Name: A Novel Microchirurgische Model voor Heterotope, En Bloc borstwand, Thymus, en harttransplantatie in Muizen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-01-23T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 24 s
Description: Leer een nieuw microchirurgisch model voor heterotope borstwand-, thymus- en harttransplantatie bij muizen. Deze methode onderzoekt immuuntolerantie en allograftoverleving met vasculair beenmerg.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd gefinancierd door de American Association of Plastic Surgeons 2014 Academic Scholar Award.

Alle operatieve procedures werden in overeenstemming met de Johns Hopkins University en het Amerikaanse ministerie van Landbouw en Volksgezondheid Dienst eisen voltooid. Dit protocol volgt de Johns Hopkins University Animal Care en gebruik Comite, institutionele review board goedgekeurde richtlijnen (protocol nummer M013M490). Definitieve overleving gegevens werd voor de chirurgische procedures hieronder beschreven. Donor en ontvanger dieren krijgen preventieve anesthesie buprenorfine bij 0,1 mg / kg sc één uur voor de operatie en het ontvangende dier buprenorfine opnieuw wordt toegediend in dezelfde dosering na transplantatie en opnieuw gedoseerd als nodig is in de eerste 48 uur na de operatie. 1. Donor Allograft Recovery Opmerking: Begin de donor deel van het transplantaat 40 min eerder dan de ontvanger transplantatie aan ontvanger narcose te minimaliseren en een gelijktijdige eindtijd of licht oor te vergemakkelijkenlier eindtijd versus de ontvanger voorbereiding. <ol><li> Gebruik standaard steriele microchirurgische instrumenten en steriele handschoenen voor de procedure. Ons laboratorium maakt gebruik autoclaaf sterilisatie van microchirurgische instrumenten. </li><li> Verdoven van de donor muis (man) met behulp van isofluraan inductie verdamper op 4%. Met behulp van atraumatische mechanische tondeuse verwijder het haar van de hals-, borst- en buikstreek. Plaats het dier in rugligging en isofluraan op 1-2% te handhaven door middel van een neuskegel. Zorg voor voldoende verdoving tijdens de procedure door het periodiek evalueren van de teen knijpen terugtrekking reflex. </li><li> Voorafgaand aan de huid incisie schaal bereiden vindt het door toepassing van povidon-jood antiseptische gevolgd door isopropylalcohol met een steriel wattenstaafje. </li><li> Begin met een oppervlakkige dwarse incisie in de huid met een schaar over de baarmoederhals en de buikhuid. Sluit beide insnijdingen bilateraal langs de midaxillaire lijnen. </li><li> Met behulp van microchirurgische tangontleden de cervicale regio bilateraal naar de externe halsaders identificeren, afbinden en verdeel met 6-0 zijden hechtdraad en schaar. Vervolgens met behulp van elektrocauterisatie verdelen de sternocleidomastoideus spieren om de interne halsaders en gemeenschappelijke halsslagaders bloot, bilateraal. Laat een 6-0 zijden hechtdraad onder de linker-zijdige en de rechter-zijdige halsslagader en de interne halsaders in bulk mode. LET OP: Zij zullen worden gebonden en later verdeeld in stap 1.9. </li><li> Scherp verdelen de riem spieren en bijbehorende losse areolar weefsel, gelegen juist voor de luchtpijp, met een schaar om de resterende bijlagen van de cervicale regio te bevrijden. </li><li> Met behulp van bipolaire elektrocauterisatie en scherpe dissectie, verdeel de pectoralis major spieren en sleutelbeenderen naar de subclavia schepen en ligeren (6-0 zijden hechtdraad) bloot te leggen en te delen proximaal. </li><li> Vervolgens voorzichtig, begrijpen en de penis van het dier te trekken. Langs de dorsale gedeelte van de penis te visualiseren de dorsale ader van de penis, en desinfecterengebied met isopropylalcohol. Met behulp van een 30 G naald, injecteren 30.000 eenheden heparine intraveneus via de dorsale ader en laat de penis terug naar zijn oorspronkelijke positie terugslag. Gedeeltelijke lekkage van de heparine-oplossing in het omringende weefsel optreden. </li><li> Met behulp van de eerder geplaatste bulk banden rond gemeenschappelijke halsslagader en de interne halsader, afbinden en verdeel de structuren, bilateraal. </li><li> Volgende gebruik schaar om een ​​dwarse intrabdominal incisie te maken. Eviscerate de darmen om de infrahepatic inferior vena cava bloot te leggen en injecteer 2 ml koude Euro-Collins cardioplegie oplossing in de infrahepatic inferior vena cava. Zorg voor een goede injectie te visualiseren lever verkleuring en stopzetting van de hartslag voorafgaande aan de overgang naar de volgende stap. OPMERKING: Euro-Collins oplossing wordt bereid in ons laboratorium, zie de tabel van specifieke reagentia en instrumenten. </li><li> Met een schaar toegang tot de intrathoracale holte via een bilateraal diaphragmatic incisie van de blootgestelde buik. Verleng de incisie craniale door de intercostals spieren en ribben. Weerspiegelen borstwand het hart, de thymus, en grote vaten bloot terwijl tegelijkertijd zorgen voor het behoud van de interne thoracale vaten langs de borstwand. </li><li> Injecteer de suprahepatic inferior vena cava met 4 ml koud Euro-Collins cardioplegie-oplossing. </li><li> Identificeer de wortel van de aorta en sporenelementen distaal naar de afdalende aorta. Scherp gesneden de dalende aorta (behoud van maximale lengte). </li><li> Identificeer de pulmonaire kofferbak en verdeel net proximaal van haar filiaal punt (behoud van maximale lengte). Vervolgens met behulp van 2 ml koude Euro-Collins cardioplegie oplossing Spoel de pulmonaire stam en hart door een zachte plastic tip katheter in het lumen van de pulmonaire stam. </li><li> Met een 6-0 zijden hechtdraad, ligeren en verdeel de inferior vena cava, samenvloeiing van pulmonaire aders en accessoires takken van de bilaterale superior vena cava. Dan verheffenen ontleden het hart craniale van de bijlagen langs de belangrijkste stam bronchiën en de luchtpijp met zorg de luchtweg niet te betreden. Met behulp van scherpe en bipolaire elektrocauterisatie ontleden de borstwand, thymus, hart en volledig te bevrijden uit de donor muis. </li><li> Tot slot, trim de borstwand allotransplantaat ex vivo naar een kleiner formaat, met behulp van een schaar, langs het borstbeen en laterale costae, met zorg niet tot de interne thoracale vaten (figuur 1A) verstoren. Bloeding na revascularisatie minimaliseren, gebruikt bipolaire electrocauterization langs de randen van de osteomusculocutaneous borstbeen. </li><li> Plaats de allograft in 10 ml koud (4 ° Celcius) Euro-Collins oplossing als de ontvanger niet bereid is voor inzet. Echter, als de ontvanger is gereed voor bijvoegsel, breng de allograft rechtstreeks naar het operatiegebied ontvanger. </li></ol> 2. Ontvanger Voorbereiding Opmerking: Voor ontvanger anesthesie te minimaliseren,begint de ontvanger preparaat op afzonderlijke werkzame station ongeveer 40 min voorafgaand aan de voltooiing van de donor allograft oogst. <ol><li> Gebruik een aparte set van standaard steriele microchirurgische instrumenten en steriele handschoenen voor de procedure. </li><li> Verdoven van de ontvanger muis (man of vrouw) met behulp van isofluraan inductie verdamper op 4%. Met behulp van atraumatische mechanische tondeuse verwijder het haar van rechts cervicale en thoracale regio. </li><li> Plaats de muis in rugligging en de hoek van de juiste bovenste ledematen iets inferiorly vormen een hoek van 110 graden tussen het hoofd en de juiste bovenste ledematen. Onderhouden narcose op 1-2% isofluraan via een neuskegel. </li><li> Plaats aardolie oogzalf op de muis ogen met behulp van een katoenen tip applicator. Voorafgaand aan de huid incisie, op grote schaal voor te bereiden de operatieve site met povidonjood antiseptische gevolgd door isopropylalcohol. </li><li> Met behulp van een schaar, maken een incisie in de huid van de middenlijn langs de rechter inferieure border van de onderkaak en infero-lateraal breiden de incisie naar rechts thoracale regio. Met behulp van stompe dissectie met microvasculaire tang, mobiliseren de externe halsader door de omtrek vrije het schip van zacht weefsel en adventitia. Verdeel alle takken met behulp van elektrocauterisatie, en verwijder de rechter kwab van de submandibulaire klier met behulp van scherpe dissectie en elektrocauterisatie aan vrije ruimte voor de allograft. </li><li> Zorgen voor voldoende lengte van de externe halsader Evert over een manchet, en ligeren de externe halsader met een 6-0 zijden hechtdraad. Steek de ader door het lumen van een voorgesneden polyimide manchet en gebruik maken van een bulldog microvasculaire klem om het vat manchet complex vast te zetten. Vervolgens met behulp van een schaar, proximaal verdelen de externe halsader, Evert over de manchet, en bevestig op zijn plaats met een 10-0 nylon hechtdraad. (Figuur 1B) </li><li> Verdeel het recht sternocleidomastoideus met een bipolaire elektrocauterisatie om de gemeenschappelijke halsslagader bloot. Omtrek mobilize de craniale slagader om de distale punt in het cervicale gebied. Dit wordt bereikt met behulp van stompe dissectie van het schip met een tang op zacht weefsel en de omliggende adventitia verwijderen. </li><li> Met behulp van 6-0 zijden hechtdraad, ligeren en verdeel de gemeenschappelijke halsslagader. Passeren de slagader door het lumen van een voorgesneden polyimide manchet en zet het op zijn plaats met een bulldog microvasculaire klem zo dicht mogelijk bij de thoracale inlaat mogelijk. Verdeel het vat distaal, zacht verwijden van het schip met behulp van een microchirurgische dilatator, Evert over de manchet, en bevestig op zijn plaats met een 10-0 nylon hechtdraad. (Figuur 1B) OPMERKING: De specifieke microchirurgische dilatator wordt beschreven in de tabel van specifieke reagentia en instrumenten. </li></ol> 3. Allograft Inzet <ol><li> Onderhouden standaard steriele instrumenten en steriele handschoenen om de allograft binnen de ontvanger cervicale regio te plaatsen in een kop en schuine positie. </li><li> Plaats vervolgens de donor dalende AORtic lumen over de arteriële manchet constructie van de ontvanger en zet het op zijn plaats met een 10-0 nylon hechtdraad (figuur 1C en 1D). </li><li> Mode hetzelfde anastomose als in stap 3.2 tussen de donor longslagader en de eversie externe halsader cuff-constructie van de ontvanger in de muis (figuur 1C en 1D). </li><li> Verwijder eerst veneuze microvasculaire klem (externe halsader klem) en vervolgens de arteriële klem (gemeenschappelijke halsslagader klem) vrij te geven. Tijdens arteriële reperfusie, inspecteren het geheel van het transplantaat aan een bloeding te pakken. Als bloeding wordt gevisualiseerd, opnieuw de arteriële klem bloedverlies te minimaliseren en de bron van bloedingen gebruik bipolaire elektrocauterisatie te verzachten. </li><li> Inspecteer het transplantaat en zorgen voor hemostase. Vrijgeven en de arteriële microvasculaire klem volledig te verwijderen. Observeer het hart tekenen van reperfusie, die onmiddellijk zichtbaar volume met een snelle expansie van de hartkamers zal tonen, en wachten op beten beginnen binnen 0,5-1 min. Gebruik warm zoutoplossing (35 ° Celsius) naar het hart te bevochtigen. </li><li> Drapeer de borstwand in een anatomische positie, zodat zij geen knikken of spanningen op de anastomosen te induceren. Sluit de huid van de operatiewond wordt gebruikt 6-0 nylon hechtingen continue (figuur 1E). </li></ol> 4. postoperatieve zorg <ol><li> Dien een 0,3 ml normale zoutoplossing intraperitoneale vloeistof bolus onmiddellijk postoperatief voor vloeistof vervanging. </li><li> Dan subcutaan injecteren buprenorfine (0,1 mg / kg) en enrofloxacine (5 mg / kg) pijn en infectie profylaxe resp. </li><li> Plaats het dier onder een warmtelamp totdat ontwaken uit narcose en terug te keren naar borstligging. Tijdens het herstel, te inspecteren de nek tot het fibrilleren hartslag van de allograft adequate allograft perfusie visualiseren. </li><li> Eenmaal wakker en in de liggende positie, de terugkeer van de muis om een ​​aparte kooi (zonder het gezelschap van andere muizen) Wanneer voedsel en water ad libitum kunnen ontvangen. Door tijdelijke geringe beperkende beweging van de rechter bovenste lidmaat, reactie gelatine voedselbron op de vloer van de kooi. </li><li> Houd de ontvanger muis 1 uur na de operatie en vervolgens terug naar de kooi inrichting waar het voedsel en water ad libitum kunnen ontvangen en wordt driemaal daags geïnspecteerd op de eerste 24 uur op activiteit en voedingsinname. Monitor muizen tekenen van pijn en angst en re doses buprenorfine (0,1 mg / kg) subcutaan tweemaal daags als nodig is voor de eerste 72 uur. Onderzoekt de dieren per dag daarna en wegen elke week. </li><li> Neem contact op met een dierenarts medewerker eventuele muizen tonen tekenen van pijn, angst, of verminderde voeropname. Beschouw vroege euthanasie (in ons protocol de euthanasie techniek maakt gebruik van CO 2 overdosering van 7 min, gevolgd door cervicale dislocatie). </li><li> Beëindiging van de allograft hartslag wordt gedefinieerd als een specifiek eindpunt wordt gevraagd de muis te sacrificed. </li></ol>

<ol><li>Santiago, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+sternum+transplant+in+rats%3A+A+new+model+of+a+vascularized+bone+marrow+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Heterotopic sternum transplant in rats: A new model of a vascularized bone marrow transplantation.</a> Microsurgery. 19 (7), 330-334 (1999).</li>
<li>Bozkurt, M., Klimczak, A., Nasir, S., Zor, F., Krokowicz, L., Siemionow, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Composite+osseomusculocutaneous+sternum%2C+ribs%2C+thymus%2C+pectoralis+muscles%2C+and+skin+allotransplantation+model+of+bone+marrow+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Composite osseomusculocutaneous sternum, ribs, thymus, pectoralis muscles, and skin allotransplantation model of bone marrow transplantation.</a> Microsurgery. (1), 43-50 (2013).</li>
<li>Klimczak, A., Agaoglu, G., Carnevale, K. A., Siemionow, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+bilateral+vascularized+femoral+bone+marrow+transplantation+for+chimerism+induction+across+the+major+histocompatibility+%28MHC%29+barrier%3A+part+II%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Plast+Surg%22%5BJournal%5D)">Applications of bilateral vascularized femoral bone marrow transplantation for chimerism induction across the major histocompatibility (MHC) barrier: part II.</a> Ann Plast Surg. 57 (4), 422-430 (2006).</li>
<li>Agaoglu, G., Carnevale, K. A., Zins, J. E., Siemionow, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bilateral+vascularized+femoral+bone+transplant%3A+a+new+model+of+vascularized+bone+marrow+transplantation+in+rats%2C+part+I%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Plast+Surg%22%5BJournal%5D)">Bilateral vascularized femoral bone transplant: a new model of vascularized bone marrow transplantation in rats, part I.</a> Ann Plast Surg. 56 (6), 658-664 (2006).</li>
<li>Agaolgu, G., Unal, S., Siemionow, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+the+vascularized+bone+allograft+into+the+inguinal+region%5BTitle%5D)+AND+%22Plas+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">Transplantation of the vascularized bone allograft into the inguinal region.</a> Plas Reconstr Surg. 115 (6), 1794-1795 (2005).</li>
<li>Ozer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+tolerance+to+hind+limb+allografts+in+rats+receiving+cyclosporine+A+and+antilymphocyte+serum%3A+effect+of+duration+of+the+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Induction of tolerance to hind limb allografts in rats receiving cyclosporine A and antilymphocyte serum: effect of duration of the treatment.</a> Transplantation. 75 (1), 31-36 (2003).</li>
<li>Mundinger, G. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tunneled+superficial+inferior+epigastric+artery+%28SIEA%29+myocutaneous%2Fvascularized+femur+chimeric+flaps%3A+a+model+to+study+the+role+of+vascularized+bone+marrow+in+composite+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Tunneled superficial inferior epigastric artery (SIEA) myocutaneous/vascularized femur chimeric flaps: a model to study the role of vascularized bone marrow in composite allografts.</a> Microsurgery. 32 (2), 128-135 (2012).</li>
<li>Barth, R. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascularized+bone+marrow-based+immunosuppression+inhibits+rejection+of+vascularized+composite+allografts+in+nonhuman+primates%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Vascularized bone marrow-based immunosuppression inhibits rejection of vascularized composite allografts in nonhuman primates.</a> Am. J. Transplant. 11 (7), 1407-1416 (2011).</li>
<li>Siemionow, M., Izycki, D., Ozer, K., Ozmen, S., Klimczak, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+thymus+in+operational+tolerance+induction+in+limb+allograft+transplant+model%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Role of thymus in operational tolerance induction in limb allograft transplant model.</a> Transplantation. 81 (11), 1568-1576 (2006).</li>
<li>Nobori, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thymic+rejuvenation+and+the+induction+of+tolerance+by+adult+thymic+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Thymic rejuvenation and the induction of tolerance by adult thymic grafts.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 103 (50), 19081-19086 (2006).</li>
<li>Menard, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Composite+%E2%80%98thymoheart%E2%80%99+transplantation+improves+cardiac+allograft+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Composite ‘thymoheart’ transplantation improves cardiac allograft survival.</a> Am J Transplant. 4 (1), 79-86 (2004).</li>
<li>Hunt, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Taking+heart--cardiac+transplantation+past%2C+present%2C+and+future%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Taking heart--cardiac transplantation past, present, and future.</a> N Engl J Med. 355 (3), 231-235 (2006).</li>
<li>Shah, A. B., Patel, J. K., Rafiei, M., Morrissey, R. P., Kittleson, M. M., Kobashigawa, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+mean+first-year+heart+rate+on+outcomes+after+heart+transplantation%3A+does+it+make+a+difference%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Transplant%22%5BJournal%5D)">The impact of mean first-year heart rate on outcomes after heart transplantation: does it make a difference?</a> Clin Transplant. 27 (5), 659-665 (2013).</li>
<li>Kaczmarek, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tacrolimus+with+mycophenolate+mofetil+or+sirolimus+compared+with+calcineurin+inhibitor-free+immunosuppression+%28sirolimus%2Fmycophenolate+mofetil%29+after+heart+transplantation%3A+5-year+results%5BTitle%5D)+AND+%22J+Heart+Lung+Transplant%22%5BJournal%5D)">Tacrolimus with mycophenolate mofetil or sirolimus compared with calcineurin inhibitor-free immunosuppression (sirolimus/mycophenolate mofetil) after heart transplantation: 5-year results.</a> J Heart Lung Transplant. 32 (3), 277-284 (2013).</li>
<li>Mastrobuoni, S., Dell'Aquila, A. M., Azcarate, P. M., Rabago, G., Herreros, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+survival+%28%3E20+years%29+following+heart+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cardiovasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Long-term survival (>20 years) following heart transplantation.</a> J Cardiovasc Surg. 53 (5), 677-684 (2012).</li>
<li>Hamour, I. M., Khaghani, A., Kanagala, P. K., Mitchell, A. G., Banner, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+outcome+of+heart+transplantation%3A+a+10-year+single+centre+perspective+and+review%5BTitle%5D)+AND+%22QJM%22%5BJournal%5D)">Current outcome of heart transplantation: a 10-year single centre perspective and review.</a> QJM. 104 (4), 335-343 (2011).</li>
<li>Schultz, B. D., Mohan, R., Dorafshar, A. H., Gottlieb, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chest+Wall%2C+Thymus+and+Heart+Vascularized+Composite+Allograft+Proof+of+Concept+Cadaveric+Model+for+Heart+Transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Plast+Surg%22%5BJournal%5D)">Chest Wall, Thymus and Heart Vascularized Composite Allograft Proof of Concept Cadaveric Model for Heart Transplantation.</a> Ann Plast Surg. 73 (1), 102-104 (2014).</li>
<li>Sosin, M., Torregrossa, G., Gerosa, G., Tuffaha, S. H., Dorafshar, A. H. Pushing the Boundary of Solid Organ and Vascularized Composite Allotransplantation: A Clinical Chest Wall, Thymus, and Heart Transplant Simulation. American Society of Reconstructive Microsurgery Annual Meeting. 2015 Jan 26, Paradise Island, Bahamas, , (2015).</li>
<li>Oberhuber, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+Cervical+Heart+Transplantation+Model+Using+a+Modified+Cuff+Technique%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Murine Cervical Heart Transplantation Model Using a Modified Cuff Technique.</a> J Vis Exp. (92), e50753(2014).</li>
<li>Huang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+model+of+cervical+heterotopic+cardiac+transplantation+for+chronic+rejection+research%5BTitle%5D)+AND+%22Zhongguo+Xiu+Fu+Chong+Jian+Wai+Ke+Za+Zhi%22%5BJournal%5D)">A modified model of cervical heterotopic cardiac transplantation for chronic rejection research.</a> Zhongguo Xiu Fu Chong Jian Wai Ke Za Zhi. 22 (12), 1508-1510 (2008).</li>
<li>Hasegawa, T., Visovatti, S. H., Hyman, M. C., Hayasaki, T., Pinsky, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+vascularized+murine+cardiac+transplantation+to+study+graft+arteriopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Heterotopic vascularized murine cardiac transplantation to study graft arteriopathy.</a> Nat Protoc. 2 (3), 471-480 (2007).</li>
<li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+transplantation+in+congenic+strains+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Heart transplantation in congenic strains of mice.</a> Transplant Proc. 5 (1), 733-735 (1973).</li>
<li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primarily+vascularized+allografts+of+hearts+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+role+of+H-2D%2C+H-2K%2C+and+non-H-2+antigens+in+rejection.+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Primarily vascularized allografts of hearts in mice.</a> The role of H-2D, H-2K, and non-H-2 antigens in rejection. Transplantation. 16 (4), 343-350 (1973).</li>
<li>Niimi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+technique+for+heterotopic+cardiac+transplantation+in+mice%3A+experience+of+3%2C000+operations+by+one+surgeon%5BTitle%5D)+AND+%22J+Heart+Lung+Transplant%22%5BJournal%5D)">The technique for heterotopic cardiac transplantation in mice: experience of 3,000 operations by one surgeon.</a> J Heart Lung Transplant. 20 (10), 1123-1128 (2001).</li>
<li>Plenter, R. J., Zamora, M. R., Grazia, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Four+decades+of+vascularized+heterotopic+cardiac+transplantation+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Surg%22%5BJournal%5D)">Four decades of vascularized heterotopic cardiac transplantation in the mouse.</a> J Invest Surg. 26 (4), 223-228 (2013).</li>
<li>Matsuura, A., Abe, T., Yasuura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simplified+mouse+cervical+heart+transplantation+using+a+cuff+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Simplified mouse cervical heart transplantation using a cuff technique.</a> Transplantation. 51 (4), 896-898 (1991).</li>
<li>Tomita, Y., Zhang, Q. W., Yoshikawa, M., Uchida, T., Nomoto, K., Yasui, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+technique+of+heterotopic+cervical+heart+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Improved technique of heterotopic cervical heart transplantation in mice.</a> Transplantation. 64 (11), 1598-1601 (1997).</li>
<li>Brandacher, G., Grahammer, J., Sucher, R., Lee, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+basic+and+translational+research+in+reconstructive+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Birth+Defects+Res+C+Embryo+Today%22%5BJournal%5D)">Animal models for basic and translational research in reconstructive transplantation.</a> Birth Defects Res C Embryo Today. 96 (1), 39-50 (2012).</li>
<li>Quaini, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chimerism+of+the+transplanted+heart%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Chimerism of the transplanted heart.</a> N Engl J Med. 346 (1), 5-15 (2002).</li>
<li>Laflamme, M. A., Myerson, D., Saffitz, J. E., Murry, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+cardiomyocyte+repopulation+by+extracardiac+progenitors+in+transplanted+human+hearts%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Evidence for cardiomyocyte repopulation by extracardiac progenitors in transplanted human hearts.</a> Circ Res. 90 (6), 634-640 (2002).</li>
<li>Leventhal, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chimerism+and+tolerance+without%2C+GVHD+or+engraftment+syndrome+in%2C+HLA-mismatched+combined+kidney+and+hematopoietic+stem+cell+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Chimerism and tolerance without, GVHD or engraftment syndrome in, HLA-mismatched combined kidney and hematopoietic stem cell transplantation.</a> Sci Transl Med. 4 (124), 124-128 (2012).</li>
<li>Talmor, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+marrow-derived+chimerism+in+non-irradiated%2C+cyclosporin-treated+rats+receiving+microvascularized+limb+transplants%3A+evidence+for+donor-derived+dendritic+cells+in+recipient+lymphoid+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology%22%5BJournal%5D)">Bone marrow-derived chimerism in non-irradiated, cyclosporin-treated rats receiving microvascularized limb transplants: evidence for donor-derived dendritic cells in recipient lymphoid tissues.</a> Immunology. 86 (3), 448-455 (1995).</li>
<li>Arslan, E., Klimczak, A., Siemionow, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chimerism+induction+in+vascularized+bone+marrow+transplants+augmented+with+bone+marrow+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Chimerism induction in vascularized bone marrow transplants augmented with bone marrow cells.</a> Microsurgery. 27 (3), 190-199 (2007).</li>
<li>Page, E. K., Dar, W. A., Knechtle, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tolerogenic+therapies+in+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Tolerogenic therapies in transplantation.</a> Front Immunol. 3, 198(2012).</li>
<li>Lukomska, B., Durlick, M., Cybulska, E., Olszewski, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+immunological+reconstitution+induced+by+vascularized+bone+marrow+versus+bone+marrow+cell+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transpl+Int%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of immunological reconstitution induced by vascularized bone marrow versus bone marrow cell transplantation.</a> Transpl Int. 9, Suppl 1. S492-S496 (1996).</li>
<li>Brandacher, G., Lee, W. P., Schneeberger, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimizing+immunosuppression+in+hand+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev+Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Minimizing immunosuppression in hand transplantation.</a> Expert Rev Clin Immunol. 8 (7), 673-683 (2012).</li>
<li>Lin, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neck+as+a+preferred+recipient+site+for+vascularized+composite+allotransplantation+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">The neck as a preferred recipient site for vascularized composite allotransplantation in the mouse.</a> Plast Reconstr Surg. 133 (2), 133e(2014).</li>
<li>Sucher, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemiface+allotransplantation+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">Hemiface allotransplantation in the mouse.</a> Plast Reconstr Surg. 129 (4), 867-870 (2012).</li>
<li>Sucher, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+hind+limb+transplantation%3A+a+new+composite+tissue+allotransplantation+model+using+nonsuture+supermicrosurgery%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Mouse hind limb transplantation: a new composite tissue allotransplantation model using nonsuture supermicrosurgery.</a> Transplantation. 90 (12), 1374-1380 (2010).</li>
<li>Sucher, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+hind-limb+transplantation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Orthotopic hind-limb transplantation in rats.</a> J Vis Exp. (41), e2022(2010).</li>
<li>Maglione, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+technique+for+heterotopic+vascularized+pancreas+transplantation+in+mice+to+assess+ischemia+reperfusion+injury+and+graft+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">A novel technique for heterotopic vascularized pancreas transplantation in mice to assess ischemia reperfusion injury and graft pancreatitis.</a> Surgery. 141 (5), 682-689 (2007).</li>
<li>Zou, Y., Brandacher, G., Margreiter, R., Steurer, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cervical+heterotopic+arterialized+liver+transplantation+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Cervical heterotopic arterialized liver transplantation in the mouse.</a> J Surg Res. 93 (1), 97-100 (2000).</li>
<li>Kamada, N., Calne, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+liver+transplantation+in+the+rat.+Technique+using+cuff+for+portal+vein+anastomosis+and+biliary+drainage%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Orthotopic liver transplantation in the rat. Technique using cuff for portal vein anastomosis and biliary drainage.</a> Transplantation. 28 (1), 47-50 (1979).</li>
<li>Zimmermann, F. A., Butcher, G. W., Davies, H. S., Brons, G., Kamada, N., Türel, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+for+orthotopic+liver+transplantation+in+the+rat+and+some+studies+of+the+immunologic+responses+to+fully+allogeneic+liver+grafts.+Transplant%5BTitle%5D)+AND+%22Proc%22%5BJournal%5D)">Techniques for orthotopic liver transplantation in the rat and some studies of the immunologic responses to fully allogeneic liver grafts. Transplant.</a> Proc. 11 (1), 571-577 (1979).</li>
</ol>

De auteurs hebben geen belangenconflicten of financiële openbaarmakingen te melden.

Er zijn een groot aantal verschijnselen die factor in het immunologische onderzoek allotransplantatie, die omvatten maar zijn niet beperkt tot mechanismen van acute en chronische afstoting, directe en indirecte antigeenpresentatie, ontvanger sensibilisatie, of de inductie van gemengd chimerisme. 19 Diermodellen zijn geworden de gouden standaard voor de studie van transplantatie immunologie en muismodellen algemeen toegepast vanwege hun lage kosten, beschikbaarheid van transgene en knockout muizen, commercieel...

Harttransplantatie is de behandelingsoptie bij hartfalen in een vergevorderd stadium. Dankzij technische vooruitgang en farmacologische innovaties zijn de acceptatiegraad van het vroege transplantaat nu hoger dan 90%.12,13 Ondanks dit, blijft de overleving van het transplantaat na 5 jaar op 60-80% en chronische afstoting, gekenmerkt door transplantaatvasculopathie, onvermijdelijk.14-16 Bovendien worden patiënten onderworpen aan meerdere chirurgische ingrepen en levenslange immunosuppressie, die gepaard gaan met borstwanddeformiteiten en medische gevolgen en toxiciteiten, respectievelijk. De behoefte aan innovatieve benaderingen om de overleving van het transplantaat te verlengen, de immunosuppressieve vereisten te minimaliseren en reconstructieve opties voor anatomische afwijkingen aan te bieden, is dringend.
Vascularized composite allotransplantation biedt een unieke strategie voor het verbeteren van de resultaten van harttransplantatie, zowel vanuit immunoloogisch oogpunt als vanuit reconstructief perspectief.17 Vascularized composite allografts zijn ook uniek omdat ze een inherente bron van donorafkomstige hematopoietische stamcellen hebben, wat een gunstige mogelijkheid heeft om immunosuppressie te verminderen en gemengde chimerisme te induceren en te onderhouden.1-8 Bovendien heeft co-transplantatie van de thymus gebleken de overleving te verlengen van zowel vaste orgaantransplantaten als vascularized composite allografts.2,9-11 Het combineren van deze strategieën met harttransplantatie biedt een nieuwe oplossing voor de eerder genoemde uitdagingen bij harttransplantatie.18
Muismodellen zijn uitstekende platforms voor mechanistische in vivo onderzoek vanwege de beschikbaarheid van antilichamen en goed gedefinieerde ingefokt en knockout stammen.19-21 Hoewel harttransplantatie bij muizen vaak wordt bestudeerd met behulp van een heterotope intra-abdominale microchirurgische hechtingstransplantatiemodel22-25, heeft een heterotope, cervicale, niet-hechtingsmanchet techniek zich als uiterst reproduceerbaar en betrouwbaar getoond en heeft het minder snel trombose.19,26,27 Het doel van deze studie is om een heterotope en bloc osteomyocutaneus borstwand, thymus en harttransplantatie techniek bij muizen te ontwikkelen om de immunologische mechanismen van gecombineerde vaste orgaan en vascularized composite allotransplantatie te bestuderen met behulp van een cervicale niet-hechtingsmanchet techniek. Dit clustertransplantaat wordt geperfuseerd door de anastomose van de donor aflopende aorta naar de rechter gemeenschappelijke halsslagader en de donor longslagader naar de rechter externe halsslagader. Behoud van de interne thoracale vaten en bijbehorende thymus takken is van het grootste belang voor het perfunderen van de borstwand (borstbeen, ribben, spieren en huid) en thymus.

<table><tbody><tr><td>Euro-Collins Oplossing</td><td></td><td></td><td>De oplossing wordt niet commercieel gekocht, maar eerder bereid in het laboratorium. Om een 500 ml oplossing te maken, voeg je het hieronder vermelde ingrediënt toe aan 330 ml dubbel gedestilleerd water. Meng goed en vul vervolgens de rest van de 170 ml dubbel gedestilleerd water in de oplossing tot een eindvolume van 500 ml. Ingrediënten: 1,02 g KH2PO4, 3,66 g K2HPO4, 0,56 g KCl, 0,42 g NaHCO3 en 17,52 g glucose.</td></tr><tr><td>Hechtdraad</td><td>Ethilon</td><td>MWI 72667</td><td>6-0 Ethilon


https://www.mwivet.com (MWI - Veterinary Supplies)</td></tr><tr><td>Polyimide Cuff Ader (21G)</td><td>Vention Medical</td><td>141-0043</td><td>http://www.ventionmedical.com/products-and-services/polyimide-tubing/</td></tr><tr><td>Polyimide Cuff Slagader (24G)</td><td>Vention Medical</td><td>141-0027</td><td>http://www.ventionmedical.com/products-and-services/polyimide-tubing/</td></tr><tr><td>Zachte kunststof puntkatheter</td><td>Terumo</td><td>SR*OX2419CA</td><td>24G x 3/4"&nbsp;</td></tr><tr><td>Microchirurgische dilator</td><td>S&amp;T</td><td>D-5a.1</td><td>Dilator, 11 cm, FH, 0,1 mm AT10d</td></tr></tbody></table>

a novel microchirurgische model voor heterotope, en bloc borstwand, thymus, en harttransplantatie in muizen

A Novel Microsurgical Model for Heterotopic, En Bloc Chest Wall, Thymus, and Heart Transplantation in Mice

Onderzoek naar nieuwe strategieën in orgaantransplantatie om de overleving van allogen transplantaten te verlengen en de behoefte aan langdurige onderdrukking van het immuunsysteem te minimaliseren, moet worden voortgezet. Het gebruik van gevasculariseerde beenmergtransplantatie en co-transplantatie van de thymus heeft in dit opzicht veelbelovend gebleken in verschillende diermodellen.1-11 Gevasculariseerde beenmergtransplantatie maakt de ononderbroken overdracht van donorbeenmergcellen mogelijk binnen de bewaarde donormicro-omgeving, en de incorporatie van thymusweefsel met gevasculariseerde beenmergtransplantatie heeft aangetoond dat dit de T-celchimerisme verhoogt en uiteindelijk een ondersteunende rol speelt bij de inductie van immuunregulatie. De combinatie van solide orgaan- en gevasculariseerde samengestelde allotransplantatie kan deze strategieën uniek combineren in de vorm van een nieuw transplantaatmodel. Muismodellen dienen als een uitstekend paradigma om de mechanismen van acute en chronische afstoting, chimerisme en tolerantie-inductie te onderzoeken, en bieden zo de basis voor het propageren van superieure allogen transplantaatoverlevingsstrategieën voor grotere diermodellen en toekomstige klinische toepassing. Hierin hebben we een nieuw heterotopisch en bloc borstwand-, thymus- en harttransplantatiemodel ontwikkeld in muizen met behulp van een cervicale niet-naadloze manchettechniek. De ervaring in syngene en allogene transplantatie-instellingen wordt beschreven voor toekomstige bredere immunologische onderzoeken via een instructief manuscript en videosupplement.

Syngene C57BL / 6 transplantaties bereikt op lange termijn te overleven. Het ontwerp van de allograft (Figuur 1) bleek succesvol te zijn vanuit dieroverleving perspectief en de mogelijkheid om lopende allograft overleving evalueren. Dit werd aangetoond door middel van overliggende huid resterende levensvatbare, actieve aanhoudende allograft haargroei en hartslagen konden worden geëvalueerd met visualisatie en vinger palpatie. Overlevingsgegevens is weergegeven in figuur 2 om syngene mui...

Om gecombineerde transplantatie van vaste organen en vaatvoorziene samengestelde allogene transplantaten te bestuderen, beschrijven we een nieuw heterotopisch en bloc model voor borstwand-, thymus- en harttransplantatie bij muizen, waarbij gebruik wordt gemaakt van een cervicale niet-naadloze manchettechniek.

A Novel Microchirurgische Model voor Heterotope, En Bloc borstwand, Thymus, en harttransplantatie in Muizen

Exploration of novel strategies in organ transplantation to prolong allograft survival and minimizing the need for long-term maintenance immunosuppression ...

Het algemene doel van dit protocol is om een nieuwe muismodel van solide orgaan- en gevasculariseerd composiet allotransplantatie te introduceren om de effecten van donorafkomstig gevasculariseerd hematopoietisch en primaire lymfatisch weefsel op immuuntolerantie en verlengde allograftoverleving te onderzoeken. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen op het gebied van reconstructieve transplantatie, zoals de rol van gevasculariseerd bot en thymus bij het induceren van tolerantie. Het grote voordeel van deze techniek is dat voor de eerste keer gecombineerd gevasculariseerd beenmerg en thymus wordt getransplanteerd met een solide orgaan, het hart en het immunologisch veelzijdige massamodelsysteem.De implicaties van deze techniek strekken zich uit van fundamenteel immunologisch onderzoek naar therapeutische translatie in de klinische arena om complexe weefseldefecten te behandelen en tegelijkertijd de langetermijnoverleving bij solide orgaantransplantatie te verbeteren. Het demonstreren van deze procedure zullen Dr. BC Oh en Dr. Georg Furtmüller zijn, die post-doctoraal onderzoeker zijn op de afdeling plastische en reconstructieve chirurgie aan de Johns Hopkins University. Om te beginnen, nadat een mannelijke donormuis is verdoofd volgens het tekstprotocol, terwijl je steriele handschoenen draagt, gebruik je mechanische knipmachines om het haar uit de cervicale, thoracale en abdominale regio te verwijderen.Plaats het dier in een liggende positie op een steriele chirurgische oppervlakte. Bevestig een neuskoker en houd isofluraan op 1 tot 2% Voorafgaand aan de huidsnede, bereid de snedeplaats breed voor door een steriele katoenen staaf te gebruiken om povidonjodium antisepticum aan te brengen, gevolgd door isopropylalcohol. Gebruik schaar om een oppervlakkige huidsnede uit te voeren over de cervicale en abdominale huid.Verbind beide sneden bilateraal, langs de middelste axillaire lijnen. Gebruik microforceps om de cervicale regio bilateraal te disseceren om de externe jugulaire aderen te identificeren. En met 6-0 zijden draad, liggeer de vaten voordat je ze met schaar snijdt.Vervolgens snijdt u met elektrocauterisatie de sternocleidomastoïde spieren om de interne jugulaire aderen en gemeenschappelijke halsslagaders bilateraal bloot te leggen. Voer een 6 0 zijden draad onder de linker en rechter gemeenschappelijke halsslagader en interne jugulaire aderen, respectievelijk, in bulkstijl. Gebruik bipolaire elektrocauterisatie en scherpe dissectie om de pectoralis major spieren en sleutelbeenderen te verdelen om de subclaviaanse vaten bloot te leggen.Gebruik 6-0 zijden draad om de vaten proximaal te liggeeren en verdelen. Pak vervolgens voorzichtig de penis van het dier vast en trek hem terug. Langs de dorsum van de penis, lokaliseer de dorsale ader en desinfecteer het gebied met isopropylalcohol.Gebruik vervolgens een 30-gauge naald om 30.000 eenheden heparine intraveneus via de dorsale ader te injecteren en laat de penis terugkeren naar zijn oorspronkelijke positie. Met de eerder geplaatste bulksteken rond de gemeenschappelijke halsslagader en interne jugulaire ader, liggeer en verdeel de structuren bilateraal. Gebruik vervolgens schaar om een transversale snede te maken om toegang te krijgen tot de buikholte.Evisceraat de darmen om de intrahepatische inferieure vena cava bloot te leggen en injecteer twee milliliters koude EuroCollins cardioplegia-oplossing in de intrahepatische inferieure vena cava. Zorg voor een goede injectie door leververkleuring en stoppen van de hartslag te visualiseren. Gebruik schaar om de intrathoracale holte toegang te krijgen via een bilaterale diafragmatische snede vanuit het blootgestelde buikgebied, waarbij de snede cephalaal wordt verlengd door de intercostale spieren en ribben.Het flossen van de pulmonaire stam en het hart met EuroCollin-oplossing is cruciaal om microtrombo-embolie te voorkomen die mogelijk binnen de kransslagaders achterblijft. Nadat koude EuroCollins-oplossing is geïnjecteerd in de superhepatische inferieure vena cava volgens het tekstprotocol, identificeer de wortel van de aorta en traceer distaal tot de descenderende aorta. Snijd de descenderende aorta scherp af, waarbij de maximale lengte wordt behouden.Identificeer nu de pulmonaire stam en verdeel deze net voor zijn takpunt, waarbij de maximale lengte wordt behouden. Gebruik vervolgens twee milliliters koude EuroCollins cardioplegia-oplossing om de pulmonaire stam en het hart te spoelen door een zachte plastic tapekatheter in het lumen van de pulmonaire stam te plaatsen. Gebruik 6-0 zijden draad om de inferieure vena cava, samenvloeiing van pulmonaire aderen en accessoire takken van de bilaterale superieure vena cava te liggeeren en verdelen.Evalueer en disseceer vervolgens het hart cephalaal van de hechtingen langs de hoofdstambronchiën en trachea met zorg, om niet in de luchtweg te komen. Gebruik scherpe en bipolaire elektrocauterisatie om de borstwand, thymus en hart te disseceren, waarbij het volledig van de donormuis wordt bevrijd. Ten slotte trimt u de allograftborstwand ex vivo met schaar tot een kleinere maat langs het borstbeen en laterale ribben, waarbij u erop let de interne thoracale vaten niet te verstoren.Om het bloedverlies na revascularisatie te minimaliseren, gebruikt u bipolaire elektrocauterisatie langs de randen van het osteomusculocutane borstbeen. Nadat de ontvangende muis is voorbereid volgens het tekstprotocol, plaatst u de muis in een liggende positie en plaatst u het rechterbovenste lidmaat in een licht inferieure oriëntatie, waarbij een hoek van 110 graden ontstaat tussen het hoofd en het rechterbovenste lidmaat. Maak een snede vanaf de middenlijn langs de rechter inferieure rand van de onderkaak en verleng de snede infralateraal naar de rechter thoracale regio.Gebruik stompe dissectie met microvasculaire forceps om de externe jugulaire ader te mobiliseren door het vat circumferentieel te bevrijden van het zachte weefsel en adventitia. Gebruik elektrocauterisatie om alle takken te verdelen en verwijder de rechterkwab van de submandibulaire klier met scherpe dissectie en elektrocauterisatie om de ruimte voor het allograft vrij te maken. Zorg voor voldoende lengte van de jugulaire ader om over een manchet te keren en liggeer de externe jugulaire ader met 6-0 zijden draad.</p

a-novel-microsurgical-model-for-heterotopic-en-bloc-chest-wall-thymus

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

De muis heterotope harttransplantatie model is bewezen door vele onderzoekers een belangrijke methode voor het bestuderen van de mechanismen van de afwijzing en immuunrespons worden. Echter, de betrokken technieken zijn nog steeds uitdagend. Door het wijzigen van standaard technieken die we hebben succes gehad met meer dan 1000 transplantaties.

Heterotope harttransplantatie in Muizen

Het murine cervicale harttransplantatie model is geschikt voor immunologische en ischemie-reperfusie schade studies. We pasten de procedure met een niet-hechtingsmanchet techniek en uitgevoerd meer dan 1000 succesvolle transplantaties met deze benadering.  Hierin geven we meer details van deze techniek om de video te vullen.

Muizen Baarmoederhalskanker harttransplantatie Model met een aangepaste manchet Techniek

Er wordt een techniek gedemonstreerd voor de microchirurgische procedure voor heterotope transplantatie van harten bij muizen, inclusief vereenvoudigde methoden voor donoroogst en anastomose van de bloedvaten van de ontvanger.

Een gewijzigde methode voor Heterotope Mouse Hart transplantatie

De manchettechniek verkort en vergemakkelijkt het model van heterotope cervicale harttransplantatie bij muizen door technisch uitdagende hechtingsanastomosen van kleine bloedvaten te vermijden. De technische details die in dit videopapier worden getoond, zouden onderzoekers in staat moeten stellen dit model in hun laboratoria tot stand te brengen.

Heterotopische Cervical harttransplantatie in Muizen

Hier beschrijven we een pre-klinisch groot dier (Porcine) model van orthotopic harttransplantatie dat stevig is vastgesteld en gebruikt om nieuwe cardioprotective strategieën te onderzoeken.

Een preklinisch varkens model van Orthotopic harttransplantatie

Een nieuwe techniek voor bloedcircuitreconstructie in een heterotopisch abdominale muisharttransplantatiemodel wordt gedemonstreerd.

Bloedcircuitreconstructie in een abdominale muis harttransplantatiemodel

In het huidige protocol wordt een muisharttransplantatiemodel gebruikt voor het onderzoeken van het mechanisme van cardiale allograftafstoting. In dit heterotope harttransplantatiemodel wordt de operatie-efficiëntie verbeterd en wordt de overleving van harttransplantaten verzekerd door een cervicale end-to-end anastomose van hartimplantatie met behulp van een gemodificeerde Cuff-techniek.

Een aangepaste manchettechniek voor muis cervicaal heterotopisch harttransplantatiemodel

Harttransplantatiemodellen bij muizen vertegenwoordigen waardevolle onderzoeksinstrumenten voor het bestuderen van de immunologie van transplantaties. Het huidige protocol beschrijft muis heterotopische cervicale harttransplantatie waarbij manchetten op de gemeenschappelijke halsslagader van de ontvanger en de longslagaderstam van de donor worden geplaatst om laminaire bloedstroom mogelijk te maken.

Muis heterotopische cervicale harttransplantatie met behulp van vasculaire manchetten

Dit protocol biedt een manchetvrije, hecht-gebaseerde cervicale heterotopische harttransplantatietechniek bij muizen, ontworpen om de betrouwbare plaatsing van een tweede heterotopische harttransplantatie mogelijk te maken voor het evalueren van donorspecifieke immuuntolerantie onder fysiologische omstandigheden met minimale interferentie door vreemd materiaal.

Manchetvrije hechtingsgebaseerde cervicale model voor secundaire heterotopische harttransplantatie om donorspecifieke immuuntolerantie bij muizen te evalueren

Dit protocol presenteert een vereenvoudigde, end-to-side hechtingsanastomosetechniek voor muis-cervicale harttransplantatie, en biedt een robuust en reproduceerbaar model voor het bestuderen van transplantatie-immunologie.

Cervicale heterotopische muisharttransplantatie met behulp van end-to-side anastomosetechniek om transplantatie-immunologie te bestuderen

Leer een nieuw microchirurgisch model voor heterotope borstwand-, thymus- en harttransplantatie bij muizen. Deze methode onderzoekt immuuntolerantie en allograftoverleving met vasculair beenmerg.

A Novel Microchirurgische Model voor Heterotope, En Bloc borstwand, Thymus, en harttransplantatie in Muizen

Meer video's verkennen