Murine Prostaat Micro-dissectie en chirurgische castratie

Het algemene doel van deze procedures is om het onderzoek naar de prostaat mogelijk te maken, evenals het bestuderen van verschillende hormonale omstandigheden binnen de muis. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen in het veld van prostaatkanker, zoals wat de effecten zijn van hormoondeprivatie op prostaatcarcinogenese. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat de effecten van verschillende pathologische processen en hormonale veranderingen kunnen worden bestudeerd in individuele prostaatklieren.

Begin door een muis op een dissectiebord te bevestigen in de rugligging door de voetkussentjes van elke poot en het abdomen te besproeien met 70% ethanol. Vervolgens, terwijl je de huid van de onderbuik vasthoudt met een pincet, gebruik je een schaar om door de huid en het buikvlies te snijden, ongeveer een centimeter voor de opening van de penis. Blijf door het buikvlies snijden vanaf de onderbuik tot aan de ribbenkast aan beide zijden van het abdomen, waardoor de buikholte wordt blootgelegd.

Na het identificeren van de locatie van de blaas en het urogenitale kanaal, of UGT, verplaats je voorzichtig het vet en andere organen opzij om de urineweefsels bloot te leggen. Vervolgens, met behulp van een pincet, grijpt u een zaadleider bij de basis dichtbij de urethra en scheurt u het vat los. Na het verwijderen van de andere ductus, gebruikt u een pincet om voorzichtig de blaas omhoog te trekken, terwijl u tegelijkertijd met een schaar door de urethra snijdt onder de ventrale prostaat en ongeveer een centimeter onder de basis van de blaas.

Breng de geoogste UGT over in een petrischaal van 60 tot 100 millimeter die ongeveer vijf tot 10 milliliter PBS bevat, en plaats de schaal onder een dissectiemicroscoop. Neem vervolgens een paar fijne pincetten in elke hand, houd de instrumenten als potloden en laat de onderarmen op de werkbladkant rusten, aan weerszijden van de microscoop, om ze stabiel te houden. Positioneer de UGT met de pincetten zodat de blaas omhoog wijst, de urethra naar beneden wijst en de zaadblaasjes aan weerszijden van de blaas zijn gepositioneerd.

Met een pincet grijpt u de urethra en trekt u met het andere pincet voorzichtig het vet weg zonder enig prostaatweefsel te verwijderen. Wanneer al het vet is verwijderd, scheurt u het bindweefsel tussen de twee ventrale lobben van de prostaat om ze te scheiden. Houd vervolgens een van de ventrale lobben dichtbij de punt vast met een pincet en grijpt u de basis van de lob zo dicht mogelijk bij de urethra.

Verplaats nu het andere paar pincetten om de urethra vast te houden terwijl u de lob met een stevige, soepele beweging van het vat weg trekt. Controleer dat er geen prostaatweefsel aan de urethra is bevestigd. Plaats vervolgens de lob in het juiste medium, afhankelijk van de volgende experimentele stap.

Na het isoleren van de andere ventrale lob op dezelfde manier, gebruikt u een pincet om voorzichtig een van de voorste lobben van de zaadblaas te trekken, zorg ervoor dat u de zaadblaas niet doorboort. Zodra de lob onafhankelijk is van de zaadblaas, verwijdert u deze op dezelfde manier als zojuist voor de ventrale lob is gedemonstreerd. Na het isoleren van de tweede voorste lob, draait u de resterende UGT om, zodat de dorsale prostaat zichtbaar is, en gebruikt u een pincet om het bindweefsel tussen de twee dorsale laterale lobben en tussen de lobben en het achterste gebied van de zaadblaasjes te scheuren.

Vervolgens verwijdert u de individuele dorsale laterale lobben, zoals zojuist is gedemonstreerd. Om de castratie uit te voeren, begint u door een verdovingsmuis op een schone, steriele ondergrond in rugligging te plaatsen en controleert u de juiste mate van sedatie door aan een teen te knijpen. Als de muis niet reageert, gebruikt u een elektrische scheermachine om het chirurgische gebied te scheren en het abdomen te steriliseren.

Gebruik vervolgens steriele chirurgische schaar om een verticale incisie van een centimeter door de middenhuid van de onderbuik te maken, ongeveer anderhalve centimeter voor de penis, gevolgd door een kleinere incisie door het buikvlies, zorg ervoor dat u geen organen snijdt. Gebruik steriele pincetten om voorzichtig de gesneden rand van het buikvlies op te tillen om de buikholte te visualiseren en gebruik een ander steriele pincet om een van de testiculaire vetkussentjes naar buiten te trekken totdat de testes verschijnt. Gebruik vervolgens een cauterpen om langzaam door het vetkussen te snijden, houd de testes vast totdat de testiculaire slagader is doorgesneden.

Als de slagader te snel wordt doorgesneden, kan het vat teveel bloeden, waardoor de muis geëuthaniseerd moet worden. Ik raad aan de cauterpen in korte stoten te verwarmen en deze niet te heet te laten worden, beweeg het instrument dan langzaam door de slagader zodat het dier niet uitbloedt. Zodra het vetkussen en de slagader zijn doorgesneden, gooit u de testes en het vetkussen weg en herhaalt u de castratie voor de andere testes.

Nadat de tweede testes is verwijderd, sluit u het buikvlies met steriele zijden hechtingen en sluit u de huid met chirurgische wondclips. Geef vervolgens pijnstilling om de pijn te beheersen en plaats de muis in een schone kooi, op een kooiverwarming, gedurende 5 tot 10 minuten met monitoring, totdat deze volledig is hersteld. Het complete urogenitale kanaal bestaat uit alle zes prostaatlobben, de blaas, de zaadblaasjes en de urethra.

De zaadleider hecht zich aan de urethra, maar is niet nodig voor de prostaat micro-dissectie en kan dus worden losgemaakt voordat de UGT wordt verwijderd. Het urogenitale kanaal blijft intact zodra het uit de buik is verwijderd; bedekt met vetweefsel dat moet worden verwijderd om toegang te krijgen tot de prostaatlobben. In dit representatieve experiment werd de castratie gevolgd door twee cycli van hormonale regeneratie en werden de testosteronniveaus in het serum bepaald met behulp van ELISA.

Zoals verwacht, verdwenen de testosteronniveaus onder castratieomstandigheden vrijwel. In aanwezigheid van tamoxifen, een selectieve oestrogeenreceptormodulator, werd geen significant verschil waargenomen ten opzichte van de hormonaal normale