Name: Een nieuwe aanpak die Elimineert Handling voor het bestuderen van agressie en de verliezer Effect in Drosophila melanogaster (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-12-30T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 19 s
Description: Leer een nieuwe methode om agressie te bestuderen in Drosophila melanogaster zonder handling. Dit vermindert stress en verbetert de betrouwbaarheid van gedragsmetingen bij winnaar- en verliezereffecten.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit onderzoek werd ondersteund door subsidies van het National Institute of General Medical Sciences (GM099883 en GM074675) naar EAK De financiers hadden geen rol in de onderzoeksopzet, het verzamelen en analyseren van gegevens, het besluit te publiceren, of de bereiding van het manuscript. We bedanken de mensen van onze werkplaats aan de Harvard Medical School voor het ontwerp van de gedrags-apparaat (contact: <a href="http://mikesmachine.com">http://mikesmachine.com).</a> Auteur bijdragen: ST, BC ontwierp de gedrags-apparaat. ST ontworpen en geoptimaliseerd het experimentele protocol. ST en BC uitgevoerd en de experimenten geanalyseerd. ST, EAK en BC schreef de krant.

Opmerking: Het volgende is een stap-voor-stap beschrijving van het experimentele protocol dat we gebruiken om betrouwbare triggering agressie tussen paren mannelijke fruitvliegjes (D. melanogaster). Deze procedure leidt tot de vorming van een &quot;winnaar&quot; effect. Met behulp van dit protocol, een korte termijn &quot;winner&quot; effect ook is onlangs gemeld 5,6. Figuur 1 toont de tijdlijn van de gedragsexperimenten. <img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/53395/53395fig1.jpg" /> Figuur 1. Tijdlijn van agressie experiment. Op dag 1, laat stadium male poppen (als vleugels worden zwart) worden geïsoleerd vers bereid isolatie flesjes. Op dag 5 na opkomst als volwassenen, worden 4 dagen oude mannelijke vliegen verdoofd met CO 2 en geverfd met verschillende kleuren voor identificatiedoeleinden. Op dag 7, voedsel bekers en vechten kamers zijnbereid om het opzetten van de gedragsexperimenten. Twee 6-7 dagen oude volwassen mannen zijn in de kamers geplaatst en zijn in staat om samen te werken. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53395/53395fig1large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a> 1. Dag 1: Sociaal isolement van Poppen <ol><li> Heffen en vlieg voorraden aan te houden in een milieuvriendelijke gecontroleerde 12 uur licht / 12 uur donker cyclus incubator bij 25 ° C en 50% relatieve vochtigheid. </li><li> Bereid isolatie flacons: Verwarm vers vlieg voedsel tot gesmolten. Met behulp van een Pasteur pipet ongeveer 1,5 ml gesmolten vlieg voedsel in enkele lege glazen reageerbuizen (1,6 x 10 cm). Laat het voedsel stollen. </li><li> Isoleer poppen: Met een fijn penseel, verwijder voorzichtig een laat stadium mannelijke pop (wanneer de vleugels worden zwart) uit de voorraad flesje en plaats het op de zijkant van een vers bereide levensmiddelen die reageerbuis. Close isolatie flesjes met katoenen (figuur 2). </li><li&gt; Plaats isolatie flesjes die poppen in de 12 uur licht / 12 uur donker incubator bij 25 ° C en 50% relatieve vochtigheid. </li></ol><img alt="Figuur 2" src="/files/ftp_upload/53395/53395fig2.jpg" /> Figuur 2. sociaal isolement. Men laat stadium male pop wordt op de zijde van een vers bereide isolatie flacon. Isolatie flesjes die pop zijn in de 12 uur licht / 12 uur donker broedstoof geplaatst bij 25 ° C en 50% relatieve vochtigheid. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53395/53395fig2large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a> 2. Dag 5: Het schilderen van de Vliegen voor individuele identificatie <ol><li> Voer deze stap op dag 5 met 4 dagen oude mannelijke vliegen en twee dagen voor de gedrags experimenten om de negatieve gevolgen van CO 2 anesthesie minimaliseren. </li><li> Verdoven vlieg met CO 2. </li&gt; <li> Met een fijne tandenstoker, plaats een kleine stip van acrylverf op de thorax. Plaats de verf op het hoofd, vleugels, buik en benen (figuur 3). </li><li> Laat verf droog gedurende ongeveer 10 seconden en zacht overdracht vliegen terug naar hun oorspronkelijke isolatie flesjes. </li><li> Terugkeer isolatie flacons naar 12 uur licht / 12 uur donker incubator bij 25 ° C en 50% relatieve vochtigheid. </li></ol><img alt="Figuur 3" src="/files/ftp_upload/53395/53395fig3.jpg" /> Figuur 3. Individuele identificatie. Na verlamming vlieg met CO 2, een druppeltje acrylverf wordt aangebracht op de thorax. Voor individuele identificatie doel worden verschillende kleuren gebruikt (wit en blauw hier). Zie de uitleg hieronder over het gebruik van CO 2 bij deze stap. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53395/53395fig3large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze Figu bekijken</a>opnieuw. 3. Dag 7: Voorbereiden van de Apparatuur <ol><li> Bereid Voedsel Cups: <ol><li> Verwarm vers vlieg voedsel tot het smelt. </li><li> Met behulp van een Pasteur pipet ongeveer 0,8 ml voedsel aan het deksel van een schroefdop flacon (1,5 cm diameter 1 cm hoogte) en laat afkoelen. Vermijd luchtbellen. </li><li> Maak verse gist pasta door het mengen van droge gist met een paar druppels water. Bij dik met een klein druppeltje gistpasta naar het midden van het voedselkop oppervlak met een tandenstoker (figuur 4). </li></ol></li></ol><img alt="Figuur 4" src="/files/ftp_upload/53395/53395fig4.jpg" /> Figuur 4. Het voorbereiden van het voedsel beker. Een voedingsmiddel beker is bereid met verse vlieg voedsel. Na het voedsel stolt, is een punt van gist pasta in het midden van het voedsel beker oppervlak. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53395/53395fig4large.jpg" target="_blank">Klik hier om v</a>IEW een grotere versie van deze figuur. <ol start="2"><li> Bereid Individuele Fighting Chambers: <ol><li> Grondig het apparaat en de individuele gevechten kamers met water voor gebruik elke keer. Droog met keukenpapier voor gebruik. </li><li> Plaats een voedselkop in het midden van elke bestrijding kamer en fixeer met een druppel kit. </li><li> Bedek vechten kamers met de inrichting klep (figuur 5). </li><li> Plaats het apparaat in een omgeving met hoge vochtigheid (60%) bij 25 ° C. </li><li> Plaats een lichtbron die boven het apparaat aan de gevechten kamers te verlichten en zet een videocamera voor het opnemen van boven. </li></ol></li></ol><img alt="Figuur 5" src="/files/ftp_upload/53395/53395fig5.jpg" /> Figuur 5. De voorbereiding van de individuele gevechten kamer. Het vers bereide gerechten kop met een punt van gist plakken op het oppervlak wordt bevestigd in gewassen individuele fivechtspel kamers. Chambers zijn gesloten met de twee-delige deksel waardoor het inbrengen van een ondoorzichtige plastic verdeler in afzonderlijke gevechten kamers. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53395/53395fig5large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a> 4. Dag 7: Behavioral Experiment <ol><li> Voer de gedragsexperimenten met 6-7 dagen oude mannelijke vliegen. </li><li> Plaats plastic verdelers in elkaar vechten kamer. </li><li> Verwijder de katoenen prop van de isolatie buis en plaats de buis onder een open gat aan de zijkant van de inrichting. </li><li> Laat de vliegen te voeren in de strijd kamer door negatieve geotaxis, meestal binnen een paar seconden. </li><li> Sluit de schuifwand na het viaduct de buis heeft verlaten en ging de kamer. </li><li> Herhaal de procedure om de tweede vlieg in de strijd kamer te introduceren aan de andere kant van het apparaat. </li><li> Plaats het apparaat weer in de verlichte videotaping positie. </li><li> Beginnen met video-opname en verwijder de plastic verdeler te laten vliegen om te interageren. <ol><li> Voor Agressie Experimenten: <ol><li> In deze experimenten, opnemen strijdt gedurende tenminste 20 minuten om de vorming van sterke dominantierelaties waarborgen. </li><li> Na de gewenste tijd, stopt de video-opname. </li><li> Verwijder vliegen uit de gevechten kamers door het omkeren van de hierboven beschreven procedure. </li><li> Grondig de gedrags-apparaat met zachte zeep en water na elk gebruik en spoelen. </li></ol></li><li> Voor &quot;Loser&quot; Effect Experimenten: Opmerking: In deze experimenten, eerst gevechten beschouwd als de conditionerende fase en tweede gevechten als de testfase. De periode van rust tussen de gevechten kunnen verschillen maar 10 minuten maakt de vorming van een sterke &quot;verliezer&quot; effect. <ol><li> Volg de hierboven beschreven om een ​​eerste gevecht te voeren procedure. </li><li> Kritische stap: Om de vorming van een &quot;verliezer&quot; mentaliteit, e inducerenNSure die eerste gevechten zijn minstens 20 minuten lang om sterke dominantie relaties. Na 20 min, opnieuw steek de plastic verdeler in gevechten kamers om de vliegen te scheiden. </li><li> Na een 10 minuten periode van rust, verwijder voorzichtig de plastic verdeler te laten vliegen om samen te werken voor de tweede gevechten. </li><li> Aan het einde van de tweede 20 min gevecht, stopt de video-opname. </li><li> Verwijder vliegt van behavioral kamers als hierboven. </li><li> Opnieuw grondig de gedrags inrichting. </li></ol></li></ol></li></ol> 5. Behavioral Analysis <ol><li> Overbrengen Movies <ol><li> Sluit camera&#39;s aan op de computer. </li><li> Omzetten MTS vliegt om vliegen .mov en meedoen films clips samen, met behulp van video omzetten van software en de optie &quot;join geselecteerde clips&quot;. </li><li> Observeren en elke film met video-reader software te analyseren. </li></ol></li><li> Scoren Gedrag Let op: dit kan handmatig worden gedaan of met onsing gedragsanalyse programma software indien beschikbaar. De onderstaande afbeelding beschrijft een mogelijke handmatige analyse voor een &quot;verliezer&quot; effect. <ol><li> Score tijde van de eerste ontmoeting tussen de vliegen op het eten beker (aard zijn wisselwerkingen tussen paren vliegen die ten minste 2 seconden duren) en het moment van verschijnen van de eerste uitval (een gedragspatroon waarbij een vlieg stijgt hoog op de achterpoten en klikt neer op en probeert de tegenstander te grijpen). Score dan de latentie longeren (het interval tussen de eerste ontmoeting en de eerste longe). </li><li> Tel het totaal aantal ontmoetingen en lunges tijdens een gevecht. Opmerking: Indien gewenst, men ook kan scoren andere gedragspatronen, zoals vleugel bedreiging, boksen, schermen, retraite of de nummers van ontmoetingen voor de eerste longe, bijvoorbeeld. </li><li> De score van de tijd van de oprichting van dominantie (tijd tussen de eerste ontmoeting en het tijdstip waarop men vliegt retraites gedurende drie opeenvolgende keer korting op het eten beker achterdeker ontvangen lunges). Notitie die vliegen is de winnaar en die de verliezer van de strijd. </li></ol></li><li> Berekenen van een &quot;Loser&quot; Effect <ol><li> Verdeel het aantal gevechten waarbij vorige verliezers verliezen 2e gevechten (Losers die verliezen: LL) door het totale aantal gevechten, en vermenigvuldig met 100. Het verkregen percentage vertegenwoordigt de &quot;verliezer&quot; effect: [(# Vliegt LL) / (# totaal strijd)] x 100 </li><li> Gebruik een Chi-square test te vergelijken of de &quot;winnaar&quot; effect statistisch verschillend van de verwachte waarde van 50%. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Chen, S., Lee, A. Y., Bowens, N. M., Huber, R., Kravitz, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fighting+fruit+flies%3A+a+model+system+for+the+study+of+aggression%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Fighting fruit flies: a model system for the study of aggression.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 99, 5664-5668 (2002).</li>
<li>Hsu, Y., Earley, R. L., Wolf, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+aggressive+behaviour+by+fighting+experience%3A+mechanisms+and+contest+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Rev+Camb+Philos+Soc%22%5BJournal%5D)">Modulation of aggressive behaviour by fighting experience: mechanisms and contest outcomes.</a> Biol Rev Camb Philos Soc. 81, 33-74 (2006).</li>
<li>Yurkovic, A., Wang, O., Basu, A. C., Kravitz, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Learning+and+memory+associated+with+aggression+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Learning and memory associated with aggression in Drosophila melanogaster.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 17519-17524 (2006).</li>
<li>Penn, J. K., Zito, M. F., Kravitz, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+social+defeat+reduces+aggression+in+a+highly+aggressive+strain+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">A single social defeat reduces aggression in a highly aggressive strain of Drosophila.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107, 12682-12686 (2010).</li>
<li>Trannoy, S., Chowdhury, B., Kravitz, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Handling+alters+aggression+and+%27loser%27+effect+formation+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Learn+Mem%22%5BJournal%5D)">Handling alters aggression and 'loser' effect formation in Drosophila melanogaster.</a> Learn Mem. 22, 64-68 (2015).</li>
<li>Trannoy, S., Kravitz, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Learning+and+memory+during+aggression+in+Drosophila%3A+handling+affects+aggression+and+the+formation+of+a+%27%27loser%27%27+effect%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nature+and+Science%22%5BJournal%5D)">Learning and memory during aggression in Drosophila: handling affects aggression and the formation of a ''loser'' effect.</a> Journal of Nature and Science. 1 (3), e56(2015).</li>
<li>Alekseyenko, O. V., Chan, Y. B., Li, R., Kravitz, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+dopaminergic+neurons+that+modulate+aggression+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Single dopaminergic neurons that modulate aggression in Drosophila.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 110, 6151-6156 (2013).</li>
<li>Dierick, H. A., Greenspan, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotonin+and+neuropeptide+F+have+opposite+modulatory+effects+on+fly+aggression%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Serotonin and neuropeptide F have opposite modulatory effects on fly aggression.</a> Nat Genet. 39, 678-682 (2007).</li>
<li>Williams, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+aggression+by+obesity-linked+genes+TfAP-2+and+Twz+through+octopamine+signaling+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Regulation of aggression by obesity-linked genes TfAP-2 and Twz through octopamine signaling in Drosophila.</a> Genetics. 196, 349-362 (2014).</li>
<li>Chase, I. D., Bartolomeo, C., Dugatkin, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aggressive+interactions+and+inter-contest+interval%3A+how+long+do+winners+keep+winning%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Anim.+Behav%22%5BJournal%5D)">Aggressive interactions and inter-contest interval: how long do winners keep winning?</a> Anim. Behav. 48, 393-400 (1994).</li>
<li>Goessmann, C., Hemelrijk, C., Huber, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+formation+and+maintenance+of+crayfish+hierarchies%3A+behavioral+and+self-structuring+properties%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Ecol+Sociobiol%22%5BJournal%5D)">The formation and maintenance of crayfish hierarchies: behavioral and self-structuring properties.</a> Behav Ecol Sociobiol. 48, 418-428 (2000).</li>
<li>Sturtevant, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experiments+on+sex+recognition+and+the+problem+of+sexual+selection+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J+Animal+Behav%22%5BJournal%5D)">Experiments on sex recognition and the problem of sexual selection in Drosophila.</a> J Animal Behav. 5, 351-366 (1915).</li>
<li>Jacobs, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+light+on+mating+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Ecology%22%5BJournal%5D)">Influence of light on mating of Drosophila melanogaster.</a> Ecology. 41, 182-188 (1960).</li>
<li>Dow, M. A., von Schilcher, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aggression+and+mating+success+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Aggression and mating success in Drosophila melanogaster.</a> Nature. 254, 511-512 (1975).</li>
<li>Hoffmann, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+laboratory+study+of+male+territoriality+in+the+sibling+species+Drosophila+melanogaster+and+D.+simulans%5BTitle%5D)+AND+%22Anim.+Behav%22%5BJournal%5D)">A laboratory study of male territoriality in the sibling species Drosophila melanogaster and D. simulans.</a> Anim. Behav. 35, 807-818 (1987).</li>
<li>Vrontou, E., Nilsen, S. P., Demir, E., Kravitz, E. A., Dickson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((fruitless+regulates+aggression+and+dominance+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">fruitless regulates aggression and dominance in Drosophila.</a> Nat Neurosci. 9, 1469-1471 (2006).</li>
<li>Nilsen, S. P., Chan, Y. B., Huber, R., Kravitz, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gender-selective+patterns+of+aggressive+behavior+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Gender-selective patterns of aggressive behavior in Drosophila melanogaster.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 12342-12347 (2004).</li>
<li>Fernandez, M. P., Kravitz, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aggression+and+courtship+in+Drosophila%3A+pheromonal+communication+and+sex+recognition%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Physiol+A+Neuroethol+Sens+Neural+Behav+Physiol%22%5BJournal%5D)">Aggression and courtship in Drosophila: pheromonal communication and sex recognition.</a> J Comp Physiol A Neuroethol Sens Neural Behav Physiol. 199, 1065-1076 (2013).</li>
<li>Alekseyenko, O. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+serotonergic+neurons+that+modulate+aggression+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Current+biology+%3A+CB%22%5BJournal%5D)">Single serotonergic neurons that modulate aggression in Drosophila.</a> Current biology : CB. 24, 2700-2707 (2014).</li>
<li>Asahina, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tachykinin-expressing+neurons+control+male-specific+aggressive+arousal+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Tachykinin-expressing neurons control male-specific aggressive arousal in Drosophila.</a> Cell. 156, 221-235 (2014).</li>
<li>Andrews, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Octopamine+neuromodulation+regulates+Gr32a-linked+aggression+and+courtship+pathways+in+Drosophila+males%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+genetics%22%5BJournal%5D)">Octopamine neuromodulation regulates Gr32a-linked aggression and courtship pathways in Drosophila males.</a> PLoS genetics. 10, e1004356(2014).</li>
<li>Zwarts, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complex+genetic+architecture+of+Drosophila+aggressive+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Complex genetic architecture of Drosophila aggressive behavior.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 108, 17070-17075 (2011).</li>
<li>Dierick, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+quantifying+aggression+in+male+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">A method for quantifying aggression in male Drosophila melanogaster.</a> Nat Protoc. 2, 2712-2718 (2007).</li>
<li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hierarchical+chemosensory+regulation+of+male-male+social+interactions+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Hierarchical chemosensory regulation of male-male social interactions in Drosophila.</a> Nat Neurosci. 14, 757-762 (2011).</li>
<li>Davis, S. M., Thomas, A. L., Nomie, K. J., Huang, L., Dierick, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tailless+and+Atrophin+control+Drosophila+aggression+by+regulating+neuropeptide+signalling+in+the+pars+intercerebralis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Tailless and Atrophin control Drosophila aggression by regulating neuropeptide signalling in the pars intercerebralis.</a> Nat Commun. 5, 3177(2014).</li>
<li>Yuan, Q., Song, Y., Yang, C. H., Jan, L. Y., Jan, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Female+contact+modulates+male+aggression+via+a+sexually+dimorphic+GABAergic+circuit+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Female contact modulates male aggression via a sexually dimorphic GABAergic circuit in Drosophila.</a> Nat Neurosci. 17, 81-88 (2014).</li>
<li>Perron, J. M., Huot, L., Corrivault, G. W., Chawla, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+carbon+dioxide+anaesthesia+on+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">Effects of carbon dioxide anaesthesia on Drosophila melanogaster.</a> J Insect Physiol. 18, 1869-1874 (1972).</li>
<li>Joachim, D., Curtsinger, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genotype+and+anesthetic+determine+mate+choice+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Genet%22%5BJournal%5D)">Genotype and anesthetic determine mate choice in Drosophila melanogaster.</a> Behav Genet. 20, 73-79 (1990).</li>
<li>Barron, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anaesthetising+Drosophila+for+behavioural+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">Anaesthetising Drosophila for behavioural studies.</a> J Insect Physiol. 46, 439-442 (2000).</li>
<li>Greenspan, R. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGreenspan%2C+RJ+%22Fly+Pushing%3A+The+theory+and+Practice+of+Drosophila+Genetics%22">Fly Pushing: The theory and Practice of Drosophila Genetics</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor. (1997).</li>
<li>Cabral, L. G., Foley, B. R., Nuzhdin, S. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+sex+trade+with+violence+among+genotypes+in+Drosophila+melanogaster%3F%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Does sex trade with violence among genotypes in Drosophila melanogaster?</a> PLoS One. 3 (4), e1986(2008).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Het moderne tijdperk van het gebruik van Drosophila met zijn krachtige genetische methoden als modelorganisme voor de studie van agressie begon ongeveer een tiental jaar geleden met de introductie van nieuwe experimentele arena&#39;s waarin betrouwbare gevechten gedrag zou kunnen worden verkregen met een enkele paren van vliegen 1,7, 8,17,19. Deze arena&#39;s opgenomen gewenste middelen (een food cup, potentiële partners) en een ruimte voor verliezer vliegt terug te trekken in. Wanneer de resultaten ...

Agressie in dierlijke systemen wordt sterk geassocieerd met het verwerven en houden van hulpbronnen zoals voedsel, grondgebied en vrienden. Gezien de belangrijke rol die deze speelt in de fitnessruimte van individuen, is het niet verwonderlijk dat de agressie zich heeft ontwikkeld over het dierenrijk. Als een adaptieve eigenschap die rechtstreeks ten goede mensen, is een sterke leren en geheugen component geassocieerd met agressie. In de competitie voor sociale rang, eerdere gevechten ervaring heeft invloed op de uitkomst van latere wedstrijden. In het algemeen eerdere verliezen ervaring toeneemt, en het winnen van ervaring vermindert de kans op verlies later wedstrijden (zogenaamde &quot;winnaar&quot; en &quot;winner&quot; effect). &quot;Loser&quot; effecten zijn waargenomen in een breed scala van soorten, en sommige rapporten suggereren dat deze kan duren voor meerdere dagen, terwijl &quot;winner&quot; effecten zijn meestal van kortere duur 2,10,11. Het eerste verslag van agressief gedragin fruitvliegen (D. ampelophila) werd door Sturtevant in 1915 in een betrekking met seks erkenning en geslachtsselectie 12 papier. Een halve eeuw later, meer volledige onderzoek van de mannelijke fruitvlieg agressie werden gemaakt, dat de meeste van de gedragspatronen waargenomen tijdens fruitvlieg gevechten beschreven. Deze experimenten werden meestal uitgevoerd in kleine groepjes van mannelijke en vrouwelijke vliegen waargenomen gedurende 13-15 uur uitgevoerd. Onlangs, met de toevoeging van krachtige genetische hulpmiddelen, dyadische hetzelfde geslacht strijd opstellingen en kortere tijden van observatie, D. melanogaster is uitgegroeid tot een belangrijk model voor de studie van de biologie van agressie 1,16. Analyse gevechten tussen hetzelfde geslacht paren van mannelijke en vrouwelijke vliegen aangetoond dat agressie gaat stereotype gedragspatronen dat de overgang van de ene naar de andere in een statistisch betrouwbare wijze 1,17. Sommige van de gedragspatronen waargenomen zijn sekse-specifieke terwijl anderen zijn waargenomen in strijds in beide geslachten. Male gevechten naar hogere intensiteit dan vrouwelijke gevechten en leiden tot de vorming van dominantierelaties duidelijke &quot;winnaars&quot; en &quot;verliezers&quot;. Op dit moment hebben veel laboratoria gestart onderzoek naar de biochemische 18, neurale 7,19-21, en ​​genetische 22 onderbouwing van agressie. Helaas, een meta-analyse van studies om inzicht strijd dynamiek en de vorming en instandhouding van dominantierelaties problematisch krijgen door het gebruik van een veelheid van experimentele procedures in verschillende laboratoria. In wezen alle van de in de literatuur beschreven technieken omvatten behandeling en manipulatie van vliegen om ze te introduceren in arena&#39;s 19,23,24 en tijdens de gedrags-experiment 3,4 om vliegen te dragen uit arena&#39;s. Behoedzame aspiratie is de meest voorkomende manier om vliegen te manipuleren 3,4,23-25, maar koud of CO 2 anesthesie worden ook gebruikt 9,26, hoewel prige studies reeds hebben gemeld dat deze procedures hebben schadelijke effecten op vlieg gedrag 27,28. Een periode van ten minste 24 uur wordt aanbevolen na het gebruik van een verdovingsmiddel om hun effecten op het gedrag van 29,30 minimaliseren. Vliegen leren van eerdere gevechten ervaring en hun gedragsproblemen gebruikspatroon in nieuwe situaties aan te passen, wat suggereert dat leren en geheugen te begeleiden en zijn de gevolgen van agonistische ontmoetingen. In die zin, vliegen gevechten lijken op operante conditionering leersituaties waarin vliegt leren dat een strategie heeft gewerkt en vervolgens gebruiken steeds vaker tijdens de daaropvolgende ontmoetingen. Vliegen veranderen hun gevechten strategieën na dominantie relaties tijdens gevechten zijn vastgesteld, met winnaars longeren meer en meer en verliezers minder en minder. Na een periode van scheiding eerdere losers toon meer onderdanig gedrag en zijn zeer waarschijnlijk verliezen 2e vecht wanneer gecombineerd met naïeve flies of eerdere winnaars 3,4. Echter, het ontbreken van een experimentele procedure die uitsluit hanteren van vliegen gedetailleerde studies van de &quot;verliezer&quot; effecten bemoeilijkt. In een recente studie vergeleken we twee experimentele procedures routinematig gebruikt in laboratoria (aspiratie en koud anesthesie) om vliegen te voeren in behavioral kamers om de nieuwe procedure die behandeling elimineert. De resultaten toonden aan dat koud verdoving had veel grotere negatieve effecten op agressie dan aspiratie, maar zelfs aspiratie verminderde het niveau van agressiviteit door vliegen. Aspiratie Wel veroorzaken zeer significante effecten op het leren en het geheugen dat agressie te begeleiden. Na identiek protocol met twee experimentele procedures (aspiratie en zonder behandeling), een robuuste &quot;verliezer&quot; effect werd alleen waargenomen wanneer de behandeling van vliegen werd geëlimineerd uit de experimentele procedure 5,6. Idealiter studies van Drosophila agressie in laboratoria dienen milieu situaties die normaal vliegen tegenkomen in het wild (concurrentie voor de middelen, grondgebied te verdedigen en de ruimte om te ontsnappen) bevatten. Bovendien moet proefomstandigheden worden geoptimaliseerd betrouwbaar induceren observeren en het gedrag onderzochte interpreteren (proberen dier handling minimaliseren, beperken het gebruik van CO 2 als anestheticum en standaardiseren van de experimentele procedures). In een poging om de meeste of alle van deze problemen, hebben we een nieuwe gedrags apparaat dat bij de behandeling van vliegen elimineert vóór, tijdens en na het inzetten gedragsproblemen arena. Met deze inrichting, vliegen gebruiken hun aangeboren negatieve geotaxis te worden verplaatst en overgebracht naar en uit de strijd kamers. Doordat handling vliegen, het protocol beoogt: (a) reduceren de gedrags variabiliteit tussen individuen; (b) verlagen van de tijd die nodig is voor vliegen om te communiceren en het genereren van duidelijke dominantie relaties (mannen); en (c) op betrouwbare wijze te induceren sterk genoeg gedragsproblemenral veranderingen in de vorming van &quot;verliezer&quot; effecten mogelijk te maken. Dit protocol wordt een nieuwe experimentele inrichting en een stapsgewijze procedure agressie analyseren en de vorming van een sterke &quot;winnaar&quot; effect in D. toestaan melanogaster. Wij verwachten dat deze gedragsproblemen inrichting gemakkelijk kan worden aangepast voor de studie van andere sociaal gedrag vertoond door fruitvliegen.

<table><tbody><tr><td>Drosophila melanogaster pupa</td><td>Bloomington Stock Center</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Standard fly food</td><td></td><td></td><td>Gemaakt in eigen huis.&nbsp;</td></tr><tr><td>Gedragskamers</td><td>Mike machine</td><td></td><td>Gemaakt in eigen huis. Neem direct&nbsp; contact op met het bedrijf voor meer informatie.</td></tr><tr><td>Borosiliccaat glazen flesjes</td><td>VWR International&nbsp;</td><td>47729-576</td><td>16 x 10 mm</td></tr><tr><td>Katoen</td><td>Fisherbrand</td><td>22-456-881</td><td>Elk merk kan worden gebruikt</td></tr><tr><td>Pasteur pipetten</td><td>VWR International&nbsp;</td><td>53300-567</td><td></td></tr><tr><td>Schilderpenseel&nbsp;</td><td>Blick Art Material</td><td>06157-7030</td><td>Rond, Grootte 3/0</td></tr><tr><td>Tandenstoker</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Elk merk kan worden gebruikt</td></tr><tr><td>Acrylverf (blauw/wit)</td><td>Blick Art Material</td><td>01637-5172/01637-1022</td><td>Elk merk kan worden gebruikt</td></tr><tr><td>Droge actieve gist</td><td>Sigma</td><td>YSC2-500G</td><td></td></tr><tr><td>Schroefdopbuis</td><td>VWR International&nbsp;</td><td>10011-394&nbsp;</td><td>15 mm diameter, 10 mm hoogte</td></tr><tr><td>Eppendorf</td><td>VWR International&nbsp;</td><td>22363212</td><td></td></tr><tr><td>Lint</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Elk merk kan worden gebruikt</td></tr><tr><td>Kunststof plakjes</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>70329-40</td><td>22 x 40 x 0,25 mm Dikte</td></tr><tr><td>Lichtbron (lamp)</td><td>VWR International&nbsp;</td><td>500003-418</td><td>Elk merk kan worden gebruikt</td></tr><tr><td>Timer</td><td>VWR International&nbsp;</td><td>62344-641</td><td>Elk merk kan worden gebruikt</td></tr><tr><td>Incubator</td><td>Percival</td><td></td><td>Neem direct contact op met de constructeur voor meer informatie.</td></tr><tr><td>Koolstofdioxide (CO2)</td><td>Medical-Technical Gases, Inc</td><td>14H31</td><td></td></tr><tr><td>Binoculaire</td><td>Nikon</td><td>SMZ-745</td><td>Elk merk kan worden gebruikt</td></tr><tr><td>Camera (SONY Handycam&nbsp; HDR-CX330)</td><td>B&amp;H</td><td>SOHDRCX330B</td><td>Elk merk kan worden gebruikt</td></tr><tr><td>Computer</td><td></td><td></td><td>Met minimaal 1,4 Ghz Processor, die draait op Microsoft Windows of Machintosh HD</td></tr><tr><td>ClipWrap</td><td>Online downloaden</td><td></td><td>Elke importsoftware kan worden gebruikt</td></tr><tr><td>QuickTime Player</td><td>Online downloaden</td><td></td><td>Elke leessoftware kan worden gebruikt</td></tr><tr><td>GraphPad Software</td><td>Online</td><td></td><td>Elke statistische software kan worden gebruikt</td></tr></tbody></table>

een nieuwe aanpak die elimineert handling voor het bestuderen van agressie en de &quot;verliezer&quot; effect in<em&gt; drosophila melanogaster</em

A New Approach that Eliminates Handling for Studying Aggression and the "Loser" Effect in Drosophila melanogaster

Agressief gedrag in Drosophila melanogaster bestaat uit de opeenvolgende expressie van stereotype gedragspatronen (analyse zie 1). Dit complex gedrag wordt beïnvloed door genetische, hormonale en omgevingsfactoren. Zoals in veel organismen, eerdere gevechten ervaring beïnvloedt de gevechten strategie van vliegen en het resultaat van latere wedstrijden: het verliezen van een gevecht verhoogt de kans op verlies later wedstrijden, onthullende &quot;verliezer&quot; effecten die waarschijnlijk te betrekken leren en geheugen 2-4. Het leren en geheugen dat de expressie van complexe sociale gedrag zoals agressie gepaard gaat, is gevoelig voor pre-test omgang met dieren 5,6. Vele experimentele procedures worden gebruikt in verschillende laboratoria agressie 09/07 echter geen routinematig gebruikte protocol dat uitsluit afhandeling van vliegen momenteel beschikbaar bestuderen. Hier melden wij een nieuwe gedrags-apparaat dat elimineert de behandeling van vliegen, met behulp instead hun aangeboren negatieve geotactic reacties op dieren te verplaatsen in of uit vechten kamers. In dit protocol zijn kleine ronde strijd arena&#39;s met een voedsel kopje verdeeld in twee gelijke helften door een verwijderbaar plastic slider voorafgaand aan het inbrengen van vliegen. Vliegen voer kamers van hun huis isolatie flesjes via schuifdeuren kamer deuren en geotaxis. Na verwijdering van plastic sliders, vliegen zijn vrij om te interageren. Na bepaalde tijd periodes, worden vliegen weer gescheiden door sliders voor verdere experimenten. Dit alles is eenvoudig te doen zonder de behandeling van individuele vliegen. Deze inrichting biedt een nieuwe benadering voor agressie en de bijbehorende leren en geheugen, zoals de vorming van &quot;winnaar&quot; effecten in vlieg gevechten bestuderen. Bovendien kan deze nieuwe general-purpose behavioral apparaat worden gebruikt om andere sociale gedrag van vliegen te bestuderen en moet, in het algemeen, van belang zijn voor het onderzoeken van ervaring gerelateerde veranderingen in de fundamentele gedrags-processen.

In dit gedeelte wordt het ontwerp van de gedrags-kamer en de analyse van een typische set van gedragsexperimenten de bovenstaande meten van agressie en de vorming van een &quot;verliezer&quot; effect beschreven protocol. Ook geïllustreerde zijn voorbeelden van andere gedragingen die kunnen worden gemeten met behulp van dit apparaat. Figuur 6 toont een schematische voorstelling van de nieuwe inrichting. De inrichting bestaat uit drie cilindrische wells (afmeting: 22,86 mm dia...

Tijdens fruitvlieg gevechten, de gedragspatronen waargenomen, vechten dynamiek, en de bijbehorende leren en geheugen worden beïnvloed door de experimentele omstandigheden. De hier gepresenteerde protocol beschrijft een nieuwe werkwijze die volledig elimineert hantering vliegen bij experimenten. Dit verbetert gevecht dynamiek en maakt de vorming van een sterke &quot;verliezer&quot; effecten.

Een nieuwe aanpak die Elimineert Handling voor het bestuderen van agressie en de &quot;verliezer&quot; Effect in<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Aggressive behavior in Drosophila melanogaster is composed of the sequential expression of stereotypical behavioral patterns (for analysis see 1). This ...

Het algemene doel van deze methode is om het ontstaan van 'loser' en 'winner' effecten bij drosophila, melanin, gaster te introduceren door het hanteren van de vliegen uit de gedragsprocedure te elimineren. De meeste gedragsstudies bij dieren die in een laboratoriumomgeving worden uitgevoerd, houden het hanteren van de dieren in. Het hanteren van de dieren induceert op zijn beurt meestal stress bij de dieren, en stress kan de gedragsstudies die u probeert uit te voeren beïnvloeden; daarom wordt getracht het stressvolle hanteren van dieren te elimineren.We hebben een nieuwe kamer ontwikkeld voor onze agressiestudies bij fruitvliegen die de hantering van de dieren vóór, tijdens of na de experimenten volledig elimineert. Met deze nieuwe kamers zijn alle gedragsparameters die we hebben gemeten verbeterd. Met deze methode minimaliseren we de gedragsvariabiliteit tussen individuen.We verkorten de tijd die nodig is om duidelijke dominantierelaties te genereren, en we waren in staat om sterke verliezers- en winnaarsmentaliteiten op te wekken. Deze kamers zijn eenvoudig in gebruik en kunnen multifunctioneel worden ingezet om verschillende gedragingen van fruitvliegen te bestuderen. Om het e

a-new-approach-that-eliminates-handling-for-studying-aggression-loser

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

Studeren Agressie in Drosophila (fruitvliegjes)

Drosophila larven zijn in staat om geur stimuli associëren met smaak beloning. Hier beschrijven we een eenvoudige gedragsmatige paradigma dat de analyse van appetitieve associatief olfactorische leren mogelijk maakt.

Appetitieve Associatieve Olfactorische Learning in<em&gt; Drosophila</em&gt; Larven

Agressie is een aangeboren gedrag en eerdere vechtervaring beïnvloedt de vechtstrategie en het resultaat van latere gevechten in vliegen. Deze video beschrijft een test die wordt gebruikt om het agressieve gedrag van Drosophilate bestuderen. Het voorbeeldprotocol bevat de test die wordt uitgevoerd in een opstelling die vliegbehandeling elimineert en daarom stress voor de dieren vermindert, wat anders de prestaties van de proefpersonen zou beïnvloeden.

Drosophila Agressietest: een methode om gedragsplasticiteit bij vliegen te testen

Hier presenteren we een protocol om de vermijding van gestreste individuen te kwantificeren. Dit paradigma is krachtig maar gebruiksvriendelijk en kan worden gebruikt om de invloed van genen en omgeving op een soort sociale interactie bij Drosophila melanogaster te beoordelen.

Ongecompliceerd Assay voor de kwantificering van Sociale Avoidance in Drosophila melanogaster

Dit protocol beschrijft een hoogdoorlaattest voor het testen van ei-legvoorkeuren van Drosophila melanogaster met een nauwkeurigheid per enkel dier. Deze test biedt een eenvoudige, efficiënte en schaalbare platform om genen en circuitonderdelen te identificeren die een eenvoudig besluitvormingsproces controleren.

High Throughput Assay to-eierleggende Voorkeuren van de individuele onderzoeken<em&gt; Drosophila melanogaster</em

We beschrijven een protocol voor het induceren van belonen en nonrewarding ervaringen in fruitvliegjes (Drosophila melanogaster) met behulp van vrijwillige ethanol consumptie als maat voor veranderingen in de beloning staten.

Een eenvoudige manier om Veranderingen Meet in Reward-zoekend gedrag Met behulp<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Dit werk beschrijft een eenvoudig gedragsparadigma dat de analyse van aversief associatief leren bij volwassen fruitvliegen mogelijk maakt. De methode is gebaseerd op het onderdrukken van het aangeboren negatieve geotaxisgedrag als gevolg van de associatie gevormd tussen een specifieke omgevingscontext en een elektrische schok.

Drosophila Passief vermijdingsgedrag als een nieuw paradigma om associatief aversief leren te bestuderen

Autisme Spectrum Stoornis (ASS) wordt geassocieerd met verminderd sociaal en communicatief gedrag en het ontstaan van repetitief gedrag. Voor het bestuderen van de onderlinge relatie tussen ASS-genen en gedragsstoornissen in het Drosophila-model , worden in dit artikel vijf gedragsparadigma's beschreven voor het bepalen van sociale afstand, agressie, verkering, verzorging en gewenningsgedrag.

Paradigma's voor gedragsbeoordeling in het Drosophila-model van autismespectrumstoornis

De hier gepresenteerde methode omvat het handmatig annoteren van beeldmateriaal dat is verkregen van Drosophila melanogaster voor specifiek verzorgingsgedrag. Het maakt het mogelijk om zowel het aantal vlooiingsperiodes als de totale tijd die aan vlooiing wordt besteed te kwantificeren om te evalueren op atypische fenotypes van zelfverzorging.

Kwantificering van het verzorgingsgedrag van Drosophila melanogaster voor evaluatie van overmatige verzorgingsfenotypes

Het protocol presenteert een high-throughput, kosteneffectieve methode voor het beoordelen van neurotoxiciteit in de fruitvlieg door middel van de kwantificering van locomotorische disfunctie als alternatief voor traditionele zoogdiermodellen. Het heeft tot doel de neurotoxische effecten van farmaceutische verbindingen, milieuagentia of genetische modificaties te evalueren met behulp van een gevoelig, reproduceerbaar en ethisch gunstig model.

Gedragsanalyse van locomotorische disfunctie bij Drosophila melanogaster als uitlezing voor neurotoxiciteit

Leer een nieuwe methode om agressie te bestuderen in Drosophila melanogaster zonder handling. Dit vermindert stress en verbetert de betrouwbaarheid van gedragsmetingen bij winnaar- en verliezereffecten.

Een nieuwe aanpak die Elimineert Handling voor het bestuderen van agressie en de "verliezer" Effect in

Meer video's verkennen