Name: Een Quick Fenotypische Neurologische Scoring System voor het evalueren van ziekteprogressie bij de SOD1-G93A muismodel van ALS (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-10-06T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 49 s
Description: Leer een snel fenotypisch neurologisch scoresysteem voor het evalueren van ziekteprogressie bij het SOD1-G93A muismodel van ALS. Deze methode helpt onderzoekers therapeutische interventies betrouwbaar te testen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

We willen Beth Levine bedanken voor het kritisch beoordelen van het manuscript, Valerie Tassinari voor het ontwikkelen van het genotyperingsprotocol, en Matt Ferola en Carlos Maya voor hun uitzonderlijke dierenverzorging.

Alle experimenten worden uitgevoerd in overeenstemming met de door de National Institutes of Health Guide voor de zorg en het gebruik van dieren protocollen en werden goedgekeurd door de ALS TDI&#39;s institutionele dierlijke zorg en gebruik Comite (IACUC). 1. Dieren, Huisvesting en Studieopzet Opmerking: De SOD1-G93A muis kolonie werd afgeleid van de hoge kopie B6SJLTgN (SOD1G93A) 1Gur stam oorspronkelijk geproduceerd door Gurney et al. 7. De kolonie wordt momenteel onderhouden door het kruisen van transgene C57BL / 6-SJL mannen met wild-type C57BL / 6-SJL F1 vrouwtjes. De F1-dieren worden gegenereerd door het kruisen van SJL mannetjes met B6 vrouwtjes. Muizen worden verscheept naar ALS TDI wekelijks op 35-45 dagen oud. <ol><li> Laat muizen minstens een week acclimatiseren aan het dier faciliteit (12-uur licht / donker cyclus bij een temperatuur van 18-23 ° C en 40-60% vochtigheid) voordat het toewijzen van een onderzoek. </li><li> Huis mannelijke SOD1-G93A mice één muis per kooi, omdat de groep gehuisvest mannetjes hebben de neiging om te vechten. Huis vrouwelijke SOD1-G93A muizen tot twee per kooi. Zorg voor het milieu verrijking, in de vorm van plastic hutten. Zorgen voor voedsel en water ad libitum, tenzij de muizen zijn onderdeel van een studie waarbij toediening van het geneesmiddel in het drinkwater / eten. In deze gevallen rantsoen en opnemen voedsel en water. </li><li> Beginnen aan een drug-efficacy studie rond de leeftijd van dag 50 en onder 64-nest geëvenaard genderevenwichtige muizen (32 per cohort). Ten slotte zorgen dat de onderzoekers het uitvoeren van de studies zijn blind voor de experimentele omstandigheden. Opmerking: Het wordt aanbevolen dat een typische geneesmiddel-effectiviteit studie begint op de leeftijd van dag 50 echter op basis van de aard van de therapeutische interventie is het misschien beter om de studie eerder of later beginnen. Opmerking: Een studie met 32 ​​muizen per cohort wordt aangedreven genderspecifieke drug-effecten te detecteren. Als er geen seksespecifieke vergelijkingen nodig zijn, moet 24 muizen per cohort volstaan ​​om de totale drug-effecten te detecteren.</li></ol> 2. Lichaamsgewicht <ol><li> Neem lichaamsgewicht voor alle muizen in studies dagelijks met een nauwkeurigheid van 1 van 10 gram. Opmerking: Lichaamsgewicht is een gevoelige indicator van de progressie van de ziekte en van alle malaise die zou kunnen voortvloeien uit een chronische behandeling met geneesmiddelen. </li><li> Muis lichaamsgewicht variëren aanzienlijk in de loop van de dag, hoger in de ochtend, dus nemen ze rond dezelfde tijd elke dag. </li></ol> 3. Neurologische Scoring System (NeuroScore) <ol><li> Evalueer neurologische score (NS) voor elke muis dagelijks door het observeren van de muis onder de volgende drie voorwaarden uitgevoerd achtereenvolgens: a) de muis wordt opgehangen bij zijn staart, b) de muis mag lopen en na het begin van parese c) het muis wordt op zijn kant. <ol><li> Voor de staart schorsing test, houdt u de muis ongeveer 1,5 &quot;van de basis van de staart over de draad top van hun kooi voor 1-2 seconden, weg van het voedsel bekken, terwijl observing de achterpoten. Herhaal de schorsing testen 3 keer en noteer de meest consistente uitkomst. </li><li> Voor de looptest, plaatst u de muis op een schoon oppervlak dat sommige tractie en een loopafstand van 25 cm biedt (bv., Een papieren handdoek vastgeplakt om uitglijden te voorkomen). Laat de muis om een ​​totaal van 75 cm (3x lengte van het papier handdoek) lopen met inachtneming van de gang. </li><li> Voor de &quot;oprichtende reflex&quot; test, plaats de muis op de linker of rechter kant en met behulp van een stop-horloge meet de tijd die nodig is om zichzelf recht zonder hulp van beide kanten. Opmerking: Slechts één proef van deze test is vereist. </li></ol></li><li> Bepaal de NS van elke achterpoot (links of rechts) zelfstandig op een schaal van 0 tot 4. Opmerking: bijvoorbeeld een score van 0, 1 betekent dat het linker achterbeen NS 0, terwijl de rechter achterpoot NS 1. </li><li> Toewijzen neurologische score (0-4), die overeenkomt met de volgende reeks van waarnemingen (samenvatting in tabel 1):<ol><li> Toewijzen NS 0 (Pre-symptomatische) indien het volgende opgemerkt: Wanneer de muis wordt geschorst door de staart, het achterbeen presenteert een normale splay wil zeggen, het is volledig uit de buurt van de laterale middellijn uitgebreid en blijft in deze positie gedurende 2 seconden of meer. Wanneer de muis is toegestaan ​​om te lopen, is de normale gang waargenomen. </li><li> Toewijzen NS 1 (eerste symptomen) als het volgende opgemerkt: Wanneer de muis wordt geschorst door de staart, het achterbeen presenteert een abnormale verwijding, dat wil zeggen, het is ingestort of gedeeltelijk ingestort in de richting van de laterale middellijn Of het beeft tijdens staart schorsing of het wordt ingetrokken / geklemd. Wanneer de muis is toegestaan ​​om te lopen, is normaal of licht trage gang waargenomen. </li><li> Toewijzen NS 2 (Onset van parese) indien het volgende opgemerkt: Wanneer de muis wordt geschorst door de staart, het achterbeen is gedeeltelijk of volledig ingestort, niet veel te breiden. (Er kunnen nog steeds gezamenlijke beweging). Wanneer de muis is toegestaan ​​om te lopen, wordt het achterbeen gebruikt voor forward motion maar de tenen krullen naar beneden ten minste twee keer tijdens een wandeling van 90 cm of een deel van de voet is te slepen langs de kooi onderaan / tafel. Wanneer de muis op de linker- en rechterzijde is geplaatst, is in staat om zichzelf recht in 10 sec van beide kanten. </li><li> Toewijzen NS 3 (Verlamming) indien het volgende opgemerkt: Wanneer de muis wordt geschorst door de staart, is er stijf verlamming van de achterpoot of minimale gezamenlijke beweging. Wanneer de muis is toegestaan ​​om te lopen is er een voorwaartse beweging maar het achterbeen wordt niet gebruikt voor de voorwaartse beweging. Wanneer de muis op de linker- en rechterzijde is geplaatst, is in staat om zichzelf recht in 10 sec van beide kanten. Opmerking: In zeldzame gevallen na het begin van verlamming, kan urine vocht op de achterpoten. Onbehandeld urine vocht kunnen leiden tot urine &quot;Burn&quot; en huidletsels. Behandel urine vocht door het knippen van het haar van toepassing warm water zuigt om de urine te verwijderen, en voorzichtig dep droog. Als huidletsels aanwezig zijn van toepassing antibiotic zalf. </li><li> Toewijzen NS 4 (Humane eindpunt) indien het volgende opgemerkt: Wanneer de muis wordt geschorst door de staart, is er stijf verlamming van de achterpoten. Wanneer de muis is toegestaan ​​om te lopen, is er geen voorwaartse beweging. Wanneer de muis op de linker- en rechterzijde wordt geplaatst is het niet in staat om zichzelf recht in 10 sec van beide kanten. Dwz afwezigheid van oprichtreflex. </li></ol></li></ol> 4. Data Entry en Analyse <ol><li> Tijdens een geneesmiddel werkzaamheidsonderzoek, voert verzameld voor elke muis in een Laboratory Information Management System (LIMS) of in de handel verkrijgbare spreadsheet software. Opmerking: De ALS TDI ontwikkelde LIMS software is een centrale opslagplaats voor alle verzamelde gegevens van interne onderzoeken, waardoor deze gegevens gemakkelijk te bereiken over de tijd voor ALS TDI onderzoekers. LIMS tracks elke individuele muis, met zijn unieke ID, terug naar zijn afstamming, lichaamsgewicht of neurologische score op alle studiedagen,en omvat alle andere waarnemingen opgemerkt tijdens zijn levensduur. LIMS uiteindelijk genereert een spreadsheet die wordt gebruikt voor daaropvolgende analyse. </li><li> Na de voltooiing van een geneesmiddel werkzaamheidsonderzoek, dwz wanneer alle muizen het humane eindpunt bereikt, gebruik spreadsheet software (zie tabel of Materials) aan de gecombineerde NS berekenen per muis per dag door het gemiddelde van de linker en rechter achterbeen NS . Vervolgens berekenen de gemiddelde leeftijd bij elke NS voor elke muis en het aantal dagen elke muis doorbrengt in een bepaalde NS. </li><li> Analyseer algehele veranderingen in de NS na verloop van tijd door het importeren van de gegevens van de spreadsheet software om de statistische software (zie tabel van Materialen). Past deze gegevens met behulp van een model van ordinale logistische regressie die schat de verwachte NS, met een mediane leeftijd bij de NS en drugs-behandeling effecten in de regressie. Met behulp van de log-rank chi-kwadraat test schatten het effect kans op kans en te bepalen of de drug-behandeling effect op de NS progressie is statistischely significant (zie Aanvullende Code File voor stap-voor-stap instructies). Opmerking: Een p-waarde &lt;0,05 wordt als statistisch significant beschouwd. Opmerking: Deze methode van statistische analyse respecteert de ordinale aard van de NS gegevens en de variabele aard van de NS trajecten voor individuele muizen. Het verdient de voorkeur omdat individuele NS trajecten duidelijk verschillend resulteert NS-time verbonden groep gemiddelden die niet voldoende afspiegeling is van NS reacties in kan zijn. Daarnaast is in sommige gevallen NS kan fluctueren, vooral wanneer de nul-op-een range. </li><li> Tot slot, gebruik grafische software (zie tabel van Materialen) voor het genereren van &quot;Ordinal Verwachte NS vs mediane leeftijd bij NS&quot; grafieken voor-geneesmiddel behandelde en controle dieren (figuur 2; zie Aanvullende Code File voor stap-voor-stap instructies). Met deze grafieken om gemakkelijk schatten verschuivingen tussen met geneesmiddel behandelde en controlegroepen door interpolatie van de y-as de gemiddelde leeftijd van begin van de ziekte (i.e., NS 2) op de x-as. Opmerking: Het verschil in mediane leeftijd tussen de twee groepen vertegenwoordigt een geneesmiddelgeïnduceerde shift en wordt beschouwd als een praktische maat voor de omvang van het effect. Opmerking: Rechtsom verschuivingen in de verwachte NS vs. mediane leeftijd curve duiden vertraagd symptomatische progressie van de ziekte. Omgekeerd, naar links verschuivingen in de verwachte NS vs. mediane leeftijd curve duiden versnelde symptomatische progressie van de ziekte. </li></ol>

<ol><li>Gurney, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motor+neuron+degeneration+in+mice+that+express+a+human+Cu%2CZn+superoxide+dismutase+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Motor neuron degeneration in mice that express a human Cu,Zn superoxide dismutase mutation.</a> Science. 264 (5166), 1772-1775 (1994).</li>
<li>Rosen, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutations+in+Cu%2FZn+superoxide+dismutase+gene+are+associated+with+familial+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mutations in Cu/Zn superoxide dismutase gene are associated with familial amyotrophic lateral sclerosis.</a> Nature. 362 (6415), 59-62 (1993).</li>
<li>Gurney, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+transgenic+mouse+models+of+amyotrophic+lateral+sclerosis+in+preclinical+drug+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Sci.+152%2C+Suppl%22%5BJournal%5D)">The use of transgenic mouse models of amyotrophic lateral sclerosis in preclinical drug studies.</a> J Neurol Sci. 152, Suppl. 1 (6415), (1997).</li>
<li>Scott, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design%2C+power%2C+and+interpretation+of+studies+in+the+standard+murine+model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Amyotroph+Lateral+Scler%22%5BJournal%5D)">Design, power, and interpretation of studies in the standard murine model of ALS.</a> Amyotroph Lateral Scler. 9 (1), 4-15 (2008).</li>
<li>Hegedus, J., Putman, C. T., Gordon, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time+course+of+preferential+motor+unit+loss+in+the+SOD1+G93A+mouse+model+of+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Dis%22%5BJournal%5D)">Time course of preferential motor unit loss in the SOD1 G93A mouse model of amyotrophic lateral sclerosis.</a> Neurobiol. Dis. 28 (2), 154-164 (2007).</li>
<li>Gordon, T., Ly, V., Hegedus, J., Tyreman, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+detection+of+denervated+muscle+fibers+in+hindlimb+muscles+after+sciatic+nerve+transection+in+wild+type+mice+and+in+the+G93A+mouse+model+of+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Neurol.+Res%22%5BJournal%5D)">Early detection of denervated muscle fibers in hindlimb muscles after sciatic nerve transection in wild type mice and in the G93A mouse model of amyotrophic lateral sclerosis.</a> Neurol. Res. 31 (1), 28-42 (2009).</li>
<li>Gurney, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motor+neuron+degeneration+in+mice+that+express+a+human+Cu%2CZn+superoxide+dismutase+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Motor neuron degeneration in mice that express a human Cu,Zn superoxide dismutase mutation.</a> Science. 264 (5166), 1772-1775 (1994).</li>
<li>Kim, K., Moore, D. H., Makriyannis, A., Abood, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AM1241%2C+a+cannabinoid+CB2+receptor+selective+compound%2C+delays+disease+progression+in+a+mouse+model+of+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">AM1241, a cannabinoid CB2 receptor selective compound, delays disease progression in a mouse model of amyotrophic lateral sclerosis.</a> Eur. J. Pharmacol. 542 (1-3), 1-3 (2006).</li>
<li>Weydt, P., Hong, S. Y., Kliot, M., Moller, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+disease+onset+and+progression+in+the+SOD1+mouse+model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Assessing disease onset and progression in the SOD1 mouse model of ALS.</a> Neuroreport. 14 (7), 1051-1054 (2003).</li>
<li>Azari, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioural+and+anatomical+effects+of+systemically+administered+leukemia+inhibitory+factor+in+the+SOD1%28G93A+G1H%29+mouse+model+of+familial+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Behavioural and anatomical effects of systemically administered leukemia inhibitory factor in the SOD1(G93A G1H) mouse model of familial amyotrophic lateral sclerosis.</a> Brain Res. 982 (1), 92-97 (2003).</li>
<li>Guan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thiazolidinediones+expand+body+fluid+volume+through+PPARgamma+stimulation+of+ENaC-mediated+renal+salt+absorption%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Thiazolidinediones expand body fluid volume through PPARgamma stimulation of ENaC-mediated renal salt absorption.</a> Nat. Med. 11 (8), 861-866 (2005).</li>
<li>Savcheniuk, O. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+probiotic+therapy+on+development+of+experimental+obesity+in+rats+caused+by+monosodium+glutamate%5BTitle%5D)+AND+%22Fiziol.+Zh%22%5BJournal%5D)">The effect of probiotic therapy on development of experimental obesity in rats caused by monosodium glutamate.</a> Fiziol. Zh. 60 (2), 63-69 (2014).</li>
<li>Smittkamp, S. E., Brown, J. W., Stanford, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time-course+and+characterization+of+orolingual+motor+deficits+in+B6SJL-Tg%28SOD1-G93A%291Gur%2FJ+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Time-course and characterization of orolingual motor deficits in B6SJL-Tg(SOD1-G93A)1Gur/J mice.</a> Neuroscience. 151 (2), 613-621 (2008).</li>
<li>C, M., Gurney, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+low+expressor+line+of+transgenic+mice+carrying+a+mutant+human+Cu%2CZn+superoxide+dismutase+%28SOD1%29+gene+develops+pathological+changes+that+most+closely+resemble+those+in+human+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">A low expressor line of transgenic mice carrying a mutant human Cu,Zn superoxide dismutase (SOD1) gene develops pathological changes that most closely resemble those in human amyotrophic lateral sclerosis.</a> Acta Neuropathol. 93 (6), 537-550 (1997).</li>
<li>Wegorzewska, I., Baloh, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TDP-43-based+animal+models+of+neurodegeneration%3A+new+insights+into+ALS+pathology+and+pathophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22Neurodegener.+Dis%22%5BJournal%5D)">TDP-43-based animal models of neurodegeneration: new insights into ALS pathology and pathophysiology.</a> Neurodegener. Dis. 8 (4), 262-274 (2011).</li>
<li>Hatzipetros, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C57BL%2F6J+congenic+Prp-TDP43A315T+mice+develop+progressive+neurodegeneration+in+the+myenteric+plexus+of+the+colon+without+exhibiting+key+features+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">C57BL/6J congenic Prp-TDP43A315T mice develop progressive neurodegeneration in the myenteric plexus of the colon without exhibiting key features of ALS.</a> Brain Res. 1584, 59-72 (2014).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

In dit verslag beschrijven we een snelle en eenvoudige video protocol dat, indien juist toegepast, kan op betrouwbare beoordeling van de progressie van de ziekte in SOD1 G93A-muizen en identificeren drugs geïnduceerde veranderingen. Terwijl verschillende groepen fenotypische scoring systemen voor SOD1-G93A muizen 8-10 hebben ontwikkeld, ze vaak niet voldoende informatie over de procedure te bieden en zijn ontoereikend voor replicatie. Hierdoor worden scoresystemen zelden gebruikt buiten de specifieke groep di...

Sinds de ontwikkeling in het midden 1990 van het SOD1 G93A-transgeen muismodel is de meest gebruikte diermodel van amyotrofe laterale sclerose (ALS) 1. Dit transgeen muismodel werd genetisch gemanipuleerd om een ​​gemuteerde vorm van de humane Cu / Zn superoxide dismutase 1 (SOD1) gen herbergt de ALS geassocieerde glycine alanine mutatie op aminozuur 93 (G93A) tot overexpressie. De G93A mutatie is één van vele mutaties in het SOD1 gen die samen samenstelling ongeveer 1 5 van familiale ALS gevallen 2. De SOD1-G93A model is een werkpaard van ALS geneesmiddelontwikkeling onderzoek, omdat naast de duidelijke genetische link ALS het recapituleert vele pathologische kenmerken van ALS bij de mens als motor neuron verlies, progressieve spierzwakte en atrofie, met eventuele verlamming en dood 3. Hoewel, zoals vaak het geval is bij transgene diermodellen, is er een inherente biological variabiliteit geassocieerd met SOD1-G93A muizen. Scott et al. hebben vastgesteld dat cohorten van tenminste 24-nest aangepaste genderevenwichtige muizen nodig in drug efficacy studieontwerpen om het geluid gemaakt door de biologische variabiliteit 4 overwinnen. Het grote aantal benodigde dieren in deze studies in combinatie met agressieve progressie van de ziekte en de behoefte aan dagelijkse controle verbiedt het gebruik van ingewikkelde, tijdrovende en mogelijk belastend technieken voor het meten neuromusculaire sterkte en functie (bijvoorbeeld, elektromyografie grijpkracht, rotorod , etc.). In plaats daarvan wijst hij op de noodzaak van een in-vivo-screening tool die betrouwbaar beoordeelt de neuromusculaire functie van SOD1-G93A muizen op een snelle manier. Bij ALS TDI werd een protocol ontwikkeld dat zorgt voor een betrouwbare beoordeling van de neuromusculaire functie van SOD1-G93A muizen in minder dan 30 seconden per muis op het gemiddelde. Dit protocol encompasses dagelijkse evaluatie van achterbeen functie met behulp van een eenvoudig neurologisch scoresysteem (NeuroScore), die wordt beschreven in dit rapport in de pers en in de video. NeuroScore is gericht op het achterbeen functie omdat achterbeen tekorten zijn de vroegste gerapporteerde neurologische tekenen van de ziekte in SOD1-G93A muizen 5,6. Verder, het protocol ontwikkeld door ALS TDI levert een onpartijdige beoordeling van de aanvang van de parese (lichte of gedeeltelijke verlamming), progressie en de ernst van de verlamming en het is gevoelig genoeg om drugs veroorzaakte veranderingen in de progressie van de ziekte te identificeren.

<table><tbody><tr><td>B6SJLTgN(SOD1G93A)1Gur strain</td><td>The Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME</td><td>002726</td><td>Stam van muizen gebruikt in dit onderzoek</td></tr><tr><td>Breeders</td><td>Biomedical Research Models, Inc., Worcester, MA</td><td></td><td>Kolonieonderhoud</td></tr><tr><td>Scale</td><td>Navigator OHAUS, Parsippany, NJ</td><td>Model N14120</td><td>Gebruikt om muizen te wegen</td></tr><tr><td>Nutra-GelH</td><td>Bio-Serv, Flemington, NJ</td><td>#S4798</td><td>Nat voer voor zieke muizen</td></tr><tr><td>Irradiated Lab Animal Diet</td><td>Harlan, Indianapolis, IN</td><td>2918-111914M</td><td>Kauwggoed</td></tr><tr><td>Lab-grade Sani-chips</td><td>Harlan Teklad, Indianapolis, IN</td><td>7090</td><td>Bedding</td></tr><tr><td>JMPH&nbsp;</td><td>SAS Institute, Inc., SAS Campus Drive, Cary, NC</td><td>&nbsp;v10.0.2</td><td>Statistische software</td></tr><tr><td>Microsoft Excel</td><td>Microsoft, One Microsoft Way, Redmond, WA</td><td>Excel 2013 (v 15.0)</td><td>Spreadsheet-software</td></tr><tr><td>GraphPad Prism 5</td><td>GraphPad software Inc., La Jolla, CA</td><td>v5.4</td><td>Grafische software</td></tr><tr><td>Mouse Huts</td><td>Bio-Serv, Flemington, NJ</td><td>K3272</td><td>Voor omgevingsverrijking</td></tr></tbody></table>

een quick fenotypische neurologische scoring system voor het evalueren van ziekteprogressie bij de sod1-g93a muismodel van als

A Quick Phenotypic Neurological Scoring System for Evaluating Disease Progression in the SOD1-G93A Mouse Model of ALS

De SOD1-G93A transgene muis is het meest gebruikte diermodel van amyotrofische laterale sclerose (ALS). Bij ALS TDI hebben we een fenotypisch screeningsprotocol ontwikkeld, hierin getoond in video, dat op betrouwbare wijze de neuromusculaire functie van SOD1-G93A muizen op een snelle manier beoordeelt. Dit protocol omvat een eenvoudig neurologisch scoresysteem (NeuroScore) ontworpen om de hindlimbfunctie te beoordelen. NeuroScore is gericht op de hindlimbfunctie omdat hindlimbdeficiënties het vroegst gerapporteerde neurologische teken van ziekte zijn bij SOD1-G93A muizen. Het protocol ontwikkeld door ALS TDI biedt een onbevooroordeelde beoordeling van het begin van parese (lichte of gedeeltelijke verlamming), progressie en ernst van verlamming en het is gevoelig genoeg om geneesmiddelgeïnduceerde veranderingen in ziekteprogressie te identificeren. In dit rapport minimaliseert de combinatie van een gedetailleerd manuscript met video scoreduideligheden en variatie tussen experimenten, waardoor het protocol kan worden overgenomen door andere laboratoria en vergelijkingen mogelijk worden tussen studies die op verschillende locaties plaatsvinden. We geloven dat dit videoprotocol kan dienen als een uitstekend trainingsinstrument voor huidige en toekomstige ALS-onderzoekers.

De neurologische score gegevens voor de 90 mannelijke en 94 vrouwelijke niet-behandelde SOD1-G93A muizen studeerde aan ALS TDI in 2014 werden geëvalueerd. De resultaten tonen aan dat mannelijke muizen kenmerkend een agressievere ziekteprogressie dan vrouwelijke muizen, zoals blijkt uit een groter deel van hun levensduur NS 1 dan bij vrouwen. NS 2 en 3 NS optreden met vrijwel gelijke frequentie over geslachten. NS 0 werd uitgesloten van de analyse omdat het wordt beschouwd als een &quot;normaal&quot; fenotype. NS 4 werd ...

Dit videoprotocol beschrijft een gevoelige, betrouwbare en snelle methode voor het evalueren van de neuromusculaire tekorten in een transgene muismodel van amyotrofische laterale sclerose.

Een Quick Fenotypische Neurologische Scoring System voor het evalueren van ziekteprogressie bij de SOD1-G93A muismodel van ALS

The SOD1-G93A transgenic mouse is the most widely used animal model of amyotrophic lateral sclerosis (ALS). At ALS TDI we developed a phenotypic screening ...

Het algemene doel van deze procedure is om de neuromusculaire functie van SOD one G 93 a muizen snel en betrouwbaar te evalueren door middel van een dagelijkse beoordeling van hun achterpotenfunctie met behulp van een eenvoudig fenotypisch neurologisch scoresysteem. Dit wordt bereikt door eerst de achterpoten van de muizen te observeren terwijl ze aan de staart worden opgehangen. De tweede stap is om de muizen te laten lopen terwijl hun gang wordt geobserveerd.Vervolgens worden de muizen op hun zij geplaatst om de aanwezigheid of afwezigheid van de schrijfreflex te testen. De laatste stap is het uitvoeren van de data-analyse door neurologische scoregegevens van muizencohorten in een ordinaal logistisch regressiemodel te passen. Uiteindelijk wordt ons fenotypische neurologische scoringssysteem gebruikt om de ziekteprogressie in de SOD1-G93A, een muismodel voor ALS, te beoordelen met als doel de effectiviteit van therapeutische interventies vast te stellen.Het belangrijkste voordeel van deze methode ten opzichte van alle andere bestaande technieken is dat deze snel, eenvoudig en betrouwbaar is, en minimale stress veroorzaakt bij de muizen. De implicaties van deze methode strekken zich uit tot de therapie voor amyotrofische laterale sclerose of ALS, omdat het een snelle beoordeling van therapeutische interventies mogelijk maakt in het meest gebruikte muismodel van de ziekte. Een visuele demonstratie is essentieel, aangezien de methode voor neurologische scoring moeilijk aan te leren is omdat de neurologische verschillen subtiel kunnen zijn.Begin met het huisvesten van mannelijke SOD1-G93A-muizen met één muis per kooi; huisvest vrouwelijke SOD1-G93A-muizen met maximaal twee per kooi. Bied de muizen een verrijkte omgeving in de vorm van plastic hutjes. Voorzie de muizen van voedsel en water ad libitum.Lichaamsgewichten voor alle muizen en studies op hetzelfde tijdstip. Het dagelijkse lichaamsgewicht is een gevoelige indicator voor de progressie van de ziekte en voor eventuele malaise die kan resulteren uit chronische medicatiewuistening. Beoordeel tijdens de studie dagelijks de neurologische score van elke muis via een regime van drie tests die sequentieel worden uitgevoerd.Kijk nauwkeurig, aangezien het bepalen van scores bij fenotypische overgangspunten tijdens de eerste test zeer moeilijk is. Houd bij de tail suspension test de muis ongeveer 1,5 inch vanaf de basis van de staart vast boven de draad bovenkant van de thuiskooi. Observeer de functie van de achterpoten gedurende een periode van één tot twee seconden en herhaal de test drie keer.Voor de looptest: Plaats de muis op een schoon oppervlak dat voldoende grip biedt en een loopafstand van ten minste 25 centimeter heeft. Laat de muis tot 75 centimeter lopen terwijl de gang wordt geobserveerd.Voor de test van de richtreflex plaatst u de muis op zijn zij en gebruikt u een stopwatch om de tijd te meten die nodig is om zich zonder hulp vanaf beide zijden right te zetten. Slechts één poging van deze test is vereist. Scoor elk achterlid, links of rechts, onafhankelijk op een schaal van nul tot vier op basis van het gezamenlijke resultaat van de drie fenotypische observatietesten.Een sinusscore van nul geeft aan dat de muis presymptomatisch is. Tijdens de suspensietest zijn de achterpoten volledig gestrekt weg van de laterale middellijn en blijven ze twee seconden of langer in deze positie. Daarnaast wordt tijdens de looptest een normale gang geobserveerd.Ken een score van één toe om de verschijning van de eerste symptomen aan te geven. Dit geldt als het achterpoot tijdens de suspensietest naar de laterale middellijn is geklapt, gedeeltelijk naar de laterale middellijn is geklapt, trilt of op een andere abnormale wijze gespreid is. Naast de zojuist getoonde symptomen van de suspensietest, moet de gang van een muis die een score van één krijgt, nog steeds normaal of slechts licht verlaagd lijken.Ken een score van twee toe ter indicatie van het begin van paresis. Indien tijdens de ophangingstest het achterste ledemaat gedeeltelijk of volledig inzakt, en daarnaast tijdens de looptest de achterpoten worden gebruikt voor voorwaartse beweging. Echter, de tenen krullen minimaal tweemaal naar beneden tijdens een wandeling van 75 centimeter, of een deel van de voet sleept, om een score van twee te krijgen.De muis moet ook nog in staat zijn om zichzelf right te zetten nadat deze binnen 10 seconden op beide zijden is geplaatst. Een sinusscore van drie duidt op verlamming. Als de muis tijdens de ophangtest rigide verlamming in de achterpoot vertoont of minimale gewrichtsbeweging heeft, kan de muis tijdens de looptest nog steeds voorwaartse beweging vertonen, echter niet door gebruik te maken van de achterpoten.Naast een sinusscore van drie moet de muis in staat zijn om zichzelf binnen 10 seconden recht te zetten nadat deze op beide zijden is geplaatst. Tot slot wordt een score van vier gedefinieerd als het humane eindpunt wanneer de muis rigide verlamming vertoont tijdens de suspensie. De test vertoont geen voorwaartse beweging tijdens de looptest met de achterpoten, en de muis is tevens niet in staat om zichzelf binnen 10 seconden recht te zetten na plaatsing op elke zijde.Mannetjesmuizen hebben doorgaans een agressievere ziekteprogressie dan vrouwtjesmuizen, wat blijkt uit een groter deel van hun levensduur waarin symptomen optreden die kunnen worden geclassificeerd met een neurologische score van één in vergelijking met vrouwtjes. Naarmate de symptomen toenemen tot het bereik van een neurologische score van twee of drie, is het aantal dagen dat op elke score wordt doorgebracht gelijk in frequentie tussen de geslachten. Hier worden ordinale logistieken getoond, statistische analysegrafieken gegenereerd met behulp van het zojuist beschreven neuroco-protocol.Deze gegevens zijn afkomstig uit een farmacologische studie naar drugseffectiviteit, waarbij een cohort SOD1-G93A-muizen dat de testverbinding TDI-173 ontving, werd vergeleken met een cohort muizen dat het vehikel ontving. Er werden geen statistisch significante verschillen waargenomen toen de geslachten afzonderlijk werden geanalyseerd, maar er werd wel statistische significantie bereikt toen de geslachten werden samengevoegd. Hoewel vergelijkbare trends zichtbaar waren, was de Kaplan-Meier-analyse van de overleving niet gevoelig genoeg om significante verschillen aan te tonen, zelfs niet wanneer de geslachten werden samengevoegd.Zodra het systeem onder de knie is, kan de scoren binnen een minuut per muis worden uitgevoerd, mits dit correct gebeurt. Na het bekijken van deze video zou u een goed inzicht moeten hebben in hoe de ziekteprogressie in de SOD one G 93, een muismodel voor ALS, kan worden beoordeeld met behulp van het Neuroco-systeem.

a-quick-phenotypic-neurological-scoring-system-for-evaluating-disease

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Beschrijven we een protocol voor de snelle en gevoelige kwantificering van de ernst van de ziekte in muismodellen van cerebellaire ataxie. De maatregelen omvatten achterste ledematen clasping, richel te testen, manier van lopen en kyphose. Dit protocol discrimineert effectief tussen de getroffen en niet-getroffen individuen, en detecteert de progressie van de getroffen personen in de tijd.

A Simple Composite Fenotype Scoring System voor het evalueren van muismodellen van cerebellaire ataxie

Een muismodel voor amyotrofische lateraal sclerose (ALS) is klinisch en gedragsmatig onderzocht. Als voorwaarde voor een begeleidende immunohistologische analyse de voorbereiding van het ruggenmerg wordt afgebeeld in detail.

Klinisch onderzoek en het ruggenmerg verwijderen in een muismodel voor Amyotrofische Lateraal Sclerose (ALS)

In dit artikel wordt een geoptimaliseerd testprotocol gepresenteerd voor de Rotarod-prestatietest, die wordt gebruikt voor het meten van progressieve neurologische handicaps bij met TMEV geïnfecteerde muizen.

Het meten van progressieve neurologische Disability in een muismodel van Multiple Sclerose

Hier beschreven is een gestage, gedrags screening aanpak die kan worden gebruikt om te screenen voor verbindingen die in vivo werkzaamheid vertonen op cognitief en functioneel motorisch gedrag bij transgene muismodellen van β-amyloïdose en tauopathie. Deze methoden zijn geoptimaliseerd om verbindingen te screenen voor activiteit in kort- en werkgeheugen taken.

Evaluatie van spontane alternatie, herkenning van nieuwe objecten en limb clasping in transgene muismodellen van Amyloid-B en Tau Neuropathology

Dit artikel beschrijft een werkwijze voor herhaalde metingen van ventilatie en respiratoire spieractiviteit in vrij gedragen amyotrofische laterale sclerose (ALS) muismodel gedurende ziekteprogressie met hele-lichaamsplethysmografie en elektromyografie via een geïmplanteerde apparaat telemetrie.

Herhaalde Meting van Respiratory spieractiviteit en Ventilatie in muismodellen van neuromusculaire aandoening

De meting van de geleiding van de zenuwen is een nuttig instrument om te beoordelen Muismodellen van neurodegeneratie maar wel vaak alleen toegepast ter stimulering van de nervus ischiadicus in hindlimbs. Hier beschrijven we een techniek voor het meten van samengestelde spier actiepotentiaal (CMAP) in vivo in de muis voorpoot spieren geïnnerveerd door de plexus brachialis.

In Vivo Elektrofysiologische meting van samengestelde spier actiepotentiaal van de voorpoten in muismodellen van Motor Neuron degeneratie

Experimentele auto-immuun encefalomyelitis (EAE) dient als een diermodel van multiple sclerose. Dit artikel beschrijft een benadering voor het scoren van ruggenmergontsteking, demyelinisatie en axonaal letsel bij EAE. Daarnaast wordt een methode gepresenteerd om oplosbare neurofilamentlichtniveaus in het muizenserum te kwantificeren, waardoor de beoordeling van axonaal letsel bij levende muizen wordt vergemakkelijkt.

Scoren van ontsteking, demyelinisatie en axonletsel van het centrale zenuwstelsel bij experimentele auto-immuunencefalomyelitis

Experimentele auto-immuun encefalomyelitis is een van de meest gebruikte muizenmodellen van multiple sclerose. In het huidige protocol worden C57BL/6J-muizen van beide geslachten geïmmuniseerd met myeline-oligodendrocytglycoproteïnepeptide, wat voornamelijk resulteert in oplopende parese van de staart en ledematen. Hier bespreken we het protocol van EAE-inductie en -evaluatie.

Modellering van multiple sclerose bij de twee geslachten: MOG35-55-geïnduceerde experimentele auto-immuun encefalomyelitis

Dit artikel presenteert een protocol voor het uitvoeren van het zeer translationele en onafhankelijk bewezen muis Stroke Unit (mSU) concept bij muizen met een grote beroerte. Het biedt ook een gestandaardiseerd protocol voor het uitvoeren van de focale experimentele beroerteschaal bij muizen, die de gedetecteerde focale tekorten van een beroerte evalueert, zelfs op de lange termijn.

Het Mouse Stroke Unit Protocol met gestandaardiseerde neurologische scores voor translationele onderzoeken naar muisberoertes

Dit artikel beschrijft intrathecale toedieningsmethoden voor op het CNS gerichte therapieën bij volwassen muizen, met de nadruk op protocolprecisie en het mogelijk maken van herhaalde injectie. Het bevat bevindingen uit een validatiestudie waarbij antisense-oligonucleotiden de expressie van mutant SOD1 verminderden in SOD1-ALS-modelmuizen, wat het nut van deze aanpak ondersteunt in preklinisch onderzoek naar neurodegeneratieve ziekten.

Lumbale intrathecale injectie van SOD1-ASO's voor precieze CNS-targeting en voorspellende effectiviteit bij menselijke SOD1-G93A ALS-muizen

Leer een snel fenotypisch neurologisch scoresysteem voor het evalueren van ziekteprogressie bij het SOD1-G93A muismodel van ALS. Deze methode helpt onderzoekers therapeutische interventies betrouwbaar te testen.

Een Quick Fenotypische Neurologische Scoring System voor het evalueren van ziekteprogressie bij de SOD1-G93A muismodel van ALS

Meer video's verkennen