Name: Zoutgehalte-afhankelijke toxiciteit Test van Silver nanocolloïden gebruik van Medaka Eieren (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-18T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 29 s
Description: Leer een nieuwe methode voor het testen van zoutgehalte-afhankelijke toxiciteit van chemicaliën bij aquatische organismen met behulp van medaka-eieren. Deze techniek verbetert ecotoxicologisch onderzoek door hoge doorvoer over verschillende zoutconcentraties.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Wij zijn Ms. Kaori Shimizu en de heer Masaki Takasu van de Graduate School of Life Sciences, Toyo University, dankbaar voor hun technische ondersteuning. Dit project werd ondersteund door onderzoekssubsidies van de Special Research Foundation en Bio-Nano Electronics Research Centre van Toyo University (aan SK); door het Science Research Promotion Fund van de Promotion and Mutual Aid Corporation for Private Schools of Japan (aan SK); door het New Project Fund for Risk Assessments, van het Ministerie van Economische Zaken, Handel en Industrie (aan SK); door een Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research (toekenning 23651028 aan SK); door een Grant-in-Aid for Scientific Research (B) en (C) (toekenning 23310026 en 26340030 aan SK); en door een Grant-in-Aid for Strategic Research Base Project for Private Universities (toekenning S1411016 aan SK) van het Ministerie van Onderwijs, Cultuur, Sport, Wetenschap en Technologie van Japan.

De Japanse medaka gebruikt in deze studie werden humane wijze in overeenstemming met de institutionele richtlijnen van Toyo University behandeld, met inachtneming van de verlichting van leed en ongemak. 1. Silver nanocolloïden (SNCS) <ol><li> Schaf gezuiverd SNCS (20 mg / L -1, 99,99% zuiverheid, deeltje gemiddelde diameter van ongeveer 28,4 ± 8,5 nm gesuspendeerd in gedestilleerd water). </li><li> Valideer de zuiverheid en concentratie van het zilver door inductief gekoppeld plasma massaspectrometrie (ICP-MS) analyse volgens gebruiksaanwijzing 8. De voorbehandeling methode voor het ICP-MS analyses wordt beschreven in hoofdstuk 7. </li></ol> 2. Voorbereiding van de SNC Solutions (mengsels van zilver colloïden en Ag +) met verschillende zoutgehaltes <ol><li> Bereid 60 × ERM bestaande uit 60 g NaCl, 1,8 g KCI, 2,4 g CaCl2 · 2 H 2 O, en 9,78 g MgSO4 · 7H 2 O in 1 L van ultrapure water; breng de pH op 7,0 met 1,25% NaHCO3 in ultrapuur water. </li><li> Roer de ERM-oplossing bij 25 ° C gedurende de nacht. </li><li> Meng SNCS met verdund ERM. Bereid 40 ml van elk SNC-ERM gemengde oplossing. De uiteindelijke concentratie is 10 mg / l -1 van SNCS in verschillende concentraties van ERM (1x, 5x, 10x, 15x, 20x of 30x). </li><li> Stel de pH van de SNC-ERM gemengde oplossing tot 7,0 met 0,625% NaHCO3 in ultrapuur water. pH-instelling van groot belang het bereiden van de SNC-oplossing, omdat Ag + afgifte wordt vergemakkelijkt door zure omstandigheden 9. </li><li> Gebruik AgNO 3 als referentie compound voor SNCS. <ol><li> Meng AgNO 3 met verdunde ERM. Bereid 40 ml AgNO 3 -ERM gemengde oplossing bij een AgNO3 concentratie van 15,7 mg / L -1 (10 mg / l -1 zilver) in verschillende concentraties ERM (1x, 5x, 10x, 15x, 20x of 30x) . Opmerking: Om zilver colloïd giftigheid onderzoeken, AgNO3oplossing, die een bron van oplosbaar zilverzout, wordt gebruikt als referentieverbinding voor SNCS, dat een mengsel van zilver colloïden en oplosbaar zilverzout zijn. </li></ol></li></ol> 3. Medaka Cultuur en Egg Oogsten <ol><li> Haal de medaka (O. latipes) (oranje-rood stam) (60 mannen en 60 vrouwen). </li><li> Cultuur medaka als groepen (20 mannetjes en 20 vrouwtjes als één groep) in 1x ERM in 3 L tanks door een medaka doorstroomsysteem kweeksysteem. <ol><li> Cultuur aan de volgende voorwaarden: pH-bereik van het kweekmedium: 6,2-6,5 licht: donker cyclus: 16: 8 uur temperatuur van het kweekmedium: 24 ± 0,5 ° C osmotische druk van het kweekmedium: 257 mOsm </li></ol></li><li> Voeden medaka op Artemia salina nauplii om 10.00 uur (een keer per dag) en diervoeders een kunstmatige droge vis dieet om 09:00, 11:00, 13:00, 15:00 en 17:00 (vijf keer per dag). <ol><li> Verkrijgen A. salina nauplii. </li> &lt;li&gt; Bereidt 5 L van een 3,0% zoutoplossing in een kunststof beker. </li><li> Voeg 30 g Artemia eieren aan de zoutoplossing in het bekerglas. </li><li> Incubeer de eieren bij 25 ° C gedurende 48 uur met bruisend (4 l / min -1) met behulp van een luchtpomp. </li><li> Na 48 uur, stopt de borrelende. </li><li> Laat de oplossing staan ​​gedurende 5 tot 10 minuten om de gearceerde A. scheiden salina nauplii (onderste deel van de oplossing) van de uitgebroede eieren en eierschalen (bovenste deel van de oplossing). </li><li> Verwijder de bovenste laag van de oplossing door decanteren. </li><li> Filtreer het onderste gedeelte van de oplossing door een zeef met openingen van 283 pm, en verzamel de nauplii die passeren op een net met openingen van 198 pm. </li><li> Voeden de nauplii de medaka binnen 6 uur. </li></ol></li><li> Nadat de vrouwelijke medaka hebben voortgeplant, verwijder de externe ei clusters voorzichtig van organen Vrouwtjes of verzamelen van de eieren van de bodem van het aquarium door een smalle netto (netto maat 5 cm x 5 cm, gatgrootte 0,2 mm x 0,2 mm). </li><li> Spoel het ei cluster met stromend leidingwater gedurende 5 sec. </li><li> Voeg alle van de gespoeld ei clusters 30x ERM-oplossing. </li><li> Verwijder de clusters uit de oplossing na 1 minuut en plaats het ei clusters tussen droog papieren handdoeken en rollen zachtjes. </li><li> Doe de eieren terug in de 30x ERM. </li><li> Selecteer bevruchte eieren onder een stereomicroscoop. </li><li> Place geselecteerd 810 eieren in 1x ERM in zes-well plastic platen met behulp van een tang. </li><li> Incubeer de eieren bij 25 ± 0,1 ° C in een incubator totdat ontwikkelingsstadium 21. (ontwikkelingsstadia van de medaka embryo&#39;s werden gedefinieerd op basis van het werk van Iwamatsu 10.) </li><li> Kies uit bebroede eieren in ontwikkelingsfase 21 onder een dissectie microscoop. </li><li> Spoel geselecteerde eieren met 1x ERM. </li><li> Betreft het gespoeld eieren blootstelling experimenten (hoofdstuk 4). </li></ol> 4. toxiciteit testen van SNCS of AgNO3 </sub&gt; Bij Different ERM zoutgehaltes <ol><li> Spoel medaka eieren (stap 21) driemaal met testoplossing [SNCS (10 mg / l -1) of AgNO 3 (15,7 mg / l -1 als 10 mg / l -1 zilver) bij elke concentratie van ERM (1x, 5x , 10x, 15x, 20x of 30x) bij pH 7]. Als controles worden eieren 1 × tot 30 × ERM bij pH 7. </li><li> Voeg 15 gespoeld eieren tot 5 ml van elke testoplossing in zes-well plastic platen. (Voer de blootstelling experimenten drie keer voor SNC of AgNO 3 toxiciteit testen met behulp van elke testoplossing.) </li><li> Wikkel de platen in aluminiumfolie. </li><li> Incubeer de gewikkelde platen bij 25 ° C in het donker totdat uitgebroed of 14 dagen. </li><li> Let op de blootgestelde eieren elke 24 uur voor biologische veranderingen en dode eieren (figuren 1 en 2). </li><li> Ruil de testoplossingen iedere 24 uur. </li><li> Voeren opmerkingen als volgt. <ol><li> Op dag 6 van de blootstelling, tel de hartslag (per 15 sec) of medaka embryo&#39;s onder een dissectiemicroscoop met een stopwatch (Figuur 3a). </li><li> Op dag 6 van de blootstelling, meet de grootteoogschaduw (diameter) van medaka embryo&#39;s onder een stereomicroscoop met een micrometer (Figuur 3b). </li><li> Op het uitbroeden dag, het meten van de full body lengte van larven onder een dissectie microscoop met behulp van een micrometer (Figuur 3c). </li><li> Tel het aantal blootgestelde eieren die uitkomen in de 14 dagen (Figuur 3d). </li></ol></li></ol> 5. Isolatie van oplosbare Zilver uit SNC Solution, en Silver Analyse <ol><li> Isoleer oplosbaar zilverzout van elke SNC oplossing (een mengsel van zilver colloïden en oplosbaar zilverzout) door filtreren door een membraanfilter 3 kDa bij 14.000 x g en 4 ° C gedurende 10 minuten. Gebruik een 3 kDa membraan filter om oplosbare zilver isoleren van de SNCS, omdat de gerapporteerde gemiddelde diameter van geaggregeerde SNCS in 1x ERM is 67,8 nm 11 and dat van Ag + is 0,162 nm 12; de 3 kDa membraan uitgesloten deeltjes met een diameter van 2 nm of meer 13. </li><li> Meet de zilverconcentratie in 50 pl gefiltreerde oplossing (= de oplosbare zilverconcentratie) met ICP-MS analyse (Figuur 3e) volgens de ICP-MS handleiding 8. De voorbehandeling werkwijze voor de ICP-MS analyses wordt beschreven in hoofdstuk 7. </li></ol> 6. Meting van Silver Bioaccumulatie in Medaka Embryo&#39;s <ol><li> Expose medaka eieren (fase 21) SNCS of AgNO 3 zoals beschreven in hoofdstuk 4. </li><li> Op dag 6 van de blootstelling, chorion verwijderen van het ei (bijv dechorion) door Medaka uitkomen enzym volgens de Medaka Book 14 beschreven protocol. </li><li> Meet de zilveren concentratie van de dechorioned eieren door ICP-MS-analyse op basis van de ICP-MS handleiding 8 (figuur 3f). de voorbehandelingwerkwijze voor de ICP-MS analyses wordt beschreven in hoofdstuk 7. </li></ol> 7. Meting van de Silver Concentratie door ICP-MS Analysis <ol><li> (; Rubriek 1 voor de validatie van de zilveren concentratie) monsters [50 ul van zilver-oplossing toe te voegen; drie dechorionated embryo&#39;s (hoofdstuk 5); of 50 pl gefiltreerde oplossing (punt 5)] een 50 ml Teflon beker. </li><li> Voeg 2,0 ml ultrazuiver salpeterzuur 50 ml bekerglas. </li><li> Verwarm het mengsel op een hete plaat bij 110 ° C tot net voordat deze droogt (ongeveer 3 uur). </li><li> De organische stoffen volledig oplossen, voeg 2,0 ml ultrazuiver salpeterzuur en 0,5 ml waterstofperoxide aan de beker. </li><li> Verwarm het mengsel weer op de hete plaat tot net voordat het droogt (ongeveer 3 uur). </li><li> Los het residu op in 4 ml 1,0% ultrazuiver salpeterzuuroplossing. </li><li> Overdracht 4 ml oplossing voor een centrifugebuis. </li><li> Herhaal 7,6-7,7 maal (in totaal driemaal). Het eindvolume is 12.0ml. </li><li> Meet de zilveren concentratie van het monster (opgelost in 1,0% ultrapuur salpeterzuur) met behulp van ICP-MS analyse volgens de gebruiksaanwijzing 8. <ol><li> Gebruik een interne en een externe standaardoplossing (zie Materials List) om de zilveren concentratie te kwantificeren. De interne en externe standaardoplossing is geaccrediteerd door de Amerikaanse Vereniging voor Laboratory Accreditation (A2LA). Detectielimieten van zilver waren 0,0018 ng / ml -1 (oplossing) en 0,016 ng mg gewicht -1 (embryo lichaam). </li></ol></li></ol>

<ol><li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22OECD+Guidelines+for+the+Testing+of+Chemicals%2C+Section+2+Effects+on+Biotic+Systems%22">OECD Guidelines for the Testing of Chemicals, Section 2 Effects on Biotic Systems</a>. , OECD. Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.oecd-ilibrary.org/environment/oecd-guidelines-for-the-testing-of-chemicals-section-2-effects-on-biotic-systems_20745761">http://www.oecd-ilibrary.org/environment/oecd-guidelines-for-the-testing-of-chemicals-section-2-effects-on-biotic-systems_20745761</a> (2015).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22National+Coastal+Condition+Report%22">National Coastal Condition Report</a>. , Environmental Protection Agency, Office of Water and Office of Research and Development. Washington, DC. (2001).</li>
<li>Sakaizumi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+inorganic+salts+on+mercury-compound+toxicity+to+the+embryos+of+the+Medaka%2C+Oryzias+latipes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Fac.+Sci.+Univ.+Tokyo%22%5BJournal%5D)">Effect of inorganic salts on mercury-compound toxicity to the embryos of the Medaka, Oryzias latipes.</a> J. Fac. Sci. Univ. Tokyo. 14 (4), 369-384 (1980).</li>
<li>Sumitani, K., Kashiwada, S., Osaki, K., Yamada, M., Mohri, S., Yasumasu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Medaka+%28Oryzias+latipes%29+Embryo+toxicity+of+treated+leachate+from+waste-landfill+sites%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Jpn.+Soc.+Waste+Manage.+Exp%22%5BJournal%5D)">Medaka (Oryzias latipes) Embryo toxicity of treated leachate from waste-landfill sites.</a> J. Jpn. Soc. Waste Manage. Exp. 15 (6), 472-479 (2004).</li>
<li>Kashiwada, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+of+Nanoparticles+in+the+See-through+Medaka+%28Oryzias+latipes%29%5BTitle%5D)+AND+%22EHP%22%5BJournal%5D)">Distribution of Nanoparticles in the See-through Medaka (Oryzias latipes).</a> EHP. 114 (11), 1697-1702 (2006).</li>
<li>Iwamatsu, T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aIwamatsu%2C+T+%22The+Integrated+Book+for+the+Biology+of+the+Medaka%22">The Integrated Book for the Biology of the Medaka</a>. , University Education Press. Japan. (2006).</li>
<li>Miyamoto, T., Machida, T., Kawashima, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+environmental+salinity+on+the+development+of+chloride+cells+of+freshwater+and+brackish-water+medaka%2C+Oryzias+latipes%5BTitle%5D)+AND+%22Zoo.+Sci%22%5BJournal%5D)">Influence of environmental salinity on the development of chloride cells of freshwater and brackish-water medaka, Oryzias latipes.</a> Zoo. Sci. 3 (5), 859-865 (1986).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22XSERIES+2+ICP-MS+Getting+Started+Guide+Revision+B+-+121+9590%22">XSERIES 2 ICP-MS Getting Started Guide Revision B - 121 9590</a>. , Thermo Fisher Scientific Inc.. Available from:
 <a target="_blank" href="http://202.127.146.37/eWebEditor/uploadfile/20130314161434190.pdf">http://202.127.146.37/eWebEditor/uploadfile/20130314161434190.pdf</a> (2007).</li>
<li>Kashiwada, S., Ariza, M. E., Kawaguchi, T., Nakagame, Y., Jayasinghe, B. S., Gartner, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silver+nanocolloids+disrupt+medaka+embryogenesis+through+vital+gene+expressions%5BTitle%5D)+AND+%22ES+%26+T%22%5BJournal%5D)">Silver nanocolloids disrupt medaka embryogenesis through vital gene expressions.</a> ES & T. 46 (11), 6278-6287 (2012).</li>
<li>Iwamatsu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stages+of+normal+development+in+the+medaka+Oryzias+latipes%5BTitle%5D)+AND+%22Mech.+Dev%22%5BJournal%5D)">Stages of normal development in the medaka Oryzias latipes.</a> Mech. Dev. 121, 605-618 (2004).</li>
<li>Kataoka, C., Ariyoshi, T., Kawaguchi, H., Nagasaka, S., Kashiwada, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salinity+increases+the+toxicity+of+silver+nanocolloids+to+Japanese+medaka+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Sci.%3A+Nano%22%5BJournal%5D)">Salinity increases the toxicity of silver nanocolloids to Japanese medaka embryos.</a> Environ. Sci.: Nano. 2, 94-103 (2014).</li>
<li>Shannon, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revised+effective+ionic+radii+and+systematic+studies+of+interatomic+distances+in+halides+and+chalcogenides%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Cryst%22%5BJournal%5D)">Revised effective ionic radii and systematic studies of interatomic distances in halides and chalcogenides.</a> Acta Cryst. 32, 751-767 (1976).</li>
<li>Pore size chart. , Spectrum Laboratories, Inc.. Available from:
 <a target="_blank" href="http://jp.spectrumlabs.com/dialysis/PoreSize.html">http://jp.spectrumlabs.com/dialysis/PoreSize.html</a> (2015).</li>
<li>Wakamatsu, Y. Medaka Book, 6.1: Preparation of hatching enzyme. , National BioResource Project (NBRP) Medaka. Available from:
 [cited 2015] <a target="_blank" href="https://shigen.nig.ac.jp/medaka/medakabook/index.php?6.1%20preparation%20of%20hatching%20enzyme">https://shigen.nig.ac.jp/medaka/medakabook/index.php?6.1%20preparation%20of%20hatching%20enzyme</a> (2015).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende financiële belangen hebben.

Medaka is een zoetwatervis die zeer tolerant voor zeewater; het is niet bekend dat de oorspronkelijke natuurlijke habitat van deze vis was zout water uit de Japanse kust 6. Vandaar medaka vissen hebben goed ontwikkelde chloride cellen 7. Deze unieke eigenschap geeft wetenschappers een nieuwe manier om de toxiciteit van de teststof in de omgeving als een functie van het zoutgehalte (zoet naar zeewater) met alleen één vissoort. Om medaka eieren in de eerste fase 21 te ver...

Sinds de oprichting van de Organisatie voor Economische Samenwerking en Ontwikkeling (OESO) richtsnoeren voor de proef voor het testen van chemische stoffen in 1979, hebben 38 testrichtsnoeren gepubliceerd in deel 2 van de richtsnoeren, Effecten op biotische systemen 1. Al het water levende organismen getest hebben van zoetwaterhabitats, namelijk zoetwater planten geweest; algen; ongewervelde dieren zoals watervlooien en chironomiden; en vissen zoals medaka, zebravis, en regenboogforel. In vergelijking met zout water omgevingen, zijn zoetwater milieus meer rechtstreeks getroffen door menselijke economische en industriële activiteiten. Daarom hebben zoetwater omgevingen zijn prioriteit voor het testen, omdat ze een hoger risico van vervuiling. In de kustgebieden, met inbegrip van estuaria, zoutgehaltes verschillen tussen brak water en zeewater omstandigheden, en deze gebieden worden vaak vervuild door industriële activiteit 2. Kustgebieden en de bijbehorende wetlands worden gekenmerkt door hoge ecologische biodiversiteit en productiviteit. Ecosystemen langs de kust moeten daarom worden beschermd tegen chemische verontreiniging. Echter, er is beperkt ecotoxicologisch onderzoek in brak water en zeewater habitats. Sakaizumi 3 bestudeerde de interacties tussen toxische methylkwik en zoutgehalte in Japanse Medaka eieren en vond dat het verhogen van de osmotische druk van de meetoplossing verhoogde de toxiciteit van de methylkwik. . Sumitani et al 4 gebruikt medaka eieren aan de toxiciteit van stortplaats percolaat te onderzoeken; Zij vonden dat de osmotische gelijkwaardigheid van percolaat om de eieren was de sleutel tot het induceren afwijkingen tijdens embryogenese. Daarnaast Kashiwada 5 gemeld dat plastic nanodeeltjes (39,4 nm in diameter) gemakkelijk doordrongen door de medaka ei chorion onder brakke omstandigheden (15x embryo opfok medium (ERM)). Een typische kleine vis model, de Japanse Medaka (Oryzias latipes </em&gt;) is gebruikt in de fundamentele biologie en ecotoxicologie 6. Japanse medaka kunnen leven in omstandigheden, variërend van zoet water naar zeewater omwille van hun sterk ontwikkelde chloride cellen 7. Zij zijn dan ook waarschijnlijk nuttig zijn voor het testen in omstandigheden met een uitgebreide lijst van zoutgehaltes te zijn.

<table><tbody><tr><td>Silver nanocolloïden</td><td>Utopia Silver Supplementen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Nacalai Tesque, Inc.</td><td>31319-45</td><td>Voor het maken van ERM</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Nacalai Tesque, Inc.</td><td>28513-85</td><td>Voor het maken van ERM</td></tr><tr><td>CaCl2&middot;2H2O</td><td>Nacalai Tesque, Inc.</td><td>06730-15</td><td>Voor het maken van ERM</td></tr><tr><td>MgSO4&middot;7H2O</td><td>Nacalai Tesque, Inc.</td><td>21002-85</td><td>Voor het maken van ERM</td></tr><tr><td>NaHCO3&nbsp;</td><td>Nacalai Tesque, Inc.</td><td>31212-25</td><td>Voor het maken van ERM</td></tr><tr><td>AgNO3</td><td>Nacalai Tesque, Inc.</td><td>31018-72</td><td></td></tr><tr><td>pH meter</td><td>HORIBA, Ltd.</td><td>F-51S</td><td></td></tr><tr><td>Balans</td><td>Mettler-Toledo International Inc.</td><td>MS204S</td><td></td></tr><tr><td>medaka (Oryzias latipes) oranje-rode stam</td><td>National Institute for Environmental Studies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>medaka doorstroming kweeksysteem</td><td>Meito Suien Co.</td><td>MEITOsystem</td><td></td></tr><tr><td>Artemia salina nauplii-eieren</td><td>Japan pet design Co. Ltd</td><td>4975677033759</td><td></td></tr><tr><td>beluchtingspomp</td><td>Japan pet design Co. Ltd</td><td>geruisloos w300</td><td></td></tr><tr><td>Otohime larval &beta;-1</td><td>Marubeni Nissin Feed Co. Ltd</td><td>Otohime larval &beta;-1</td><td>Kunstmatig droog visvoer</td></tr><tr><td>dissectiemicroscoop</td><td>Leica microsystems</td><td>M165FC</td><td></td></tr><tr><td>micrometer</td><td>Fujikogaku, Ltd.</td><td>10450023</td><td></td></tr><tr><td>incubator</td><td>Nksystem</td><td>TG-180-5LB</td><td></td></tr><tr><td>schudler</td><td>ELMI Ltd.</td><td>Aizkraukles 21-136</td><td></td></tr><tr><td>6-well plastic platen</td><td>Greiner CELLSTAR</td><td>M8562-100EA</td><td></td></tr><tr><td>aluminiumfolie</td><td>AS ONE Co.</td><td>6-713-02</td><td></td></tr><tr><td>stopwatch</td><td>DRETEC Co. Ltd.</td><td>SW-111YE</td><td></td></tr><tr><td>3 kDa membraanfilter</td><td>EMD Millipore Corporation</td><td>0.5 ml centrifugaal-type filter</td><td></td></tr><tr><td>50 ml Teflon beker</td><td>AS ONE Co.</td><td>33431097</td><td></td></tr><tr><td>Aangepaste claritas standaard</td><td>SPEXertificate</td><td>ZSTC-538</td><td>Voor interne standaard</td></tr><tr><td>Aangepaste claritas standaard</td><td>SPEXertificate</td><td>ZSTC-622</td><td>Voor externe standaard</td></tr><tr><td>Ultrapuur salpeterzuur</td><td>Kanto Chemical Co.</td><td>28163-5B</td><td></td></tr><tr><td>Waterstofperoxide&nbsp;</td><td>Kanto Chemical Co.</td><td>18084-1B</td><td>voor atomaire absorptiespectrometrie</td></tr><tr><td>ICP-MS</td><td>Thermo Scientific</td><td>Thermo Scientific X Series 2&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Hot plate</td><td>Tiger Co.</td><td>CRC-A300</td><td></td></tr></tbody></table>

zoutgehalte-afhankelijke toxiciteit test van silver nanocolloïden gebruik van medaka eieren

Salinity-dependent Toxicity Assay of Silver Nanocolloids Using Medaka Eggs

Het zoutgehalte is een belangrijk kenmerk van het aquatisch milieu. Voor waterorganismen definieert de leefgebieden van zoetwater, brak water en zeewater. Tests van de toxiciteit van chemicaliën en beoordeling van hun ecologische risico voor waterorganismen worden vaak uitgevoerd in zoet water, maar de toxiciteit van chemische stoffen voor waterorganismen afhankelijk van pH, temperatuur, zoutgehalte. Er is geen methode echter voor het testen van het zoutgehalte afhankelijkheid van toxiciteit voor waterorganismen. Hier gebruikten we medaka (Oryzias latipes), omdat ze zich kunnen aanpassen aan zoetwater, brak water en zeewater. Verschillende concentraties van embryo grootbrengen medium (ERM) (1x, 5x, 10x, 15x, 20x en 30x) werden gebruikt om de toxiciteit van zilver nanocolloidal deeltjes (SNCS) testen om eieren (1x ERM en 30x ERM Medaka hebben osmotische druk gelijkwaardig om zoet- en zeewater, respectievelijk). In zes-well platen, 15 medaka eieren in drievoud werden blootgesteld aan SNCS bij 10 mg / L &amp;# 8722, 1 in verschillende concentraties ERM bij pH 7 en 25 ° C in het donker. We gebruikten een dissectie microscoop en een micrometer voor het meten van de hartslag per 15 sec en oog diameter op dag 6 en full body lengte van de larven op het uitkomen dag (deel 4). De embryo&#39;s werden waargenomen tot het uitkomen of dag 14; we vervolgens geteld het uitbroeden tarief per dag gedurende 14 dagen (deel 4). Zilver accumulatie te zien in embryo&#39;s, gebruikten we inductief gekoppeld plasma massaspectrometrie om de zilveren concentratie van testoplossingen (deel 5) en dechorionated embryo&#39;s (hoofdstuk 6) .De toxiciteit van de SNCS om medaka embryo&#39;s duidelijk toe met toenemende verzilting te meten. Deze nieuwe methode laat ons toe om de toxiciteit van chemische stoffen te testen in verschillende zoutgehaltes.

Het effect van het zoutgehalte op SNC toxiciteit was erg duidelijk: de inductie van misvorming of dood saliniteit afhankelijke (figuren 1 en 2). We gemeten fenotypische biomarkers (hartslag, oog grootte, full body lengte, en broedeieren rate) in SNC (10 mg / l -1) -exposed embryo&#39;s. Deze fenotypische biomarkers bleek zoutgehalte SNC-afhankelijke toxiciteit. Hart varieerden 29,6-...

Embryonale stadia zijn het meest vatbaar voor xenobiotica. Hoewel chemische toxiciteit afhankelijk is van de zoutconcentratie, bestaat er geen methode om de zoutconcentratieafhankelijkheid van toxiciteit voor aquatische organismen te testen. Hier beschrijven we een nieuwe en snelle methode om de zoutconcentratieafhankelijkheid van toxiciteit voor aquatische embryo's te bepalen.

Zoutgehalte-afhankelijke toxiciteit Test van Silver nanocolloïden gebruik van Medaka Eieren

Salinity is an important characteristic of the aquatic environment. For aquatic organisms it defines the habitats of freshwater, brackish water, and ...

Het algemene doel van dit experiment is om de zoutgehalte-afhankelijke toxiciteit van chemicaliën voor aquatische organismen te testen. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen binnen het vakgebied van de ecotoxicologie, zoals de beoordeling van toxiciteit onder zoetwater-, brakwater- en zeewateromstandigheden. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat medaka's nooit worden ingezet om de toxiciteit van chemicaliën bij verschillende zoutgehaltes te testen.Daarnaast strekt de implicatie van deze techniek zich uit tot andere therapieën of diagnoses van chemische toxiciteit. De bereiding van commerciële zilver-nanocolloïden in oplossing, bij verschillende zoutgehaltes, wordt in het tekstprotocol behandeld. Evenzo worden de kweek van medaka en het verzamelen van eitjes beschreven.Begin met het drie keer spoelen van zes collecties Stage 21 medaka-eieren in de testoplossing. Voer dit uit met behulp van ERM's, waarbij voor elke set eieren een andere concentratie wordt gebruikt. Breng vervolgens vanuit elke gespoelde collectie 15 eieren over naar een afzonderlijk putje met testoplossing in een plastic zes-wells plaat.Voer dit experiment in drievoud uit en was elke groep afzonderlijk. Wikkel de platen in aluminiumfolie en incubeer deze bij 25 °C, in het donker. Doe dit tot de eieren uitkomen of voor een periode van 14 dagen, afhankelijk van wat het eerst gebeurt.Observe de eieren dagelijks tijdens de incubatie op biologische veranderingen en op dode eieren. Verschoon de testoplossing dagelijks, gelijktijdig met de observaties.Tel op de zesde dag van de observatie de hartslag van elk embryo over een periode van 15 seconden. Meet op deze zesde dag ook de diameter van de ogen van elk embryo in elke experimentele conditie met behulp van een micrometer. Zodra de embryo's uitkomen als larven, meet u hun totale lichaamslengte met een micrometer.Houd daarnaast gedurende de 14 dagen het totaal aantal uitgekomen eitjes bij. Om de bioaccumulatie van zilver te meten, verzamel op de zesde dag de chorionen van de eitjes via de standaardmethode. De gedechorioneerde eitjes kunnen worden geanalyseerd op dezelfde wijze als de SNC-oplossing, zoals beschreven in de volgende sectie.Om het oplosbare zilver uit elke SNC-oplossing te isoleren, wordt het mengsel van colloïden en oplosbaar zilver eerst gefilterd met behulp van een membraan van 3 kilodalton. Centrifugeer vervolgens het beladen filter gedurende 10 minuten bij 14.000 Gs in een gekoelde centrifuge.Meet de zilverconcentratie in 50 µL van het filtraat via ICP-MS analyse. Breng het aliquot over in een Teflon bekerglas van 50 mL en voeg twee mL ultrapuur salpeterzuur toe aan het bekerglas. Verhit het mengsel vervolgens op een warmteplaat bij 110 °C.Laat de oplossing gedurende ongeveer drie uur verhitting bijna volledig indampen. Zodra het bekerglas is afgekoeld, worden de organische vaste stoffen volledig opgelost. Voeg twee milliliter ultrapuur salpeterzuur en 0,5 milliliter waterstofperoxide toe aan het bekerglas.Verwarm het mengsel vervolgens opnieuw, totdat het bijna weer volledig is ingedampt. Los het resterende residu nu op in vier milliliter één procent ultrapuur salpeterzuur, bereid in ultrapuur water. Overbreng de oplossing naar een centrifugebuis van 15 milliliter.Herhaal het proces van het oplossen van de overgebleven vaste stoffen in het Teflon-bekerglas nog twee keer, waarbij de drie collecties worden afgekoeld in één enkele buis. Meet vervolgens de zilverconcentratie in het monster met behulp van ICP-MS. Gebruik het door de fabrikant aanbevolen protocol voor de analyse van de monsters.Zorg ervoor dat er interne en externe standaarden worden gebruikt. Het effect van saliniteit op de SNC-toxiciteit was duidelijk zichtbaar. De inductie van misvorming of sterfte was duidelijk afhankelijk van de saliniteit.Er werden diverse fysiologische metingen verricht. De hartslag bleef onveranderd totdat het zoutgehalte 30 X ERM bereikte. De lichaamslengte was significant korter bij zoutgehaltes van 15 en 30 X ERM.De oogdiameter nam eveneens af, in overeenstemming met de lichaamslengte. Uitkomst was minder waarschijnlijk bij 15 X ERM, en vond slechts plaats bij twee procent van de eieren bij 30 X ERM. In de experimentele oplossingen werden wateroplosbare metaalcomplexen gemakkelijker gevormd naarmate de zoutconcentratie toenam.Onderzoek naar de metaalcomplexen in de embryo's na zes dagen toonde aan dat hun concentratie in de embryo's toenam naarmate de concentratie in de oplossing steeg. Bij het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om de pH van de testcondities aan te passen, omdat de afgifte van zilverionen wordt gefaciliteerd door zure omstandigheden.

salinity-dependent-toxicity-assay-silver-nanocolloids-using-medaka

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Ontwikkelingsbiologie

Hormoonverstorende stoffen (EDC) vormen een aanzienlijk risico voor het aquatisch milieu. Gemeentelijke afvalwaterzuiveringsinstallaties zijn belangrijke bijdragen aan de oestrogene potentie van oppervlaktewater. De methodologie in dit document maakt een evaluatie van de doeltreffendheid en de geschiktheid van afvalwaterzuiveringsprocessen opzichte van EDC verwijderd.

Gebruik van een batterij van chemische en ecotoxicologische methoden voor de beoordeling van de werkzaamheid van Afvalwaterbehandeling processen te verwijderen Estrogenic Potentie

Kleine laboratoriumvissen zijn populaire modellen geworden voor botonderzoek naar de mechanismen die ten grondslag liggen aan menselijke botaandoeningen en voor het screenen van botmodulerende geneesmiddelen. In dit rapport beschrijven we een protocol om het effect van alendronaat op botcellen bij medaka-larven met osteoporose-laesies te beoordelen.

Drug Treatment en<em&gt; In Vivo</em&gt; Imaging van Osteoblast osteoclasten Interacties in een Medaka Fish Osteoporosis Model

Een protocol wordt uitgereikt om te lokaliseren Ag in walvisachtigen weefsels van de lever en de nieren door autometallography. Bovendien is een nieuwe bepaling, genaamd de walvisachtigen histologische Ag assay (CHAA) ontwikkeld voor het inschatten van de concentraties van de Ag in deze weefsels.

Gebruik van Autometallography om te lokaliseren en semi-kwantificeren zilver in walvisachtigen weefsels

Zebravis embryo's worden gebruikt voor het evalueren van de toxiciteit van chemische verbindingen. Ze ontwikkelen zich extern en zijn gevoelig voor chemicaliën, waardoor subtiele fenotypische veranderingen kunnen worden opgespoord. Het experiment vereist slechts een kleine hoeveelheid stof, die direct wordt toegevoegd aan de plaat die embryo's bevat, waardoor het testsysteem efficiënt en kosteneffectief is.

Snelle evaluatie van de toxiciteit van chemische verbindingen met behulp van zebravis embryo's

We demonstreren algentoxiciteitstests voor moeilijke stoffen (bijvoorbeeld gekleurde stoffen of nanomaterialen) met behulp van een opstelling die verticaal met een LED wordt verlicht.

Een kleinschalige setup voor algentoxiciteitstesten van nanomaterialen en andere moeilijke stoffen

Dit artikel beschrijft twee snelle en efficiënte methoden voor het verzamelen van sperma van het kleine modelvis medaka (Oryzias latipes), evenals een protocol voor het betrouwbaar beoordelen van de spermakwaliteit met behulp van computerondersteunde spermaanalyse (CASA).

Spermaverzameling en computerondersteunde spermaanalyse in het Teleost-model Japanse Medaka (Oryzias latipes)

Dit werk is gericht op het evalueren en herzien van de Artemia salina letaliteit bioassay procedure, ook geïdentificeerd als pekel garnalen letaliteit ashality assay. Deze eenvoudige en goedkope methode geeft informatie over de algemene toxiciteit (beschouwd als een voorlopige toxiciteitsevaluatie) van monsters, namelijk natuurlijke producten.

Letaliteit Bioassay met behulp van Artemia salina L.

Hier presenteren we een uitgebreide gedragstestbatterij, inclusief de nieuwe tank-, Shoaling- en sociale voorkeurstests, om de potentiële neurotoxische effecten van chemicaliën (bijv. methamfetamine en glyfosaat) op volwassen zebravissen effectief te bepalen met behulp van een enkele tank. Deze methode is relevant voor neurotoxiciteit en milieuonderzoek.

Beoordeling van neurotoxiciteit bij volwassen Danio rerio met behulp van een reeks gedragstests in een enkele tank

We beschrijven de workflow en data-analyse van een screeningssysteem voor het evalueren van de toxiciteit van chemische verbindingen op basis van de schrikreactie van zebravisembryo's. Het systeem registreert de bewegingen van zebravisembryo's bij blootstelling aan een trillingsstimulus en maakt een geïntegreerde evaluatie van algemene toxiciteit/letaliteit en neuromusculaire toxiciteit mogelijk.

Evaluatie van de toxiciteit van chemicaliën met behulp van een Zebrafish Vibration Startle Response Screening System

Het artikel stelt een nieuwe in vitro methode voor voor de snelle en gevoelige beoordeling van de toxiciteit en ecotoxiciteit van polluenten, gebaseerd op de beweeglijkheid van Mytilus galloprovincialis hemocyten. De methode heeft tot doel bij te dragen tot de ontwikkeling van meer ethische en sensitieve toxicologische en ecotoxicologische blootstellingsproeven.

Een toxicologische en ecotoxicologische test op basis van de hemocytenmotiliteit van mossel (Mytilus galloprovincialis)

Leer een nieuwe methode voor het testen van zoutgehalte-afhankelijke toxiciteit van chemicaliën bij aquatische organismen met behulp van medaka-eieren. Deze techniek verbetert ecotoxicologisch onderzoek door hoge doorvoer over verschillende zoutconcentraties.

Zoutgehalte-afhankelijke toxiciteit Test van Silver nanocolloïden gebruik van Medaka Eieren

Meer video's verkennen