Name: Melk Collection in de rat met behulp van capillaire buizen en Schatting van melk vetgehalte Creamatocrit (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-12-16T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 38 s
Description: Leer handmatige melkcollectie bij zogende ratten met capillaire buizen en de creamatocrit-methode voor vetbepaling. Deze eenvoudige techniek vereist geen gespecialiseerde apparatuur en ondersteunt onderzoek naar moederlijke voeding en melksamenstelling.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door middel van subsidies van de Natural Sciences and Engineering Research Council van Canada (RGPIN 238382-2011) en de Canadese Institutes of Health Research (MOP115076). Heather Paul werd ondersteund door een Natural Sciences and Engineering Research Council van Canada Postgraduate Scholarship en een Alberta vernieuwt Health Solutions beurs. Megan Hallam werd ondersteund door een Natural Sciences and Engineering Research Council Postgraduate Scholarship, een Frederick Banting en Charles Best Canada Graduate Scholarship en een Alberta Children&#39;s Hospital Research Institute Training Award in Genetics, Child Development, en gezondheid.

Dit protocol werd goedgekeurd door de Universiteit van Calgary Animal Care Comite en voldeden aan de Gids voor de Zorg en gebruik van proefdieren. 1. Afzonderlijk Dam van Offspring <ol><li> Scheid de dam van haar nakomelingen gedurende ten minste 5 min voor het melken 12. LET OP: De dam kan worden gemolken 5-6 uur na de scheiding 1,6,13, maar perioden van scheiding langer dan 4 uur kan melksamenstelling 14 veranderen. Terwijl de scheiding tijd lijkt geen melk collectie volume 12 invloed hebben, wordt geadviseerd dat een consequente scheiding moment van het onderzoek worden gehandhaafd. Melksamenstelling kan gedurende de lactatie 15 te veranderen, dus pogingen moeten worden ondernomen om de dag van de melk collectie consistent te houden. Maximale melkproductie wordt voorgesteld om zich voordoen op het geven van borstvoeding dag 14 12. </li><li> Met behulp van een warming kamer, zorgen voor de pups in staat zijn om de juiste lichaam temperatu behoudenopnieuw zonder de aanwezigheid van de moeder voor de duur van het melken. LET OP: In de studie hieronder weergegeven, melken werd uitgevoerd bij het spenen, wanneer de dammen waren ongeveer 22 weken oud en de jongen 21 dagen oud, dus geen opwarming kamer werd gebruikt. </li></ol> 2. Set-up en voorbereiding <ol><li> Verzamel alle materialen die nodig zijn voor het melken procedure. LET OP: Alle materialen kunnen worden gevonden in de materialen en apparatuur tafel. </li><li> Plaats een verwarmingselement op de bank, waar melken zal plaatsvinden en betrekking hebben op de pad met een absorberend bankje onder-pad. </li><li> Het opzetten van de verdoving systeem. Zorg ervoor dat het systeem voldoende zuurstof en isofluraan voorafgaand aan begin. Bevestig de verdoving masker dat wordt gebruikt voor de initiële anesthesie inductie naar de machine. Plaats het masker dat wordt gebruikt voor anesthesie onderhoud omgeving indien anders dan de oorspronkelijke verdoving masker. </li><li> Bevestig een 25 G naald naar een 1 ml spuit voor oxytocineinjectie met behulp van aseptische techniek. </li><li> Zet de verwarming pad zodat moederlichaam temperatuur tijdens het melken wordt gehandhaafd. OPMERKING: Controleer de temperatuur van de verwarming pad om de pad te waarborgen niet te heet worden en brandwonden veroorzaken. Als alternatief gebruikt een warmtebron, zoals een verwarmde operatietafel, die kan worden ingesteld op een bepaalde temperatuur. </li></ol> 3. Verdoven de Dam behulp Isoflurane <ol><li> Open de zuurstoftank en zet de stroom naar 1 L (1000 cc) per min. Schakel de stroom van isofluraan en ingesteld op 5%. LET OP: Vermijd directe inademing van verdoving en accumulatie van verdoving dampen te voorkomen. </li><li> Verdoven de dam. </li><li> Schakel over naar het onderhoud masker indien nodig, het plaatsen van de dam liggende op het absorberende bank pad. Bevestig verdoving door een gebrek aan pedaal reflex. </li><li> Verminder de stroom van isofluraan 2-3% voor het onderhoud van anesthesie. Voortdurend toezicht dam gedurende de procedure om ervoor te zorgen depression van de ademhaling niet optreedt. OPMERKING: Eenmaal onder narcose, moet de ogen van de dam worden beveiligd met behulp van een steriele oog smeermiddel om te voorkomen dat de ogen tegen uitdrogen of gekrast. </li></ol> 4. Oxytocine Injection <ol><li> Zorg ervoor dat de oxytocine (20 USP eenheden / ml) is niet voorbij de vervaldatum. Ontsmet de flacon van oxytocine met een steriel alcoholdoekje / alcohol reiniging pad. </li><li> Met behulp van aseptische techniek, het opstellen van 2 IE (0,1 ml) van oxytocine in de spuit. Gebruik een nieuwe naald en spuit voor elke dam die zal worden gemolken. OPMERKING: Oxytocin doses variëren in het algemeen uit één injectie van 1 tot 5 IU 1,6,12,16. Als alternatief kan een dosering van 4 IU / kg lichaamsgewicht worden gebruikt 12. Een enkelvoudige dosis van 2 IE eenmaal worden herhaald wanneer moeilijkheden melken optreedt. </li><li> Injecteer de oxytocine intraperitoneaal. Steek de naald in de rechter kwadrant van de buik met de naald wijst naar het hoofd, schuinvan 15-30 °, ongeveer 0,5 cm diep. </li><li> Trek de zuiger om negatieve druk voorafgaand aan de injectie te garanderen. Als een vloeistof (bloed, urine, darminhoud, etc.) wordt opgezogen in de spuit, verwijder de naald en probeer de injectie met een nieuwe naald en spuit. Als er geen vloeistof wordt opgezogen injecteer de oxytocine en de naald en spuit gooi onmiddellijk in een biohazard container. </li><li> Wacht ongeveer 5-15 minuten voor de oxytocine melk teleurstelling te stimuleren. </li></ol> 5. Voorbereiding van de melken sites <ol><li> Kies de sites / spenen die melk zal worden verzameld. Melk kan worden verzameld uit elke speen 12. </li><li> Verwijder voorzichtig de vacht rond de spenen worden gemolken met de trimmers, zoals bont moeite met monstername kan veroorzaken door wicking van de melk. Wees lief - de huid rond de spenen is uiterst gevoelig en kunnen droog zijn en als zodanig is gevoelig voor krassen en scheuren. </li><li> Sterilisatie van de speen iis niet noodzakelijk, maar eventueel reinigen van de speen met lauw water na de vacht wordt verwijderd. Bereid ten minste twee locaties als meer dan een site nodig kunnen zijn voor de melk collectie. OPMERKING: Als de analyse van melk bevat microbiële profilering, kan de speen gebied sterilisatie met jodium 5 vereisen. </li></ol> 6. Melk Collection <ol><li> Knijp de basis van de speen, handmatig het verdrijven van de melk voor de collectie. OPMERKING: Als de analyse van melk bevat microbiële profileren, moet de eerste paar druppels melk worden weggegooid. </li><li> Verzamel de druppels melk in een capillaire buis, het vullen van de capillaire buis. Capillaire buisjes die grotere hoeveelheden (bijvoorbeeld 50 pi) vergemakkelijken het proces tegemoet. OPMERKING: Indien moeilijk melkverzameleenheid is aangetroffen, kan een tweede dosis oxytocine toegediend. Het wordt aanbevolen de dosis niet hoger zijn dan 4 IE totaal. </li><li> Verdeel de melk de capillaire buis in een steriele microcentrifugebuis vanaanraken van het uiteinde van de buis die werd gebruikt om melk te trekken uit de speen naar de zijkant van de microcentrifugebuis - observeert de melk uit het capillair getrokken via capillaire werking. OPMERKING: &#39;blow out&#39; de melk die niet in de buis wordt getrokken met behulp van een 18 G naald bevestigd aan een 1 ml spuit. </li><li> Voortdurend toezicht op de dam op tekenen van pijn of respiratoire depressie en stel de stroom van isofluraan dienovereenkomstig. </li><li> Blijven om melk te verzamelen, zoals beschreven in deze sectie totdat voldoende melk heeft verzameld voor de gekozen analyse van melk. Voor de hieronder beschreven creamatocrit en eiwit concentratie bepaling, het verzamelen van 0,25 ml melk. OPMERKING: Gebruik een andere melken site als melk afknapper vertraagt ​​of de gekozen locatie niet voldoende melk te verdrijven. Een maximum van ongeveer 2,5 ml melk per dier kan worden tot 17, of tot 0,5 ml per speen. De auteurs bevelen aan dat de totale tijd onder narcose worden beperkt tot ongeveer 45-60 min, or 45 min van het melken. </li><li> Verzamel melk in een microhematocrit buis creamatocrit meting van verse melkmonsters, en sluit het uiteinde van de buis met klei kit. Label de microhematocrietmethode buis met de dam-ID en rechtop op te bergen het melkmonster. </li><li> Wanneer het melken is voltooid, schakelt u de stroom van isofluraan en zuurstof. Verwijder het masker van de dam en blijven volgen dam tot wakker. Het wordt aanbevolen dat als niet volledig bewust, de dam moet worden op een absorberend bankje kussen geplaatst tijdens de herstelperiode, in plaats van direct op de kooi beddengoed, om te voorkomen dat het beddengoed van wordt opgezogen of krassen op de ogen van de dam tijdens het herstel. OPMERKING: de dam onbeheerd verlaten totdat het voldoende bewustzijn heeft herwonnen aan borstbeen recumbancy handhaven. </li><li> Indien geen verdere analyse nodig, melk bevriezen bij -80 ° C. Anderen hebben voorgesteld dat de melk kan worden bewaard tot 3 uur bij 4 ° C of 5 maanden bij -20 ° C 18. </li></ol> 7. Creamatocrit Meting <ol><li> Schatten het vetgehalte in de melk door het berekenen van de melk creamatocrit (het percentage van de room in het melkmonster) 19. OPMERKING: Metingen met moedermelk hebben aangetoond dat zowel vers of bevroren melk kan worden gebruikt voor een creamatocrit meting echter verse melk meer sterk gecorreleerd (r = 0,92 versus r = 0,90) met lipideconcentratie 11. Het gebruik van verse of bevroren melk voor creamatocrit metingen moeten consistent worden gehouden over de studie, als ontdooide melk wordt geassocieerd met een kleine afname in creamatocrit waarden 11. </li><li> Voor verse melk, het verzamelen van een monster van melk uit de speen in een microhematocrietmethode buis; Vul ten minste ¾ vol (ongeveer 15-20 pi). Als alternatief, trekken verse melk uit de verzamelde monster in het capillair na goed mengen. Verzegelen het einde met klei kit. </li><li> Plaats de capillaire buis in de hematocriet spinner, met deafgedichte wijst naar buiten, zodat de centrifuge in balans. </li><li> Begin de hematocriet draai (120 sec bij 13.700 xg). OPMERKING: Spin tijd of snelheid kan veranderen, afhankelijk van het model van de centrifuge gebruikt. </li><li> Haal de buis uit de centrifuge na de spin is voltooid en voert de metingen voor de berekening van creamatocrit. Observeren de scheiding van het monster in een crème laag en een heldere laag. </li><li> Meet en registreer de totale lengte van fluïdum in de buis en de lengte van het vet (room) laag behulp van beugels of een liniaal. Opmerking: De creamatocrit wordt uitgedrukt als het percentage van de crèmelaag binnen het melkmonster 19, berekend als (lengte crèmelaag / totale kolomlengte melk) x 100 (Figuur 1A). Bereken vetconcentratie en energiewaarden van de creamatocrit meting als volgt: Vet concentratie (g / L) = (creamatocrit (%) - 0,59) /0.146 (Figuur 1B) 19; Energie waarde (kcAl / L) = 290 + (66,8 * creamatocrit (%) (Figuur 1C) 19. </li></ol> 8. Eiwit concentratiebepaling <ol><li> Met behulp van runderserumalbumine als standaard eiwit, vaststellen van totaal melkeiwit concentratie met een standaard- eiwitanalyse, zoals een Lowry eiwit assay 6. OPMERKING: Verdunning van de melk noodzakelijk zijn voor melkeiwit metingen binnen de standaardcurve van de assay valt. </li></ol>

<ol><li>Izumi, H., Kosaka, N., Shimizu, T., Sekine, K., Ochiya, T., Takase, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time-dependent+expression+profiles+of+microRNAs+and+mRNAs+in+rat+milk+whey%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Time-dependent expression profiles of microRNAs and mRNAs in rat milk whey.</a> PLoS ONE. 9 (2), e0088843(2014).</li>
<li>Hsieh, C. C., Hernández-Ledesma, B., Fernández-Tomé, S., Weinborn, V., Barile, D., de Moura Bell, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Milk+Proteins%2C+Peptides%2C+and+Oligosaccharides%3A+Effects+against+the+21st+Century+Disorders%5BTitle%5D)+AND+%22+BioMed+Res.+Int%22%5BJournal%5D)">Milk Proteins, Peptides, and Oligosaccharides: Effects against the 21st Century Disorders.</a> BioMed Res. Int. , (2015).</li>
<li>Rogier, E. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lessons+from+mother%3A+Long-term+impact+of+antibodies+in+breast+milk+on+the+gut+microbiota+and+intestinal+immune+system+of+breastfed+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22Gut+Microbes%22%5BJournal%5D)">Lessons from mother: Long-term impact of antibodies in breast milk on the gut microbiota and intestinal immune system of breastfed offspring.</a> Gut Microbes. 5 (5), 663-668 (2014).</li>
<li>Keen, C. L., Lönnerdal, B., Clegg, M., Hurley, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+changes+in+composition+of+rat+milk%3A+trace+elements%2C+minerals%2C+protein%2C+carbohydrate+and+fat%5BTitle%5D)+AND+%22J.+of+Nutr%22%5BJournal%5D)">Developmental changes in composition of rat milk: trace elements, minerals, protein, carbohydrate and fat.</a> J. of Nutr. 111 (2), 226-236 (1981).</li>
<li>Cabrera-Rubio, R., Collado, M. C., Laitinen, K., Salminen, S., Isolauri, E., Mira, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+human+milk+microbiome+changes+over+lactation+and+is+shaped+by+maternal+weight+and+mode+of+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Clin.+Nutr%22%5BJournal%5D)">The human milk microbiome changes over lactation and is shaped by maternal weight and mode of delivery.</a> Am. J. Clin. Nutr. 96 (3), 544-551 (2012).</li>
<li>Hallam, M. C., Barile, D., Meyrand, M., German, J. B., Reimer, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+high-protein+or+high-prebiotic-fiber+diets+affect+maternal+milk+composition+and+gut+microbiota+in+rat+dams+and+their+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22Obesity%22%5BJournal%5D)">Maternal high-protein or high-prebiotic-fiber diets affect maternal milk composition and gut microbiota in rat dams and their offspring.</a> Obesity. 22 (11), 2344-2351 (2014).</li>
<li>Munch, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptome+Profiling+of+microRNA+by+Next-Gen+Deep+Sequencing+Reveals+Known+and+Novel+miRNA+Species+in+the+Lipid+Fraction+of+Human+Breast+Milk%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Transcriptome Profiling of microRNA by Next-Gen Deep Sequencing Reveals Known and Novel miRNA Species in the Lipid Fraction of Human Breast Milk.</a> PLoS ONE. 8 (2), e50564(2013).</li>
<li>Li, M., Sloboda, D. M., Vickers, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+obesity+and+developmental+programming+of+metabolic+disorders+in+offspring%3A+Evidence+from+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Diabetes+Res%22%5BJournal%5D)">Maternal obesity and developmental programming of metabolic disorders in offspring: Evidence from animal models.</a> Exp Diabetes Res. 2011, (2011).</li>
<li>Ellis, P. J. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrifty+metabolic+programming+in+rats+is+induced+by+both+maternal+undernutrition+and+postnatal+leptin+treatment%2C+but+masked+in+the+presence+of+both%3A+implications+for+models+of+developmental+programming%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">Thrifty metabolic programming in rats is induced by both maternal undernutrition and postnatal leptin treatment, but masked in the presence of both: implications for models of developmental programming.</a> BMC Genomics. 15, 49(2014).</li>
<li>Gomez-Gallago, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+to+collect+high+volumes+of+milk+from+mice+%28Mus+musculus%29%5BTitle%5D)+AND+%22An.+Vet.+Murcia%22%5BJournal%5D)">A method to collect high volumes of milk from mice (Mus musculus).</a> An. Vet. Murcia. 29, 55-61 (2013).</li>
<li>Wang, C. D., Chu, P. S., Mellen, B. G., Shenai, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creamatocrit+and+the+nutrient+composition+of+human+milk%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Perinatol%22%5BJournal%5D)">Creamatocrit and the nutrient composition of human milk.</a> J. Perinatol. 19 (5), 343-346 (1999).</li>
<li>Rodgers, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Practical+aspects+of+milk+collection+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Lab.+Anim%22%5BJournal%5D)">Practical aspects of milk collection in the rat.</a> Lab. Anim. 29 (4), 450-455 (1995).</li>
<li>Godbole, V. Y., Grundleger, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Composition+of+rat+milk+from+day+5+to+20+of+lactation+and+milk+intake+of+lean+and+preobese+zucker+pups%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Nutr%22%5BJournal%5D)">Composition of rat milk from day 5 to 20 of lactation and milk intake of lean and preobese zucker pups.</a> J. Nutr. 111 (3), 480-487 (1981).</li>
<li>Del Prado, M., Delgado, G., Villalpando, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+lipid+intake+during+pregnancy+and+lactation+alters+milk+composition+and+production+and+litter+growth+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Nutr%22%5BJournal%5D)">Maternal lipid intake during pregnancy and lactation alters milk composition and production and litter growth in rats.</a> J. Nutr. 127 (3), 458-462 (1997).</li>
<li>Nicholas, K. R., Hartmann, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Milk+secretion+in+the+rat%3A+progressive+changes+in+milk+composition+during+lactation+and+weaning+and+the+effect+of+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Comp.+Biochem.+Physiol.+A.+Comp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Milk secretion in the rat: progressive changes in milk composition during lactation and weaning and the effect of diet.</a> Comp. Biochem. Physiol. A. Comp. Physiol. 98 (3-4), 533-542 (1991).</li>
<li>Azara, C. R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethanol+intake+during+lactation+alters+milk+nutrient+composition+and+growth+and+mineral+status+of+rat+pups%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Res%22%5BJournal%5D)">Ethanol intake during lactation alters milk nutrient composition and growth and mineral status of rat pups.</a> Biol. Res. 41 (3), 317-330 (2008).</li>
<li>Keen, C. L., Lönnerdal, B., Sloan, M. V., Hurley, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+milking+procedure+on+rat+milk+composition%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Behav%22%5BJournal%5D)">Effects of milking procedure on rat milk composition.</a> Physiol. Behav. 24 (3), 613-615 (1980).</li>
<li>Romeu-Nadal, M., Castellote, A. I., Lòpez-Sabater, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+cold+storage+on+vitamins+C+and+E+and+fatty+acids+in+human+milk%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Chem%22%5BJournal%5D)">Effect of cold storage on vitamins C and E and fatty acids in human milk.</a> Food Chem. 106 (1), 65-70 (2008).</li>
<li>Lucas, A., Gibbs, J. A., Lyster, R. L., Baum, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creamatocrit%3A+simple+clinical+technique+for+estimating+fat+concentration+and+energy+value+of+human+milk%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+Med.+J%22%5BJournal%5D)">Creamatocrit: simple clinical technique for estimating fat concentration and energy value of human milk.</a> Br. Med. J. 1 (6119), 1018-1020 (1978).</li>
<li>Furtado, K., Andrade, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+beneficial+and+adverse+effects+of+inhalable+and+injectable+anaesthetics+in+animal+models%3A+a+mini-review%5BTitle%5D)+AND+%22OA+Anaesthetics%22%5BJournal%5D)">Comparison of the beneficial and adverse effects of inhalable and injectable anaesthetics in animal models: a mini-review.</a> OA Anaesthetics. 1 (2), 20(2013).</li>
<li>Hausman Kedem, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+advanced+maternal+age+upon+human+milk+fat+content%5BTitle%5D)+AND+%22Breastfeed.+Med%22%5BJournal%5D)">The effect of advanced maternal age upon human milk fat content.</a> Breastfeed. Med. 8 (1), 116-119 (2013).</li>
<li>Mandel, D., Lubetzky, R., Dollberg, S., Barak, S., Mimouni, F. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fat+and+energy+contents+of+expressed+human+breast+milk+in+prolonged+lactation%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Fat and energy contents of expressed human breast milk in prolonged lactation.</a> Pediatrics. 116 (3), e432-e435 (2005).</li>
</ol>

De auteurs hebben geen belangenconflicten te onthullen. Alle dierproeven werden uitgevoerd in overeenstemming met CCAC goedgekeurde protocollen.

Onderzoek naar de componenten van moedermelk is toegenomen naarmate de belangstelling voor onderzoek naar vroege levensontwikkeling toeneemt. Als enige bron van voeding tijdens de neonatale periode zijn de bioactieve stoffen in melk essentieel voor een ideale groei en ontwikkeling, vooral in de context van darm- en immuungezondheid3. De hier gepresenteerde methode is een eenvoudige, niet-invasieve methode om melk te verzamelen van de lacterende rat in hoeveelheden die voldoende zijn voor downstream-analyse, zo...

Melk is de enige bron van voeding voor pasgeboren zoogdieren, het verstrekken van energie en voedingsstoffen voor de baby groei en ontwikkeling 1,2. Terwijl melk bestaat voornamelijk uit cellen, lipiden en eiwitten 1, bevat het ook een overvloed van bioactieve verbindingen die vroege leven ontwikkeling van nageslacht waaronder enzymen, koolhydraten, hormonen, antilichamen, groeifactoren, cytokines, exosomes, microvesicles en kleine RNA dergelijke moduleren als microRNA 1,2. De fundamentele rol van de moedermelk in de oprichting van de nakomelingen het immuunsysteem en de gezondheid van de darmen 3, in combinatie met het bewijs dat borstgevoede baby&#39;s zijn minder vatbaar voor ziekten 2, benadrukt het belang van de identificatie van de bestanddelen van melk in verband met de ziekte van processen in het begin van het leven en de moleculaire mechanismen die betrokken zijn in hun acties. De ontwikkeling van rat is een populair model voor het onderzoeken van het effect van verschillende voedings-, fysiologische en chemische interventies vroege-life ontwikkeling 4. De analyse van de rat melk kan daarom bieden nieuwe inzicht in de moeder en nakomelingen gezondheid. De huidige wetenschappelijke vooruitgang bieden nu meer mogelijkheden voor diepgaand onderzoek naar de effecten van specifieke melkbestanddelen op gezondheid en ziekte. Zo heeft sequentiebepaling melk bacteriële profielen hun rol toegelicht begin darmflora van de baby darm 5, hebben massaspectrometrie analyse melk oligosacchariden inzicht gegeven in de wijziging van melk oligosaccharide profielen via maternale voeding 6 en diepe sequencing van microRNA uitgescheiden in de vetbolletjes moedermelk belicht mogelijke rollen in gentranscriptie, het metabolisme en het immuunsysteem 7. Ratmodellen vertegenwoordigen een van de meest populaire modelorganismen gebruikt maternale studies 8,9. Een voordeel is hun korte zwangerschap en borstvoeding periode, van slechts approximatEly 21 dagen elk; dus de totale tijd vanaf het begin van de zwangerschap tot borstvoeding is een korte tijdsperiode waarin waardevolle data kunnen worden gegenereerd. De grotere omvang van ratten in vergelijking met muizen in het kader van melk verzamelen, kan een significant voordeel opleveren met betrekking tot hoeveelheid melk en gemakkelijk melkinzameling; melkproductie in de muis, lijkt bijvoorbeeld afhankelijk totale lichaamsgewicht zwaardere muizen produceren meer melk 10 te zijn. Hier wordt een algemene beschrijving voor het handmatig verzamelen van melk van zogende ratten verstrekt. Dit protocol vereist een minimale uitrusting, niet-invasief, goedkoop, en kan worden gebruikt om voldoende hoeveelheden melk te verzamelen voor verdere stroomafwaartse analyses. In het kort, is de dam verdoofd met isofluraan, melkafgifte wordt gestimuleerd door oxytocine, en de melk wordt verzameld in capillaire buisjes via handmatige uitdrukking van de melk. Tot slot, als twee belangrijke componenten van de melk zijn vet en eiwitten, een korte description schatten melkvetgehalte behulp creamatocrit afmetingen 11 en kwantificeren van totale eiwitconcentratie met behulp van een standaard eiwit assay wordt gepresenteerd.

<table><tbody><tr><td>Equipment - Melken</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 ml spuiten</td><td>BD-Canada</td><td>309602</td><td></td></tr><tr><td>25 G naalden</td><td>BD-Canada</td><td>305122</td><td></td></tr><tr><td>18 G naalden</td><td>BD-Canada</td><td>305196</td><td></td></tr><tr><td>50 &mu;l Microdispenser capillaire buizen</td><td>Fisher Scientific</td><td>21-169D</td><td></td></tr><tr><td>Oxytocine (20 USP eenheden/ml)</td><td>Bimeda-MTC</td><td>1OXY015</td><td></td></tr><tr><td>PPC Vet Isofluraan Inhalatieanesthesie, 250 ml</td><td>Fresenius Kabi</td><td>M60302</td><td>Wordt gebruikt op verzoek van een dierenarts</td></tr><tr><td>Steriele alcohol preparaat pad</td><td>Dukal</td><td>853</td><td></td></tr><tr><td>Absorbeerbare onderlegger</td><td>VWR</td><td>82020-845</td><td></td></tr><tr><td>Maxi-Therm Hyper/Hypothermie deken</td><td>Cincinnati Sub-Zero</td><td>274</td><td></td></tr><tr><td>Rodent Anesthesie Machine met Verdamper</td><td>Benson Medical Industries Inc.</td><td></td><td>Afhankelijk van de individuele laboratoriumbehoeften</td></tr><tr><td>Dieren maskers</td><td>Benson Medical Industries Inc.</td><td>50100/50102</td><td></td></tr><tr><td>Microcentrifuge buizen</td><td>Axygen</td><td>MCT-060-C</td><td></td></tr><tr><td>ChroMini Professional Trimmer</td><td>Wahl</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Equipment - Creamatocrit</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>StatSpin SafeCrit Plastic Microhematocrietbuizen (Onbehandeld)</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-274-914</td><td></td></tr><tr><td>Critoseal Capillaire buis sealant tray</td><td>VWR</td><td>470161-478</td><td></td></tr><tr><td>StatSpin CritSpin Microhematocriet centrifuge</td><td>Beckman Coulter, Inc</td><td>X00-004999-001</td><td></td></tr></tbody></table>

melk collection in de rat met behulp van capillaire buizen en schatting van melk vetgehalte creamatocrit

Milk Collection in the Rat Using Capillary Tubes and Estimation of Milk Fat Content by Creamatocrit

Melk, als enige voedingsbron voor het pasgeboren zoogdier, levert de nodige voedingsstoffen en energie voor de groei en ontwikkeling van het nageslacht. Het bevat ook een groot aantal bioactieve verbindingen die de ontwikkeling van de pasgeborene sterk beïnvloeden. De analyse van melkcomponenten zal helpen bij het verhelderen van belangrijke factoren die het metabolisme en de gezondheid van de moeder koppelen aan de groei en ontwikkeling van het nageslacht. De laboratoriumrat vertegenwoordigt een populair modelorganisme voor moederstudies, en rattenmelk kan worden gebruikt om het effect van verschillende fysiologische, voedings- en farmacologische interventies van de moeder op melkcomponenten te onderzoeken, wat vervolgens de gezondheid van het nageslacht kan beïnvloeden. Hier wordt een eenvoudige methode beschreven voor het handmatig verzamelen van melk van de lacterende rat die door één onderzoeker kan worden uitgevoerd, geen gespecialiseerde vacuüm- of zuigapparatuur vereist en voldoende melk levert voor latere downstream-analyse. Er wordt ook een methode gepresenteerd voor het schatten van het vetgehalte van melk door het meten van het percentage room in het melkmonster, bekend als de creamatocriet. Deze methoden kunnen uiteindelijk worden gebruikt om inzicht in moeder-kindgezondheid te vergroten en om moederlijke factoren te verhelderen die betrokken zijn bij de juiste groei en ontwikkeling van het nageslacht.

Melk werd verzameld zoals beschreven spenen van Wistar dammen (ongeveer 22 weken oud, met een gewicht 350-400 g) die een controle verbruikt (AIN-93G, n = 5) hoog eiwitgehalte (40% caseïne wt / wt, n = 5) of hoge prebiotische vezels (21,6% w / w, 1: 1 verhouding van oligofructose en inuline, n = 4) voeding tijdens de zwangerschap en borstvoeding. De dosis oxytocine werd 2 IU. Melk werd verzameld met behulp van capillaire buisjes, en één buis werd gecentrifugeerd met een hematocriet spinner creamatocrit (figuur 1A...

Melk is een primaire voedingsbron voor de pasgeborene. Analyse van melkcomponenten kan inzicht geven in maternale factoren die de gezondheid van het nageslacht beïnvloeden. Dit protocol beschrijft een handmatige methode voor het verzamelen van melkmonsters van de lacterende rat, die vervolgens kunnen worden gebruikt voor verdere downstream-analyse.

Melk Collection in de rat met behulp van capillaire buizen en Schatting van melk vetgehalte Creamatocrit

Milk, as the sole source of nutrition for the newborn mammal, provides the necessary nutrients and energy for offspring growth and development. It also ...

Het algemene doel van deze procedure is om te beschrijven hoe melk handmatig kan worden verzameld van een lacterende rat voor laboratoriumanalyse van de melksamenstelling. Deze methode kan worden gebruikt om belangrijke vragen op het gebied van moeder- en kindgezondheid te beantwoorden, zoals de wijze waarop het dieet van de moeder de melksamenstelling kan beïnvloeden. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat deze door een enkele onderzoeker kan worden uitgevoerd zonder gespecialiseerde vacuüm- of zuigapparatuur.Nee. Om te beginnen scheidt u de moeder minimaal vijf minuten voor het melken van haar nakomelingen. Verzamel vervolgens alle materialen die nodig zijn voor de melkprocedure, zoals hier wordt getoond. Plaats daarna een absorberende benchpad op een verwarmde operatietafel, of gebruik een apart warmtekussen om warmteverlies van de moeder tijdens de melkprocedure te voorkomen.Controleer vervolgens het anesthesiesysteem om er zeker van te zijn dat het systeem voldoende zuurstof en isofluraan bevat voorafgaand aan de procedure. Bevestig daarna het masker dat zal worden gebruikt voor de initiële anesthesie-inductie aan het apparaat en leg het onderhoudsmasker in de buurt klaar. Open de zuurstoftank en stel de flow in op 1 liter per minuut.Zet vervolgens de toevoer van isofluoraan aan en stel de flow in op 5%. Zodra het dier is genarceerd, wordt het overgezet naar het onderhoudsmasker. Bevestig een voldoende niveau van anesthesie door te controleren op de afwezigheid van een pedaalreflex. Plaats het dier vervolgens in rugligging op het absorberende benchpad.Verlaag de toevoer van isofluraan naar 2 tot 3%. Bewaak de moederdier gedurende de gehele procedure voortdurend en pas de toevoer van isofluraan naar behoefte aan om pijn en respiratoire depressie te voorkomen. Gebruik vervolgens een steriel alcoholdoekje of reinigingspad om een flacon oxytocine te desinfecteren; zuig met een injectiespuit van 1 milliliter, voorzien van een naald van 25 gauge, 0,1 milliliter oxytocine op. Steek daarna de naald in het rechteronderkwadrant van de buik van het moederdier, waarbij de naald in een hoek van 15 tot 30 graden in de richting van de kop wordt geplaatst, tot een diepte van ongeveer 0,5 centimeter.Trek de zuiger naar achteren om negatieve druk te garanderen vóór de injectie. Als er geen vloeistof wordt opgezogen, injecteer dan de oxytocine en gooi de naald en spuit onmiddellijk weg in een container voor biologisch gevaarlijke afvalstoffen. Wacht ongeveer vijf tot 15 minuten tot de oxytocine de melkproductie stimuleert.Kies tijdens het uierprikkelen de spieren waarvan de melk zal worden verzameld. Gebruik een trimmer om voorzichtig de haren rond de geselecteerde spieren te verwijderen, aangezien haren de monstername kunnen bemoeilijken. Reinig vervolgens de spieren met lauwwarm water.Bereid ten minste twee locaties voor, aangezien er mogelijk meer dan één locatie nodig is voor de melkcollectie. Zodra de melk is neergekomen, knijpt u voorzichtig in de basis van de Tet om handmatig melk te laten uitstromen. Verzamel de melkdruppels voor de collectie in een capillaire buis van 50 µL.Zodra de capillaire buis vol is, brengt u de melk over in een steriele microcentrifugebuis door het uiteinde van de buis, waarmee de melk uit de uier is getrokken, tegen de wand van de microcentrifugebuis te tikken. Gebruik vervolgens een naald van 18 gauge, bevestigd aan een spuit van 1 ml, om eventuele melk die niet in de buis is getrokken, naar buiten te blazen. Herhaal de melkcollectie en breng deze over in de microcentrifugebuis totdat er voldoende melk is verzameld.Probeer voor de gekozen analyse de totale tijd dat de moederdier onder anesthesie is te beperken tot minder dan één uur. Wanneer het melken is voltooid, sluit u de toevoer van isofluraan en zuurstof af en verwijdert u het masker van het moederdier. Blijf het moederdier monitoren totdat het voldoende bewustzijn heeft teruggewonnen om in sternumpositie te blijven liggen.Als er geen verdere analyses nodig zijn, vries de melk in bij -80 °C. Ter voorbereiding op de CCR-meting brengt u 15 tot 20 µL melk direct vanuit de Tet over in een micro-hematocrietbuisje. Sluit vervolgens het uiteinde van het buisje af met een kleisealant.Plaats de capillaire buis in de hematocrietcentrifuge met de inkeping van de verzegeling naar buiten gericht en zorg ervoor dat de centrifuge in balans is. Centrifugeer het monster vervolgens bij 13 700 ×g gedurende twee minuten. Verwijder de buis uit de centrifuge zodra het centrifugeerproces is voltooid.Observeer de scheiding van het monster in een roomlaag en een heldere laag. Meet en noteer de totale lengte van de vloeistof in de buis en de lengte van de vet- of roomlaag met een liniaal of schuifmaat. Gebruik deze informatie om de CCR te berekenen zoals beschreven in het bijbehorende tekstprotocol om te bepalen hoe het dieet tijdens de zwangerschap en lactatie de melksamenstelling beïnvloedt.Melkmonsters werden verzameld bij het spenen van Worcester-moederdieren die werden gevoed met respectievelijk een dieet met een hoog eiwitgehalte, een dieet met veel prebiotische vezels of een controledieet. De melk die werd verzameld van moederdieren met het dieet met veel prebiotische vezels vertoonde numeriek de hoogste C-hematocriet, vetconcentratie en energiewaarde. Deze verschillen waren echter niet statistisch significant wat betreft eiwit.Echter, melk verzameld van de moederdieren met het dieet met een hoog proteïnegehalte had de hoogste proteïneconcentratie. Hoewel ook dit verschil niet statistisch significant was. Zodra men deze techniek beheerst, kan deze, mits correct uitgevoerd, in minder dan een uur worden voltooid vanaf het moment van de initiële anesthesie van het moederdier.Bij het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om de moederrat voortdurend te monitoren om ervoor te zorgen dat er geen ademhalingsdepressie optreedt onder anesthesie na deze ingreep. Andere methoden, zoals massaspectrometrie, kunnen worden gebruikt om aanvullende vragen te beantwoorden, zoals de bepaling van de oligosacharidecompositie van de melk. Na het bekijken van deze video zou u een goed inzicht moeten hebben in hoe de handmatige melkextractie bij een lacterende rat wordt uitgevoerd.

milk-collection-rat-using-capillary-tubes-estimation-milk-fat-content

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Melkverzameling van diermodellen vergemakkelijkt verschillende onderzoekswegen: het begrijpen van passieve immuniteit, het identificeren van pathogenen die verantwoordelijk zijn voor verticale overdracht en, door het gebruik van transgene muizen, zelfs de commerciële productie van eiwitten die in menselijke moedermelk worden aangetroffen. Hier illustreren we een eenvoudige methode voor melkverzameling bij muizen en Reeves’ muntjakherten.

Melk Collection Methoden voor Mice and Reeves &#39;Muntjac Herten

Cultuur van het hele embryo van zoogdieren (WEC) wordt veel gebruikt in de teratology en ontwikkelingsbiologie. Direct gecentrifugeerd rattenserum wordt vaak geleverd als medium voor zowel muis- als ratten-WEC. In deze video demonstreren we ons standaardprotocol voor de bereiding van hoogwaardig rattenserum dat geschikt is voor zoogdier-WEC.

Voorbereiding van de Rat Serum Geschikt voor zoogdieren Hele Embryo Cultuur

We beschrijven een HPLC-gebaseerde methode voor de bepaling van N-acetylneuraminezuur en N-glycolylenuraminezuur in muizenlever en melk.

Bepaling van Sialic Acids in Lever en Melk Monsters van Wild-type en<em&gt; CMAH</em&gt; Knock-out Muizen.

Dit artikel beschrijft een transplantatiemethode om donorrattenborstepitheelcellen te transplanteren in het interscapulaire witte vetkussen van de ontvangende dieren. Deze methode kan worden gebruikt om gastheer- en/of donoreffecten op de ontwikkeling van borstepitheel te onderzoeken en elimineert de noodzaak van pre-clearing, waardoor het nut van deze techniek wordt uitgebreid.

Rat Mammary Epitheliale Celtransplantatie in de Interscapular White Fat Pad

Dit artikel beschrijft en demonstreert de toediening van intranasale vaccins en de verzameling van melk van zogende konijnen (Oryctolagus cuniculus) als een middel om mucosale immuniteit te beoordelen in een translationeel geschikt model van maternale immunisatie.

Intranasale immunisatie en melkverzameling in studies naar maternale immunisatie bij Nieuw-Zeelandse witte konijnen (Oryctolagus cuniculus)

Het huidige protocol beschrijft een eenvoudige en efficiënte methode voor het verzamelen van bloed uit de subclavia-ader bij ratten. Het maakt snelle, tijdige en gemakkelijk identificeerbare bemonstering zonder anesthesie mogelijk en verkrijgt bloed van hoge kwaliteit door herhaalde monsterverzameling.

Repetitieve bloedafname uit de subclavia-ader van bewuste rat

Het protocol toont herhaalde cerebrospinale vocht- en bloedafname van epileptische ratten die parallel worden uitgevoerd met continue video-elektro-encefalogram (EEG)-monitoring. Deze zijn van groot belang voor het onderzoeken van mogelijke verbanden tussen veranderingen in verschillende lichaamsvloeistofmoleculen en epileptische activiteit.

Bemonstering van hersenvocht en bloed uit laterale staartader bij ratten tijdens EEG-opnames

Hier presenteren we een combinatie van effectieve rattenbeperking en subclavia-aderpunctiemethoden die snelle, veilige en herhaalde bloedafname bij ratten zonder verdoving mogelijk maken.

Bloedafname van subclavia-aderen bij bewuste ratten

In dit artikel wordt beschreven hoe u een apparaat in elkaar zet dat kan worden gebruikt om melk van laboratoriummuizen op te vangen. Dit apparaat is betaalbaar, draagbaar en maakt het mogelijk om 0,1-0,5 ml melk op te halen door één getraind persoon. Er is ook een gedetailleerd melkprotocol opgenomen.

Een efficiënte eenpersoonstechniek voor het bemonsteren van melk van laboratoriummuizen

Dit protocol is ontworpen om de effectieve isolatie van extracellulaire blaasjes uit menselijke moedermelk met hoge zuiverheid te versnellen en mogelijk te maken.

Snelle isolatie van extracellulaire blaasjes afkomstig van menselijke moedermelk

Leer handmatige melkcollectie bij zogende ratten met capillaire buizen en de creamatocrit-methode voor vetbepaling. Deze eenvoudige techniek vereist geen gespecialiseerde apparatuur en ondersteunt onderzoek naar moederlijke voeding en melksamenstelling.

Melk Collection in de rat met behulp van capillaire buizen en Schatting van melk vetgehalte Creamatocrit

Meer video's verkennen