Name: Apical resectie muismodel naar Early Mammalian Hart Regeneration Studie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-01-23T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 8 s
Description: Leer apicale resectie bij neonatale muizen voor onderzoek naar vroege hartregeneratie. Deze chirurgische techniek biedt een directe methode om cellulaire en moleculaire mechanismen van cardiale reparatie te bestuderen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs danken Drs. James Hawkins, Zu-Xi Yu en Xuan Qu van het National Heart, Lung, and Blood Institute (NHLBI) voor hun hulp met de muis chirurgie en voorbereiding en kleuring van paraffine secties. De auteurs zijn dankbaar voor de NIH Fellows Editorial Board voor redactionele ondersteuning.

Alle muizen experimenten werden goedgekeurd door de Animal Care en gebruik Program aan de National Institutes of Health (NIH) met protocol nummer H0083R3. De NHLBI IACUC keurde het protocol zonder pijnstillers. 1. Onderkoeling Anesthesie in Neonatale Muizen <ol><li> Steriliseren sponzen en chirurgische apparatuur in een autoclaaf voor de operatie. Bereid de chirurgische materialen en schakel een hete kraal sterilisator 15-20 min vooraf aan 240 ° C bereikt tot 270 ° C. </li><li> Breng alle C57BL / 6 pups (leeftijd P1) uit hun zogende moeder om een ​​schone muis kooi met fris beddengoed en nestmateriaal. Zodra de pups in een operatiekamer genomen, voeren de apicale operatie onmiddellijk te minimaliseren de tijd gescheiden van de moeder en het risico van maternale cannibalization verminderen. </li><li> Zet sponzen op een ijs bed en plaats dan een pup op de spons voor ~ 3 minuten naar onderkoeling anesthesie te bereiken. Bevestig verdoving door het observeren van apnea en akinesie en knijpen een achterste voet. Controleer de status van pasgeborenen vaak omdat er te weinig tijd de pup akinetisch en apneu en een buitensporig lange duur van de anesthesie kan de overlevingskans 12 zakken niet zal maken. </li></ol> 2. Thoracotomie <ol><li> Breng de pup uit het ijs bed op een chirurgische benchtop ruimte en gebruik tape om haar armen, benen, en de staart immobiliseren in een liggende positie. </li><li> Ontsmet de borst met betadine en voorzichtig te reinigen met behulp van een 70% alcohol prep pad. </li><li> Wordt dwarse huidincisie langs de vierde intercostale ruimte van de borstholte via een Vannas Spring schaar en vervolgens stomp ontleden de vierde intercostale spieren om toegang tot het hart te bevorderen. OPMERKING: Survival tarieven verbeteren wanneer bloedverlies wordt geminimaliseerd tijdens de chirurgische proces. </li></ol> 3. Chirurgische Amputatie van het Hart ventriculaire Apex <ol><li> Met de hand, zachtjes druk uitoefenen op de buik van de exterioriserenapex van het hart. Absorberen bloed rond het chirurgische gebied met een steriel wattenstaafje applicators voor duidelijke visualisatie. Voor de schijn-geopereerde controle pasgeborenen, gaat rechtstreeks naar stap 4 (Hechting en herstel van muizen). </li><li> Onder een vergrootglas lamp en het gebruik iridectomiescharen voorzichtig uitvoeren fragmentarisch resectie van de linker ventrikel (LV) totdat de LV kamer wordt blootgesteld. Wees voorzichtig om de weggesneden delen van de LV een minimum te beperken. Ongeveer 15% resectie moet optimale belichting van de LV kamer te bereiken. </li><li> Zorg ervoor dat het hart terug naar de borstholte zodra de LV kamer wordt blootgesteld. </li></ol> 4. Hechting en herstel van Muizen <ol><li> Hechtdraad de ribben en spieren samen om de borstholte te dichten met behulp van steriele Proline 6-0 hechtingen, en dan voorzichtig de huid incisie te sluiten met behulp van de huid lijm. </li><li> Verwarm de pasgeborene onder een hitte lamp voor ~ 3 min voor herstel, en reinig het bloed en lijm sporen met behulp van een 70% alcohol prep pad before herinvoering van het aan haar nestgenoten. Proberen om de hele operatie te voltooien binnen 10 minuten, omdat het minimaliseren van de tijd gescheiden van de moeder verbetert pup overleving na apicale resectie. </li><li> Na elke operatie, plaatst de chirurgische instrumenten in contact met de korrels van de hete kraal sterilisator gedurende ongeveer 20 seconden voor volledige sterilisatie. Laat de chirurgische instrumenten afkoelen tot kamertemperatuur vóór elke operatie. </li><li> Na het voltooien van operaties voor alle pups in een nest, meng de pups met beddengoed en uitwerpselen van de moeder alvorens terug te keren ze naar het nest van de moeder. LET OP: In het algemeen, ICR / CD-1 muizen beter pleegmoeders dan C57BL / 6, maar zelfs onder moeders die borstvoeding geven van dezelfde genetische achtergrond, het bevorderen van instincten variëren. Als het veranderen van een zogende moeder is nodig om de sterfte te verminderen door de moeder kannibalisatie, verwijdert u de P0 pups naar een zogende moeder en voer apicale resectie bij P1. Alleen uit te voeren ofwel de sham werking of de apicale resection in een nest pups, omdat het mengen schijnvertoning en chirurgische pups de overlevingskansen van de chirurgische groep pups 6 kan verminderen. </li></ol> 5. Post-chirurgische Analyse <ol><li> Een dag na de operatie, toezicht houden op de pups, ervoor zorgen dat er geen verschil is tussen sham en chirurgische groepen, en tel het aantal pups naar de overlevingskans te meten. Wanneer de operaties naar behoren worden uitgevoerd, dient de overlevingscijfers soortgelijke en groter dan 60% in zowel sham chirurgische groepen. </li><li> Isolatie hart en fixatie. <ol><li> Euthanaseren de pups op dag 1 en 2 na de ingreep via onthoofding en dag 21 na de operatie door CO2 met een garantie van de dood door cervicale dislocatie, reinig de borst met behulp van een 70% alcohol prep. </li><li> Incise de middellijn huid en spieren van de borstkas en open de borst. </li><li> Accijnzen het gehele hart van de borstholte en bevestig het gehele hart van elk monster in 5 ml 4% paraformaldehyde O / N bij kamertemperatuur. </li></ol></li><li> De volgende dag, de overdracht van de monsters 70% ethanol. Monsters kunnen worden opgeslagen tot één week voor inbedden in paraffine. </li><li> Slice 5-micrometer dikke paraffine secties door de gehele ventrikel en het uitvoeren van standaard hematoxyline en eosine (H &amp; E) en Masson&#39;s trichroomkleuring naar de regeneratieve respons 5, 7 onderzoeken. Specifiek, H &amp; E kleuring wordt gebruikt om spier vervanging onderzoeken en Masson&#39;s Trichrome vlek wordt gebruikt om fibrotische reacties 5 onderzoeken. </li><li> Selecteer het gebied van belang en het opzetten van ten minste drie brandpunten per monster handmatig met een dia-scanner. Imago en de kleuring dia&#39;s te analyseren op 40 × vergroting volgens de instructies van de fabrikant met de standaard parameters. </li></ol>

<ol><li>Lin, Z., Pu, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategies+for+cardiac+regeneration+and+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Strategies for cardiac regeneration and repair.</a> Sci Transl Med. 6, 231-239 (2014).</li>
<li>Xin, M., Olson, E. N., Bassel-Duby, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mending+broken+hearts%3A+cardiac+development+as+a+basis+for+adult+heart+regeneration+and+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Mending broken hearts: cardiac development as a basis for adult heart regeneration and repair.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 14, 529-541 (2013).</li>
<li>Mahmoud, A. I., Porrello, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Turning+back+the+cardiac+regenerative+clock%3A+lessons+from+the+neonate%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Cardiovasc+Med%22%5BJournal%5D)">Turning back the cardiac regenerative clock: lessons from the neonate.</a> Trends Cardiovasc Med. 22, 128-133 (2012).</li>
<li>Porrello, E. R., Olson, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+neonatal+blueprint+for+cardiac+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">A neonatal blueprint for cardiac regeneration.</a> Stem Cell Res. 13, 556-570 (2014).</li>
<li>Porrello, E. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+regenerative+potential+of+the+neonatal+mouse+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Transient regenerative potential of the neonatal mouse heart.</a> Science. 331, 1078-1080 (2011).</li>
<li>Mahmoud, A. I., Porrello, E. R., Kimura, W., Olson, E. N., Sadek, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+models+for+cardiac+regeneration+in+neonatal+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Surgical models for cardiac regeneration in neonatal mice.</a> Nat Protoc. 9, 305-311 (2014).</li>
<li>Allen, T. C. Armed Forces Institute of Pathology. Hematoxylin and eosin. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAllen%2C+TC+%22Laboratory+methods+in+Histotechnology%22">Laboratory methods in Histotechnology</a>. Prophet, E. B., Mills, B., Arrington, J. B., Sobin, L. H. , American Registry of Pathology. Washington DC. 53-58 (1992).</li>
<li>Andersen, D. C., Ganesalingam, S., Jensen, C. H., Sheikh, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Do+neonatal+mouse+hearts+regenerate+following+heart+apex+resection%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+cell+reports%22%5BJournal%5D)">Do neonatal mouse hearts regenerate following heart apex resection?</a> Stem cell reports. 2, 406-413 (2014).</li>
<li>Kotlikoff, M. I., Hesse, M., Fleischmann, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comment+on+%27Do+neonatal+mouse+hearts+regenerate+following+heart+apex+resection%3F%27%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+cell+reports%22%5BJournal%5D)">Comment on 'Do neonatal mouse hearts regenerate following heart apex resection?'.</a> Stem cell reports. 3, 2(2014).</li>
<li>Sadek, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-investigator+letter+on+reproducibility+of+neonatal+heart+regeneration+following+apical+resection%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+cell+reports%22%5BJournal%5D)">Multi-investigator letter on reproducibility of neonatal heart regeneration following apical resection.</a> Stem cell reports. 3, 1(2014).</li>
<li>Andersen, D. C., Jensen, C. H., Sheikh, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Response+to+Sadek+et+al.+and+Kotlikoff+et+al%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+cell+reports%22%5BJournal%5D)">Response to Sadek et al. and Kotlikoff et al.</a> Stem cell reports. 3, 3-4 (2014).</li>
<li>Phifer, C. B., Terry, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+hypothermia+for+general+anesthesia+in+preweanling+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Behav%22%5BJournal%5D)">Use of hypothermia for general anesthesia in preweanling rodents.</a> Physiol Behav. 38, 887-890 (1986).</li>
<li>Laflamme, M. A., Murry, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regenerating+the+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Regenerating the heart.</a> Nat Biotechnol. 23, 845-856 (2005).</li>
<li>Laflamme, M. A., Murry, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Heart regeneration.</a> Nature. , 326-335 (2011).</li>
<li>Jesty, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((c-kit%2B+precursors+support+postinfarction+myogenesis+in+the+neonatal%2C+but+not+adult%2C+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">c-kit+ precursors support postinfarction myogenesis in the neonatal, but not adult, heart.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 109, 13380-13385 (2012).</li>
<li>Gonzalez-Rosa, J. M., Martin, V., Peralta, M., Torres, M., Mercader, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extensive+scar+formation+and+regression+during+heart+regeneration+after+cryoinjury+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Extensive scar formation and regression during heart regeneration after cryoinjury in zebrafish.</a> Development. 138, 1663-1674 (2011).</li>
</ol>

Publicatie kosten voor dit artikel werden gesponsord door een gift van Fine Science Tools Dr Jian Hou.

Cardiac regeneratie vertoont potentieel voor de behandeling en preventie van hartfalen1, 2. Diermodellen zijn onmisbaar en spelen een cruciale rol in het begrijpen van hoe hartregeneratie plaatsvindt3-6. Veel amfibieën en vissen regenereren hartweefsel als reactie op letsel, wat inzicht biedt in ons begrip van menselijke hart- en vaatziekten13, 14. In termen van evolutie zou de pathofysiologie echter meer geconserveerd moeten zijn tussen een muismodel en mensen. Hartregeneratie in zoogdie...

Een verlengde menselijke levensduur leidt tot verschillende verouderings- en levensstijlgerelateerde ziekten, waaronder hartfalen, een leidende doodsoorzaak. Zonder vervanging van verloren of disfunctionele hartspiercellen kunnen huidige therapieën de hartfunctie echter alleen tijdelijk verbeteren1, 2. Daarom is het noodzakelijk om innovatieve strategieën voor hartregeneratie en -reparatie te ontdekken en ontwikkelen. Het volwassen zoogdierhart heeft een beperkt regeneratief vermogen. Studies van lagere gewervelden, zoals urodele amfibieën en teleost vissen, hebben ongekende inzichten geboden in de moleculaire en cellulaire mechanismen die ten grondslag liggen aan hartregeneratie3, 4. Onlangs is een neonataal muismodel van hartregeneratie opgedoken dat de identificatie en karakterisering van evolutionair bewaarde pathofysiologische gebeurtenissen die nodig zijn voor menselijke hartregeneratie zou kunnen mogelijk maken5. 
Apicale resectie verwijst naar de chirurgische verwijdering van de linkerventriculaire apex. Deze procedure is beperkt tot 1- tot 7-dagen oude (P1 tot P7) muizen vanwege de hoge dodelijkheid bij oudere muizen6. Het hartregeneratieproces bij neonataal muizen na apicale resectie wordt verwacht als volgt te zijn: (I) snelle en effectieve vorming van een hematoom om de apex te verzegelen en exsanguinatie te voorkomen; (II) cardiomyocytregeneratie en herstel van de systolische functie5, 7. Recent werk heeft debat gestimuleerd over de significantie en efficiëntie van dit model8-11. Daarom is het belangrijk om de apicale resectie duidelijk en in detail te presenteren. Daartoe beschrijft dit protocol levendig en specifiek een video van hoe ik apicale resectie uitvoerde op basis van een eerder protocol6. 
Het begrijpen van de moleculaire mechanismen die ten grondslag liggen aan hartregeneratie is van belang voor de behandeling van hartaandoeningen die worden gekenmerkt door verlies en/of beschadigde cardiomyocyten, zoals hartfalen1, 2. Gezien de huidige en veelbelovende voortgang van apicale resectie in het onderzoek naar hartregeneratie, zou deze studie het gebruik van deze techniek en zijn toepassingen in onderzoek naar hartregeneratie kunnen bevorderen.

<table><tbody><tr><td>Olsen-Hegar Needle Holders with Scissors, 1.5 mm</td><td>Fine Science Tools</td><td>12002-12</td><td></td></tr><tr><td>Vannas Spring Scissors - 2 mm Cutting Edge</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-03</td><td>Iridectomieschaar</td></tr><tr><td>Hot Bead Sterilizer</td><td>Fine Science Tools</td><td>18000-45</td><td></td></tr><tr><td>Iris Forceps, Straight, Serrated</td><td>Fine Science Tools</td><td>11064-07</td><td></td></tr><tr><td>Iris Forceps, Curved, Serrated</td><td>Fine Science Tools</td><td>11065-07</td><td></td></tr><tr><td>Shea Scissors - Curved/Blunt-Blunt/12cm</td><td>Fine Science Tools</td><td>14105-12</td><td></td></tr><tr><td>Round Handled Suture Tying Forceps, Straight</td><td>Fine Science Tools</td><td>18025-12</td><td></td></tr><tr><td>Round Handled Vannas Spring Scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>15400-12</td><td></td></tr><tr><td>Fine Hemostat</td><td>Fine Science Tools</td><td>13007-12</td><td></td></tr><tr><td>Magnifying Lamp</td><td>Luxolamp Corp</td><td>IM120&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Heating lamp</td><td>Brandt Equipment llc</td><td>51152/3</td><td></td></tr><tr><td>6-0 Prolene sutures</td><td>Ethicon</td><td>8889H</td><td></td></tr><tr><td>Skin glue-Vetbond Tissue Adhesive&nbsp;</td><td>3M&nbsp;</td><td>1469</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Cotton Tipped Applicators</td><td>Dynarex</td><td>4305</td><td></td></tr><tr><td>WEBCOL Alcohol Prep Pad</td><td>Covidien</td><td>6818</td><td>Medium 2 PLY, 200/BOX, Satured with 70% Isopropyl Alcohol</td></tr><tr><td>Curity All Purpose Sponges</td><td>Covidien</td><td>9024</td><td>Non-woven 4 PLY, 4"x4" (10.2cm&times;10.2cm)</td></tr><tr><td>Bench top protector sheet</td><td>KIMTECH SCIENCE</td><td>7546</td><td>18" x 19.5" (45.72cm x 49.53cm) x 50</td></tr><tr><td>0.9% Sodium Chloride, 250ml</td><td>Hospira Inc.</td><td>NDC 0409-6138-22</td><td></td></tr><tr><td>Betadine Solution Swabsticks</td><td>Purdue Products L.P.</td><td>NDC 67618-153-03</td><td></td></tr><tr><td>Autoclave</td><td>TOMY Digital Biology</td><td>SX-700</td><td>HIGH-PRESSURE STEAM STERILIZER</td></tr><tr><td>Slide scanner</td><td>HAMAMATSU</td><td>NanoZoomer 2.0-RS</td><td></td></tr></tbody></table>

apical resectie muismodel naar early mammalian hart regeneration studie

Apical Resection Mouse Model to Study Early Mammalian Heart Regeneration

Cardiovasculaire aandoeningen teistert de hele wereld als gevolg van intensieve veranderingen in levensstijl. Hart regeneratie houdt grote belofte voor de reparatie en het herstel van hartspiercellen verloren als gevolg van verwondingen en ziekte. In tegenstelling tot de robuuste cardiale regeneratie van bepaalde lagere gewervelde dieren, volwassen zoogdieren harten tonen meestal minimale capaciteit voor hart regeneratie en reparatie. Echter, recente studies leidde tot grote wetenschappelijke belangstelling met de bevinding dat, tussen postnatale dag 1-7 (P1 tot P7), de neonatale muis hart behoudt significant regeneratieve potentieel na apicale resectie (dwz, chirurgische amputatie en de blootstelling van de linker ventriculaire apex). Een belangrijke controverse over deze bevinding kan te wijten zijn aan de uiteenlopende-operatie-gerelateerde procedures die worden gebruikt bij de inspanningen om te repliceren of uit te breiden op dit belangrijke bevinding. Deze instructies dynamisch presenteren de materialen en methodologie voor apicale resectie in een muismodel. De meest opvallende stappen van deze knaagdieren Survival chirurgie betrekken onderkoeling anesthesie, thoracotomie, chirurgische amputatie van hart ventriculaire apex en hechtdraad en het herstel van de muizen. De aanpak beschreven kan de toepassing van de apicale resectie muismodel voor cardiovasculair onderzoek uit te breiden.

Muis pups werden gedood 1, 2, en 21 dagen na resectie apicale en hun hart werden verzameld voor H &amp; E en Masson&#39;s Trichrome kleuring. Kleur in Masson&#39;s Trichrome kleuring geeft de afzetting van extracellulaire matrix epicardiale 5. Met succes apicale resectie wordt een bloedstolsel daadwerkelijk gevormd om de LV één dag post-apicale resectie dichten, zoals weergegeven in figuur 1A. Een geleidelijke resorptie van het bloedstolsel en vroege cardiale fibrose waargeno...

Een stapsgewijs videoprotocol van apicale resectie wordt in deze studie gedemonstreerd. Apicale resectie is een recent gehighlighte chirurgische aanpak in onderzoek naar regeneratie van het zoogdierhart. Deze studie kan de toepassing van apicale resectie bevorderen als een standaardmethodologie in onderzoek naar de mechanismen die ten grondslag liggen aan hartregeneratie.

Apical resectie muismodel naar Early Mammalian Hart Regeneration Studie

Cardiovascular disease plagues the whole world due to intensive lifestyle changes. Heart regeneration holds great promise for repairing and restoring ...

Het algemene doel van deze procedure is om apicale resectie bij pasgeboren muizen te gebruiken om vroege hartregeneratie bij zoogdieren te bestuderen. Dit kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen binnen het vakgebied van hartregeneratie, zoals welke moleculaire en cellulaire mechanismen ten grondslag liggen aan vroege cardiale regeneratie bij zoogdieren. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het muismodel voor apicale resectie een relatief eenvoudige en directe benadering biedt voor het bestuderen van vroege hartregeneratie bij zoogdieren.Voordat u met de procedure begint, verplaatst u alle C57 black six pups van postnatal dag één van hun zogende moeder naar een schone muizenkooi met verse strooisel en nestmateriaal. Verplaats vervolgens voor elke neonatus op beurt de pup van een ijsbed naar het chirurgische gebied en immobiliseer de armen, poten en staart in rugligging. Desinfecteer de borst met betadine, gevolgd door een voorzichtige reiniging met een 70% alcohol prep pad.Maak nu een huidincisie voor de overdracht langs het vierde binnenste costale gebied van de borgholte. Gebruik veerschaaren om een incisie in de apex van het hart te maken. Om toegang te krijgen tot het hart, gebruikt u veerschaaren om een incisie in de apex van het hart te maken, gevolgd door een botte dissectie van de binnenste costale spieren.Gebruik steriele 6-0 hechtingen om de ribben en spieren te sluiten. Gebruik huidlijm om de huidincisie zorgvuldig te sluiten en laat de neonaat ongeveer drie minuten herstellen onder een warmtelamp. Gebruik vervolgens een 70% alcohol-gaasje om alle bloed- en lijmresten van de pup te verwijderen en plaats het dier terug bij de nestgenootjes.Nadat alle operaties zijn uitgevoerd, mengt u de pups met de nestmateriaal en uitwerpselen van de moeder voordat u de neonaten terugplaatst in het nest van de moeder. Eén dag na de operatie telt u het aantal sham- en geopereerde pups om het overlevingspercentage binnen elke groep te bepalen. Op het juiste tijdstip na de operatie reinigt u voor elk dier achtereen de borstkas met 70% ethanol en maakt u een incisie in de huid en spieren langs de middellijn van de borstkas.Verwijder het gehele hart uit de borgholte en fixeer het weefsel gedurende een nacht bij kamertemperatuur in vier procent paraformaldehyde met een laagte van vijf millimeter. Breng de monsters de volgende dag over naar 70% ethanol voor maximaal één week vóór het inbedden in paraffine. Nadat er paraffinecoupes van vijf micrometer dikte over het gehele ventrikel zijn verkregen, worden de monsters gekleurd met hematoxyline, eosine en Masson's trichroom om respectievelijk de spiervervanging en de fibrotische reacties in de geresecteerde harten te onderzoeken.Verkrijg handmatig met een slidescanner ten minste drie brandpunten per monster. Analyseer vervolgens de monsterbeelden bij een 40X vergroting volgens de instructies van de fabrikant, gebruikmakend van de standaardparameters van de scanner. Bij een succesvolle apicale resectie wordt binnen één dag na de apicale resectie effectief een bloedstolsel gevormd om de linker ventrikel af te sluiten.Een progressieve resorptie van het bloedstolsel en vroege cardiacfibrose worden vervolgens waargenomen, met een geleidelijke vervanging door myocardiaal weefsel tot de volledige regeneratie van het myocard 21 dagen na de resectie. Inderdaad zijn er drie weken na de operatie door morfologische analyse geen verschillen meer zichtbaar tussen de geresecteerde en sham-geopereerde harten. Bij het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om steriele omstandigheden te handhaven.Na deze procedure kunnen andere maatregelen, zoals labeling en de lineaire meting, worden uitgevoerd om aanvullende vragen over de proliferatie van cardiomyocyten en apicale resectie te beantwoorden. Na het bekijken van deze video zou u een goed begrip moeten hebben van hoe u apicale resectie bij pasgeboren muizen uitvoert.

apical-resection-mouse-model-to-study-early-mammalian-heart

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

In this video, we demonstrate the procedure to surgically remove the left ventricular apex of a neonatal mouse heart.

Apical Resection Neonatal Mouse Model: A Surgical Procedure to Amputate the Ventricular Apex to Study Regenerative Potential in a Neonate Mouse Heart

Hartfalen is de belangrijkste oorzaak van ziekenhuisopname en een belangrijke doodsoorzaak. Een model van permanente ligatie van de linker voorste afdalende kransslagader bij muizen wordt toegepast om ventriculaire remodellering en cardiale disfunctie na een myocardinfarct te onderzoeken. De techniek van invasieve hemodynamische metingen bij muizen wordt gepresenteerd.

Permanente Ligatie van de linker anterior Aflopend Kransslagader in Muizen: Een model van Post-myocardinfarct Remodelling en hartfalen

Dit protocol beschrijft een zeer reproduceerbaar model van hartregeneratie door chirurgische inductie van een myocardinfarct in de linker ventrikel van muizen op postnatale dag 1. De methode omvat inductie van hypothermische anesthesie en ligatie van de linker voorste descendentie van de kransslagader.

Myocardinfarct bij pasgeboren muizen, een model van Cardiac Regeneration

Cardiomyocyte proliferatie na letsel is een dynamisch proces dat een symfonie van extracellulaire signalen van niet-myocyte celpopulaties vereist. Met behulp van afstamming strekken, passieve helderheid, en drie-dimensionale whole-mount confocale microscopie technieken, kunnen we analyseren de invloed van een verscheidenheid van celtypes op cardiale reparatie en regeneratie.

Het vastleggen van de cardiale letselrespons van gerichte celpopulaties via Cleared Heart Driedimensionale beeldvorming

Dit protocol is bedoeld om een 3D-bioprint patch te transplanteren op het epicardium van infarct muizen die hartfalen modelleren. Het bevat details met betrekking tot anesthesie, de chirurgische borstopening, permanente ligatie van de linker voorste aflopende (LAD) kransslagader en toepassing van een bioprinted patch op het infarct gebied van het hart.

Transplantatie van een 3D Bioprinted Patch in een Murine Model van Myocardikoesie Infarct

Een nieuwe techniek voor bloedcircuitreconstructie in een heterotopisch abdominale muisharttransplantatiemodel wordt gedemonstreerd.

Bloedcircuitreconstructie in een abdominale muis harttransplantatiemodel

We bieden een protocol voor neonatale cardiale macrofaagscheiding en transplantatie in een volwassen muizenhart, wat een veelbelovende manier kan zijn om hartherstel te bevorderen.

Transplantatie van neonatale muizen cardiale macrofagen in volwassen muizen

Echogeleide celafgifte rond de plaats van myocardinfarct bij muizen is een veilige, effectieve en handige manier van celtransplantatie.

Echogeleide geïnduceerde pluripotente stamcel-afgeleide cardiomyocytenimplantatie bij myocardinfarct muizen

Hier beschrijven we een protocol om een voldoende hoeveelheid enkele niet-cardiomyocyten met hoge levensvatbaarheid te isoleren uit een post-myocardinfarct (MI) muizenhart. Dit kan worden gebruikt voor daaropvolgende single-cell sequencing, flowcytometrie-analyse en primaire celcultuur.

Voorbereiding van een niet-cardiomyocytencelsuspensie voor single-cell RNA-sequencing van een post-myocardinfarct volwassen muizenhart

Xenopus tropicalis is een ideaal model voor regeneratief onderzoek, omdat veel van zijn organen een opmerkelijk regeneratief vermogen bezitten. Hier presenteren we een methode voor het construeren van een hartletselmodel in X. tropicalis via apexsectie.

Een apicale resectiemodel in het volwassen Xenopus tropicalis-hart

Leer apicale resectie bij neonatale muizen voor onderzoek naar vroege hartregeneratie. Deze chirurgische techniek biedt een directe methode om cellulaire en moleculaire mechanismen van cardiale reparatie te bestuderen.

Apical resectie muismodel naar Early Mammalian Hart Regeneration Studie

Meer video's verkennen