Name: Retroductal Submandibulaire Gland Blaasinstillatie en gelokaliseerde gefractioneerde bestraling in een Rat Model van het speeksel hypofunction (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-04-24T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 44 s
Description: Leer retroductale instillatie in de submandibulaire klier van ratten voor lokaal herstel van speekselklierfunctie na bestraling. Deze methode minimaliseert systemische bijwerkingen en biedt een betrouwbaar model voor therapeutisch onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Wij bedanken Dr. John Chang (Radiotherapie, LSU Health Science Center) voor hulp met metingen van stralingsdoses. Het onderzoek werd ondersteund door de American Cancer Society (Subsidienummer: 116945-RSG-09-038-01-CCE), National Institute of Health (Subsidienummer: R21CA173162) en het Feist-Weiller Kankercentrum.

Alle procedures werden goedgekeurd door de LSU Health, Shreveport, Animal Care en gebruik Comite en waren in overeenstemming met de NIH richtlijnen voor de zorg en het gebruik van proefdieren. 1. Canulatie van Rat Submandibulaire speekselklieren <ol><li> Voorbereiding van de spuit-Tubing Assembly <ol><li> Snijd een 10 cm lengte van PE10 polyethyleen buis met een scalpel. Houd beide uiteinden van de buis tussen de wijsvinger en duim. Verwarm het middelste gedeelte van de buis boven een zachte vlam en voorzichtig rekken de zachte slang aan de lengte verdubbeld door aan beide zijden. </li><li> Snijd de slang in het midden met een scalpel onder een hoek van 45 o 2 canules krijgen - elk met een taps toelopend uiteinde. Vouw de niet-taps toelopende einde van de canule door het aanbrengen van het over een 29 G naald van 0,5 cc insuline spuit. </li><li> Verwijder de canule en trek 220 pi zoutoplossing in de injectiespuit. Tik om luchtbellen te verwijderen. Monteer de cannuleen over de naald en duw de zuiger om de lucht te verdrijven en te zorgen voor een vrije stroom van de oplossing door de canule. Zet het volume op 200 ul. </li></ol></li><li> Intra-orale Canulatie van Submandibulaire Gland Duct LET OP: Autoclaaf instrumenten voorafgaand aan de procedure, en steriliseer in-tussen procedures in een hete kraal sterilisator. <ol><li> Weeg de Sprague Dawley ratten, en verdeel het berekende volume van ketamine (42 mg / kg) / xylazine (8 mg / kg) / acepromazine (1,4 mg / kg) mengsel in een injectiespuit. </li><li> Zet het dier vast door grijpen de basis van de staart tussen de wijsvinger en de duim van een hand en schuiven anderzijds over het lichaam te grijpen. Rest de wijs- en middelvinger langs de zijkanten van het hoofd, terwijl houden de romp met de duim en de resterende vingers. </li><li> Injecteren het verdovingsmiddel in de achterste ledematen spieren. Bevestig de diepte van de anesthesie door teen knijpen en ooglidreflex. Solliciteer eye smeermiddel tot droog, terwijl voorkomendier onder narcose. </li><li> Plaats het dier op een speciaal ontworpen platform (figuur 1), en over de bovenste snijtanden op de dwarsbalk. Trek de onderkaak door looping een rubberen band rond de onderste snijtanden en verankerd aan het platform. </li><li> Passeren een steriele hechtdraad door de tong en til het aan de vloer van de mond te verhogen. Klem de hechtingen met een hemostat, en gaat het over de dwarsbalk. </li><li> Vouw de wangen met een op maat gemaakte wang strooier (figuur 1), en onder een stereomicroscoop vind sublinguale papillen op de vloer van de mond. </li><li> Pak de taps toelopende einde van de voorgevormde PE10 slang met behulp van een delicate pincet. Voorzichtig manipuleren van de punt van de canule in de ductale opening op de sublinguale papillen. Bevestig plaatsing van de canule door rijgen deze 3-5 mm in het kanaal; ervoor te zorgen dat het passeert zonder enige belemmering. </li></ol></li><li> Submandibulaire Gland Instillation <ol><li> Injecteren atropine (0,5 mg / kg) subcutaan in het nekvel en wacht 10 minuten voor een verlaging van speeksel afscheidingen. </li><li> Bevestig de canule op het kanaal opening met een druppel cyanoacrylaat (lijm), en laten drogen. Wekt de oplossing in de gland (200 gl / klier) door langzaam indrukken van de zuiger met een snelheid van ~ 50 pl / min. </li><li> Plet de buis met een hemostat, en verwijder voorzichtig de spuit. Bewaar de buis in het kanaal voor 30 - 60 minuten totdat het dier bijkomt. Verwijder de hechtdraad die de tong bezit. </li><li> Breng het dier naar een aparte kooi, en het gebruik van een warmtelamp om het warm te houden tijdens het herstel. Laat de dieren niet onbeheerd achter te laten totdat het is weer bij bewustzijn te borstbeen recumbence handhaven. </li><li> Nadat het dier is volledig ambulant, het huis van het op het terrarium met onbeperkte toegang tot voedsel en water. </li></ol></li></ol> 2. Gelokaliseerde Gefractioneerde Bestralingvan onderkaakspeekselklier <ol><li> Zet het dier vast zoals eerder beschreven, en verdoven met intramusculaire toediening van ketamine (33 mg / kg) / xylazine (6 mg / kg) / acepromazine (1 mg / kg) mengen in de achterste ledematen. Bevestigen diepte van anesthesie en smeermiddel op de ogen. </li><li> Plaats het dier in rugligging op de lineaire versneller tafelblad, en uit te breiden zijn nek door het kantelen van de kop. Richt het stralingsveld (3 cm spleetbreedte) omvatten voor het gebied van de onderrand van de mandibula naar de top van het borstbeen. </li><li> Plaats een 1 cm weefsel equivalente bolus over het gebied en de afstand tussen de stralingsbron en de bovenkant van de bolus tot 100 cm passen. </li><li> Bestralen het dier (2,5 Gy) met een 6 MV foton bundel een lineaire versneller. De dosering, veldgrootte, en de afstand van de stralingsbron naar de oppervlakte bolus zal de belichtingstijd te dicteren. In de set-up huidige, werden de dieren bestraald met een dosis van ~ 1 Gy / min. </li><li> Herhaalde blootstelling; 2,5 Gy / dag voor een totaal van 8dagen; 4 dagen / week met een 2-dagen interval ertussen. Houd het dier warm tijdens het herstel. Breng het dier naar een vivarium nadat het volledig ambulant. </li><li> Verzamel gestimuleerde submandibulaire klier speeksel 8 weken na straling om klierfunctie 14 te meten. Euthanaseren dieren onder verdoving door cardiale perfusie van koude 4% paraformaldehyde / fosfaat gebufferde zoutoplossing pH 7,2. Roeien onderkaakspeekselklier voor histologische en immunohistochemische analyses 14. </li></ol>

<ol><li>Delporte, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+fluid+secretion+after+adenoviral-mediated+transfer+of+the+aquaporin-1+cDNA+to+irradiated+rat+salivary+glands%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Increased fluid secretion after adenoviral-mediated transfer of the aquaporin-1 cDNA to irradiated rat salivary glands.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 94 (7), 3268-3273 (1997).</li>
<li>Chambers, M. S., Rosenthal, D. I., Weber, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiation-induced+xerostomia%5BTitle%5D)+AND+%22Head+Neck%22%5BJournal%5D)">Radiation-induced xerostomia.</a> Head Neck. 29 (1), 58-63 (2007).</li>
<li>Sciubba, J. J., Goldenberg, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+complications+of+radiotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Oncol%22%5BJournal%5D)">Oral complications of radiotherapy.</a> Lancet Oncol. 7 (2), 175-183 (2006).</li>
<li>Rodrigues, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+prospective+study+of+salivary+gland+function+in+lymphoma+patients+receiving+head+and+neck+irradiation%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Radiat+Oncol+Biol+Phys%22%5BJournal%5D)">A prospective study of salivary gland function in lymphoma patients receiving head and neck irradiation.</a> Int J Radiat Oncol Biol Phys. 75 (4), 1079-1083 (2009).</li>
<li>Coracin, F. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Major+salivary+gland+damage+in+allogeneic+hematopoietic+progenitor+cell+transplantation+assessed+by+scintigraphic+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Bone+Marrow+Transplant%22%5BJournal%5D)">Major salivary gland damage in allogeneic hematopoietic progenitor cell transplantation assessed by scintigraphic methods.</a> Bone Marrow Transplant. 37 (10), 955-959 (2006).</li>
<li>Jensen, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+systematic+review+of+salivary+gland+hypofunction+and+xerostomia+induced+by+cancer+therapies%3A+management+strategies+and+economic+impact%5BTitle%5D)+AND+%22Support+Care+Cancer%22%5BJournal%5D)">A systematic review of salivary gland hypofunction and xerostomia induced by cancer therapies: management strategies and economic impact.</a> Support Care Cancer. 18 (8), 1061-1079 (2010).</li>
<li>de Castro, G. Jr, Federico, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation%2C+prevention+and+management+of+radiotherapy-induced+xerostomia+in+head+and+neck+cancer+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Evaluation, prevention and management of radiotherapy-induced xerostomia in head and neck cancer patients.</a> Curr Opin Oncol. 18 (3), 266-270 (2006).</li>
<li>Epperly, M. W., Carpenter, M., Agarwal, A., Mitra, P., Nie, S., Greenberger, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraoral+manganese+superoxide+dismutase-plasmid%2Fliposome+%28MnSOD-PL%29+radioprotective+gene+therapy+decreases+ionizing+irradiation-induced+murine+mucosal+cell+cycling+and+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vivo%22%5BJournal%5D)">Intraoral manganese superoxide dismutase-plasmid/liposome (MnSOD-PL) radioprotective gene therapy decreases ionizing irradiation-induced murine mucosal cell cycling and apoptosis.</a> In Vivo. 18 (4), 401-410 (2004).</li>
<li>Cotrim, A. P., Sowers, A., Mitchell, J. B., Baum, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+of+irradiation-induced+salivary+hypofunction+by+microvessel+protection+in+mouse+salivary+glands%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Prevention of irradiation-induced salivary hypofunction by microvessel protection in mouse salivary glands.</a> Mol Ther. 15 (12), 2101-2106 (2007).</li>
<li>Zheng, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+of+radiation-induced+salivary+hypofunction+following+hKGF+gene+delivery+to+murine+submandibular+glands%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Prevention of radiation-induced salivary hypofunction following hKGF gene delivery to murine submandibular glands.</a> Clin Cancer Res. 17 (9), 2842-2851 (2011).</li>
<li>Palaniyandi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenoviral+delivery+of+Tousled+kinase+for+the+protection+salivary+glands+against+ionizing+radiation+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Adenoviral delivery of Tousled kinase for the protection salivary glands against ionizing radiation damage.</a> Gene Ther. 18 (3), 275-282 (2011).</li>
<li>Baum, B. J., Voutetakis, A., Wang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salivary+glands%3A+novel+target+sites+for+gene+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Salivary glands: novel target sites for gene therapeutics.</a> Trends Mol Med. 10 (12), 585-590 (2004).</li>
<li>Limesand, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin-like+growth+factor-1+preserves+salivary+gland+function+after+fractionated+radiation%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Radiat+Oncol+Biol+Phys%22%5BJournal%5D)">Insulin-like growth factor-1 preserves salivary gland function after fractionated radiation.</a> Int J Radiat Oncol Biol Phys. 78 (2), 579-586 (2010).</li>
<li>Timiri Shanmugam, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recombinant+AAV9-TLK1B+administration+ameliorates+fractionated+radiation-induced+xerostomia%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Recombinant AAV9-TLK1B administration ameliorates fractionated radiation-induced xerostomia.</a> Hum Gene Ther. 24 (6), 604-612 (2013).</li>
<li>Coppes, R. P., Vissink, A., Konings, A. W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+radiosensitivity+of+rat+parotid+and+submandibular+glands+after+different+radiation+schedules%5BTitle%5D)+AND+%22Radiother+Oncol%22%5BJournal%5D)">Comparison of radiosensitivity of rat parotid and submandibular glands after different radiation schedules.</a> Radiother Oncol. 63 (3), 321-328 (2002).</li>
<li>Sunavala-Dossabhoy, G., Palaniyandi, S., Richardson, C., De Benedetti, A., Schrott, L., Caldito, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TAT-mediated+delivery+of+Tousled+protein+to+salivary+glands+protects+against+radiation-induced+hypofunction%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Radiat+Oncol+Biol+Phys%22%5BJournal%5D)">TAT-mediated delivery of Tousled protein to salivary glands protects against radiation-induced hypofunction.</a> Int J Radiat Oncol Biol Phys. 84 (1), 257-265 (2012).</li>
<li>Baum, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transfer+of+the+AQP1+cDNA+for+the+correction+of+radiation-induced+salivary+hypofunction%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Transfer of the AQP1 cDNA for the correction of radiation-induced salivary hypofunction.</a> Biochim Biophys Acta. 1758 (8), 1071-1077 (2006).</li>
<li>Tran, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paracrine+effects+of+bone+marrow+soup+restore+organ+function%2C+regeneration%2C+and+repair+in+salivary+glands+damaged+by+irradiation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Paracrine effects of bone marrow soup restore organ function, regeneration, and repair in salivary glands damaged by irradiation.</a> PLoS One. 8 (4), e61632(2013).</li>
<li>Nanduri, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salisphere+derived+c-Kit%2B+cell+transplantation+restores+tissue+homeostasis+in+irradiated+salivary+gland%5BTitle%5D)+AND+%22Radiother+Oncol%22%5BJournal%5D)">Salisphere derived c-Kit+ cell transplantation restores tissue homeostasis in irradiated salivary gland.</a> Radiother Oncol. 108 (3), 458-463 (2013).</li>
<li>Arany, S., Benoit, D. S., Dewhurst, S., Ovitt, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoparticle-mediated+gene+silencing+confers+radioprotection+to+salivary+glands+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Nanoparticle-mediated gene silencing confers radioprotection to salivary glands in vivo.</a> Mol Ther. 21 (6), 1182-1194 (2013).</li>
<li>Voutetakis, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reengineered+salivary+glands+are+stable+endogenous+bioreactors+for+systemic+gene+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Reengineered salivary glands are stable endogenous bioreactors for systemic gene therapeutics.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101 (9), 3053-3058 (2004).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Speekselklieren ontvangen vaak stralingsdoses boven de drempel van weefsel herstel bij patiënten die radiotherapie voor hoofd-halskanker, electieve ablatie van de nek knooppunten, of regionale hematologische maligniteiten. Hoewel de vloeistof afscheidende acinaire cellen van de klier gedifferentieerd zijn, zij paradoxaal stralingsgevoelige. De secretoire functie laat binnen de eerste weken van straling en onherstelbare schade klier leidt tot een chronische lage speeksel output. Ter bestrijding van slechte klierfunctie e...

Collaterale vernietiging van gezond weefsel vertegenwoordigt een aantal schadelijke bijwerkingen van kankerbehandelingen. Een deel of geheel van de grote speekselklieren dat de stralingsvelden liggen onvermijdelijk vernietigd. Daarom zijn de meeste patiënten die radiotherapie voor hoofd- en nekkanker, baarmoederhalskanker lymfoom of volledige lichaamsbestraling voor beenmergtransplantatie lijden een van de meest voorkomende en persistente schadelijke effecten van straling, speekselklier hypofunction 2-6. De fluïdum producerende acinaire cellen van de speekselklieren zijn uiterst gevoelig voor straling. Beschadiging van de speekselklieren veroorzaakt een drastische vermindering van de speekselproductie, een genoemd speeksel hypofunction voorwaarde. Chronische afname van speekselvloed schaadt belangrijke orale activiteiten zoals kauwen, slikken, spraak en smaak, maar de gevolgen van morbide intense pijn, mucosale tranen, dysfagie, opportunistische infecties en cariës verslechtert eenpatiënt welzijn en functie 2,3. Aangezien radiotherapie geassocieerde speeksel celverlies onomkeerbaar is, er geen corrigerende behandeling van xerostomie. De huidige behandeling die zich richt op assuaging symptomen met kunstmatige speeksel substituten en prosecretory drugs is niet effectief voor de lange termijn verlichting 6. Hoewel verbeterde stralingsafgiftemiddelen technieken helpen verminderen de ernst van de aandoening, normaal weefsel toxiciteit en de complicaties ervan blijft een beperkende factor in kankerbehandeling 6,7. Pre-emptive maatregelen om radiotherapie bijbehorende complicaties te voorkomen zijn dan ook steeds de norm. Radio-beschermende middelen die vangen vrije radicalen oxygen species, bevorder cel herbevolking, of verbetering van DNA-reparatie worden onderzocht om speeksel hypofunction 8-11 af te wenden. Afscheidingen van exocriene speekselklieren afwateren in de mond door de belangrijkste uitscheidingsmechanisme leidingen. Intra-orale infusen van The excretie leidingen voor injectie van contrastmiddelen wordt routinematig uitgevoerd als een poliklinische procedure. Met een soortgelijk benadering kan speekselklieren direct gericht voor het plaatselijk behandelen 12. Naast het risico van systemische bijwerkingen heeft retroductal klier indruppeling voordelen toegevoegd. De monolaag opstelling van speeksel cellen aan de ductale boom maakt targeting van speeksel epitheelcellen, en het vezelachtige inkapseling van de klier werkt als een barrière om ongewenste therapeutische spreiding reduceren. In wezen, speekselklieren zijn optimaal geschikt voor gerichte behandeling van schildklier aandoeningen, zoals door straling veroorzaakte speeksel hypofunction. Conventionele bestraling bij de behandeling van kanker is in betrekkelijk geringe doses (1,8-2,5 Gy / fractie / dag, vijf dagen per week) gedurende weken. Daarom is een radio-beschermende therapeutische dat de werkzaamheid tegen een langdurige regeling straling blijkt in experimentele modellen heeft een grotere klinische lager. Compromaliseerde speekselklieren functie na gefractioneerde bestraling is opgenomen in kleine dieren, maar stralingsbron, fractie dosis en protocollen die gebruikt zijn gevarieerd 9,10,13. Dit rapport stelt methoden voor retroductal levering aan en gelokaliseerde straling van rat onderkaakspeekselklier behulp van patiënt-relevante stralingsbron en fractie dosis.

<table><tbody><tr><td>Intramedic Polyethyleen buis (PE10)</td><td>Becton Dickson</td><td>427401</td><td></td></tr><tr><td>1/2 cc Insuline-sering U-100</td><td>Becton Dickson</td><td>309306</td><td></td></tr><tr><td>Kunstmatige tranen</td><td>Miller Vet Supply&nbsp;</td><td>5098-9840-64</td><td></td></tr><tr><td>Hot Bead Sterilisator</td><td>Fine Science Tools</td><td>18000-45</td><td></td></tr><tr><td>Perma-Hand zijden hechtdraad</td><td>Ethicon</td><td>K833H</td><td></td></tr><tr><td>Graefe pincet</td><td>Fine Science Tools</td><td>11051-10</td><td></td></tr><tr><td>Olympus SZX16 Stereo Microscoop</td><td>Hunt Optics and Imaging</td><td></td><td></td></tr><tr><td>6 MV Lineaire Versneller</td><td>Elekta</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bolus - Huidloos&nbsp;</td><td>Civco</td><td>MTCB410</td><td></td></tr><tr><td>Warmtelamp</td><td>Braintree Scientific</td><td>HL-1&nbsp;110V</td><td></td></tr></tbody></table>

retroductal submandibulaire gland blaasinstillatie en gelokaliseerde gefractioneerde bestraling in een rat model van het speeksel hypofunction

Retroductal Submandibular Gland Instillation and Localized Fractionated Irradiation in a Rat Model of Salivary Hypofunction

Normale weefsels die binnen de poorten van straling liggen, worden onbedoeld beschadigd. Speekselklieren raken vaak beschadigd tijdens radiotherapie van het hoofd en de nek. Onherstelbare celbeschadiging leidt tot een chronische verlies van speekselfunctie die basismondactiviteiten belemmert en het risico op orale infecties en tandbederf verhoogt. Hypofunctie van de speekselklieren en de complicaties ervan hebben een ernstige impact op het comfort van een patiënt. De huidige symptomatische behandeling van de aandoening is niet effectief, en er zijn nieuwere therapieën nodig om de aandoening te verlichten.
Speekselklieren zijn exocriene klieren, die hun afscheidingen via uitscheidingskanalen in de mond uitscheiden. Canulerings van deze kanalen biedt directe toegang tot de klieren. Retroductale toediening van een contrastmiddel aan de grote speekselklieren is een routinematige poliklinische procedure voor diagnostisch beeldvorming. Met behulp van een vergelijkbare procedure is lokale behandeling van de klieren haalbaar. Het uitvoeren van deze techniek in preklinische studies met kleine dieren stelt echter unieke uitdagingen. In deze studie beschrijven we de techniek van retroductale toediening in rattensubmandibulaire klieren, een procedure die werd verfijnd in het laboratorium van Dr. Bruce Baum (NIH)1, en leggen we een procedure voor lokale klierontsteking vast.

Aanpassen van een minimaal invasieve techniek sialografie, lokale behandeling van grote speekselklieren haalbaar. Retroductal toediening bij ratten submandibulaire speekselklier werd geprobeerd door intra-orale canulatie kanalen Wharton&#39;s (figuur 2). Het speeksel leidingen van Wharton open op de sublinguale papillen op de bodem van de mond, maar de openingen niet gemakkelijk toegankelijk. Het inbrengen van de canule werd dan ook gedaan door zachte sonderen. Om ongewe...

Hypofunctie van de speekselklieren, een belangrijk nadelig effect van radiotherapie in het hoofd- en nekgebied, vermindert de kwaliteit van leven van een patiënt. Het aantonen van de werkzaamheid van nieuwe therapieën in diermodellen is een voorwaarde voordat er een klinische overgang plaatsvindt. Dit protocol beschrijft retroductale toediening en lokale bestraling van submandibulaire rattenklieren.

Retroductal Submandibulaire Gland Blaasinstillatie en gelokaliseerde gefractioneerde bestraling in een Rat Model van het speeksel hypofunction

Normal tissues that lie within the portals of radiation are inadvertently damaged. Salivary glands are often injured during head and neck radiotherapy. ...

Het algemene doel van deze procedure is om therapeutica via een retroductale toediening in de submandibulaire klieren te brengen om hun effectiviteit bij het bestrijden van speekselklierdisfunctie te beoordelen. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen op het gebied van speekselklierstoornissen, zoals welke therapieën kunnen beschermen tegen of de functie van de speekselklieren herstellen na bestraling. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat speekselklieren lokaal behandeld kunnen worden, waardoor het risico op bijwerkingen in niet-doelwitweefsels wordt verminderd.Over het algemeen zullen mensen die nieuw zijn met deze methode moeite hebben omdat de openingen van de ductus niet zichtbaar zijn en de canule blindelings in de ductus moet worden gemanipuleerd. Snijd vóór aanvang van de procedure een stuk PE 10 polyethyleenslang van tien centimeter af met een scalpel, pak vervolgens beide uiteinden van de slang vast tussen de wijsvinger en duim van elke hand en verhit het middelste gedeelte van de slang boven een zachte vlam, waarbij beide zijden voorzichtig worden uitgetrokken om de verzachte slang tot het dubbele van zijn lengte te rekken. Gebruik daarna een scalpel om de slang in het midden onder een hoek van 45 graden door te snijden om twee canules te verkrijgen die elk een taps toelopend uiteinde hebben.Rek het niet-toelopende uiteinde van een van de canules over de 29 gauge naald van een 0,5cc insulinespuit. Verwijder vervolgens de canule en trek 220 microliters zoutoplossing in de spuit. Tik tegen de schacht van de spuit om eventuele luchtbellen te verwijderen en bevestig de canule opnieuw over de naald.Druk de zuiger in om de lucht uit de canule te verdrijven en een vrije stroom van de oplossing door de slang te waarborgen en stel het volume kolfzout in de spuit in op 200 microliters. Bevestig nu het passende sedatieniveau van de rat door middel van een teenknijptest en een palpebraal reflex en breng ooglubricant aan op de blootgestelde hoornvliezen. Plaats het dier op een speciaal ontworpen fixatieplatform en klem de bovenste snijtanden vast aan de dwarsbalk.Plaats een elastiekje rond de onderste snijtanden om de kaak naar beneden te trekken en veranker dit aan het platform. Haal vervolgens een steriele hechtdraad door de tong en til deze op om de mondbodem te heffen.Gebruik vervolgens een hemostat om de hechtingen af te klemmen en breng de hemostat over de dwarsbalk. Gebruik daarna een speciaal vervaardigde wangspreider om de wangen te spreiden en een dissectiemicroscoop om de sublinguale papillen op de bodem van de mond te lokaliseren. Pak met een fijne pincet het taps toelopende uiteinde van de prefab PE 10-tubing vast en manoeuvreer de tip van de canule voorzichtig in de ductale opening op de sublinguale papil.Schuif vervolgens de canule drie tot vijf millimeter in het duct, waarbij u er zeker van bent dat de canule zonder obstructie door het duct gaat. Voordat de zoutoplossing wordt toegediend, wordt atropine subcutaan in de nekvel van het dier geïnjecteerd. Tien minuten na de injectie wordt de canule met een druppel cyanoacrylaat aan de opening van het duct bevestigd.Nadat de lijm is opgedroogd, wordt de plunjer van de spuit langzaam ingedrukt met een snelheid van 50 microliters per minuut totdat er 200 microliters van de zoutoplossing in de klier is ingebracht. Als er tijdens het inbrengen tegendruk optreedt, stop dan en trek de slang terug, om vervolgens opnieuw te canuleren met een nieuwe canule. Klem daarna de slang af met een hemostaat en verwijder voorzichtig de spuit.Laat de slang 30 tot 60 minuten in de duct zitten totdat het dier weer bij bewustzijn is. Verwijder vervolgens de hechting die de tong vasthoudt en plaats het dier in een aparte kooi onder een warmtelamp tot het volledig is hersteld. Om gefractioneerde bestraling lokaal toe te passen op de submandibulaire klier.Collimeer een stralingsveld in de vorm van een gleuf van drie centimeter dat het gebied beslaat vanaf de onderrand van de mandibula tot aan de bovenzijde van het sternum van de genarceerde rat in rugligging. Plaats vervolgens een weefsel-equivalent bolus van één centimeter over het gebied. Stel de afstand tussen de stralingsbron en de bovenzijde van de bolus in op 100 centimeter met behulp van een fotonenbundel van zes megavolt op de lineaire versneller.Bestraal het dier met 2,5 gray gedurende de juiste blootstellingstijd. Warm het dier na afloop van de bestralingsperiode op tijdens het herstel, zoals zojuist gedemonstreerd. Tijdens de initiële experimenten werd de juiste plaatsing van de canule bevestigd door de klier te infuseren met een hematoxiline- of trypaanblauwoplossing en de kleuring van de klier bij geëuthanaseerde dieren te evalueren.De submandibulaire klieren werden bestudeerd omdat deze selectief kunnen worden bestraald met gecollimeerde straling op de nek, waardoor ernstige orale neveneffecten die de gezondheid van de dieren en de experimentele uitkomst kunnen beïnvloeden, worden vermeden. Analyse van de effecten van dit gefractioneerde bestralingsschema op de speekselvloed acht weken na de bestraling laat zien dat dagelijkse blootstelling aan incrementen van 2,5 grey de speekselvloed drastisch vermindert. Er is sprake van een tienvoudige afname van de speekselproductie bij bestraalde dieren vergeleken met niet-bestraalde dieren.Zodra deze techniek beheerst is, kan deze in enkele minuten worden voltooid mits deze correct wordt uitgevoerd. Tijdens het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om ervoor te zorgen dat de canule ongehinderd in de uitscheidingsgang van de speekselklier kan worden ingebracht. Na de ontwikkeling van deze techniek konden onderzoekers op het gebied van speekselklierstoornissen behandelingen gaan verkennen voor stralingsgerelateerde en auto-immuune aandoeningen van de speekselklieren.Na het bekijken van deze video zou u een goed inzicht moeten hebben in hoe u een retroductale installatie uitvoert in de submandibulaire klier van de rat en hoe u de klieren lokaal bestraalt om de therapeutische effectiviteit van het verminderen van stralingstoxiciteit te beoordelen. Vergeet niet dat het werken met gen- en eiwittherapeutica extreem gevaarlijk kan zijn en dat voorzorgsmaatregelen, zoals het vermijden van naaldprikken en het minimaliseren van blootstelling van de huid aan biologische agentia, altijd in acht moeten worden genomen tijdens het uitvoeren van deze procedure.

retroductal-submandibular-gland-instillation-localized-fractionated

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Een protocol voor de canulatie van de muis submandibulaire speekselklier via kanaal van de Wharton is beschreven. Voor dit experiment wordt het trypaan blauw-oplossing gebruikt als een verver om aan te tonen hoe deze techniek effectief infusies levert in de gerichte klier, en om de betrouwbaarheid van deze nieuwe aanpak voorstellen als een potentieel klinisch drug / celtherapie voor het herstel van de speekselklieren.

Canulatie van de muis submandibulaire speekselklier via Duct de Wharton&#39;s

Botulinumtoxine wordt in de speekselklieren geïnjecteerd voor de behandeling van sialorroe. De door echografie geleide botulinumtoxine-injectie in zowel de parotis- als submandibulaire klieren toont een aanhoudende werkzaamheid en het ontbreken van ernstige bijwerkingen.

Ultrasound-begeleide botulinetoxine-A injecties: Een methode voor het behandelen Sialorrhea

Speekselklier hypofunction is een frequente gevolg van auto-immune ziekte en straling therapie. Reproduceerbaar evaluatie van speekselklier functie in muismodellen van deze ziekten is een technische uitdaging. Hier wordt een eenvoudige methode voor nauwkeurige en reproduceerbare meting van speeksel productie in muizen beschreven.

Een methode voor het meten van speekselklier functie in muizen

We beschrijven een protocol om operatief bloot en stabiliseren de lymfkliertest submandibulaire speekselklier voor intravital geschikt zijn met behulp van rechtop intravital microscopie. Dit protocol is gemakkelijk aan te passen aan andere exocrine klieren van het hoofd en nek regio van muizen en andere kleine knaagdieren.

Voorbereiding van lymfkliertest submandibulaire speekselklier rechtop Intravital microscopie

Lokale drug levering aan de submandibulaire klieren is van belang in begrip speekselklier biologie en voor de ontwikkeling van nieuwe therapieën. We presenteren een bijgewerkte en gedetailleerde retroductal injectie protocol, ter verbetering van de nauwkeurigheid van de levering en experimentele reproduceerbaarheid. De hier vermelde toepassing is de levering van polymere nanodeeltjes.

Retroductal Nanoparticle injectie aan de lymfkliertest submandibulaire klier

We presenteren een gedetailleerde aanpak voor het uitvoeren van speeksel inzameling, met inbegrip van lymfkliertest tracheostomy en het isolement van de drie grote speekselklieren.

Gefractioneerde lymfkliertest speeksel functioneel-diagnostiek via Pilocarpine stimulatie volgende straling

Met behulp van driedimensionale organotypic culturen te visualiseren morfologie en functionele markers van speekselklieren kunnen nieuwe inzichten in de mechanismen van weefselbeschadiging na straling. Hier beschreven is een protocol bij sectie, cultuur, bestralen, vlek, en beeld 50 – 90 μm dikke speekselklier secties voorafgaand aan en na blootstelling aan ioniserende straling.

De behandeling van de straling van Organotypic culturen van submandibulaire en Parotis speekselklieren modellen sleutel in vivo kenmerken

Speekselklieren zijn voorgesteld als een weefseldoelplaats voor gentherapie, vooral op het gebied van vaccinatie door genoverdracht. We demonstreren genafgifte in een niet-menselijk primatenmodel met behulp van retrograde parotisinfusie.

Retrograde parotisklierinfusie via het kanaal van Stensen in een niet-menselijke primaat voor vectored genafgifte

Immunofluorescerende beeldvorming wordt beperkt door het vermogen om complexe, tijdsafhankelijke biologische processen in slechts één momentopname in de tijd waar te nemen. Deze studie schetst een live-imaging-benadering die wordt uitgevoerd op nauwkeurig gesneden plakjes submandibulaire klier van muizen. Deze aanpak maakt de real-time observatie mogelijk van cel-cel interacties tijdens homeostase en de processen van regeneratie en herstel.

Ondervraging van cel-celinteracties in de speekselklier via ex vivo beeldvorming van levende cellen

Dit protocol beschrijft de methode voor het gebruik van een lipfixatieapparaat bij labiale speekselklierbiopsie, samen met de bijbehorende voordelen.

Een lipfixatieapparaat faciliteert een labiale speekselklierbiopsie bij de ziekte van Sjögren

Leer retroductale instillatie in de submandibulaire klier van ratten voor lokaal herstel van speekselklierfunctie na bestraling. Deze methode minimaliseert systemische bijwerkingen en biedt een betrouwbaar model voor therapeutisch onderzoek.

Retroductal Submandibulaire Gland Blaasinstillatie en gelokaliseerde gefractioneerde bestraling in een Rat Model van het speeksel hypofunction (Video) | JoVE Journal

Retroductal Submandibulaire Gland Blaasinstillatie en gelokaliseerde gefractioneerde bestraling in een Rat Model van het speeksel hypofunction

Meer video's verkennen