Tuning een parallelle gesegmenteerd Flow Column en Multiplexed Detection inschakelen

Het algemene doel van deze HPLC-procedure is om een parallel gesegmenteerde stromingskolom af te stemmen om multiplex detectie mogelijk te maken. Deze methode beantwoordt belangrijke vragen op het gebied van gezondheid en welzijn, milieuwetenschappen, forensische wetenschap en alle gebieden die de analyse van complexe monsters vereisen, zoals bio-ontdekking. Deze techniek maakt een uitgebreide monsteranalyse mogelijk terwijl het ook informatie oplevert over de chemische en bioactieve eigenschappen van stoffen in complexe mengsels.

De multi-detectieprotocollen maken ook snelle analyse mogelijk. Deze methode maakt de ontwikkeling van strategieën mogelijk voor het definiëren van de chemische vingerafdruk van complexe mengsels, zoals koffie en wijn, waardoor fabrikanten het verschil kunnen zien tussen hun producten en goedkope namaakvarianten. Aanvankelijk kan het onorthodox aanvoelen om niet het hele monster naar slechts één detector te sturen voor nauwkeurige analyse.

De analytconcentratie binnen elke stromingsstroom is echter hoger dan de totale stromingsstroom van een conventionele kolom. Om te beginnen, stel het HPLC-instrument in met 100% UE-water en zuiver methanol voor de mobiele fasen A en B respectievelijk. Als een MS-detector wordt gebruikt, voeg 0,1% formijnzuur toe aan beide mobiele fasen en spoel vervolgens de HPLC-pompen volgens de instructies van de fabrikant.

Assembleer de MS UV VS. En DPPH-detectoren. Volgens de instructies van de fabrikant. Zorg ervoor dat de componenten op de juiste manier zijn gerangschikt, zodat het dode volume in de detectorleidingen minimaal is.

Stel vervolgens de UV VISTA-detectorgolflengte in op de golflengte die specifiek is voor het monster hier. 280 nanometer voor de MS-detector. Gebruik positieve modus voor totale iontelling of TIC-analyse met de volledige scandetectiemethode.

Breng de temperatuur en gasstroom van de MS-detector in evenwicht met de volgende waarden. Verdampertemperatuur van 500 graden Celsius, capillaire temperatuur van 350 graden Celsius, hulpgasstroom van 40 eenheden, veeggasstroom van vijf eenheden, mantelgassnelheid van 60 eenheden en spuitspanning van 3,5 kilovolt. Om het DPPH-radicale reagens voor te bereiden, begin met het oplossen van 25 milligram DPPH-radicaal in 250 milliliter methanol in een inhoudsmaat.

Voeg 250 microliters formijnzuur toe aan de oplossing en soniceer de oplossing gedurende 10 minuten. Dek vervolgens de fles af met folie om lichtblootstelling te voorkomen. Spuit vervolgens de pomp met de DPPH-radicale oplossing, zoals geadviseerd door de fabrikant, om het DPPH-radicale systeem in te stellen.

Zorg ervoor dat de pompleiding is bevestigd aan de inlaat van een T-stuk en verbind vervolgens de 100 microliter reactiespoel met de uitlaat van het T-stuk. Bevestig de detector aan het andere uiteinde van de reactiespoel ENC-behuizing, de reactiespoel en een kolomverwarmer. Stel tenslotte de DPPH-radicale UV V-detector in op 520 nanometer.

Om de parallel gesegmenteerde stroming of PSF-kolom te construeren, verbind eerst de kolominlaat met het HPLC-instrument. Verbind vervolgens met een stuk buis de centrale poort met de MS-detector. Gebruik buizen van dezelfde afmetingen om een perifere kolompoort te verbinden met de UV VS-detector en een andere met het T-stuk van het DPPH-radicale detectiesysteem.

Blokkeer eventuele ongebruikte perifere poorten met kolomstoppers. Pas de stromingssnelheid van de HPLC aan op één milliliter per minuut van 100% mobiele fase B voor een kolom van 4,6 millimeter, interne diameter en 250 millimeter lang. Laat 20 minuten gelijkmatig verdelen.

Om te beginnen met het afstemmen van het PSF-systeem, scheur eerst lege verzamelvaten. Gebruik deze flesjes om afzonderlijk mobiele fase te verzamelen van de UV VS. En DPPH-radicale poorten. Let op de verzamelingstijd en verzamel minimaal 500 milligram oplosmiddel in elke vat.

Weeg vervolgens de verzamelvaten om de massa van de mobiele fase te bepalen en verdeel de massa door de dichtheid van methanol om het volume van de mobiele fase te berekenen dat van elke poort is verzameld. Bepaal ten slotte de stromingssnelheid naar de MS-detector en bereken de stromingsverhoudingen van alle detectoren als een percentage van de totale stroming zoals beschreven in het tekstprotocol. Als de stromingsverhoudingen substantieel afwijken van de ideale waarden, voeg dan extra buisleidingen toe waar nodig om de tegendruk aan te passen en herhaal het verzamelen en berekenen van het proces. Tot slot, stel de stromingssnelheid van de DPPH-radicale reagenspomp in om overeen te komen met de stromingssnelheid van de uitlaatpoort verbonden met de detector. Een multiplexed HPLC-analyse werd uitgevoerd op een koffiemonster. Het vermogen om DPPH-radicale UV VS. En Ms. Chromatogrammen gelijktijdig op te nemen, maakt het mogelijk om de verbindingen in het monster die positief reageerden op DPPH-radicale gemakkelijk te matchen met de UV vs.

En MS-reacties op basis van retentietijd-uitlijning waar een positieve reactie werd gezien van de MSS TIC-detector, werd de moleculaire massa van de piek geregistreerd. De gemakkelijke matching van pieken tussen verschillende detectieprocessen maakt een snelle en efficiëntere vorm van screening en karakterisering mogelijk voor een complex monster zoals koffie Eenmaal onder de knie, kan deze techniek in slechts een uur worden ingesteld en klaar zijn voor monsteranalyse Volg deze procedure. Andere detectoren zoals brekingsindexfluorescentie en chemisch gebaseerde detectie zoals chemische luminescentie kunnen worden gebruikt om aanvullende monsterinformatie te verkrijgen.

Na het bekijken van deze video, zou u de belangrijkheid van multiplexing detectieprocessen moeten herkennen om een groter begrip van een complex monster te krijgen. Bovendien is multiplex detectie met behulp van parallel gesegmenteerde stromingskolommen een uiterst efficiënte manier om bio-exploratie uit te voeren.