Name: Een Trombotische Stroke model op basis van Transient Cerebrale hypoxie-ischemie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-08-18T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 1 s
Description: Leer een trombotisch beroertemodel op basis van transiënte cerebrale hypoxie-ischemie bij muizen. Deze methode evalueert de effectiviteit van tPA-therapie voor recanalizatie en infarctreductie in neurologisch onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Deze studie werd ondersteund door de NIH-subsidie NS074559 (aan C. K.). We danken alle medewerkers die hebben bijgedragen aan onze onderzoeksartikelen waarop de huidige methodologierapport is gebaseerd.

Dit protocol wordt goedgekeurd door de Institutional Animal Care en gebruik Comite (IACUC) van de Emory University en volgt de National Institutes of Health Leidraad voor Zorg en gebruik van proefdieren. 1. Setup <ol><li> Bereid de chirurgische bed verwarmingskussen verbonden met warmtepomp bij 37 ° C gedurende ten minste 15 minuten voor de operatie. Plaats een nek roll met het vat van 3 ml spuit op de chirurgische bed. Bereid de verdoving gas met 2% isofluraan in de medische lucht. </li><li> Bereid geautoclaveerd pincet, schaar, micro naald houders, hemostat, wattenstaafjes en hechtingen. Bereid weefsel lijm en oogzalf. </li><li> Stel de hypoxie-systeem en temperatuurregelaars met warmtelamp en rectale sonde. Bereid hypoxie gas met 2% isofluraan in 7,5% O 2 evenwicht met 92,5% N 2. </li><li> Een uur voor de operatie worden muizen analgesized door subcutane injectie van een langzame-afgifte Meloxicam (4,0 mg / kg). </li></ol> &lt;p class = &quot;jove_title&quot;&gt; 2. Voorbijgaande cerebrale hypoxie-ischemie (Figuur 1B) <ol><li> Verdoven 10-13 weken oude mannelijke C57BL / 6 muizen met een gewicht van 22-30 g in de anesthesie inductie kamer met 3% isofluraan totdat het dier niet reageert op de voet knijpen, en verwijder het haar op rechts nek met behulp van een elektronische scheerapparaat. </li><li> Plaats muizen op de chirurgische bed verbonden met 2% isofluraan in medische lucht stroomsnelheid van 2 l / min. Secure voorpoten uitgestrekt langs de hals roll aan de zijkanten met behulp van medische tape. </li><li> Reinig de chirurgische site voor incisie met betadine, gevolgd door alcohol en vervolgens wattenstaafjes. </li><li> Onder dissectiemicroscoop, maken een 0,5 cm rechter cervicale incisie met behulp van een rechte tang en een micro schaar ongeveer 0,2 cm lateraal van de middellijn huid. </li><li> Gebruik een paar fijne getande tang om uit elkaar trekken van de fascia en weefsel om de juiste gemeenschappelijke halsslagader (RCCA) bloot te leggen. Zorgvuldig scheiden de RCCA van de nervus vagus met een paar fijne gladde tang. </li><li> Levende knoop twee voorgesneden 5-0 zijden hechtdraad (vrijgeefbare) op de RCCA, en naai de huid met behulp van 4-0 nylon monofilament hechtdraad (figuur 1C). </li><li> Breng oogzalf beide ogen tot droog voorkomen. </li><li> Snel overdracht van de muizen aan hypoxie-systeem en zet de neus en mond in het gezicht-masker met 2% isofluraan in 7,5% O 2 bij stroomsnelheid van 0,5-1 L / min gedurende 30 min. <ol><li> Tijdens hypoxie, gebruiken temperatuurregelaars met verwarming lampen om de rectale temperatuur regelen op 37,5 ± 0,5 ° C. Bewaken van de ademhaling bij 80-120 ademhalingen / min. Het onderhoud van de lichaamstemperatuur boven 37 ° C tijdens de hypoxie belangrijk is dat de herseninfarct maken. Lage ademhalingsfrequentie gebeurt meestal na 20 min hypoxie. Verwijder de face-masker en laat normale luchttoevoer als de ademhaling lager is dan 40. Dit duurt 1-2 minuten en telt niet mee in de 30 min hypoxie duur. </li></ol></li><li> Na hypoxie, overdragenmuizen om een ​​chirurgische bed en laat de twee hechtingen uit RCCA. Sluit de wond met behulp weefsellijm, en muizen terug naar de kooi. Uitsluiten de dieren als zowel van twee live knopen worden onverwacht vrijgelaten na hypoxie. </li><li> Controleer de muizen gedurende 5-10 minuten om te herstellen van hypoxie en anesthesie. Leg de natte voedsel in de kooi en terug te sturen naar dier zorginstelling. Opmerking: Dieren die milde tot ernstige cirkelen gedrag op 24 uur na Thi zijn gecorreleerd met de hersenen overtreding. De meeste dieren met epileptische symptomen sterven voordat de 24 uur na het tijdstip THI. </li></ol> 3. Laser Speckle Contrast Imaging Noot: Hoewel dit geen essentiële werkzaamheden van het THI-model kan een tweedimensionaal laser speckle contrast beeldvormingssysteem 16 worden gebruikt om de veranderingen van de cerebrale bloedstroom (CBF) karakteriseren tijdens of na transiënte hypoxie-ischemie. Om de wijzigingen van de CBF onmiddellijk document onder Thi, record na de step 2.6. Alternatief CBF herstel vergelijken na Thi insult Deze procedures kunnen worden uitgevoerd na de stap 2.10. <ol><li> Een verdoofde muis in buikligging en uitvoeren van een 1 cm lange middellijn incisie op de hoofdhuid met de schedel bloot maar ongeopend. </li><li> Monitor CBF in beide hersenhelften onder een bloedtoevoer imager volgens het protocol van de fabrikant en beginnen met het opnemen van de bloedtoevoer naar de hersenen direct na de CCAO chirurgie (stap 2.6). Doorgaan voor 50 min. </li><li> Weergeven CBF afbeelding met arbitraire eenheden in een 16-kleurenpalet en analyseren real-time de geselecteerde gebieden met de MoorFLPI software instructies van de fabrikant (figuur 2). </li><li> Na het opnemen van de CBF, sluit de hoofdhuid met weefsellijm en terug te keren het dier naar de kooi. </li></ol> 4. tPA Administration <ol><li> Injecteer dieren in de staartader met het oplosmiddel of 10 mg / kg recombinant tPA (220-300 &amp;# 956, l van 1 mg / m tPA) en 0,5, 1 of 4 uur na tCCAo plus hypoxia (figuur 4). </li></ol> 5. Brain Damage Detection met verschillende opties Opmerking: Om de hersenen monsters verzamelen, euthanaseren de muizen op 1, 4 of 24 uur na THI. <ol><li> Voer kwantificering van infarctvolume door in vivo 2,3,5-trifenyltetrazoliumchloride methode (TTC) bij 24 uur na Thi belediging als eerdere beschreven. 17 <ol><li> Intraperitoneaal injecteren van dieren met 1,4 M mannitol oplossing (~ 0,1 ml / g lichaamsgewicht) 30 minuten vóór transcardial perfusie. Transcardial perfuseren muizen met PBS, gevolgd door 10 ml 2% TTC. </li><li> Verwijder de hersenen van dieren met chirurgische instrumenten na 10 minuten en plaats in 4% paraformaldehyde voor bevestiging nachts en in sectie 1 mm dik met een vibratoom. </li><li> Snap een serie van vier doorsnede hersenen dia&#39;s door digitale microscoop en quantify het infarctvolume als de verhouding van het infarctgebied (wit gebied rechts) op het gebied van de onbeschadigde, contralaterale hemisfeer met de ImageJ software. </li></ol></li><li> Ook het uitvoeren van trombose vorming door immunofluorescentie op 1 uur na Thi belediging. <ol><li> Bevries de vaste hersenen in oktober verbinding en deel de hersenen bij 12 micrometer dikte met behulp van een cryostaat. </li><li> Incubeer de hersenen dia met konijnen anti-fibrinogeen-antilichaam (1: 100) gevolgd door geit anti-konijn Alexa Fluor 488 kleurstof (1: 200) om de fluorescentie mbt een fluorescentiemicroscoop. </li></ol></li><li> Als alternatief voeren vaartuig obstructie door staartader injectie van 100 ul 2% Evans blauwe kleurstof bij 4 uur na THI belediging. <ol><li> Euthanaseren de muizen en snel snijden het hoofd naar de hersenen te verwijderen in 4% paraformaldehyde na Evans blauw injectie. Opmerking: Het duurt 5-10 minuten voor Evans blauwe circulatie met blauwe kleur van zowel de voor- en achterpoten. </li><li> Sectiop vaste hersenen bij 100 micrometer dikte met behulp van een sledemicrotoom en observeer de fluorescentie met een emissie filter 680 nm op een fluorescentiemicroscoop. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Broderick, J. P., Hacke, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+acute+ischemic+stroke%3A+Part+I%3A+recanalization+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Treatment of acute ischemic stroke: Part I: recanalization strategies.</a> Circulation. 106 (12), 1563-1569 (2002).</li>
<li>Hossmann, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathophysiological+basis+of+translational+stroke+research%5BTitle%5D)+AND+%22Folia+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Pathophysiological basis of translational stroke research.</a> Folia Neuropathol. 47 (3), 213-227 (2009).</li>
<li>Hossmann, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+two+pathophysiologies+of+focal+brain+ischemia%3A+implications+for+translational+stroke+research%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">The two pathophysiologies of focal brain ischemia: implications for translational stroke research.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 32 (7), 1310-1316 (2012).</li>
<li>Macrae, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+stroke+research--advantages+and+disadvantages+of+the+most+common+rodent+models+of+focal+ischaemia%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Preclinical stroke research--advantages and disadvantages of the most common rodent models of focal ischaemia.</a> Br. J. Pharmacol. 164 (4), 1062-1078 (2011).</li>
<li>Niessen, F., Hilger, T., Hoehn, M., Hossmann, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+clot+preparation+determine+outcome+of+recombinant+tissue+plasminogen+activator+treatment+in+experimental+thromboembolic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Differences in clot preparation determine outcome of recombinant tissue plasminogen activator treatment in experimental thromboembolic stroke.</a> Stroke. 34 (8), 2019-2024 (2003).</li>
<li>Orset, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+of+in+situ+thromboembolic+stroke+and+reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Mouse model of in situ thromboembolic stroke and reperfusion.</a> Stroke. 38 (10), 2771-2778 (2007).</li>
<li>Watson, B. D., Dietrich, W. D., Prado, R., Ginsberg, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Argon+laser-induced+arterial+photothrombosis.+Characterization+and+possible+application+to+therapy+of+arteriovenous+malformations%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Argon laser-induced arterial photothrombosis. Characterization and possible application to therapy of arteriovenous malformations.</a> J. Neurosurgery. 66 (5), 748-754 (1987).</li>
<li>Sun, Y. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergy+of+combined+tPA-edaravone+therapy+in+experimental+thrombotic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Synergy of combined tPA-edaravone therapy in experimental thrombotic stroke.</a> PLoS One. 9, e98807(2014).</li>
<li>Levine, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anoxic-ischemic+encephalopathy+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Anoxic-ischemic encephalopathy in rats.</a> Am. J. Pathol. 36, 1-17 (1960).</li>
<li>Rice, J. E. 3rd, Vannucci, R. C., Brierley, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+immaturity+on+hypoxic-ischemic+brain+damage+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+Neurol%22%5BJournal%5D)">The influence of immaturity on hypoxic-ischemic brain damage in the rat.</a> Annals Neurol. 9 (2), 131-141 (1981).</li>
<li>Vannucci, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+stroke+in+the+female+diabetic%2C+db%2Fdb%2C+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Experimental stroke in the female diabetic, db/db, mouse.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 21 (2), 52-60 (2001).</li>
<li>Adhami, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+ischemia-hypoxia+induces+intravascular+coagulation+and+autophagy%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Cerebral ischemia-hypoxia induces intravascular coagulation and autophagy.</a> Am. J. Pathol. 169 (2), 566-583 (2006).</li>
<li>Shereen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+vivo+diffusion+tensor+imaging+and+neuropathological+correlation+in+a+murine+model+of+hypoxia-ischemia-induced+thrombotic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Ex vivo diffusion tensor imaging and neuropathological correlation in a murine model of hypoxia-ischemia-induced thrombotic stroke.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 31 (4), 1155-1169 (2011).</li>
<li>Michaud, J. P., Pimentel-Coelho, P. M., Tremblay, Y., Rivest, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+Ly6C+low+monocytes+after+cerebral+hypoxia-ischemia+in+adult+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">The impact of Ly6C low monocytes after cerebral hypoxia-ischemia in adult mice.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 34 (7), e1-e9 (2014).</li>
<li>Zoppo, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Virchow%27s+triad%3A+the+vascular+basis+of+cerebral+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Rev.+Neurol.+Dis%22%5BJournal%5D)">Virchow's triad: the vascular basis of cerebral injury.</a> Rev. Neurol. Dis. 5, 12-21 (2008).</li>
<li>Dunn, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+speckle+contrast+imaging+of+cerebral+blood+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+Biomed.+Eng%22%5BJournal%5D)">Laser speckle contrast imaging of cerebral blood flow.</a> Annals Biomed. Eng. 40 (2), 367-377 (2012).</li>
<li>Sun, Y. Y., Yang, D., Kuan, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mannitol-facilitated+perfusion+staining+with+2%2C3%2C5-triphenyltetrazolium+chloride+%28TTC%29+for+detection+of+experimental+cerebral+infarction+and+biochemical+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Mannitol-facilitated perfusion staining with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) for detection of experimental cerebral infarction and biochemical analysis.</a> J. Neurosci. Methods. 203 (1), 122-129 (2012).</li>
<li>Lozano, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+and+regional+mortality+from+235+causes+of+death+for+20+age+groups+in+1990+and+2010%3A+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Global and regional mortality from 235 causes of death for 20 age groups in 1990 and 2010: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study.</a> Lancet. 380 (9859), 2095-2128 (2010).</li>
<li>Murray, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disability-adjusted+life+years+%28DALYs%29+for+291+diseases+and+injuries+in+21+regions%2C+1990-2010%3A+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Disability-adjusted life years (DALYs) for 291 diseases and injuries in 21 regions, 1990-2010: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study.</a> Lancet. 380 (9859), 2197-2223 (2012).</li>
<li>Dirnagl, U., Macleod, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stroke+research+at+a+road+block%3A+the+streets+from+adversity+should+be+paved+with+meta-analysis+and+good+laboratory+practice%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Pharm%22%5BJournal%5D)">Stroke research at a road block: the streets from adversity should be paved with meta-analysis and good laboratory practice.</a> Br. J. Pharm. 157 (7), 1154-1156 (2009).</li>
<li>Dirnagl, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+concerted+appeal+for+international+cooperation+in+preclinical+stroke+research%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">A concerted appeal for international cooperation in preclinical stroke research.</a> Stroke. 44 (6), 1754-1760 (2013).</li>
<li>Khatri, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revascularization+end+points+in+stroke+interventional+trials%3A+recanalization+versus+reperfusion+in+IMS-I%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Revascularization end points in stroke interventional trials: recanalization versus reperfusion in IMS-I.</a> Stroke. 36 (11), 2400-2403 (2005).</li>
<li>Rosenberg, R. D., Aird, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular-bed--specific+hemostasis+and+hypercoagulable+states%5BTitle%5D)+AND+%22New+Eng.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Vascular-bed--specific hemostasis and hypercoagulable states.</a> New Eng. J. Med. 340 (20), 1555-1564 (1999).</li>
<li>Majid, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+vulnerability+to+permanent+focal+cerebral+ischemia+among+3+common+mouse+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Differences in vulnerability to permanent focal cerebral ischemia among 3 common mouse strains.</a> Stroke. 31 (11), 2707-2714 (2000).</li>
</ol>

Beroerte is een belangrijk gezondheidsprobleem van groeiende betekenis voor elke samenleving met een vergrijzende bevolking. Wereldwijd, een beroerte is de tweede belangrijkste doodsoorzaak met een geschatte 5,9 miljoen fatale gebeurtenissen in 2010, wat overeenkomt met 11,1% van alle sterfgevallen 18. Stroke is ook de derde belangrijke oorzaak van disability adjusted life years (DALY&#39;s) verloren wereldwijd in 2010, een stijging van de vijfde positie in 1990 19. Deze epidemiologische gegevens o...

Trombolyse recanalization is de meest effectieve behandeling van acute ischemische beroerte in de klinische praktijk 1. Maar de meeste preklinische neuroprotectie onderzoek werd uitgevoerd in een tijdelijke mechanische obstructie model (intraluminale hechtdraad middelste cerebrale arterie occlusie) dat snelle herstel van de cerebrale bloedstroom bij verwijdering van de vasculaire occlusie produceert en vertoont weinig of geen voordelen met tPA trombolyse. Er is gesuggereerd dat de twijfelachtige keuze takt modellen droegen, ten minste gedeeltelijk, de moeilijkheid bij het ​​vertalen neuroprotectieve therapie bij patiënten 2,3. Daarom is er een toenemende roep om het gebruik van tPA-responsieve trombo-embolische beroerte modellen in preklinisch onderzoek, maar dergelijke modellen hebben ook technische problemen (zie Discussie) 4-7. Hier beschrijven we een nieuw trombotische beroerte model gebaseerd op eenzijdige voorbijgaande hypoxie-ischemie (THI) belediging en haar antwoorden op intraveneuze tPA therapie 8. De THI beroerte model werd ontwikkeld op basis van de Levine procedure (permanente ligatie van de eenzijdige gemeenschappelijke halsslagader, gevolgd door blootstelling aan voorbijgaande hypoxie in een kamer), die werd uitgevonden voor experimenten met volwassen ratten in 1960 9. De oorspronkelijke Levine procedure vervaagde in de vergetelheid, omdat alleen produceerde variabele hersenschade, maar dezelfde insult veroorzaakt consistente neuropathologie knaagdieren pups toen het werd opnieuw geïntroduceerd door Robert Vannucci en zijn collega&#39;s als een model van neonatale hypoxisch-ischemische encefalopathie (HIE) in 1981 10. In de afgelopen jaren zijn sommige onderzoekers opnieuw aangepast de Levine-Vannucci model volwassen muizen door het aanpassen van de temperatuur van de hypoxische kamer 11. Het is aannemelijk dat de inconsistente hersenletsels in het oorspronkelijke Levine kunnen opkomen van wisselende lichaamstemperaturen van volwassen knaagdieren in de hypoxische kamer. Om deze hypothese te testen, hebben we de Levine procedure gewijzigd door het toedienen van hypoxische gasvia een gezichtsmasker, terwijl de knaagdieren kerntemperatuur bij 37 ° C op de operatietafel 12. Zoals verwacht stringente lichaamstemperatuur sterk toegenomen reproduceerbaarheid van HI-geïnduceerde hersenpathologie. De HI belediging triggers ook coagulatie, autofagie en grijs- en witte stof letsel 13. Andere onderzoekers hebben ook gebruik van de HI model om na een beroerte ontstekingsreacties 14 onderzoeken. Een uniek kenmerk van de HI slagmodel is dat volgt de Virchow triade van trombusvorming, waaronder de stasis van de bloedstroom, endotheliale schade (bijvoorbeeld door HI-geïnduceerde oxidatieve stress) en hypercoagulabiliteit (HI-geïnduceerde bloedplaatjesactivering) ( Figuur 1A) 15. Als zodanig kan de HI model sommige pathofysiologische mechanismen om real-world herseninfarct relevant vast te leggen. Met dit idee in het achterhoofd, hebben we verder verfijnd de HI model met omkeerbare ligatie van de VNilateral carotis communis (dus een voorbijgaande HI insult te maken), en getest zijn reacties op tPA trombolyse met of zonder Edaravone. Edaravone is een vrije radicalen die al in Japan goedgekeurd voor ischemische beroerte binnen 24 uur na het begin 9 behandelen. Onze experimenten toonden aan dat zo kort 30 min voorbijgaande HI triggers trombotische infarct, en dat gecombineerd tPA-Edaravone behandeling verleent synergetische 8 voordelen. Hier beschrijven we gedetailleerde chirurgische procedures en methodologische overwegingen van het THI-model, dat gebruikt kan worden om reperfusie behandeling van acute ischemische beroerte optimaliseren.

<table><tbody><tr><td>adult male mice</td><td>Charles River</td><td>C57BL/6&nbsp;</td><td>10-13 weken oud (22-30 g)</td></tr><tr><td>Mobile Laboratory Animal Anesthesia System</td><td>VetEquip</td><td>901807</td><td>anesthesie</td></tr><tr><td>Medical air (Compressed) air tank</td><td>Airgas</td><td>UN1002</td><td>anesthesie</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Piramal Healthcare</td><td>NDC 66794-013-25</td><td>anesthesie</td></tr><tr><td>Multi-Station Lab Animal AnesthesiaSystem</td><td>Surgivet</td><td>V703501</td><td>hypoxie systeem</td></tr><tr><td>7.5% O2 balanced by 92.5% N2 tank</td><td>Airgas</td><td>UN1956</td><td>hypoxie systeem</td></tr><tr><td>Temperature Controller with heating lamp&nbsp;</td><td>Cole Parmer&nbsp;</td><td>EW-89000-10</td><td>temperatuurregelaars</td></tr><tr><td>Rectal probe</td><td>Cole Parmer&nbsp;</td><td>NCI-00141PG</td><td>temperatuurregelaars</td></tr><tr><td>Dissecting microscope&nbsp;</td><td>Olympus&nbsp;</td><td>SZ40</td><td>chirurgische opstelling</td></tr><tr><td>Heat pump with warming pad</td><td>Gaymar&nbsp;</td><td>TP700</td><td>chirurgische opstelling</td></tr><tr><td>Fine curved forceps (serrated)</td><td>FST</td><td>11370-31</td><td>chirurgisch instrument</td></tr><tr><td>Fine curved forceps (smooth)</td><td>FST</td><td>11373-12</td><td>chirurgisch instrument</td></tr><tr><td>micro scissors</td><td>FST</td><td>15000-03</td><td>chirurgisch instrument</td></tr><tr><td>micro needle holders</td><td>FST</td><td>12060-01</td><td>chirurgisch instrument</td></tr><tr><td>Halsted-Mosquito hemostats</td><td>FST</td><td>13008-12</td><td>chirurgisch instrument</td></tr><tr><td>5-0 silk suture&nbsp;</td><td>Harvard Apparatus</td><td>624143</td><td>chirurgische benodigdheden</td></tr><tr><td>4-0 Nylon monofilament suture</td><td>LOOK</td><td>766B</td><td>chirurgische benodigdheden</td></tr><tr><td>Tissue glue</td><td>Abbott Laboratories</td><td>NC9855218</td><td>chirurgische benodigdheden</td></tr><tr><td>Puralube Vet ointment</td><td>Fisher</td><td>NC0138063&nbsp;</td><td>oogdroogte preventie&nbsp;</td></tr><tr><td>MoorFLPI-2 blood flow imager</td><td>Moor</td><td>780-nm laserbron</td><td>Laser Speckle Contrast Imaging</td></tr><tr><td>Mannitol</td><td>Sigma</td><td>M4125</td><td>in vivo TTC</td></tr><tr><td>2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC)&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>T8877</td><td>in vivo TTC</td></tr><tr><td>Vibratome</td><td>Stoelting</td><td>51425</td><td>hersensectie voor in vivo TTC&nbsp;</td></tr><tr><td>Digital microscope</td><td>Dino-Lite</td><td>AM2111</td><td>hersenbeeldvorming</td></tr><tr><td>O.C.T compound</td><td>Sakura Finetek</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>goat anti-rabbit Alexa Fluro 488</td><td>Invitrogen</td><td>A11008</td><td>Immunohistochemistry</td></tr><tr><td>Cryostat</td><td>Vibratome</td><td>ultrapro 5000</td><td>hersensectie voor IHC</td></tr><tr><td>Evans blue</td><td>Sigma</td><td>E2129</td><td>Vasculair perfusie detecteren</td></tr><tr><td>Microtome</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>5000</td><td>hersensectie voor histologie</td></tr><tr><td>Avertin (2, 2, 2-Tribromoethanol)</td><td>Sigma</td><td>T48402</td><td>euthanasie</td></tr><tr><td>Fluorescent microscope</td><td>Olympus</td><td>DP73</td><td></td></tr><tr><td>Meloxicam SR</td><td>ZooPharm</td><td></td><td>NSAID pijnstilling</td></tr></tbody></table>

een trombotische stroke model op basis van transient cerebrale hypoxie-ischemie

A Thrombotic Stroke Model Based On Transient Cerebral Hypoxia-ischemia

Stroke onderzoek heeft vele tegenslagen doorstaan ​​in het vertalen van neuroprotectieve therapieën in de klinische praktijk. In tegenstelling, de echte therapie (tPA trombolyse) produceert nauwelijks voordelen mechanische occlusie gebaseerde experimentele modellen die preklinisch onderzoek beroerte domineren. Deze splitsing tussen de bank en bed suggereert de noodzaak om tPA-responsieve modellen in dienst in preklinische beroerte onderzoek. Hiertoe wordt een eenvoudige en tPA-reactieve trombotische slagmodel uitgevonden en hierin beschreven. Dit model bestaat uit transiënte occlusie van de eenzijdige halsslagader en levering van 7,5% zuurstof via een gezichtsmasker bij volwassen muizen gedurende 30 min, terwijl de rectale temperatuur dier op 37,5 ± 0,5 ° C. Hoewel reversibele ligatie van de eenzijdige halsslagader of hypoxie elke onderdrukte hersenbloedstroom alleen transiënt, de combinatie van beide beledigingen heeft langdurige reperfusie stoornissen, fibrine en bloedplaatjes afzetting en grote infarct in het midden cerebrale slagader geleverd grondgebied. Belangrijk-staartader injectie van recombinant tPA op 0,5, 1, of 4 uur na Thi (10 mg / kg) die tijdsafhankelijke vermindering van de sterfte en de infarctgrootte. Dit nieuwe slagmodel is eenvoudig en kan worden gestandaardiseerd laboratoria experimentele resultaten te vergelijken. Verder induceert trombose zonder craniectomy of invoering voorgevormde embolie. Gezien deze unieke verdiensten, de THI-model is een nuttige aanvulling op het repertoire van preklinisch beroerte onderzoek.

Tweedimensionaal laser speckle contrast imaging (LSCI) 16 werd toegepast om de veranderingen van de cerebrale bloedstroom (CBF) vergelijken door 30 min transient eenzijdige carotis occlusie (tCCAO), 30 min blootstelling aan hypoxie (7,5% zuurstof) en 30 min eenzijdige carotis ligatie onder hypoxie (THI). Dit experiment toonde dat tCCAO onder normoxie onderdrukte de CBF de carotide geligeerd halfrond ~ 50% boven de basislijn, die snel hersteld tot boven 85% na de vrijgave van de carotis occlusie (R in ...

Modellen voor trombo-embolische beroertes zijn essentiële hulpmiddelen voor het optimaliseren van de recanalisatietherapie. Hier beschrijven we een muismodel voor trombotische beroerte gebaseerd op een tijdelijk cerebraal hypoxisch-ischemisch (tHI) letsel, dat trombose en infarct veroorzaakt en gunstig reageert op weefselplasminogeenactivator (tPA)-gemedieerde fibrinolyse in een therapeutisch venster vergelijkbaar met dat bij beroertepatiënten.

Een Trombotische Stroke model op basis van Transient Cerebrale hypoxie-ischemie

Stroke research has endured many setbacks in translating neuroprotective therapies into clinical practice. In contrast, the real-world therapy (tPA ...

Het algemene doel van deze procedure is om een eenvoudig trombotisch berotemodel met een stabiel herseninfarct te vestigen en om de beschermende effecten van weefselplasminogeenactivator- of TPA-therapie te evalueren. Ten eerste wordt de inductie van transiënte cerebrale hypoxische ischemie of THI gedemonstreerd via de dubbele ligatie van de rechter arteria carotis communis of RCCA en de blootstelling van het geligeerde dier aan hypoxische omstandigheden voor de inductie van trombose. Na een hypoxische conditie van 30 minuten worden de twee knopen op de halsslagader losgelaten.In de laatste stap worden de toediening en de evaluatie van de effecten van TPA-therapie getoond. Alternatief kunnen de real-time registratie van de cerebrale bloedstroom, de vorming van de trombose en de graad van vaatobstructie worden onderzocht. Met deze methode kan een trombotische beroerte worden opgewekt bij volwassen muizen met gebruik van hun eigen stollingssysteem.We willen dit model gebruiken om te bestuderen hoe de hersenen hun eigen bloedstroom reguleren onder hypothetische ischemische omstandigheden. Daarnaast willen we het gebruiken om te onderzoeken hoe we trombolytische therapie kunnen verbeteren. Een visuele demonstratie van deze methode is essentieel, aangezien het moeilijk kan zijn om de juiste lichaamstemperatuur en een gelijkmatige ademhaling te handhaven tijdens de herseninfectie.Inductiestappen Ten minste 15 minuten voordat de procedure begint. Plaats de operatietafel op een warmtemat, stel deze in op 37 °C en plaats een nekkrol, gemaakt van de huls van een spuit van 3 mL, op de tafel. Stel het hypoxiesysteem zo in dat er 2% isofluraan in 7,5% zuurstof wordt toegediend, gebalanceerd met 92,5% stikstof, en stel de temperatuurregelaars bij.Plaats een mannelijke C 57 black six muis van 10 tot 13 weken oud en met een gewicht van 22 tot 30 gram op de operatietafel. Na bevestiging van de anesthesie door een knijpprik in de teen, brengt u zalf aan op de ogen van het dier. Strek de vier ledematen langs de nek, rol ze in en zet ze vast met medische tape.Verwijder vervolgens met een ontharingcrème de haren op de nek van het dier en maak de operatieve plaats schoon. Plaats de operatietafel nu onder een dissectiemicroscoop en maak een rechts-cervicale incisie van 0,5 centimeter in de huid langs de middellijn. Trek met een fijne pincet de trachea en spier opzij om de arteria carotis communis rechts bloot te leggen en plaats twee voorgesneden 5-0 zijden hechtingen onder de arterie.Zorg ervoor dat de halsslagader zorgvuldig van de nervus vagus wordt gescheiden; zet vervolgens twee voorgesneden, verwijderbare 5-0 zijden hechtingen op de RCCA. Gebruik daarna 4-0 nylon monofilament hechtingen om de huid te sluiten en transfer de muis snel naar het hypoxiesysteem. Plaats het gezichtsmasker over de neus en mond van het dier en breng een rectale probe aan, zodat gedurende de gehele toediening van hypoxie een lichaamstemperatuur van 37,5 °C wordt gehandhaafd.Pas de warmtelampen na 30 minuten aan. Verplaats de muis terug naar de operatietafel en maak de twee hechtingen los. Sluit vervolgens de wond met weefsellijm en plaats de muis terug in de kooi, waarbij het dier wordt gemonitord totdat het volledig hersteld is.Als alternatief kan laser speckle contrast imaging worden gebruikt om de cerebrale bloedstroom tijdens en na hypoxische ischemie te onderzoeken. Plaats het dier in buikligging. Maak vervolgens een midline incisie van één centimeter lang in de hoofdhuid om de schedel bloot te leggen, zonder deze te openen.Plaats het dier vervolgens onmiddellijk in de bloedstroom-imager en start de registratie van de cerebrale bloedstroom. Bekijk de beelden van de cerebrale bloedstroom volgens de instructies van de fabrikant met de FLPI-software om de geselecteerde regio's in realtime te analyseren. Injecteer de dieren op het juiste tijdstip intraveneus in de staartvin na de tijdelijke unilaterale carotisocclusie en hypoxie om de effecten van TPA-therapie te evalueren.Kwantificeer vervolgens het infarctvolume via in vivo TTC 24 uur na de voorbijgaande cerebrale hypoxische ischemie. Gebruik de volgende dag een vibraatome om coupes van één millimeter dik te verkrijgen. Verkrijg tot slot een serie van vier doorsneden van hersenbeelden via digitale microscopie en gebruik de geschikte beeldbewerkingssoftware om het infarctvolume te kwantificeren als de ratio van het witte infarctgebied ten opzichte van het gebied van de onbeschadigde contralaterale hemisfeer.Voor deze procedure kunnen andere thrombolysemethoden worden gebruikt om hun effecten en klinische potentieel te evalueren. Deze techniek heeft de weg vrijgemaakt voor onderzoekers op het gebied van ischemische beroertes om thrombolytische therapie in de hersenen te onderzoeken.

a-thrombotic-stroke-model-based-on-transient-cerebral-hypoxia-ischemia

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

De postnatale rat model voor hypoxisch-ischemische hersenschade is een goed uitgewerkt model van de menselijke neonatale hypoxische ischemische encefalopathie (HIE). In dit artikel beschrijven we het model van HIE in post-natale rattenjongen.

De hypoxische ischemische encefalopathie Model van de Perinatale ischemie

This video demonstrates the procedure of replicating a thrombotic stroke in a mouse model by blocking the right common carotid artery and exposing the mouse to a low-oxygen environment. This process reduces blood and oxygen flow to the brain, causing blood clot formation and brain damage.

Inducing Thrombotic Stroke Through Hypoxia and Ischemia in a Mouse Model

Photothrombosis is een snelle, minimaal-invasieve techniek voor het induceren van kleine en goed afgebakende infarct in gebieden die van belang zijn in zeer reproduceerbare wijze. Het is bijzonder geschikt voor het bestuderen van cellulaire en moleculaire respons onderliggende hersenplasticiteit in transgene muizen.

Fototrombotisch Ischemie: Een minimaal invasieve en Reproduceerbaar Fotochemisch corticale laesie Model voor Mouse Stroke Studies

Verschillende muismodellen van midden cerebrale slagader occlusie (MCAO) worden veel gebruikt in experimenteel onderzoek hersenen. Hier tonen we het model van transcraniële permanente distale MCAO die consistent zijn corticale infarct van een omvang die overeenkomt met die door de meerderheid van de menselijke ischemische beroertes schade veroorzaakt.

Modellering Stroke in Muizen: Permanente Coagulatie van de distale midden cerebrale slagader

Neonatale beroerte is een belangrijke oorzaak van vroege hersenbeschadiging die een translationeel model vereist met consistente focale letselpatronen en hoge reproduceerbaarheid om onderzoek mogelijk te maken. Dit onderzoek beschrijft de gedetailleerde chirurgische procedure voor het creëren van een niet-hemorragische, unilaterale focale ischemie-reperfusieletsel bij full-term-equivalente knaagdieren.

Transient midden cerebrale slagader occlusie Model van Neonatale Stroke in P10 Rats

Hier beschreven is het fototrombotische beroertemodel, waarbij een beroerte wordt geproduceerd door de intacte schedel door permanente microvasculaire occlusie op te wekken met behulp van laserverlichting na toediening van een lichtgevoelige kleurstof.

Modelleerslag bij muizen: focale corticale laesies door fototrombose

Verschillende modellen van middelste cerebrale arterie occlusie (MCAo) worden gebruikt in experimenteel beroerteonderzoek. Hier wordt een experimenteel beroertemodel van voorbijgaande MCAo via de externe halsslagader (ECA) beschreven, dat tot doel heeft een menselijke beroerte na te bootsen, waarbij de cerebrovasculaire trombus wordt verwijderd als gevolg van spontane stolsellysis of therapie.

Modellering beroerte bij muizen: transiënte middelste cerebrale arterie occlusie via de externe halsslagader

Dit protocol beschrijft het model van voorbijgaande focale cerebrale ischemie bij muizen door intraluminale occlusie van de middelste hersenslagader. Daarnaast worden voorbeelden van uitkomstbeoordeling getoond met behulp van magnetische resonantiebeeldvorming en gedragstests.

Voorbijgaand occlusiemodel van de middelste cerebrale slagader van een beroerte

Hier presenteren we een protocol om een distaal occlusiemodel van de middelste hersenslagader (dMCAO) op te stellen door middel van transcraniële elektrocoagulatie bij C57BL/6J-muizen en evalueren we het daaropvolgende neurologische gedrag en histopathologische kenmerken.

Inductie van acute ischemische beroerte bij muizen met behulp van de distale occlusietechniek van de middelste slagader

Deze studie presenteert een protocol voor het opstellen van een zeer reproduceerbaar diermodel van hemorragische transformatie (HT) met behulp van occlusie/reperfusie van de middelste hersenslagader (MCAO/R) bij C57BL/6-muizen met acute hyperglykemie.

Een muismodel van hemorragische transformatie geïnduceerd door acute hyperglykemie in combinatie met voorbijgaande focale ischemie

Leer een trombotisch beroertemodel op basis van transiënte cerebrale hypoxie-ischemie bij muizen. Deze methode evalueert de effectiviteit van tPA-therapie voor recanalizatie en infarctreductie in neurologisch onderzoek.

Een Trombotische Stroke model op basis van Transient Cerebrale hypoxie-ischemie

Meer video's verkennen