Name: Transarterial Toediening van Oncolytic Virussen voor Locoregionale Therapie van Orthotope HCC in Ratten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-04-15T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 55 s
Description: Leer hoe je oncolytische virussen via de leverarterie toedient voor locoregionale therapie van hepatocellulair carcinoom bij ratten. Deze methode maakt hoge titers en gerichte behandeling van meerdere tumoren mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk wordt ondersteund door de SFB 824 subprojecten C6 en C7 (DFG Sonderforschungsbereich 824), German Research Foundation, Bonn, Duitsland.

Let op: De volgende stappen zijn uitgevoerd in overeenstemming met de richtlijnen van onze instelling en de lokale overheid van Beieren, Duitsland. Alle pogingen om dit protocol te reproduceren dient te geschieden in naleving met de lokale richtlijnen voor de humane behandeling van dieren, zoals gedicteerd door lokale dierlijke zorg en het gebruik commissie. Bijvoorbeeld, veel instituten vereisen dat steriele handschoenen worden gedragen tijdens knaagdier chirurgie. Bovendien moet het werk met virussen worden uitgevoerd in overeenstemming met de plaatselijke regelgeving, zorg voor persoonlijke en milieuveiligheid. Zorg moet worden genomen om goed te ontdoen van verontreinigd afval en instrumenten en werkruimte schoon te maken (dat wil zeggen, autoclaaf en reiniging met een geschikt antiviraal ontsmettingsmiddel volgens de instructies van de fabrikant). 1. Voorbereidingen Voordat u aan Surgery <ol><li> Steriliseren chirurgische instrumenten (dat wil zeggen, in de autoclaaf). </li><li> Verdun het virus aan de KREDIETENiate concentratie die varieert afhankelijk van de toxiciteit van het specifieke virus wordt gebruikt en de gevoeligheid van de rat stam. Opmerking: Bijvoorbeeld, bij gebruik van vesiculaire stomatitis bij mannelijke Buffalo ratten, we meestal injecteren 10 7 pfu in een volume van 1 ml, dat is de maximaal getolereerde dosis in dat model. <ol><li> Prefill het virus (met behulp van aseptische techniek) in 1 ml injectiespuiten, en bevestig 30 G naalden, zorg ervoor dat de lucht uit de spuit en naald. </li></ol></li><li> Bereid de chirurgische ruimte met alle materialen en apparatuur die nodig is, en spuit het gebied met ethanol te desinfecteren. Vul een klein bakje met steriele zoutoplossing (0,9% NaCl) voor het bevochtigen van gaas swabs en wattenstaafje applicators. </li></ol> 2. Voorbereiding van de Rat <ol><li> Dien een pijnstiller (zoals aangegeven door de lokale dierlijke zorg en het gebruik commissie), bij de juiste dosis 30 minuten voor het begin van de chirurgische procedure. Bijvoorbeeld,toedienen van een hoge dosis metamizol (100-200 mg / kg). </li><li> Verdoven van de rat, door middel inhalering (isofluraan) of injecteerbare (dwz een mengsel van Medetomidine (0,15 mg / kg), Midazolam (2 mg / kg) en fentanyl (0,005 mg / kg), ook bekend als MMF) anesthesie. Dien isolflurane door middel van een verdamper bij 1-3% en aan te passen als nodig is om een ​​normale ademhaling en de hartslag te houden. <ol><li> Voordat u verder gaat, ervoor zorgen dat de rat volledig verdoofd en niet in staat om pijn te voelen door knijpen de voet pad en observeren voor een reactie. </li><li> Breng een veterinaire oogzalf tot droog te voorkomen tijdens de anesthesie. </li></ol></li><li> Scheer de buik van het borstbeen naar beneden tot net boven de genitaliën met een kleine veterinaire tondeuse. Zorg ervoor dat een glad scheerresultaat te bereiken zonder de huid te beschadigen. </li><li> Bevestig de rat aan de chirurgische bed met behulp van tape op de voor- en achterpoten en, bij gebruik van inhalatie-anesthesie, plaatst u de snuit in een voldoende omvang neuskegel. Plaats een verwarmingselementonder het rat lichaamstemperatuur te handhaven. Ontsmet het buikgebied met een chirurgische kwaliteit ontsmettingsmiddel, gevolgd door een spoeling alcohol en toepassing van een antisepticum verf. </li></ol> 3. Laparotomie <ol><li> Met behulp van een kleine gebogen scalpel, zoals # 15, een kleine verticale incisie in de huid laag direct langs de middellijn. Verleng de incisie tot aan de xyphoid proces. Vervolgens incise de spierlaag door voorzichtig te tillen met een paar Adson tang om een ​​scalpel incisie en trek de insnijding tot aan de xyphoid proces chirurgische schaar. Let erop dat de organen van de buikholte doorboren of de kleine bloedvaten aan weerszijden van de xyphoid nadelig beïnvloeden. </li><li> Plaats een retractor over de buik om de spieren en huid te verspreiden en bloot de hele buikstreek. </li><li> Bevochtig twee 7,5 x 7,5 cm 2 gaaskompressen met steriele fysiologische zoutoplossing en gespreid over één boven de chirurgischeopening en een over de bodem, zoals getoond in figuur 2A. </li></ol> 4. Isolatie van de leverslagader <ol><li> Met behulp van twee bevochtigde katoenen applicator doekjes bevochtigd met een steriele fysiologische zoutoplossing, de darmen en blindedarm til uit de buikholte, en leg ze op de lagere gaas swab. Vouw het gaas naar de organen vochtig te houden en om ze uit de weg te houden. </li><li> Met behulp van twee bevochtigde katoenen applicator wattenstaafjes, voorzichtig til de linker laterale lever kwab, die de meest overheersende kwab gezien in dit stadium zal zijn. Flip de lob omhoog en, met een paar kleine lente schaar, dwars door de vezelige membraan aan de onderzijde van de nok, zodat de lob volledig opgeklapt worden en rusten bovenop de eerder geplaatste gaas doekje. Vouw het gaas swab over de kwab om het te houden op zijn plaats. </li><li> Verder met de volgende kwab (de voorste nucleus caudatus), die nu de voorkwab gezien. met the behulp van een dissectie microscoop en fijne tang, ontleden het dun membraan rond de kwab om deze los en laat hem vrij omhoog worden omgedraaid. Plaats de lob onder het gaas staafje met de linker laterale lob. </li><li> Let op de achterste Spiegelse kwab, die nu zichtbaar zal zijn. Herhaal stap 4.3 met het achterste Spiegelse kwab volledig te ontleden en te spiegelen naar boven en in het gaas samen met de eerder geplaatste lever lobben. </li><li> Net onder de oorspronkelijke positie van de Spiegelse kwab, vindt de leverslagader, die nu zichtbaar en gemakkelijk te herkennen aan zijn sterke pulsaties zal zijn. Naar aanleiding van de slagader naar de anatomische rechts, let op de dikke membraneuze materiaal verduistert de gastroduodenale en de juiste lever slagaders uit het zicht. Met behulp van fijne tang, til dit materiaal en voorzichtig scheuren, zorg ervoor dat alle kleine schepen in dit gebied te voorkomen. Gebruik katoenen applicator doekjes om eventuele bloeden die kunnen optreden te stoppen. <ol><li> Zoek het eenrterial takken, die duidelijk zichtbaar met behulp van een stereomicroscoop bij de membranen goed worden ontleed. </li></ol></li><li> Met behulp van twee fijne, atraumatische pincet voorzichtig ontleden de leverslagader, gastroduodenale slagader en de juiste leverslagader zodat zij bevrijd zijn van de omliggende membranen (Figuur 2B). </li></ol> 5. Bereiding van de slagader voor injectie <ol><li> Laat een 7-0 Prolene hechtdraad onder de gastroduodenale slagader, en gebruik een micro-naaldhouder een vaste ligatuur binden aan het distale uiteinde, net boven de bifurcatie (zie Figuur 1 voor de juiste plaatsing). Rekening met ongeveer 2 inch hechtmateriaal nog op de uiteinden en klem ze een naaldhouder aan de slagader onderwezen trekken, zoals in figuur 2C. </li><li> Plaats een kleine klem op de leverslagader om de bloedstroom (figuur 2C) tijdelijk te blokkeren. Let op: Dit is important massale bloeden te voorkomen wanneer de naald uit de arterie verwijderd. Bovendien zal de blokkering van arteriële bloedstroom mogelijk maken langzamere virustoediening en betere transductie efficiëntie. <ol><li> Belangrijk: Werk snel om de hoeveelheid tijd die bloedstroom beperken gestopt - de injectie toe en daaropvolgende ligatie van de arterie binnen 5 min van klemmen van de leverslagader. </li></ol></li><li> Als het mogelijk is, de vergroting van de microscoop ontleden, zodanig dat de gastroduodenale slagader is in scherpe focus en lijkt groot genoeg om nauwkeurig steek de 30 G naald. Plaats de naald van de injectiespuit in het lumen van de gastroduodenale slagader en druk langzaam op de zuiger. Noot: De juiste plaatsing van de naald resulteert in de geïnjecteerde oplossing direct stroomt door het juiste hepatische slagader en naar de lever. <ol><li> Voer de injectie heel langzaam aan transductie efficiëntie te maximaliseren. </li></ol></li> &lt;li&gt; Zodra bij injectievolume is toegediend, langzaam trek de naald uit de slagader. Opmerking: Er mag geen bloeden uit de injectieplaats zijn. In het geval dat bloeding optreedt, betekent dit dat de klem niet goed geplaatst en moeten snel worden aangepast. </li></ol> 6. Closing <ol><li> Laat een tweede 7-0 Prolene hechtdraad onder de gastroduodenale slagader, en bind een tweede permanente ligatuur boven de injectieplaats. </li><li> Verwijder de klem van de leverslagader. Controleer of de bloedstroom door de juiste leverslagader naar de lever is hersteld. <ol><li> Snijd de losse eindjes van de ligaturen. </li></ol></li><li> Controleer dat er geen bloeden, voordat de darmen en de lever naar de buikholte. Zorg ervoor dat de appendix wordt teruggebracht in de oorspronkelijke oriëntatie. </li><li> Hechtdraad de spier en huid in afzonderlijke lagen met behulp van 4-0 vicryl hechtmateriaal met een gebogen naald. plaats Continuous hechtingen ongeveer 1 mm van elkaar en trek stevig vast. <ol><li> Tijdens de fase hechten, dienen een analgeticum zoals buprenorfine (0,05 mg / kg). </li></ol></li><li> Verwijder rat uit anesthesie. Als isofluraan is gebruikt, moet de rat bewustzijn binnen enkele minuten terug te krijgen. Als MMF is gebruikt als een injecteerbare verdoving antagoniseren met een subcutane injectie van Atipamezole (0,75 mg / kg), Flumazenil (0,2 mg / kg) en naloxon (9,12 mg / kg), die de effecten van de verdoving omkeren en laat de dieren weer bij bewustzijn komen binnen 20 minuten. Houd ratten warm met een infrarood opwarming lamp tijdens de eerste fase van ontwaken. <ol><li> Heeft een dier niet onbeheerd achter te laten tot het voldoende bewustzijn heeft herwonnen om borstligging handhaven. </li><li> Heeft een dier dat een operatie heeft ondergaan om het gezelschap van andere dieren tot volledig hersteld niet meer terug. </li></ol></li><li> Monitor ratten post-operatief voor pathologische tekenen van angst, en de followmet pijnstillers zoals vereist door de lokale dierlijke zorg en het gebruik commissie. Zo kan buprenorfine worden toegediend bij 0,05 mg / kg elke 12 uur. </li></ol>

<ol><li>Murray, C. J., Lopez, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence-based+health+policy+-+lessons+from+the+Global+Burden+of+Disease+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Evidence-based health policy - lessons from the Global Burden of Disease Study.</a> Science. 274, 740-743 (1996).</li>
<li>Parkin, D. M., Bray, F., Ferlay, J., Pisani, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimating+the+world+cancer+burden%3A+Globocan+2000%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Estimating the world cancer burden: Globocan 2000.</a> Int J Cancer. 94, 153-156 (2001).</li>
<li>Bruix, J., Sala, M., Llovet, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemoembolization+for+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Chemoembolization for hepatocellular carcinoma.</a> Gastroenterology. 127, 179-188 (2004).</li>
<li>Miraglia, R., Pietrosi, G., Maruzzelli, L., Petridis, I., Caruso, S., Marrone, G., Mamone, G., Vizzini, G., Luca, A., Gridelli, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+transcatheter+embolization%2Fchemoembolization+%28TAE%2FTACE%29+for+the+treatment+of+single+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Efficacy of transcatheter embolization/chemoembolization (TAE/TACE) for the treatment of single hepatocellular carcinoma.</a> World J Gastroenterol. 13, 2952-2955 (2007).</li>
<li>Breedis, C., Young, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+blood+supply+of+neoplasms+in+the+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">The blood supply of neoplasms in the liver.</a> Am J Pathol. 30, 969-977 (1954).</li>
<li>Nakashima, T., Kojiro, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathologic+characteristics+of+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Liver+Dis%22%5BJournal%5D)">Pathologic characteristics of hepatocellular carcinoma.</a> Semin Liver Dis. 6, 259-266 (1986).</li>
<li>Heo, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Randomized+dose-finding+clinical+trial+of+oncolytic+immunotherapeutic+vaccinia+JX-594+in+liver+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Randomized dose-finding clinical trial of oncolytic immunotherapeutic vaccinia JX-594 in liver cancer.</a> Nat Med. 19, 329-336 (2013).</li>
<li>Altomonte, J., Marozin, S., Schmid, R. M., Ebert, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineered+newcastle+disease+virus+as+an+improved+oncolytic+agent+against+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Engineered newcastle disease virus as an improved oncolytic agent against hepatocellular carcinoma.</a> Mol Ther. 18, 275-284 (2010).</li>
<li>Shinozaki, K., Ebert, O., Kournioti, C., Tai, Y. S., Woo, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oncolysis+of+multifocal+hepatocellular+carcinoma+in+the+rat+liver+by+hepatic+artery+infusion+of+vesicular+stomatitis+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Oncolysis of multifocal hepatocellular carcinoma in the rat liver by hepatic artery infusion of vesicular stomatitis virus.</a> Mol Ther. 9, 368-376 (2004).</li>
<li>Shinozaki, K., Ebert, O., Woo, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eradication+of+advanced+hepatocellular+carcinoma+in+rats+via+repeated+hepatic+arterial+infusions+of+recombinant+VSV%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Eradication of advanced hepatocellular carcinoma in rats via repeated hepatic arterial infusions of recombinant VSV.</a> Hepatology. 41, 196-203 (2005).</li>
<li>Altomonte, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergistic+antitumor+effects+of+transarterial+viroembolization+for+multifocal+hepatocellular+carcinoma+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Synergistic antitumor effects of transarterial viroembolization for multifocal hepatocellular carcinoma in rats.</a> Hepatology. 48, 1864-1873 (2008).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Hoewel directe intratumorale injectie ongetwijfeld de eenvoudigste methode is om efficiënte tumortransductie van een enkele tumorknoop te bewerkstelligen, vertegenwoordigt hepatische arteriële infusie een ideale toedieningsroute om multifocale, orthotopische HCC aan te pakken. Deze methode is zowel veilig als effectief gebleken voor de behandeling van HCC bij immuuncompetente ratten met oncolytische virussen. Bovendien, aangezien HCC-patiënten routinematig worden behandeld door transarterielle toediening van chemo-embo...

Hepatocellulair carcinoom (HCC) is de vijfde meest voorkomende kanker in de wereld, en de derde belangrijke oorzaak van kanker-gerelateerde dood, waardoor het een belangrijke gezondheids-zorg 1,2. Voor patiënten die niet in aanmerking komen voor resectie van de tumor, of die in afwachting van een levertransplantatie, locoregionale therapie waarbij transarterial embolisatie (TAE) of transarterial chemoembolization (TACE) worden toegepast als standaard palliatieve zorg 3,4. Deze therapieën gebruik maken van de unieke eigenschap van de dubbele bloedtoevoer in de lever, waarbij tumoren bijna uitsluitend worden gevoed door de lever arteriële bloedstroom, terwijl de omringende lever het merendeel van de bloedtoevoer van de poortader 5,6 krijgt. Vanwege de extreem beperkte efficacies gevestigde therapieën voor HCC hebben oncolytische virussen ontwikkeld tot veelbelovende alternatieve therapeutica. JX-594, onlangs omgedoopt tot Pexa-Vec, is een thymidine-kinase verwijderd vaccinia vector, gewapend met granulocyt-macrophage-koloniestimulerende factor (GM-CSF), welke fase II klinische proef voor HCC 7 heeft voltooid. Meer recent is een recombinant vesiculair stomatitis virus vector (VSV) die humaan interferon-bèta een fase I klinische proef aangegeven voor sorafenib-refractaire HCC (NCT01628640). Als oncolytische virussen dichter op de goedkeuring voor klinische toepassing voor HCC patiënten bewegen, de noodzaak van een effectieve toedieningsroute targeten multifocale ziekte is evident. Terwijl systemische toediening nauwelijks worden door inefficiënte tumor transductie kan intratumorale toepassingen de werkzaamheid van de therapie om de geïnjecteerde tumor beperkt, waardoor uninjectable microscopische lesies vatbaar voor ziekteprogressie. We hebben een wijze om de hepatische slagader bij ratten oncolytische virus therapie mogelijk in een locoregionale wijze orthotopische HCC streefdoel. We hebben aangetoond dat deze toedieningsweg resulteert in veilige en effective transductie van multifocale HCC knobbeltjes, wat resulteert in aanzienlijke overleving verlenging in immuuncompetente ratten 8-10. Hier beschrijven we de methode hebben, ontleden en injecteren in de leverslagader bij ratten. Een schema van de procedure is weergegeven in figuur 1 (eerder gepubliceerd 9)

<table><tbody><tr><td>Dierenklinische tondeuse</td><td>Aesculap</td><td>GT415</td><td>Kleine, snoerloze trimmer ideaal voor het verwijderen van vacht uit chirurgisch gebied</td></tr><tr><td>Stereomicroscoop</td><td>Zeiss</td><td>Stemi SV6</td><td></td></tr><tr><td>30 G naalden</td><td>Braun</td><td>4656300</td><td>30 G x &frac12;&rdquo;</td></tr><tr><td>1 ml spuiten</td><td>Braun</td><td>9161406V</td><td>Tuberculinese spuit</td></tr><tr><td>Wegwerp scalpel</td><td>Feather</td><td>2975#15</td><td>#15 mes&nbsp;</td></tr><tr><td>Standaard chirurgische schaar</td><td>Fine Science Tools</td><td>14001-13&nbsp;</td><td>Scherp/blunt, voor het openen van huid en spier</td></tr><tr><td>Adson pincet</td><td>Fine Science Tools</td><td>1101-12</td><td>Met tanden, voor het grijpen van huid en spier</td></tr><tr><td>Alm retractor</td><td>Fine Science Tools</td><td>17008-07</td><td>Met blunt tanden, voor het spreiden van de buikholte tijdens de chirurgie</td></tr><tr><td>Gaasjes</td><td>Lohmann &amp; Rauscher</td><td>18504</td><td>7,5 cm x 7,5 cm, moet voor gebruik worden geautoclaveerd</td></tr><tr><td>Wattenstaafjes met katoen</td><td>Lohmann &amp; Rauscher</td><td>11970</td><td>Steriel</td></tr><tr><td>Fijnpunt pincet</td><td>Fine Science Tools</td><td>11063-07</td><td>0,4 mm, gebogen punt, voor het dissecteren van de leverarterie</td></tr><tr><td>Vannas veerschaar</td><td>Fine Science Tools</td><td>91500-09</td><td>Voor delicaat snijden</td></tr><tr><td>Micro-naaldhouder</td><td>Fine Science Tools</td><td>12076-12</td><td>Voor het ligaren van de gastroduodenale slagader</td></tr><tr><td>Naaldhouder</td><td>Fine Science Tools</td><td>12005-15</td><td>Wolfraamcarbide kaken</td></tr><tr><td>7-0 Prolene hechtdraad</td><td>Ethicon</td><td>8648H</td><td>Polypropyleen hechtdraad met gebogen naald, voor het ligaren van de gastroduodenale slagader</td></tr><tr><td>4-0 Vicryl hechtdraad</td><td>Ethicon</td><td>V3040H</td><td>Met gekromde naald bevestigd</td></tr><tr><td>Infrarood verwarmingslamp</td><td>Beurer</td><td>IL11</td><td>Voor het handhaven van de lichaamstemperatuur na de operatie</td></tr></tbody></table>

transarterial toediening van oncolytic virussen voor locoregionale therapie van orthotope hcc in ratten

Transarterial Administration of Oncolytic Viruses for Locoregional Therapy of Orthotopic HCC in Rats

Hepatocellulair carcinoom (HCC) is een ziekte met beperkte behandelingsopties en een slechte prognose. In de afgelopen jaren hebben oncolytische virotherapieën zich bewezen als potentieel krachtige middelen om maligniteit te bestrijden. Vanwege de unieke dubbele bloedtoevoer in de lever, is het mogelijk om therapieën lokaal toe te passen op orthotopische levertumoren, die overwegend worden gevoed door arteriële bloedstroom. We hebben eerder aangetoond dat lever-arterielle toediening van oncolytische virussen resulteert in veilige en efficiënte transductie-efficiëntie van multifocale HCC-laesies, resulterend in significante verlenging van de overleving bij immuuncompetente ratten. Deze procedure bootst de toepassing van transarterielle embolisatie bij patiënten na, wat de standaard palliatief zorg is voor veel HCC-patiënten. De mogelijkheid om tumortherapieën via de leverarterie toe te dienen bij ratten, maakt een zeer geavanceerd preklinisch model mogelijk voor het evalueren van nieuwe virale vectoren in ontwikkeling. Hier beschrijven we het gedetailleerde protocol voor microdissectie van de leverarterie voor infusie van oncolytische virusvectoren om orthotopisch HCC te behandelen.

Met ervaring, kan een bijna 100% slagingspercentage (wat betekent dat de slagader met succes werd ontleed en geïnjecteerd, en het dier overleefde chirurgie) worden bereikt. Echter, de gezondheidsstatus van de rat voorafgaand aan de operatie (mate van tumorlast onderliggende leverfunctie, enz.) Vanzelfsprekend een rol spelen bij de uitkomst van de chirurgische ingreep. Na de operatie kunnen ratten worden verwacht voorbijgaand gewichtsverlies en een geringe, voorbijgaande stijging...

Oncolytische virotherapieën zijn in ontwikkeling als nieuwe therapieën voor de behandeling van hepatocellulair carcinoom (HCC). Hier beschrijven we een methode voor locoregionale therapie van HCC via hepatische arteriële toediening van oncolytisch virus.

Transarterial Toediening van Oncolytic Virussen voor Locoregionale Therapie van Orthotope HCC in Ratten

Hepatocellular carcinoma (HCC) is a disease with limited treatment options and poor prognosis.  In recent years, oncolytic virotherapies have proven ...

Het algemene doel van deze chirurgische interventie is het toedienen van locoregionale oncolytische virustherapie via hepatische arteriële administratie aan orthotopisch hepatocellulair carcinoom of HCC-laesies. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen in het veld van oncolytische virussen, zoals: wat is de effectiviteit van locoregionaal toegepaste therapie bij de behandeling van orthotopisch HCC? Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het de toediening van hoge titers oncolytisch virus aan meerdere HCC-laesies mogelijk maakt.Een beperking van intratumorale of systemische toediening. Deze techniek bootst de toepassing van transarteriële chemo-embolisatie na. Dit is de standaardzorg voor veel HCC-patiënten, wat zorgt voor een uitstekende vertaling van preklinische gegevens.Trek vóór aanvang van de chirurgische ingreep de juiste persoonlijke beschermingsmiddelen aan en desinfecteer het operatiegebied en de apparatuur met 70% ethanol. Verdun het virus tot de juiste concentratie, afhankelijk van de toxiciteit van het virus en de gevoeligheid van de gebruikte rattenstam. Vul vervolgens spuiten van één milliliter met het verdunde virus en voorzie de spuiten van naalden met een dikte van 30 Gauge, waarbij u er zorg voor draagt dat alle luchtbellen worden verwijderd.Bevestig dat de rat volledig gesedeerd is door te controleren op het uitblijven van een reactie op het knijpen in het voetzoolkussentje. Maak met een klein, gebogen scalpel een kleine, verticale incisie in de huid, precies langs de middenlijn, en breid de opening uit tot aan het xiphoidproces. Snijd vervolgens de spierlaag op dezelfde wijze open, waarbij u er zorg voor draagt de organen van de buikholte niet te doorboren.Plaats een retractor over de buik om de spieren en huid te spreiden, zodat het gehele buikgebied wordt blootgesteld. Bevochtig vervolgens twee gaasjes van 7,5 bij 7,5 centimeter met fysiologische zoutoplossing en leg één gaasje over de bovenkant van de chirurgische opening en één over de onderkant. Om de arteria hepatica te isoleren, worden eerst twee bevochtigde wattenstaafjes gebruikt om de darmen en het caecum voorzichtig uit de buikholte naar het onderste gaasje te verplaatsen, waarbij het gaasje over de organen wordt gevouwen om ze vochtig te houden.Til vervolgens de linker laterale leverkwab voorzichtig op en klap deze om op het bovenste gaas, en gebruik een kleine veerschaar om door het fibreuze membraan aan de onderzijde van de kwab te knippen. Vouw het gaas over de kwab om deze op zijn plaats te houden. Dissekeer daarna, met behulp van een dissectiemicroscoop en fijne pincetten, het dunne membraan rondom de binnenste caudate kwab en klap de kwab om op het bovenste gaas.Plaats de binnenste caudate lob onder de gaasvouw samen met de linker laterale lob, en dissekeer vervolgens de posterieure caudate lob op dezelfde wijze. Nadat de posterieure caudate lob onder het gaas is geplaatst, wordt de arteria hepatica communis gelokaliseerd aan middel van de sterke pulsatie. Volg de arterie naar anatomisch rechts en gebruik fijne pincetten om het dikke membraneuze weefsel te verwijderen dat de arteria gastroduodenalis en de arteria hepatica propria belemmert.Stop eventuele bloedingen met een wattenstaafje. Gebruik vervolgens twee fijne atraumatische pincetten om de arteria hepatica communis, de arteria gastroduodenalis en de arteria hepatica propria zorgvuldig te dissekeren van de omringende membranen. Om de arteria hepatica te injecteren, brengt u eerst een 7-0 prolene-hechtdraad onder de arteria gastroduodenalis door en gebruikt u een micronaalhouder om een permanente ligatuur te knopen aan het distale uiteinde van de arterie, net boven de bifurcatie, waarbij ongeveer twee inch hechtmateriaal aan beide uiteinden wordt gelaten.Plaats vervolgens een kleine klem op de arteria hepatica communis om de bloedstroom tijdelijk te blokkeren. Verhoog binnen vijf minuten na het plaatsen van de klem de vergroting totdat de arteria gastroduodenalis scherp in beeld is en groot genoeg lijkt om de naald nauwkeurig in te brengen. Plaats vervolgens de naald van de injectiespuit in het lumen van de arteria gastroduodenalis en druk de zuiger langzaam in om de transductie-efficiëntie te maximaliseren.Wanneer het volledige injectievolume is toegedield, wordt de naald langzaam uit de arterie teruggetrokken en wordt een tweede 7-0 prolenehechting onder de arteria gastroduodenalis doorgevoerd. Bind een tweede permanente ligatuur boven de injectieplaats en verwijder de klem uit de arteria hepatica communis. Bevestig dat de bloedstroom via de arteria hepatica propria naar de lever is hersteld en knip de losse uiteinden van de ligaturen af.Bevestig dat er geen interne bloedingen zijn. Plaats vervolgens de geëxternaliseerde weefsels terug in de buikholte. Hecht met 4-0 vicryl en een gebogen naald de spieren en de huid in afzonderlijke lagen met doorlopende hechtingen met een tussenruimte van ongeveer één millimeter.Houd het dier vervolgens in de gaten tot het volledig hersteld is. De kinetiek van intratumorale virusreplicatie is afhankelijk van het virus. Zo bereikt de replicatie van het vesicular stomatitis virus binnen één dag na injectie zijn piek.Met talrijke virale foci, bevindt een ouder zich uitsluitend binnen de hepatocellulaire carcinoomknobbels van de geïnjecteerde dieren. In contrast hiermee vertoont het Newcastle disease virus een verlengde virale replicatiekinetiek, met piekvirustiters op dag vijf na injectie. Vanwege de inherente tumorspecificiteit van de virussen wordt het pathogeen snel geklaard uit het normale omliggende leverweefsel.Bovendien laat morfometrische analyse van willekeurig geselecteerde tumor knobbels, behandeld met een vector van het vesicular stomatitis virus, zien dat de efficiëntie van de tumor-transductie niet correleert met de tumoromvang. Transhepatische arteriële toediening van een afbreekbare zetmeelmicrosfeer, gelijktijdig met de virale oplossing, resulteert in een bijna volledige embolisatie van de tumor knobbels, terwijl er een minimaal effect is op de doorbloeding van het normale leverweefsel. Dit wordt verder aangetoond door deze dynamische contrast-versterkte magnetische resonantiebeelden met gebruik van een gadoliniumcontrastmiddel.Zodra deze techniek onder de knie is, kan deze in 20 minuten worden voltooid, mits correct uitgevoerd. Tijdens deze procedure is het belangrijk om alles voor te bereiden voordat de anesthesie wordt toegediend, om de tijd die nodig is voor de interventie te minimaliseren. Na het bekijken van deze video zou u een goed begrip moeten hebben van hoe de arteria hepatica moet worden gedissecteerd en voorbereid voor de injectie van oncolytische virusoplossingen voor locoregionale therapie van HCC.Vergeet niet dat het werken met virussen extreem gevaarlijk kan zijn en dat er altijd voorzorgsmaatregelen moeten worden genomen tijdens het uitvoeren van deze procedure, zoals het dragen van persoonlijke beschermende kleding en het correct ontsmetten van het werkgebied en de instrumenten.

transarterial-administration-oncolytic-viruses-for-locoregional

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

In dit artikel beschrijven we de identificatie van het adeno-geassocieerd virus serotype 3 (AAV3) als de meest efficiënte vector voor het richten van de menselijke lever kankercellen.

High-Efficiency transductie van leverkanker met behulp van recombinant adeno-geassocieerd virus serotype 3 Vectoren

We een gemakkelijk te stellen herziening van de klassieke twee manchet techniek orthotope levertransplantatie in rat.

Orthotope levertransplantatie bij ratten

The video demonstrates locoregional delivery of oncolytic viruses through hepatic arterial injection as a therapeutic approach for hepatocellular carcinoma. These viruses selectively replicate in tumor cells, inducing cell lysis and releasing tumor cell-associated antigens. This process triggers immunogenic cell death, inducing an anti-tumor response.

Targeting Liver Tumors with Oncolytic Viruses via the Hepatic Artery

Auxiliary levertransplantatie biedt een tijdelijke ondersteuning in acuut leverfalen, tot de regeneratie van het falende lever. Heterotopisch extra levertransplantatie (HALT) met poortader arterialization (PVA) maakt voldoende leverfunctie. We ontwikkelden een analoge techniek in de rat, de invloed van de poortader arterialization de morfologie en functie van het transplantaat te onderzoeken.

Heterotopische Auxiliary Rat Liver Transplantation Met Flow-gereguleerd poortader Arterialization in acuut leverfalen

De wederopbouw van de suprahepatic vena cava (SHVC) blijft een moeilijke stap in rat orthotopic lever transplantatie. In dit artikel tonen we een stapsgewijze protocol voor SHVC wederopbouw in ratten met behulp van een roman magnetische wapendrager-techniek.

Een Rat Model van Orthotopic met behulp van een roman magnetische Anastomosis techniek voor Suprahepatic Vena Cava wederopbouw levertransplantatie

Het doel van dit artikel is bedoeld als een primer voor de ontwikkeling en het gebruik van de VX2 carcinoom konijn model voor leverkanker.

Ontwikkeling en het gebruik van de Angiographic van het konijn VX2 Model voor leverkanker

Hier beschrijven we de ontwikkeling van een klinisch relevant muriene model van leverkanker die de typische immuunkenmerken van hepatocellulaire kanker (HCC) recapituleren.

Een oncogene hepatocyte-geïnduceerde Orthotopic muis model van hepatocellulaire kanker ontstaan in de setting van leverontsteking en fibrose

Portale ader injectie van colorectale kanker (CRC) organoïden genereert stroma-rijke levermetastase. Dit muismodel van CRC-levermetastase vertegenwoordigt een nuttig hulpmiddel om tumor-stroma-interacties te bestuderen en nieuwe stroma-gerichte therapieën te ontwikkelen, zoals adeno-geassocieerde virus-gemedieerde gentherapieën.

Portale ader injectie van colorectale kanker organoïden om de levermetastase stroma te bestuderen

Hier presenteren we een protocol om orthotopische hepatocellulaire carcinoom xenografts met en zonder ligatie van de leverslagader te creëren en niet-invasieve positronemissietomografie (PET) beeldvorming van tumorhypoxie uit te voeren met behulp van [18 F] Fluoromisonidazol ([18 F] FMISO) en [18 F] Fluorodeoxyglucose ([18F] FDG).

Niet-invasieve PET/MR-beeldvorming in een orthotopisch muismodel van hepatocellulair carcinoom

Oncolytische virussen zijn veelbelovend voor kankertherapieën. De mogelijkheid om de infectability van levende weefselmonsters van patiënten voorafgaand aan de behandeling vast te stellen is een uniek voordeel van deze therapeutische aanpak. Dit protocol beschrijft hoe te verwerken weefsels...

Ex Vivo Infectie van levend weefsel met oncolytische Virussen

Leer hoe je oncolytische virussen via de leverarterie toedient voor locoregionale therapie van hepatocellulair carcinoom bij ratten. Deze methode maakt hoge titers en gerichte behandeling van meerdere tumoren mogelijk.

Transarterial Toediening van Oncolytic Virussen voor Locoregionale Therapie van Orthotope HCC in Ratten

Meer video's verkennen