Name: Long Tumor cel aanwerving Assay (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-02-26T12:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 28 s
Description: Leer hoe u tumorcelaccumulatie in longen kwantificeert in een muismodel van metastase. Deze methode maakt nauwkeurige kwantificatie van tumorcelwerving in een verafgelegen orgaan mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Alle procedures uitgevoerd met muizen werden goedgekeurd door het dier onderzoek Comité van Tokyo vrouwen Medizinische Universität.
1. staart veneuze injectie van Lewis Lung Carcinoma (LLC) cellen
<ol><li>Handhaven van LLC cellen in DMEM aangevuld met 10% FCS, in een bevochtigde 5% CO2 incubator bij 37 ° C. Cellen moeten bevatten een fluorescerend eiwit expressie systeem (b.v., GFP).</li>
	<li>Cellen verwijderen uit het cultuur schotel met behulp van een niet-enzymatische cel dissociatie reagens. Volg protocol van de fabrikant.</li>
	<li>Cellen in een tube van 15 mL en centrifuge op 400 x g verzamelen voor 3 min. resuspendeer de cellen in 5 mL PBS door pipetteren en centrifugeren van de buis (400 x g, 3 min). Verwijder vervolgens het supernatant.<ol>
<li>Herhaal deze stap wassen één meer tijd.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Na de tweede wash, de cellen passeren door een zeef van de cel (40 µm poriegrootte) en resuspendeer in PBS te geven een laatste celdichtheid van 1 x 106 cellen/mL.</li>
	<li>Injecteren van 0,1 mL celsuspensie (1 x 105 cellen, 29 G naald) in elke C57BL/6 muis (8-10 week oude mannetjes) via de ader van de staart.</li>
</ol>2. isolatie van de longen en het tellen van de cellen onder een stereomicroscoop fluorescentie
<ol><li>De muizen bij CO2 inademing euthanaseren.</li>
	<li>Verwijder de huid op het ventrale oppervlak van de borst met een schaar. Snij vervolgens de ribben en het middenrif naar de borstholte bloot. PBS (100 cmH2van O, totale 15 mL) via de rechterventrikel met een gevleugelde infusie 25 G naald en de buis spoelen.</li>
	<li>Knip het hart en de thymus. Grip van de luchtpijp met een tang en optrekken, ontrafeling van het bindweefsel rond de luchtpijp met een schaar. Ontleden uit de longen en was ze in PBS.</li>
	<li>Losmaken elke kwab en observeren onder een fluorescentie stereomicroscoop.</li>
</ol>3. lung spijsvertering
<ol><li>Los 10 mg collagenase, 10 mg dispase en 10 µg DNase in 10 mL serumvrij DMEM. Filtreer door een 0,22 µm spuit filter ter voorbereiding van de enzymatische spijsvertering-oplossing.</li>
	<li>De geïsoleerde caudal lobe dobbelstenen met een schaar. Leg de stukjes van de Long in een 10 mL spuit, gevolgd door de plunjer.</li>
	<li>Gecombineerd de spijsvertering-oplossing (5 mL) in de injectiespuit door terug te trekken op de plunjer. Werken de zuiger omhoog en omlaag totdat de Long in de oplossing zinkt. Dan de longen en de spijsvertering buffer te plaatsen in een tube van 50 mL.</li>
	<li>Schud de buis gedurende 15 minuten bij 37 ° C op een wederzijdse shaker (150 rpm). Longen kunnen tijdens deze incubatie gescheurde geworden.</li>
	<li>Pipetteer op en neer totdat longkanker cellen volledig zijn verspreid. Schud de buis voor de extra 30 minuten bij 37 ° C op een wederzijdse shaker (150 rpm).</li>
	<li>De longkanker cellen passeren een 40 µm cel zeef. Spin down de cellen bij 400 x g gedurende 3 minuten.</li>
</ol>4. Stroom Cytometry van longkanker cellen
<ol><li>Los 100 mg BSA in 10 mL PBS en filter door een 0,22 µm spuit filter te bereiden PBS - 1% BSA.</li>
	<li>Verwijder de bovendrijvende vloeistof van het monster verkregen bij stap 3.6 met behulp van een precisiepipet en voeg toe 2 mL rode bloedcellen lysis van de oplossing. Dan draai naar beneden de cellen bij 400 x g gedurende 3 min. Verwijder het supernatant.</li>
	<li>Resuspendeer de cellen in 5 mL PBS - 1% BSA door pipetteren en centrifugeren van de buis (400 x g, 3 min). Verwijder het supernatant.<ol>
<li>Herhaal deze stap wassen één meer tijd.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Cellen in 1 mL PBS - 1% BSA schorten en passeren een nieuwe 40 µm cel zeef.</li>
	<li>Het analyseren van de cellen met een cytometer van de stroom te tellen van de tumorcellen (met behulp van de filter setup FL1 voor GFP-LLC).</li>
</ol>

<ol><li>Valastyan, S., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+metastasis%3A+molecular+insights+and+evolving+paradigms%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Tumor metastasis: molecular insights and evolving paradigms.</a> Cell. 147 (2), 275-292 (2011).</li>
<li>Kaplan, R. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VEGFR1-positive+haematopoietic+bone+marrow+progenitors+initiate+the+pre-metastatic+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">VEGFR1-positive haematopoietic bone marrow progenitors initiate the pre-metastatic niche.</a> Nature. 438 (7069), 820-827 (2005).</li>
<li>Hiratsuka, S., Watanabe, A., Aburatani, H., Maru, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumour-mediated+upregulation+of+chemoattractants+and+recruitment+of+myeloid+cells+predetermines+lung+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Tumour-mediated upregulation of chemoattractants and recruitment of myeloid cells predetermines lung metastasis.</a> Nature Cell Biology. 8 (12), 1369-1375 (2006).</li>
<li>Hiratsuka, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+S100A8-serum+amyloid+A3-TLR4+paracrine+cascade+establishes+a+pre-metastatic+phase%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">The S100A8-serum amyloid A3-TLR4 paracrine cascade establishes a pre-metastatic phase.</a> Nature Cell Biology. 10 (11), 1349-1355 (2008).</li>
<li>Tomita, T., Sakurai, Y., Ishibashi, S., Maru, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imbalance+of+Clara+cell-mediated+homeostatic+inflammation+is+involved+in+lung+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Imbalance of Clara cell-mediated homeostatic inflammation is involved in lung metastasis.</a> Oncogene. 30 (31), 3429-3439 (2011).</li>
<li>Deguchi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serum+amyloid+A3+binds+MD-2+to+activate+p38+and+NF-%CE%BAB+pathways+in+a+MyD88-dependent+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Serum amyloid A3 binds MD-2 to activate p38 and NF-κB pathways in a MyD88-dependent manner.</a> Journal of Immunology. 191 (4), 1856-1864 (2013).</li>
<li>Erler, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia-induced+lysyl+oxidase+is+a+critical+mediator+of+bone+marrow+cell+recruitment+to+form+the+premetastatic+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Hypoxia-induced lysyl oxidase is a critical mediator of bone marrow cell recruitment to form the premetastatic niche.</a> Cancer Cell. 15, 35-44 (2009).</li>
<li>Huang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+vascular+destabilization+in+the+premetastatic+phase+facilitates+lung+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Pulmonary vascular destabilization in the premetastatic phase facilitates lung metastasis.</a> Cancer Research. 69 (19), 7292-7237 (2009).</li>
<li>Sceneay, J., Smyth, M. J., Möller, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pre-metastatic+niche%3A+finding+common+ground%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Metastasis+Reviews%22%5BJournal%5D)">The pre-metastatic niche: finding common ground.</a> Cancer Metastasis Reviews. 32 (3-4), 449-464 (2013).</li>
<li>Castle, J., Shaker, H., Morris, K., Tugwood, J. D., Kirwan, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+significance+of+circulating+tumor+cells+in+breast+cancer%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22The+Breast%22%5BJournal%5D)">The significance of circulating tumor cells in breast cancer: A review.</a> The Breast. 23, 552-560 (2014).</li>
<li>Wolf, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+CCR2+signaling+induced+by+colon+carcinoma+cells+enables+extravasation+via+the+JAK2-Stat5+and+p38MAPK+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Endothelial CCR2 signaling induced by colon carcinoma cells enables extravasation via the JAK2-Stat5 and p38MAPK pathway.</a> Cancer Cell. 22 (1), 91-105 (2012).</li>
<li>Hiratsuka, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+tumours+modulate+innate+immune+signalling+to+create+pre-metastatic+vascular+hyperpermeability+foci%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Primary tumours modulate innate immune signalling to create pre-metastatic vascular hyperpermeability foci.</a> Nature Communications. 4, 1853(2013).</li>
<li>Deguchi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eritoran+inhibits+S100A8-mediated+TLR4%2FMD-2+activation+and+tumor+growth+by+changing+the+immune+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Eritoran inhibits S100A8-mediated TLR4/MD-2 activation and tumor growth by changing the immune microenvironment.</a> Oncogene. 35 (19), 1445-1456 (2016).</li>
<li>Ieguchi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ADAM12-cleaved+ephrin-A1+contributes+to+lung+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">ADAM12-cleaved ephrin-A1 contributes to lung metastasis.</a> Oncogene. 33 (17), 2179-2190 (2014).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Voorbehandeling van muizen met antilichamen, drugs, een vetrijke dieet of tumor-geconditioneerd medium vóór tumor cel injectie is mogelijk. De moeilijkste stap in deze test is de staart veneuze injectie. Onvolledige injectie leidt tot twijfelachtige gegevens. De ader van de staart in C57BL/6 is bijzonder moeilijk te identificeren, wat resulteert in mislukte injecties. Plaatsen van de muizen op een verwarming pad (37 ° C) verwijden helpt de staart ader zodat injectie gemakkelijker wordt.
Deze t...

Tumor metastase rekeningen voor de hoge sterfte in kanker-gerelateerde ziekten. Vanuit het oogpunt van onderzoek op moleculair niveau, metastase kan worden onderverdeeld in meerdere stappen: tumor inleiding op de primaire tumor site, de groei van de primaire tumor en de invasie in de omringende weefsels, intravasation, omloop door de bloedvaten , extravasation op verre organen en tumor uitgroei. Elke stap impliceert verschillende soorten moleculen/signalen1.
Studies tot op heden zijn bezorgd met gebeurtenissen die plaatsvinden in verre organen voordat de tumorcellen circuleren in het bloed, die ook bekend staat als de pre metastatische fase2,3,4,5, 6. Onze muis model studies is gebleken dat de vooraf metastatische fase Long metastase vergemakkelijkt door het creëren van duurzame en low-level inflammatoire reacties in de longen. De vooraf metastatische fase wordt gekenmerkt door hyperpermeability van themicrovasculature, werving van afgeleid beenmergcellen (BMDC), en opregulatie van cytokine/chemokine-achtige moleculen met inbegrip van S100A8 en SAA33,4 . Er werd gemeld dat lysyl-oxidase wijzigt de extracellulaire matrix in de longen te werven BMDCs7. Een ander rapport is gebleken dat het belang van Angpt2, MMP3 en MMP10 in de vooraf metastatische fase8. Met andere woorden, de complexe interacties tussen primaire tumoren, beenmerg en externe organen moeten worden begrepen en correct gemoduleerd (bijvoorbeeld door het gebruik van drugs die gericht zijn op eiwitten die betrokken zijn in deze interacties) om te voorkomen dat toekomstige metastase9 . Voor het regelen van de vooraf metastatische fase, moet eerst worden gevisualiseerd en voor diagnostische of therapeutische interventies geëvalueerd. Wij rapporteren hier, een Long tumor cel aanwerving assay waarmee de studie van de vooraf metastatische fase in de longen.
Tumorcellen direct geïnjecteerd in het bloedvat van de muis zijn vergelijkbaar met de circulerende tumorcellen bij kankerpatiënten, hoewel er verschillen tussen gekweekte cellen zijn kunnen en circulerende tumorcellen. Circulerende tumorcellen ondergaan zich enkele karakteristieke wijzigingen bij het invoeren van verkeer van de primaire tumor. Gekweekte cellen vormen echter kunnen tumoren in immunodeficiëntie muizen wanneer ze worden geïnjecteerd in de ader van de staart. Daarnaast, in de muis modelsysteem, kan fluorescentie label tumorcellen worden gebruikt waarmee het volgen van deze cellen in het lichaam. Het gedrag van de circulerende tumorcellen is cruciaal omdat zij de uiteindelijke gevolgen van kanker patiënten10 bepalen. Bloed is niet een goede plek om te overleven van tumor cellen2. Ze moeten ontsnappen uit de aanval door het immuunsysteem van de gastheer en anti-apoptotic signalen om te voorkomen dat apoptosis als gevolg van een gebrek aan fysieke ondersteuning. Tumorcellen met hogere capaciteiten van tumor inleiding op metastatische sites genereren meer tumor knobbeltjes. Als de tumorcellen Toon specifieke orgel tropisme, moet metastase in die specifieke organen worden geobserveerd. De eerste stappen van de metastatische cascade (primaire tumorgroei en invasie) zijn niet inbegrepen in deze test, en zo de nadruk ligt op de interactie tussen het circulerende tumorcellen en de stromale cellen (endotheliale cellen, epitheliaale cellen en bloedcellen). In conventionele tumor cel injectie testen moeten onderzoekers wachten tot de tumor knobbeltjes groeien tot een tastbare grootte detecteren de metastase. In dit geval worden niet het exacte aantal tumorcellen in het bloedvat gekwantificeerd. Dit proces omvat bovendien een tumor hergroei fase, die aangeeft dat andere factoren in de tumorcellen van invloed kunnen zijn op het resultaat.
Tellen is met het label tumorcellen onder een fluorescentie stereomicroscoop een eenvoudig proces. De stereomicroscoop biedt een breed gezichtsveld zodat de hele Long kan worden gescand. Stroom cytometry is ook een nuttig hulpmiddel dat direct een nauwkeurige aantal tumorcellen in het weefsel geeft. Fluorescerende cellen in het weefsel onder een confocal microscoop tellen is ook mogelijk en geeft de meest nauwkeurige beelden van metastatische tumorcellen, maar het is tijdrovend en vooringenomen resultaten kan geven als alleen een geselecteerd gebied wordt geteld. Het uiteindelijke doel van deze test is om te observeren hoe gemakkelijk tumorcellen zich ophopen in de longen. Zoals gemeld eerder3,4, als de longen zijn in vooraf metastatische fase als gevolg van inflammatoire signalering van de primaire tumor, zijn de geïnjecteerde tumorcellen gevoelig voor zich ophopen in de longen, dus impliceert hogere kans op longkanker metastase. Andere aandoeningen (reumatoïde artritis, astma, enz.), en hun behandeling met anti-inflammatoire stoffen (zoals anti-TNFα) kan verzachten Long metastase. Dus, we concluderen dat deze bepaling een krachtig hulpmiddel voor het beoordelen van de mogelijkheid van longkanker metastase.

<table><tbody><tr><td>Collagenase</td><td>Sigma</td><td>C6885</td><td></td></tr><tr><td>Dispase</td><td>Gibco</td><td>17105-041</td><td></td></tr><tr><td>Bovine serum albumin</td><td>Sigma</td><td>A7030</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Gibco</td><td>14190-144</td><td>geen calcium, geen magnesium</td></tr><tr><td>Deoxyribonuclease I</td><td>Sigma</td><td>DN-25</td><td>spoorhoeveelheid</td></tr><tr><td>RBC lysis buffer</td><td>Sigma</td><td>R7757</td><td></td></tr><tr><td>Cell strainer</td><td>BD</td><td>352340</td><td>40 micrometer mesh</td></tr><tr><td>Fluorescence labeling kit</td><td>Sigma</td><td>MIN26-KIT</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>11965-092</td><td></td></tr><tr><td>0.22 &mu;m syringe filter</td><td>sartorius</td><td>17597K</td><td></td></tr><tr><td>O.C.T. compound</td><td>Sakura Finetek</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>4% Paraformaldehyde Phosphate Buffer Solution</td><td>Wako</td><td>163-20145</td><td></td></tr></tbody></table>

long tumor cel aanwerving assay

Lung Tumor Cell Recruitment Assay

Voor het onderzoek naar de moleculaire mechanismen bestuur tumor metastase, verschillende testen met behulp van de muis als een dier model voorgesteld. Hier tonen we een eenvoudige test om te evalueren van de tumor cel extravasation of micrometastasis. In deze test, tumorcellen waren geïnjecteerd door de ader van de staart, en na een korte periode, de longen werden ontleed en verteerd om te tellen de geaccumuleerde gelabelde tumorcellen. Deze test wordt overgeslagen de eerste stap van primaire tumor invasie in het bloedvat en vergemakkelijkt de studie van gebeurtenissen in het verre orgaan waar de uitzaaiing van de tumor zich voordoet. Het aantal cellen in het bloedvat geïnjecteerd kan worden geoptimaliseerd om te zien hoe een beperkt aantal metastasen. Er werd gemeld dat stromale cellen in het verre orgel aan metastase bijdragen. Dus zou deze test een nuttig instrument om te verkennen potentiële therapeutische drugs of apparaten voor preventie van uitzaaiing van de tumor.

De longen presenteren veel GFP-LLC cellen 2 h na injectie (figuur 1A). Opgemerkt moet worden dat de fluorescerende vlekken ook gedetecteerd in de rode filter moeten worden uitgesloten van de cel nummer tellen. De overgrote meerderheid van de LLC cellen verdwijnen uit de longen 24u na injectie (Figuur 1 c).
Om te bevestigen het nummer van het GFP-LLC in de longen, kan ee...

Dit manuscript beschrijft een methode om te kwantificeren tumor cel accumulatie in de longen in een diermodel van uitzaaiing van de tumor.

Long Tumor cel aanwerving Assay

To investigate the molecular mechanisms governing tumor metastasis, various assays using the mouse as a model animal have been proposed. Here, we ...

Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen in de tumor biologie veld over de moleculaire mechanismen van metastase. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat de rekrutering van tumorcellen binnen een afgelegen orgaan kan worden kwantificeren. Begin met het gebruik van een niet-enzymatische cel dissociatie reagens om fluorescerende eiwit-uitdrukkende Lewis longcarcinoom, of LLC, cellen uit hun cultuur container volgens standaard protocollen te verwijderen.Breng de resulterende celoplossing in een conische buis van 15 milliliter voor centrifugatie en was de pellets twee keer in vijf milliliter PBS per wasbeurt. Na de tweede wasbeurt, filter de cellen door een 40-micrometer porie cel zeef, en verdun de suspensie tot een keer 10 tot de zes cellen per milliliter concentratie. Laad vervolgens de cellen in een spuit van één milliliter uitgerust met een naald van 29 meter en injecteer 100 microliter cellen in de staartader van elke acht-tot-10-week-oude, C57-Black-6, mannelijke muis.Gebruik op het juiste experimentele eindpunt een schaar om de huid van het ventrale oppervlak van elke muis te verwijderen en snijd de ribben en het middenrif om de borstholte bloot te leggen. Gebruik een 25-gauge gevleugelde infuus naald en slang te spoelen 15 milliliter PBS door de rechter ventrikel, en verwijder het hart en de thymus. De luchtpijp vastpakken met tangen, optrekken, de bindweefsels rond de luchtpijp ontleden, om de longen te oogsten.Was vervolgens de longen in PBS, en los een kwab voor visualisatie van de fluorescerende cellen in situ onder een fluorescentie microscoop. Om het longweefsel te verteren, eerst de staartkwab met een schaar in blokjes gesneden en de longstukken in een spuit van 10 milliliter plaatsen. Sluit de spuit met de zuiger en zuig vijf milliliter spijsverteringsoplossing in de spuit, waarbij de zuiger in en uit de spuitschacht wordt verplaatst totdat het longweefsel door de hele oplossing wordt verspreid.Doseer de longdrijfmest in een buis van 50 milliliter en verteer het weefsel op een wederkerige shaker gedurende 15 minuten bij 37 graden Celsius en 150 rpm. Aan het einde van de incubatie trituraat het resterende weefsel totdat de longcellen volledig zijn verspreid, en de buis terug te keren naar de shaker voor een extra 30 minuten. Vervolgens filteren de cellen door een 40-micrometer porie zeef, en het verzamelen van de cellen door centrifugatie.Om de geïsoleerde longcellen te analyseren door flow cytometrie, resuspend de pellet in twee milliliter rode bloedcel lyse buffer voor een minuut bij kamertemperatuur, en het verzamelen van de cellen door centrifugatie. Centrifuge de pellet vervolgens twee keer in vijf milliliter verse PBS aangevuld met 1% runderserum albumine per wasbeurt. Na de tweede centrifugatie, resuspend de pellet in een milliliter verse PBS plus BSA, en filter de cellen door een nieuwe 40-micrometer porie zeef voor kwantificering van de tumorcellen door stroom cytometrie.De longen presenteren veel GFP-LLC cellen twee uur na injectie, met de overgrote meerderheid van de cellen verdwijnen uit de longen binnen 24 uur. Houd er rekening mee dat fluorescerende vlekken die in het rode filter worden gedetecteerd, moeten worden uitgesloten van het aantal cellen. Om het aantal GFP-LLC in de longen te bevestigen, kan een van de lobben worden gebruikt voor flow cytometrische analyse zoals aangetoond.Tijdens een poging tot deze procedure, is het belangrijk om te onthouden dat een bevroren sectie procedure is een meer nauwkeurige methode voor het observeren van de exacte locatie van tumorcellen.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kankeronderzoek

In this video, we perform brain tumor stem cell migration assay to analyze the effect of the drug of interest on the migration of live brain tumor stem cells using chemotaxis migration plate. Live-cell imaging facilitates the visualization and quantification of cell migration during the assay.

Brain Tumor Stem Cell (BTSC) Migration Assay for Drug Treatment Studies: An In Vitro Live-cell Imaging Technique to Analyze the Effect of Drug Treatment on Migration of BTSCs

We beschrijven een protocol om de radiale mobiliteit van niet-aderente immuuncellen in vitro te monitoren met behulp van een celsedimentatie manifold/slide apparaat. Celmigratie wordt gevolgd op monolagen van tumorcellen of op extracellulaire matrix-eiwitten. Onderzoek door licht- en fluorescentiemicroscopie maakt observatie van celmobiliteit en cytotoxische functionaliteit mogelijk.

Radial Mobiliteit en cytotoxische functie van retrovirale replicerende vector getransduceerde, niet-klevende Alloresponsive T-lymfocyten

Invasie van omliggende normale weefsels is een typerend kenmerk van kwaadaardige tumoren. We bieden hier een eenvoudige, semi-geautomatiseerde microplaattest van invasie in een natuurlijke 3D biomatrix die met een aantal modellen van gevorderde menselijke kankers is geëxemplifeerd.

Driedimensionale (3D) Tumor Spheroid Invasion Assay

Neutrofielen spelen niet alleen een belangrijke rol bij de verdediging van het gastheerlichaam tegen binnendringende micro-organismen, maar zijn ook betrokken bij de immuunbewaking van tumorcellen. Hier beschrijven we technieken met betrekking tot de isolatie van neutrofielen met anti-tumoreigenschappen en methoden voor het monitoren van anti-tumor neutrofielen functie in vitro en in vivo.

Isolatie en karakterisering van neutrofielen met Anti-Tumor Properties

Deze methode evalueert de invasie van kankercellen uit sferoïden in een omringende 3D-matrix.  Sferoïden worden gegenereerd via de hanging drop-kweekmethode en vervolgens ingebed in een matrix bestaande uit basement membraanmaterialen en type I collageen.  Invasie uit de sferoïden wordt vervolgens gemonitord.

Een Cancer Cell Sferoïde Assay om Invasion beoordelen in een 3D-instelling

Een dierlijk model is nodig om het ontcijferen van de rol van circulerende tumorcellen (CTCs) bij de bevordering van longkanker kolonisatie tijdens kanker uitzaaiingen. Hier, we vastgesteld en met succes uitgevoerd een in vivo assay op specifiek proef de eis van polymere fibronectine (polyFN) vergadering over CTCs voor longkanker kolonisatie.

De oprichting van een Long kolonisatie Assay voor het circulerende Tumor visualisatie van de cel in de weefsels van de longen

Hier beschrijven we live-cel beeldvormingstechnieken voor het kwantitatief meten van de migratie en invasie van de cellen van de stam van tumor van de hersenen van glioblastoma na verloop van tijd en onder meerdere behandeling voorwaarden.

Live-cel Imaging tests studie Glioblastoma Brain Tumor stamcel migratie en invasie

Hier beschrijven we een eenvoudige en goedkope methode die het mogelijk maakt de kwantificering van lijmtumorcellen naar lymfeklier (LN) cryosecties. LN-aanhangende tumorcellen worden gemakkelijk geïdentificeerd door lichtmicroscopie en bevestigd door een fluorescentiegebaseerde methode, waardoor een adhesie-index wordt gegeven die de tumorcelbindende affiniteit met LN-parenchyma onthult.

Kwantificering van tumorcelhechting in cryosecties lymfeklieren

De gepresenteerde aanpak evalueert tegelijkertijd kankercelinvasie in 3D-sferoïde testen en T-celcytotoxiciteit. Sferoïden worden gegenereerd in een steiger-vrije agarose multi-microwell gegoten. Co-cultuur en inbedding in type I collageen matrix worden uitgevoerd in hetzelfde apparaat dat het mogelijk maakt om kankercel invasie en T-cel gemedited cytotoxiciteit te controleren.

Monitoring Cancer Cell Invasion en T-Cell Cytotoxicity in 3D Cultuur

Het kweken van CTC's maakt een diepere functionele karakterisering van kanker mogelijk, door specifieke markerexpressie te testen en resistentie tegen geneesmiddelen en het vermogen om de lever te koloniseren te beoordelen, naast andere mogelijkheden. Over het algemeen zou de CTC-cultuur een veelbelovend klinisch hulpmiddel kunnen zijn voor gepersonaliseerde geneeskunde om de uitkomst van de patiënt te verbeteren.

Circulerende tumorcellijnen: een innovatief hulpmiddel voor fundamenteel en translationeel onderzoek

Leer hoe u tumorcelaccumulatie in longen kwantificeert in een muismodel van metastase. Deze methode maakt nauwkeurige kwantificatie van tumorcelwerving in een verafgelegen orgaan mogelijk.

Long Tumor cel aanwerving Assay

Meer video's verkennen