Name: Orthotope Hind Limb Transplantation in de muis (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-02-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 15 s
Description: Leer orthotope achterpoottransplantatie bij muizen met een niet-hechtingsmanchettechniek voor super-microvasculaire anastomose. Dit model vereenvoudigt complexe chirurgische procedures en verhoogt het succespercentage voor immunologisch onderzoek naar vasculaire composietallotransplantatie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door het leger, de marine, NIH, Air Force, VA en Health Affairs aan de AFIRM II te steunen, onder Award No. W81XWH-13-2-0053. De US Army Medical Research overnameactiviteit, 820 Chandler Street, Fort Detrick MD 21702-5014 is het toekennen en beheren van acquisitie kantoor. Adviezen, interpretaties, conclusies en aanbevelingen zijn die van de auteur en zijn niet per se door het ministerie van Defensie onderschreven. De auteurs willen graag Jessica Izzi, DVM, Caroline Garrett, DVM en Julie Watson, DVM bedanken voor hun uitstekende veterinaire steun tijdens deze studie.

Alle experimenten werden uitgevoerd in overeenstemming met de Gids voor de Zorg en gebruik van proefdieren van het National Institute of Health (NIH) en werden goedgekeurd door de Johns Hopkins University Dierverzorging en gebruik Comite (JHUACUC). De specifieke procedures werden uitgevoerd in het kader van het goedgekeurde ACUC protocol MO13M108. 1. Donor Operation <ol><li> Dien pijnstilling op het juiste tijdstip voor elke farmacologische formulering voorafgaand aan de operatie. Zoals aangegeven in de goedgekeurde dier zorg en het gebruik protocol gebruik 0,1 mg / kg lichaamsgewicht van buprenorfine subcutaan 1 uur voorafgaand aan de huid incisie. </li><li> Sedate de donor met isofluraan aangebracht door een kamer die aan een isofluraan vaporizer op 4%; onderhouden sedatie en anesthesie bij 2% door middel van een neuskegel. Voer teen knijpen terugtrekking reflectie om de diepte van de anesthesie voorafgaand aan de inleiding van de procedure te volgen. </li><li> Maskers dragen, wegwerp isolatie jassen en handschoenen. </li><li> Scheer de chirurgische area, met name de achterste ledematen en lies en prep met 10% povidon - jood. </li><li> Gebruik een steriele laken, geautoclaveerd instrumenten en een hoge vergroting microscoop (40X). </li><li> Maak lies huid incisie met een schaar proximaal naar het halverwege de dij en de omtrek sluit de incisie aan de achterste ledematen van de rest van de muis lichaam af te bakenen. </li><li> Identificeren en ontleden de femorale slagader, ader en zenuw. Scheid alle drie structuren met behulp van een tang en micro-schaar. </li><li> Zodra de vaatsteel wordt ontleed verdelen de schepen op het niveau van het inguinale ligament behulp van micro schaar. </li><li> Vervolgens blijven de individuele ventrale (gracilis en mediale dijspieren) en dorsale spiergroepen 20 proximaal verdelen op het niveau van het midden van de dij naar het transplantaat te scheiden van de donor dier met een schaar. </li><li> Doorsnijden het dijbeen en op het midden van de femurschacht met een schaar te snijden. </li><li> Euthanaseren van dieren door isofluraan overdosis folgevolgd door cervicale dislocatie. Bevestig stopzetting van de hartslag en de ademhaling. </li><li> Spoel de ledemaat met 2 ml gehepariniseerde (30 IE) koud (4 ° C) zoutoplossing met behulp van een 33 G naald spoelen gemonteerd op een injectiespuit (zie Materialen tabel). </li><li> Plaats een polyimide manchet op de femorale ader en slagader, respectievelijk. </li><li> Wikkel graft in natte gaasje, plaats in de petrischaal en bewaar bij 4 ° C tot inzet. </li></ol> 2. Ontvanger Operation <ol><li> Verwijdering van de achterpoot <ol><li> Dien pijnstilling op het juiste tijdstip voor elke farmacologische formulering voorafgaand aan de operatie. Zoals aangegeven in de goedgekeurde dier zorg en het gebruik protocol gebruik 0,1 mg / kg lichaamsgewicht van buprenorfine SC 1 uur voorafgaand aan de huid incisie. </li><li> Sedate de donor met isofluraan aangebracht door een kamer die aan een isofluraan vaporizer op 4%; onderhouden sedatie en anesthesie bij 2% door middel van een neuskegel. Voer teen knijpen terugtrekking reflectie aan de dept controlerenh van anesthesie voorafgaand aan de inleiding van de procedure. </li><li> Gebruik veterinaire zalf op de ogen van de muis tot droog voorkomen terwijl onder verdoving. </li><li> Scheer de chirurgische gebied, in het bijzonder de achterste ledematen en lies en prep met 10% Povidon - Jodium. </li><li> Maak lies huid incisie met een schaar proximaal naar het halverwege de dij en de omtrek sluit de incisie aan de achterste ledematen van de rest van de muis lichaam af te bakenen. </li><li> Identificeren en ontleden de femorale slagader, ader en zenuw en scheiden alle drie structuren met behulp van een tang en micro-schaar. </li><li> Zodra de vaatsteel wordt ontleed, klem de femorale vaten ter hoogte van het inguinale ligament. </li><li> Snijd de vaten distale ter hoogte van de oppervlakkige epigastrische slagader. </li><li> Vervolgens blijven de individuele ventrale (gracilis en mediale dijspieren) en dorsale spiergroepen 20 proximaal op het niveau van het midden van de dij te verdelen aan de inheemse achterpoten li scheidenmb van de ontvanger dieren met behulp van een schaar. </li><li> Doorsnijden het dijbeen in het midden van de femorale schacht met een schaar. </li><li> Cauterize eerder doorsneden dijspieren om het bloeden van de dissectie plaats en dus ontvanger bloedverlies te voorkomen. </li></ol></li><li> implantatie <ol><li> Minimaliseren vochtverlies door de irrigatie van het operatieve veld met warme zoutoplossing (37 ° C) en het injecteren van 0,3 ml warm zoutoplossing voor en na de operatie. </li><li> Plaats het implantaat zodanig dat de juiste anatomische positie van het natieve achterpoot door uitlijnen van de femur bot van de ontvanger en het transplantaat en sluit ze met een 20 G naald spinale als een intramedullaire staaf weerspiegelt. </li><li> Coapt de ventrale en dorsale spiergroepen gebruikt absorbeerbare hechtmateriaal (6-0 Polysorb). </li><li> Sluit de femorale vaten met behulp van de niet-hechtingsmanchet techniek; in detail, trekt u de ontvanger zijde van het schip over de manchetten eerder gemonteerd op het schip uiteinden van het graft. Gebruik een 10-0 nylon hechtdraad en het uitvoeren van een rondlopende band met het ontvangende vaartuig op de manchet op te lossen. </li><li> Naast de klemmen los. In dit stadium visueel te controleren manchet rotatie en optimale positionering te mis-rotatie en knikken van de vaten te voorkomen. </li><li> Voer zorgvuldige hemostase met behulp van electro cautery met een bijzondere focus op de spier ontvanger donor interface en het bot eindigt. </li><li> Sluit de huid met behulp van niet absorbeerbaar nylon hechtingen (6-0 Ethilon). </li><li> Vestigen normotherme voorwaarden doordat het dier te herstellen in zijn kooi onder een warmtelamp. Doorgaan regelmatige controle gedurende tenminste 4 uur voorafgaand aan de terugkeer naar de behuizing faciliteit. </li><li> Post-operatieve analgesie met buprenorfine in een dosis van 0,1 mg / kg SC elke 6-8 uur gedurende 3 dagen. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Khalifian, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Facial+transplantation%3A+the+first+9+years%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Facial transplantation: the first 9 years.</a> Lancet. , (2014).</li>
<li>Petruzzo, P., Dubernard, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+International+Registry+on+Hand+and+Composite+Tissue+allotransplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Transpl%22%5BJournal%5D)">The International Registry on Hand and Composite Tissue allotransplantation.</a> Clin. Transpl. , 247-253 (2011).</li>
<li>Shores, J. T., Brandacher, G., Lee, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hand+and+Upper+Extremity+Transplantation%3A+An+Update+of+Outcomes+in+the+Worldwide+Experience%5BTitle%5D)+AND+%22Plast.+Reconstr.+Surg%22%5BJournal%5D)">Hand and Upper Extremity Transplantation: An Update of Outcomes in the Worldwide Experience.</a> Plast. Reconstr. Surg. , (2014).</li>
<li>Levi, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+the+abdominal+wall%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Transplantation of the abdominal wall.</a> Lancet. 361, 2173-2176 (2003).</li>
<li>Strome, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laryngeal+transplantation+and+40-month+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22N.Engl.J.+Med%22%5BJournal%5D)">Laryngeal transplantation and 40-month follow-up.</a> N.Engl.J. Med. 344, 1676-1679 (2001).</li>
<li>Rose, K. G., Sesterhenn, K., Wustrow, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tracheal+allotransplantation+in+man%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Tracheal allotransplantation in man.</a> Lancet. 1, 433(1979).</li>
<li>Hofmann, G. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allogeneic+vascularized+transplantation+of+human+femoral+diaphyses+and+total+knee+joints--first+clinical+experiences%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant.+Proc%22%5BJournal%5D)">Allogeneic vascularized transplantation of human femoral diaphyses and total knee joints--first clinical experiences.</a> Transplant. Proc. 30, 2754-2761 (1998).</li>
<li>Hu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+preliminary+report+of+penile+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Urol%22%5BJournal%5D)">A preliminary report of penile transplantation.</a> Eur. Urol. 50, 851-853 (2006).</li>
<li>Brannstrom, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Livebirth+after+uterus+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Livebirth after uterus transplantation.</a> Lancet. , (2014).</li>
<li>Sarhane, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosing+skin+rejection+in+vascularized+composite+allotransplantation%3A+advances+and+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Diagnosing skin rejection in vascularized composite allotransplantation: advances and challenges.</a> Clin. Transplant. 28, 277-285 (2014).</li>
<li>Schneeberger, S., Khalifian, S., Brandacher, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunosuppression+and+monitoring+of+rejection+in+hand+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Tech.+Hand+Up.+Extrem.+Surg%22%5BJournal%5D)">Immunosuppression and monitoring of rejection in hand transplantation.</a> Tech. Hand Up. Extrem. Surg. 17, 208-214 (2013).</li>
<li>Lee, W. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relative+antigenicity+of+components+of+a+vascularized+limb+allograft%5BTitle%5D)+AND+%22Plast.+Reconstr.+Surg%22%5BJournal%5D)">Relative antigenicity of components of a vascularized limb allograft.</a> Plast. Reconstr. Surg. 87, 401-411 (1991).</li>
<li>Sucher, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemiface+allotransplantation+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Plast.+Reconstr.+Surg%22%5BJournal%5D)">Hemiface allotransplantation in the mouse.</a> Plast. Reconstr. Surg. 129, 867-870 (2012).</li>
<li>Ibrahim, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+heterotopic+swine+hind+limb+transplant+model+for+translational+vascularized+composite+allotransplantation+%28VCA%29+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A modified heterotopic swine hind limb transplant model for translational vascularized composite allotransplantation (VCA) research.</a> J Vis Exp. , (2013).</li>
<li>Oberhuber, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+cervical+heart+transplantation+model+using+a+modified+cuff+technique%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Murine cervical heart transplantation model using a modified cuff technique.</a> J Vis Exp. , (2014).</li>
<li>Sucher, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+hind+limb+transplantation%3A+a+new+composite+tissue+allotransplantation+model+using+nonsuture+supermicrosurgery%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Mouse hind limb transplantation: a new composite tissue allotransplantation model using nonsuture supermicrosurgery.</a> Transplantation. 90, 1374-1380 (2010).</li>
<li>Maglione, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+technique+for+heterotopic+vascularized+pancreas+transplantation+in+mice+to+assess+ischemia+reperfusion+injury+and+graft+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">A novel technique for heterotopic vascularized pancreas transplantation in mice to assess ischemia reperfusion injury and graft pancreatitis.</a> Surgery. 141, 682-689 (2007).</li>
<li>Sucher, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+hind-limb+transplantation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Orthotopic hind-limb transplantation in rats.</a> J Vis Exp. , (2010).</li>
<li>Zou, Y., Brandacher, G., Margreiter, R., Steurer, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cervical+heterotopic+arterialized+liver+transplantation+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Surg.+Res%22%5BJournal%5D)">Cervical heterotopic arterialized liver transplantation in the mouse.</a> J. Surg. Res. 93, 97-100 (2000).</li>
<li>Zhang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+mouse+limb+transplantation+model%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Development of a mouse limb transplantation model.</a> Microsurgery. 19, 209-213 (1999).</li>
<li>Schneeberger, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Upper-extremity+transplantation+using+a+cell-based+protocol+to+minimize+immunosuppression%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Surg%22%5BJournal%5D)">Upper-extremity transplantation using a cell-based protocol to minimize immunosuppression.</a> Ann. Surg. 257, 345-351 (2013).</li>
<li>Azari, K., Brandacher, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascularized+composite+allotransplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Organ+Transplant%22%5BJournal%5D)">Vascularized composite allotransplantation.</a> Curr Opin Organ Transplant. 18, 631-632 (2013).</li>
<li>Pomahac, B., Gobble, R. M., Schneeberger, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Facial+and+hand+allotransplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb.+Perspect.+Med%22%5BJournal%5D)">Facial and hand allotransplantation.</a> Cold Spring Harb. Perspect. Med. 4, (2014).</li>
<li>Chong, A. S., Alegre, M. L., Miller, M. L., Fairchild, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lessons+and+limits+of+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb.+Perspect.+Med%22%5BJournal%5D)">Lessons and limits of mouse models.</a> Cold Spring Harb. Perspect. Med. 3, a015495(2013).</li>
<li>Lin, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neck+as+a+preferred+recipient+site+for+vascularized+composite+allotransplantation+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Plast.+Reconstr.+Surg%22%5BJournal%5D)">The neck as a preferred recipient site for vascularized composite allotransplantation in the mouse.</a> Plast. Reconstr. Surg. 133, 133e-141e (2014).</li>
<li>Shapiro, R. I., Cerra, F. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+for+reimplantation+and+transplantation+of+a+complex+organ%3A+the+rat+hind+limb%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Surg.+Res%22%5BJournal%5D)">A model for reimplantation and transplantation of a complex organ: the rat hind limb.</a> J. Surg. Res. 24, 501-506 (1978).</li>
<li>Leto Barone, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+gracilis+myocutaneous+free+flap+in+swine%3A+an+advantageous+preclinical+model+for+vascularized+composite+allograft+transplantation+research%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">The gracilis myocutaneous free flap in swine: an advantageous preclinical model for vascularized composite allograft transplantation research.</a> Microsurgery. 33, 51-55 (2013).</li>
<li>Mathes, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+preclinical+canine+model+for+composite+tissue+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Reconstr.+Microsurg%22%5BJournal%5D)">A preclinical canine model for composite tissue transplantation.</a> J. Reconstr. Microsurg. 26, 201-207 (2010).</li>
<li>Barth, R. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prolonged+survival+of+composite+facial+allografts+in+non-human+primates+associated+with+posttransplant+lymphoproliferative+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Prolonged survival of composite facial allografts in non-human primates associated with posttransplant lymphoproliferative disorder.</a> Transplantation. 88, 1242-1250 (2009).</li>
<li>Brandacher, G., Grahammer, J., Sucher, R., Lee, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+basic+and+translational+research+in+reconstructive+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Birth+Defects+Res+C+Embryo+Today%22%5BJournal%5D)">Animal models for basic and translational research in reconstructive transplantation.</a> Birth Defects Res C Embryo Today. 96, 39-50 (2012).</li>
<li>Foster, R. D., Liu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+hindlimb+transplantation+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Reconstr.+Microsurg%22%5BJournal%5D)">Orthotopic hindlimb transplantation in the mouse.</a> J. Reconstr. Microsurg. 19, 49(2002).</li>
<li>Tung, T. H., Mohanakumar, T., Mackinnon, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+Mouse+Model+for+Heterotopic+Limb+and+Composite-Tissue+Transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Reconstr.+Microsurg%22%5BJournal%5D)">Development of a Mouse Model for Heterotopic Limb and Composite-Tissue Transplantation.</a> J. Reconstr. Microsurg. 17, 267-274 (2001).</li>
<li>Zhang, F., Shi, D. Y., Kryger, Z., Moon, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+mouse+limb+transplantation+model%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Development of a mouse limb transplantation model.</a> Microsurgery. 19 (5), 209-213 (1999).</li>
<li>Schneeberger, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atypical+acute+rejection+after+hand+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Atypical acute rejection after hand transplantation.</a> Am. J. Transplant. 8, 688-696 (2008).</li>
<li>Mathes, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stable+mixed+hematopoietic+chimerism+permits+tolerance+of+vascularized+composite+allografts+across+a+full+major+histocompatibility+mismatch+in+swine%5BTitle%5D)+AND+%22Transpl.+Int%22%5BJournal%5D)">Stable mixed hematopoietic chimerism permits tolerance of vascularized composite allografts across a full major histocompatibility mismatch in swine.</a> Transpl. Int. 27, 1086-1096 (2014).</li>
<li>Yamada, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+CTLA4Ig+for+induction+of+mixed+chimerism+and+renal+allograft+tolerance+in+nonhuman+primates%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Use of CTLA4Ig for induction of mixed chimerism and renal allograft tolerance in nonhuman primates.</a> Am. J. Transplant. 14, 2704-2712 (2014).</li>
<li>Sachs, D. H., Kawai, T., Sykes, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+tolerance+through+mixed+chimerism%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb.+Perspect.+Med%22%5BJournal%5D)">Induction of tolerance through mixed chimerism.</a> Cold Spring Harb. Perspect. Med. 4, a015529(2014).</li>
<li>Kawai, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HLA-mismatched+renal+transplantation+without+maintenance+immunosuppression%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">HLA-mismatched renal transplantation without maintenance immunosuppression.</a> N. Engl. J. Med. 358, 353-361 (2008).</li>
<li>Kawai, T., Sachs, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tolerance+induction%3A+hematopoietic+chimerism%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Organ+Transplant%22%5BJournal%5D)">Tolerance induction: hematopoietic chimerism.</a> Curr Opin Organ Transplant. 18, 402-407 (2013).</li>
<li>Kawai, T., Sachs, D. H., Sykes, M., Cosimi, A. .B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HLA-mismatched+renal+transplantation+without+maintenance+immunosuppression%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">HLA-mismatched renal transplantation without maintenance immunosuppression.</a> N. Engl. J. Med. 368, 1850-1852 (2013).</li>
<li>Leventhal, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chimerism+and+tolerance+without+GVHD+or+engraftment+syndrome+in+HLA-mismatched+combined+kidney+and+hematopoietic+stem+cell+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+Transl.+Med%22%5BJournal%5D)">Chimerism and tolerance without GVHD or engraftment syndrome in HLA-mismatched combined kidney and hematopoietic stem cell transplantation.</a> Sci. Transl. Med. 4, 124-128 (2012).</li>
<li>Cendales, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Banff+2007+working+classification+of+skin-containing+composite+tissue+allograft+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Transplant%22%5BJournal%5D)">The Banff 2007 working classification of skin-containing composite tissue allograft pathology.</a> Am. J. Transplant. 8, 1396-1400 (2008).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat ze geen concurrerende financiële belangen hebben.

Doorbloed Composite allotransplantatie, zoals de bovenste ledematen en het gezicht transplantatie voor de wederopbouw van de verwoestende weefsel gebreken, heeft zich ontwikkeld als een geldige behandelingsoptie voor patiënten die niet amendeerbaar conventionele reconstructieve procedures. Technische ontwikkelingen op het gebied van reconstructieve microchirurgie en ruime ervaring met krachtige immuunonderdrukkende en immuunmodulerende therapieën in orgaantransplantaties, nu mogelijk langdurige allograft overleving bij ...

De late jaren negentig luidden de baanbrekende dagen van reconstructieve transplantatie in met de eerste succesvolle handtransplantatie die in 1998 in Frankrijk werd uitgevoerd. Sindsdien is het gebruik van VCA's voor reconstructie van verwoestende weefseldervingen met succes toegepast bij een breed spectrum van patiënten. Tot op heden telt de wereld 76 ontvangers van 112 bovenste ledematen en 31 gezichten 1-3. Bovendien zijn verschillende andere soorten VCA's zoals buikwand 4, larynx 5, luchtpijp 6, gevasculariseerde gewrichten 7 en zelfs penis 8 uitgevoerd. Verder werd onlangs de levende geboorte van een baby gemeld na baarmoedertransplantatie 9. Deze groeiende wereldervaring is een indicatie voor hoe reconstructieve transplantatie een geldige therapeutische optie is geworden voor patiënten die lijden aan significante functionele weefseldervingen die niet geschikt zijn voor conventionele reconstructieve en herstellende chirurgie en behandeling. 
Terwijl het idee van "het vervangen van gelijksoortige met gelijksoortige" klinische enthousiasme wekte, blijft er nog steeds scepsis met betrekking tot bijwerkingen van conventionele hoge dosis immunosuppressie die nodig is om allograften en hun functie te behouden 10,11. Echter, zoals aangetoond door baanbrekend werk van Lee et al., zijn deze samengestelde grafts minder vatbaar voor afstoting dan de afzonderlijke componenten ervan, en bovendien hebben sommige weefselcomponenten, zoals het gevasculariseerde botcompartiment, optimisme gewekt omdat ze unieke immunologische effecten kunnen uitoefenen op de balans tussen immuunacceptatie en afstoting 12. 
Onze groep was pionier in verschillende microchirurgische diermodellen voor transplantatie van vaste organen, evenals voor gevasculariseerde composiet allotransplantatie 13-19. Hier beschrijven we een nieuwe chirurgische procedure met behulp van een niet-naadloze manchettechniek om super microvasculaire anastomosen uit te voeren in een orthotopisch muismodel voor achterpoottransplantatie. Dit transplantatiemodel biedt een nuttig hulpmiddel voor het onderzoeken van immuunacceptatie en afstotingsmechanismen, evenals de rol van individuele weefselcomponenten, zoals het gevasculariseerde beenmergcompartiment, bij het induceren van tolerantie in de immunologisch veelzijdige omgeving van de muissoort. Bovendien opent de orthotopische plaatsing van de poot de mogelijkheden voor zenuwregeneratie en functionele uitkomststudies, die van cruciaal belang zijn voor de setting van VCA.

<table><tbody><tr><td>Suture, 6-0 Nylon</td><td>MWI</td><td>31849</td><td></td></tr><tr><td>Suture, 6-0 Polysorb</td><td>MWI</td><td>72667</td><td></td></tr><tr><td>Suture, 10-0 Nylon</td><td>Aero Surgical</td><td>TK-107038</td><td></td></tr><tr><td>Polyimide Tubing, Size 25</td><td>Vention Medical</td><td>141-0023</td><td></td></tr><tr><td>Polyimide Tubing, Size 27</td><td>Vention Medical</td><td>141-0015</td><td></td></tr><tr><td>Microvascular Clamps (Single)</td><td>Synovis</td><td>00396</td><td></td></tr><tr><td>Microvascular Clamps (Double)</td><td>Synovis</td><td>00414</td><td></td></tr><tr><td>Micro-Scissors</td><td>Synovis</td><td>SAS-18</td><td></td></tr><tr><td>Micro-Forceps</td><td>Synovis</td><td>FRS-15 RM-8</td><td></td></tr><tr><td>Micro-Dilators</td><td>Synovis</td><td>FRS-15 RM-8d.1</td><td></td></tr><tr><td>Micro-Needledriver</td><td>Synovis</td><td>C-14</td><td></td></tr><tr><td>Micro-Clamp Applicator</td><td>Synovis</td><td>CAF-4</td><td></td></tr><tr><td>Micro-Flushing Needle</td><td>Hamilton</td><td></td><td>10MM, 30&deg;, 33G</td></tr><tr><td>Lactated Ringers Solution</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9968051</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine</td><td></td><td></td><td>DEA Number required; verkregen bij de ziekenhuisapotheek.</td></tr><tr><td>Enrofloxacin; Baytril</td><td>Bayer Health Care</td><td>186599</td><td></td></tr><tr><td>Heparin</td><td></td><td></td><td>Verkregen bij de ziekenhuisapotheek</td></tr></tbody></table>

orthotope hind limb transplantation in de muis

Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse

In vivo diermodelsystemen, en in het bijzonder muismodellen, zijn uitgegroeid tot krachtige en veelzijdige wetenschappelijke instrumenten die onmisbaar zijn voor fundamenteel en translationeel onderzoek op het gebied van transplantatiegeneeskunde. Een groot scala aan reagentia is exclusief in dit setting beschikbaar, inclusief mono- en polyklonale antilichamen voor zowel diagnostische als interventionele toepassingen. Bovendien staat een groot aantal gegenotypeerde, ingefokt, transgene en knock-out stammen gedetailleerd onderzoek toe van de individuele bijdragen van humorale en cellulaire componenten aan de complexe wisselwerking van een immuunrespons en maakt de muis de gouden standaard voor immunologisch onderzoek.
Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) beschrijft een nieuw veld van transplantatie waarbij allogenen worden gebruikt om 'gelijksoortigs' te vervangen bij patiënten die lijden aan traumatische of aangeboren weefselverlies. Dit chirurgische methodologische protocol toont het gebruik van een niet-naad-manchettechniek voor super-microvasculaire anastomose in een orthotopisch muis achterpoottransplantatiemodel. Het model maakt specifiek vergelijking mogelijk tussen gevestigde paradigma's in solide orgaantransplantatie met een nieuwe vorm van transplantaten bestaande uit verschillende weefselcomponenten. Uniek staat dit model de transplantatie toe van een levensvatbaar gevasculariseerd beenmergcompartiment en niche die het potentieel hebben om een gunstig effect uit te oefenen op de balans tussen immuunacceptatie en afstoting. Deze techniek biedt een hulpmiddel om allogenenherkenning en allograft afstoting en acceptatie te onderzoeken, en maakt ook de voortzetting van functionele zenuwregeneratiestudies mogelijk om dit nieuwe veld van transplantatie verder te ontwikkelen.

Uitvoeren gevasculariseerde composiet allotransplantation in een muizenmodel met een niet-hechtingsmanchet techniek maakt uitstekende lange termijn graft en dierlijke overleving bereiken zoals getoond in figuur 1. Bovendien is een betrouwbare methode om reproduceerbare resultaten geleidelijke allograft afstoting bij gevasculariseerde composiet allotransplantatie zoals blijkt uit de in figuur 2 beelden. H &amp; E histologie van weefsel va...

Dit nieuwe model voor orthotope achterste ledematen transplantatie in de muis, van een niet-hechtingsmanchet techniek voor super-microvasculaire anastomose, een krachtig hulpmiddel voor in vivo mechanistische immunologisch onderzoek naar gevasculariseerd samengestelde allotransplantatie (VCA).

Orthotope Hind Limb Transplantation in de muis

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and ...

Het algemene doel van deze instructievideo is het introduceren van een muismodel voor orthotopische transplantatie van het achterpootje, waarbij gebruik wordt gemaakt van een hechtheloze cuff-techniek voor super-microvasculaire anastomose. Diermodellen zijn van cruciaal belang voor het begrip en de behandeling van menselijke ziekten en hebben de afgelopen twee decennia de weg vrijgemaakt voor reconstructieve transplantatie als klinische realiteit. Dit specifieke model kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen met betrekking aan de pathofysiologie van een allo-immuunrespons die specifiek is voor gevasculariseerde samengestelde allografts.Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat de cuff-techniek zonder hechtingen de complexiteit aanzienlijk vermindert en het succespercentage van deze super-microvasculaire procedure verhoogt. Nadat het passende sedatieniveau via een knijptest bij de teen is bevestigd, wordt het achterste ledemaat en de lies van het donordier geschoren. Desinfecteer vervolgens de huid met 10% povidonjodium en plaats de muis onder een dissectiemicroscoop.Begin de oogst van het donorledemaat met een schaar door een huidincisie in de lies te maken, proximaal ten opzichte van het midden van het dijbeen. Maak de incisie circumferentieel door om het achterpootje van de rest van het lichaam te scheiden. Identificeer en ontleed de arteria femoralis, vena femoralis en de nervus femoralis.Gebruik vervolgens een pincet en microschaar om de drie structuren te scheiden. Het voorkomen van microtrauma aan de vaatwand door een 'no touch'-techniek toe te passen is essentieel voor het slagen van de procedure. Zodra de vasculaire pedikel is gedissekeerd, worden de vaten met de microschaar bij het ligament inguinale doorgesneden.Zet de dissectie van de individuele ventrale en dorsale spiergroepen voort ongeveer tot het midden van het dijbeen om het transplantaat van het donordier te scheiden. Transecteer vervolgens het femur door te snijden in het midden van de femurschacht. Spoel het geoogste ledemaat met een spuit voorzien van een naald van 33 gauge schoon met 2 ml hepariniseerde fysiologische zoutoplossing van 4 °C.Plaats vervolgens individuele polyimide manchetten op de vena femoralis en de arteria femoralis. Bewaar het transplantaat in natte katoengazen in een petrischaal bij 4 °C tot aan de inbrenging. Het monteren van de pesis op de polyimide manchetten is de meest kritische stap van de procedure.Aangezien malnotatie de bloedstroom kan belemmeren en onjuiste weefseldruk sommige antibiotische weefsels kan blootstellen, waardoor de kans op trombosevorming toeneemt. Om het achterpoot-recipiëntlid te verwijderen, injecteert u 0,3 ML warme zoutoplossing intraperitoneaal. Maak een circumferentiële incisie rond het achterpootlid en identificeer en dissecteer de femorale arterie, vene en zenuw, zoals zojuist gedemonstreerd.Zodra de vasculaire pedikel is gedissecteerd, worden de femorale vaten bij het ligament inguinale afgeklemd. Snijd vervolgens de vaten distaal door bij de arteria epigastrica superficialis. Ga verder met het scheiden van de individuele ventrale en dorsale spiergroepen ongeveer ter hoogte van het midden van het dijbeen om het oorspronkelijke achterpoot van het ontvangende dier te scheiden.Transect vervolgens het dijbeen in het midden van de femurschacht. Gebruik daarna een spinale naald van 20 gauge als intramedullaire pen en lijn de dijbeenderen van de ontvanger en het transplantaat uit in de oorspronkelijke positie van het achterpootje. Verbind de dijbeenderen van de donor en de ontvanger.Gebruik absorbeerbaar hechtmateriaal om de ventrale en dorsale spiergroepen te coapteren. Door deze uitlijning nauwkeurig en snel uit te voeren, wordt uitgebreid bloedverlies uit de beenholte voorkomen. Om de femorale vaten te verbinden, trekt u de ontvangende zijde van het vat over de polyimide cuffs.Gebruik een 10-0 nylonhechtdraad om het ontvangende vat met een circumferentiële knoop op de cuff te fixeren. Zodra het vat is gestabiliseerd, mogen de klemmen worden verwijderd. Verifieer vervolgens visueel of de cuffs niet zijn verdraaid.Verifieer visueel de homeostase en gebruik elektrocauterisatie om elke bloedingsbron te stoppen. Sluit vervolgens de huid met niet-absorbeerbare nylon hechtingen. Monitor het dier tot het volledig is hersteld.Het uitvoeren van een gevasculariseerde composiet allotransplantatie in een muismodel met behulp van deze niet-gehechte cuff-techniek vergemakkelijkt het bereiken van een uitstekende en langdurige overleving van zowel het transplantaat als het dier. Bovendien vormt deze techniek een betrouwbare methode om reproduceerbare resultaten van geleidelijke allotransplantaatafwstoting te verkrijgen, en een gevasculariseerd composiet allotransplantatiemodel zoals gedocumenteerd door de beelden. Inderdaad onderstreept histologische analyse van weefsels verkregen van dieren die afstoting ondergaan verder de reproduceerbare dynamiek van allotransplantaatafwstoting in dit muismodel.Zodra deze techniek onder de knie is, kan deze in 90 tot 120 minuten worden voltooid, mits deze correct wordt uitgevoerd. Tijdens het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om uiterste aandacht te besteden aan de hantering van het weefsel en elke vorm van bloeding te vermijden. Na de ontwikkeling van deze techniek kan deze de weg vrijmaken voor onderzoekers op het gebied van reconstructieve transplantatie.Om fundamentele mechanistische vragen te onderzoeken met betrekking tot de allo-immuniteit van gevasculariseerde composiet-allografts. Na het bekijken van deze video zou u een goed begrip moeten hebben van hoe alle kritieke stappen van een orthotope achterpoottransplantatie bij de muis moeten worden uitgevoerd.

orthotopic-hind-limb-transplantation-in-the-mouse

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

De muis heterotope harttransplantatie model is bewezen door vele onderzoekers een belangrijke methode voor het bestuderen van de mechanismen van de afwijzing en immuunrespons worden. Echter, de betrokken technieken zijn nog steeds uitdagend. Door het wijzigen van standaard technieken die we hebben succes gehad met meer dan 1000 transplantaties.

Heterotope harttransplantatie in Muizen

Hier beschrijven we de orthotope rat achterste ledematen transplantatie procedure, die lijkt te zijn de gouden...

Orthotope Hind-Limb Transplantatie bij ratten

Er wordt een techniek gedemonstreerd voor de microchirurgische procedure voor heterotope transplantatie van harten bij muizen, inclusief vereenvoudigde methoden voor donoroogst en anastomose van de bloedvaten van de ontvanger.

Een gewijzigde methode voor Heterotope Mouse Hart transplantatie

Om gecombineerde transplantatie van vaste organen en vaatvoorziene samengestelde allogene transplantaten te bestuderen, beschrijven we een nieuw heterotopisch en bloc model voor borstwand-, thymus- en harttransplantatie bij muizen, waarbij gebruik wordt gemaakt van een cervicale niet-naadloze manchettechniek.

A Novel Microchirurgische Model voor Heterotope, En Bloc borstwand, Thymus, en harttransplantatie in Muizen

Dit protocol presenteert een robuust, reproduceerbaar model van vascularized composiet allotransplant (VCA) gericht op gelijktijdige studie van immunologie en functioneel herstel. De tijd geïnvesteerd in zorgvuldige techniek in een rechter mid-dij achterpoot orthotopische transplantatie met de hand genaaid vasculaire anastomoses en neurale coaptatie levert de mogelijkheid om functioneel herstel te bestuderen.

Het nemen van de volgende stap: een neurale coaptatie orthotopische achterste ledemaat transplantatie model om functioneel herstel in Rat maximaliseren

Dit artikel presenteert een partieel heterotopisch osteomyocutaan flaptransplantatieprotocol bij ratten en de mogelijke uitkomsten ervan in de follow-up op middellange termijn.

Partieel heterotopisch hindlimbtransplantatiemodel bij ratten

Het doel van dit manuscript is om de microchirurgische stappen te beschrijven die nodig zijn om een heterotope larynxtransplantatie bij muizen uit te voeren. De voordelen van dit muismodel ten opzichte van andere diermodellen van larynxtransplantatie zijn de kosteneffectiviteit en de beschikbaarheid van immunologische testen en gegevens.

Een heterotopisch muismodel voor het bestuderen van larynxtransplantatie

In dit protocol bespreken we de implementatie van een model van succesvolle orthotope levertransplantatie (OLT) bij muizen. Daarnaast worden ook adjuvantia besproken om de doorgankelijkheid van het transplantaat verder te analyseren na succesvolle OLT in een muis, met name met behulp van microcomputertomografie (microCT)-scans.

Succesvolle orthotope levertransplantatie bij muizen met behulp van microcomputertomografie-angiografie

We presenteren een reproduceerbaar muismodel van heterotopische vascularisatie allotransplantatie van achterpoot tot hals. Dit supermicrochirurgisch protocol, waarbij 0,3-0,5 mm vatenanastomosen worden gebruikt, integreert nylonfilamentgeleiding en veneuze manchetten. Het biedt een betrouwbaar platform voor translationele studies naar tolerantie, ischemie-reperfusieschade en immunologische mechanismen bij vasculariseerde samengestelde allotransplantatie.

Heterotopische achterpoot-naar-nek transplantatie bij de muis: een supermicrochirurgisch model van vasculariseerde composietallotransplantatie

Dit protocol presenteert een vereenvoudigde, end-to-side hechtingsanastomosetechniek voor muis-cervicale harttransplantatie, en biedt een robuust en reproduceerbaar model voor het bestuderen van transplantatie-immunologie.

Cervicale heterotopische muisharttransplantatie met behulp van end-to-side anastomosetechniek om transplantatie-immunologie te bestuderen

Leer orthotope achterpoottransplantatie bij muizen met een niet-hechtingsmanchettechniek voor super-microvasculaire anastomose. Dit model vereenvoudigt complexe chirurgische procedures en verhoogt het succespercentage voor immunologisch onderzoek naar vasculaire composietallotransplantatie.

Orthotope Hind Limb Transplantation in de muis

Meer video's verkennen