Gordijn Flow Column: Optimalisatie van efficiëntie en gevoeligheid

Het algemene doel van deze methode is om de efficiëntie en gevoeligheid van een scheiding te verbeteren door de optimalisatie van een curtain flow kolom. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen op het gebied van milieuwetenschappen, forensische wetenschappen en in gebieden die traceerbaarheidsanalyse vereisen, waar een efficiënte en zeer gevoelige scheidingstechniek vereist is. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het de efficiëntie van een scheiding en de gevoeligheid van de analyse verhoogt in vergelijking met conventionele methoden van HPLC-scheiding.

Deze methode kan een middel bieden om de scheidingskracht te verhogen, en dus de capaciteit en snelheid, op een economisch en tijdsefficiënte manier. De curtain flow kolom is een nieuw concept voor beoefenaars van HPLC, maar het gebruik ervan is niet ingewikkeld. Het vereist simpelweg de optimalisatie van geschikte stromingsverhoudingen.

Bereid eerst flessen met 100 procent ultrapuur water en 100 methanol voor als mobiele fasen A en B van het HPLC-instrument. Spuit de pompen leeg zoals voorgeschreven door de fabrikant. Na het spoelen, koppel de pompleiding los van de injectorklep van de autosampler.

Bevestig een T-stuk aan de losgekoppelde leiding. Bevestig aan elke poort van het T-stuk slangen van 0,13 millimeter interne diameter en 15 centimeter lang. Verbind een slang van het T-stuk naar de injectorklep van de autosampler.

Stel ten slotte de pomp in op een stromingssnelheid van één milliliter per minuut. Tareer twee lege opvangvaten en label ze centraal en perifeer. Gebruik gedurende 60 seconden het centraal gelabelde vat om de uitgaande mobiele fase van de leiding te verzamelen die van de injector komt.

Weeg het centrale vat opnieuw en bepaal de massa van de verzamelde mobiele fase. Herhaal dit proces door de doorstroming door de perifere poort te verzamelen met het perifeer gelabelde vat. Bepaal het percentage stroming, of milliliters per minuut, van elke leiding met behulp van de aangegeven vergelijkingen.

De centrale poort zou ongeveer 40 procent moeten zijn, en de perifere poort ongeveer 60 procent. Als de waarden met meer dan twee procent verschillen, verander dan de lengte of diameter van de slang om de stromingsverhouding aan te passen. Herhaal vervolgens de verzamelings- en berekeningsstappen.

Zet vervolgens de pompstroming uit en verbind de injectorleiding naar de centrale poort van de kolominlaat. Verbind ook de leiding van het T-stuk naar de perifere poort van de kolominlaat. Verhoog langzaam de stromingssnelheid naar één milliliter per minuut van 100 procent mobiele fase B. Om het afstemmen van het systeem af te ronden, laat 100 procent methanol gedurende 10 minuten stromen met één milliliter per minuut om de kolom in evenwicht te brengen.

Gebruik om te beginnen slangen om de centrale uitlaatpoort te verbinden met de UV-Vis detector. Verbind slangen van hetzelfde type en dezelfde lengte naar de perifere uitlaatpoort van de CF kolom. Stel vervolgens de pomp in op een stromingssnelheid van één milliliter per minuut.

Tareer twee lege opvangvaten en label opnieuw een voor centrale verzameling en een voor perifeer. Gebruik gedurende 60 seconden het centraal gelabelde vat om de uitgaande mobiele fase van de UV-Vis detector te verzamelen. Weeg het opvangvat opnieuw om de massa van de elueerde oplossing te bepalen.

Herhaal dit proces met de perifere uitlaatpoort en gelabelde verzamelingsvat. Bepaal nu het percentage stroming van elke leiding zoals eerder gedaan met de inlaatstroming. De UV-Vis lijn zou 21 procent moeten zijn, en de perifere uitlaatstroming zou 79 procent moeten zijn.

Als de stromingsverhouding aanzienlijk afwijkt, pas de grootte van de slang die aan de uitgang van de UV-Vis detector is bevestigd, aan om het centrale stromingspercentage te veranderen. Het is belangrijk dat de stromingsverhoudingen tussen het centrale en perifere gedeelte aan de inlaat en de uitlaat van de kolom dit protocol volgen om optimale prestaties van de curtain flow kolom te garanderen. Active flow technology kolommen werden ontwikkeld met behulp van een gespecialiseerd fritontwerp in de multiport kolom-eindfittings om de heterogeniteit van de kolombed te overwinnen en de scheidingsprestaties te verbeteren.

Een testmengsel met fenetol, butylbenzeen en pentylbenzeen werd geanalyseerd op conventionele 4,6 en 2,1 millimeter interne diameter kolommen en een 4,6 millimeter interne diameter curtain flow kolom. De scheiding van het mengsel illustreert de verbeterde prestaties in termen van efficiëntie en gevoeligheid van een curtain flow kolom ten opzichte van standaard kolommen. Het gebruik van een curtain flow kolom verhoogde het signaal voor butylbenzeen ondanks het verminderde piekvolume.

Eenmaal beheerst, kan deze techniek in minder dan een half uur worden ingesteld als deze correct wordt uitgevoerd. De curtain flow kolom instelling kan keer op keer worden hergebruikt, maar de stromingsverhoudingen moeten regelmatig worden gecontroleerd. Terwijl u deze procedure probeert, is het belangrijk om te onthouden om zo dicht mogelijk bij de voorgeschreven stromingsverhoudingen te blijven.

De curtain flow kolom heeft de weg gebaand voor onderzoekers op het gebied van HPLC om de grenzen van de kolommen en UPLC-instrumenten te verleggen om snellere monsteranalyse te verkrijgen zonder de scheidingsprestaties in gevaar te brengen. Na het bekijken van deze video, zou u de belangrijkheid van curtain flow kolommen moeten begrijpen, omdat ze betere scheidingen kunnen bieden dan conventionele HPLC kolommen.