Name: Zebravis als een model om de teratogene potentie van nitriet Assess (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-02-16T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 29 s
Description: Ontdek hoe je de teratogene effecten van nitriet beoordeelt in zebraviseieren. Deze methode maakt externe ontwikkeling en microscopische observatie mogelijk voor toxicologisch onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

VK werd gefinancierd door subsidies van het IUP Department of Biology en de School of Graduate Studies and Research (Professionale Ontwikkeling voor Afgestudeerde Studenten). CQD en TWS werden ondersteund door de IUP School of Graduate Studies and Research (Publicatiekosten voor Faculteit/Incidentele Onderzoeksuitgaven). We danken ook de leden van het Diep laboratorium voor het onderhouden van de zebravis faciliteit.

De in dit protocol beschreven procedures werden goedgekeurd door de Institutional Animal Care en gebruik Comite aan de Indiana University of Pennsylvania. 1. Harvest Embryo&#39;s <ol><li> Handhaaf zebravis bij 28,5 ° C, pH 7, geleidbaarheid tussen 500-1,500 microseconde en een licht / donker-cyclus van 14 uur licht en 10 uur donker 24. Gebruik wild-type stammen zoals Tu, AB of TU / AB hybride. Verschillende stammen kunnen anders reageren op chemische behandeling 25. </li><li> Stel de vis voor de paring de nacht vóór de oogst eieren door toevoeging van vis systeem water in een paring tank. Voeg een mannelijke en vrouwelijke vis in de tank en scheiden de twee vissen met een scheidingswand. Elke vis pair zal een bereik van 50-300 eieren te produceren. Om ervoor te zorgen dat er genoeg eieren zal worden geproduceerd, het opzetten van 30 paar van de vis. Gewoonlijk zal ongeveer 50% van de vissen paren op de primaire paring leeftijd (6-9 maanden oud) eieren produceren, resulterende tot 200 eieren per paar en maximaal tot 3, 000 eieren voor dit experiment. </li><li> De volgende ochtend na het licht gaat branden, verwijder de verdeler de paring te starten. Controleer de paring tanks voor eieren elke 15 min. </li><li> Zodra de vis leggen eieren, oogsten alle embryo&#39;s met behulp van een theezeefje en combineren tot één grote container met E3 buffer (5 mM NaCl, 0,17 mM KCI, 0,33 mM CaCl2, 0,33 mM MgSO4). Op 1,5 HPF, te verwijderen en gooi onbevruchte eieren met een plastic overdracht pipet onder een dissectie microscoop. Onbevruchte eieren zijn ondoorzichtig, terwijl bevruchte eieren zijn doorzichtig 34. </li><li> Transfer 50 embryo&#39;s in een 100 x 15 mm glazen petrischaal met 50 ml E3 buffer voor elke behandeling conditie. Een totaal van 33 schotels nodig voor 11 behandelingsomstandigheden en 3 replicaten. </li></ol> 2. Het behandelen van Embryo&#39;s <ol><li> Uit te voeren behandelingen in 2 uur na de bevruchting (HPF) 35. Incubeer embryo&#39;s / larven bij 28,5 ° C en onderzoekt de larven op 120 HPF. Presteren op least drie replicaten van elke behandeling voorwaarde voor statistische analyse. </li><li> Voor 3 petrischaaltjes (elk 50 embryo&#39;s) op 2 HPF, verwijder de E3 buffer met een transfer pipet en voeg 50 ml van 300 mM ethanol verdund in E3 buffer. Bedek de petrischalen met Parafilm om verdamping van ethanol minimaliseren. <ol><li> Verder blootstellen van het embryo tot ethanol gedurende 22 uur. Verwijder vervolgens de ethanol met een transfer pipet. Voeg 50 ml van de E3 buffer en schud de schotel meerdere malen uit te spoelen de ethanol. Verwijder deze E3 buffer met een transfer pipet en herhaal de wasstap nog 2 keer. </li></ol></li><li> Voor 3 petrischaaltjes (elk 50 embryo&#39;s) op 2 HPF, verwijder de E3 buffer met een transfer pipet en voeg 50 ml van de nieuwe E3 buffer. </li><li> 9 Petrischalen (elk 50 embryo) en 2 HPF Verwijder de E3 buffer met een transfer pipet en voeg 50 ml van 1000 mg / l natriumnitriet opgelost in E3 buffer. Controleer de concentratie van de voorraad nitriet oplossing van tevoren met behulp van eenmodificatie van de diazotering (USEPA Methode 354,1) spectrofotometrische methode 28. <ol><li> Ga door het blootstellen van 3 gerechten voor 46 uur, 3 gerechten voor 70 uur en 3 gerechten voor 94 uur. Vervang de nitrietoplossing met vers gemaakte nitrietoplossing dag. </li><li> Na elke belichtingstijd, verwijder de nitriet met een transfer pipet. Voeg 50 ml van de E3 buffer en schud de schotel meerdere malen uit te spoelen de nitriet. Verwijder deze E3 buffer met een transfer pipet en herhaal de wasstap nog 2 keer. </li></ol></li><li> 3 Petrischalen (elk 50 embryo) en 2 HPF Verwijder de E3 buffer met een transfer pipet en voeg 50 ml van 200 mg / l natrium nitriet. Herhaal dit met 400, 600, 800 en 1000 mg / L natriumnitriet. <ol><li> Voortzetting van de embryo&#39;s bloot te stellen aan nitriet voor 70 uur. Vervang de nitrietoplossing met vers gemaakte nitrietoplossing dag. </li><li> Na de belichtingstijd, verwijder de nitriet met een transfer pipet. Voeg 50 ml van de E3 buffer en schud de schotel meerderekeer te wassen van de nitriet. Verwijder deze E3 buffer met een transfer pipet en herhaal de wasstap nog 2 keer. </li></ol></li><li> 3 Petrischalen (elk 50 embryo) en 2 HPF Verwijder de E3 buffer met een transfer pipet en voeg 50 ml van 1000 mg / l natrium nitraat opgelost in E3 buffer. Bevestigen de concentratie van de voorraadoplossing nitraatoplossing vooraf onder gewijzigde cadmium reductie (USEPA Methode 353,3) spectrofotometrische methode 28. <ol><li> Voortzetting van de embryo&#39;s bloot te stellen aan nitraat voor 70 uur. Vervang de nitraat-oplossing met vers gemaakte nitraat oplossing dagelijks. </li><li> Na de belichtingstijd, verwijder het nitraat met een transfer pipet. Voeg 50 ml van de E3 buffer en schud de schotel meerdere malen uit te spoelen het nitraat. Verwijder deze E3 buffer met een transfer pipet en herhaal de wasstap nog 2 keer. </li></ol></li><li> Tijdens elke dag van de blootstelling, tel het aantal dode embryo / larven met behulp van een stereomicroscoop. Tekenen van de doodonder meer het ontbreken van de hartslag en de bloedsomloop, of het gebrek aan beweeglijkheid na 1 min van waarneming. Verwijderen dode embryo / larven met een transfer pipet om verontreiniging van het E3 buffer verminderen. </li><li> Bij experimenten eindigen bij 120 HPF, euthanaseren de larven. <ol><li> Verwijder de E3 buffer met een transfer pipet. Voeg vervolgens 50 ml van 0,2% MS-222 (gebufferd tot pH 7) en wacht 10 minuten. </li><li> Verwijder de MS-222 met een transfer pipet. Voeg 50 ml van de E3 buffer en krul uit te spoelen de MS-222. </li><li> Verwijder de E3 buffer met een transfer pipet en voeg 20 ml van 4% paraformaldehyde (PFA) aan de larven te repareren. Swirl de schotel meerdere malen. Gebruik een pipet om de overdracht larven over in een glazen flesje met PFA voldoende om het flesje te vullen. Bewaar de injectieflacons in de koelkast &#39;s nachts (O / N). </li></ol></li><li> Maak foto&#39;s van de vaste larven met behulp van een stereoscoop met een digitale camera. Gebruik 30X vergroting, ISO 200 en 200 msec belichtingstijd. Oriënteer de larven, zodat de voorste naar de left en de dorsale is om de top van het veld. </li></ol>

<ol><li>Gilbert-Barness, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Teratogenic+causes+of+malformations%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Clin+Lab+Sci%22%5BJournal%5D)">Teratogenic causes of malformations.</a> Ann Clin Lab Sci. 40 (2), 99-114 (2010).</li>
<li>Brent, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cause+and+prevention+of+human+birth+defects%3A+What+have+we+learned+in+the+past+50+years%5BTitle%5D)+AND+%22Con+Anom%22%5BJournal%5D)">The cause and prevention of human birth defects: What have we learned in the past 50 years.</a> Con Anom. 41 (1), 3-21 (2001).</li>
<li>Lin, S., Zhao, Y., Nel, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish%3A+an+in+vivo+model+for+nano+EHS+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Zebrafish: an in vivo model for nano EHS studies.</a> Small. 9 (9-10), 1608-1618 (2013).</li>
<li>Pamanji, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxicity+effects+of+profenofos+on+embryonic+and+larval+development+of+zebrafish+%28Danio+rerio%29%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Toxicol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Toxicity effects of profenofos on embryonic and larval development of zebrafish (Danio rerio).</a> Environ Toxicol Pharmacol. 39 (2), 887-897 (2015).</li>
<li>Simmons, A. E., Karimi, I., Talwar, M., Simmons, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+nitrite+on+development+of+embryos+and+early+larval+stages+of+the+zebrafish+%28Danio+rerio%29%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">Effects of nitrite on development of embryos and early larval stages of the zebrafish (Danio rerio).</a> Zebrafish. 9 (4), 200-206 (2012).</li>
<li>Mantecca, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxicity+Evaluation+of+a+New+Zn-Doped+CuO+Nanocomposite+With+Highly+Effective+Antibacterial+Properties%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Sci%22%5BJournal%5D)">Toxicity Evaluation of a New Zn-Doped CuO Nanocomposite With Highly Effective Antibacterial Properties.</a> Toxicol Sci. , (2015).</li>
<li>Jensen, F. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitric+oxide+formation+from+nitrite+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Biol%22%5BJournal%5D)">Nitric oxide formation from nitrite in zebrafish.</a> J Exp Biol. 210, 3387-3394 (2007).</li>
<li>Scholz, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+embryo+model+in+environmental+risk+assessment--applications+beyond+acute+toxicity+testing%29%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Sci+Pollut+Res+Int%22%5BJournal%5D)">The zebrafish embryo model in environmental risk assessment--applications beyond acute toxicity testing).</a> Environ Sci Pollut Res Int. 15 (5), 394-404 (2008).</li>
<li>Howe, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+reference+genome+sequence+and+its+relationship+to+the+human+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The zebrafish reference genome sequence and its relationship to the human genome.</a> Nature. 496 (7446), 498-503 (2013).</li>
<li>CDC. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+abortions+possibly+related+to+ingestion+of+nitrate-contaminated+well+water--LaGrange+County%2C+Indiana%2C+1991-1994%5BTitle%5D)+AND+%22MMWR+Morb+Mortal+Wkly+Rep%22%5BJournal%5D)">Spontaneous abortions possibly related to ingestion of nitrate-contaminated well water--LaGrange County, Indiana, 1991-1994.</a> MMWR Morb Mortal Wkly Rep. 45 (26), 569-572 (1996).</li>
<li>Brender, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prenatal+nitrate+intake+from+drinking+water+and+selected+birth+defects+in+offspring+of+participants+in+the+national+birth+defects+prevention+study%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Health+Perspect%22%5BJournal%5D)">Prenatal nitrate intake from drinking water and selected birth defects in offspring of participants in the national birth defects prevention study.</a> Environ Health Perspect. 121 (9), 1083-1089 (2013).</li>
<li>Huber, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+dietary+intake+of+nitrates%2C+nitrites+and+nitrosamines+and+selected+birth+defects+in+offspring%3A+a+case-control+study%5BTitle%5D)+AND+%22Nutr+J%22%5BJournal%5D)">Maternal dietary intake of nitrates, nitrites and nitrosamines and selected birth defects in offspring: a case-control study.</a> Nutr J. 12, 34(2013).</li>
<li>Phillips, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Naturally+occurring+nitrate+and+nitrite+in+foods+in+relation+to+infant+methaemoglobinaemia%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Cosmet+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Naturally occurring nitrate and nitrite in foods in relation to infant methaemoglobinaemia.</a> Food Cosmet Toxicol. 9 (2), 219-228 (1971).</li>
<li>Moncada, S., Palmer, R. M., Higgs, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitric+oxide%3A+physiology%2C+pathophysiology%2C+and+pharmacology%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Rev%22%5BJournal%5D)">Nitric oxide: physiology, pathophysiology, and pharmacology.</a> Pharmacol Rev. 43 (2), 109-142 (1991).</li>
<li>Gladwin, M. T., Crawford, J. H., Patel, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biochemistry+of+nitric+oxide%2C+nitrite%2C+and+hemoglobin%3A+role+in+blood+flow+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radic+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">The biochemistry of nitric oxide, nitrite, and hemoglobin: role in blood flow regulation.</a> Free Radic Biol Med. 36 (6), 707-717 (2004).</li>
<li>Gupta, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recurrent+acute+respiratory+tract+infections+in+areas+with+high+nitrate+concentrations+in+drinking+water%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Health+Perspect%22%5BJournal%5D)">Recurrent acute respiratory tract infections in areas with high nitrate concentrations in drinking water.</a> Environ Health Perspect. 108 (4), 363-366 (2000).</li>
<li>Kross, B. C., Ayebo, A. D., Fuortes, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methemoglobinemia%3A+nitrate+toxicity+in+rural+America%5BTitle%5D)+AND+%22Am+Fam+Physician%22%5BJournal%5D)">Methemoglobinemia: nitrate toxicity in rural America.</a> Am Fam Physician. 46 (1), 183-188 (1992).</li>
<li>Greer, F. R., Shannon, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infant+methemoglobinemia%3A+the+role+of+dietary+nitrate+in+food+and+water%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Infant methemoglobinemia: the role of dietary nitrate in food and water.</a> Pediatrics. 116 (3), 784-786 (2005).</li>
<li>Sanchez-Echaniz, J., Benito-Fernandez, J., Mintegui-Raso, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methemoglobinemia+and+consumption+of+vegetables+in+infants%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Methemoglobinemia and consumption of vegetables in infants.</a> Pediatrics. 107 (5), 1024-1028 (2001).</li>
<li>Reregistration Eligibility Decision: Inorganic Nitrate/Nitrite (Sodium and Potassium Nitrates). , U.S. Environmental Protection Agency. Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.epa.gov/oppsrrd1/REDs/old_reds/4052red.pdf">http://www.epa.gov/oppsrrd1/REDs/old_reds/4052red.pdf</a> (1991).</li>
<li>Virtanen, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitrate+and+nitrite+intake+and+the+risk+for+type+1+diabetes+in+Finnish+children.+Childhood+Diabetes+in+Finland+Study+Group%5BTitle%5D)+AND+%22Diabet+Med%22%5BJournal%5D)">Nitrate and nitrite intake and the risk for type 1 diabetes in Finnish children. Childhood Diabetes in Finland Study Group.</a> Diabet Med. 11 (7), 656-662 (1994).</li>
<li>Case Studies in Environmental Medicine: Nitrate/Nitrite Toxicity. , U.S. Agency for Toxic Substances and Diseases Registry. Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.atsdr.cdc.gov/HEC/CSEM/nitrate/docs/nitrate_nitrite.pdf">http://www.atsdr.cdc.gov/HEC/CSEM/nitrate/docs/nitrate_nitrite.pdf</a> (2001).</li>
<li>Reimers, M. J., Flockton, A. R., Tanguay, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethanol-+and+acetaldehyde-mediated+developmental+toxicity+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotoxicol+Teratol%22%5BJournal%5D)">Ethanol- and acetaldehyde-mediated developmental toxicity in zebrafish.</a> Neurotoxicol Teratol. 26 (6), 769-781 (2004).</li>
<li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWesterfield%2C+M+%22The+zebrafish+book%3A+A+guide+for+the+laboratory+use+of+zebrafish+%28Danio+rerio%29%22">The zebrafish book: A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio)</a>. , 5th edn, University of Oregon Press. (2007).</li>
<li>Loucks, E., Carvan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strain-dependent+effects+of+developmental+ethanol+exposure+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotoxicol+Teratol%22%5BJournal%5D)">Strain-dependent effects of developmental ethanol exposure in zebrafish.</a> Neurotoxicol Teratol. 26 (6), 745-755 (2004).</li>
<li>Bilotta, J., Barnett, J. A., Hancock, L., Saszik, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethanol+exposure+alters+zebrafish+development%3A+a+novel+model+of+fetal+alcohol+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotoxicol+Teratol%22%5BJournal%5D)">Ethanol exposure alters zebrafish development: a novel model of fetal alcohol syndrome.</a> Neurotoxicol Teratol. 26 (2), 737-743 (2004).</li>
<li>Li, J., Jia, W., Zhao, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Excessive+nitrite+affects+zebrafish+valvulogenesis+through+yielding+too+much+NO+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Excessive nitrite affects zebrafish valvulogenesis through yielding too much NO signaling.</a> PLoS One. 9 (3), e92728(2014).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Methods+for+chemical+analysis+of+water+and+wastes%22">Methods for chemical analysis of water and wastes</a>. , United States Environmental Protection Agency. Cincinnati, OH. Environmental Monitoring and Support Laboratory, Office of Research and Development (1983).</li>
<li>Loucks, E., Ahlgren, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+teratogenic+changes+in+a+zebrafish+model+of+fetal+alcohol+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Assessing teratogenic changes in a zebrafish model of fetal alcohol exposure.</a> J Vis Exp. (61), (2012).</li>
<li>Addiscott, T. M. Fertilizers and nitrate leaching. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAddiscott%2C+TM+%22Agricultural+Chemicals+and+the+Environment%2C+Issues+in+Environmental+Science+and+Technology%22">Agricultural Chemicals and the Environment, Issues in Environmental Science and Technology</a>. , book 5 1-26 (1996).</li>
<li>Su, Y. F., Lu, L. H., Hsu, T. H., Chang, S. L., Lin, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+treatment+of+methemoglobinemia+in+an+elderly+couple+with+severe+cyanosis%3A+two+case+reports%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medical+Case+Reports%22%5BJournal%5D)">Successful treatment of methemoglobinemia in an elderly couple with severe cyanosis: two case reports.</a> Journal of Medical Case Reports. 6 (290), (2012).</li>
<li>Harvey, M., Cave, G., Chanwai, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatal+methaemoglobinaemia+induced+by+self-poisoning+with+sodium+nitrite%5BTitle%5D)+AND+%22Emergency+Medicine+Australasia%22%5BJournal%5D)">Fatal methaemoglobinaemia induced by self-poisoning with sodium nitrite.</a> Emergency Medicine Australasia. 22, 463-465 (2010).</li>
<li>Nishiguchi, M., Nushida, H., Okudaira, N., Nishio, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+autopsy+case+of+fatal+methemoglobinemia+due+to+ingestion+of+sodium%5BTitle%5D)+AND+%22Forensic+Research%22%5BJournal%5D)">An autopsy case of fatal methemoglobinemia due to ingestion of sodium.</a> Forensic Research. 6, (2015).</li>
<li>Avdesh, A., Chen, M., Martin-Iverson, M. T., Mondal, A., Ong, D., Rainey-Smith, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regular+Care+and+Maintenance+of+a+Zebrafish+%28Danio+rerio%29+Laboratory%3A+An+Introduction%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Regular Care and Maintenance of a Zebrafish (Danio rerio) Laboratory: An Introduction.</a> J. Vis. Exp. (69), (2012).</li>
<li>Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Dev Dyn. 203 (3), 253-310 (1995).</li>
<li>White, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transparent+adult+zebrafish+as+a+tool+for+in+vivo+transplantation+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Transparent adult zebrafish as a tool for in vivo transplantation analysis.</a> Cell Stem Cell. 2 (2), 183-189 (2008).</li>
<li>Tsang, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish%3A+A+tool+for+chemical+screens%5BTitle%5D)+AND+%22Birth+Defects+Res+C+Embryo+Today%22%5BJournal%5D)">Zebrafish: A tool for chemical screens.</a> Birth Defects Res C Embryo Today. 90 (3), 185-192 (2010).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

De hier beschreven methode toont de bruikbaarheid van zebravis bij de beoordeling van de teratogene potentie van nitriet en nitraat. Vergeleken met andere gewervelde dieren, zebravis hebben voordelen die hoge vruchtbaarheid, externe bevruchting, optische transparantheid en snelle ontwikkeling omvatten. Verkrijgbaar mutanten die pigmentatie missen (zoals de zebravis Casper 36) dragen eveneens bij aan de zichtbaarheid van de inwendige organen te verbeteren. Het is ook gemakkelijk om transgene zebravis met repor...

Teratogenese is een proces dat de normale ontwikkeling van een embryo of foetus verstoort door het veroorzaken van blijvende structurele en functionele abnormaliteiten, groeiachterstand, miskraam of in ernstige gevallen 1. Het kan worden veroorzaakt door bepaalde natuurlijke middelen (teratogens), die interfereren met de embryonale ontwikkeling op verschillende manieren 2. Tijdens de foetale ontwikkeling van de mens, hebben gemeenschappelijke teratogens zoals straling, infectieuze agentia, giftige metalen en organische chemicaliën gemeld om defecten in epicanthic plooien (de huidplooi in het bovenste ooglid) en clinodactyly (gekromde vinger of teen) door middel van morfogenetische fouten veroorzaken 1. Het begrijpen van de moleculaire mechanisme van teratogenese is de eerste stap naar de ontwikkeling van de behandeling en preventie. Verscheidene vertebrate modellen zoals de Afrikaanse klauwkikker (Xenopus laevis) en de zebravis (Danio rerio) zijn gebruikt om de moleculaire mechanismen die door terat bepalenOgens. Eerdere studies hebben zebravis als model voor de epidemiologie, toxicologie en teratogenese 3-7. Scholz et al. beschouwd zebravis als een &quot;gouden standaard&quot; voor de beoordeling milieutoxiciteit. Dit is deels te wijten aan de transparantie van het zebravis embryo, waardoor onderzoekers de ontwikkelingsdefect voorstellen als het zich voordoet 8. Ongeveer 70% van de menselijke genen orthologen in zebravis, waardoor zebravis een wenselijke vertebrate Modelmatige menselijke fouten 9. Sommige epidemiologische studies hebben gesuggereerd dat nitraat en nitriet, vaak in de boerderij voedingsmiddelen en water, worden geassocieerd met aangeboren afwijkingen of spontane abortus 10,11, terwijl andere studies niet deze vereniging 12 ondersteunen. Nitraat (NO 3 -) en nitriet (NO 2 -) zijn van nature aanwezig in de bodem en het water. Ze zijn een stikstofbron voor planten en zijn een deel van de nitrogen cyclus 13. Voedingsmiddelen zoals groene bonen, wortelen, squash, spinazie, en bieten uit bedrijven die meststoffen hoog in nitraat gebruiken aanzienlijk vergroot niveaus van nitraat en nitriet 7. Melk van koeien gevoed met hoog nitraatgehalte voedingsmiddelen en vis in hoog nitraatgehalte water (vooral uit de bodem runoff 30) kan leiden tot de mens consumeren van grote hoeveelheden nitraat en nitriet 14. Nitraat en nitriet worden ook vaak gebruikt in voedselbehoud dat de ingenomen door mensen 12 hoeveelheid drastisch verhoogt. Optimale niveaus van nitraat en nitriet speelt een fundamentele rol in fysiologische processen zoals de vasculaire homeostase en functie, neurotransmissie en immunologische afweer mechanismen 13-15. Echter, kan de blootstelling aan hoge niveaus van nitraat en nitriet leiden tot nadelige effecten, vooral bij zuigelingen en kinderen 16. Ingested nitraat verder omgezet in nitriet in de mondholte van microflora en in The maagdarmkanaal door darmflora 17. Nitraat zet baby op een hoog risico voor de Blauwe baby door oxidatie van hemoglobine tot methemoglobine, afbreuk hemoglobine uit de zuurstof-dragende vermogen 18. Dit leidt tot de blauwe kleur van de huid die zich uitstrekt tot de perifere weefsels in meer ernstige gevallen. Remde zuurstofvoorziening van de weefsels resultaten in andere symptomen, zwaarst leiden tot coma en de dood 19,20. Soortgelijke symptomen zijn waargenomen bij baby&#39;s en volwassenen bij hogere concentraties nitraat 21. Verhoogde niveaus van methemoglobine bij volwassenen als gevolg van nitriet vergiftiging resultaten in cyanose, hoofdpijn, ademhalingsstoornissen 31, en ​​de dood als deze niet behandeld als gevolg van complicaties in verband met vitale weefselhypoxie 32,33. Nitraat ingenomen op hogere niveaus kan ook leiden tot verschillende gezondheidsproblemen complicaties. Jeugd diabetes, terugkerende diarree en recidiverende luchtweginfectiesbij kinderen in verband gebracht met een hoge inname van nitraat 11,17,22. Chronische blootstelling aan een hoog nitraatgehalte wordt geassocieerd met plassen en bloedingen milt. Acute blootstelling hoge dosis nitraten kan leiden tot een breed spectrum van medische aandoeningen zoals buikpijn, spierzwakte, bloed in de ontlasting en urine, flauwvallen en 11 dood. Prenatale blootstelling aan nitraat op een hoog niveau is geassocieerd met neurale buis en musculoskeletale defect 11. Een recent rapport toonde aan dat de behandeling van de zebravis embryo&#39;s met nitriet leidde tot sac oedeem, craniofaciale en axiale misvormingen dooier, en zwemblaas noninflation 5. In deze studie demonstreren we een werkwijze voor het behandelen zebravisembryo&#39;s met nitraat en nitriet hun teratogeen effect bepalen. Embryo&#39;s werden blootgesteld aan verschillende concentraties nitriet en verschillende tijdsduren. Ethanol werd gebruikt als een positieve controle, omdat het een gevestigde teratogeen 23. Our methode toonde dat zowel hoge concentraties en lange blootstellingstijden aan nitriet waren nadelig voor overleving en resulteerde in verschillende fenotypes, variërend van licht (oedeem) tot ernstig (bruto ontwikkelingsdefecten). Daarom is de zebravis is een bruikbaar model voor het direct het verkennen van de mogelijke teratogene effecten van nitraat en nitriet op embryo&#39;s epidemiologische studies aan te vullen.

<table><tbody><tr><td>DREL/2010 instrument</td><td>Hach</td><td>26700-03</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E7023</td><td></td></tr><tr><td>KIMAX glass Petri Dish</td><td>VWR</td><td>89001-244</td><td></td></tr><tr><td>MS-222</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E10521</td><td></td></tr><tr><td>NitraVer 5 Nitrate Reagent</td><td>Hach</td><td>14034-46</td><td></td></tr><tr><td>NitriVer 3 Nitrite Reagent</td><td>Hach</td><td>14065-99</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Fisher Scientific</td><td>3-374-10</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>158127</td><td></td></tr><tr><td>S6E stereomicroscope</td><td>Leica</td><td>10446294</td><td></td></tr><tr><td>Sodium nitrate</td><td>Fisher Scientific</td><td>S343</td><td></td></tr><tr><td>Sodium nitrite</td><td>Fisher Scientific</td><td>S347</td><td></td></tr><tr><td>Transfer pipets</td><td>Laboratory Products Sales</td><td>L320072</td><td></td></tr><tr><td>Glass vials</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-338B</td><td></td></tr></tbody></table>

zebravis als een model om de teratogene potentie van nitriet assess

Zebrafish as a Model to Assess the Teratogenic Potential of Nitrite

Hoog nitraatgehalte in het milieu kan leiden tot aangeboren afwijkingen of miskramen bij de mens. Vermoedelijk komt dit door de omzetting van nitraat in nitriet door darm en speeksel bacteriën. Echter, in andere zoogdieren studies, hoge nitriet niveaus niet leiden tot aangeboren afwijkingen, maar ze kunnen leiden tot slechte reproductieve uitkomsten. Zo is het teratogeen potentieel van nitriet is niet duidelijk. Het zou nuttig zijn een vertebraat modelsysteem teratogene effecten van nitriet of andere chemische plaats gemakkelijk beoordeling te zijn. Hier tonen we het nut van de zebravis (Danio rerio) om verbindingen op toxiciteit en embryonale afwijkingen te screenen. Zebravis embryo&#39;s worden extern bevrucht en hebben een snelle ontwikkeling, waardoor ze een goed model voor teratogene studies. We tonen aan dat het verhogen van de tijd van blootstelling aan nitriet negatief beïnvloedt overleving. Verhogen van de concentratie van nitriet ook afbreuk overleven, terwijl nitraat niet. Voor embryo&#39;s that overleven nitriet blootstelling, kunnen diverse gebreken voordoen, met inbegrip pericardiale en dooierzak oedeem, zwemblaas noninflation en craniofaciale misvormingen. Onze resultaten geven aan dat de zebravis is handig voor het bestuderen van teratogene eigenschappen van nitriet. Deze benadering kan eenvoudig worden aangepast aan andere teststoffen op hun effecten op de vroege ontwikkeling van vertebraten.

Blootstelling aan 300 mM ethanol gedurende 22 uur had geen effect op de overleving (gegevens niet getoond), in overeenstemming met eerdere rapporten 5,23,26. Dit wordt verwacht, ethanol is een bekende teratogeen en diende als een positieve controle. Waargenomen fenotypes inbegrepen pericardiale oedeem, blaas noninflation swim (figuur 1), craniofaciale defecten, en ontwikkelingsachterstand (gegevens niet getoond). <p class="jove_content" fo:keep-together.wi...

Blootstelling aan teratogens kan geboorteafwijkingen veroorzaken. Zebravis zijn nuttig voor het bepalen van het teratogeen potentieel van chemicaliën. We demonstreren het nut van zebravis embryo&#39;s door blootstelling aan verschillende niveaus van nitriet en ook op verschillende tijden van blootstelling. We tonen aan dat nitriet giftig zijn en ernstige ontwikkelingsstoornissen.

Zebravis als een model om de teratogene potentie van nitriet Assess

High nitrate levels in the environment may&#160;result in congenital defects or miscarriages in humans. Presumably, this is due to the conversion of ...

Het algemene doel van deze procedure is om zebravissenembryo's te behandelen met nitriet en het teratogene effect ervan vast te stellen. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van enkele kernvragen op het gebied van ontwikkelingstoxicologie, zoals het beoordelen van de teratogene effecten van chemicaliën op de embryonale ontwikkeling. Het belangrijkste voordeel van deze procedure is dat er gebruik wordt gemaakt van zebravissenembryo's, die zich extern ontwikkelen en onder een microscoop kunnen worden geobserveerd.Houd voor de hier gedemonstreerde experimenten wild-type zebravisstammen, zoals de Tuebingen-stam, bij 28,5 °C en een licht-donkercyclus van respectievelijk 14 uur en 10 uur. Voeg de avond vóór het oogsten van de eieren viswater en dividers toe aan de paringstanks en plaats de mannetjes- en vrouwtjesvissen aan weerszijden van de divider. Om te garanderen dat er voldoende eieren worden geproduceerd, worden 30 paren vissen klaargezet.De volgende ochtend, nadat de lichten zijn aangegaan, verwijdert u de scheidingswanden om de paring te initiëren. Controleer de paaitanks elke 15 minuten op eitjes. Zodra de vissen eitjes hebben gelegd, gebruikt u een theezeefje om de embr

zebrafish-as-a-model-to-assess-the-teratogenic-potential-of-nitrite

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Om de moleculaire mechanismen van de ethanol-geïnduceerde ontwikkelingsschade begrijpen, hebben we een zebravis model van ethanol blootstelling en het verkennen van de fysieke, cellulaire en genetische veranderingen die optreden na blootstelling aan...

Het beoordelen van Teratogene Veranderingen in een zebravis model van foetale blootstelling aan alcohol

Hier presenteren we een protocol te onderzoeken larvale zebravis en fathead minnow motorische activiteiten en photomotor Reacties (PMR) met behulp van een geautomatiseerd tracking-software. Wanneer opgenomen in algemene toxicologie bioassays, geven analyses van deze gedragingen een diagnostisch instrument om te onderzoeken van chemische topicale. Dit protocol wordt beschreven met behulp van cafeïne, een neurostimulant model.

Experimentele Protocol voor de behandeling van de gedragsmatige reactie profielen in larvale vissen: toepassing op de Neuro-stimulerende cafeïne

Het doel van dit protocol is voor het meten van de transittijd van fluorescently geëtiketteerde voedsel door de darm van larvale zebrafish in een hoge doorvoersnelheid mode.

High-throughput meting van darm transittijd met behulp van larvale zebravis

Zebravis embryo's worden gebruikt voor het evalueren van de toxiciteit van chemische verbindingen. Ze ontwikkelen zich extern en zijn gevoelig voor chemicaliën, waardoor subtiele fenotypische veranderingen kunnen worden opgespoord. Het experiment vereist slechts een kleine hoeveelheid stof, die direct wordt toegevoegd aan de plaat die embryo's bevat, waardoor het testsysteem efficiënt en kosteneffectief is.

Snelle evaluatie van de toxiciteit van chemische verbindingen met behulp van zebravis embryo's

Een gedetailleerd experimenteel protocol wordt gepresenteerd in dit document voor de evaluatie van neurobehavioral toxiciteit van milieuverontreinigende stoffen met behulp van een zebravis larven model, met inbegrip van het blootstellingsproces en tests voor neurobehavioral indicatoren.

Neurobehavioral Effecten van milieuverontreinigende stoffen op zebravissenlarven bestuderen

Dit protocol beschrijft de procedures om acute nierschade (AKI) te veroorzaken bij volwassen zebravissen met cisplatine als nefrotoxisch middel. We beschreven de stappen om de reproduceerbaarheid van de techniek te evalueren en twee technieken om respectievelijk ontsteking en celdood in het nierweefsel, flowcytometrie en TUNEL te analyseren.

Acuut nierletselmodel geïnduceerd door Cisplatine bij volwassen zebravissen

De verhoogde snelheid van farmaco- en toxicokinetische analyses van metalen en op metaal gebaseerde verbindingen in zebravissen kan voordelig zijn voor milieu- en klinische vertaalstudies. De beperking van onbekende blootstelling aan water werd overwonnen door sporenmetaalanalyse uit te voeren op verteerd zebravisweefsel met behulp van inductief gekoppelde plasmamassaspectrometrie.

Dosisopname van op platina en ruthenium gebaseerde samengestelde blootstelling bij zebravissen door inductief gekoppelde plasmamassaspectrometrie met bredere toepassingen

De zebravis is onlangs gebruikt als model om potentiële stralingsmodificatoren te valideren. Het huidige protocol beschrijft de gedetailleerde stappen om zebravisembryo's te gebruiken voor op straling gebaseerde screeningsexperimenten en enkele observationele benaderingen om het effect van verschillende behandelingen en bestraling te evalueren.

Zebravislarven als model om potentiële radiosensibilisatoren of beschermers te evalueren

Hier presenteren we een uitgebreide gedragstestbatterij, inclusief de nieuwe tank-, Shoaling- en sociale voorkeurstests, om de potentiële neurotoxische effecten van chemicaliën (bijv. methamfetamine en glyfosaat) op volwassen zebravissen effectief te bepalen met behulp van een enkele tank. Deze methode is relevant voor neurotoxiciteit en milieuonderzoek.

Beoordeling van neurotoxiciteit bij volwassen Danio rerio met behulp van een reeks gedragstests in een enkele tank

We beschrijven de workflow en data-analyse van een screeningssysteem voor het evalueren van de toxiciteit van chemische verbindingen op basis van de schrikreactie van zebravisembryo's. Het systeem registreert de bewegingen van zebravisembryo's bij blootstelling aan een trillingsstimulus en maakt een geïntegreerde evaluatie van algemene toxiciteit/letaliteit en neuromusculaire toxiciteit mogelijk.

Evaluatie van de toxiciteit van chemicaliën met behulp van een Zebrafish Vibration Startle Response Screening System

Dit protocol beschrijft een screeningprocedure voor geneesmiddelen bij zebravislarven 3-7 dagen na de bevruchting, gevolgd door morfologische beoordeling.

Screening van kleine moleculen en toxiciteitstesten bij zebravislarven in een vroeg stadium

Ontdek hoe je de teratogene effecten van nitriet beoordeelt in zebraviseieren. Deze methode maakt externe ontwikkeling en microscopische observatie mogelijk voor toxicologisch onderzoek.

Zebravis als een model om de teratogene potentie van nitriet Assess

Meer video's verkennen