Long-Term catheterisatie van de intestinale Lymfe Stam en verzamelen van lymfe in Neonatale Pigs
5 maart 2016
We presenteren een chirurgische procedure om de intestinale lymfe-lymfeklier bij neonatale varkens te kateteriseren om grote hoeveelheden componenten van het lipidenmetabolisme uit efferente lymfe te verzamelen.
Lymfkatheterisatie is een belangrijke techniek die wordt gebruikt om mechanismen te onderzoeken die betrokken zijn bij lipiden- en medicijnmetabolisme, kankermetastase en immuunfunctie en het verzamelen van grote hoeveelheden lymfe uit verschillende diermodellen stelt onderzoekers in staat om deze processen te bestuderen. De video toont in detail de chirurgische procedure die wordt toegepast om de intestinale lymfatische stam bij neonatale varkens te katheteriseren met behulp van een ventrale middenlijnbenadering. Alle procedures zijn goedgekeurd door het Institutioneel Dierverzorgings- en gebruikscomité van de Universiteit van Alberta.
Om toegang te krijgen tot het lymfatische vat werd de buikholte geopend. Elektrocauterisatie op de snijinstelling werd gebruikt om de spierlaag te openen. Een retractor werd geplaatst om de buikwand gedurende de duur van de procedure open te houden.
Belangrijke buikorganen worden geïdentificeerd om het lokaliseren van het lymfatische vat te vergemakkelijken. Voor een betere toegang tot de lymfatische vatsegmenten van de dunne darm en dikke darm worden deze naar de linkerkant van het lichaam gebracht. Het lymfatische vat wordt gemarkeerd door de lever en het rechter ventrale segment van de poortader te identificeren.
Bij neonatale varkens zijn de lymfatische vaten delicaat en kunnen gemakkelijk scheuren, dus een zorgvuldige dissectie met wattenstaafjes en stompe instrumenten is vereist. Hier is het intestinale lymfatische vat. Nu wordt de naald onder het lymfatische vat gevoerd met stompe forceps.
Nu zijn er drie 2-0 zijden naden onder het lymfatische vat gevoerd. De caudale meest naad wordt gebruikt om het vat te verwijden en de katheter aan het vat te bevestigen. De craniale naden worden gebruikt om de katheter in het vat te bevestigen.
Een kleine incisie in het lymfatische vat stelt stompe forceps in staat het vat te verwijden. De katheter wordt in het vat ingebracht. Dit moet voorzichtig gebeuren om ervoor te zorgen dat het lymfatische vat niet scheurt.
De katheter moet worden gevorderd voorbij de craniale meest naad om ervoor te zorgen dat deze goed zit. De drie 2-0 zijden naden bevestigen de katheter in het lymfatische vat. Belangrijk is dat de twee craniale naden eerst worden gebruikt om de katheter in het vat te bevestigen en de caudale meest naad vervolgens wordt gebruikt om de katheter te verankeren, wat stabiliteit toevoegt.
Het is belangrijk om ervoor te zorgen dat er een goede lymfestroom is voordat de buikholte wordt gesloten. De katheter wordt geëxterioriseerd op de linker middelflank van het varken. Grote forceps worden gebruikt om de katheter uit de buikholte naar het uitwendige oppervlak van de flank van het varken te trekken.
De spierlagen worden gesloten met 2-0 vicrylnaad op een taps toelopende naald in een eenvoudige onderbroken naadpatroon. De huid wordt gesloten met 2-0 vicrylnaad op een snijdende naald in een lopend subcuticulair naadpatroon. Met de exit incisie passeert de katheter door de huid en wordt deze gesloten met 2-0 nylonnaad op een snijdende naald in een purse-string naadpatroon.
Deze sluiting helpt om oplopende infecties te voorkomen die zich langs de katheter naar binnen kunnen verspreiden. De jas waarin de lymfeopvangflessen worden gehouden, wordt op het varken geplaatst terwijl het varken nog onder narcose staat. De katheter wordt in de opvangfles ingebracht en een goede lymfestroom wordt verzekerd voordat het varken wordt gewekt.
De varkens herstellen goed van de procedure en een uitstekende lymfestroom wordt gedurende het hele experiment gehandhaafd. De tabel toont de componenten van lymfe die zijn verzameld uit het lymfatische vat. Deze componenten omvatten Apolipoproteïne B48, Triglyceriden en Cholesterol.
De figuur van de Western Blot toont de aanwezigheid van zowel Apolipoproteïne B48 als kleine hoeveelheden plasma-afgeleid Apolipoproteïne B100 in het verzamelde lymfemonster. Hoewel lymfatische katheterisatie bij jonge varkens technisch uitdagend kan zijn, omdat de lymfatische vaten zowel delicaat als broos zijn, toont deze video aan dat het gebruik van een juiste en zorgvuldige chirurgische techniek bij jonge varkens onderzoekers een uitstekend model kan bieden voor het verzamelen van intestinale lymfe.
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's
Overzicht
Dit artikel presenteert een gedetailleerde chirurgische procedure voor het catheteriseren van de intestinale lymfestam bij pasgeboren varkens. Deze techniek maakt het mogelijk om significante hoeveelheden componenten van het lipidenmetabolisme uit de efferente lymfe te verzamelen, wat onderzoek naar lipiden- en geneesmiddelmetabolisme faciliteert.
Belangrijkste Onderdeel van de Studie
Wetenschapsgebied
- Lipidemetabolisme
- Chirurgische technieken
- Diermodellen
Achtergrond
- Lymfatische catheterisatie is essentieel voor het bestuderen van diverse biologische processen.
- Het helpt bij het begrijpen van mechanismen die betrokken zijn bij het lipidenmetabolisme en de immuunfunctie.
- Grote hoeveelheden lymfe kunnen uit diermodellen worden verzameld voor onderzoek.
- Deze studie richt zich op pasgeboren varkens als modelorganisme.
Doel van de studie
- Om een chirurgische techniek voor lymfe catheterisatie te demonstreren.
- Om de collectie van lymfe mogelijk te maken voor het bestuderen van het lipidenmetabolisme.
- Om een gedetailleerde procedurele gids voor onderzoekers te bieden.
Gebruikte methoden
- Er werd een ventrale middenlijnbenadering gehanteerd om toegang te krijgen tot de intestinale lymfestam.
- De buikholte werd geopend om het lymfevat te bereiken.
- Er werd gebruikgemaakt van elektrocauterisatie om de spierlaag te openen.
- Tijdens de procedure werd een retractor geplaatst om de buikwand open te houden.
Belangrijkste resultaten
- De procedure maakt een succesvolle collectie van lymfe bij pasgeboren varkens mogelijk.
- Het biedt een betrouwbare methode voor het bestuderen van componenten van het lipidemetabolisme.
- Alle procedures zijn goedgekeurd door de relevante institutionele commissie voor dierenwelzijn.
Conclusies
- Deze chirurgische techniek is effectief voor lymfecatheterisatie bij pasgeboren varkens.
- Het opent wegen voor verder onderzoek naar het lipidenmetabolisme en aanverwante vakgebieden.
- De gedetailleerde procedurele gids kan andere onderzoekers ondersteunen bij soortgelijke studies.
Veelgestelde vragen
Industriële relevantie voor directieleden
Deze chirurgische techniek maakt een continue verzameling van intestinale lymfe bij pasgeboren varkens mogelijk, waardoor een betrouwbare bron ontstaat voor het bestuderen van componenten van het lipidenmetabolisme, zoals apolipoproteïnen en triglyceriden. Het model ondersteunt mechanistische risicoreductie in de vroege ontdekkingsfase door kwantitatieve analyse van lipidentransport en inflammatoire mediatoren in een fysiologisch relevant systeem mogelijk te maken. Het biedt translationele continuïteit voor de preklinische evaluatie van drugmetabolisme en immunomodulatiepaden.
Strategische toepassingen in biofarmaceutische R&D
Vroege ontdekking & targetvalidatie
- Wetenschappelijke waarde: Maakt onderzoek naar lipidemetabolisme-paden mogelijk door directe meting van de samenstelling van de efferente lymfe van de darm.
- Operationele waarde: Maakt longitudinale lymfemonstername van grote volumes mogelijk om hypothesetoetsing bij de validatie van lipiderelateerde targets te ondersteunen.
Screening & assayontwikkeling
- Wetenschappelijke waarde: Genereert gestandaardiseerde lymfemonsters die meetbare biomarkers bevatten, zoals Apolipoproteïne B48 en triglyceriden, voor kalibratie van assays.
- Operationele waarde: Ondersteunt de ontwikkeling van reproduceerbare read-outs voor lipidestroom en screening van ontstekingsbevorderende verbindingen.
Translationeel & Preklinisch Onderzoek
- Wetenschappelijke waarde: Faciliteert de studie naar het transport van immuuncellen in de darm en lipid-geassocieerde ziektemechanismen in een neonataal model.
- Operationele waarde: Maakt longitudinale monitoring van de lymfesamenstelling mogelijk om de target-interactie en pathway-modulatie in de loop van de tijd te beoordelen.
Integratie van Pipeline & Workflow
De methode wordt geïntegreerd in discovery-workflows door biologisch relevante lymfe te leveren voor downstream-analyses, waardoor de vroege toetsing van doelwit-hypothesen wordt verbonden met preklinische validatie van het mechanisme.
- Ontdekkingsbiologie: Ondersteunt functionele validatie van targets voor het lipidenmetabolisme via directe meting van lymfe-biomarkers.
- Screening: Levert consistente lymfemonsters voor assay-standaardisatie en evaluatie van het effect van verbindingen.
- Analytica: Maakt kwantitatieve meting van lymfecomponenten zoals cholesterol en apolipoproteïnen mogelijk om structuur-activiteitsrelaties te bepalen.
- Translationeel onderzoek: Verbindt intestinale lipideverwerking met systemisch metabolisme en modellering van de immuunrespons.
- Bedrijfbrede hergebruik: Vestigt een herbruikbaar chirurgisch platform voor longitudinale lymfecollectie over meerdere studiecohorten.
Operationele & Bedrijfsimpact
- Wetenschappelijke waarde: Vermindert mechanistische ambiguïteit in studies naar lipidenmetabolisme door directe toegang tot het intestinale lymfevocht.
- Operationele waarde: Garandeert een reproduceerbare lymfeopbrengst en -samenstelling via een gestandaardiseerde catheterisatietechniek.
- Strategische waarde: Verbetert go/no-go-beslissingen door vroegtijdige gegevens over het lipidenmetabolisme en de immuunrespons te verschaffen.
- Impact op portfolio: Maakt risico-gecorrigeerde prioritering van targets mogelijk op basis van biomarkerprofielen afgeleid uit lymfe.
Overwegingen voor implementatie
- Vereist expertise in microsurgische technieken en de omgang met neonatale dieren.
- Afhankelijkheid van precisie-instrumentarium voor dissectie van vaten en het vastzetten van katheters.
- Vereist gestandaardiseerde postoperatieve zorg om de lymfestroom te behouden en infecties te voorkomen.
- Overwegingen voor aanpassingen bij verschillende varkensrassen of leeftijdmodellen op basis van de fragiliteit van de vaten.
- Beperkt door de technische uitdaging om delicate neonatale lymfevaten te canuleren zonder trauma te veroorzaken.
Biopharma Veelgestelde Vragen
Chapters in this video
0:00
Title
0:34
Abdominal Surgery
1:24
Localizing the Lymphatic Vessel
2:36
Inserting the Catheter into the Lymphatic Vessel & Securing the Catheter with Sutures
4:18
Closing the Abdomen
5:02
Placing the Jacket on the Pig & Post-surgical Recovery
5:40
Results
6:06
Conclusion
