Name: Een Neonatale Mouse Spinal Cord Injury Compressie Model (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-27T14:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 31 s
Description: Leer een reproduceerbaar compressiemodel voor ruggenmergletsel bij neonatale muizen. Deze methode maakt onderzoek naar adaptieve plasticiteit en herstelmechanismen mogelijk voor therapeutische toepassingen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit werk is ondersteund door subsidies van de Regionale Gezondheidsautoriteit van Zuidoost-Noorwegen (JLB, 2014119; JCG, projectnummers 2015045 en 2012065), door de Noorse Onderzoeksraad (JCG, projectnummer 23 00 00) en de Universiteit van Oslo.

Deze experimentele protocol is goedgekeurd door de National Animal Research Authority in Noorwegen (Forsøksdyrutvalget, lokale experimentele erkenningsnummer 12,4591) in overeenstemming met de Europese Unie verzorging van dieren regelgeving (Federatie Europese Laboratory Animal Science Association). De inspanningen werden gedaan om het aantal gebruikte dieren en hun lijden te minimaliseren. In dit artikel de procedure gebruikt postnatale (P) dag 1 wildtype ICR (stempelen controlegebied) muizen (Jackson, USA) beschreven maar dezelfde benadering kan ook worden gebruikt in latere stadia. 1. De bouw van een Gas Anesthesie-systeem voor pasgeboren muizen (figuur 1) <ol><li> Bouw een neus-masker van het uiteinde van een spuit. Sluit deze aan op de 3-weg kraan met plastic buis (Figuur 1 - rode buizen en figuur 2A1). </li><li> Boor een klein gat in de zijkant van de neus masker en sluit deze aan plastic slang aan de overloop van gas uit het verwijderenmasker. Beëindig de buis hetzij op een vacuümpomp die voor een lichte onderdruk of in een zuurkast (Figuur 1 - heldergroene tubing). </li><li> Maak een verdoving kamer uit een 150 mm x 25 mm plastic petrischaal (figuur 2A2). <ol><li> Enerzijds een gat groot genoeg is om de kop van de muis en neusmasker tegemoet. </li><li> Aan de andere kant erop twee kleinere gaten waardoor de kunststof buizen en uit de neus masker kan worden ingebracht (Figuur 1 - rood en helder groen slang respectievelijk). </li><li> Voeg een derde boring aan de bovenkant van het deksel en hechten aan dit derde plastic buis die eindigt bij de vacuümpomp (Figuur 1 - donkergroen tubing). Het doel van deze derde buis zodat overtollige gas dat niet is vastgelegd door de uitlaat van de neus masker wordt verwijderd. </li></ol></li><li> Bouw een slaap kamer door een gat in de bodem van elke soort lab schaal die groot genoeg is om contain de muis en heeft een gladde en zelfs rand (de opening van de schaal moet met de tafel om lekkage van gas te voorkomen liggen). Sluit de opening in de kamer om de 3-weg kraan met kunststof buis (figuur 1 - Bruin tubing). Plaats de slaap kamer onder een zuurkast. </li><li> Sluit een 3-weg kraan naar de uitlaatbuis van de verdamper (Figuur 1 - gele buizen en figuur 2A3). </li><li> Sluit de inlaat van de verdamper om de zuurstoftoevoer (Figuur 1 - Blauw tubing). </li></ol> 2. Wijziging van een Yasargil Tijdelijke Aneurisma Mini-clip aan de Compression Tool aanmaken (figuur 2 en tabel 1) <ol><li> Bevestig de clip stevig aan een stand met een klem. Met behulp van een binoculaire loep voor visuele controle, dienen langs het buitenoppervlak van de punt van elke clip blad tot een uiteindelijke dikte van ongeveer 150 pm met behulp van een slijpsteen gemonteerd op een boormachine (Figuur 2B en C). </li&gt; <li> Maak een stop voor de clip door het snijden van een stukje van polyethyleen capillaire buis (Tabel 1) onder een stereomicroscoop met een micro-mes (Tabel 1) en plaats dit op één van de schoepen (figuur 2A4 en figuren 2B en C). Dit voorkomt dat de volledige sluiting van de clip en zorgt voor gestandaardiseerde compressie dimensies. Wanneer de clip wordt sloot de ruimten tussen de afstand is ongeveer 230 urn. Nieuwe stop voor elk experiment als polyethyleen materiaal samen te drukken tijdens gebruik, waarbij de ruimten tussen de ruimte zou wijzigen. Opmerking: De veerspanning van de clip mettertijd afneemt zodanig dat na ongeveer 80 compressies de clip niet meer volledig sluit de stop en moet worden vervangen. </li></ol> 3. Voorbereiding voor de operatie <ol><li> Plaats de muis in de slaapkamer (figuur 1) en initiëren anesthesie met 4% isofluraan (figuur 2A5 </strong&gt;) Verdampt in zuivere zuurstof, met een verdamper (figuur 2A3 en Tabel 1). </li><li> Test de terugtrekking reflex van de muis door zachtjes knijpen het web van huid tussen de tenen met een dunne plastic pincet. Doe dit zorgvuldig pasgeboren muizen gemakkelijk gewond. Knijpen te hard tot de onmiddellijke kneuzingen. Deze test wordt uitgevoerd aan het begin van de sedatie veroorzaakt de reflex en geeft een goede indicatie van de hoeveelheid kracht nodig. </li><li> Zodra de reflex wordt afgeschaft, verwijdert u de muis uit de slaap kamer en plaats deze in een buikligging op de operatietafel met de snuit ingevoegd in de neus masker dat een continue aanvoer van 4% isofluraan gemengd in zuivere zuurstof (figuur 1) voorziet. Zorg ervoor dat de opwarming pad is ingeschakeld en ingesteld op 37-38 ° C als onderkoeling tijdens de operatie kan fataal zijn. </li><li> Om volledige analgesie te bereiken, subcutaan injecteren 50 ul van het lokale verdovingsmiddel Bupivacaïne (2,5 mg / ml, <strong&gt; Figure 2A6) in plaats van de operatie (in de experimenten hier gemeld, dit is op thoracale niveau (T) 9-T11). Gebruik een insulinespuit (300 pl, 30 G, figuur 2A7 en tabel 1) aan de injectie uit te voeren. </li><li> Verminder de concentratie isofluraan geleverd aan de neus masker tot 1-2%. </li></ol> 4. Dorsale Laminectomie <ol><li> Voer een operatie onder microscopische controle. </li><li> Na de operatie gebied reinigen met chloorhexidine gluconaat (Tabel 1 # 19) gedurende ten minste 30 seconden, maak een 1-2 mm dwarse incisie in T9-T11 via een microknife (figuur 2A8). Opmerking: In ICR pasgeboren muizen het rostrale deel van de maag, zichtbaar bevat melk, wordt geconfronteerd met de vertebrale niveaus T12-T13 (Figuur 3). Een andere bezienswaardigheid is de rostrale deel van de thoracale onderhuidse vetweefsel aggregaat die eindigt bij ongeveer T8-9. Deze mijlpaal is pas zichtbaar nadat incisie in de huid. </li><li&gt; tang (figuur 2A9 en A10) op de huid opening in dwarsrichting breder 8-9 mm in de huid trekken zacht rostraal en caudaal (huid gemakkelijk scheurt, waardoor een glad en recht wond). Dit zorgt voor voldoende zijdelingse toegang tot de wervelkolom. </li><li> Trek de randen van de incisie van de onderliggende structuren inbrengen steriele stukken hemostatische gelatinespons (Figuur 2A11 en Tabel 1) subcutaan rostraal en caudaal van de incisie. Dit vergroot de opening en voorkomt dat de huid intrekken en het gebied verduistert tijdens de operatie. De hemostatische gelatinespons niet worden geweekt in een zoutoplossing voor gebruik. </li><li> De ruggengraat bloot ontleden de paravertebrale spieren via dunne schaar (figuur 2A12 en Tabel 1). Snijd de bevestigingen van de spieren aan de wervelkolom en bloot de plaat (figuur 4A). Niete ook dat in dit stadium de spinale proces is onderontwikkeld. </li><li> Identificeer de middellijn en dwars doorgesneden tussen de twee lagen (die in dit stadium is kraakbeen) met dunne schaar (figuur 4B). Plaats voorzichtig een blad van een dunne tang tussen de lamina en de dura (Figuur 4C), pak de lamina met de tang en til het voorzichtig omhoog tot een stuk breekt weg, waardoor de dura intact (figuur 4D). Herhaal dit 2-3 keer een 1-2 segment lange laminectomie te verkrijgen. </li><li> Met behulp van de dunne tang rongeurs, verwijder delen van de facetgewrichten bilateraal om voldoende ruimte te krijgen om de clip te plaatsen binnen het wervelkanaal. Maak de chirurgische gebied en de controle bloeden met kleine stukjes hemostatische gelatine spons. </li></ol> 5. Spinal Cord Injury Compression <ol><li> Open de gewijzigde aneurysma mini-clip in de clip houder (Figuur 2A13 en figuur 2B) en plaats the messen aan weerszijden van het ruggenmerg in en tussen de facet verbindingen en het koord. Zorg ervoor dat de messen diep genoeg om het ventrale deel van het ruggenmerg beïnvloeden ingevoegd. Indien dit niet mogelijk is, verwijderen van de facetgewrichten. </li><li> Maak de mini-clip snel, houdt het op zijn plaats met de clip houder om te voorkomen dat schuiven. Handhaving van de compressie voor 15 sec. </li><li> Open de mini-clip snel en verwijderen. Om een ​​symmetrische compressie te bereiken, omkeren van de oriëntatie van de mini-clip, en met behulp van de makkelijk te zien mark gemaakt door de hemorragische oedeem uit de eerste compressie als een gids, de positie van de clip in de omgekeerde oriëntatie voor een tweede 15-sec compressie (voorafgaande experiment toonde aan dat dit genereert symmetrische histologische en fysiologische tekorten, terwijl enkel compressies niet 1). De dura mag niet beschadigd door de compressie. </li><li> Reinig het gebied en hemostase met stukjes hemostatische gelatine spons te handhaven.</li><li> Verwijder de stukken hemostatische gelatinespons die onder de randen van de huid incisie aan het begin van de operatie gebracht en sluit de huidincisie met steriele 6,0 hechtdraad en een naaldhouder (Figuur 2A14 en 15). </li><li> Injecteer subcutaan 0,75 mg / kg lichaamsgewicht buprenorfine (Figuur 2A16) verdund in steriel PBS onder gebruikmaking van een insulinespuit (300 pl, 30 G). </li></ol> 6. postoperatieve zorg <ol><li> Verwijder de muis uit de neus masker en plaats deze in een temperatuur-gecontroleerde kamer ingesteld op 30 ° C totdat de verdoving is uitgewerkt en de muis wordt alert (1-3 uur is meestal voldoende). </li><li> Injecteer Diazepam (Figuur 2B17) intraperitoneaal in de moeder (8 g / kg lichaamsgewicht). Hierdoor ontstaat een verstijving die het risico van kannibalisme in de eerste nacht vermindert, wanneer dit risico het grootst. </li><li> Zet de bediende muis om het nest. </li><li> Als het nest is large (&gt; 12 pups), verwijder een deel van de niet geopereerde pups, bij voorkeur de grotere dieren als ze verschillen in grootte, om de concurrentie voor de melk te verminderen. Moederlijke zorg van de geopereerde pups is het beste in de ICR lijn als de worpgrootte is ongeveer 9 pups. </li><li> Voor pijnbestrijding, toedienen Buprenorfine (0,75 mg / kg lichaamsgewicht) subcutaan eenmaal per dag gedurende de eerste postoperatieve dagen, met een insulinespuit (300 pl, 30 G). Een geschikt volume voor onderhuidse toediening is 30-50 pl. In neonatale muizen vocalisatie en agitatie goede indicatoren van pijn. </li><li> Voer een dagelijkse onderzoek van de gewonde muizen met behulp van een scoreblad voor voeding, lichaamsgewicht, uitdroging, pijn, wondgenezing, urineretentie en infectiestatus evalueren. Volgens de score verkregen, hebben speciale zorg, zoals injecties van een steriele pediatrische voeding-oplossing (tabel 1 # 18) in het geval van abnormale voeding. Het scoreblad ook0; definieert humaan eindpunt criteria. Een moeder die de gewonde pups niet verwerpt is de beste verzorger. </li><li> In het uitzonderlijke geval van blaas dysfunctie, voeren de blaas massage twee keer per dag totdat functie wordt hersteld. Dit gebeurt door de muis in liggende positie in de ene hand en masseren van de onderbuik zachtjes in een rostro-caudaal vingertop. </li></ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

In dit artikel worden de procedures voor een clip-gegenereerde SCC letsel bij P1 muizen worden beschreven. Dezelfde procedure kan ook worden uitgevoerd in een latere fase. Compressie verwondingen werden met succes uitgevoerd bij P5, P7, P9 en P12 (Züchner, et al., Manuscript in voorbereiding). Bij alle postnatale fase, wordt algemene anesthesie verkregen met isofluraan verdampt in zuivere zuurstof, maar de verdoving resultaat is sterk afhankelijk van de leeftijd. In eerste pogingen tot P1-P4, voordat de plaatselijke verdoving werd in het protocol, was het moeilijk om een ​​diepe en verlengde sedatie verkrijgen door een smalle dosis-effect window tussen onvoldoende sedatie en overdosis. Daarnaast is bezorgdheid met betrekking tot een neurotoxisch effect van isofluraan in pasgeboren dieren verhoogd 27-30. Een combinatie van isofluraan en de plaatselijke verdoving Bupivacaine resulteert in een diepere en meer stabiele anesthesie terwijl het toelaten van een isofluraan dosis reductie met een factor 2-3. Verschillende soorten anesthesia beschreven neonatale knaagdieren, waaronder cryoanesthesia 31,32, maar één potentiële ongemak van cryoanesthesia is het neuroprotectieve effect (beoordeeld door 33,34), die de vorming kan bemoeilijken van een efficiënt en reproduceerbaar letsel. -Barbituraat gebaseerde anesthesie wordt beschouwd als lagere efficiëntie in neonatale muizen hebben als gevolg van lagere niveaus van serumalbumine en lichaamsvet dan bij volwassenen 35,36. Hoewel vrij invasief en traumatisch, zodra de procedure het sterftecijfer wordt vastgesteld tijdens de operatie is laag. Er zijn echter kritische stappen in de procedure die extra aandacht voor het herstel en de overleving van de geopereerde muizen verbeteren. Een belangrijk punt is voor pups die de beste kans om de operatie te overleven zal selecteren. Wanneer het nest groot is de voedingstoestand van de individuele pups varieert. Naast de onvermijdelijke bloeden die optreedt tijdens de operatie, uitgevoerd pups brengen uurs uit de buurt van de moeder, en ze vaak niet drinken melk voor de volgende ochtend. Het is dus een voordeel pups die reeds een bepaalde hoeveelheid melk in de maag te selecteren. Dit is direct zichtbaar door de buikhuid van P0 tot P7. Tijdens de eerste nacht de geopereerde pup is een groot risico te worden gekannibaliseerd door de moeder. Tijdens de initiële ontwikkeling van dit model meer dan de helft van de geopereerde muizen misten de volgende ochtend, met duidelijke tekenen van bloed in de kooi. Necrophagy, kannibalisme en kindermoord bij knaagdieren zijn onderzocht tientallen jaren 37-40. In deze studie werd kannibalisme eenmaal getuige, maar werd beschouwd als een meer waarschijnlijke verklaring dan Necrophagy omdat de pups die werden aan de kooi kenmerkend waren in zo&#39;n goede staat dat natuurlijke dood tijdens de nacht leek onwaarschijnlijk. Dit leidde tot het idee om een ​​omkeerbare farmacologisch middel zoals Diazepam angst en agressiviteit i verminderenn de moeder (beoordeeld door 41). Intraperitoneale injectie van diazepam sterk verbeterde de situatie vallen mortaliteit gedurende de eerste nacht meer dan 60% tot minder dan 20%. Het verminderen van worpgrootte door het ruimen en het verstoren van de kattenbak zo weinig mogelijk volgende postoperatieve terugkeer zijn bijkomende elementen die kunnen profiteren van de geopereerde dieren. Echter, waardoor alleen bediend pups met de moeder is niet gunstig. De beste balans tussen gebruikt / niet geopereerde pups kan variëren afhankelijk van de lijn, maar voor ICR en SCID-ICR-muizen verlaten 4-5 bediend pups (letsel of sham) samen met 3-4 geopereerde pups gaf de beste resultaten. In algemene zin is de belangrijkste beperking van deze neonatale SCI model is dat de neonatale ruggenmerg verschilt in meerdere opzichten van de volwassen ruggenmerg, en kan dus niet experimentele resultaten die vergelijkbaar zijn met die verkregen uit volwassen SCI modellen leveren. Dergelijke verschillen omvatten totale omvang envolume van het ruggenmerg, celgetal, ondervertegenwoordigd specifieke celtypen zoals oligodendrocyten, onrijpe immuunsysteem en onvolwassen neuronale circuits. Conclusies uit experimenten op dit model moeten daarom zorgvuldig worden overwogen. Anderzijds is het model relevant voor de relatief minder onderzochte scenario pediatrische SCI. Bovendien is de schijnbare zwakheid met betrekking tot volwassen SCI modellen is een potentiële kracht omdat de opheldering van mechanismen die plasticiteit, hoewel minimaal bestaande in het volwassen ruggenmerg, kan een therapeutisch substraat vertegenwoordigen als hersteld kunnen toestaan. Het is denkbaar dat herstel van neonatale of embryonale voorwaarden kan worden uitgevoerd door implantatie van minder ontwikkelde cellen of weefsel of door behandeling met reagentia die de volwassen weefsel met eerdere ontwikkelingskenmerken veroorzaken. Gebruik enzymen perineuronal netten elimineren is een voorbeeld van de laatste aanpak 42,43. <p class=&quot;Jove_content&quot;&gt; Een belangrijke kwestie bij de vaststelling van een diermodel voor SCI is een gestandaardiseerde letsel te verkrijgen. Dit is een belangrijk aspect dat in meerdere SCI modellen heeft gericht is, bijvoorbeeld doorsnijding, hemisectie, kloppers, ballon compressie, tangen verbrijzeling, statisch gewicht compressie, enz. Met betrekking tot de invloed apparaten, de inspanningen in deze richting hebben geleid tot SCI modellen in volwassen knaagdieren waarbij meerdere parameters van het effect zoals snelheid, kracht en duur kan worden gemanipuleerd (overzicht door 44). Een andere benadering, waarbij minder apparatuur, biedt werk aan een wijziging van het Kerr-Lougheed aneurysmaclip 45,46. Deze 2 benaderingen zijn complementair als de impactor bootst een contusie letsel, terwijl de clip bootst een compressie letsel met een zekere mate van gelijktijdige ischemie. Vanwege de aanzienlijke omvang beperkingen en grotere kwetsbaarheid van neonatale muizen, de hogere sterfte langere operaties alsmede de kosten van ontoping kleinere schaal apparatuur werd gekozen om een ​​clip-gegenereerde compressie te ontwikkelen in plaats van een-impactor gegenereerd kneuzing aanpak. Dit werd bewerkstelligd door het aanpassen van een commercieel verkrijgbare aneurysma mini-clip om de grootte van de wervelkolom van neonatale muizen 1 tegemoet. Toevoegen van een stop verzekert een gestandaardiseerde compressie breedte, en zolang de spanning van de klem comprimeert tot de grens van de stop, moet de kracht van de druk in de statische fase bij minimale breedte variëren weinig. Wat niet gestandaardiseerd is de snelheid van de druk tijdens de dynamische fase, aangezien dit zal variëren terwijl de stapel spanning verandert gedurende de levensduur. Aangezien de statische fase van de compressie veel langer dan de dynamische fase duurt en er helemaal niet zeker dat het ruggenmerg weefsel oefent veel als een tegenkracht tegen de mini-clip blades, is het waarschijnlijk dat de ernst van schade meest afhankelijk de statische fase. Dit is echter nog worden getest. Letselernst hangt waarschijnlijk af van meerdere factoren, waaronder de statische compressiekracht en duur, de snelheid van de compressie en decompressie, de positie van de mini-klem, en het aantal compressies uitgevoerd op dezelfde locatie. Zo zou combinatorische variatie van deze parameters leiden tot het genereren van een spectrum schade ernst van zwak tot ernstig. Ondanks de mogelijke variabiliteit in ons eerder gepubliceerde studie 1 verkregen we consistente resultaten op histologische, fysiologische en gedragsmatige niveaus, zodat er weinig te suggereren dat aanvaardbaar normalisatie is moeilijk te bereiken. We merken dat in deze studie gebruikte we meerdere methoden validatie op elk niveau, inclusief gedragstesten zoals lucht-stepping zie figuur 5. In deze neonatale SCI model spaart de verwonding een bepaald deel van axonen en verschaft daardoor een gunstige situatie voor het opwekken adaptieve plasticiteit via re-modeling gespaard verbindingen en de vorming van nieuwe circuits. Aangezien de neonatale muis goed geschikt voor onderzoek door vele experimentele methoden, is het mogelijk om dit model voor functioneel herstel en adaptieve plasticiteit met een geïntegreerde benadering, zoals gedragstesten, retrograde en anterograde axonale tracing, immunohistochemie, elektrofysiologie en hoge bestuderen -throughput optische registratiemedium 1. Als voorbeeld hebben we voordeel van deze geïntegreerde benadering van netwerk hermodelleren aangetoond op het niveau van specifieke aflopend inputs met high-throughput calcium beeldvorming in ex vivo wholemount preparaten van de hersenstam en ruggemerg 1. Dit kan verder worden geduwd door het gebruik van neuro-optogenetic en optogenetic farmacologie tools om de herinrichting van synaptische verbindingen tussen specifieke subpopulaties van spinale neuronen te beoordelen.

Gedurende het laatste decennium hebben toenemende bewijzen verkregen uit verschillende modellen voor ruggenmergletsel (RWL) aangetoond dat ruggenmergnetwerken zich spontaan kunnen reorganiseren om bij te dragen aan functioneel herstel1-9. Adaptieve plasticiteit is daardoor een belangrijk onderwerp geworden in RWL-onderzoek. Er is aangetoond dat plasticiteit hergroei van gespaarde axonen, uitlokken van nieuwe axonen collaterals en de vorming van nieuwe synaptische verbindingen omvat. Veel van deze kennis is verkregen uit gedrags- of anatomische studies bij volwassen dieren. Een belangrijke beperking van studies met volwassen ruggenmergen is de moeilijkheid om hoogdoorvoer fysiologische beoordeling uit te voeren, wat gemakkelijker is bij neonatale preparaten1. Een groot verschil is dat gehele ex vivo preparaten van het volwassen hersenstammen en ruggenmerg een lage levensvatbaarheid hebben. Een ander verschil is dat volwassen ruggenmergweefsel meer ondoorzichtig is voor licht omdat het dikker en gemyelineerd is. Hoewel recente vorderingen in in vivo beeldvorming (zie bijvoorbeeld, 10-12) deze problemen gedeeltelijk kunnen overwinnen, is de mogelijkheid om hoogdoorvoer beeldvorming uit te voeren op elke gewenste dorsoventrale diepte op meerdere locaties langs een gegeven hersenstammen-ruggenmerg preparaat momenteel alleen haalbaar bij neonaten. De onvolgroeide toestand van axonenmyelinisatie in het neonatale ruggenmerg vergemakkelijkt hoogdoorvoer ex vivo optische opname, waardoor een dynamische beoordeling van functionele synaptische verbindingen mogelijk is13-17. In combinatie met genetisch gecodeerde calcium reporters en optogenetische stimulatie en farmacologie gereedschappen kunnen optische benaderingen bijdragen aan een dieper begrip van de mechanismen die ten grondslag liggen aan adaptieve plasticiteit.
Naar schatting treft tussen de 1-10% van alle ruggenmergletsels zuigelingen en kinderen18-22. In tegenstelling tot volwassen RWL is de pathogenese en potentieel voor spontaan herstel bij pediatrisch RWL minder bestudeerd. Het gebruik van een neonataal RWL-model kan daarom meer inzicht bieden in pediatrisch RWL en bijdragen aan een beter begrip van de pathogenetische en herstelmechanismen die betrokken zijn. Bovendien wordt aangenomen dat post-RWL plasticiteit die functioneel herstel in het volwassen ruggenmerg ondersteunt, ten minste gedeeltelijk dezelfde mechanismen betreft die de ontwikkeling van het centrale zenuwstelsel regelen, zoals axonengroei, vertakking en vorming van nieuwe synapsen23-26. Het gebruik van een neonataal RWL-model zou dus belangrijke inzichten kunnen bieden in mechanismen die ook in het volwassen ruggenmerg actief zijn, of die potentieel opnieuw kunnen worden ingesteld in het volwassen ruggenmerg (bijvoorbeeld door implantatie van foetale cellen of weefsel of van weefsel geconstrueerd de novo uit pluripotente stamcellen) om herstel te vergemakkelijken.
De neonatale muis biedt dus een platform voor een integratieve, multi-methodologische benadering van het onderzoek naar adaptieve plasticiteit na ruggenmergletsel, waarbij een combinatie van gedrags-, fysiologische, anatomische, moleculaire en genetische methoden gemakkelijk kan worden toegepast. Het vaststellen van gestandaardiseerde neonatale letselmodellen is een belangrijke stap in het implementeren van dergelijke studies.

<table><tbody><tr><td>Plastic syringe (30 of 50&nbsp;ml)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Plastic Petri dish (150 x 25&nbsp;mm)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fortec isofluraandamp; vaporizer</td><td>Cyprane</td><td></td><td>We gebruiken een oud apparaat dat niet meer wordt geproduceerd, bekijk de link voor een nieuwer apparaat</td></tr><tr><td>Yasargil tijdelijk aneurysma mini-clip</td><td>&AElig;sculap</td><td>FE681K</td><td></td></tr><tr><td>Fijn-boorgepolijst polyethyleen buis ID 0.58&nbsp;mm, OD 0.96&nbsp;mm</td><td>Smiths Medical</td><td>800/100/200</td><td></td></tr><tr><td>Isofluraan (Forene)</td><td>Abbott GmbH &amp; Co. KG</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Marcain (Bupivacaine)</td><td>AstraZeneca</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Insuline spuit 0.3&nbsp;ml 30&nbsp;G x 8&nbsp;mm</td><td>VWR</td><td>80086-442</td><td></td></tr><tr><td>Ultra Fine Micro Knife 5&nbsp;mm snijrand</td><td>Fine Science Tools</td><td>10315-12</td><td></td></tr><tr><td>Extra Fijn Graefe Tang &ndash; 0.5&nbsp;mm Tip</td><td>Fine Science Tools</td><td>1153-10</td><td>Niet echt nodig, vaak zijn de tanden te groot</td></tr><tr><td>Tang SuperGrip Recht</td><td>Fine Science Tools</td><td>00632-11</td><td>Twee tangen zijn nodig</td></tr><tr><td>Spongostan Special 70 x 50 x 1&nbsp;mm</td><td>Ferrosan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vannas Spring Scissors &ndash; 2&nbsp;mm Bladjes Recht</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-03</td><td></td></tr><tr><td>Vario Clip Aanbrengtang</td><td>Aesculap</td><td>FE502T</td><td></td></tr><tr><td>Vicryl 6&ndash;0 (Ethicon)</td><td>Johnson and Johnson</td><td>J105G</td><td></td></tr><tr><td>Diethrich micro naaldhouder</td><td></td><td>11-510-20</td><td></td></tr><tr><td>Temgesic (buprenorfine)</td><td>Schering-Plough</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stesolid (diazepam)</td><td>Actavis</td><td></td><td>Ook bekend als Valium</td></tr><tr><td>Pedamix</td><td>Fresenius Kabi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Klorhexidinsprit (chlorhexidine gluconate)</td><td>Fresenius Kabi</td><td>D08A C02</td><td></td></tr></tbody></table>

een neonatale mouse spinal cord injury compressie model

A Neonatal Mouse Spinal Cord Compression Injury Model

Ruggenmergletsel (SCI) veroorzaakt meestal verwoestende neurologische stoornissen, met name door schade aan vezels afdalen van de hersenen naar het ruggenmerg. Een belangrijke huidige gebied van onderzoek is gericht op de mechanismen van adaptieve plasticiteit die spontane of geïnduceerde functioneel herstel na SCI ten grondslag liggen. Spontane functioneel herstel is gemeld grotere vroeg in het leven te zijn, het verhogen interessante vragen over hoe adaptieve plasticiteit verandert als het ruggenmerg zich ontwikkelt. Het onderzoek van deze dynamische vergemakkelijken, hebben we een SCI model in de neonatale muis ontwikkeld. Het model heeft relevantie voor pediatrisch SCI, die te weinig bestudeerd. Omdat neurale plasticiteit in het volwassen impliceert een aantal van dezelfde mechanismen als neurale plasticiteit in het begin van het leven 1, kan dit model mogelijk wel enige relevantie ook voor volwassen SCI. Hier de gehele procedure beschrijven we voor het genereren van een reproduceerbare ruggenmerg compressie (SCC) schade in de neonatale muisal postnatale (P) dag 1. SCC wordt bereikt door het uitvoeren van een laminectomie op een bepaald ruggenmergniveau (hier beschreven thoracale niveaus 9-11) en vervolgens met behulp van een gemodificeerde Yasargil aneurysma mini-clip snel comprimeren en decomprimeren van het ruggenmerg . Zoals eerder beschreven, kan de benadeelde neonatale muizen worden getest afwijkend gedrag of opgeofferd ex vivo fysiologische analyse van synaptische connectiviteit gebruik elektrofysiologische en zeer snelle optische opnametechniek 1. Eerdere en lopende onderzoeken met gedrags- en fysiologische beoordeling hebben een dramatische, acute verminderde motiliteit achterbeen gevolgd door een volledig functioneel herstel binnen 2 weken, en het eerste bewijs van veranderingen in de functionele schakelingen op het niveau herkende aflopend synaptische verbindingen 1 getoond.

Ruggenmergcompressie schade en verlies van functie Zoals eerder beschreven, door het optimaliseren van de preoperatieve, operatieve en post-operatieve procedures, kan een reproduceerbare compressie SCI model in de neonatale muis worden verkregen 1. De polyethyleen stop geplaatst op een blad van de clip (Figuur 2B en C) voorkomt dat de volledige sluiting van de clip en houdt de inter-blade afstand constant op ongeveer 230 urn. Het omkeren van de oriëntatie van het fragment tussen de twee compressies resulteert in een symmetrische letsel, zoals beoordeeld door histologische gevolgen (figuur 5A en 1). Onmiddellijk na de mini-clip te verwijderen, de gecomprimeerde ruggenmerg weefsel wordt donkerder als gevolg van hemorragische kneuzingen en oedeem. Observatie van seriële secties van de gewonde ruggenmerg gekleurd voor Eosine en Hematoxylin al op een dag eenN a letsel onthult geleidelijke achteruitgang van het weefsel bij het ​​naderen van de laesie epicentrum (Figuur 5A). De aanwezigheid van holten intraspinale of bloed in de laesie is niet ongebruikelijk. Gedragsbeoordeling, bijvoorbeeld door het volgen achterbeen trajecten onder niet-gewichtdragende omstandigheden enkele uren na de operatie, toont een dramatische verslechtering van achterbeen motiliteit in SCC verwonde muizen vergeleken met sham controlemuizen waarbij slechts een laminectomie wordt uitgevoerd (Figuur 5B en 1) . Deze test kan worden herhaald tot de muis is in staat om andere gedragstesten die extra haar eigen gewicht 1 uitvoeren. Sterfte en herstel na een operatie Intra-operatieve sterfte is vooral te wijten aan apneu en hartstilstand als gevolg van de hoge concentratie van isofluraan die nodig is om voldoende Anesthesi bereikeneen. De invoering van de plaatselijke verdoving Bupivacaine in de chirurgische protocol maakt verlaging van de isofluraan concentratie en daardoor vermindert aanzienlijk het sterftecijfer. In een recente experimentele serie met inbegrip van meer dan 20 dieren, het intra-operatieve mortaliteit was nihil. Daarentegen wordt postoperatieve overleving vooral beïnvloed door aanvaarding van de geopereerde muizen door hun moeder. Een significante verbetering opgetreden bij angst en agressiviteit werd verminderd door het leveren van een enkele injectie van diazepam (ip 8 g / kg lichaamsgewicht) aan de moeder, voordat de werking muizen het strooisel 1. Acceptatie en postoperatief herstel van de geopereerde muizen kan worden gecontroleerd door de aanwezigheid van melk in de maag. De maag van een P1-P7 muis die dronken melk heeft duidelijk wit en zichtbaar door de buikhuid (figuur 3). Vergelijking van voeden in werking, sham controle en geopereerde muizen die nuttig is voor de beoordeling van de voedingstoestand van verwondend muizen. Beoordeling van de groei van bediende versus geopereerde muizen blijkt dat ondanks een bescheiden gewichtsverlies tijdens de eerste postoperatieve dagen, de groeicurve van muizen gebruikt normaliseert snel daarna (figuur 6). Sterfte ten gevolge blaasstoornis of infectie nooit in muizen onderzocht zolang 7 weken waargenomen. <table border="1"><tbody><tr><td> Nummer in Fig. 2 </td><td> Naam </td><td> Fabrikant / Provider </td><td> Referentie # </td><td colspan="3"> Link </td><td> Commentaar </td></tr><tr><td> 1 </td><td> Plastic injectiespuit (30 of 50 ml) </td><td></td><td></td><td colspan="3"></td><td></td></tr><tr><td> 2 </td><td> Plastic petrischaal (150 x 25 mm) </td><td></td><td></td><td colspan="3"></td><td></td></tr><tr><td> 3 </td><td> Fortec isofluraan vaporizer </td><td> Cyprane </td><td></td><td colspan="3"> http://www.mssmedical.co.uk/products/new-vaporisers/ </td><td> We gebruiken en oude apparaat uit productie, check de link voor nieuwere apparaat </td></tr><tr><td> 4a </td><td> Yasargil tijdelijke aneurysma mini-clip </td><td> Aesculap </td><td> FE681K </td><td colspan="3"> http://www.aesculapusa.com/assets/base/doc/DOC697_Rev_C-Yasargil_Aneurysm_Clip.pdf </td><td></td></tr><tr><td> 4b </td><td> Fijne boring polyethyleen capillaire buis ID 0,58 mm, OD 0,96 mm </td><td> Smiths Medical </td><td> 800/100/200 </td><td colspan="3"> http://www.smiths-medical.com/industrialproducts/8/39/ </td><td></td></tr><tr><td> 5 </td><td> Isofluraan (Forene) </td><td> Abbott GmbH &amp; Co. KG </td><td></td><td colspan="3"> http://www.life-sciences-europe.com/product/forene-abbott-gmbh-wiesbaden-group-narcotic-germany-west-2001-1858.html </td><td></td></tr><tr><td> 6 </td><td> Marcain (Bupivacaïne) </td><td> AstraZeneca </td><td></td><td colspan="3"> http://www.astrazeneca.co.uk/medicines01/neuroscience/Product/marcaine </td><td></td></tr><tr><td> 7 </td><td> Insuline spuit 0,3 ml 30 G x 8mm </td><td> VWR </td><td> 80086-442 </td><td colspan="3"> https://us.vwr.com/store/catalog/product.jsp?product_id=4646138 </td><td></td></tr><tr><td> 8 </td><td> Ultra Fine Micro Knife 5 mm cutting edge </td><td> Fine Science Tools </td><td> 10.315-12 </td><td colspan="3"> http://www.finescience.de/katalog_ansicht.asp?Suchtyp= Kat &amp; suchkatalog = 0019900000 &amp; reloadmenu = 1 </td><td></td></tr><tr><td> 9 </td><td> Extra Fine Graefe Forceps - 0,5 mm Tip </td><td> Fine Science Tools </td><td> 1153-1110 </td><td colspan="3"> http://www.finescience.de/katalog_ansicht.asp?Suchtyp= Kat &amp; suchkatalog = 0055700000 &amp; reloadmenu = 1 </td><td> Niet echt noodzakelijk, vaak de tanden te groot </td></tr><tr> &lt;td&gt; 10 </td><td> Tang SuperGrip Straight </td><td> Fine Science Tools </td><td> 00.632-11 </td><td colspan="3"> http://www.finescience.de/katalog_ansicht.asp?Suchtyp= Kat &amp; suchkatalog = 0053500000 &amp; reloadmenu = 1 </td><td> Twee forceps noodzakelijk </td></tr><tr><td> 11 </td><td> Spongostan Special 70 x 50 x 1 mm </td><td> Ferrosan </td><td></td><td colspan="3"></td><td></td></tr><tr><td> 12 </td><td> Vannas Spring Scissors - 2 mm Blades Straight </td><td> Fine Science Tools </td><td> 15.000-03 </td><td colspan="3"> http://www.finescience.de/katalog_ansicht.asp?Suchtyp= Kat &amp; suchkatalog = 0012800000 &amp; reloadmenu = 1 </td><td></td></tr><tr><td> 13 </td><td> Vario Clip toepassen Forceps </td><td> Aesculap </td><td> FE502T </td><td colspan="3"> http://www.aesculapusa.com/assets/base/doc/DOC697_Rev_C-Yasargil_Aneurysm_Clip.pdf </td><td></td></tr><tr><td> 14 </td><td> Vicryl 6-, 0 (Ethicon) </td><td> Johnson en Johnson </td><td> J105G </td><td colspan="3"></td><td></td></tr><tr><td> 15 </td><td> Diethrich micro naaldhouder </td><td></td><td> 11-510-20 </td><td colspan="3"> http://trimed-ltd.com/Products/Suture-Instruments/Micro-Needle-Holders-With-Tungsten-Carbide-Inserts/Ref-11-29.html </td><td></td></tr><tr><td> 16 </td><td> Temgesic (buprenorfine) </td><td> Schering-Plough </td><td></td><td colspan="3"></td><td></td></tr><tr><td> 17 </td><td> Stesolid (diazepam) </td><td> Actavis </td><td></td><td colspan="3"></td><td> Ook bekend als Valium </td></tr><tr><td> 18 </td><td> Pedamix </td><td> Fresenius Kabi </td><td></td><td colspan="3"> http://www.helsebiblioteket.no/retningslinjer/pediatri/mage-tarm-lever-ern%C3%A6ring/parenteral-ern%C3%A6ring </td><td></td></tr><tr><td> 19 </td><td> Klorhexidinsprit (chloorhexidine gluconaat) </td><td> Fresenius Kabi </td><td> D08A C02 </td><td colspan="3"> http://www.felleskatalogen.no/medisin/klorhexidinsprit-fresenius-kabi-klorhexidinsprit-farget-fresenius-kabi-fresenius-kabi-560639 </td><td></td></tr></tbody></table> Tabel 1. Lijst van apparatuur en toebehoren voor het genereren van een clip-gedreven compressie van het ruggenmerg letsel bij een neonatale muis. <img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/53498/53498fig1.jpg" /> Figuur 1. Schematische voorstelling van de anesthesie setup. Dit schema geeft de verdoving setup ontworpen voor de neonatale muis, met een slaap kamer voor de eerste verdoving en een neus masker apparaat voor de voortzetting van de anesthesie tijdens de operatie. <img alt="figuur 2" src="/files/ftp_upload/53498/53498fig2.jpg" /> Figuur 2. Principal gereedschappen en compressie clip. (A) gereedschap gebruikt tijdens de procedure. De nummers komen overeen met de annotatie die in tabel 1. (B en C) A Yasargil tijdelijke aneurysma mini-clip met de punt van elk blad handmatig bijgesneden tot ongeveer 150 urn dik. Een stop van een stuk polyethyleen buis (tabel 1) wordt geplaatst op een van de bladen volledige sluiting van de klem te voorkomen. Schaal bar: 2 mm. App: clip applicator (# 12 in A); St:. Stopper <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53498/53498fig2large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a> <img alt="figuur 3" src="/files/ftp_upload/53498/53498fig3.jpg" /> Figuur 3. Landmark voor preoperatieve beoordeling van spinale niveau neonatale ICR muis. (A) Zij mening van een P1 ICR muis met witte melk in de s<html> tomach. Het rostrale deel van de maag komt overeen met T12-T13 spinale niveau. (B) P1 ICR muis onder narcose in een buikligging. Hoewel moeilijker te visualiseren dan (A), de maag gevuld met melk herkenbaar. De rostrale deel van de maag geeft T12-T13 spinale niveau. Schaal bars: 0,5 cm. <img alt="figuur 4" src="/files/ftp_upload/53498/53498fig4.jpg" /> Figuur 4. Dorsale laminectomie. (A) Dissectie van paravertebrale spieren. Merk op dat op deze leeftijd het spinale proces is onderontwikkeld. (B) Transversale afsnijden van de lamina met dunne schaar. (C) Invoering van een blad van een dunne tang tussen de lamina en de dura. De entry point wordt weergegeven door de pijlpunt. (D) verwijderen van de lamina. Schaal bar: 2 mm. bestanden / ftp_upload / 53498 / 53498fig5.jpg &quot;/&gt; Figuur 5. Histologische en gedragsmatige uitkomsten na compressie van het ruggenmerg letsel bij P1. (A) Eosine en hematoxyline kleuring in het ruggenmerg secties van een gewonde muis (1 dag na blessure) op verschillende afstanden van de blessure epicentrum. (B) Vertegenwoordiger sporen van voorpoot en achterbeen trajecten waargenomen 6 uur na een verwonding of na een schijnvertoning controle laminectomie. Sporen op de top vertegenwoordigen trajecten vanuit een zijaanzicht van het dier. Sporen onderaan vertegenwoordigen trajecten vanuit het ventrale aspect van de dieren. Zie ook 1. Schaal bar: 250 pm. DH: dorsale hoorn; L, links; R: rechts; SCC: ruggenmergcompressie; VH:. Ventrale hoorn <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53498/53498fig5large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a> <img alt = &quot;Figuur 6&quot; src = &quot;/ files / ftp_upload / 53498 / 53498fig6.jpg&quot; /&gt; Figuur 6. Vergelijkende groeicurven. Histogram toont de gewichtstoename van ongeopereerde en SCC gewond muizen van postnatale dag 1 tot postnatale dag 9.

Dit artikel beschrijft een methode voor het genereren van een reproduceerbare spinale cord compressie letsel (SCI) in de neonatale muis. Het model biedt een voordelige platform voor het bestuderen van mechanismen van adaptieve plasticiteit die ten grondslag liggen aan spontane functionele herstel.

Een Neonatale Mouse Spinal Cord Injury Compressie Model

Spinal cord injury (SCI) typically causes devastating neurological deficits, particularly through damage to fibers descending from the brain to the spinal ...

Het algemene doel van deze procedure is het reproduceerbaar veroorzaken van een compressieletsel van het ruggenmerg bij een pasgeboren muis. Dit wordt bereikt door de muis eerst diep onder narcose te brengen en vervolgens een dorsale laminectomie uit te voeren om het ruggenmerg bloot te leggen.En tot slot door het veroorzaken van het compressieletsel. Onlangs hebben we een neonataal muismodel voor ruggenmergletsel ontwikkeld en we hebben aangetoond dat neonatale muizen een verbazingwekkende mate van adaptieve plasticiteit vertonen. Het bestuderen van dit mechanisme dat ten grondslag ligt aan het herstel kan belangrijke inzichten verschaft, die gebruikt kunnen worden bij de behandeling van ruggenmergletsel.In deze video demonstreren we hoe een compressieletsel van het ruggenmerg kan worden veroorzaakt bij een muis van één dag oud. Deze chirurgische procedure omvat anesthesie, laminectomie en twee epidurale compressies met behulp van clips. Voorbereiding op de operatie.De operatie wordt uitgevoerd onder een stereomicroscoop. Plaats een warmtemat onder de microscoop. Het is cruciaal om de pup warm te houden om plotselinge dood tijdens de operatie te voorkomen.Plaats een chirurgisch laken of een groot vel schoon, zacht laboratoriumpapier over het warmtekussen. Bereid voor de presurgische analgesie een insulinespuit voor (0,3 milliliter, 30 gauge), gevuld met het lokale anestheticum Marcaine, verdund met steriele PBS tot een eindconcentratie van 2,5 milligram per milliliter. Gebruik voor de huidincisie, spierverwijdering en laminectomie een micronmes, fijne pincetten en fijne iridectomieschaaren.Let op dat we hier ook een pincet gebruiken waarvan we de punten hebben verbogen om tanden te vormen. Deze werken beter dan commercieel verkrijgbare getande pincetten omdat de tanden zeer klein moeten zijn. Gebruik voor de compressie van het ruggenmerg een speciaal aangepaste Yasargil Temporary Aneurysm Miniclip, die we later zullen beschrijven.Een kort stukje plastic capillaire buis is ook nodig om een stop te maken die voorkomt dat de clip volledig sluit, evenals een clip-applicator voor het plaatsen van de clip. Gebruik voor het hechten een naaldvoerder en een klein schaartje om de draad door te knippen. Verdun voor de pijnbehandeling Temgesic in steriele PBS tot 0,03 mg/mL.Het ruggenmergletsel wordt veroorzaakt door compressie met een klem, waarbij een Yasargil Temporary Aneurysm Miniclip wordt gebruikt. Voor gebruik moet de klem mechanisch worden aangepast door de dikte van de bladen met een slijpsteen te verminderen tot 150 micrometers. Vlak voor de operatie wordt een kort stukje plastic slangetje afgesneden en over een van de klembladen geplaatst.De slang dient als stop om te voorkomen dat de clip volledig sluit. Anesthesie en analgesie. Voor gasanesthesie gebruiken we een suprane-vaporisator die is aangesloten op een zuurstoftank.Isoflurane is het anestheticum dat wordt verdampt in zuivere zuurstof. Om het mengsel van Isoflurane en zuurstof aan de muis toe te dienen, moet u een neusmasker maken dat is aangepast aan neonaten. Neonatale muizen zijn zo klein dat het masker kan worden gemaakt van de punt van een spuit, die dient als inlaat voor de plastic slang die is verbonden met de uitlaat van de verdamper.Boor aan de zijkant van het masker een klein gaatje om een afvoerslang aan te sluiten die eindigt in een gereguleerde vacuümpomp met een opvangeenheid, of simpelweg in een zuurkast. Maak een overdrukkamer voor anesthesie met behulp van een plastic petrischaal van 150 bij 25 milliliter. Maak aan één zijde een gat dat groot genoeg is voor de kop van de muis.Maak aan de tegenovergestelde zijde twee kleinere gaten met dezelfde diameter als de plastic slang. Maak tot slot bovenaan de schaal een evacuatiegat dat kleiner is dan de overige gaten. Knip de punt van een 250 µL pipetpunt af en plaats deze in dit laatste gat.De pipetpunt fungeert als connector voor de vacuümbuis die is aangesloten op een vacuümapparaat dat is ingesteld op een lichte onderdruk. Bevestig het masker met Plasticine net binnen het gat voor de kop van de muis. Bevestig de plastic slang met tape of Plasticine aan het plafond van de kamer, waarbij u ervoor zorgt dat de slangen goed gepositioneerd zijn in de juiste gaten.Plaats de kamer op het chirurgische laken onder de microscoop. Het gehele systeem is in dit schema weergegeven. Een driewegkraan is geplaatst op de uitlaat van de vaporizer.Hier is het pad naar de slaapkamer open, terwijl het pad naar het masker geblokkeerd is, waardoor de muis in de slaapkamer kan worden geplaatst om de sedatie te initiëren. Door de driewegkraan naar rechts te draaien, kan het gas naar het masker stromen en wordt het pad naar de slaapkamer geblokkeerd. In deze configuratie kan de muis naar het masker worden overgebracht.Gaslekkage wordt door middel van vacuüm uit de overloopkamer verwijderd. Selecteer een muizenwelp die onlangs melk heeft gedronken, wat zichtbaar is aan de witte kleur door de huid. Plaats de welp in de slaapkamer en voeg 4% verdampt Isoflurane toe om een snelle sedatie te bereiken.Plaats de pup in het masker. Positioneer de snuit van de muis zorgvuldig diep in het masker om voldoende blootstelling aan het anesthesiegas te garanderen. Draai aan de driewegkraan om het gas naar het masker te leiden.Injecteer subcutaan 50 µL Marcaine met een concentratie van 2,5 mg/mL op de gewenste chirurgische plaats. Let erop dat u niet te diep injecteert, aangezien bloedvaten gemakkelijk kunnen worden geraakt en de introductie van Marcaine in een vat letaal is. Veeg het overtollige Marcaine af met een klein steriel kompres.Dorsale laminectomie. Verlaag de isofluraanconcentratie naar één tot twee procent. Doorboor na enkele minuten de huid met een micro-mesje en maak een transversale opening van acht tot negen millimeter door de huid voorzichtig in rostrale-caudale richting opzij te trekken.Een transversale opening is veel praktischer en biedt betere laterale toegang voor het uitvoeren van de laminectomie. Retraheer de randen van de huidincisie van het onderliggende weefsel door stukjes spongistatin subcutaan rostraal en caudaal van de incisie in te brengen. Snijd de prevertebrale spieren door met een dunne schaar om de wervelkolom bloot te leggen.Houd er rekening mee dat het spinale proces bij de neonatus niet volledig is ontwikkeld. Bepaal de middellijn en knip de lamina transversaal door met de dunne schaar. Let erop dat u niet te diep knipt, aangezien dit potentieel de dura en zelfs het ruggenmerg kan beschadigen.Plaats voorzichtig één blad van een dunne pincet tussen de lamina en de dura. Pak de lamina vast door de pincet te sluiten en til deze voorzichtig op totdat deze loslaat, waarbij de dura intact blijft. Herhaal deze stap twee tot drie keer om een laminectomie van één tot twee segmenten te verkrijgen.Beheers de bloeding met kleine stukjes spongistatine. Gebruik de dunne pincet als rongeur om bilateraal delen van de facetgewrichten te verwijderen, zodat er voldoende ruimte ontstaat om de gemodificeerde aneurysma-miniclip in het wervelkanaal te plaatsen. Deze stap resulteert vaak in bloedingen die kunnen worden beheerst met kleine stukjes spongistatine.Om de zichtbaarheid te verbeteren is het soms voordelig om te spoelen met warme steriele PBS, 37 °C. Het veroorzaken van de compressieletsel van het ruggenmerg. Open de klem en plaats de bladen aan weerszijden van het ruggenmerg in de ruimtes tussen de facetgewrichten en het merg.Zorg ervoor dat de klembladen diep genoeg zijn ingebracht om het ventrale deel van het ruggenmerg te omvatten. Sluit de clip snel terwijl de applicator op zijn plaats wordt gehouden, om te voorkomen dat de clip naar achteren glijdt. Laat de clip na 15 seconden snel los.Reinig de wond met spongistatin. Om een symmetrische compressie te verkrijgen, worden de klembladen omgedraaid en wordt een tweede compressie van 15 seconden in de tegenovergestelde richting uitgevoerd. Hechten. Verwijder de stukjes spongistatin die aan het begin van de operatie onder de huid zijn geplaatst en sluit de huid met 6.0 hechtingen.Injecteer 0,05 milliliters Temgesic, met een concentratie van 0,03 milligrams per milliliter, subcutaan met een insulinespuit van 30 gauge en plaats de pup in een temperatuurgecontroleerde omgeving bij 30 degrees centigrade gedurende enkele uren. Om agressief maternaal gedrag jegens de geopereerde pup tijdens de eerste nacht na de operatie te verminderen, dient een oplossing van Diazepam, verdund in schoon PBS tot 0,1 milligrams per milliliter, te worden bereid voor intraperitonele injectie bij een dosering van acht grams per kilogram. Resultaten.Zoals te zien is in deze grafiek, zijn zes uur na compressie van het ruggenmerg, op de lagere thoracale niveaus, de achterpoten van de gewonde muizen verlamd, terwijl de voorpoten dat niet zijn. In het geval van de sham-controledieren, die alleen een laminectomie ondergingen, zijn zowel de achterpoten als de voorpoten zeer mobiel. De sectie van het ruggenmerg laat residueel bloed zien op de plaats van het letsel.Daarnaast is het weefsel doorschijnend, wat duidt op weefselverlies, wat vaak enkele dagen later leidt tot de vorming van een caviteit. Conclusie. Na deze video zou u een goed begrip moeten hebben van hoe u een compressieletsel van het ruggenmerg kunt veroorzaken bij een neonatale muis. Het voordeel van het gebruik van neonatale muizen is dat we specifieke methoden kunnen toepassen om adaptieve plasticiteit aan te pakken, die niet kunnen worden gebruikt bij volwassen muizen.Daarnaast biedt het model een platform voor het testen van therapeutische benaderingen, zoals stamceltransplantatie.

a-neonatal-mouse-spinal-cord-compression-injury-model

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Source: Elzat, E. Y. Y., et al., Establishing a Mouse Contusion Spinal Cord Injury Model Based on a Minimally Invasive Technique. J. Vis. Exp. (2022).This video demonstrates the method for inducing a contusion injury at the T9 level spinal cord in a mouse model, using a spinal cord injury coaxial platform. A weight is dropped on the T9 level spinal cord that creates a contusion that immediately causes tissue discoloration and swelling.

Inducing a Spinal Cord Contusion in a Mouse Model Using a Spinal Cord Injury Coaxial Platform

Source: Lakshman, N., et al. A Neurosphere Assay to Evaluate Endogenous Neural Stem Cell Activation in a Mouse Model of Minimal Spinal Cord Injury. J. Vis. Exp. (2018).This video demonstrates the activation and migration of neural stem cells (NSCs) in a mouse spinal cord injury model. To expose the spinal cord, a vertebra from the thoracic region of the spine is removed from an anesthetized mouse. A superficial injury is then created in the white matter of the spinal cord using a bent needle,...

 A Minimal Spinal Cord Injury Model to Study Neural Stem Cell Activation and Migration

Source: Kumar, S., et. al. Mouse Model of Pressure Ulcers After Spinal Cord Injury. J. Vis. Exp. (2019)This video demonstrates a detailed induction of spinal cord injury in mice. The anesthetized mouse is dissected to expose T9-T10 vertebrae, and their spinous processes are removed. The exposed spinal cord is then transected to inflict the injury. The surgical area is then closed, and the mouse is allowed to recover.

Generating a Mouse Model with a Spinal Cord Injury

Dwarslaesie is een traumatische aandoening die ernstige morbiditeit en hoge sterfte veroorzaakt. In dit werk beschrijven we in detail een kneuzing model van dwarslaesie bij muizen, gevolgd door een transplantatie van neurale stamcellen.

Neurale stamceltransplantatie bij Experimentele Contusive Model van Spinal Cord Injury

Modellen van ruggenmergletsel dienen zeer reproduceerbaar te zijn. We tonen aan dat het gekalibreerde forcepscompressiemodel van ruggenmergletsel een gemakkelijk te gebruiken chirurgische methode is voor het genereren van reproduceerbare letsels aan het muisruggenmerg.

Gekalibreerde tang Model van Spinal Cord Injury Compression

Wij introduceren een weefselverplaatsingsgebaseerd contusief ruggenmergbeseringsmodel dat een consequente contusieve ruggengraatbesering in volwassen muizen kan veroorzaken.

Een Weefselverplaatsing-gebaseerde Contusive Spinal Cord Injury Model in Muizen

Dit protocol beschrijft hoe u een nauwkeurige laminectomie voor inductie van stabiele transsectie-type dwarslaesie in het muismodel, met minimale bijkomende schade voor het onderzoek van de dwarslaesie te creëren.

Inductie van volledige transsectie-type ruggenmergletsel bij muizen

Minimaal invasieve technieken en een eenvoudig laboratoriumapparaat verbeteren de reproduceerbaarheid van het ruggenmergletselmodel door operatieve schade aan de proefdieren te verminderen en anatomisch morfologisch onderhoud mogelijk te maken. De methode is de moeite waard omdat de betrouwbare resultaten en reproduceerbare procedure het onderzoek naar de mechanismen van ziekteherstel vergemakkelijken.

Het opzetten van een muiskneuzingsletselmodel op basis van een minimaal invasieve techniek

Het huidige protocol dat het centrale navelstrengsyndroom (CCS) bij muizen simuleert, heeft de herhaalbaarheid verbeterd en de operatieschade aan de proefdieren geminimaliseerd, waardoor de anatomische structuur niet overmatig wordt verstoord. De strategie in deze studie is voordelig omdat het onderzoek naar letselmechanismen mogelijk maakt door consistente resultaten te produceren.

Vaststelling van het Central Cord Syndrome-model in C57BL/6J-muis

Hier wordt een nieuw geautomatiseerd apparaat voor kneuzing van ruggenmergletsel voor muizen gepresenteerd, dat nauwkeurig modellen voor dwarslaesie met verschillende gradaties kan produceren.

Geautomatiseerde impactor voor kneuzingsmodel voor dwarslaesie bij muizen

Leer een reproduceerbaar compressiemodel voor ruggenmergletsel bij neonatale muizen. Deze methode maakt onderzoek naar adaptieve plasticiteit en herstelmechanismen mogelijk voor therapeutische toepassingen.

Een Neonatale Mouse Spinal Cord Injury Compressie Model

Meer video's verkennen