Beoordeling van Perigenital Sensitivity en Prostatic mestcelactivatie in een muismodel van Neonatale Maternal Separation

Het algemene doel van het volgende experiment is om de impact van vroege stress in het leven op het urogenitale systeem te bepalen door peri genitale mechanische gevoeligheid en activering van mestcellen in de prostaat te meten bij mannelijke C 57 zwarte zes muizen die een neonatale maternale scheiding hebben ondergaan. Dit wordt bereikt door eerst neonatale maternale scheiding uit te voeren op nesten van C 57 zwarte zes muisjes om vroege stress gedurende 20 opeenvolgende dagen te induceren. De tweede stap is om peri genitale mechanische gevoeligheid te meten door een reeks Von Fre monofilamenten op de peri genitale regio aan te brengen.

Vervolgens wordt verzuuring met toluidineblauw uitgevoerd op cryostat-secties van de muisprostaat. Om de activering van mestcellen te kwantificeren. De resultaten tonen aan dat neonatale maternale scheiding peri genitale mechanische gevoeligheid en prothetische mastcelactivering verhoogt op basis van onze gedrags- en histologische analyses.

Het belangrijkste voordeel van deze techniek boven bestaande methoden zoals experimentele auto-immuunprostatitis, is dat het stressblootstelling tijdens de vroege ontwikkeling incorporeert, wat symptomatologie later in het leven veroorzaakt, vergelijkbaar met wat wordt waargenomen bij patiënten met chronische prostatitis. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen in het veld van chronische bekkenpijn, zoals de impact van vroege stress in het leven op gedrag, en histologisch bewijs leveren van veranderde pijntoestanden. Hoewel deze methode inzicht kan geven in chronische prostatitis, kan deze ook worden toegepast op andere functionele pijnsyndromen zoals interstitiële cystitis, pijnlijk blaassyndroom, vulvodynie, fibromyalgie of migraine.

Het kan zelfs worden toegepast op andere veelvoorkomende psychologische comorbiditeiten zoals angst en depressie De dag na de geboorte, verwijder de dam uit de thuiscas en plaats haar in een schone secundaire container. Wrijf een handvol beddengoed tussen schone, gehandschoende handen om de geur van de thuiscas te behouden, en breng vervolgens een diepte van één tot twee centimeter van het thuiscas-beddengoed over in een schone, geschikt geëtiketteerde tweeliter glazen sprekker. Bovendien, bij ongeveer de helft van eventueel aanvullend verrijkingsbeddengoed dat in de thuiscas aanwezig is, zoals nestjes of kreukpapier, in de glazen sprekker plaats vervolgens alle pups van een enkele worp in de voorbereide beker en plaats de beker onmiddellijk gedurende 180 minuten bij 33 graden Celsius en 50% luchtvochtigheid.

Tijdens de gescheiden incubatieperiode, verwijder de dam uit de secundaire container en breng haar terug naar de thuiscas. Breng de thuiscas terug naar de juiste huisvestingslocatie binnen het vivarium. Aan het einde van de scheidingsperiode, haal de thuiscas op en verwijder de dam, en plaats haar in een schone secundaire container.

Vervolgens verwijdert u de beker uit de incubator en laat u een handvol beddengoed tussen schone, gehandschoende handen vallen om de geur van de thuiscas te behouden tijdens het hanteren van de pups. Verplaats de pups voorzichtig individueel van de beker naar de thuiscas en breng eventueel overgebleven verrijkings- en beddengoed in de beker terug naar de thuiscas. Zodra alle pups zijn teruggeplaatst, verplaats de dam van de secundaire container naar de thuiscas en breng deze terug naar de juiste huisvestingslocatie binnen het vivarium.

Herhaal deze volledige procedure voor elke worp die neonatale maternale scheiding ondergaat, elke dag door tot postnataal dag 21. Vervolgens worden de pups gespeend en onder dezelfde omstandigheden gehuisvest als de controlemuizen gedurende de duur van het experiment. Bereid het testgebied voor door een absorberende onderlegger te plaatsen onder een verhoogde draadgaas bovenkant tafel met een hoogte van 55 centimeter.

De tafel moet voldoende ruimte bieden om de onderzoeker van onderen te laten naderen zonder de muizen te verschrikken. Plaats maximaal 12 muizen van acht weken oud individueel onder doorzichtige, geperforeerde plastic kamers bovenop de draadgaas tafel. Plaats een zwaar voorwerp bovenop de kamers om te voorkomen dat de muizen ontsnappen.

Houd de basis van een driepunts 22 gram von frame monofilament en laat het ingetrokken monofilament zichtbaar zijn. Plaats de sonde zodat het monofilament verticaal is georiënteerd. Wanneer de muis alert is, onbeweeglijk en zijn lichaamsgewicht gelijkmatig verdeeld is tussen de achterpoten.

Breng het aan op de linker- of rechterkant van het scrotum, vermijd de middellijn totdat een lichte buiging in het filament wordt waargenomen. Houd het monofilament 10 seconden op zijn plaats of totdat het dier een positieve reactie vertoont, zoals een snelle ruk of sprong of likken of bijtgedrag gericht op het monofilament. Als een muis zich niet beweegt of geen positieve reacties vertoont tijdens de tien seconden monofilament-toepassing, registreer een negatieve reactie. Test alle muizen met hetzelfde formaat filament en schakel vervolgens over naar het volgende geschikte monofilament.

Ga door met het testen van elke muis met het volgende grotere of kleinere monofilament, zoals passend voor een extra vier toepassingen. Na de eerste positieve reactie, dissecteer en cryo-sectie, gefixeerd prostaatweefsel van negen weken oude muizen in zeven micrometer dikke cryo-secties. Bereid vervolgens een 1% toluidineblauw stockoplossing door een gram toluidineblauw O toe te voegen aan 100 milliliter 70% ethanol en vortex de mix totdat het in oplossing gaat.

Bewaar de stockoplossing bij kamertemperatuur gedurende maximaal drie weken. Voeg in een andere beker een gram natriumchloride toe aan 100 milliliter water geplaatst op een roerplaat. Pas de pH van de zoutoplossing aan met 12 molair zoutzuur totdat een pH-bereik van 0,5 tot 1,0 is bereikt.

Bereid vervolgens een 0,25% verzuurde toluidineblauw werkoplossing door acht milliliter van de Udine blauw stockoplossing en 32 milliliter van de zure 1% natriumchlorideoplossing te combineren. Pipet het omhoog en omlaag om een totale incorporatie van de odine blauw stockoplossing te garanderen en meng. Bereid de werkoplossing vers voor elke batch dia's voor. Was de we