Name: Knaagdieren Brain Micro-injectie om te studeren Molecular substraten van gemotiveerd gedrag (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-09-16T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 5 s
Description: Leer hersenmicro-injectie bij knaagdieren om moleculaire substraten van gemotiveerd gedrag te bestuderen. Deze methode omvat het vervaardigen van cannules en micro-injectoren met precisie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

MSB wordt ondersteund door de Alcohol Beverage Medical Research Foundation, een Center for Translational Research Award (UL1 TR000058), de National Institutes for Alcohol Abuse and Alcoholism (P50 AA022537), en opstartfondsen verstrekt door de Virginia Higher Education Equipment Trust Fund en de VCU School of Medicine.

<ol><li>Koob, G. F., Volkow, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurocircuitry+of+addiction%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Neurocircuitry of addiction.</a> Neuropsychopharmacology. 35 (1), 217-238 (2010).</li>
<li>Kalivas, P. W., Peters, J., Knackstedt, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+and+brain+circuits+in+drug+addiction%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Interv%22%5BJournal%5D)">Animal models and brain circuits in drug addiction.</a> Mol Interv. 6 (6), 339-344 (2006).</li>
<li>Bossert, J. M., Marchant, N. J., Calu, D. J., Shaham, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+reinstatement+model+of+drug+relapse%3A+recent+neurobiological+findings%2C+emerging+research+topics%2C+and+translational+research%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology+%28Berl%29%22%5BJournal%5D)">The reinstatement model of drug relapse: recent neurobiological findings, emerging research topics, and translational research.</a> Psychopharmacology (Berl). 229 (3), 453-476 (2013).</li>
<li>Connor, E. C., Chapman, K., Butler, P., Mead, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+predictive+validity+of+the+rat+self-administration+model+for+abuse+liability%29%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Biobehav+Rev%22%5BJournal%5D)">The predictive validity of the rat self-administration model for abuse liability).</a> Neurosci Biobehav Rev. 35 (3), 912-938 (2011).</li>
<li>Watson, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+blockade+of+dopamine+D3+receptors+enhances+while+D2+receptor+antagonism+impairs+social+novelty+discrimination+and+novel+object+recognition+in+rats%3A+a+key+role+for+the+prefrontal+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Selective blockade of dopamine D3 receptors enhances while D2 receptor antagonism impairs social novelty discrimination and novel object recognition in rats: a key role for the prefrontal cortex.</a> Neuropsychopharmacology. 37 (3), 770-786 (2012).</li>
<li>Takahashi, A., Shimamoto, A., Boyson, C. O., DeBold, J. F., Miczek, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GABA%28B%29+receptor+modulation+of+serotonin+neurons+in+the+dorsal+raphe+nucleus+and+escalation+of+aggression+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">GABA(B) receptor modulation of serotonin neurons in the dorsal raphe nucleus and escalation of aggression in mice.</a> J Neurosci. 30 (35), 11771-11780 (2010).</li>
<li>Spencer, R. C., Klein, R. M., Berridge, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Psychostimulants+act+within+the+prefrontal+cortex+to+improve+cognitive+function%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Psychostimulants act within the prefrontal cortex to improve cognitive function.</a> Biol Psychiatry. 72 (3), 221-227 (2012).</li>
<li>Bowers, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activator+of+G+protein+signaling+3%3A+a+gatekeeper+of+cocaine+sensitization+and+drug+seeking%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Activator of G protein signaling 3: a gatekeeper of cocaine sensitization and drug seeking.</a> Neuron. 42 (2), 269-281 (2004).</li>
<li>Abudara, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+connexin43+mimetic+peptide+Gap19+inhibits+hemichannels+without+altering+gap+junctional+communication+in+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The connexin43 mimetic peptide Gap19 inhibits hemichannels without altering gap junctional communication in astrocytes.</a> Front Cell Neurosci. 8, 306(2014).</li>
<li>Cahill, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((D1R%2FGluN1+complexes+in+the+striatum+integrate+dopamine+and+glutamate+signalling+to+control+synaptic+plasticity+and+cocaine-induced+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">D1R/GluN1 complexes in the striatum integrate dopamine and glutamate signalling to control synaptic plasticity and cocaine-induced responses.</a> Mol Psychiatry. 19 (12), 1295-1304 (2014).</li>
<li>McFarland, K., Kalivas, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+circuitry+mediating+cocaine-induced+reinstatement+of+drug-seeking+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The circuitry mediating cocaine-induced reinstatement of drug-seeking behavior.</a> J Neurosci. 21 (21), 8655-8663 (2001).</li>
<li>Fuchs, R. A., Branham, R. K., See, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Different+neural+substrates+mediate+cocaine+seeking+after+abstinence+versus+extinction+training%3A+a+critical+role+for+the+dorsolateral+caudate-putamen%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Different neural substrates mediate cocaine seeking after abstinence versus extinction training: a critical role for the dorsolateral caudate-putamen.</a> J Neurosci. 26 (13), 3584-3588 (2006).</li>
<li>Ebersberger, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiology+of+meningeal+innervation%3A+aspects+and+consequences+of+chemosensitivity+of+meningeal+nociceptors%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc+Res+Tech%22%5BJournal%5D)">Physiology of meningeal innervation: aspects and consequences of chemosensitivity of meningeal nociceptors.</a> Microsc Res Tech. 53 (2), 138-146 (2001).</li>
<li>Netter, F. H. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNetter%2C+FH+%22Musculoskeletal+System+Part+I%3A+Anatomy%3B+Physiology%2C+and+Metabolic+Disorders%22">Musculoskeletal System Part I: Anatomy; Physiology, and Metabolic Disorders</a>. 8, 1st ed, CIBA-Geigy. Summit, New Jersey. (1987).</li>
<li>Ferguson, S. M., Eskenazi, D., Ishikawa, M., Wanat, M. J., Phillips, P. E., Dong, Y., Roth, B. L., Neumaier, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+neuronal+inhibition+reveals+opposing+roles+of+indirect+and+direct+pathways+in+sensitization%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Transient neuronal inhibition reveals opposing roles of indirect and direct pathways in sensitization.</a> Nat Neurosci. 14 (1), 22-24 (2011).</li>
<li>Gonzalez-Perez, O., Guerrero-Cazares, H., Quinones-Hinojosa, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+of+deep+brain+structures+with+microinjections+for+delivery+of+drugs%2C+viral+vectors%2C+or+cell+transplants%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Targeting of deep brain structures with microinjections for delivery of drugs, viral vectors, or cell transplants.</a> J Vis Exp. (46), (2010).</li>
<li>Inquimbert, P., Moll, M., Kohno, T., Scholz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stereotaxic+injection+of+a+viral+vector+for+conditional+gene+manipulation+in+the+mouse+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Stereotaxic injection of a viral vector for conditional gene manipulation in the mouse spinal cord.</a> J Vis Exp. (73), (2013).</li>
<li>Schier, C. J., Mangieri, R. A., Dilly, G. A., Gonzales, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microdialysis+of+ethanol+during+operant+ethanol+self-administration+and+ethanol+determination+by+gas+chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Microdialysis of ethanol during operant ethanol self-administration and ethanol determination by gas chromatography.</a> J Vis Exp. (67), (2012).</li>
<li>Fornari, R. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+stereotaxic+surgery+and+animal+welfare+outcome+improvements+for+behavioral+neuroscience%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Rodent stereotaxic surgery and animal welfare outcome improvements for behavioral neuroscience.</a> J Vis Exp. (59), e3528(2012).</li>
<li>Geiger, B. M., Frank, L. E., Caldera-Siu, A. D., Pothos, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survivable+stereotaxic+surgery+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Survivable stereotaxic surgery in rodents.</a> J Vis Exp. (20), e880(2008).</li>
<li>Richardson, N. R., Roberts, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progressive+ratio+schedules+in+drug+self-administration+studies+in+rats%3A+a+method+to+evaluate+reinforcing+efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Progressive ratio schedules in drug self-administration studies in rats: a method to evaluate reinforcing efficacy.</a> J Neurosci Methods. 66 (1), 1-11 (1996).</li>
<li>Cheeta, S., Brooks, S., Willner, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+reinforcer+sweetness+and+the+D2%2FD3+antagonist+raclopride+on+progressive+ratio+operant+performance%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Effects of reinforcer sweetness and the D2/D3 antagonist raclopride on progressive ratio operant performance.</a> Behav Pharmacol. 6 (2), 127-132 (1995).</li>
<li>Roberts, D. C., Morgan, D., Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+to+make+a+rat+addicted+to+cocaine%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Neuropsychopharmacol+Biol+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">How to make a rat addicted to cocaine.</a> Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry. 31 (8), 1614-1624 (2007).</li>
<li>Arnold, J. M., Roberts, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critique+of+fixed+and+progressive+ratio+schedules+used+to+examine+the+neural+substrates+of+drug+reinforcement%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Biochem+Behav%22%5BJournal%5D)">A critique of fixed and progressive ratio schedules used to examine the neural substrates of drug reinforcement.</a> Pharmacol Biochem Behav. 57, 441-447 (1997).</li>
<li>Hodos, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progressive+ratio+as+a+measure+of+reward+strength%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Progressive ratio as a measure of reward strength.</a> Science. 134 (3483), 943-944 (1961).</li>
<li>Depoortere, R. Y., Li, D. H., Lane, J. D., Emmett-Oglesby, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parameters+of+self-administration+of+cocaine+in+rats+under+a+progressive-ratio+schedule%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Biochem+Behav%22%5BJournal%5D)">Parameters of self-administration of cocaine in rats under a progressive-ratio schedule.</a> Pharmacol Biochem Behav. 45 (3), 539-548 (1993).</li>
<li>Bowers, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleus+accumbens+AGS3+expression+drives+ethanol+seeking+through+G+betagamma%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Nucleus accumbens AGS3 expression drives ethanol seeking through G betagamma.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 105 (34), 12533-12538 (2008).</li>
<li>Bull, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+Nucleus+Accumbens+Core+Astrocytes+Modulate+Reward+and+the+Motivation+to+Self-Administer+Ethanol+after+Abstinence%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Rat Nucleus Accumbens Core Astrocytes Modulate Reward and the Motivation to Self-Administer Ethanol after Abstinence.</a> Neuropsychopharmacology. 39 (12), 2835-2845 (2014).</li>
<li>Hopf, F. W., Chang, S. J., Sparta, D. R., Bowers, M. S., Bonci, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motivation+for+alcohol+becomes+resistant+to+quinine+adulteration+after+3+to+4+months+of+intermittent+alcohol+self-administration%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol+Clin+Exp+Res%22%5BJournal%5D)">Motivation for alcohol becomes resistant to quinine adulteration after 3 to 4 months of intermittent alcohol self-administration.</a> Alcohol Clin Exp Res. 34 (9), 1565-1573 (2010).</li>
<li>Hopf, F. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+nucleus+accumbens+SK+channel+activity+enhances+alcohol+seeking+during+abstinence%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Reduced nucleus accumbens SK channel activity enhances alcohol seeking during abstinence.</a> Neuron. 65 (5), 682-694 (2010).</li>
<li>Salerni, C. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSalerni%2C+CM+%22Engineering+Adhesives+for+Repeated+Sterilization%22">Engineering Adhesives for Repeated Sterilization</a>. , Henkel. Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.henkelna.com/us/content_data/99736_Engineering_Adhesives_for_Repeated_Sterilization.pdf">http://www.henkelna.com/us/content_data/99736_Engineering_Adhesives_for_Repeated_Sterilization.pdf</a> (2015).</li>
<li>Gundersen, H. J., Jensen, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+efficiency+of+systematic+sampling+in+stereology+and+its+prediction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Microsc%22%5BJournal%5D)">The efficiency of systematic sampling in stereology and its prediction.</a> J Microsc. 147 (Pt 3), 229-263 (1987).</li>
<li>Mastakov, M. Y., Baer, K., Xu, R., Fitzsimons, H., During, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combined+injection+of+rAAV+with+mannitol+enhances+gene+expression+in+the+rat+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Combined injection of rAAV with mannitol enhances gene expression in the rat brain.</a> Mol Ther. 3 (2), 225-232 (2001).</li>
<li>Burger, C., Nguyen, F. N., Deng, J., Mandel, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+mannitol-induced+hyperosmolality+amplifies+rAAV2-mediated+striatal+transduction+to+a+greater+extent+than+local+co-infusion%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Systemic mannitol-induced hyperosmolality amplifies rAAV2-mediated striatal transduction to a greater extent than local co-infusion.</a> Mol Ther. 11 (2), 327-331 (2005).</li>
<li>Agulhon, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+the+autonomic+nervous+system+by+acute+glial+cell+Gq-GPCR+activation+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Modulation of the autonomic nervous system by acute glial cell Gq-GPCR activation in vivo.</a> J Physiol. 591 (22), 5599-5609 (2013).</li>
<li>Armbruster, B. N., Li, X., Pausch, M. H., Herlitze, S., Roth, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolving+the+lock+to+fit+the+key+to+create+a+family+of+G+protein-coupled+receptors+potently+activated+by+an+inert+ligand%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Evolving the lock to fit the key to create a family of G protein-coupled receptors potently activated by an inert ligand.</a> PNAS. 104 (12), 5163-5168 (2007).</li>
<li>Cruikshank, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potent+block+of+Cx36+and+Cx50+gap+junction+channels+by+mefloquine%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Potent block of Cx36 and Cx50 gap junction channels by mefloquine.</a> PNAS. 101 (33), 12364-12369 (2004).</li>
<li>Miguel-Hidalgo, J., Shoyama, Y., Wanzo, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infusion+of+gliotoxins+or+a+gap+junction+blocker+in+the+prelimbic+cortex+increases+alcohol+preference+in+Wistar+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Psychopharmacol%22%5BJournal%5D)">Infusion of gliotoxins or a gap junction blocker in the prelimbic cortex increases alcohol preference in Wistar rats.</a> J Psychopharmacol. 23 (5), 550-557 (2008).</li>
<li>Bowers, M. S., Lake, R. W., Rubinchik, S., Dong, J. Y., Kalivas, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elucidation+of+Homer+1a+function+in+the+nucleus+accumbens+using+adenovirus+gene+transfer+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+N+Y+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Elucidation of Homer 1a function in the nucleus accumbens using adenovirus gene transfer technology.</a> Ann N Y Acad Sci. 1003, 419-421 (2003).</li>
<li>Mackler, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NAC-1+is+a+brain+POZ%2FBTB+protein+that+can+prevent+cocaine-induced+sensitization+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">NAC-1 is a brain POZ/BTB protein that can prevent cocaine-induced sensitization in the rat.</a> J Neurosci. 20 (16), 6210-6217 (2000).</li>
<li>Geyer, M. A., Swerdlow, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+startle+response%2C+prepulse+inhibition%2C+and+habituation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Measurement of startle response, prepulse inhibition, and habituation.</a> Curr Protoc Neurosci. 8, Unit 8.7(2001).</li>
<li>Bedford, J. A., Bailey, L. P., Wilson, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cocaine+reinforced+progressive+ratio+performance+in+the+rhesus+monkey%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Biochem+Behav%22%5BJournal%5D)">Cocaine reinforced progressive ratio performance in the rhesus monkey.</a> Pharmacol Biochem Behav. 9 (5), 631-638 (1978).</li>
</ol>

Geen van de auteurs heeft concurrerende of tegenstrijdige belangen.

De hier voorgestelde werkwijze is een efficiënt middel om microinjectie canules en microinjectors die zullen helpen bij het ophelderen van de moleculaire substraten gemotiveerd gedrag produceren. Deze methode biedt verschillende voordelen. Ten eerste, door de productie van het eigen implantaten en microinjectors, nieuwe experimentele parameters kan snel worden geoptimaliseerd, dat wil zeggen, hoeft men niet te wachten op maat gemaakte onderdelen te komen. Ten tweede, als gevolg van de kleine diameter van de canule, meer canules gelijktijdig worden geïmplanteerd. Dit verkort de vereiste chirurgische tijd, die overlevingskansen kan verbeteren, en maakt ook meerdere implantaten per dier. Ten derde, de software waarmee de operante kamers besturen gemakkelijk geschikt progressieve verhouding schema aangezien een vaste verhouding paradigma snel worden omgezet in een progressieve verhouding paradigma door eenvoudig aanbrengen van een gebeurtenis overgang parameter lijst die de gewenste versterking schema bevat. Zijnalgemeen nuttig, micro-injectie werd een algemene procedure voorgesteld die in het algemeen toepasbaar voor de micro-injectie van vrijwel elk reagens momenteel beschikbaar moeten zijn. Daarom verwachten we dat deze techniek blijft vergelijkbare hoge gebruikswaarde in de toekomst met kleine wijziging worden. Door het veranderen van slechts enkele variabelen, kan deze benadering worden toegepast op een groot aantal reagentia. Parameters die het vaakst worden gemanipuleerd omvatten de lengte die de microinjector uitsteekt uit de canule, injectievolume en injectiesnelheid. Zo kan men wil dat de injector verder uitsteken van de canule-uiteinde naar het gliale litteken gewoonlijk vormt rond chronische implantaten te voorkomen. Bovendien kan men wensen om een ​​groter volume te injecteren. Voor striatale virus micro-injecties, wordt een volume van 1 ui kenmerkend gebruikt en deze hoeveelheid wordt gewoonlijk geïnjecteerd over een langere periode (vaak 7-10 min plus 3 - 10 min aanvullende diffusie tijd) in vergelijking met die gebruikd voor farmacologische reagentia (typisch 0,3-0,5 ul meer dan 2 - 3 min plus 1-3 min extra diffusie tijd). De gebruiker moet de literatuur raadplegen en / of empirisch bepalen van de parameters die het meest geschikt voor hun behoeften. Ondanks het succes van deze procedure is kritisch afhankelijk van variabelen 4: 1) canule lengte, 2) microinjectie length, 3) de kwaliteit van microinjectie spuitpatroon, en 4) de integriteit van het systeem voorafgaand aan injectie. Omdat microinjectie locatie afhankelijk van de diepte die de microinjector uitsteekt uit de canule, is het noodzakelijk dat beide canules (stap 1.2.8) en microinjectie lengte (na buiging, stap 2.2.1) beide nauwkeurig bekend en uniform tussen alle vakken . Dit kan gemakkelijk worden geregeld door eenvoudig verwerpen elk werktuig dat niet de vereiste lengte van het uiteindelijke opnieuw meten. Bovendien kan de injectie locatie alleen voorspeld als het direct onder de geleidingscanule optreedt. Dus elke microinjector dat does niet spuit een lange, fijne stroom na het testen (stap 2.4.6) moet worden afgewezen. Een kwaliteit injectie is ook gerelateerd aan de integriteit van het systeem voorafgaand aan injectie. Als u na het afgeven van al het water uit de injector (voorafgaand aan het vullen met reagens) meerdere plekken worden waargenomen op de lab-vegen, dan moet een lek te worden verholpen (Let op stap 2.4.8). Indien verder de bel (stap 2.4.9) dat het medicijn scheidt van het water in de PE20 slang niet één enkele bel (na het vullen van de microinjector met reagens), dan is de injector is gedeeltelijk verstopt. Deze klomp kan zowel voorkomen of af te leiden van de injectie. Ook dit kan gemakkelijk worden verholpen (Let op stap 2.4.8). Indien men wenst microinject terwijl het dier in de stereotaxische kader zijn er drie mogelijkheden. Ten eerste kan men de lengte van de microinjector kraag zodat deze stevig kan worden vastgehouden door de stereotaxische manipulator en ook tot ver genoeg om verbinding met PE20 buismateriaal laten toenemen. Anderzijds ope kon tijdelijk implanteren van een canule en gebruik de standaard microinjector hier gepresenteerd. Ten derde, men kon gebruiken getrokken en gepolijst glas pipetten. 16,17 Een belangrijke beperking van de hier gepresenteerde methode is dat het best uitgevoerd in goed behandelde ratten die bekend zijn met de procedure zijn. Ratten die voor het bij de Resultaten genoemde gegevens vereist geen speciale behandelingsprocedures omdat dezelfde onderzoeker behandelde ratten dagelijks gedurende meer dan 2 maanden. Dit omvatte dagelijkse waarneming en manipulatie van het chirurgisch implantaat minstens 2 weken. Echter, ratten snel worden gewend door een aantal technieken die gebruikt worden om voor de pre-puls inhibitie assay, die kan worden beïnvloed door stress. Deze speciale gewenning technieken zijn goed eerder beschreven. 43 Naast deze procedures, is het raadzaam dat ratten worden gewend aan de micro-injectie procedure waarbij verkort microinjectors gebruik during &#39;schijnvertoning&#39; injecties. Tijdens deze sham-injecties, is het essentieel dat de microinjector niet uitsteekt in het weefsel teneinde weefselbeschadiging te beperken. Met andere woorden, de microinjector niet meer dan 14 mm worden gebogen. Zo zou de grondige gewenning vereist voor optimale toepassing van deze techniek worden beschouwd als een beperking. Terwijl verschillende behavioral paradigma&#39;s bestaan ​​om de motivatie te meten, is de progressieve verhouding vaak gebruikt om de inspanning die het onderwerp bereid is om te oefenen om een ​​reinforcer verkrijgen kwantificeren. De progressieve verhouding paradigma vormt een maatregel bekend als breekpunt, dat vaak wordt gedefinieerd als het maximale aantal hefboompersen tijdens het laatste volledige verhouding;.. Dat wil zeggen, maximale reactie die opgewekt bekrachtiger 21 De progressieve verhouding is gevoelig voor magnitude bekrachtiger. Bijvoorbeeld hogere cocaïne (of sacharose) doses produceren een hogere breekpunt en lagere cocaïne (of sacharose) doses leveren een lagere breakpoint. 21,22 Dienovereenkomstig breekpunt is een routinematig gebruikte proxy motivatie en / of versterkende werking. 21,23-26 Door de bedoeling van het breekpunt te bepalen wanneer het dier reageert, een belangrijke parameter van de progressieve verhouding paradigma sessielengte. Eindige sessie lengtes kan een vals pet op breekpunt waarden te zetten en dit kan worden verergerd door pre-behandelingen die abnormaal verminderen de snelheid van zelf-toediening of die stijging na versterking pauzeren. Deze verwarren kan worden overwonnen door een aantal benaderingen,.. Bijvoorbeeld sessies opgeheven wanneer het dier is ingehouden reageert op een meervoud van de gemiddelde inter-infusie interval 44 Een algemeen toegepaste variant van deze benadering is om sessies te beëindigen zodra reageren heeft ingehouden door een empirisch bepaalde waarde die constant over onderwerpen wordt gehouden. We hebben de methode om deze aanpak toe te passen in stap 4.4.9.11 verstrekt.

Knaagdieren en mensen reageren op opmerkelijk vergelijkbare wijzen op gedragsrelevante stimuli1-3. Dit suggereert dat knaagdieren geschikte proefpersonen zijn voor het verduidelijken van de moleculaire substraten van gedrag en complexe psychiatrische aandoeningen4. Het begrijpen van de moleculaire substraten van complexe gedragsprocessen, zoals motivatie, vereist vaak hersenmicro-injectie. Zowel de hersenmicro-injectietechniek als een primaire motivatie-assay zullen hier worden gepresenteerd. Ratten zullen als proefpersonen worden gebruikt, maar deze procedures kunnen gemakkelijk worden aangepast voor goed behandelde muizen. Inbegrepen zijn hier procedures voor de fabricage van de benodigde canule, obturators (dummy canule of stijletten) en micro-injectoren. De gepresenteerde methode is aanzienlijk flexibeler en kosteneffectiever dan voorgefabriceerde implementa. Deze flexibiliteit zal waardevol blijken bij het optimaliseren van omstandigheden. Belangrijk is dat omdat de micro-injectieprocedure kan worden gebruikt om een groot aantal hypothesen te testen; de hier gepresenteerde technieken zouden breed toepasbaar moeten zijn. Bijvoorbeeld, receptorliganden kunnen worden micro-geïnjecteerd om neurochemie te begrijpen3,5,6; cel-permeabele peptiden en kleine moleculen kunnen worden micro-geïnjecteerd om intracellulaire signaalroutes te begrijpen7-10; toxines, ionkanaalblokkers of antagonistcocktails kunnen worden micro-geïnjecteerd om circuits te begrijpen1,11,12.
Hoewel het generieke protocol dat hier wordt gepresenteerd gemakkelijk kan worden aangepast door de gebruiker voor hun specifieke behoeften, is de procedure bijzonder goed geschikt voor gedragsanalyses aangezien micro-injectie plaatsvindt bij wakkere knaagdieren die slechts onder milde handbeperking zijn. Geen anesthesie of speciale beperkingen zijn vereist. Dit is mogelijk omdat de hersenen zelf geen pijngevoel hebben. Als er echter geen anesthesie wordt gebruikt, moet micro-injectie plaatsvinden via canule die eerder stereotactisch waren geïmplanteerd. Dit is omdat nociceptoren aanwezig zijn op de hoofdhuid, hersenvliezen,13 die de membranen rond de hersenen zijn, en het periosteum,14 dat de membraan is die de schedel bedekt. Er moet worden opgemerkt dat micro-injectie onder anesthesie soms wenselijk is. Een voorbeeld is wanneer het virus wordt geïnjecteerd en men het virus mogelijk rechtstreeks wil injecteren via roestvrijstalen naalden15 of glazen pipetten, omdat dit weefselschade kan verminderen en de transductie-efficiëntie kan verbeteren.16,17 De micro-injectoren die hieronder worden beschreven, kunnen hiervoor worden aangepast en suggesties over hoe dit te doen, zijn te vinden in de Discussie. Omdat andere JoVE-artikelen stereotactische hersencanule-implantatie hebben gedemonstreerd,18-20 zullen deze procedures hier niet worden behandeld.
We presenteren deze micro-injectieprocedures samen met een assay die motivatie kwantificeert. Verschillende knaagdierenmodellen van gemotiveerd gedrag worden momenteel gebruikt, zoals de runway-box en barrièreschaling. Hier beschrijven we hoe een operante progressieve verhoudingsversterkingsschema te gebruiken om motivatie te kwantificeren waarbij operant reageren wordt gehandhaafd door een beloning. Reageren op de progressieve verhouding is responsief op de grootte van de beloning.21,22 Dienovereenkomstig wordt deze assay routinematig gebruikt als een proxy voor motivatie en/of versterkende werkzaamheid. 21,23-30 Omdat verschillende uitstekende reviews dit onderwerp in detail hebben behandeld,21,24 zullen we ons voornamelijk concentreren op praktische zorgen.

<table><tbody><tr><td>Cannula Tubing</td><td>Amazon Supply/ Small Parts</td><td>HTXX-26T-60</td><td>26 G, Hypotube S/S 316-TW 26GA</td></tr><tr><td>Obturator</td><td>Amazon Supply/ Small Parts</td><td>GWXX-0080-30-05</td><td>33 gauge, Wire S/S 316LVM 0.008 IN</td></tr><tr><td>Microinjector Wire</td><td>MicroGroup</td><td>33RW 304</td><td>33 gauge</td></tr><tr><td>Super Glue</td><td>Loctite</td><td>3924AC</td><td>Liquid, Non-gel, kan worden geautoclaveerd</td></tr><tr><td>Microinjector Plastic Tubing</td><td>Becton Dickson</td><td>427406</td><td>PE20</td></tr><tr><td>Medium Weight Hemostats</td><td>World Precision Instruments</td><td>501241-G</td><td></td></tr><tr><td>Ruler</td><td>Fisher</td><td>09-016</td><td>150 mm</td></tr><tr><td>#7 Forceps</td><td>Stoelting</td><td>52100-77</td><td>Dumont, Dumostar</td></tr><tr><td>Rotary Tool</td><td>Dremmel</td><td>285</td><td>Twee snelheden</td></tr><tr><td>Cut-off Disc</td><td>McMaster Carr</td><td>3602</td><td>15/16" x 0.025"</td></tr><tr><td>Microinjection Pump</td><td>Harvard Apparatus</td><td>PhD 2000</td><td></td></tr><tr><td>1 ul Glass Syringe</td><td>Hamilton</td><td>7001KH</td><td>Naaldstijl: 25s/2.75"/3</td></tr><tr><td>Cotton Tipped Applicator</td><td>Fisher</td><td>23-400-101</td><td></td></tr><tr><td>Lab Wipes</td><td>Kimwipes</td><td>34133</td><td></td></tr><tr><td>Operant Software</td><td>Coulbourn</td><td>Graphic State</td><td></td></tr><tr><td>Operant Chambers</td><td>Coulborun</td><td>Habitest</td><td></td></tr></tbody></table>

knaagdieren brain micro-injectie om te studeren molecular substraten van gemotiveerd gedrag

Rodent Brain Microinjection to Study Molecular Substrates of Motivated Behavior

Hersenmicroinjectie kan helpen bij het ophelderen van de moleculaire substraten van complex gedrag, zoals motivatie. Hiervoor kunnen knaagdieren dienen als geschikte modellen, deels omdat de reactie op gedragsrelevante stimuli en de circuitiek die stimulus-actie-uitkomsten verwerkt verrassend vergelijkbaar is tussen mensen en knaagdieren. Bij het bestuderen van moleculaire substraten van complex gedrag is de microinjectie van reagentia die specifieke systemen wijzigen, versterken of dempen een onschatbare techniek. Het is echter van cruciaal belang dat de microinjectieplaats precies wordt gericht om de interpretatie van de resultaten te ondersteunen. We presenteren een methode voor de vervaardiging van chirurgische instrumenten en microinjectienaalden die nauwkeurige microinjectie en onbeperkte aanpasbaarheid met minimale kosten mogelijk maakt. Belangrijk is dat deze techniek met succes kan worden voltooid bij wakkere knaagdieren als deze wordt uitgevoerd in combinatie met andere JoVE-artikelen die de vereiste chirurgische procedures behandelden. Bovendien zijn er veel gedragsparadigma's die goed geschikt zijn voor het meten van motivatie. De progressieve ratio is een veel gebruikte methode die de effectiviteit van een versterker kwantificeert om respons te handhaven ondanks een (vaak exponentieel) toenemende arbeidsvereiste. Deze test is gevoelig voor versterkergrootte en farmacologische manipulaties, waardoor de versterkende effectiviteit en/of motivatie kan worden bepaald. We presenteren ook een eenvoudige aanpak om operante software te programmeren om een progressieve ratio-versterkingsschema te accommoderen.

Hier illustreren we voorbeelden van resultaten die kunnen worden verkregen met de bovenstaande procedure. Getoond eerste is een typisch gebied dat is getransfecteerd met virale vectoren (Figuur 3). In het algemeen wordt een getransfecteerde volume van ~ 1 mm 3 verkregen striatale weefsels. Het volume van de getransfecteerde gebied kan worden gekwantificeerd over seriecoupes volgens methode Cavalieri 32 Belangrijk is dat de getransfecteerde volume hangt af van vele factoren zoals het soort weefsel dat wordt getransfecteerd.; virale serotype; promotor; snelheid en volume geïnjecteerd; aantal deeltjes geïnjecteerd; injectaat pH; en of hyperosmolaire reagentia, zoals mannitol, werden gebruikt. 33,34 Typisch, microinject we 10 12 deeltjes / ml, 1 pl / kant over 10 min, en laat 7 extra minuten voorafgaand aan het vervangen obturators. Bovendien, het injectaat in het algemeen ongeveer pH 8. Vervolgens laten we zien dat motivatie kunnen worden gemanipuleerd door hetzij transgenexpressie (figuur 4)of farmacologische reagens micro-injectie (Figuur 5). In figuur 4, hebben wij op een Designer Receptor Exclusief geactiveerd door Designer Drugs (DREADDs). De DREADD-receptor coderende gebied werd gevolgd door een interne Ribosoom Entry Site en een mCitrine cassette. De mCitrine maakt gemakkelijke visualisatie van getransfecteerde cellen. De DREADD werd gekoppeld aan de heterotrimere G-eiwit Gaq. Activering van de Gaq gekoppelde DREADD kan astrocyten, 28,35 en DREADD zelf gestimuleerd kan worden geactiveerd door systemische toediening van clozapine-N-oxide (CNO, 3 mg / kg, ip). 14,22,36 Ratten werden getraind om hefboom reageren voor ethanol versterking, waarbij 3 hefboompersen leverde 1 kans om te drinken tijdens dagelijks 1 uur sessies meer dan 60 aaneengesloten dagen. Vervolgens werden ratten gedwongen onthouding en Gaq gekoppelde DREADDs werden uitgedrukt in nucleus accumbens kern astrocyten. Na 3 weken onthouding, de motivatie om zelf-admi<html> Nister ethanol werd gemeten door breekpunt. 21,27-30 Activering van nucleus accumbens kern astrocyten, via systemische toediening CNO, daalde de motivatie van ratten ethanol zelftoediening hervatten na onthouding ten opzichte van het voertuig. Belangrijk CNO had geen effect op gelijkwaardige getrainde cohort dat uitte Green Fluorescent Protein plaats van de DREADD. <img alt="Figuur 3" src="/files/ftp_upload/53018/53018fig3.jpg" /> Figuur 3. Vertegenwoordiger ventrale striatum regio getransfecteerd door gemicroinjecteerd virus. Deze afbeelding toont de regio nucleus accumbens astrocyten die werden getransfecteerd door het volgen van de bovenstaande methode. De gegevens worden overgenomen uit Bull et al. 13 met toestemming van de copyrighthouder. Details zijn te vinden in deze publicatie en de bijbehorende aanvullend materiaal.blank &quot;&gt; Klik hier om een ​​grotere versie van deze figuur te bekijken. <img alt="Figuur 4" src="/files/ftp_upload/53018/53018fig4.jpg" /> Figuur 4. Motivatie van de ratten zichzelf toedienen ethanol werd gereduceerd door het activeren van een transgen dat was over-uitgedrukt in de nucleus accumbens kern astrocyten. Virus werd gemicroinjecteerd en motivatie gemeten via breekpunt na aftrek één week voor het virus uit te drukken. De transgene uitgedrukt werd een Designer Receptor Exclusief geactiveerd door Designer Drugs (DREADDs). Een eenzijdige ANOVA (F (2,30) = 3,29, p = 0,04), gevolgd door Scheffe post-hoc gebleken dat de activering van de DREADD door systemische toediening van clozapine-N-oxide (CNO, 3 mg / kg, ip ) verminderde significant de motivatie van ratten zichzelf toedienen ethanol na onthouding opzichte voertuig CNO geen effect op gelijkwaardige getrainde cohort dat uitte Green Fluorescent Protein (GFP hadden) in plaats van de DREADD. De gegevens worden overgenomen uit Bull et al. 13 met toestemming van de copyrighthouder. Details zijn te vinden in deze publicatie en de bijbehorende aanvullend materiaal. <img alt="Figuur 5" src="/files/ftp_upload/53018/53018fig5.jpg" /> Figuur 5. Micro-injectie van gap junction blokkers vergroot de motivatie van ratten zelftoediening ethanol na onthouding twee gap junction blockers werden geëvalueerd op hun effect op de motivatie (gemeten via breekpunt) van ratten zelftoediening ethanol. Mefloquine en 18- a-glycyrrhetinezuur (18-α). Een twee-weg ANOVA toonde dat micro-injectie van gap-junction blockers in de nucleus accumbens kern vergroot de motivatie van ratten zelftoediening ethanol na onthouding (F (3,40) = 5,56, p = 0,003). De gegevens worden overgenomen uit Bull et al. 13 met toestemming van de copyrighthouder. Details zijn te vinden in deze publicatie ende bijbehorende aanvullende materiaal.

Knaagdieren zijn een geschikt model om de moleculaire substraten van gedrag en complexe psychiatrische stoornissen te onderzoeken. Hersenmicro-injectie bij wakkere knaagdieren kan worden gebruikt om ziekte-substraten te verduidelijken. Een efficiënte en aanpasbare hersenmicro-injectiemethode evenals de uitvoering van een operante paradigma dat motivatie kwantificeert wordt gepresenteerd.

Knaagdieren Brain Micro-injectie om te studeren Molecular substraten van gemotiveerd gedrag

Brain microinjection can aid elucidation of the molecular substrates of complex behaviors, such as motivation. For this purpose rodents can serve as ...

Het algemene doel van deze procedure is het nauwkeurig vervaardigen van een canule en micro-injectoren, evenals het correct uitvoeren van de micro-injectie. Dit wordt bereikt door eerst een canule op de juiste lengte te vervaardigen. De tweede stap bestaat uit het snijden en assembleren van de micro-injectoren.Bereid vervolgens de micro-injectoren, slangetjes en een pomp voor de micro-injectie voor. De laatste stap is het voltooien van de micro-injectie en het laten verstrijken van een diffusieperiode. Uiteindelijk wordt micro-injectie gebruikt om reagentia nauwkeurig in de gewenste hersenregio te injecteren, waarbij de juiste hanteertechniek wordt gedemonstreerd.Tijdens de micro-injectie zal Ryan Poland, een student in mijn laboratorium, aanwezig zijn. Over het algemeen hebben personen die nieuw zijn met deze methode moeite, omdat er bijzondere zorgvuldigheid geboden is en alle stappen grote aandacht vereisen om een correcte plaatsing van de canule en de locatie van de micro-injectie te garanderen. Om de canule voor te bereiden, trekt u eerst met een fijne pen een referentielijn van 15 millimeter op de tape.Gebruik dit vervolgens als leidraad om de secties van 15 millimeter opeenvolgend op de slang te markeren met een scherpe permanente marker. Maak daarna inkepingen in de canule-slang door deze tegen de langzaam draaiende afsnijschijf van het roterende gereedschap te houden. Draai de canule bij de gemarkeerde punten 180 graden en maak een inkeping aan de tegenoverliggende zijde van de slang.Snijd de slang niet volledig door, omdat dit kan leiden tot occlusie. Buig de slang daarna scherp om deze in secties van 15 millimeter te breken. Houd vervolgens elk uiteinde van de canule tussen duim en wijsvinger loodrecht op de afgesneden schijf vast.Draai de canulebuis terwijl u de punt tegen het oppervlak van de aphidsnijdschijf drukt om een stompe punt te creëren. Bree door vervolgens beide uiteinden van de canule met een schuine naald van 26 gauge om ervoor te zorgen dat alle bramen zijn verwijderd en dat de canule vrij is van obstructies. Om de obturateurklem voor te bereiden, klemt u één canule op ongeveer de helft van de lengte met rechtlijnig hemostatisch instrument van gemiddeld gewicht; leg de vergrendelde hemostaat op de werkbank zodat de canule loodrecht op de werkbank staat.Voer vervolgens één uiteinde van de ator-draad in de canule tot deze de werkbank bereikt. Buig de draad door met de vingers te knijpen totdat een hoek van 30 graden is bereikt, terwijl het contact tussen de obturator en de werkbank behouden blijft. Verwijder daarna de draad uit de canule en knip het overtollige gedeelte op 2,5 millimeter van de buiging af met kleine zijknippers.Houd bij deze procedure één uiteinde van de micro-injectieslang loodrecht vast met een vergrendelde rechte hemostat. Draai de hemostat terwijl er spanning op de slang blijft staan en wikkel deze ten minste één keer strak rond de hemostat. Meet vervolgens 32 millimeter vanaf het tegenoverliggende losse uiteinde van de micro-injectieslang en pak dit punt loodrecht vast met een tweede hemostat.Buig de slang herhaaldelijk heen en weer terwijl de spanning wordt gehandhaafd totdat deze breekt. Inspecteer vervolgens de slang van de micro-injector om te controleren of beide uiteinden recht zijn en of de binnendiameter vrij is van obstructies. Trek een referentielijn van 5 mm op het meetlint en markeer opeenvolgend secties van 5 mm op de canule-slang met een watervaste marker.Raak vervolgens met de canulebuis de langzaam draaiende afsnijschijf aan op de gemarkeerde punten om inkepingen in de buis te maken. Buig daarna de hulsbuis van de micro-injector scherp om deze in secties van vijf millimeter te breken. Schuif op elke micro-injectiebuis een huls over op ongeveer twee centimeter van het uiteinde.Breng een kleine hoeveelheid secondelijm aan op de micro-injectiebuis op vijf millimeter van één uiteinde. Schuif vervolgens de huls over de lijmbead, zodat deze zich op één millimeter van het uiteinde van de micro-injectiebuis bevindt. Bedek daarna beide uiteinden van de huls met lijm.Bevestig vervolgens een naald van 26 gauge aan de spuit van één milliliter gevuld met steriel water. Schuif het stuk micro-injectieplasticbuis van acht centimeter over de naald, waarbij u er op let dat u de buis niet doorboort; schuif daarna het andere uiteinde van de plasticbuis over het kraaguiteinde van de gedroogde micro-injector. Druk de zuiger van de met water gevulde spuit in om te testen op patentie. Buig in deze stap de voltooide micro-injector op 15 millimeters vanaf het uiteinde tegenover de kraag met 95 graden.Snijd vervolgens de plastic slang af op 70 centimeter en schuif deze over de kraag van de micro-injector. Om de pomp voor de micro-injectie voor te bereiden, stelt u op de slang de diameter van de micro-injectienaald, de gewenste infusiesnelheid en het doelinjectievolume in. Zet daarna de pompmodus op volume, zodat er automatisch een nauwkeurig volume wordt afgeleverd.Pas vervolgens de aanslag van de pomp aan, zodat de spuit kan worden gevuld tot het injectievolume plus een extra 0,2 µL. Plaats nu de punt van de gasdichte spuit in het steriele water in een klein weegschalletje en beweeg de zuiger voorzichtig heen en weer om de interne draad gelijkmatig te smeren. Trek de zuiger naar de aanslag van de pomp om de microinjectienaald met water te vullen.Volgende dia. De PE 20-slang die is verbonden met de micro-injector is bevestigd aan een naald van 26 gauge, die op zijn beurt is bevestigd aan een spuit van één milliliter gevuld met steriel water. Spuit steriel water door de micro-injector en inspecteer het spuitpatroon en de afstand.Plaats vervolgens een gesteriliseerde micro-injector op een steriel veld. Schuif de slang van de naald af en knip de slang onder het door de naald beschadigde gebied door, terwijl u de slang rechtop houdt om te voorkomen dat er water uitloopt. Duw daarna de zuiger van de micro-injectorspuit voorzichtig naar voren om een druppel aan het uiteinde van de naald te vormen en schuif de met water gevulde PE 20-slang over de naald.Duw daarna de zuiger volledig naar voren ter voorbereiding op het laden van het monster en zorg ervoor dat er geen sporen van ethanol in de micro-injector achterblijven. Controleer de opstelling op lekken door de waterdruppel die zich aan de punt van de micro-injector vormt een paar keer aan te raken met een schoon laboratoriumdoekje. Trek vervolgens de zuiger van de spuit 0,2 µL terug om een luchtbel te creëren tussen het steriele water en de PE 20-tubulatuur en de te injecteren oplossing.Plaats daarna de micro-injector in het te injecteren reagens en trek de zuiger van de spuit langzaam naar de aanslag. Om het dier voor te bereiden op de injectie, houdt de experimentator de borst van de rat tegen zijn of haar eigen borst aan. Reinig het gebied rond de canule met een wattenstaafje gedrenkt in Betadine.Veeg de kopkap drie keer af met Betadine en vervolgens twee keer met ethanol. Plaats daarna de gevulde micro-injector in de canule. Druk op start op de micro-injectiepomp en volg de beweging van de luchtbel.Wanneer de injectie voltooid is, verwijdert u de micro-injector uit de canule en vervangt u deze door een obturator. Deze figuur toont de transfectie van de astrocytenregio in de nucleus accumbens door middel van een micro-geïnjecteerd virus, en deze figuur toont de vermindering van de motivatie van ratten om ethanol zelf toe te dienen door activering van een transgen dat overexpressie vertoonde in de nucleus accumbens. Activering van DREAD in de astrocyten van de nucleus accumbens door systemische toediening van CNO verminderde de motivatie van ratten om ethanol zelf toe te dienen na onthouding significant in vergelijking met vehicle CNO, wat geen effect had bij een gelijkwaardig getrainde cohort die GFP tot expressie bracht in plaats van de DREAD.Deze techniek maakt de mogelijkheid voor op maat gemaakte instrumenten voor hersenmicroinjecties en biedt meer flexibiliteit in experimentele procedures. Tijdens het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om te onthouden dat een precieze locatie van de microinjectie essentieel is om het gewenste effect te bereiken.

rodent-brain-microinjection-to-study-molecular-substrates-motivated

Research

JoVE Journal

Behavior

Gedrag

De controle van de extracellulaire neurotransmitter niveaus in verschillende gebieden van de hersenen van vrij bewegende dieren biedt inzichten over het verband tussen neurotransmitters en gedrag. In vivo microdialyse gekoppeld met elektrochemische detectie zorgt voor een uitstekende anatomische en chemische resolutie, en informatie over hoe basale neurotransmissie wordt aangepast door farmacologische of fysiologische manipulaties.

Survivable stereotaxische Chirurgie in Knaagdieren

Source: Poland, R. et al. Rodent Brain Microinjection to Study Molecular Substrates of Motivated Behavior. J. Vis. Exp. (2015)In this video, a water-filled microinjection setup consisting of a syringe and microinjector tubing is used for precise drug delivery. A rat with a pre-implanted guide cannula undergoes targeted brain microinjection, enabling accurate administration of therapeutic agents in awake animals with minimal tissue damage.

Microinjection-Based Delivery of a Therapeutic Agent into an Awake Rodent Brain

This protocol outlines the assembly and use of an injectrode for precise drug delivery into targeted brain regions of an anesthetized rat, followed by monitoring of neuronal activity through recorded electrical signals.

Drug Microinjection with Electrophysiological Recording in a Rat Brain

Source: Paolone, G., et al. Personalized Needles for Microinjections in the Rodent Brain. J. Vis. Exp. (2018).This video demonstrates a rodent brain microneedle injection using a quartz microneedle with holes. The microneedle is attached to a syringe and micropump to control the delivery rate. The needle with the injection solution is inserted into the brain with the delivery speed set at low. Once positioned, the delivery speed is increased. The needle is withdrawn after a brief pause.

Rodent Brain Microinjection Using a Quartz Microneedle

MicroRNA een belangrijke rol spelen in hersenstructuur en functie. Hier beschrijven we een methode om hippocampus miRNA dwingen over-expressie met behulp van stereotactische injectie van een aangelegde miRNA-expressie lentivirus. Deze benadering kan dienen als een relatief snelle manier om te...

Stereotactische injectie van MicroRNA expressie Lentivirussen om de muis Hippocampus CA1 regio en Evaluatie van de Behavioral Outcome

In dit artikel wordt beschreven hoe u virale vectoren microinject in de hersenen van muizen en vervolgens te testen in een geconditioneerde voorkeur paradigma plaats die een overname, uitsterven en herstel fase omvat.

Stereotactische Micro-injectie van virale vectoren uitdrukken Cre Recombinase om de rol van Target Genen in Cocaine Geconditioneerd Place Voorkeur Studie

Hier maken we een glazen pipette met twee functies: remming van diepe hersenstructuren door micro-injecties van geneesmiddelen en real-time monitoring van hun effecten door gelijktijdige elektrofysiologische opnames.

Gelijktijdig Elektrofysiologische opname en Micro-injecties van remmende middelen in de knaagdierhersenen

Stereotactische injectie van lentivirussen uiten cDNAs of shRNAs kan genexpressie moduleren in specifieke hersengebieden van muizen. Hier presenteren we een protocol om stereotactische injecties te combineren met gedragsproblemen taken, zoals het open veld Test (OFT) en de Gedwongen Swim Test (FST).

Het toepassen van stereotactische injectie techniek om genetische effecten op Animal Gedrag Studie

Deze procedure beschrijft de verzameling van discrete bevroren hersengebieden om hoogwaardige eiwitten en RNA te verkrijgen met behulp van goedkope en algemeen beschikbare tools.

Verzameling van bevroren knaagdierhersengebieden voor downstreamanalyses

Hier wordt een stereotactische procedure beschreven die zich kan richten op uitdagende en moeilijk bereikbare hersengebieden (vanwege ruimtelijke beperkingen) met behulp van een schuine coronale benadering. Dit protocol is aanpasbaar aan zowel muis- als rattenmodellen en kan worden toegepast op diverse neurowetenschappelijke toepassingen, waaronder canule-implantatie en micro-injecties van virale constructies.

Aanpasbare schuine stereotactische benadering voor veelzijdige neurowetenschappelijke technieken

Leer hersenmicro-injectie bij knaagdieren om moleculaire substraten van gemotiveerd gedrag te bestuderen. Deze methode omvat het vervaardigen van cannules en micro-injectoren met precisie.

Knaagdieren Brain Micro-injectie om te studeren Molecular substraten van gemotiveerd gedrag

Meer video's verkennen