. </li><li> Verzamel de urine van elk vrouwtje in een 1,5 ml buis en meng alle urinemonsters te normaliseren van variabiliteit tussen de dieren. Bewaar bij -20 ° C tot gebruik. </li><li> Op de dag van het experiment dooi urine en voer 4 verdunningen met tweemaal gedestilleerd water met een verdunningsfactor van 10 (1:10, 1: 100, 1: 1000, 1: 10.000). </li></ol></li></ol></li></ol>3. Olfactorische Testing Opmerking: In dit protocol geuren zijn bewust gekozen die worden gezien als sterke lokstoffen (pindakaas en vrouwelijke urine) of sterke afstotende (2-MB zuur) 15. Het is belangrijk de voorkeur en gevoeligheidstests aangename geuren voorafgaand voeren naar vermijdingstest om de mogelijkheid van enige interferentie met de olfactorische gedrag elimineren. Niettemin is het voor de eenvoud in dit document, voorkeur en vermijdingstest zullen beide worden beschreven in de perceptie testen. Elke behavioral sessie start met een gewenning fase. <ol><li> Gewenning Phase <ol><li> Plaats het dier in de schone toegewezen kooi en laat deze onderzoeken voor 5 min (Figuur 1B). Daar de omgeving van de experimentele kooi bekend aan de kooi, deze korte tijd genoeg om voor gewenning. </li><li> Als de gevoeligheid testen in één dag is voltooid, voert gewenning maar één keer voor de application van de hoogste verdunde geur. Als de gevoeligheid test op verschillende dagen wordt uitgevoerd, op elke dag een gewenning fase op een nieuwe, schone kooi nodig is. </li></ol></li><li> Perception Test <ol><li> Na gewenning, het activeren van de camera en onmiddellijk pipet 60 ul van de aangename geur (pindakaas) en 60 ul van de neutrale geur (leidingwater) op de tegenoverliggende wanden van de kooi op ongeveer 10 cm van de bodem (figuur 1C). </li><li> Laat de muis verken de geuren voor 2 min (figuur 1D). Daarna schakelt de camera uit. </li><li> Op dit moment, verder met de volgende muis vanaf de gewenning fase. Voer de vermijdingstest exact dezelfde wijze door toepassing van 60 pi van het afstotende geur (2-MB acid) en 60 pl water. </li></ol></li><li> Gevoeligheid-test <ol><li> Evalueer de aantrekkelijkheid drempel van mannelijke muizen met toenemende concentraties van vrouwelijke urine in de volgende volgorde: 1: 10.000; 1: 1000; 1: 100; 1:10 en pure urine. </li><li> Na gewenning, bloot elke muis met de hoogste verdunning gepipetteerd door de experimentator zoals eerder beschreven in 3.2.1. </li><li> Noteer de verkennende gedrag van de urine versus water, binnen een 2 min tijdsbestek op een video camera. Nadat alle muizen cohorten worden getest op de hoogste verdunning (1: 10.000), blootgesteld aan een hogere concentratie van urine, zoals hierboven aangegeven. </li></ol></li></ol> 4. Post-hoc gegevensanalyse Opmerking: Alle gedragstesten beschreven worden volgens de instructies data-analyse verwerkt post hoc. <ol><li> Open MOV Bestanden in ImageJ voor Windows-systemen <ol><li> Installeer Quick Time voor Java met behulp van de aangepaste instellingen van http://www.apple.com/quicktime/download. </li><li> Installeer de Quick Time plugin van de website ImageJ (http://rsb.info.nih.gov/ij/plugins/qt-capture.html). </li><li> Importeer de QTJava.zip (C: Program Files QuickTime QTSystem) in de bibliotheek extensometersion van ImageJ (.ImageJ jre lib ext). </li><li> Kopieer ook de QTJava.zip in de map plugins en hernoem het als QTJava.jar. </li><li> Installeer de zes scripts bevestigd in de map macro&#39;s (ImageJ plugins Macros). </li><li> Open ImageJ en compileren en uitvoeren van de Quick Time plugin, daarna dicht ImageJ. </li><li> Heropenen ImageJ en open het MOV-bestand via Bestand&gt; Importeren&gt; met Quick Time. </li></ol></li><li> Video Adjustment <ol><li> Zodra het videobestand wordt geopend in ImageJ, snijd de video om een ​​constante 2 min exploratie vanaf het moment de onderzoeker de geurstoffen is gepipetteerd in de kooi (T0) te verkrijgen. Identificeer het frame overeenkomt met de T0 en verwijder de vorige frames met stappen van 1 (ImageJ Image Stapels ToolsSlice remover). Gebruik hetzelfde commando om alle frames boven de 2 min exploratie verwijderen. </li><li> Zorg ervoor dat de kooi is gecentreerd en gebruik zo nodig de Afbeelding&gt; Transformatie&gt; opdracht Roteren aan te passen. </li></ol></li><li> Video Processing Opmerking: Video verwerking is volledig computerondersteund en maakt gebruik van macro commando&#39;s bij dit artikel. <ol><li> Om het gebied op de kooi van een 127 pixels x 218 pixels grootte beperken lopen de Stap 1 macro vanaf de Plugin&gt; Macro&#39;s&gt; Uitvoeren commando. Beweeg de vaste rechthoek over de kooi (Figuur 2, Stap 1). </li><li> Snijd de oppervlakte van de kooi op het gebied van belang (ROI) met de macro Stap 2 (Figuur 2, Stap 2). </li><li> Gebruik de Stap 3 macro om de muis afbeelding van de achtergrond te halen door het toewijzen van een drempel signaal, ontvlekken en filteren van het signaal variantie. De waarden in de Z-as grafiek geven de gemiddelde grijswaarden, die overeenkomt met de intensiteit van de muis schaduw zich binnen het ROI van de &quot;waterkamer&quot; tijdens de 2 min exploratie. Kopieer de resultaten in een werkblad genoemd naar het ROI in rekenbladbestand (Figuur 2, Stap 3). </li><li> Gebruik de Stap 4 macroextraheer de gemiddelde grijswaarden van de muis in het ROI &quot;geur chamber&quot;. Kopieer de resultaten in een werkblad genoemd naar de ROI in dezelfde spreadsheetbestand zoals in 4.3.3 (figuur 2, stap 4). </li><li> Om de analyse van de muisbewegingen in het ROI &quot;water perimeter&quot; verder te beperken gebruiken Stap 5 macro. Kopieer het resultaat op het werkblad genoemd naar de ROI in dezelfde spreadsheetbestand zoals in 4.3.3 (figuur 2, stap 5). </li><li> Om de analyse van de bewegingen van de muis in de ROI &quot;geur perimeter&quot; beperkt gebruik maken van de Stap 6 macro. Kopieer het resultaat op het werkblad genoemd naar het ROI spreadsheetbestand zoals in 4.3.3 (figuur 2, stap 6). </li><li> Verwerk alle video&#39;s en controleer de consistentie van het aantal frames per dieren. Hier, nemen alle voor 1810 frames die overeenkomen met een 2 min verkenning sessie. </li><li> Voor elk dier en voor elke ROI soort frames met een gemiddelde grijs values groter dan 0. Verdeel het aantal frames van de waarden die overeenkomen met 1 seconde en het verkrijgen seconden doorgebracht in elk ROI. </li></ol></li></ol> 5. Statistische analyse <ol><li> Voor elke test controleren homogeniteit van variantie binnen groepen / genotypes van Bartlett&#39;s test met de formule beschikbaar http://www.real-statistics.com/one-way-analysis-of-variance-anova/homogeneity-variances/. </li><li> In de aantrekking en vermijding test uitvoeren vergelijken de tijd doorgebracht met water versus geur binnen één groep onder toepassing van een ongerichte t-toets bij gelijke of ongelijke varianties afhankelijk van de resultaten van de Bartlett-test. Vergelijk de tijd doorgebracht met de geuren afgetrokken tegen de tijd doorgebracht met water tussen de genotypen door one-way ANOVA met Bonferroni post-hoc-test. </li><li> In de gevoeligheid testen analyseren de vergelijkingen van de tijd doorgebracht met de geur afgetrokken van de tijd doorgebracht met water tussen groepen op een specifieke verdunningen van urine door eenzijdige ANOVA met Bonferroni post-hoc-test. Vergelijk de gevoeligheid tussen groepen aan de groeiende concentraties geur door 2-Way ANOVA met herhalingen met Bonferroni post-hoc-test. </li><li> Interactie tussen genotypen en behandelingen in de aantrekkingskracht en vermijding testen worden onderzocht door 2-way ANOVA met Bonferroni post-hoc-test. </li></ol>

<ol><li>Doty, R. L., Kamath, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influences+of+age+on+olfaction%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Cognitive+Science%22%5BJournal%5D)">The influences of age on olfaction: a review.</a> Cognitive Science. 5, 20(2014).</li>
<li>Mesholam, R. I., Moberg, P. J., Mahr, R. N., Doty, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfaction+in+neurodegenerative+disease%3A+a+meta-analysis+of+olfactory+functioning+in+Alzheimer%E2%80%99s+and+Parkinson%E2%80%99s+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Olfaction in neurodegenerative disease: a meta-analysis of olfactory functioning in Alzheimer’s and Parkinson’s diseases.</a> Archives of Neurology. 55 (1), 84-90 (1998).</li>
<li>Moberg, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+Dysfunction+in+Schizophrenia%3A+A+Qualitative+and+Quantitative+Review%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Olfactory Dysfunction in Schizophrenia: A Qualitative and Quantitative Review.</a> Neuropsychopharmacology. 21 (3), 325-340 (1999).</li>
<li>Kovács, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+olfactory+dysfunction+in+aging+and+neurodegenerative+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Ageing+Research+Reviews%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of olfactory dysfunction in aging and neurodegenerative disorders.</a> Ageing Research Reviews. 3 (2), 215-232 (2004).</li>
<li>Barrios, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfaction+and+neurodegeneration+in+HD%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Olfaction and neurodegeneration in HD.</a> Neuroreport. 18 (1), 73-76 (2007).</li>
<li>Doty, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfaction+in+Parkinson%E2%80%99s+disease+and+related+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+Disease%22%5BJournal%5D)">Olfaction in Parkinson’s disease and related disorders.</a> Neurobiology of Disease. 46 (3), 527-552 (2012).</li>
<li>Doty, R. L., Shaman, P., Dann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+the+University+of+Pennsylvania+Smell+Identification+Test%3A+a+standardized+microencapsulated+test+of+olfactory+function%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+%26+Behavior%22%5BJournal%5D)">Development of the University of Pennsylvania Smell Identification Test: a standardized microencapsulated test of olfactory function.</a> Physiology & Behavior. 32 (3), 489-502 (1984).</li>
<li>Devanand, D. p, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+Deficits+in+Patients+With+Mild+Cognitive+Impairment+Predict+Alzheimer%E2%80%99s+Disease+at+Follow-Up%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Olfactory Deficits in Patients With Mild Cognitive Impairment Predict Alzheimer’s Disease at Follow-Up.</a> American Journal of Psychiatry. 157 (9), 1399-1405 (2000).</li>
<li>Conti, M. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odor+Identification+Deficit+Predicts+Clinical+Conversion+from+Mild+Cognitive+Impairment+to+Dementia+Due+to+Alzheimer%E2%80%99s+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Clinical+Neuropsychology%22%5BJournal%5D)">Odor Identification Deficit Predicts Clinical Conversion from Mild Cognitive Impairment to Dementia Due to Alzheimer’s Disease.</a> Archives of Clinical Neuropsychology. 28 (5), 391-399 (2013).</li>
<li>Keller, A., Vosshall, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Better+Smelling+Through+Genetics%3A+Mammalian+Odor+Perception%5BTitle%5D)+AND+%22Current+opinion+in+neurobiology%22%5BJournal%5D)">Better Smelling Through Genetics: Mammalian Odor Perception.</a> Current opinion in neurobiology. 18 (4), 364-369 (2008).</li>
<li>Brai, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Notch1+activity+in+the+olfactory+bulb+is+odour-dependent+and+contributes+to+olfactory+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Notch1 activity in the olfactory bulb is odour-dependent and contributes to olfactory behaviour.</a> European Journal of Neuroscience. 40 (10), 3436-3449 (2014).</li>
<li>Larson, J., Hoffman, J. S., Guidotti, A., Costa, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+discrimination+learning+deficit+in+heterozygous+reeler+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Olfactory discrimination learning deficit in heterozygous reeler mice.</a> Brain Research. 971 (1), 40-46 (2003).</li>
<li>Alonso, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+Discrimination+Learning+Increases+the+Survival+of+Adult-Born+Neurons+in+the+Olfactory+Bulb%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Olfactory Discrimination Learning Increases the Survival of Adult-Born Neurons in the Olfactory Bulb.</a> The Journal of Neuroscience. 26 (41), 10508-10513 (2006).</li>
<li>Wesson, D. W., Keller, M., Douhard, Q., Baum, M. J., Bakker, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+urinary+odor+discrimination+in+female+aromatase+knockout+%28ArKO%29+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hormones+and+behavior%22%5BJournal%5D)">Enhanced urinary odor discrimination in female aromatase knockout (ArKO) mice.</a> Hormones and behavior. 49 (5), 580-586 (2006).</li>
<li>Kobayakawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+versus+learned+odour+processing+in+the+mouse+olfactory+bulb%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Innate versus learned odour processing in the mouse olfactory bulb.</a> Nature. 450 (7169), 503-508 (2007).</li>
<li>Witt, R. M., Galligan, M. R., Despinoy, J., Segal, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+Behavioral+Testing+in+the+Adult+Mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments+JoVE%22%5BJournal%5D)">Olfactory Behavioral Testing in the Adult Mouse.</a> Journal of Visualized Experiments JoVE. (23), (2009).</li>
<li>Lee, A. W., Emsley, J. G., Brown, R. E., Hagg, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Marked+differences+in+olfactory+sensitivity+and+apparent+speed+of+forebrain+neuroblast+migration+in+three+inbred+strains+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Marked differences in olfactory sensitivity and apparent speed of forebrain neuroblast migration in three inbred strains of mice.</a> Neuroscience. 118 (1), 263-270 (2003).</li>
<li>Page, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computerized+assessment+of+social+approach+behavior+in+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Behavioral+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Computerized assessment of social approach behavior in mouse.</a> Frontiers in Behavioral Neuroscience. 3, 48(2009).</li>
<li>Nyfeler, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Jagged1+signals+in+the+postnatal+subventricular+zone+are+required+for+neural+stem+cell+self-renewal%5BTitle%5D)+AND+%22Embo+J%22%5BJournal%5D)">Jagged1 signals in the postnatal subventricular zone are required for neural stem cell self-renewal.</a> Embo J. 24 (19), Available from:
	
 <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Citation&list_uids=16163386"">http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Citation&list_uids=16163386"</a> 3504-3515 (2005).</li>
<li>Tong, M. T., Peace, S. T., Cleland, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Properties+and+mechanisms+of+olfactory+learning+and+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Behavioral+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Properties and mechanisms of olfactory learning and memory.</a> Frontiers in Behavioral Neuroscience. 8, (2014).</li>
<li>Steinlechner, S. Chapter 2.12 - Biological Rhythms of the Mouse. The Laboratory Mouse (Second Edition). , Available from:
 
 <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B9780123820082000179">http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B9780123820082000179</a> 383-407 (2012).</li>
<li>Corthell, J., Stathopoulos, A., Watson, C., Bertram, R., Trombley, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+Bulb+Monoamine+Concentrations+Vary+with+Time+of+Day%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Olfactory Bulb Monoamine Concentrations Vary with Time of Day.</a> Neuroscience. 247, 234-241 (2013).</li>
<li>Lehmkuhl, A. M., Dirr, E. R., Fleming, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+assays+for+mouse+models+of+neurodegenerative+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Olfactory assays for mouse models of neurodegenerative disease.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (90), e51804(2014).</li>
</ol>

Er is geen belangenconflict.

De in dit protocol voorgesteld testen toelaten om verschillende aspecten van aangeboren olfactorische gedrag bij muizen te evalueren: perceptie te geuren, discriminatie tussen geuren versus water en gevoeligheid voor geuren. Dit protocol kan worden toegepast op elke geur dat naar keuze en voorkoming schaal eerder aangetoond 15. Aangezien het protocol is gebaseerd op experimentele activiteit is het belangrijk dat muizen geen motorische beschadiging of angst, die hun beweging kunnen beïnvloeden en verstoren olf...

Reukzin is een van de meest ontwikkelde en belangrijke zintuigen bij zoogdieren. Elke impairment in olfactorische activiteit kan beïnvloeden voedselinname, sociaal gedrag en, in het ergste geval, zelfs overleven. Bij mensen olfactorische verslechtering leeftijdsafhankelijk 1 en als een sterke voorspeller van neurologische aandoeningen 2-6. De olfactorische identificatie-test ontwikkeld door de Universiteit van Pennsylvania vertegenwoordigt momenteel een van de meest gebruikte, niet-invasieve en kwantificeerbaar, diagnostische tests die vroege neurologische tekorten 7 kunnen beoordelen en te voorspellen met een hoge kans op de progressie van dementie 8,9. De toegankelijkheid van het olfactorische systeem en de bekendheid van de reukzin bij knaagdieren, heeft een intense lijn van onderzoek aanpakken van de onderliggende mechanismen die olfactorische functies 10 aangewakkerd. We hebben eerder aangetoond dat het verlies van functie van de signalering receptof Notch1 beïnvloedt olfactorische vermijden 11. In dit protocol gebruiken we muizen ontbreekt de signalering ligand, Jagged1, in neuronen of glia om olfactorische prestaties te bestuderen. Innate reukzin wordt gedefinieerd door drie parameters als waarneming, discriminatie tussen geuren en olfactorische gevoeligheid 4. Olfactorische testen bij knaagdieren kan op verschillende manieren en dragstherapie onderzoeken maken gebruik van olfactometers, waarvan de geur aan het dier verschaffen van een specifiek dampconcentraties en een nauwkeurig tijdschema 12-14. Toch is dit instrumentatie is duur en zijn mogelijk alleen beschikbaar in gespecialiseerde faciliteiten. In ons werk, bieden wij een eenvoudige, snelle en reproduceerbare olfactorische testprotocol, dat wordt uitgevoerd met behulp van vluchtige geuren. De tests beschreven maatregel perceptie van een lokstof of een afstotende geur en de discriminatie tussen de geur en water 11,15,16 evalueren. Met dezelfde setup, we kan de gevoeligheid voor een geur bij verschillende concentraties 16,17 meten. De post-hoc-computerondersteunde videoverwerking, geïnspireerd door het werk van de pagina en collega&#39;s 18, biedt resultaten zonder de noodzaak van het experimentele verblinding en de mogelijkheid van een persoon om het hele experiment uit te voeren. Dit protocol is bedoeld als uitgangspunt voor het bestuderen olfactorische gedrag bij muizen.

<table><tbody><tr><td>Muisenkooi</td><td>Italplast (Italië)</td><td>1144B</td><td>36 cm lengte x 20,5 cm breedte x 13,5 cm hoogte</td></tr><tr><td>Gespleten houten bedden</td><td>Abedd (Oostenrijk)</td><td>LTE E-001</td><td>3 cm hoog</td></tr><tr><td>Pindakaas</td><td>Migros (Zwitserland)</td><td>NA</td><td>1:10</td></tr><tr><td>2-Methylbutyric</td><td>Sigma Aldrich (Zwitserland)</td><td>W269514</td><td>Puur</td></tr><tr><td>Vrouwelijke urine van vruchtbare vrouwtjes van hetzelfde muisras</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Verdunningsreeks</td></tr><tr><td>Camera</td><td>Olympus (VS)</td><td>Camedia C-8080</td><td>MOV-bestanden</td></tr><tr><td>Quicktime voor Java (Windows)</td><td>Apple (VS)</td><td>NA</td><td>video-plugin voor het visualiseren van MOV-bestanden</td></tr><tr><td>ImageJ voor Windows</td><td>NIH (VS)</td><td>NA</td><td>Videoverwerking/Analyse</td></tr></tbody></table>

eenvoudig en computer-assisted olfactorische testen voor muizen

Simple and Computer-assisted Olfactory Testing for Mice

Reukzin is sterk geconserveerd tussen soorten en is vereist voor de reproductie en overleving. Bij mensen reukzin is één van de betekenissen die is aangetast door veroudering en is een sterke voorspeller van neurodegeneratieve ziekten. Aldus wordt reukzin testen gebruikt als een niet-invasieve diagnostische methode van neurologische tekorten vroeg detecteren. Om de mechanismen die ten grondslag liggen aan olfactorische netwerk gevoeligheid te begrijpen, heeft olfactorische onderzoek in knaagdieren momentum opgedaan in het afgelopen decennium. Hier is een zeer eenvoudige, efficiënte en reproduceerbare tijd olfactorische testmethode van aangeboren geurwaarneming en gevoeligheid in muizen presenteren we zonder of vooraf voedsel of water beperking. De tests worden uitgevoerd in een vertrouwde omgeving aan de muizen, vereisen slechts de geuren en 2 min sessie geurstof blootstelling. De analyse wordt uitgevoerd, post-hoc computergestuurd ondersteunde commando&#39;s ImageJ en kan derhalve, Van begin tot eind uitgevoerd door een onderzoeker. Dit protocol vereist geen speciale hardware of configuratie nodig en is geïndiceerd voor elk laboratorium geïnteresseerd zijn in het testen van olfactorische perceptie en gevoeligheid.

De perceptie test meet de aantrekkingskracht pindakaas en vermijding 2-MB zuur. Drie groepen muizen worden getest en de tijd doorgebracht in de &quot;geur omtrek&quot; worden gekwantificeerd ten opzichte van water. In de preferente proef de controlegroep A vertoont significante voorkeur voor de geur in vergelijking met water (8 t = 2,52, p &lt;0,05). Aan de andere kant, groep B geen significante aantrekkingskracht pindakaas te tonen en besteedt meer tijd met water (6 t = 3,22, p &lt;0,05). Zo is he...

We presenteren een eenvoudige en onbevooroordeelde olfactorische test bij muizen. Met dit protocol kunnen olfactorische discriminatie, voorkeur, vermijding en gevoeligheid voor een nieuwe geur in vergelijking met water worden beoordeeld in sessies van enkel gedrag. Deze methode is geïndiceerd voor een enkele experimentator en de analyse is gebaseerd op computerondersteunde videoverwerking.

Eenvoudig en Computer-assisted Olfactorische testen voor Muizen

Olfaction is highly conserved among species and is required for reproduction and survival.
In humans, olfaction is also one of the senses that is affected ...

Het algemene doel van het volgende experiment is om de aangeboren olfactorische discriminatie, olfactorische voorkeur of vermijding en de olfactorische gevoeligheid bij muizen te testen. Dit wordt bereikt door de muis bloot te stellen aan een nieuwe attractant of repellent, en een neutrale geur, namelijk water. Ondertussen legt een videocamera de gedragssessie vast.Vervolgens wordt de video geanalyseerd in Image J met behulp van de verstrekte macro's om de tijd die in de geur- en waterparameters wordt doorgebracht te bepalen. De resultaten tonen, op basis van de post hoc computerondersteunde analyse, het voorkeurs- of vermijdingsgedrag ten opzichte van geuren in vergelijking met water bij verschillende genotypen. Het belangrijkste voordeel van de olfactorische test boven het gebruik van een specifieke arena en olfactometrie is dat er een bekende arena wordt gebruikt, waardoor de opstelling eenvoudig is en de uitvoering snel verloopt.Bovendien maakt het gebruik van goedkope hardware; de procedure zal worden gedemonstreerd door Emmanuel Abry, een student in mijn laboratorium. Gebruik voor dit experiment mannelijke C 57 black, six wild-type en transgene muizen in de leeftijd van drie tot vijf maanden. Deze demonstratie maakt gebruik van twee knockout-lijnen en nestgenootcontroles.Gebruik voor de experimentele arena's schone, gesteriliseerde muizenkooien met drie centimeter strooisel. Bereid vervolgens de camera-opstelling voor. Plaats deze op een aangepaste statiefhouder 58 centimeter boven de bodem van de kooi.Maak markeringen op de tafel om aan te geven waar de kooi geplaatst moet worden. Voor een gecentreerd beeld stelt u de camera in om een video van 320 bij 240 pixels op te nemen met ongeveer 15 frames per seconde. Bereid de test voor door concentraten van elke geur, indien mogelijk, in oplosmiddel te bewaren.Maak voor de voorkeurstest een 10% gewicht-volume oplossing van pindakaas in pindaolie. Gebruik voor de vermijdingsonderzoek een oplossing van 98% methylboterzuur. Verzamel voor de gevoeligheidstest één tot twee dagen voor de test urine van een vrouwelijke muis van dezelfde stam.Fixeer een vrouwtje met de buik boven het kooigrid en vang druppels urine op in een plastic schaaltje. Verzamel monsters van meerdere vrouwtjes om te normaliseren. Vanwege individuele variabiliteit kunnen alle monsters in een buisje van 1,5 milliliter worden samengevoegd en worden bewaard bij minus 20 graden Celsius.Om te beginnen met de habituatie van de dieren, plaatst u één dier in een schone kooi en laat u dit verkennen. Gedurende vijf minuten moet de omgeving van de testkooi gelijk zijn aan die van de thuiskooi. Herhaal de habituatiefase één keer op elke testdag; zodra de habituatieperiode is afgelopen, start u de opname en pipetteert u 60 µL van een aangename geur.Breng in dit geval pindakaas aan op de ene wand en pipetteer dezelfde hoeveelheid water op de tegenoverliggende wand. Gebruik een neutrale geur en breng de druppels ongeveer 10 centimeter boven elke wand aan. Laat het dier nu twee minuten verkennen, stop vervolgens de opname en breng de muis terug naar de thuiskooi.Herhaal dit proces voor elke muis die getest moet worden. Gebruik hierbij altijd nieuwe testkooien. Voer drie tot vijf dagen na het voltooien van alle preferentietesten de vermijdingsproef uit in een nieuwe testkooi.Voer voor elke muis de vermijdingsproef uit. Net als bij de attractietest wordt enkel de aangename geur vervangen door de vermijdingsgeur, namelijk 2-methylboterzuur. Voor de gevoeligheidstest kan één kooi tussen de proeven door opnieuw worden gebruikt voor dezelfde muis.Markeer dus de waterzijde van de kooi en bereid u voor om de korte wanden tussen de proeven door te reinigen met in 70% ethanol gedrenkt papier. Maak op de dag van het experiment vier concentraties van de urine met behulp van een tienvoudige verdunningsreeks. Laat elk dier, zoals bij de vermijdingsproef, vijf minuten wennen aan de testkooi met behulp van dubbel gedestilleerd water.Stel vervolgens elke muis eerst bloot aan urine met de hoogste verdunning, namelijk 1:10.000. Breng tijdens de registratie de urineverdunning aan in de testkooi en breng water aan op de tegenoverliggende wand. Laat het dier, zoals bij andere tests, het gebied verkennen.Gedurende twee minuten. Verplaats het dier daarna naar een schone muizenkooi. Nadat alle dieren aan de laagste concentratie zijn blootgesteld, moeten alle wanden van de testkooien worden gereinigd en de test op elke muis worden herhaald met de urine met de volgende hoogste concentratie.Zet dit proces voort totdat de pure urine is getest. Nadat alle gegevens voor een experiment zijn verzameld, worden de video's geopend in ImageJ voor aanpassing en verwerking; de details hiervan zijn te vinden in het tekstprotocol via de beschreven protocollen. Twee verschillende knockout-lijnen.Groepen B en C werden vergeleken met controle-groep A, bestaande uit nestgenoten. Een niet-directionele student t-toets met gelijke of ongelijke variantie vergelijkt de tijd die binnen genotypes werd doorgebracht tussen de geur en het water. Vergelijk het gedrag tussen genotypes met behulp van een eenweg- ANOVA. Beide experimentele groepen, B en C, vertoonden geen voorkeur voor de aantrekkende geur. In de vermijdingsproef was de respons op de afstotende geur van 2-methylboterzuur zoals verwacht voor groepen A en B, maar groep C vertoonde geen vermijdingsgedrag ten opzichte van deze geur.Bij de sensitiviteitstest werd de attractiedrempel bepaald door de tijd die met water werd doorgebracht af te trekken van de tijd die met urine werd doorgebracht, waarbij urine de voorkeur had boven water bij een verdunning van 1 op 1000. Beide experimentele groepen, B en c, hadden echter een 100 maal hogere concentratie nodig om een voorkeur te tonen. Zodra men deze techniek beheerst, kan deze in een paar uur worden uitgevoerd mits correct uitgevoerd; na deze procedure kunnen andere methoden, zoals olfactorisch leren en extinctie, worden toegepast om de olfactorische plasticiteit en het leervermogen te onderzoeken.

simple-and-computer-assisted-olfactory-testing-for-mice

Research

JoVE Journal

Behavior

Gedrag

Fundamenteel, maar toch unieke eigenschappen van het knaagdieren olfactorisch systeem hebben ertoe geleid dat het toenemende onderzoek onder biologen. Een relatief eenvoudige beoordeling van de functie is dan ook noodzakelijk. Hier beschrijven we gevoelige tests voor de karakterisering van de muis olfactorische gevoeligheid en voorkeur.

Olfactorische Behavioral Testen in de Adult Mouse

Verminderde olfactorische functie is een veel voorkomend kenmerk bij veel neurodegeneratieve aandoeningen, waaronder Parkinson, Alzheimer en de ziekte van Huntington. In het huidige artikel beschrijven we een reeks tests voor het beoordelen van olfactorische discriminatie en detectie bij muizen die kunnen worden gebruikt om olfactorische vermogens te meten in muismodellen van neurodegeneratieve ziekten.

Olfactorische Testen voor muismodellen van neurodegeneratieve ziekte

Dit manuscript beschrijft een protocol om het reuksysteem van knaagdieren te onderzoeken. De reuk habituatie/dishabituatie test zal onderzoekers in staat stellen om te bepalen of een muis zich aanpast aan een herhaaldelijk gepresenteerde geur en of de muis dishabituatie vertoont wanneer een nieuwe geur wordt gepresenteerd.

Testen voor Geur Discriminatie en gewenning in Muizen

Cognitieve afwijkingen in aandachtsverlegging zijn een kernkenmerk van veel psychiatrische ziekten. Hier presenteren we de ontwikkeling van een nieuw automatisch systeem voor het effectieve onderzoek naar aandachtsverleggingsvermogens, executieve functies en andere cognitieve vermogens bij muizen met een hoge translationele validiteit voor menselijke studies.

Een Operante intra- / extra-dimensionale Set-shift Taak voor Muizen

Hier trainen we muizen op een associative Leeropdracht voor het testen van de discriminatie van de geur. Dit protocol voorziet ook in studies over leren-geïnduceerde structurele veranderingen in de hersenen.

Een objectieve en reproduceerbare Test van olfactorische leren en discriminatie in muizen

Dit artikel geeft een gedetailleerde beschrijving van een nieuw muisbeoordelingsprotocol. Bewijs van de gevoeligheid van deze olfactorische graaftaak voor affectieve toestand wordt ook aangetoond en het nut ervan in verschillende onderzoeksgebieden wordt besproken.

Beoordeling van de beoordelingsbias van de muis door middel van een olfactorische graaftaak

Dit artikel geeft een gedetailleerde beschrijving van de test voor begraven voedsel en het experiment met sociale geurdiscriminatie om de effecten van blootstelling aan ingeademde milieuverontreinigende stoffen op de reukfunctie bij muizen te beoordelen.

Onderzoek naar de effecten van ingeademde milieuverontreinigende stoffen op de reukfunctie bij muizen

Dit protocol beschrijft de constructie van een olfactometer voor go/no-go olfactorische gedragsexperimenten. Stapsgewijze instructies, samen met afbeeldingen, worden meegeleverd om de succesvolle constructie van de olfactometer te garanderen. Informatie voor het oplossen van problemen die zich tijdens het proces voordoen, is ook inbegrepen.

Constructie van een olfactometer voor onderzoek naar olfactorisch gedrag bij knaagdieren

Hier presenteren we een protocol van een olfactorische voorkeurstest die het mogelijk maakt om negatieve olfactorische vooroordelen ten opzichte van zowel eetlust als aversieve geurstimuli in muismodellen van depressie te beoordelen.

Een olfactorische voorkeurstest voor het meten van olfactorische hedonische vooroordelen in muismodellen van depressie

Dit artikel presenteert een protocol voor een contextuele en cued vreesconditionering test met een video-analysesysteem om angst leren en geheugen in muizen te beoordelen.

Contextuele en cued Fear Conditioning Test Met behulp van een video analysesysteem in Muizen

Leer een eenvoudige reukzintest voor muizen met computerondersteunde videonanalyse. Deze methode evalueert reukdiscriminatie, voorkeur en vermijdingsgedrag in een vertrouwde omgeving.

Eenvoudig en Computer-assisted Olfactorische testen voor Muizen

Meer video's verkennen