Name: Forward Genetische Aanpak stress resistentiegenen in Muizen Ontdek - Een High-throughput scherm in ES-cellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-11-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 40 s
Description: Leer een high-throughput screeningsmethode voor stressresistentie in embryonale stamcellen om muismodellen voor verouderingsonderzoek te genereren. Deze techniek identificeert genen die bijdragen aan gezonde levensduur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

We willen het Wellcome Trust Sanger Institute bedanken voor de geschenken van piggyBac transposon en piggyBac transposase. Dit werk werd ondersteund door de Butcher-subsidie van Colorado en de NIH R01 AG041801 (W.S.C).

<ol><li>Johnson, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longevity+genes+in+the+nematode+Caenorhabditis+elegans+also+mediate+increased+resistance+to+stress+and+prevent+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Inherit+Metab+Dis%22%5BJournal%5D)">Longevity genes in the nematode Caenorhabditis elegans also mediate increased resistance to stress and prevent disease.</a> J Inherit Metab Dis. 25, 197-206 (2002).</li>
<li>Murakami, S., Salmon, A., Miller, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplex+stress+resistance+in+cells+from+long-lived+dwarf+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Faseb+J%22%5BJournal%5D)">Multiplex stress resistance in cells from long-lived dwarf mice.</a> Faseb J. 17, 1565-1566 (2003).</li>
<li>Perez, V. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+overexpression+of+major+antioxidant+enzymes+does+not+extend+the+lifespan+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">The overexpression of major antioxidant enzymes does not extend the lifespan of mice.</a> Aging Cell. 8, 73-75 (2009).</li>
<li>Martin, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+engineering+of+mice+to+test+the+oxidative+damage+theory+of+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+NY+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Genetic engineering of mice to test the oxidative damage theory of aging.</a> Ann NY Acad Sci. 1055, 26-34 (2005).</li>
<li>Chick, W. S., Drechsel, D. A., Hammond, W., Patel, M., Johnson, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transmission+of+mutant+phenotypes+from+ES+cells+to+adult+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mamm+Genome%22%5BJournal%5D)">Transmission of mutant phenotypes from ES cells to adult mice.</a> Mamm Genome. 20, 734-740 (2009).</li>
<li>Ramirez-Solis, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+DNA+microextraction%3A+a+method+to+screen+numerous+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">Genomic DNA microextraction: a method to screen numerous samples.</a> Anal Biochem. 201, 331-335 (1992).</li>
<li>Uren, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-throughput+splinkerette-PCR+method+for+the+isolation+and+sequencing+of+retroviral+insertion+sites%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">A high-throughput splinkerette-PCR method for the isolation and sequencing of retroviral insertion sites.</a> Nat Protoc. 4, 789-798 (2009).</li>
<li>Wang, W., Bradley, A., Huang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+piggyBac+transposon-based+genome-wide+library+of+insertionally+mutated+Blm-deficient+murine+ES+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Res%22%5BJournal%5D)">A piggyBac transposon-based genome-wide library of insertionally mutated Blm-deficient murine ES cells.</a> Genome Res. 19, 667-673 (2009).</li>
<li>Chick, W. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Screening+for+stress-resistance+mutations+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Genet%22%5BJournal%5D)">Screening for stress-resistance mutations in the mouse.</a> Front Genet. 5, 310(2014).</li>
<li>Salmon, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibroblast+cell+lines+from+young+adult+mice+of+long-lived+mutant+strains+are+resistant+to+multiple+forms+of+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Fibroblast cell lines from young adult mice of long-lived mutant strains are resistant to multiple forms of stress.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 289, 23-29 (2005).</li>
<li>Skarnes, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+public+gene+trap+resource+for+mouse+functional+genomics%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">A public gene trap resource for mouse functional genomics.</a> Nat Genet. 36, 543-544 (2015).</li>
<li>Baker, K. E., Parker, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonsense-mediated+mRNA+decay%3A+terminating+erroneous+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Nonsense-mediated mRNA decay: terminating erroneous gene expression.</a> Curr Opin Cell Biol. 16, 293-299 (2004).</li>
<li>Shigeoka, T., Kawaichi, M., Ishida, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+nonsense-mediated+mRNA+decay+permits+unbiased+gene+trapping+in+mouse+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Suppression of nonsense-mediated mRNA decay permits unbiased gene trapping in mouse embryonic stem cells.</a> Nucleic Acids Res. 33, e20(2004).</li>
<li>Symula, D. J., Zhu, Y., Schimenti, J. C., Rubin, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+annotation+of+mouse+mutations+in+embryonic+stem+cells+by+use+of+expression+profiling%5BTitle%5D)+AND+%22Mamm+Genome%22%5BJournal%5D)">Functional annotation of mouse mutations in embryonic stem cells by use of expression profiling.</a> Mamm Genome. 15, 1-13 (2004).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Forward genetische analyse maakt een onbevooroordeelde ondervraging van het genoom mogelijk voor genen die verantwoordelijk zijn voor een specifiek fenotype. Deze methode is zeer krachtig om nieuwe genfuncties te ontdekken. Het is veel gebruikt bij lagere organismen, maar niet bij zoogdieren, zoals muizen, voornamelijk vanwege de extreem hoge kosten die gepaard gaan met de infrastructuur en logistiek die dit met zich meebrengt. Hier hebben we het genetische screeningsproces verplaatst naar het ES-celkweekplatform, waa...

Levensduur heeft een intieme relatie met stressbestendigheid. In het algemeen, langlevende soorten vaak aantonen verhoogde weerstand tegen meerdere stressoren, zoals waterstofperoxide, paraquat (PQ), UV, hitte en zware metalen 1,2. Daarentegen verhoogde stressgevoeligheid neigt kortere levensduur en / of een ziekte-gevoelig fenotype voorspellen. De anti-oxidant scavenging route is lang gespeculeerd een belangrijke rol spelen bij het verlenen van stressresistentie aan het dier. Echter, met weinig uitzonderingen, studies van verschillende transgene dieren manipulaties in diverse anti-oxidant enzymen (bijvoorbeeld SOD) geven aan dat het verhogen van het oxidatiemiddel scavenging enzymen niet verhoogt levensduur of de gezondheid overspanning 3. Deze gegevens suggereren dat de stressresistentie eigenschap consistent waargenomen in langlevende dieren wordt gemedieerd door andere cellulaire routes nog worden blootgesteld aan. We namen een onbevooroordeelde vooruitgenetische benadering genen die bij gemuteerd, kan een stress-resistentie fenotype in gekweekte embryonale stamcellen (ES) cellen verlenen identificeren. ES-cellen bieden twee belangrijke voordelen in deze studie: (1) verfijnde genetische manipulaties zijn voor het genoom van de ES-cellen te wijzigen; en (2) stress resistente ES-cellen gewonnen uit het scherm kan direct worden gebruikt voor muizen produktie, waardoor een snelle vertaling in geheel dierproeven levensduur en gezondheid overspanning meten. In dit rapport beschrijven we het gebruik van C9 ES cellijn, waarbij de Blm allelen werden onder controle van een tetracycline responsieve element. Behandeling van doxycycline (DOX) kortstondig uitgeschakeld de uitdrukking van Blm leidt tot verhoogde incident van zusterchromatide uitwisseling. Deze korte-termijn Blm knock-out termijn voor het genereren van homozygote mutaties in de populatie heterozygote zodat recessieve mutaties voor stressbestendigheid kan worden meegenomen in de screening. Weook beschreven het gebruik van piggyBac (PB) transposon als mutageen willekeurig invoegen poly-A trap cassette (PB-UPA) te muteren genen in het genoom. Cellen met verstoring van een gen door de poly-A val werd G418 resistente en kon worden hersteld, zodat een verzameling van gen-trap mutanten (gen-trap bibliotheek) zou kunnen worden gemaakt, en vervolgens gescreend op mutante klonen die stressbestendig zijn. Stress resistente klonen gewonnen uit de selectie kan vrij snel worden gekarakteriseerd door moleculaire technieken ten aanzien van het aantal inserties (qPCR), de plaats van invoeging (splinkerette PCR), de identiteit van het verstoorde gen (BLAST) en het expressieniveau ( RT-qPCR). De PB insertie kan remobilized door transiënte expressie van MPB transposase in de kloon met het wild-type DNA-sequentie te herstellen en aldus testen voor het verlies van stressresistentie. Dit zijn krachtige manieren om causaliteit van de mutatie te bevestigen dat vooraf moet worden gedaandure muis productie. Eerdere studies toonden aan dat cellen blootgesteld aan stressoren verloren hun pluripotentie 4,5. Dus, in dit protocol, het behoud van een replica set van gemuteerde cellen, die niet zou worden behandeld met stressoren is van cruciaal belang voor een succesvolle muis productie. Ons laboratorium heeft de C9 ES-cellijn en de PB-UPA vector ontworpen, beide zijn beschikbaar voor andere onderzoekers op verzoek. Het protocol hier gerapporteerde start door het genereren van de novo bibliotheek van gen-gevangen ES-cellen met PB-UPA (figuur 1A), gevolgd door replica plating en stress selectie stress resistente klonen (figuur 1B) te isoleren. We toonden de selectie met paraquat, een krachtige vrije radicalen generator in de cellen. Vrijwel elke cytotoxische verbinding of toxine, bijvoorbeeld ER ​​stressoren (bijvoorbeeld thapsigargin en tunicamycine), neuronale oxidant (bijv MPP +, 6-hydroxy dopamine en rotenon), hitte en zwaremetalen (bijvoorbeeld Cd, Se), kunnen worden aangepast om de werkwijze te selecteren voor respectieve resistente mutanten.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Vector</td></tr><tr><td>PB-UPA</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>mPBase</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>mPBasePuro</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Weefselcultuur</td></tr><tr><td>500-ml Stericup filters</td><td>EMD Millipore</td><td>SCGPU05RE</td><td></td></tr><tr><td>250-ml Stericup filters</td><td>EMD Millipore</td><td>SCGPU02RE</td><td></td></tr><tr><td>50-ml Steriflip-GV filters</td><td>EMD Millipore</td><td>SE1M179M6</td><td></td></tr><tr><td>KO DMEM</td><td>Life Technologies</td><td>10829-018</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D6429</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Tissue Culture Biologicals</td><td>104</td><td></td></tr><tr><td>Heat Inactivated FBS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F4135-500</td><td></td></tr><tr><td>LIF</td><td>EMD Millipore</td><td>ESG1107</td><td></td></tr><tr><td>Non-essential Amino Acids</td><td>Life Technologies</td><td>11140-050</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX</td><td>Life Technologies</td><td>35050-061</td><td></td></tr><tr><td>Pen/Strep</td><td>Life Technologies</td><td>15140148</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-Mercaptoethanol</td><td>Life Technologies</td><td>21985-023</td><td></td></tr><tr><td>Methyl Viologen dichloride (Paraquat)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>856177</td><td></td></tr><tr><td>Dimethyl Sulphoxide Hybri-MAX</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>EmbryoMAX 0.1% gelatin</td><td>EMD Millipore</td><td>ES006B</td><td></td></tr><tr><td>DPBS/Modified</td><td>HyClone</td><td>SH30028.02</td><td></td></tr><tr><td>0.25% Trypsin-EDTA</td><td>Life Technologies</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>T25 Flask</td><td>Corning</td><td>353108</td><td></td></tr><tr><td>T75 flask</td><td>Corning</td><td>353135</td><td></td></tr><tr><td>100-mm&nbsp; plate</td><td>Corning</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>150-mm&nbsp; plate</td><td>Corning</td><td>430599</td><td></td></tr><tr><td>96-well&nbsp; plate</td><td>Corning</td><td>3585</td><td></td></tr><tr><td>96-well U-bottom plate</td><td>Corning</td><td>3799</td><td></td></tr><tr><td>24-well plate</td><td>Corning</td><td>3526</td><td></td></tr><tr><td>50-ml reservoir&nbsp;</td><td>Corning</td><td>4870</td><td></td></tr><tr><td>15-ml tubes</td><td>VWR International, LLC</td><td>82050-276</td><td></td></tr><tr><td>Primary Mouse Embryonic Fibroblasts</td><td>EMD Millipore</td><td>PMEF-NL</td><td></td></tr><tr><td>DR4 Mouse Embryonic Fibroblasts</td><td>Applied StemCell</td><td>ASF-1001</td><td></td></tr><tr><td>Mitomycin C</td><td>Fisher BioReagents&nbsp;</td><td>BP25312</td><td></td></tr><tr><td>Geneticin (G418)</td><td>Life Technologies</td><td>11811-023</td><td></td></tr><tr><td>Doxycycline</td><td>Fisher BioReagents&nbsp;</td><td>BP26531</td><td></td></tr><tr><td>Cryotubes</td><td>Thermo Scientific</td><td>377267</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge&nbsp;</td><td>Eppendorf</td><td>Centrifuge 5702</td><td></td></tr><tr><td>TC10 cell counter</td><td>Bio-Rad</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Counting Slides (for TC10)</td><td>Bio-Rad</td><td>1450011</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Elektroporatie</td></tr><tr><td>Gene Pulser Xcell</td><td>Bio-Rad</td><td>1652611</td><td></td></tr><tr><td>Gene Pulser Cuvettes (4&#160;mm gap)</td><td>Bio-Rad</td><td>1652088</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Moleculair biologie</td></tr><tr><td>Thermal Cycler</td><td>Eppendorf</td><td>Mastercylcer ep Gradient&nbsp; S</td><td></td></tr><tr><td>Puregene Core kit B</td><td>Qiagen</td><td>158745</td><td></td></tr><tr><td>Topo-TA Cloning kit</td><td>Life Technologies&nbsp;</td><td>450030</td><td></td></tr><tr><td>High Capacity cDNA synthesis kit</td><td>Applied Biosystems</td><td>4368814</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Fisher BioReagents&nbsp;</td><td>BP358-212</td><td></td></tr><tr><td>100% ethanol</td><td>Decon Laboratories, Inc.</td><td>2716</td><td></td></tr><tr><td>Double Processed Tissue Culture Water</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W3500</td><td></td></tr><tr><td>Sau3A1</td><td>New England BioLabs</td><td>R0169L</td><td></td></tr><tr><td>T4 DNA Ligase</td><td>New England BioLabs</td><td>M0202T</td><td></td></tr><tr><td>EcoRV</td><td>New England BioLabs</td><td>R3195S</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">96-well Lysis Buffer (Ramires-Solis et al. 1992)</td></tr><tr><td>Trizma Base</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T1503</td><td></td></tr><tr><td>Hydrochloric Acid</td><td>Fisher BioReagents&nbsp;</td><td>A144-212</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E5134</td><td></td></tr><tr><td>N-Lauroylsarcosine sodium salt</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L5777</td><td></td></tr><tr><td>Proteinase-K</td><td>Fisher BioReagents&nbsp;</td><td>BP1700</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Elektroforese</td></tr><tr><td>Mini-Sub Cell GT</td><td>Bio-Rad</td><td>170-4469EDU</td><td></td></tr><tr><td>LE Agarose&nbsp;</td><td>GeneMate</td><td>E3120500</td><td></td></tr><tr><td>Ethidium Bromide&nbsp;</td><td>Fisher BioReagents&nbsp;</td><td>BP1302</td><td></td></tr><tr><td>100 BP DNA Ladder</td><td>New England BioLabs</td><td>N3231S</td><td></td></tr><tr><td>1 Kb DNA Ladder</td><td>New England BioLabs</td><td>N3232S</td><td></td></tr><tr><td>2-log DNA Ladder</td><td>New England BioLabs</td><td>N3200L</td><td></td></tr></tbody></table>

forward genetische aanpak stress resistentiegenen in muizen ontdek - een high-throughput scherm in es-cellen

Forward Genetic Approach to Uncover Stress Resistance Genes in Mice &#8212; A High-throughput Screen in ES Cells

Fenotype-gestuurde genetische screenings in muizen is een krachtige techniek om genfuncties te onthullen, maar wordt vaak gehinderd door extreem hoge kosten, wat het potentieel ernstig beperkt. We beschrijven hier het gebruik van embryonale muis (ES) cellen als surrogaatcellen om te screenen op een fenotype van belang en vervolgens deze cellen in een gasthereMBRYO in te brengen om zich te ontwikkelen tot een levende muis die het fenotype draagt. Deze methode biedt (1) een kosteneffectief, hoogdoorvoerplatform voor genetische screening in zoogdiercellen; (2) een snelle manier om de gemuteerde genen te identificeren en de causaliteit te verifiëren; en (3) een kortere weg om muizenmutanten rechtstreeks uit deze geselecteerde ES-cellen te ontwikkelen voor studies op het hele dier. We hebben het gebruik van paraquat (PQ) aangetoond om resistente mutanten te selecteren en mutaties te identificeren die oxidatieve stressresistentie verlenen. Andere stressoren of cytotoxische verbindingen kunnen ook worden gebruikt om resistente mutanten te screenen om nieuwe genetische determinanten van een verscheidenheid aan cellulaire stressresistentie te onthullen.

In een typisch mutagenese-experiment, transfectie uit een totaal van 3 x 10 7 ES-cellen met PB-UPA en MPB transposase. Het aantal-gen ingesloten ES-cellen gegenereerd in twee onafhankelijke experimenten worden samengevat in tabel 1. De efficiëntie van gen-entrapment ongeveer 0,04%. De gecombineerde gen-trap bibliotheken bevatten 22.400 onafhankelijke mutanten, over een volledige dekking van de muis genoom (23.000 coderende genen). Overmatige dekking kan worden bereikt door meer mutanten door ...

Stressbestendigheid is een van de kenmerken voor een lange levensduur en is bekend genetisch geregeld. Hier, een onbevooroordeelde high-throughput methode ontwikkelden we voor het screenen op mutaties die stress-resistentie in ES-cellen waarmee de muis modellen te ontwikkelen voor een lange levensduur studies.

Forward Genetische Aanpak stress resistentiegenen in Muizen Ontdek - Een High-throughput scherm in ES-cellen

Phenotype-driven genetic screens in mice is a powerful technique to uncover gene functions, but are often hampered by extremely high costs, which severely ...

De algemene doelstellingen van deze methode zijn om efficiënt te selecteren op stressresistente mutante embryonale stamcellen, geassocieerde genen snel te identificeren en kosteneffectief levensvatbare muismodellen te genereren. Deze methoden kunnen helpen bij het beantwoorden van kernvragen binnen het vakgebied van veroudering, waardoor we genen kunnen identificeren die betrokken zijn bij stressresistentie en de verbetering van de gezonde levensduur en levensverwachting bij zoogdieren. Een voordeel van deze techniek is dat het een kosteneffectieve selectie van nieuwe mutanten mogelijk maakt en de generatie van fenotypische muismodellen faciliteert na screening van embryonale stamcellen als surrogaatmodel.Om te beginnen met het kweken van ES-cellen, ontdooi eerst één vial met mitomycine C-geactiveerde primaire embryonale muis-fibroblasten of P MFS in een waterbad van 37 °C om als feeder-cellen voor de ES-celkweek te gebruiken. Breng de cellen over in vijf milliliter ES-celmedium en centrifugeer deze bij 100 ×g gedurende vijf minuten. Aspireer het supernatant en resuspendeer de cellen in 30 milliliter ES-celmedium.Verdeel de cellen over twee platen van 100 millimeter en over twee T

forward-genetic-approach-to-uncover-stress-resistance-genes-mice-high

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Ontwikkelingsbiologie

We beschrijven een gevoelig methode om postembryonic regulatoren van eiwit expressie en lokalisatie...

RNAi screening Postembryonic fenotypes Leg in C. elegans</em

We beschrijven een fluorescentie reporter test om snel te identificeren en karakteriseren genen die muis embryonale stamcellen onderhoud en zelfvernieuwing te reguleren.

Oct4GiP Reporter Assay van genen die muis embryonale stamcellen Onderhoud en Zelfvernieuwing Regel Studie

De microinjectie van muis oocyten wordt vaak gebruikt voor zowel klassieke transgenese ( dwz de willekeurige integratie van transgenen) en CRISPR-gemedieerde gen targeting. Dit protocol beoordeelt de nieuwste ontwikkelingen in microinjectie, met speciale nadruk op kwaliteitscontrole en genotyping strategieën.

Generatie van genetisch gemodificeerde muizen via de microinjectie van oocyten

Dit protocol beschrijft een high-throughput methodologie om functioneel scherm op basis van eiwitten erfdeel in S. cerevisiae.

High-throughput Screening op basis van eiwitten erfdeel in S. cerevisiae

Hier karakteriseren we cellulaire proteotoxische stressreacties in de nematode C. elegans door het meten van de activering van fluorescerende transcriptieverslaggevers en assaying gevoeligheid voor fysiologische stress.

Metingen van fysiologische stressreacties in C. Elegans

Om chaperonne-chaperonne- en chaperonne-substraatinteracties te bestuderen, voeren we synthetische interactiescreenings uit in Caenorhabditis elegans met behulp van RNA-interferentie in combinatie met milde mutaties of overexpressie van chaperonnes en monitoren we weefselspecifieke eiwitdisfunctie op organismaal niveau.

Caenorhabditis elegans gebruiken om te screenen op weefselspecifieke chaperonne-interacties

Een voorwaarts genetisch scherm op basis van Ca2 + hoogte als een read-out leidt tot de identificatie van genetische componenten die betrokken zijn bij calcium afhankelijke signalering trajecten in planten.

Forward Genetisch Scherm met behulp van transgene calcium Reporter Aequorin om nieuwe doelen te identificeren in calcium signalering

De rol van recent ontdekte ziekte-geassocieerde genen in de pathogenese van neuropsychiatrische aandoeningen blijft onduidelijk. Een gemodificeerde bilaterale in utero elektroporatie techniek maakt de genoverdracht in grote populaties neuronen en onderzoek van de veroorzakers van genexpressie veranderingen op sociaal gedrag mogelijk.

Een pijpleiding die bilaterale in Utero-elektroporatie gebruikt om genetische invloeden op knaagdiergedrag te ondervragen

Dit werk beschrijft een protocol voor een multicopy suppressor genetische screening in Schizosaccharomyces pombe. Dit scherm maakt gebruik van een genoombrede plasmidebibliotheek om suppressorkloon (en) van een functieverliesfenotype geassocieerd met een querymutantenstam te identificeren. Nieuwe genetische onderdrukkers van de ell1 null-mutant werden geïdentificeerd met behulp van dit scherm.

Genetische screening voor identificatie van multicopy suppressors in Schizosaccharomyces pombe

Een protocol om een co-cultuursysteem te genereren dat bestaat uit neuronen afgeleid van geïnduceerde pluripotente stamcellen (iPSC's), primaire corticale neuronen en astrocyten wordt beschreven. Dit co-cultuursysteem maakt detectie mogelijk van de vorming van synaptische contacten en circuits tussen nieuwe, iPSC-afgeleide neuronen en reeds bestaande corticale neuronen die channelrhodopsine-2 tot expressie brengen.

Een optogenetische Aanpak voor het beoordelen van de vorming van neuronale verbindingen in een co-cultuur systeem

Leer een high-throughput screeningsmethode voor stressresistentie in embryonale stamcellen om muismodellen voor verouderingsonderzoek te genereren. Deze techniek identificeert genen die bijdragen aan gezonde levensduur.

Forward Genetische Aanpak stress resistentiegenen in Muizen Ontdek - Een High-throughput scherm in ES-cellen

Meer video's verkennen