Name: Een eenvoudige methode voor Automated Solid Phase Extraction van watermonsters voor immunologische Analyse van Kleine verontreinigende stoffen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-01-01T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: Leer een geautomatiseerde SPE-methode voor watermonsters die estradiol pre-concentreert voor immunologische analyse. Deze kosteneffectieve techniek vervangt traditionele extractieprocessen en verbetert de monitoring van organische verontreinigingen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd gefinancierd door het zevende kaderprogramma van de Europese Unie FP7/2007-2013 onder subsidieovereenkomst nr. 265721. De auteurs danken het RIKILT Institute for Food Safety (NL) voor hun steun bij dit project.

Opmerking: Het volgende protocol beschrijft de SPE uitgevoerd op 100 ml water monster met C18 sorptiemiddel en elutie met 50% v / v methanol. De verrijkte monster wordt verdund tot 10% v / v methanol bereiken voordat de analyse van een enzymgekoppelde immunosorbent assay (ELISA) kit. 1. Voorbereiding van de reagentia <ol><li> Bereid de watermonsters <ol><li> Voorafgaand aan een andere stap, filteren elke 100 ml water monster met 0,2 um poriegrootte filters. </li><li> Spike het monster met gewenste concentratie door verdunning geschikt volume referentieoplossing in een volume water. Zo bereiden 100 ml water monster met 100 ng / l E2 door het verdunnen van 3,3 pl E2 referentieoplossing in een concentratie van 300 ug / L. Verdun deze oplossing tien keer om een ​​monster verrijkt met 10 ng / L E2. Verdun deze laatste nog tien keer een monster van 100 ml met 1 ng / L E2 verkrijgen. </li><li> Plaats het gefiltreerde monster (ongemodificeerde of spiked) in een glazen fles met GL45 draad. Gebruik het monster op dezelfde dag. Neem een ​​kleine fractie wordt geanalyseerd met ELISA beginconcentratie schatten. </li></ol></li><li> Bereid 300 ul eluens door verdunning methanol in gedeïoniseerd (di-) water tot 50% v / v in een strakke buis. </li></ol> 2. Voorbereiding van de SPE Column <ol><li> Bereid een 20 mg / ml suspensie van octadecyl-silicagel sorbensdeeltjes door toevoeging eerst 1600 pl methanol en vervolgens 400 gl di-water om 40 mg van omgekeerde fase sorbens. Goed sluit het deksel en schud met een vortex. </li><li> Het installeren van de onderste membraan in kolom <ol><li> Selecteer een Nylon membraan met poriegrootte 11 micrometer en plaats het op een dubbele laag van anti-stof weefsel. Met een 3 mm diameter pons gesneden twee houtbewerking van het membraan. </li><li> Pak een van de kleine membranen met een flatscreen-end filter pincet en plaats het op de ene kant van de kolom. </li><li> Schroef de vlakke bodem connector met de buis en draai. Het membraan is now op zijn plaats en het sorbens kan veilig worden toegevoegd. Teken een pijl op het lichaam van de kolom wijst naar het einde, waar het membraan geplaatst. </li></ol></li><li> De voorbereiding van de gepakte sorptiemiddel kolom <ol><li> Bevestig de kolom aan de houder met de pijl naar beneden. De kolom moet zo verticaal mogelijk worden ingesteld. </li><li> Bevestig een lege 10 ml wegwerpspuit aan het einde van de buis van de kolom via de Luer-Lock aansluitingen. </li><li> Bereid een micro-pipet met een 20-200 ul tip, zet het volume tot 100 ul. Deze pipetpunt formaat wordt aangepast aan de grootte van de kolom sorbens te bereiden. De procedure zou moeilijker met grotere pipettips zoals die gebruikt bij 1 ml pipetten zijn. </li><li> Schud het sorberende suspensie met een vortex en snel pipet 100 ul in het midden van de kolom. Tijdens het injecteren, aspireren voorzichtig alle gepipetteerde oplossing doorheen het membraan met behulp van de injectiespuit met de andere hand. Op dit stleeftijd, moet de oplossing vullen van de spuit vrij van deeltjes en een deeltjesgrootte bed kan eventueel worden waargenomen in de kolom. </li><li> Herhaal dit proces 2 keer door roeren van de voorraadsuspensie tussen alle pipetteerstappen homogene suspensie van de deeltjes in de oplossing te waarborgen. De verkregen kolom bevat 6 mg sorptiemiddel. </li><li> Wanneer de 300 ul suspensie zijn geladen en gedroogd door opzuigen met de injectiespuit, houdt de spuit in positie en plaats het tweede Nylon membraan aan de bovenzijde met behulp van de tang met de andere hand. </li><li> Schroef de tweede aansluiting met buis en gooi de spuit. De kolom SPE is klaar voor gebruik. </li></ol></li></ol> 3. Voorbereiding van het systeem <ol><li> Draai de kolom SPE op het apparaat met behulp van de Luer-Lock-aansluitingen. De pijl moet wijzen in dezelfde richting als die op de inrichting. </li><li> Sluit de fles met het monster op de inrichting van de schroevenmits GL45 veiligheid cap op. </li><li> Laad 200 gl eluent in de &#39;Eluent&#39; reservoir. </li><li> Belasting 800 pi van di-water in het &#39;verwateren&#39; reservoir. </li><li> Plaats een fles op de afvoer naar het verwerkte water op te vangen tijdens de extractie stap. Het formaat is niet belangrijk, maar de hoeveelheid dient voldoende groot met betrekking tot het monstervolume zijn. </li><li> Plaats een klein flesje op de sensor uitgang met het minimale volume van 1,5 ml. Een maximaal volume van 1 ml zal te klein zijn als belletjes zal vormen in deze outlet bij het verzamelen van verrijkt eluent en verdunning buffer. </li><li> Controleer de drukregelaar in gesloten stand handmatig draaien, reverse-rechts tot verdere verplaatsing niet mogelijk. </li></ol> 4. SPE met de Prototype <ol><li> Schakel de prototype door op de knop op de achterkant. </li><li> De voorbereiding van de user interface en het selecteren van het programma <ol><li> Open de gebruikersinterface. Selectde communicatie-poort van de computer waarop het apparaat is aangesloten uit de lijst, en klik op de knop &#39;Volgende&#39;. </li><li> Voer de waarden 580 voor PSET en 30 voor dpset. De pomp wordt aangepast om de druk in het druksysteem en reservoirs te handhaven op 580 ± 30 mbar uitgevoerd. </li><li> Selecteer de automatische modus. </li><li> In de automatische modus hoek, laadt het programma bestand in het vak &#39;configuratiebestand pad&#39;. </li></ol></li><li> Het aanpassen van de drukregelaar <ol><li> Start de pomp. </li><li> Draai handmatig de drukregelaar totdat de waarde lezen preg inferieur is, maar dicht bij 320 mbar. </li><li> Stop de pomp. </li></ol></li><li> Starten van de SPE procedure <ol><li> Druk op &#39;start&#39; in de automatische modus hoek. De pomp zal inschakelen en de winning, elutie en verdunning stappen zullen automatisch volgen elkaar. De gehele procedure een 100 ml monster wordt uitgevoerd in 50 minuten. </li><li>Controleer de waarde van preg. Het moet in de range 320 zijn - 350 mbar bij de winning stap om een ​​optimale debiet te garanderen. </li><li> Sluit het kleine flesje en bewaar bij 4-5 ° C in het donker tot analyse. Voer analyse in de volgende 30 uur tot degradatie te voorkomen. </li><li> Ontdoen van het verwerkte water. </li></ol></li><li> Het reinigen van het systeem Let op: Na elke extractieprocedure het systeem moet worden gereinigd om kruisbesmetting te voorkomen. <ol><li> Bereid een 10 ml oplossing van methanol 70% v / v in een glazen fles GL 45. </li><li> Stekker uit de kolom SPE en steek de buis met connectoren. </li><li> In de automatische modus selecteert u de &#39;schoonmaak&#39; bestand en start het met dezelfde druk instellingen. </li></ol></li></ol> 5. Detectie van estradiol Concentratie met ELISA <ol><li> Bereid de kalibratie monsters bij concentraties zoals aangegeven in het protocol die bij de ELISA kit die wordt gebruikt. Bereid een calibratie set met dezelfde matrix als het monster, en een calibratie set met methanol 10% v / v. </li><li> Doseer de benodigde hoeveelheid monster in de putjes op de plaat, volgens de instructies van de fabrikant. Gebruik ijkmonsters, ongewijzigde en spiked watermonsters die werden gefilterd, maar niet in methanol 10% v verwerkt met SPE, en verrijkt samples / v. Gebruik 3 putjes per monster aan de foutenbronnen bij de assay te verminderen. </li><li> Volg de aanwijzingen van het protocol dat wordt geleverd bij de kit voor de toevoeging van reagentia, incubatietijd, wassen en verdere reactie met het enzym. </li><li> Lees het optische signaal in elke put volgens instructies van de fabrikant kit met een plaatlezer instrument en het verzamelen van de gegevens. </li><li> Met de software van de plaatlezer instrument om de kalibratiekromme te passen en bepaal de E2 concentratie in het oorspronkelijke monster met dezelfde matrix, en in het verrijkte monsters met methanol 10% v / v. </li></ol>

<ol><li>Chang, H. S., Choo, K. H., Choi, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+methods+of+identification%2C+analysis+and+removal+of+endocrine+disrupting+compounds+%28EDCs%29+in+water%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Hazard.+Matter%22%5BJournal%5D)">The methods of identification, analysis and removal of endocrine disrupting compounds (EDCs) in water.</a> J. Hazard. Matter. 172, 1-12 (2009).</li>
<li>Azzouz, A., Souhail, B., Ballesteros, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Continuous+solid-phase+extraction+and+gas+chromatography-mass+spectrometry+determination+of+pharmaceuticals+and+hormones+in+water+samples%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Continuous solid-phase extraction and gas chromatography-mass spectrometry determination of pharmaceuticals and hormones in water samples.</a> J. Chromatogr. A. 1217, 2956-2963 (2010).</li>
<li>Tomsikova, H., Aufartova, J., Solich, P., Novakova, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+sensitivity+analysis+of+female-steroid+hormones+in+environ-mental+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">High sensitivity analysis of female-steroid hormones in environ-mental samples.</a> Trends Anal. Chem. 34, 35-58 (2012).</li>
<li>Ciofi, L., Fibbi, D., Chiuminatto, U., Coppini, E., Checchini, L., Del Bubba, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fully+automated+on-line+solid+phase+extraction+coupled+to+high-performance+liquid+chromatography-tandem+mass+spectrometric+analysis+at+sub-ng%2FL+levels+of+selected+estrogens+in+surface+water+and+wastewater%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Fully automated on-line solid phase extraction coupled to high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometric analysis at sub-ng/L levels of selected estrogens in surface water and wastewater.</a> J. Chromatogr. A. 1283, 53-61 (2013).</li>
<li>Robles-Molina, J., Lara-Ortega, F. J., Gilbert-Lopez, B., Garcia-Reyes, J. F., Molina-Diaz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-residue+method+for+the+determination+of+over+400+priority+and+emerging+pollutants+in+water+and+wastewater+by+solid-phase+extraction+and+liquid+chromatography-time-of-flight+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Multi-residue method for the determination of over 400 priority and emerging pollutants in water and wastewater by solid-phase extraction and liquid chromatography-time-of-flight mass spectrometry.</a> J. Chromatogr. A. 1350, 30-43 (2014).</li>
<li>Huang, C. H., Sedlak, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+estrogenic+hormones+in+municipal+waste+water+effluent+and+surface+water+using+enzyme-linked+immunosorbent+assay+and+gas+chromatography%2Ftandem+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Toxicol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Analysis of estrogenic hormones in municipal waste water effluent and surface water using enzyme-linked immunosorbent assay and gas chromatography/tandem mass spectrometry.</a> Environ. Toxicol. Chem. 20, 133-139 (2001).</li>
<li>Hintemann, T., Schneider, C., Schöler, H. F., Schneider, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Field+study+using+two+immunoassays+for+the+determination+of+estradiol+and+ethinylestradiol+in+the+aquatic+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Water+Res%22%5BJournal%5D)">Field study using two immunoassays for the determination of estradiol and ethinylestradiol in the aquatic environment.</a> Water Res. 40, 2287-2294 (2006).</li>
<li>Farré, M., Kuster, M., Brix, R., Rubio, F., Lopez de Alda, M. J., Barcelo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+study+of+an+estradiol+enzyme-linked+immunosorbent+assay+kit%2C+liquid+chromatography-tandem+mass+spectrometry%2C+and+ultra-performance+liquid+chromatography-quadrupole+time+of+flight+mass+spectrometry+for+part-per-trillion+analysis+of+estrogens+in+water+samples%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Comparative study of an estradiol enzyme-linked immunosorbent assay kit, liquid chromatography-tandem mass spectrometry, and ultra-performance liquid chromatography-quadrupole time of flight mass spectrometry for part-per-trillion analysis of estrogens in water samples.</a> J. Chromatogr. A. 1160, 166-175 (2007).</li>
<li>Pu, C., Wu, Y. F., Yang, H., Deng, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trace+analysis+of+contraceptive+drug+levonorgestrel+in+waste+water+samples+by+a+newly+developed+indirect+competitive+enzyme-linked+immunosorbent+assay+%28ELISA%29+coupled+with+solid+phase+extraction%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chim.+Acta%22%5BJournal%5D)">Trace analysis of contraceptive drug levonorgestrel in waste water samples by a newly developed indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) coupled with solid phase extraction.</a> Anal. Chim. Acta. 628, 73-79 (2008).</li>
<li>Van Emon, J. M., Gerlach, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+status+report+on+field-portable+immunoassay%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Sci.+Technol%22%5BJournal%5D)">A status report on field-portable immunoassay.</a> Environ. Sci. Technol. 29 (7), 312A-317A (1995).</li>
<li>Farré, M., Brix, R., Barcelò, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Screening+water+for+pollutants+using+biological+techniques+under+European+Union+funding+during+the+last+10+years%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Screening water for pollutants using biological techniques under European Union funding during the last 10 years.</a> Trends Anal. Chem. 24 (6), 532-545 (2005).</li>
<li>Schneider, C., Schöler, H. F., Schneider, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+enzyme-linked+immunosorbent+assay+for+ethinylestradiol+using+a+long-chain+biotinylated+EE2+derivative%5BTitle%5D)+AND+%22Steroids%22%5BJournal%5D)">A novel enzyme-linked immunosorbent assay for ethinylestradiol using a long-chain biotinylated EE2 derivative.</a> Steroids. 69, 245-253 (2004).</li>
<li>Heub, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+and+portable+solid+phase+extraction+platform+for+immuno-detection+of+17%CE%B2-estradiol+in+water%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chrom.+A%22%5BJournal%5D)">Automated and portable solid phase extraction platform for immuno-detection of 17β-estradiol in water.</a> J. Chrom. A. 1381, 22-28 (2015).</li>
<li>Petrovic, M., Eljarrat, E., Lopez de Alda, M. J., Barcelo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endocrine+disrupting+compounds+and+other+merging+contaminants+in+the+environment%3A+a+new+survey+on+new+monitoring+strategies+and+occurrence+data%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Bioanal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Endocrine disrupting compounds and other merging contaminants in the environment: a new survey on new monitoring strategies and occurrence data.</a> Anal. Bioanal. Chem. 378, 549-562 (2004).</li>
<li>Richardson, S. D., Ternes, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Water+analysis%3A+Emerging+contaminants+and+current+issues%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Water analysis: Emerging contaminants and current issues.</a> Anal. Chem. 86, 2813-2848 (2014).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Een nieuwe werkwijze voor de bereiding van watermonsters gevolgd door analyse met behulp immunoassay voorgesteld. Het instrument maakt het mogelijk om de vaste fase extractie uit te voeren op een geautomatiseerde en gebruiksvriendelijke manier. De filtratie van het watermonster vóór de injectie in het systeem kritisch. Eventuele deeltjes nog in de oplossing mogelijk verstopping van de vloeibare netwerk veroorzaken en belemmeren de kolom SPE. Een andere belangrijke stap is de bereiding van de...

Monstervoorbereiding is een belangrijke stap in een analytisch proces. Vooral het verwijderen van matrixeffecten, vermindering van storingen en de verrijking van het analyt nodig om nauwkeurige resultaten te bereiken en lage detectiegrenzen. Hormoonverstorende stoffen (EDC&#39;s) zijn van bijzonder belang vanwege hun actie op de levende organismen, zelfs wanneer aanwezig op zeer lage niveaus in het milieu. Het natuurlijke hormoon 17β-estradiol is aanwezig op de EU watervervuiling watch list en gevoelig te worden toegevoegd aan de lijst van prioritaire stoffen die vallen onder de Europese Kaderrichtlijn Water. Vaste fase-extractie (SPE) is gewoonlijk voor de analyse van kleine verontreinigingen in het water, zowel chemisch 1-5 (chromatografie, massaspectrometrie) en immunologische 6-9 detectiemethoden. De laatste kreeg belang op het gebied van toezicht op het milieu, zoals immunoassays zijn verkrijgbaar in grote verscheidenheid van formaten, zijn specifiek voor de tarGebruik analyt, en bereiken lage aantoonbaarheidsgrenzen. 6, 7, 10, 11 Diverse enzymgekoppelde immunosorbent assays (ELISA) zijn commercieel verkrijgbaar en in staat om meerdere monsters tegelijkertijd te analyseren op een multi-well plaat. De procedure bestaat uit achtereenvolgende reactiestappen die enkele uren kan duren. Het uiteindelijke reactieproduct kan optisch worden gedetecteerd om de concentratie van het doelwitmolecuul op basis van een ijkcurve te bepalen. Klassieke SPE procedures omvatten sorbens pre-conditioning, monstername, wassen, elutie en indampen van het eluens. Het oplosmiddel gebruikt voor het verdunnen van het extract wordt gekozen afhankelijk van de detectiemethode. Voor immunologische werkwijzen, de hoeveelheid organisch oplosmiddel beïnvloedt sterk de gevoeligheid van de werkwijze. 12 Naast het herstel en de pre-concentratie uitvoeringen, de werkwijze moet ook eenvoudig en kostenefficiënt. Automatisering van de procedure helpt tot-mens-gerelateerde fouten te verminderen. In onze vorige werk 13 we ons prototype voor geautomatiseerde SPE geïntroduceerd, en onze methode werd toegepast op de analyse van het natuurlijke hormoon 17β-estradiol in zee watermonsters. Met de huidige video willen we de technische voordelen van onze methode vergeleken met de traditionele off-line en on-line SPE, en de bijzondere compatibiliteit met detectie door immuno-reacties te markeren. We beschrijven het protocol toegepast watermonsters voor de detectie van 17β-oestradiol. SPE wordt uitgevoerd met octadecyl-silicagel (C18) sorbent fase en elutie wordt uitgevoerd met verdunde methanol.

<table><tbody><tr><td>Filter membrane 0.2 &mu;m pore size</td><td>Merck Millipore</td><td>GNWP04700</td><td>Voor monsterfiltratie</td></tr><tr><td>Nylon membrane 11 &mu;m pore size</td><td>Merck Millipore</td><td>NY1104700</td><td>Voor SPE-kolom</td></tr><tr><td>Disposable biopsy punch 5 mm</td><td>Medical Budget</td><td>39302439</td><td></td></tr><tr><td>Nucleodur C18 ec&nbsp;</td><td>Macherey Nagel</td><td>713550.01</td><td>50 &mu;m deeltjesdiameter</td></tr><tr><td>Synthetic sea water</td><td>Sigma Aldrich</td><td>SSWS500-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Methanol</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>17beta-estradiol standard</td><td>Enzo Life Science</td><td></td><td>300 ng/ml</td></tr><tr><td>17beta-estradiol ELISA kit</td><td>Enzo Life Science</td><td>ADI-900-008</td><td>96 wells, bereik 30 - 3.000 ng/L</td></tr></tbody></table>

een eenvoudige methode voor automated solid phase extraction van watermonsters voor immunologische analyse van kleine verontreinigende stoffen

A Simple Method for Automated Solid Phase Extraction of Water Samples for Immunological Analysis of Small Pollutants

Een nieuwe methode voor vastefase-extractie (SPE) milieu watermonsters voorgesteld. De ontwikkelde prototype is kostenefficiënt en gebruiksvriendelijk, en maakt het mogelijk om een ​​snelle, geautomatiseerde en eenvoudige SPE voeren. De pre-geconcentreerde oplossing is geschikt voor analyse door immunoassay, met een laag gehalte organisch oplosmiddel. Een werkwijze wordt beschreven voor de extractie en pre-percentage natuurlijke hormoon 17β-oestradiol in 100 ml watermonsters. Omgekeerde fase SPE wordt uitgevoerd met octadecyl-silicagel sorptiemiddel en elutie uitgevoerd met 200 pl methanol 50% v / v. Eluent wordt verdund door toevoeging van di-water om de hoeveelheid methanol te verlagen. Na bereiding handmatig SPE kolom, wordt de totale procedure automatisch uitgevoerd binnen 1 uur. Aan het eind van het proces wordt oestradiol concentratie gemeten met behulp van een commercieel enzym-gekoppelde immuun-sorbent assay (ELISA). 100-voudig pre-concentratie wordt bereikt en het gehalte aan methanol in slechts 10% v / v. Vol terugvorderingen van het molecuulworden bereikt met 1 ng / l spiked gedeïoniseerd en synthetische zeewater monsters.

Reproduceerbaarheid sorptiemiddel verpakking werd geëvalueerd door het drogen en het wegen van de gepipetteerde sorbens in glazen flesjes en het resultaat wordt getoond in figuur 1. Reproduceerbaarheid van het tijdstip van de injectie werd getest 100 ml monsters, zie figuur 2. Concentratie initiële en pre- spiked geconcentreerde monsters werden bepaald met een commerciële ELISA kit voor 17β-oestradiol en worden getoond in figuur ...

Een protocol voor de extractie en pre-concentratie van oestradiol uit watermonsters door gebruik te maken van een geautomatiseerd en geminiaturiseerd systeem wordt gepresenteerd.

Een eenvoudige methode voor Automated Solid Phase Extraction van watermonsters voor immunologische Analyse van Kleine verontreinigende stoffen

A new method for solid phase extraction (SPE) of environmental water samples is proposed. The developed prototype is cost-efficient and user friendly, and ...

Het algemene doel van deze methode voor monsterbereiding is om kleine, organische verontreinigingen uit watermonsters te preconcentreren op een gebruiksvriendelijke, kosteneffectieve en geautomatiseerde manier. Deze methode kan standaard SPE-processen vervangen bij het bestuderen van de contaminatie van watermonsters met behulp van immunodetectiemethoden, zoals immunoassays in wellplaten of biosensoren. De belangrijkste voordelen van deze techniek zijn dat de SPE-procedure is geautomatiseerd, terwijl de voetafdruk en de kosten van de instrumenten laag zijn in vergelijking met traditionele benaderingen.Bovendien voldoen de prestaties van het verrijkingsproces aan de eisen voor de analyse van immunoassays, zowel wat betreft het lage oplosmiddelgehalte als de efficiëntie van de preconcentratie. Filtreer eerst een watermonster van 100 milliliter met een filter met een poriegrootte van 0,2 micrometer. Plaats het gefiltreerde monster in een glazen fles met GL 45 schroefdraad.Bereid 300 µL eluent voor door methanol in gedeïoniseerd water te verdunnen tot 50% volume in een goed afsluitbare buis. Bereid vervolgens een suspensie van 20 mg/mL octadecyl silicaSorbent-deeltjes door 1.600 µL methanol gevolgd door 400 µL gedeïoniseerd water toe te voegen aan 40 mg reversed phase sorbent in een glazen flacon. Sluit het deksel stevig en meng met een vortexmixer.Plaats een nylon membraan met een poriegrootte van 11 micrometers op een dubbele laag stofvrij weefsel. Pons twee kleine stukjes met een diameter van drie millimeter uit het membraan. Pak vervolgens een van de kleine membranen met platte filterpincetten en plaats dit aan één zijde van de kolom.Schroef vervolgens de vlakke bodemconnector op de buis en draai deze vast. Teken daarna een pijl op de behuizing van de kolom die wijst naar het uiteinde waar het membraan is geplaatst. Bevestig de kolom vervolgens in de houder met de pijl naar beneden gericht.Bevestig een lege wegwerpspuit van 10 milliliter aan het uiteinde van de buis van de kolom met behulp van de onderste vergrendelconnectoren. Agiteer de sorbent-suspensie met de vortexmixer en pipetteer snel 100 microliters in het midden van de kolom. Aspireer tijdens het injecteren met de andere hand de gepipetteerde oplossing voorzichtig door het membraan met behulp van de spuit.De voorbereiding van de SPE-kolom is zeer belangrijk. U moet ervoor zorgen dat u de oplossing correct door het membraan aspireert met de spuit terwijl u de partikelsuspensie in de kolom injecteert. Anders zullen de partikels niet dicht genoeg worden gepakt.Herhaal het vorige proces nog twee keer, waarbij de voorraadsuspensie tussen alle pipetteerstappen wordt geschud om een homogene suspensie van de deeltjes in de oplossing te waarborgen. Nadat de gehele suspensie is opgeladen en is gedroogd door aspiratie met een spuit, houdt u de spuit op zijn plaats en plaatst u met de andere hand en een pincet het tweede nylon membraan aan de bovenzijde. Schroef vervolgens de tweede connector met een buisje vast en gooi de spuit weg.Zet op dit punt de kolom op het SPE-apparaat vast met behulp van de onderste vergrendelconnectoren. Sluit de fles met de monsteroplossing aan op het apparaat door de meegeleverde GL 45 veiligheidsdop erop te schroeven. Vul het eluentreservoir met 200 µL eluent.Laad vervolgens 800 µL gedeïoniseerd water in het verdunningsreservoir. Controleer of de drukregelaar in de gesloten stand staat door deze tegen de klok in te draaien totdat verdere beweging niet meer mogelijk is. Voer na het inschakelen van het prototype de waarden 580 voor pset en 30 voor delta pset in.Om de drukregelaar af te stellen, start u de pomp. Draai vervolgens handmatig aan de drukregelaar totdat de afgelezen waarde voor preg lager is dan, maar dicht bij 320 millibar ligt. Start na het stopzetten van de pomp de SPE-procedure door op start te drukken in de hoek voor de geautomatiseerde modus.Zodra de SPE-procedure is voltooid, sluit u het kleine monsterflesje en bewaart u dit bij vier tot vijf graden Celsius in het donker tot de ELISA-analyse. Om het systeem te reinigen, bereidt u in een glazen fles met GL 45-schroefdraad een oplossing van 10 milliliter 70 procent methanol (volumeprocent). Koppel de SPE-kolom los en sluit de slang aan met connectoren.Selecteer in de automatische modus het reinigingsbestand en start dit met dezelfde drukinstellingen die eerder werden gebruikt voor pset, delta pset en preg. De reproduceerbaarheid van de sorbentvulling werd geëvalueerd door het gepipetteerde sorbent in glazen vials te drogen en te wegen. De reproduceerbaarheid van de injectietijd werd getest voor de monsters van 100 milliliter.De concentraties van de initiële en gepreconcentreerde gespikede monsters werden bepaald met behulp van een commerciële ELISA-kit voor 17 beta-estradiol. Uit de kalibratiecurves blijkt duidelijk dat de methanolverhouding uit het verrijkte monster de gevoeligheid van de immunoassay niet beïnvloedt. Voor gedioniseerd water en kunstmatig zeewater werden herstelpercentages berekend van respectievelijk 128 ± 22% en 107 ± 6%.Zodra de techniek onder de knie is, kan de voorbereiding van een SPE-kolom in minder dan vijf minuten worden voltooid, mits deze correct wordt uitgevoerd. De gehele SPE-procedure kan in minder dan één uur worden afgerond. Na de ontwikkeling van deze techniek werd de weg vrijgemaakt voor onderzoekers in de milieukunde om de ontwikkeling van immunodetectiemethoden voor het monitoren van kleine organische verontreinigingen te onderzoeken.Na het bekijken van deze video zou u een goed begrip moeten hebben van hoe u watermonsters voorbereidt met ons kosteneffectieve, geautomatiseerde instrument voor de analyse van verontreinigende stoffen via immunoassays. Vergeet niet dat het werken met organische verontreinigingen en oplosmiddelen gevaarlijk kan zijn, en dat er altijd voorzorgsmaatregelen moeten worden genomen, zoals het dragen van geschikte handschoenen en een veiligheidsbril, bij het uitvoeren van dit proces.

a-simple-method-for-automated-solid-phase-extraction-water-samples

Research

JoVE Journal

Environment

Milieu

Dit protocol beschrijft het gebruik van een tangentiële stroming holle-fiber ultrafiltratie monsterconcentratie en een warmte dissociatie als andere stappen voor het detecteren van...

Een aangepaste EPA-methode 1623, dat tangentiële Flow holle-vezel ultrafiltratie en warmte Dissociatie stappen gebruikt om te detecteren op waterbasis<em&gt; Cryptosporidium</em&gt; En<em&gt; Giardia spp.</em

In this video, we demonstrate SPME-probe-based extraction of metabolites from a pre-harvested donor kidney. The extracted metabolites can be used to perform metabolomic and lipidomic analysis in order to assess the organ quality for transplantation.

Solid Phase Microextraction Sampling: A Probe-based Technique for Sample Extraction from Graft Tissues

Dit manuscript beschrijft een geautomatiseerde aanpak voor gelgrootteselectie voor het zuiveren van DNA-fragmenten voor next-generation sequencing. De Ranger-technologie biedt volledige automatisering van het gehele proces van agarose gel laden, elektroforetische analyse en herstel van gerichte DNA-fragmenten, waardoor high-throughput en hoge kwaliteit next-generation sequencing bibliotheken mogelijk zijn.

Geautomatiseerde Gel Size Selectie om de kwaliteit van next-generation sequencing bibliotheken Bereid uit Environmental watermonsters Verbeteren

Het fabricageprotocol van een dipool-ondersteunde solid phase extractie microchip voor de traceerbare metalenanalyse wordt gepresenteerd.

Fabricage van een dipool-geassisteerde Solid Phase Extraction Microchip voor Trace Metal Analysis in watermonsters

Een protocol over de karakterisering en toepassing van vijf verschillende passieve bemonsteringsapparaten wordt gepresenteerd.

Karakterisering en toepassing van passieve samplers voor Monitoring van bestrijdingsmiddelen in het water

Speciale zorg met behulp van "schone technieken" is vereist om watermonsters correct te verzamelen en te verwerken voor sporenmetaalstudies in aquatische omgevingen. Er wordt een protocol gepresenteerd voor bemonstering, verwerking en analytische procedures met als doel betrouwbare gegevens voor milieubewaking en resultaten met hoge gevoeligheid voor gedetailleerde sporenmetaalstudies te verkrijgen.

Clean monsterneming en analyse van de rivier en estuariene Waters voor Trace Metal Studies

We introduceren de VacuSIP, een eenvoudige, niet-invasieve en betrouwbare methode voor schoon en nauwkeurig puntsampling van water. Het systeem werd ontwikkeld en geëvalueerd voor de gelijktijdige verzameling van het water dat wordt ingeademd en uitgeademd door benthische suspensie-voeders in situ, om de verwijdering en uitscheiding van deeltjes en opgeloste verbindingen schoon op te meten.

VacuSIP, een verbeterde INEX Methode voor het<em&gt; In Situ</em&gt; Meten van Particulate en opgeloste componenten verwerkt door Active Suspension Voeders

Een protocol voor de uitgebreide extractie van lipiden, metabolieten en eiwitten uit biologische weefsels met behulp van een monster wordt gepresenteerd.

Een eenvoudige gefractieerde extractie methode voor de uitgebreide analyse van metabolieten, lipiden en proteïnen uit een enkele monster

Hier presenteren we een protocol voor de sequentiële gerichte kwantificering en niet-gerichte analyse van gefluoreerde verbindingen in water door de Spectrometrie van de massa. Deze methode biedt kwantitatieve niveaus van bekende fluorochemical verbindingen en identificeert onbekende chemicaliën in verwante monsters met semi-kwantitatieve ramingen van hun overvloed.

Identificeren van- en Polyfluorinated chemische soorten met een gecombineerde gerichte en niet-gerichte-Screening hoge-resolutie massa spectrometrie Workflow

Dit protocol presenteert een volledig geautomatiseerde workflow voor de extractie van geosmin en 2-methylisoborneol uit water en lipidenrijke visweefsels. De methode maakt het mogelijk om deze moleculen vroegtijdig op te sporen voordat ze geurdrempels bereiken. Er worden representatieve gegevens van een aquacultuuromgeving verstrekt.

Extractie en detectie van geosmin en 2-methylisoborneol in water en vis met behulp van soppenextractiesondes met hoge capaciteit en GC-MS

Leer een geautomatiseerde SPE-methode voor watermonsters die estradiol pre-concentreert voor immunologische analyse. Deze kosteneffectieve techniek vervangt traditionele extractieprocessen en verbetert de monitoring van organische verontreinigingen.

Een eenvoudige methode voor Automated Solid Phase Extraction van watermonsters voor immunologische Analyse van Kleine verontreinigende stoffen (Video) | JoVE Journal

Een eenvoudige methode voor Automated Solid Phase Extraction van watermonsters voor immunologische Analyse van Kleine verontreinigende stoffen

Meer video's verkennen