Name: Kwantitatieve fundus autofluorescentie voor de beoordeling van Netvliesaandoeningen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 22 s
Description: Leer kwantitatieve fundus autofluorescentie voor het beoordelen van netvliesaandoeningen met CSLO. Deze methode meet lipofuscine in het retinale pigmentepitheel voor onderzoek naar leeftijdsgebonden maculadegeneratie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Wij willen graag onze medewerkers, Francois Delori, Tomas Burke, en Tobias Duncker bedanken. Onderzoek Ondersteuning: NIH / NEI R01 EY015520 (RTS, JPG), en onbeperkte middelen uit onderzoek ter voorkoming van Blindheid (RTB).

Ethiek Verklaring: Alle patiënten die deelnamen aan deze studies werden gedaan in overeenstemming met goedgekeurde institutionele review board toezicht aan de New York University School of Medicine. 1. selectie van patiënten en de eerste voorbereidingen voor de Imaging Opmerking: De volgende materialen nodig: 0,5% tropicamide oogdruppels, 2,5% fenylefrine oogdruppels, cSLO uitgerust met spectrale domein optical coherence tomography (SD-oktober), en interne referentiegegevens fluorescentie. <ol><li> Voorafgaand aan beeldvorming, juist is ingesteld cSLO voor data-acquisitie volgens de instructies van de fabrikant. </li><li> Monteer een interne fluorescerende referentie in de cSLO. Opmerking: De interne fluorescerende referentie, zoals gekocht van de fabrikant, wordt gehuisvest in een metalen ring is direct achter de lens geplaatst. Als een cSLO van een andere fabrikant wordt gebruikt, kan er een andere configuratie dan die welke is beschreven in zijndit protocol. <ol><li> Om de verwijzing in de cSLO plaatst, draai de lens om het te verwijderen, draai de machine metalen ring en vervang deze door de nieuwe metalen ring met de referentie. Opmerking: de interne fluorescerende referentie is essentieel voor het Qaf techniek omdat daarmee correctie voor variaties in laservermogen en detector gevoeligheid / versterking. </li></ol></li><li> Hebben patiënten gerekruteerd voor de beeldvorming worden onderworpen aan een routine verwijde oogonderzoek en achtergrond informatie met betrekking tot het verleden oculaire geschiedenis en de onderliggende medische aandoeningen die kunnen manifesteren met oculaire bevindingen te verkrijgen. </li><li> Verwijden de pupillen met 0,5% tropicamide en 2,5% fenylefrine. Kritische stap: Homothetie leerlingen minstens 6 mm. Opmerking: Dit is essentieel voor een ononderbroken doorgang van licht, en dus voor een optimale visualisatie en meting van de fundus. </li><li> Voorafgaand aan de beeldvorming, de positie van de patiënt goed op het cSLO, met de kin op de chinrest, voorhoofd geplaatst tegen de forehead rust, en laterale canthi goed uitgelijnd met de indicatoren. </li></ol> 2. Baseline beeldvorming van het oculair Fundus <ol><li> Ten eerste, de fundus beeld met nabij infrarood reflectie (IR) licht (golflengte van 820 nm) om de camera te centraliseren in de macula en het verkrijgen van ruw focus. <ol><li> Met de patiënt goed geplaatst, schakelt de hardware-instelling op het bedieningspaneel om IR imaging-modus, positie camera handmatig totdat de fundus is in volle focus, en neem een ​​beeld </li><li> Pas de instelling op het bedieningspaneel om &quot;IR-oktober&quot;, die spectrale domein optical coherence tomography (SD-oktober) gebruik in combinatie met IR beeldvorming om de macula voor de onderliggende ziekte te evalueren. </li><li> Gebruik het heden in de imaging-venster gidsen om correct te oriënteren de oktober de IR-beeld van de fundus op. Voor een optimale SD-oktober kwaliteit te bereiken, plaatst u de camera zodanig dat beeld oktober is in het bovenste derde van de imaging-venster. Verwerven ten minste één horizontale lijn scEen door de fovea en verspreid over het gehele beeldveld. </li></ol></li></ol> 3. Het opzetten van QAF Imaging <ol><li> Gebruik &quot;High speed&quot; beeldacquisitie. Opmerking: Deze instelling zorgt voor een snellere beeldverwerking overname, die risico op signaalverlies daalt als gevolg van beweging van de patiënt en de resulterende blokkering van het licht door de iris of oogleden. </li><li> Gebruik &quot;Mean van 9&quot; frames. Opmerking: deze instelling kan de snelle, vastlegmodus van 9 beeldrasters, die vervolgens kunnen worden &quot;gemiddeld&quot; ruis en artefacten te verminderen (zie hieronder). </li><li> Gebruik &quot;30 x 30 graden&quot; in. Opmerking: Dit verwijst naar de mate van retinale gebied dat wordt vastgelegd tijdens beeldacquisitie. </li><li> Voorafgaand aan beeldvorming patiënt waarschuwen over het blauwe licht, want dit alarmerende kan op het eerste. </li><li> Schakel de AF-modus en richt de camera-as zodanig dat het scherm is maximaal &quot;gevuld&quot; met fundus AF (minimaal verduistering van de zijden en de hoeken van het beeld). <ol><li> Als patiënten have moeite tolereren van de heldere blauwe licht, beginnen beeldvorming met de camera verder van het oog en dan brengen de camera langzaam in de richting van de patiënt tot de fundus is in het volle zicht. Kritische stap: Als licht in het binnenkomen of verlaten van het oog wordt belemmerd, verminderde signaal zal leiden. Gelokaliseerde daling is zichtbaar als asymmetrische verduistering van een afbeelding zijkant of hoek. Gegeneraliseerde verlies van het signaal wordt gezien als oogbewegingen alleen licht doorgang belemmeren. </li></ol></li><li> Lijn de camera zodat de AF signaal op het hoogste niveau gehele veld. Streven naar maximale signaal eerder dan scherpste beeld, maar ze ruwweg correleren. Stel de camera scherp door het verplaatsen van de cSLO om de camera handmatig of met de oftalmoscoop joystick verplaatsen. </li><li> Pas de gevoeligheid / gain zodanig dat fundus AF is goed zichtbaar, maar vermijd oververzadiging. Tijdens beeldverwerving, gekleurde pixels zichtbaar in het interne referentie (aan de bovenzijde van deafbeelding) of de fundus te geven over-verzadiging en daarmee het verlies van signaal. </li></ol> 4. Image Acquisition Let op: Kritische stap: het doel in beeldopname moet zijn om 2 hoge kwaliteit 9-frame stacks per sessie te verkrijgen om te controleren voor variatie tussen de afbeeldingen in een sessie. Na de herpositionering van de patiënt en de camera, het verkrijgen van een tweede sessie van twee beelden te beoordelen en controle voor de variabiliteit. Alle beelden uiteindelijk worden geijkt om de interne referentie (hieronder beschreven). <ol><li> Acquire beelden pas na ten minste 20 sec van &quot;bleaching&quot; (volledige blootstelling van het netvlies te AF licht) om de absorptie van licht minimaliseren door rhodopsine in de sensorische retina 9. <ol><li> Gebruik deze periode om camera uitlijning, aandacht en gevoeligheid te optimaliseren. </li></ol></li><li> Hebben de proefpersonen knipperen voordat elk beeld acquisitie als een frisse traan film verbetert de kwaliteit van het signaal. </li><li> Vermijd oogleden in het vlak van de overname. Opmerking: Het kan handig zijn om handmatig geopende oogleden meer uitdagende patiënten. De auteurs bevelen aan dat een assistent deze taak uitvoert. </li><li> Optimaliseer uitlijning voor elke beeldopname om ervoor te zorgen dat het licht wordt niet belemmerd door de iris resulteert in verminderde signaal. Let op: Als ten minste kleine beweging is heel gebruikelijk, de auteurs bevelen boete herschikking als nodig is voor elk beeld acquisitie. Het begeleiden en stimuleren van de patiënt, terwijl imaging helpt bij het verminderen beweging. De auteurs raden ook aan het gebruik van de machine voetpedaal als de &quot;overname knop&quot; om zo operator afleiding te minimaliseren. </li><li> Post-beeldverwerking door het berekenen van de &quot;gemiddelde&quot; van de 9-kader stack signaal-ruisverhouding te verhogen. Bereken het gemiddelde van een stapel met de cSLO software van de optie om het gemiddelde te berekenen selecteren. Let op: Er kunnen stapels waar sommige frames zijn niet van optimale kwaliteit te zijn (dat wil zeggen, gelokaliseerde of gegeneraliseerde verlaagde signaal opzichte van de optimale frames), derhalve zorgvuldig inspecteren elke stapel en suboptimale frames schakel voor berekening van het gemiddelde. Opmerking: Mean beelden met acceptabele signaal-ruisverhouding kan uit ten minste 3 frames worden verwerkt. Het is normaal dat de zijkanten en de hoeken van elk beeld een lagere signaal dan de centrale 20 graden als gevolg van beperkingen in de cSLO zelf hebben. <ol><li> Als de software vraagt ​​of de exploitant wil de grijswaarden normaliseren (dat wil zeggen, strek de histogram) tussen 0 en 255, selecteert u &quot;Nee&quot;. Hierdoor blijft ongewijzigd grijswaarden voor analyse. </li></ol></li></ol> 5. Image Analysis <ol><li> Analyseer AF beelden zoals eerder beschreven met behulp van beeldanalyse-software die is ontwikkeld voor de QAF techniek (IGOR; 9). Een korte beschrijving van een typische beeldanalyse met behulp van deze software is hieronder opgenomen. <ol><li> Laad het QAF programma in IGOR en afbeeldingen importeren (in bmp-formaat) die uit decSLO software met pixelverhouding 768 x 768 (standaard-parameter). </li><li> Selecteer de afbeelding in het drop-down menu en initiëren analyse. </li><li> Verplaats kalibratie indicatoren op het beeld zodanig dat het &quot;vizier&quot; liggen over de fovea en de &#39;beugel&#39; grenst aan de optische schijf (deze indicatoren worden gebruikt op schaal en de positie van de ROI). Wanneer goed gepositioneerd, prompts gebruiken software dan bevolken de afbeelding met de omtrek ROI rond de fovea (zie figuren 1, 2). </li><li> Selecteer de optie IGOR de totale grijsniveaus van elk beeld te kalibreren met die in de interne fluorescerende referentieniveaus. Opmerking: Deze stap maakt kalibratie van machinegerelateerde factoren, zoals de elektronische nulniveau van elk beeld en de interne referentie kalibratiefactor van elke machine, evenals patiëntenfactoren, zoals leeftijd, breking en corneale kromming. Let op: De analyse software geeft vervolgens het vaste rREGIO &#39;S over de resulterende afbeelding en een QAF waarde wordt gedemonstreerd in elke regio. QAF waarden worden ook automatisch in een spreadsheet in een apart venster ingevoerd. &quot; </li><li> Genereer QAF &quot;heat maps&quot; door de optie in het commando prompts selecteren. Alle beelden en gegevens kunnen van de IGOR software in een Excel-spreadsheet worden uitgevoerd door het selecteren van de gewenste opties. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Strauss, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+retinal+pigment+epithelium+in+visual+function%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+reviews%22%5BJournal%5D)">The retinal pigment epithelium in visual function.</a> Physiological reviews. 85, 845-881 (2005).</li>
<li>Ach, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+autofluorescence+and+cell+density+maps+of+the+human+retinal+pigment+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Quantitative autofluorescence and cell density maps of the human retinal pigment epithelium.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 55, 4832-4841 (2014).</li>
<li>Ach, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipofuscin+redistribution+and+loss+accompanied+by+cytoskeletal+stress+in+retinal+pigment+epithelium+of+eyes+with+age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Lipofuscin redistribution and loss accompanied by cytoskeletal stress in retinal pigment epithelium of eyes with age-related macular degeneration.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 56, 3242-3252 (2015).</li>
<li>Schmitz-Valckenberg, S., Jorzik, J., Unnebrink, K., Holz, F. G., Group, F. A. M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+digital+scanning+laser+ophthalmoscopy+fundus+autofluorescence+images+of+geographic+atrophy+in+advanced+age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Graefe%27s+archive+for+clinical+and+experimental+ophthalmology+%3D+Albrecht+von+Graefes+Archiv+fur+klinische+und+experimentelle+Ophthalmologie%22%5BJournal%5D)">Analysis of digital scanning laser ophthalmoscopy fundus autofluorescence images of geographic atrophy in advanced age-related macular degeneration.</a> Graefe's archive for clinical and experimental ophthalmology = Albrecht von Graefes Archiv fur klinische und experimentelle Ophthalmologie. 240, 73-78 (2002).</li>
<li>Weng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insights+into+the+function+of+Rim+protein+in+photoreceptors+and+etiology+of+Stargardt%27s+disease+from+the+phenotype+in+abcr+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Insights into the function of Rim protein in photoreceptors and etiology of Stargardt's disease from the phenotype in abcr knockout mice.</a> Cell. 98, 13-23 (1999).</li>
<li>Holz, F. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+lysosomal+degradative+functions+in+RPE+cells+by+a+retinoid+component+of+lipofuscin%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Inhibition of lysosomal degradative functions in RPE cells by a retinoid component of lipofuscin.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 40, 737-743 (1999).</li>
<li>Sparrow, J. R., Nakanishi, K., Parish, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+lipofuscin+fluorophore+A2E+mediates+blue+light-induced+damage+to+retinal+pigmented+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">The lipofuscin fluorophore A2E mediates blue light-induced damage to retinal pigmented epithelial cells.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 41, 1981-1989 (2000).</li>
<li>Smith, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipofuscin+and+autofluorescence+metrics+in+progressive+STGD%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Lipofuscin and autofluorescence metrics in progressive STGD.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 50, 3907-3914 (2009).</li>
<li>Delori, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+measurements+of+autofluorescence+with+the+scanning+laser+ophthalmoscope%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Quantitative measurements of autofluorescence with the scanning laser ophthalmoscope.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 52, 9379-9390 (2011).</li>
<li>Burke, T. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+fundus+autofluorescence+in+recessive+Stargardt+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Quantitative fundus autofluorescence in recessive Stargardt disease.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 55, 2841-2852 (2014).</li>
<li>Duncker, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+fundus+autofluorescence+and+optical+coherence+tomography+in+best+vitelliform+macular+dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Quantitative fundus autofluorescence and optical coherence tomography in best vitelliform macular dystrophy.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 55, 1471-1482 (2014).</li>
<li>Duncker, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+fundus+autofluorescence+distinguishes+ABCA4-associated+and+non-ABCA4-associated+bull%27s-eye+maculopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Quantitative fundus autofluorescence distinguishes ABCA4-associated and non-ABCA4-associated bull's-eye maculopathy.</a> Ophthalmology. 122, 345-355 (2015).</li>
<li>Greenberg, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+fundus+autofluorescence+in+healthy+eyes%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Quantitative fundus autofluorescence in healthy eyes.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 54, 5684-5693 (2013).</li>
<li>Delori, F. C., Goger, D. G., Dorey, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+accumulation+and+spatial+distribution+of+lipofuscin+in+RPE+of+normal+subjects%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Age-related accumulation and spatial distribution of lipofuscin in RPE of normal subjects.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 42, 1855-1866 (2001).</li>
<li>Sparrow, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+fundus+autofluorescence+in+mice%3A+correlation+with+HPLC+quantitation+of+RPE+lipofuscin+and+measurement+of+retina+outer+nuclear+layer+thickness%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Quantitative fundus autofluorescence in mice: correlation with HPLC quantitation of RPE lipofuscin and measurement of retina outer nuclear layer thickness.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 54, 2812-2820 (2013).</li>
<li>Delori, F. C., Webb, R. H., Sliney, D. H. American National Standards Institute. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maximum+permissible+exposures+for+ocular+safety+%28ANSI+2000%29%2C+with+emphasis+on+ophthalmic+devices%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Optical+Society+of+America.+A%2C+Optics%2C+image+science%2C+and+vision%22%5BJournal%5D)">Maximum permissible exposures for ocular safety (ANSI 2000), with emphasis on ophthalmic devices.</a> Journal of the Optical Society of America. A, Optics, image science, and vision. 24, 1250-1265 (2007).</li>
</ol>

STA: geen onthullingen, JPG: geen onthullingen, RTS: consultant, Ocata Therapeutics.

Abnormale RPE lipofuscine distributie, of verhoogd of verlaagd, is een gevoelige marker van retinale ziekte en wordt meestal geassocieerd met het verlies van sensorische retina-functie. Hier beschrijven we de toepassing van qaf voor de evaluatie van RPE lipofuscine. Opname van een interne fluorescerende referentie voor het corrigeren van variabele laservermogen en detectorsensitiviteit 9 naast onze standaard beeldtechniek maakt betrouwbare kwantificering van AF niveaus. Het is ons doel dat deze methode zal he...

Het retinale pigmentepitheel (RPE) ondersteunt de functie van de sensorische retina door talrijke werkwijzen 1. Leeftijdsgebonden maculadegeneratie (AMD) is de belangrijkste oorzaak van onbehandelbare blindheid in geïndustrialiseerde landen en wordt gekenmerkt door veranderingen in het RPE, waaronder verlies van pigment, functieverlies en atrofie. AMD en normale veroudering, de RPE accumuleert fluorescent, lysosoom afgeleide organellen die gefagocyteerde fotoreceptor fragmenten, aangeduid als lipofuscine granules. De accumulatie van lipofuscine RPE is gedacht oxidatieve dysfunctie 1 geven, maar recente studies hebben aangetoond dat de RPE morfologie blijft normaal verouderde ogen met hoge niveaus lipofuscine 2. Echter, afwijkende patronen van lipofuscine distributie, in het bijzonder het verlies van lipofuscine, zijn gedocumenteerd markers voor AMD en AMD progressie, zowel histologisch en klinisch 3,4 defecte proceszing van RPE lipofuscine is ook aangetoond voor bij bepaalde erfelijke retinale degeneratie. Patiënten die lijden aan de ziekte van Stargardt (STGD) accumuleren lipofuscin in de RPE op jonge leeftijd, uiteindelijk het ontwikkelen van visie verlies vergelijkbaar met dat in AMD 5. Deze bevindingen suggereerden dat lipofuscine accumulatie zelf kan giftig zijn en rijden RPE dysfunctie 6,7. Echter, een gedetailleerde imaging studie bij patiënten met STGD na verloop van tijd niet bevestigen dat focale lipofuscine accumulatie geleid tot latere RPE verlies 8. Daarom hoewel lipofuscine afwijkingen markers voor retinale degeneratie, een rol voor directe toxiciteit van lipofuscine blijft onbewezen. De RPE is de meest achterste cellaag van het netvlies, maar genereert de meeste fluorescente signaal van de oculaire fundus. Opwekking en detectie van autofluorescentie (AF) afgeleid van het RPE kan worden uitgevoerd met behulp van confocale scanning laser Ophthalmoscopie (cSLO), die zorgt voor visualization van de ruimtelijke verdeling van fundus AF. Bepaalde retinale degeneratie tonen onderscheidende patronen van fundus AF en AF imaging helpt bij de diagnose en monitoring van deze voorwaarden. Hoewel de standaard AF beeldvorming is klinisch belangrijk, is kwantitatieve AF (Qaf) uitgegroeid tot een belangrijk middel voor het beoordelen van gezondheidsrisico RPE. Wij en anderen hebben een gestandaardiseerde aanpak die betrouwbaar QAF niveaus kan bepalen op specifieke netvlies locaties 9 ontwikkeld. QAF heeft potentiële toepassingen in de diagnose en monitoring van retinale aandoeningen, en kunnen ook nut in prognose en risicostratificatie. Bovendien zijn de diagnostische mogelijkheden van qaf eveneens beschreven voor bepaalde retinale aandoeningen 10-12. Hier geven we stapsgewijze informatie voor het uitvoeren van onze techniek vergezeld van een visuele demonstratie van de toepassing bij de beoordeling van gezonde en zieke ogen.

<table><tbody><tr><td>Spectralis HRA + OCT</td><td>Heidelberg Engineering</td><td></td><td></td></tr><tr><td>0,5% tropicamide oogdruppels</td><td></td><td></td><td>Elk merk kan worden gebruikt</td></tr><tr><td>2,5% fenylefrine oogdruppels</td><td></td><td></td><td>Elk merk kan worden gebruikt</td></tr><tr><td>Interne fluorescente referentie</td><td>Heidelberg Engineering</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IGOR Pro software</td><td>WaveMetrics</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

kwantitatieve fundus autofluorescentie voor de beoordeling van netvliesaandoeningen

Quantitative Fundus Autofluorescence for the Evaluation of Retinal Diseases

Het retinale pigmentepitheel (RPE) ligt naast de bovenliggende sensorische retina en ondersteunt de functie van het visuele systeem. Tot de taken van het RPE behoren fagocytose en verwerking van uitwendige fotoreceptorsegmenten via lysosoom-afgeleide organellen. Deze afbraakproducten, opgeslagen en aangeduid als lipofuscinerandkorrels, zijn gedeeltelijk samengesteld uit bisretinoïden, die brede fluorescentieabsorptie- en emissiespectra hebben die klinisch kunnen worden gedetecteerd als fundusautofluorescentie met confocale scanlaser oftalmoscopie (cSLO). Lipofuscinaccumulatie wordt geassocieerd met een toenemende leeftijd, maar wordt ook gevonden in verschillende patronen in zowel verworven als erfelijke degeneratieve ziekten van de retina. Het bestuderen van het accumulatiepatroon ervan en het correleren van dergelijke patronen met veranderingen in de bovenliggende sensorische retina zijn dus essentieel voor het begrijpen van de pathofysiologie en progressie van retinale ziekten. Hier beschrijven we een techniek die door ons laboratorium en anderen wordt gebruikt en die cSLO gebruikt om het niveau van RPE-lipofuscin in zowel gezonde als zieke ogen te kwantificeren.

Deze techniek werd gebruikt om qaf bestuderen in zowel gezonde 13 en ziektetoestanden 10-12. Bij gezonde ogen (figuur 1), wordt AF uitgezonden door de RPE relatief gelijkmatig in de fundus (Figuur 1A). Verminderde intensiteit waargenomen in het centrale maculaire gebied wegens blokkering van licht door maculaire pigment, en aan de zijden en hoeken van het beeld door de lens in het oog en de camera. Schepen verschijnen donker en moet...

Het retinale pigmentepitheel (RPE) ondersteunt de sensorische retina door het recyclen van bijproducten van de visuele cyclus, die zich ophopen als lipofuscine. Deze producten zijn autofluorescent en kunnen kwalitatief in vivo worden geïmaged. Hier beschrijven we een methode om RPE lipofuscine kwantitatief te beeldvormen met behulp van confocale scanlaser oftalmoscopie.

Kwantitatieve fundus autofluorescentie voor de beoordeling van Netvliesaandoeningen

The retinal pigment epithelium (RPE) is juxtaposed to the overlying sensory retina, and supports the function of the visual system. Among the tasks ...

Het algemene doel van kwantitatieve autofluorescentie, of qAF, is om het totale niveau van lipofuscine in de ondersteuningscellen van het netvlies, het retinaal pigmentepitheel, of RPE, te evalueren in zowel gezonde als zieke ogen. Deze techniek kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen in de retinale celbiologie, zoals de manier waarop de gezondheid van het retinaal pigmentepitheel interageert met de ontwikkeling van leeftijdgerelateerde maculadegeneratie, of AMD. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het de bepaling van absolute niveaus van lipofuscine-autofluorescence in het fundus mogelijk maakt, en daarmee een kwantitatieve en reproduceerbare follow-up tussen patiënten, tussen beeldvormingssessies van patiënten en in grote studiepopulaties.Stel vóór de beeldvorming de confocale scannerlaser-oftalmoscopie, of CSLO, op de juiste wijze in voor gegevensverwerving volgens de instructies van de fabrikant. Om een interne fluorescentiereferentie, die bij de fabrikant wordt aangeschaft, te monteren, draait u de lens om deze te verwijderen, schroeft u de metalen ring van het apparaat los en vervangt u deze door de nieuwe metalen ring met de referentie. Het is essentieel dat de pupillen zijn gedilateerd tot ten minste 6mm voor een ononderbroken lichtdoorgang.Verwijdt de pupillen van de patiënt tot ten minste 6mm met 0.5% tropicamide en 2.5% phenylephrine, wat essentieel is voor een ononderbroken lichtpassage om het fundus te kunnen zien en meten. Positioneer de patiënt correct in de CSLO, waarbij de kin op de kinsteun rust, het voorhoofd tegen de voorhoofdssteun is geplaatst en de laterale canthi correct zijn uitgelijnd met de indicatoren. Om basisbeelden te verkrijgen, wordt het fundus eerst gefotografeerd met nabij-infraroodreflectantie, of IR-licht, om de camera over de macula te centreren en een grove focus te verkrijgen.Zodra de patiënt correct is gepositioneerd, schakelt u de hardware-instelling op het bedieningspaneel in naar de IR-beeldmodus, positioneert u de camera handmatig tot de fundus volledig in focus is en maakt u een afbeelding. Pas de instelling op het bedieningspaneel aan naar IROCT, waarbij spectral domain optische coherentietomografie, of SDOCT, in combinatie met IR-beeldvorming wordt gebruikt om de macula op onderliggende aandoeningen te beoordelen. Gebruik de hulplijnen in het beeldvenster om de OCT correct te oriënteren ten opzichte van het IR-beeld van de fundus.Om een optimale SDOCT-kwaliteit te verkrijgen, positioneert u de camera zodanig dat het OCT-beeld zich in het bovenste derde deel van het beeldvenster bevindt. Maak ten minste één horizontale lijnscan door de fovea, die het gehele beeldveld beslaat. Gebruik voor de instelling van de qAF-beeldvorming een snelle beeldacquisitie, waardoor het risico op signaalverlies door bewegingen van de patiënt en blokkade van het licht door de iris of oogleden wordt verminderd.Gebruik Mean of 9 frames, waarbij snel en opeenvolgend negen beeldframes worden vastgelegd die vervolgens worden gemiddeld om ruis en artefacten te verminderen. Kies een gezichtsveld van 30 x 30 graden, wat verwijst naar de graden van het netvliesoppervlak die tijdens de beeldacquisitie worden vastgelegd. Waarschuw de patiënt voor het blauwe licht, schakel de AF-modus in en richt de camera-as zodanig uit dat het scherm maximaal wordt gevuld met fundus AF, met minimale verduistering van de zijkanten en hoeken van het beeld.Als patiënten moeite hebben met het verdragen van het heldere blauwe licht, verplaats de camera dan verder van het oog om te beginnen met het maken van beelden, en breng de camera langzaam naar de patiënt toe totdat het fundus volledig in beeld is. Pas de uitlijning van de camera handmatig of met de joystick van de ophtalmoscoop aan door de CSLO te verplaatsen om de camera zodanig te repositioneren dat het AF-signaal over het gehele veld op het hoogste niveau is, in plaats van te streven naar het scherpste beeld. Tijdens de beeldacquisitie duiden gekleurde pixels die zichtbaar zijn in zowel de interne referentie als het fundus op oververzadiging en dus op signaalverlies.Stel het netvlies gedurende ten minste 20 seconden volledig bloot aan AF-licht om de absorptie van licht door rhodopsine in het sensorische netvlies tijdens de beeldvorming te minimaliseren. Gebruik deze periode om de uitlijning, focus en gevoeligheid van de camera te optimaliseren. Laat de proefpersonen knipperen voor elke beeldacquisitie, aangezien een verse traanfilm de signaalkwaliteit verbetert.Zorg dat de oogleden zich niet in het acquisitievlak bevinden en maak de afbeelding. Het is belangrijk om per beeldsessie ten minste twee afbeeldingen van hoge kwaliteit te genereren voor de data-analyse. Voer nabewerking uit met de CSLO-software om het gemiddelde van de stack van negen frames te berekenen, om zo de signaal-ruisverhouding te verhogen.Voer de beeldanalyse uit volgens het tekstprotocol. Zoals hier wordt getoond, is bij gezonde ogen de AF die door het RPE wordt uitgezonden relatief gelijkmatig over het fundus verdeeld. Een verminderde intensiteit is zichtbaar in het centrale maculagebied door de blokkering van licht door maculapigment, en aan de zijkanten en hoeken door de optiek van het oog en de camera.Vaten moeten donker zijn en scherp in beeld. Deze figuur toont een bijbehorende heatmap-weergave van de qAF-niveaus uit deze figuur. Koelere kleuren komen overeen met gebieden met een lagere AF-intensiteit, terwijl warmere kleuren overeenkomen met gebieden met een hogere AF-intensiteit.De maximale intensiteit wordt over het algemeen waargenomen in de tweede concentrische ring van acht segmenten, en de gemiddelde intensiteiten in dit gebied worden gebruikt voor het grootste deel van de data-analyse. Hier wordt een representatieve analyse getoond van een oog met AMD, waarbij geografische atrofie, een gevorderde vorm van AMD, zichtbaar is. Deze vorm van AMD leidt tot gelokaliseerde gebieden van RPE-verlies, wat blijkt uit een sterk verminderde of afwezige AF, en veroorzaakt progressief centraal gezichtsverlies.Bij het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om kandidaatpatiënten zorgvuldig te selecteren en reproduceerbaar beelden van hoge kwaliteit te verkrijgen om de datakwaliteit te maximaliseren. Het gebruik van deze procedure maakt een longitudinale follow-up van de gezondheid van het netvlies mogelijk om de voortgang van retinal degeneraties te bepalen. Na de ontwikkeling van deze techniek werd de weg vrijgemaakt voor onderzoekers in het veld van de oogheelkunde om retinal degeneraties te volgen en te analyseren.Na het bekijken van deze video zou u een goed inzicht moeten hebben in hoe u kwantitatieve autofluorescentie kunt gebruiken om uw patiënten met retina-degeneraties te evalueren. Bedankt voor het kijken en veel succes met uw experimenten.

quantitative-fundus-autofluorescence-for-evaluation-retinal

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Retinale beeldanalyse is een onopvallende procedure voor het visualiseren van de microcirculatie. De gevolgen van hart-en vaatziekten risicofactoren kunnen leiden tot veranderingen van het netvlies kalibers vaartuig. De procedures voor fundus foto en stappen te nemen voor het berekenen van het vaartuig kalibers worden beschreven.

Fundus fotografie als een handig hulpmiddel om microvasculaire Reacties op hart-en vaatziekten Risicofactoren in epidemiologische studies Studie

Het netvlies deelt opvallende gelijkenissen met de hersenen en vormt aldus een uniek venster te bestuderen van therapieën en neuronale structuur in de hersenen niet-gebeurt. Dit protocol beschrijft een methode om te studeren met behulp van retinale beeldvormingstechnieken dementie. Deze methode kan kunnen helpen bij de diagnose en risicobeoordeling van dementie.

Met behulp van retinale Imaging te bestuderen van dementie

De geïsoleerde-check visuele opgeroepen potentiële (icVEP) methode wordt hier geïmplementeerd om de magnocellulaire ON pad dat in eerste instantie is beschadigd in glaucoom te beoordelen. De studie toont standaard operatieve procedures met behulp van icVEP om betrouwbare resultaten te verkrijgen. Het is bewezen te dienen als een nuttige objectieve diagnose technologie voor de vroege opsporing van glaucoom.

Beoordeling van early stage open-angle glaucoom bij patiënten door geïsoleerde-check visuele opgeroepen potentieel

In dit rapport presenteren we een protocol waarmee de onderzoeker een muismodel van intraoculaire uveïtis kan genereren. Meer algemeen aangeduid als experimentele auto-immune uveïtis (EAU), dit gevestigde model legt vele aspecten van de menselijke ziekte vast. Hierin zullen we beschrijven hoe de progressie van de ziekte kan worden geïnduceerd en gevolgd met behulp van verschillende uitlezingen.

Experimentele auto-immune uveïtis: een intraoculair inflammatoir muismodel

Diabetische retinopathie is een van de belangrijkste oorzaken van blindheid. Histologie, bloed-retinale barrièreafbraaktest en fluorescentieangiografie zijn waardevolle technieken om de pathofysiologie van het netvlies te begrijpen, wat de efficiënte screening van geneesmiddelen tegen diabetische retinopathie verder zou kunnen verbeteren.

Retinale pathofysiologische evaluatie in een rattenmodel

Muismodellen kunnen nuttige hulpmiddelen zijn voor het onderzoeken van de biologie van het retinale gepigmenteerde epitheel (RPE). Er is vastgesteld dat muizen een reeks RPE-pathologieën kunnen ontwikkelen. Hier beschrijven we een fenotyperingsprotocol om RPE-pathologieën bij muizen op te helderen en te kwantificeren met behulp van licht, transmissie-elektron en confocale microscopie.

Een protocol voor het evalueren en kwantificeren van retinale gepigmenteerde epitheelpathologieën in muismodellen van leeftijdsgebonden maculaire degeneratie

Dit onderzoek beschrijft een workflow om autofluorescentieniveaus te bepalen en te vergelijken uit individuele interessegebieden (bijv. drusen en subretinale drusenoïde afzettingen bij leeftijdsgebonden maculadegeneratie [AMD]), rekening houdend met variërende autofluorescentieniveaus in de fundus.

Een workflow voor het kwantitatief bepalen van leeftijdsgebonden maculadegeneratielaesiespecifieke variaties in fundus-autofluorescentie

Laboratoriumtests kunnen gebruikmaken van de prognostische waarde van de longitudinale optische coherentietomografie (OCT) -gebaseerde multimodale beeldvorming van leeftijdsgebonden maculaire degeneratie (AMD). Menselijke donorogen met en zonder AMD worden in beeld gebracht met behulp van OCT, kleur, nabij-infrarood reflectantie scanning laser oftalmoscopie, en autofluorescentie op twee excitatie golflengten voorafgaand aan weefselsectie.

Ex Vivo OCT-gebaseerde multimodale beeldvorming van menselijke donorogen voor onderzoek naar leeftijdsgebonden maculaire degeneratie

Fibroblasten van patiënten die mutaties in Parkinson's ziekte-veroorzakende genen vormen een gemakkelijk...

Het gebruik van primaire menselijke fibroblasten voor de monitoring van Mitochondriale fenotypes op het gebied van de ziekte van Parkinson

Hier beschrijven we histologische technieken voor het visualiseren van oculaire weefsel direct naast een metalen epiretinale tack en een retinale prothese.

Technieken voor verwerking Ogen geïmplanteerd met een Retina Prothese voor gelokaliseerde Histopathologisch Analyse: Part 2 Epiretinal Implantaten met Retina Kopspijkers

Leer kwantitatieve fundus autofluorescentie voor het beoordelen van netvliesaandoeningen met CSLO. Deze methode meet lipofuscine in het retinale pigmentepitheel voor onderzoek naar leeftijdsgebonden maculadegeneratie.

Kwantitatieve fundus autofluorescentie voor de beoordeling van Netvliesaandoeningen

Meer video's verkennen