Name: Immobilisatie van Multi-biokatalysatoren in Alginaat Kralen voor cofactorregeneratiesysteem en verbeterde Herbruikbaarheid (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-04-22T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 27 s
Description: Leer de co-immobilisatie van E. coli-stammen in alginaat kralen voor verbeterde cofactorregeneratie en herbruikbaarheid bij de productie van L-xylulose. Deze methode optimaliseert biocatalytische processen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit onderzoek werd gesteund door Basic Science Research Program door de National Research Foundation Korea (NRF), gefinancierd door het Ministerie van Onderwijs, Wetenschap en Technologie (NRF-2013R1A1A2012159 en NRF-2013R1A1A2007561), Konkuk University, en het Department of Chemical Engineering en mCubed Program aan de Universiteit van Michigan.

1. Whole-cell Biokatalysatoren Voorbereiding LET OP: De recombinante E. coli cellen die pET28a- SpNox 31 of pET28a- HjLAD 28 zijn hierna E. SpNox coli en E. coli HjLAD respectievelijk. <ol><li> Inoculeer een enkele kolonie van E. coli HjLAD in 3 ml Luria-Bertani (LB) medium aangevuld met kanamycine (50 ug / ml) en geïncubeerd in een incubator shaker O / N bij 37 ° C, 250 rpm. </li><li> Verdun de kweek van 1: 100 in 200 ml vers LB dat 50 ug / ml kanamycine en incubeer bij 37 ° C, 250 rpm tot de OD600 0,6 bereikt ~. </li><li> HjLAD eiwitexpressie induceren door toevoeging van 0,1 mM isopropyl β-D-thiogalactopyranoside (IPTG) aan het kweekmedium en incubeer bij 16 ° C, 180 rpm gedurende 16 uur. <ol><li> Als alternatief uit te voeren inductie bij 25 ° C, 200 rpm 6 uur als de L-xylulose biosynthese (Stap 2 hieronder) wordt op dezelfde dag uitgevoerd. </li></ol></li><li> Oogst de geïnduceerde E. HjLAD coli cellen door centrifugeren bij 3200 xg gedurende 20 min bij 4 ° C Verwijder het supernatant en ga naar stap 2 om de cel pellet te verwerken. </li><li> Tegelijkertijd voeren de stappen 1,1-1,4 voor E. coli SpNox. </li></ol> 2. biosynthese van L-xylulose door koppeling E. HjLAD coli en E. coli SpNox voor cofactorregeneratiesysteem <ol><li> Resuspendeer de celpellets E. HjLAD coli en E. coli SpNox afzonderlijk in 50 mM Tris-HCl buffer (pH 8,0) bij een celdichtheid van 5,0 g droog celgewicht (gDCW) / L. Opmerking: Een correlatie tussen gDCW en de optische dichtheid gemeten bij 600 nm (OD 600) kan worden vastgesteld om het experiment te vergemakkelijken. De formule die inDit protocol is 1 gDCW / L = 0,722 * OD 600-,0965, die kan variëren tussen verschillende spectrometers. </li><li> Meng 600 ul van 5,0 gDCW / L E. coli HjLAD, 600 ul van 5,0 gDCW / L E. coli SpNox, 100 gl 20 mM NAD +, en 150 pl 2 M L-arabinitol in een 14 ml rondbodem buis en breng het reactievolume tot 2 ml door toevoeging van 550 pl 50 mM Tris-HCl (pH 8,0) . Noot: De verhouding van de twee whole-cell biokatalysatoren bedrag kan worden geoptimaliseerd om de biosynthese van het product te verbeteren. Voor het beschreven systeem, een verhouding van E. SpNox coli: E. coli HjLAD = 1: 1 werd gevonden optimaal voor L-xylulose biosynthese (figuur 1B) te zijn. </li><li> Incubeer het reactiemengsel bij 30 ° C, 200 rpm gedurende 8 uur. </li><li> Verzamel de supernatant na centrifugeren bij 4 ° C, 3200 g gedurende 10 min eennd overgaan tot de L-xylulose productie kwantificeren zoals beschreven in stap 3 hieronder. </li></ol> 3. colorimetrische bepaling van L-xylulose Kwantificering <ol><li> Verzamelbak 100 gl van de reactie supernatant verzameld uit stap 2.4 in een 1,5 ml buis. </li><li> Voeg 50 ul van 1,5% cysteïne, 900 pi 70% zwavelzuur en 50 pi 0,1% carbazool opgelost in ethanol en meng voorzichtig door het buisje 3 keer. </li><li> Incubeer het reactiemengsel bij 37 ° C, 200 rpm gedurende 20 min. </li><li> Meet de optische absorptie van het reactiemengsel bij 560 nm (560 A) met een spectrofotometer. <ol><li> Verdun het reactiemengsel als de A 560 aflezing boven 1. </li></ol></li></ol> 4. Immobilisatie van Recombinant Whole-cell Catalysts in calciumalginaat Kralen <ol><li> Ontbinden 4 g natriumalginaat in 100 ml gedestilleerd water. Bereid alginaatoplossing door toevoeging sodium alginaat water om de vorming van klonten te vermijden. Verwarm het mengsel indien nodig. </li><li> Voeg 600 ul van 5,0 gDCW / L E. coli HjLAD en 600 ui 5,0 gDCW / l E. coli SpNox in 1,2 ml 4% alginaat bereid in stap 4.1 en meng de cellen en alginaat door zachte pipetteren te borrelen vorming te voorkomen. </li><li> Zuig het alginaat / cel suspensie in een spuit met een naald en voeg het mengsel druppelsgewijs een 0,3 M calciumchloride (CaCl2) oplossing in een 100 ml bekerglas onder voortdurend roeren. Opmerking: Het volume van CaCl 2-oplossing voor de vorming alginaat bead moet genoeg zijn om het alginaat druppels volledig wordt ondergedompeld. Bovendien moet de afstand tussen de naald en het oppervlak van de calciumchloride-oplossing binnen een optimaal bereik te handhaven om de vorming van uniforme bolvormige korrels waarborgen. Het optimale bereik afstand kan worden bepaald experimentally en is afhankelijk van de binnendiameter van de naald. Als een schatting, een afstand van ~ 15 ± 5 cm werd gevonden optimaal voor een 0,6 cm (binnendiameter) spuitnaald te zijn. </li><li> Laat de parels in de CaCl2-oplossing voor 2-3 uur bij kamertemperatuur zonder roeren verknoping en vorming gelkorrels toe. </li><li> Schenk de CaCl2 oplossing zonder de korrels storen door voorzichtig gieten van de CaCl2 oplossing in een 50 ml conische buis, en draagt ​​de resterende parels in CaCl 2-oplossing in een 50 ml conische buis. </li><li> Was de kralen met 10 ml 50 mM Tris-HCl (pH 8,0) buffer driemaal overmatig CaCl 2 en niet-ingekapselde cellen te verwijderen. NOTITIE: Op een gegeven stap, niet centrifugeren de parels als dit te doen zal ze scheuren. Om de kralen te scheiden uit de oplossing, zodat de schorsing ongestoord staan ​​voor 3-5 min. De kralen zal vestigen op de bodem en het wassen buffer kan worden overgegotenin een schoon vat. <ol><li> Heeft de gebruikte wassen buffer niet weg. Verzamel de gebruikte Tris-HCl wasbuffer (30 ml) met de gebruikte CaCl 2-oplossing vanuit stap 4,5. </li></ol></li><li> Pellet de-un geïmmobiliseerde E. coli-cellen door centrifugatie van de gepoolde CaCl 2 en Tris-HCl-oplossing vanuit stap 4,6 bij 3200 xg gedurende 20 min. De immobilisatie-effectiviteit vaststelling, de dichtheid van de niet-ingekapselde gepelleteerde cellen in gDCW / L, zoals beschreven in stap 2.1. </li><li> Breng de gewassen korrels uit stap 4.6 in een buis. Volg stap 2,2-3,4 voor de L-xylulose biosynthese via alle gewassen kralen in plaats van celpellets evalueren. </li></ol> 5. Stabiliteit Assay van geïmmobiliseerde Biokatalysatoren voor L-xylulose Production <ol><li> Verzamel de kralen van stap 4,8 en tweemaal wassen met 10 ml 50 mM Tris-HCl (pH 8,0) -buffer zonder centrifugeren (zoals beschreven in stap 4.6). </li><li> gebruik allevan de gewassen kralen om de reactie uit te voeren zoals beschreven in stap 2,2-3,4. </li><li> Herhaal stap 5,1-5,2 voor gewenste aantal productiecycli en meet de hoeveelheid L-xylulose bij de reactie supernatant in elke cyclus. </li></ol>

De auteurs verklaren geen concurrerende financiële belangen. Het papier is gericht op het rapporteren van gedetailleerde methodologie om een ​​gekoppelde whole-cell biokatalytische systeem geïmmobiliseerd in alginaat kralen te genereren. Wetenschappelijke nieuwigheden gemeld in een eerdere studie 16.

Recente technologische ontwikkelingen hebben een sterke stijging in de commercialisering van recombinant biotherapeutica ingeschakeld, wat resulteert in een geleidelijke stijging van hun marktwaarde in de biotechnologie-industrie. Eén zo&#39;n vooruitgang is de komst van metabolic engineering in recombinante micro-organismen, die een grote belofte bij het ​​vaststellen schaalbare industriële systemen 38 is getoond. Zoals bij de meeste processen succesvolle commercialisering van recombinant biomoleculen door g...

Reductieve hele cellen biotransformatie middels micro-organismen is uitgegroeid tot een wijdverspreide werkwijze voor de chemo-enzymatische synthese van commercieel en therapeutisch belangrijke biomoleculen 1-3. Het biedt verschillende voordelen boven het gebruik van geïsoleerde enzymen, met name de eliminatie van dure stroomafwaartse zuiveringsprocessen en de demonstratie van een langere levensduur 4-7. Voor biokatalytische paden indien cofactoren nodig voor productvorming, whole-cell-systemen is in situ cofactorregeneratiesysteem te voorzien via de toevoeging van goedkope elektronendonerende cosubstraten 5,8,9. Dit is echter verminderd vermogen voor reacties die een stoichiometrische concentratie van zeldzame en dure cosubstraten 10 vereisen - 13. Samen met een slechte hergebruik van hele cellen, belemmert dit de oprichting van een schaalbare en continue productie systeem. Strategische modificaties volle-celsystemen deze cofactor-afhankelijke biotransformaties moeten de bovengenoemde beperkingen te overwinnen. Specifiek zijn de combinatie van whole-cell biokatalysatoren die samen te werken aangetoond aanzienlijke verbetering van de productiviteit en stabiliteit van de enzymen 14 herbergde. Deze factoren, die vaak kritiek voor het mogelijk maken grootschalige productie van commercieel levensvatbare producten zijn, kunnen verder worden geoptimaliseerd door co-immobiliseren biokatalytische microben 15. We hebben onlangs een eenvoudige en herbruikbare whole-cell biokatalytische systeem dat zowel cofactorregeneratiesysteem en biokatalysator immobilisatie maakt de L-xylulose productie 16. In deze studie werd dit systeem gebruikt als een voorbeeld voor de experimentele procedures van toepassing van deze twee strategieën voor verbeterde productieopbrengst biotransformatie en biokatalysator herbruikbaarheid illustreren. L-xylulose behoort tot een class van biologisch bruikbare moleculen genaamd zeldzame suikers. Zeldzame suikers zijn uniek monosachariden of suiker derivaten die zeer zelden in de natuur voorkomen, maar een cruciale rol spelen als een erkenning elementen in biologisch actieve moleculen 17,18. Ze hebben een verscheidenheid aan toepassingen, variërend van zoetstoffen, functionele voedingsmiddelen potentiële therapeutische 19. L-xylulose kunnen worden gebruikt als een mogelijke remmer van verschillende α-glucosidases, en kunnen ook worden gebruikt als een indicator van hepatitis of levercirrose 17,20. Hoge omzettingsefficiëntie van xylitol L-xylulose geheel-celsystemen werd voorheen in Pantoea ananatis 21,22, Alcaligenes sp. 701B 23, Bacillus pallidus Y25 24,25 en Escherichia coli 26. In E. coli, maar het werd uitsluitend gebruik van lage (&lt;67 mM) concentraties xylitol 26 vanwege mogelijke remmende effecten van een eerste xylitol concentratie hoger dan 100 mM xylitol on-4-dehydrogenase activiteit 21,26. Thermodynamisch evenwicht tussen xylulose en xylitol is blijkt sterk begunstigen de vorming van xylitol 25,27. Bovendien wordt xylulose opbrengst beperkt door de hoeveelheid dure cofactoren die bij afwezigheid van een in situ cofactorregeneratiesysteem te leveren hebben. Samen vormen deze factoren beperken de mogelijkheden voor schaalvergroting in duurzame systemen voor de L-xylulose biosynthese. Om deze beperkingen te overwinnen en het verbeteren van de L-xylulose biotransformatie opbrengst, werd de strategie van cofactorregeneratiesysteem eerste in dienst van de oprichting van een gekoppelde whole-cell biokatalytische systeem. Specifiek, L-arabinitol 4-dehydrogenase (EC 1.1.1.12) van Hypocrea jecorina (HjLAD), een enzym in de L-arabinose afbraakproduct van schimmels, werd geselecteerd om de omzetting van L-arabinitol katalyseren in L-xylulose 28,29 . Net als veel biosynthetische enzymen, een belangrijke BEPERKIn van HjLAD is dat het een stoichiometrische hoeveelheid van het dure nicotinamide adenine dinucleotide-cofactor (NAD +, de geoxideerde vorm van NADH) deze omzetting uit te voeren. NADH oxidase in Streptococcus pyogenes (SpNox) is aangetoond dat hoge cofactor-activiteit regeneratie 30,31 weergegeven. Door gebruik te maken van deze eigenschap van SpNox, E. coli-cellen die HjLAD voor de productie van L-xylulose gekoppeld met E. coli-cellen die SpNox voor de regeneratie van NAD + op de L-xylulose productie beschreven door gekoppelde reactie figuur 1A stimuleren. Onder optimale omstandigheden en met een aanvankelijke concentratie van 150 mM L-arabinitol, de maximale L-xylulose opbrengst bedroeg 96%, waardoor dit systeem veel efficiënter dan die gerapporteerd in de literatuur. De strategie van whole-cell immobilisatie werd gebruikt naast de verdere versterking van de herbruikbaarheid van de gekoppelde biocatalytic-systeem. Algemeen gebruikte werkwijzen voor whole-cell immobilisatie omvatten adsorptie / covalente koppeling aan vaste matrices, verknoping / invangen en inkapselen in polymere netwerken 32. Onder deze benaderingen, de meest geschikte methode voor mobiele inkapseling immobilisering in calciumalginaat parels. Hun milde geleringseigenschappen, inerte waterige matrix en hoge porositeit bijdragen aan het behoud van de fysiologische eigenschappen en functionaliteit van de ingekapselde biologicals 33. Daarom is de combinatie biokatalysator systeem dat zowel E. coli cellen die HjLAD of SpNox geïmmobiliseerd in calciumalginaat parels meerdere cycli van L-xylulose productiewijzen (figuur 2) .De geïmmobiliseerde biokatalysator systeem aangetoond operationeel stabiel handhaven 65% van het omzettingsrendement van de eerste cyclus na 7 cycli opeenvolgende hergebruik, terwijl de vrije celsysteem de katalytische activiteit bijna volledig verloren.

<table><tbody><tr><td>LB broth&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>L3022-6X1KG</td><td></td></tr><tr><td>Kanamycin</td><td>Fisher</td><td>BP906-5</td><td></td></tr><tr><td>Isopropyl &beta;-D-thiogalactopyranoside (IPTG)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>I6758-10G</td><td></td></tr><tr><td>Tris base</td><td>Fisher</td><td>BP1521</td><td></td></tr><tr><td>B-Nicotinamide adenine dinucleotide hydrate</td><td>Sigma Aldrich</td><td>N7004-1G</td><td></td></tr><tr><td>L-Arabinitol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A3506-10G</td><td></td></tr><tr><td>L-Cysteine</td><td>Sigma Aldrich</td><td>168149</td><td></td></tr><tr><td>Sulfuric acid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>320501-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Carbazole</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C5132</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol&nbsp;</td><td>Fisher</td><td>BP2818-4</td><td></td></tr><tr><td>Sodium alginate</td><td>Sigma Aldrich</td><td>W201502</td><td></td></tr><tr><td>Calcium chloride dihydrate</td><td>Sigma Aldrich</td><td>223506-500G</td><td></td></tr><tr><td>Excella E24 shaker incubator</td><td>New Brunswick Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cary 60 UV-Vis Spectrophotometer</td><td>Agilent Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge 5810R</td><td>Eppendrof</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Beakers</td><td>Fisher</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Syringe</td><td>Fisher</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Needle</td><td>Fisher</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pioneer Analytical and Precision Weighing Balance</td><td>Ohaus</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

immobilisatie van multi-biokatalysatoren in alginaat kralen voor cofactorregeneratiesysteem en verbeterde herbruikbaarheid

Immobilization of Multi-biocatalysts in Alginate Beads for Cofactor Regeneration and Improved Reusability

We hebben onlangs een eenvoudige, herbruikbaar en gekoppeld whole-cell biokatalytische systeem de mogelijkheid cofactorregeneratiesysteem en biokatalysator immobilisatie verbeterde productieopbrengst en aanhoudende synthese. Beschreven is hierbij de experimentele procedure voor de ontwikkeling van een dergelijk systeem bestaat uit twee E. coli-stammen die functioneel complementair zijn enzymen uit te drukken. Samen kunnen deze twee enzymen functioneren coöperatief aan de regeneratie van kostbare co-factoren bemiddelen betere productopbrengst van de bioreaction. Bovendien wordt de werkwijze voor het synthetiseren van een geïmmobiliseerde vorm van het gekoppelde biokatalytische systeem inkapselen van gehele cellen in calciumalginaat parels gerapporteerd. Als voorbeeld geven we de verbeterde biosynthese van L-xylulose van L-arabinitol door koppeling E. coli-cellen die de enzymen L-arabinitol dehydrogenase en NADH oxidase. Onder optimale omstandigheden en met een beginconcentratie van 150mM L-arabinitol, de maximale L-xylulose opbrengst bedroeg 96%, wat hoger is dan die in de literatuur. De geïmmobiliseerde vorm van de gekoppelde whole-cell biokatalysatoren aangetoond operationeel stabiel handhaven 65% van de opbrengst verkregen bij de eerste cyclus na 7 cycli van opeenvolgende hergebruik, terwijl de vrije celsysteem de katalytische activiteit bijna volledig verloren. Daarom is de hier vermelde werkwijzen levert twee strategieën die kunnen bijdragen aan de industriële productie van L-xylulose, alsmede andere verbindingen met toegevoegde waarde waarbij het gebruik van co-factoren in het algemeen.

Om cofactor regeneratie mogelijk te maken, werd L-xylulose synthese in een gekoppelde whole-cell biokatalytische systeem dat E. uitgevoerd HjLAD coli en E. SpNox coli cellen. Na de optimalisering van verschillende parameters, de herbruikbaarheid van het systeem verbeterd door immobiliseren in calciumalginaat parels (figuur 2). ...

Weergegeven is het protocol voor co-immobiliserende hele cellen biokatalysatoren voor cofactorregeneratiesysteem en betere herbruikbaarheid, via de productie van L-xylulose als voorbeeld. De cofactor regeneratie wordt bereikt door het koppelen van twee Escherichia coli-stammen die functionele complementariteit enzymen; de hele cellen biokatalysator immobilisatie wordt bereikt door celinkapselende in calciumalginaat parels.

Immobilisatie van Multi-biokatalysatoren in Alginaat Kralen voor cofactorregeneratiesysteem en verbeterde Herbruikbaarheid

We have recently developed a simple, reusable and coupled whole-cell biocatalytic system with the capability of cofactor regeneration and biocatalyst ...

Het algemene doel van deze experimentele procedure is om het gebruik van een gekoppeld whole-cell biocatalytisch systeem te demonstreren, geïmmobiliseerd in alginaatkralen, voor een verbeterde productieopbrengst en herbruikbaarheid. Dit is mijn onderwerp, waarbij ik antwoord heb gegeven op kernvragen binnen het veld van de biocatalyse, zoals de immobilisatie van biocatalysatoren, stabiliteit, cofactor-regeneratie en whole-cell biocatalysatoren. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het een eenvoudige maar flexibele benadering biedt voor de verbeterde productie van vele belangrijke biomoleculen via cofactor-afhankelijke pathways.In dit protocol worden twee recombinante E. coli-stammen gebruikt: SpNOx E. coli, die NADH-oxidase tot expressie brengt, en HjLAD E. coli, die L-arabinitol-dehydrogenase tot expressie brengt. Aangezien deze procedure voor beide E. coli-stammen identiek is, zal deze enkel worden gedemonstreerd voor HjLAD E. coli.Inoculeer een enkele kolonie HjLAD E coli in drie milliliters LB-medium, aangevuld met 15 micrograms per milliliter Ket-A-My-Sin, en incubeer dit overnacht in een schudincubator. Verdun de volgende dag de cultuur in een verhouding van 1:

immobilization-multi-biocatalysts-alginate-beads-for-cofactor

Research

JoVE Journal

Chemistry

Scheikunde

In de volgende paragrafen beschrijven we procedures voor de bereiding van alginaat die voor toepassing in biomedische toepassingen. We specifiek illustreren een techniek voor het maken van meerdere lagen alginaat microsferen voor het tweeledige doel van de cel en eiwitten inkapseling als een potentiële behandeling voor diabetes type 1.

Genereren van alginaat Microspheres voor biomedische toepassingen

This video demonstrates a method for fabricating polymer microbeads that encapsulate neurotoxic amyloid-beta-secreting cells. The cell-polymer suspension is processed through a microbead fabrication device, with polymer gelation achieved via calcium cross-linking, forming spherical microbeads around the cells. The polymer allows cell proliferation while allowing controlled, long-term amyloid-beta release, simulating its accumulation in Alzheimer's disease.

Fabrication of Amyloid-Beta-Releasing Polymer Microbeads for Modeling Alzheimer&#39;s Disease

We presenteren een methode voor een snelle, omkeerbare immobilisatie van kleine moleculen en gefunctionaliseerde nanodeeltjes assemblages voor Surface Plasmon Resonance (SPR) studies, met behulp van sequentiële on-chip bioorthogonal cycloadditiereactie chemie en antilichaam-antigen capture.

Microfluïdische On-chip Capture-cycloadditiereactie omkeerbaar Immobiliseer Small Molecules of Multi-component Structuren voor biosensortoepassingen

Hier presenteren we een protocol voor het inkapselen van katabolische cellen, die lipiden consumeren voor warmteproductie in intra-abdominaal vetweefsel en de energiedissipatie bij obese muizen verhogen.

Inkapseling Thermogenic preadipocyten voor transplantatie in VetWeefsel Depots

We hebben een methode ontwikkeld om pluripotente stamcellen (PS-cellen) in alginaathydrogeelkapsels te inkapselen met behulp van een coaxiale mondstuk. Dit voorkomt dat cellen zich overmatig bundelen en beperkt de schuifspanning die cellen in suspensiecultuur ervaren. De techniek is toepasbaar op de massaproductie van PS-cellen evenals op onderzoek naar stamcelniches.

Alginaat inkapseling van pluripotente stamcellen Met behulp van een co-axiale Nozzle

Zelf-geassembleerde polyelektrolyetcomplexen (PEC) gemaakt van heparine en protamine werden afgezet op alginaatkralen om osteogene groeifactoren vast te houden en de afgifte ervan te reguleren. Deze afgiftestrategie maakt een 20-voudige vermindering van de BMP-2 dosis mogelijk bij toepassingen voor spinale fusie. Dit artikel illustreert de voordelen en fabricage van PEC's.

Polyelectrolyte Complex voor Heparine Binding Domain osteogeen Growth Factor Delivery

Engineering en analyse van dragende weefsels met heterogene celpopulaties is nog steeds een uitdaging. Hier beschrijven we een methode voor het maken van bi-gelaagde alginaat-hydrogelschijven als platform voor co-cultuur van diverse celpopulaties binnen één constructie.

Gelaagde Alginaat Constructen: Een platform voor Co-cultuur van heterogene celpopulaties

Deze video en manuscript beschrijven een emulsie gebaseerde methode om zoogdiercellen in 0,5% tot 10% alginaatkralen te inkapselen die in grote batches kunnen worden geproduceerd onder gebruikmaking van een eenvoudig geroerd vat. De ingekapselde cellen kunnen in vitro worden gekweekt of getransplanteerd voor toepassingen op het gebied van cellotherapie.

Zoogdiercelcapsulatie in Alginaatkralen Met Een Eenvoudig Verrijkt Vaartuig

Dit protocol illustreert een cel inkapseling methode door snelle fysieke gelatie van alginaat om cellen te immobiliseren. Verkregen microbeads laten gecontroleerde en aanhoudende secretie van amyloid-β toe na verloop van tijd en kunnen worden gebruikt om de effecten van uitgescheiden amyloid-β in in vitro en in vivo modellen te bestuderen.

Vervaardiging van amyloid-β-afscheidende alginaat Microbeads voor gebruik bij de modellering van de ziekte van Alzheimer

Hier worden twee protocollen gepresenteerd voor de inkapseling van varkensocyten in 3D-kweekomstandigheden. In de eerste worden cumulus-eicellencomplexen (COC's) ingekapseld in fibrin-alginaatkralen. In de tweede zijn ze ingesloten met gefluoreerde ethyleenpropyleenpoederdeeltjes (microbioreactoren). Beide systemen zorgen voor optimale omstandigheden om hun 3D-organisatie te onderhouden.

Proteolytisch afgebroken alginaat hydrogels en hydrofobe microbioreactoren voor porcine Oocyte Inkapseling

Leer de co-immobilisatie van E. coli-stammen in alginaat kralen voor verbeterde cofactorregeneratie en herbruikbaarheid bij de productie van L-xylulose. Deze methode optimaliseert biocatalytische processen.

Immobilisatie van Multi-biokatalysatoren in Alginaat Kralen voor cofactorregeneratiesysteem en verbeterde Herbruikbaarheid

Meer video's verkennen