Name: Voorbereiding en analyse van In Vitro Three Dimensional mammacarcinoom Surrogates (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-05-09T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 16 s
Description: Leer hoe u driedimensionale borstkankersurrogaten genereert met een perfusiebioreactorsysteem en celgroei analyseert in histologische secties. Deze methode verbetert in vitro-modellering voor therapeutisch onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Het University of Alabama at Birmingham Center for Metabolic Bone Disease voerde de histologische verwerking en het snijden van surrogaten uit. Southern Research (Birmingham, AL) zorgde voor ondersteuning bij de vervaardiging van het bioreactorsysteem. Financiering werd verstrekt door het Breast Cancer Research Program (BC121367) van het United States Department of Defense.

<ol><li>Hakanson, M., Textor, M., Charnley, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineered+3D+environments+to+elucidate+the+effect+of+environmental+parameters+on+drug+response+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Integr+Biol+%28Camb%29%22%5BJournal%5D)">Engineered 3D environments to elucidate the effect of environmental parameters on drug response in cancer.</a> Integr Biol (Camb). 3 (1), 31-38 (2011).</li>
<li>Horning, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3-D+tumor+model+for+in+vitro+evaluation+of+anticancer+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pharm%22%5BJournal%5D)">3-D tumor model for in vitro evaluation of anticancer drugs.</a> Mol Pharm. 5 (5), 849-862 (2008).</li>
<li>Dhiman, H. K., Ray, A. R., Panda, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+chitosan+scaffold-based+MCF-7+cell+culture+for+the+determination+of+the+cytotoxicity+of+tamoxifen%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional chitosan scaffold-based MCF-7 cell culture for the determination of the cytotoxicity of tamoxifen.</a> Biomaterials. 26 (9), 979-986 (2005).</li>
<li>Place, A. E., Jin Huh, S., Polyak, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microenvironment+in+breast+cancer+progression%3A+biology+and+implications+for+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">The microenvironment in breast cancer progression: biology and implications for treatment.</a> Breast Cancer Res. 13 (6), 227(2011).</li>
<li>Mao, Y., Keller, E. T., Garfield, D. H., Shen, K., Wang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stromal+cells+in+tumor+microenvironment+and+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Metastasis+Rev%22%5BJournal%5D)">Stromal cells in tumor microenvironment and breast cancer.</a> Cancer Metastasis Rev. 32 (1-2), 303-315 (2013).</li>
<li>Paulsson, J., Micke, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prognostic+relevance+of+cancer-associated+fibroblasts+in+human+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cancer+Biol%22%5BJournal%5D)">Prognostic relevance of cancer-associated fibroblasts in human cancer.</a> Semin Cancer Biol. 25, 61-68 (2014).</li>
<li>Roskelley, C. D., Desprez, P. Y., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix-dependent+tissue-specific+gene+expression+in+mammary+epithelial+cells+requires+both+physical+and+biochemical+signal+transduction%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix-dependent tissue-specific gene expression in mammary epithelial cells requires both physical and biochemical signal transduction.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 91, 12378-12382 (1994).</li>
<li>Pickl, M., Ries, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+3D+and+2D+tumor+models+reveals+enhanced+HER2+activation+in+3D+associated+with+an+increased+response+to+trastuzumab%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Comparison of 3D and 2D tumor models reveals enhanced HER2 activation in 3D associated with an increased response to trastuzumab.</a> Oncogene. 28 (3), 461-468 (2008).</li>
<li>Ivascu, A., Kubbies, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+generation+of+single-tumor+spheroids+for+high-throughput+cell+function+and+toxicity+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomol+Screen%22%5BJournal%5D)">Rapid generation of single-tumor spheroids for high-throughput cell function and toxicity analysis.</a> J Biomol Screen. 11 (8), 922-932 (2006).</li>
<li>Lovitt, C. J., Shelper, T. B., Avery, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+cell+culture+techniques+for+cancer+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Advanced cell culture techniques for cancer drug discovery.</a> Biology (Basel). 3 (2), 345-367 (2014).</li>
<li>Bergamaschi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix+signature+identifies+breast+cancer+subgroups+with+different+clinical+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix signature identifies breast cancer subgroups with different clinical outcome.</a> J Pathol. 214 (3), 357-367 (2008).</li>
<li>Oskarsson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix+components+in+breast+cancer+progression+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Breast%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix components in breast cancer progression and metastasis.</a> The Breast. 22, S66-S72 (2013).</li>
<li>Kelley, L. C., Lohmer, L. L., Hagedorn, E. J., Sherwood, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Traversing+the+basement+membrane+in+vivo%3A+A+diversity+of+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22JBC%22%5BJournal%5D)">Traversing the basement membrane in vivo: A diversity of strategies.</a> JBC. 204 (3), 291-301 (2014).</li>
<li>Sadlonova, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breast+fibroblasts+modulate+epithelial+cell+proliferation+in+three-dimensional+in+vitro+co-culture%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Breast fibroblasts modulate epithelial cell proliferation in three-dimensional in vitro co-culture.</a> Breast Cancer Res. 4, (2004).</li>
<li>Wendt, D., Marsano, A., Jakob, M., Heberer, M., Martin, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oscillating+perfusion+of+cell+suspensions+through+three-dimensional+scaffolds+enhances+cell+seeding+efficiency+and+uniformity%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Oscillating perfusion of cell suspensions through three-dimensional scaffolds enhances cell seeding efficiency and uniformity.</a> Biotechnol Bioeng. 84 (2), 205-214 (2003).</li>
<li>Marshall, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow-perfusion+bioreactor+system+for+engineered+breast+cancer+surrogates+to+be+used+in+preclinical+testing%5BTitle%5D)+AND+%22J+Tissue+Eng+Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Flow-perfusion bioreactor system for engineered breast cancer surrogates to be used in preclinical testing.</a> J Tissue Eng Regen Med. , (2015).</li>
<li>Calcagnile, P., Fragouli, D., Mele, E., Ruffilli, R., Athanassiou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymeric+foams+with+functional+nanocomposite+cells%5BTitle%5D)+AND+%22RSC+Adv%22%5BJournal%5D)">Polymeric foams with functional nanocomposite cells.</a> RSC Adv. 4, 19177-19182 (2014).</li>
<li>Naba, A., Clauser, K. R., Lamar, J. M., Carr, S. A., Hynes, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix+signatures+of+human+mammary+carcinoma+identify+novel+metastasis+promoters%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix signatures of human mammary carcinoma identify novel metastasis promoters.</a> eLife. 3, (2014).</li>
<li>Lochter, A., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+extracellular+matrix+constituents+in+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cancer+Biol%22%5BJournal%5D)">Involvement of extracellular matrix constituents in breast cancer.</a> Semin Cancer Biol. 6 (3), 165-173 (1995).</li>
<li>Joiner, K. S., Spangler, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+HistoGel-embedded+specimens+for+use+in+veterinary+diagnostic+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vet+Diagn+Invest%22%5BJournal%5D)">Evaluation of HistoGel-embedded specimens for use in veterinary diagnostic pathology.</a> J Vet Diagn Invest. 24 (4), 710-715 (2012).</li>
<li>Varsegi, G. M., Shidham, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+Block+Preparation+from+Cytology+Specimen+with+Predominance+of+Individually+Scattered+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Cell Block Preparation from Cytology Specimen with Predominance of Individually Scattered Cells.</a> J Vis Exp. (29), e1316(2009).</li>
<li>Sadlonova, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+Breast+Fibroblasts+Inhibit+Growth+of+the+MCF10AT+Xenograft+Model+of+Proliferative+Breast+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Human Breast Fibroblasts Inhibit Growth of the MCF10AT Xenograft Model of Proliferative Breast Disease.</a> Am J Pathol. 170 (3), (2007).</li>
<li>Otali, D., He, Q., Stockard, C. R., Grizzle, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preservation+of+immunorecognition+by+transferring+cells+from+10%25+neutral+buffered+formalin+to+70%25+ethanol%5BTitle%5D)+AND+%22Biotech+Histochem%22%5BJournal%5D)">Preservation of immunorecognition by transferring cells from 10% neutral buffered formalin to 70% ethanol.</a> Biotech Histochem. 88 (0), 170-180 (2013).</li>
<li>Webster, S. S., Jenkins, L., Burg, K. J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histological+Techniques+for+Porous%2C+Absorbable%2C+Polymeric+Scaffolds%2C+Used+in+Tissue+Engineering%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histotechnol%22%5BJournal%5D)">Histological Techniques for Porous, Absorbable, Polymeric Scaffolds, Used in Tissue Engineering.</a> J Histotechnol. 26 (1), 57-65 (2003).</li>
<li>Troy, T. -C., Arabzadeh, A., Enikanolaiye, A., Lariviere, N., Turksen, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistochemistry+on+Paraffin+Sections+of+Mouse+Epidermis+Using+Fluorescent+Antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Immunohistochemistry on Paraffin Sections of Mouse Epidermis Using Fluorescent Antibodies.</a> J Vis Exp. (11), (2008).</li>
<li>Carpenter, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CellProfiler%3A+image+analysis+software+for+identifying+and+quantifying+cell+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biol%22%5BJournal%5D)">CellProfiler: image analysis software for identifying and quantifying cell phenotypes.</a> Genome Biol. 7 (10), R100(2006).</li>
<li>Kwon, Y. -J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gli1+enhances+migration+and+invasion+via+up-regulation+of+MMP-11+and+promotes+metastasis+in+ERa+negative+breast+cancer+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Gli1 enhances migration and invasion via up-regulation of MMP-11 and promotes metastasis in ERa negative breast cancer cell lines.</a> Clin Exp Metastasis. (28), (2011).</li>
<li>Evilsizor, M. N., Ray-Jones, H. F., Lifshitz, J., Ziebell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primer+for+Immunohistochemistry+on+Cryosectioned+Rat+Brain+Tissue%3A+Example+Staining+for+Microglia+and+Neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Primer for Immunohistochemistry on Cryosectioned Rat Brain Tissue: Example Staining for Microglia and Neurons.</a> J Vis Exp. (99), e52293(2015).</li>
<li>Pal, A., Kleer, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three+dimensional+cultures%3A+a+tool+to+study+normal+acinar+architecture+vs.+malignant+transformation+of+breast+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Three dimensional cultures: a tool to study normal acinar architecture vs. malignant transformation of breast cells.</a> J Vis Exp. (86), e51311(2014).</li>
<li>Hasselbach, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+High+Grade+Glioma+Cell+Culture+from+Surgical+Specimens+for+Use+in+Clinically+Relevant+Animal+Models+and+3D+Immunochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Optimization of High Grade Glioma Cell Culture from Surgical Specimens for Use in Clinically Relevant Animal Models and 3D Immunochemistry.</a> J Vis Exp. (83), e51088(2014).</li>
<li>Foty, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Simple+Hanging+Drop+Cell+Culture+Protocol+for+Generation+of+3D+Spheroids%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A Simple Hanging Drop Cell Culture Protocol for Generation of 3D Spheroids.</a> J Vis Exp. (51), e2720(2011).</li>
<li>Materne, E. -M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Multi-organ+Chip+-+A+Microfluidic+Platform+for+Long-term+Multi-tissue+Coculture%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">The Multi-organ Chip - A Microfluidic Platform for Long-term Multi-tissue Coculture.</a> J Vis Exp. (98), e52526(2015).</li>
<li>Sadlonova, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+Molecular+Distinctions+Between+Normal+Breast-Associated+Fibroblasts+and+Breast+Cancer-Associated+Fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Microenviron%22%5BJournal%5D)">Identification of Molecular Distinctions Between Normal Breast-Associated Fibroblasts and Breast Cancer-Associated Fibroblasts.</a> Cancer Microenviron. 2, 9-21 (2009).</li>
<li>Wang, J. D., Douville, N. J., Takayama, S., ElSayed, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+analysis+of+molecular+absorption+into+PDMS+microfluidic+channels%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Quantitative analysis of molecular absorption into PDMS microfluidic channels.</a> Ann Biomed Eng. 40 (9), 1862-1873 (2012).</li>
<li>Halldorsson, S., Lucumi, E., Gomez-Sjoberg, R., Fleming, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advantages+and+challenges+of+microfluidic+cell+culture+in+polydimethylsiloxane+devices%5BTitle%5D)+AND+%22Biosens+Bioelectron%22%5BJournal%5D)">Advantages and challenges of microfluidic cell culture in polydimethylsiloxane devices.</a> Biosens Bioelectron. 63, 218-231 (2015).</li>
<li>Regehr, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+implications+of+polydimethylsiloxane-based+microfluidic+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Biological implications of polydimethylsiloxane-based microfluidic cell culture.</a> Lab Chip. 9 (15), 2132-2139 (2009).</li>
<li>Burdett, E., Kasper, F. K., Mikos, A. G., Ludwig, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+tumors%3A+a+tissue+engineering+perspective+in+cancer+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+B+Rev%22%5BJournal%5D)">Engineering tumors: a tissue engineering perspective in cancer biology.</a> Tissue Eng Part B Rev. 16 (3), 351-359 (2010).</li>
<li>Caruso, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+coagulative+necrosis+in+malignant+epithelial+tumors+%28Review%29%5BTitle%5D)+AND+%22Oncol+Lett%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of coagulative necrosis in malignant epithelial tumors (Review).</a> Oncol Lett. 8 (4), 1397-1402 (2014).</li>
<li>Elmore, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis%3A+A+Review+of+Programmed+Cell+Death%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Pathol%22%5BJournal%5D)">Apoptosis: A Review of Programmed Cell Death.</a> Toxicol Pathol. 35 (4), 495-516 (2007).</li>
<li>Majno, G., Joris, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis%2C+oncosis%2C+and+necrosis.+An+overview+of+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Apoptosis, oncosis, and necrosis. An overview of cell death.</a> Am J Pathol. 146 (1), 3-15 (1995).</li>
<li>Ogino, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+pathological+epidemiology+of+epigenetics%3A+emerging+integrative+science+to+analyze+environment%2C+host%2C+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Mod+Pathol%22%5BJournal%5D)">Molecular pathological epidemiology of epigenetics: emerging integrative science to analyze environment, host, and disease.</a> Mod Pathol. 26 (4), 465-484 (2013).</li>
<li>Otali, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combined+effects+of+formalin+fixation+and+tissue+processing+on+immunorecognition%5BTitle%5D)+AND+%22Biotech+Histochem%22%5BJournal%5D)">Combined effects of formalin fixation and tissue processing on immunorecognition.</a> Biotech Histochem. 84 (5), 223-247 (2009).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat ze geen concurrerende financiële belangen hebben.

Hierin is een werkwijze voor 3D cultuur beschreven dat componenten van het weefsel micro, waaronder de extracellulaire matrix (ECM) en humane stromale fibroblasten bevat, in een hoeveelheid die dichter modellen menselijke borstkanker om voor de ontwikkeling van een samenvattend 3D morfologie . De 3D kweekmethode beschreven representatiever menselijke ziekten dan traditionele 2D celkweek die meerdere celtypen opgenomen in een 3D-volume van ECM. Er wordt opgemerkt dat deze parameters (dat wil zeggen, verschillend...

Driedimensionale (3D) cultuurmodellen die nauwkeuriger na te bootsen de tumor micro-architectuur en in vivo in studies gericht op de complexe interacties tussen cellen en hun micro ontleden en werkzaamheid van kandidaat therapieën testen. Tumor dimensionaliteit effecten van zuurstof en voedingsstoffen gradiënten, de uniformiteit van de blootstelling aan het geneesmiddel, interstitiële druk / doorbloeding, en 3D-architectuur 1-4. De aanwezigheid van een geschikte stromale tumor micro bijdraagt ​​aan dimensionaliteit en invloeden cel-ECM signalering en paracrienen tussen bindweefselcellen en kwaadaardige epitheelcellen. De effecten van de tumor dimensionaliteit en het micromilieu op de cellulaire functie zijn goed ingeburgerd, met beide factoren veranderen drug reactie 1,3,5-8. Bovendien, cellulaire groei kinetiek, stofwisseling en cell signaling verschillen tussen tweedimensionale (2D) cultuur en cultuur in 3D, met deze factoren affecting cellulaire respons 1,3,8-10. In vitro, kan de tumor surrogaat micro gemoduleerd worden door het opnemen van representatieve ECM bestanddelen en stromale cellen populaties. Kwaadaardige epitheelcellen worden beïnvloed door de ECM en kankergeassocieerde stromale cellen hetzij in een synergistisch / beschermende wijze tumorprogressie bevorderen of op een onderdrukkende wijze verdere vermeerdering 5,6,10 tumor remmen. In beide context, kan de stroma en therapeutische respons geneesmiddelafgifte via paracrienen en / of door het verhogen interstitiële druk in de tumor resulteert in verminderde geneesmiddelafgifte 1,6 beïnvloeden. Daarom zal de toevoeging van ECM en stromale cellen in preklinische modellen te recapituleren aspecten van de tumor die niet goed kunnen worden gemodelleerd in 2D cultuur. Hierin wordt een methode om borstkanker surrogaten dat een samenvattend micro-omgeving op te nemen, met inbegrip van ECM bestanddelen en s vast te stellentromal cellen, in een 3D volume wordt beschreven. In borstcarcinoom, wordt de stromale celpopulatie voornamelijk bestaat uit kanker geassocieerde fibroblasten (CAF) en de stromale ECM bestaat voornamelijk uit collageen type I met een kleinere hoeveelheid matrix onderdeel dat in het basale membraan, waaronder laminine en collageen type IV 1,4,11-13. Daarom zijn deze onderdelen van het micro borstcarcinoom (bijv CAF, collageen I en basaalmembraan) zijn opgenomen in de surrogaten. Deze methode kan worden gebruikt om vaste, niet-geperfundeerde 3D ​​surrogaten (Figuur 1A) genereren of kunnen worden aangepast aan perfusie drager omvatten via surrogaat via een bioreactorsysteem (Figuur 1B). Beide benaderingen zijn beschreven. Deze werkwijze kan ook worden aangepast om andere stromale elementen, zoals tumor-geassocieerde macrofagen omvatten, of andere vaste tumoren modelleren door instellen van de cellulaire en ECM componenten, indien nodig. <pclass = &quot;jove_content&quot;&gt; Voor de borstcarcinoom surrogaat beschreven, hebben we gebruik gemaakt van de MDA-MB-231 (231) borstkanker cellijn, CAF eerder geïsoleerd uit humane borstcarcinoom 14 en een ECM samengesteld uit 90% collageen I ( 6 mg / ml) en 10% groeifactor verlaagd basaal membraan materiaal (BM). De draagmoeder is ofwel gekweekt in een 8-well kamer slide (vast surrogaat) of een bioreactor systeem wordt gebruikt om continue perfusie van voedingsstoffen (doorbloed surrogaat) te verstrekken. Elke perfusie bioreactorsysteem die geschikt een volume van ECM bevattende cellen kunnen worden gebruikt 15. Als voorbeeld beschrijven we de bereiding van het weefsel surrogaten in ons bioreactorsysteem. Dit systeem is in eigen huis ontwikkeld en is niet in de handel verkrijgbaar. Omdat onze focus ligt hierbij op de voorbereiding en de analyse van de 3D-weefsel surrogaten, hebben we niet gegaan in uitgebreide details met betrekking tot de specifieke kenmerken van de fabricage en assemblage van onze bioreactor systeem. Echter, een gedetailleerde beschrijving vanDit systeem en de ontwikkeling ervan is gepubliceerd 16. In het bioreactorsysteem, wordt een polydimethylsiloxaan (PDMS) stromingskanaal gebruikt om het surrogaat, die wordt ondersteund door een PDMS schuim huis (gevormd onder toepassing van werkwijzen vergelijkbaar met die beschreven door Calcagnile et al. 17). Deze hoeveelheid wordt gepenetreerd door 4 microkanalen (elk 400 urn diameter) die continu door medium perfusie via een microphysiologic pomp zuurstof en nutriënten naar de draagmoeder. Passende analyse van de surrogaten cruciaal om relevante informatie te verkrijgen over cellulaire functie in respons op behandeling of andere manipulaties. Surrogaten kunnen worden geanalyseerd op verschillende manieren inclusief directe beeldvorming van intacte surrogaten via confocale microscopie of ander niet-invasieve beeldvorming, indirect cellulaire analyse door het bepalen van de geconditioneerde media of perfusaat voor uitgescheiden producten of analyse van histologische secties na fixatie en verwerking naarparaffine. Een dergelijke parameter die kan worden beoordeeld op histologische secties celdichtheid. Wij presenteren een benadering celdichtheid te meten (dat wil zeggen, het aantal kernhoudende cellen per groep gebied) door middel van semi-automatische beeldverwerking toegepast voor microfoto surrogaat histologische secties gekleurd met hematoxyline en eosine (H &amp; E). De celdichtheid kan worden gebruikt als een indicator van de relatieve verandering van het aantal cellen in de tijd of als gevolg van wisselende groeiomstandigheden en behandelingen. <img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/54004/54004fig1.jpg" /> Figuur 1. 3D volume en bioreactorsysteem. A) Schema van de werkwijze om vaste 3D surrogaten genereren. Top: cartoon van vaste 3D-volume met ECM (roze), epitheliale carcinoma cellen (geel), en CAF (oranje); Bottom:. Bovenaanzicht van 8-well kamer dia met surrogaten B) Schematische voorstelling van het proces voor het genereren van 3D-doorbloed surrogaten. Top: cartoon van 3D-volume met kanalen mogelijk te maken voor middelgrote perfusie en met ECM (roze), epitheliale carcinoma cellen (geel), en CAF (oranje); Midden: beeld van PDMS stroom kanaal met PDMS schuim (zwarte pijl) te injecteren met een mobiele + ECM en gepenetreerd door roestvrij staaldraad-polymeer beklede (roze pijl) van 400 micrometer in doorsnede; Onder:. Beeld van de PDMS stromingskanaal met een surrogaat en verbonden met het bioreactorsysteem om continue perfusie medium (peristaltische pomp en media reservoir niet getoond) C) Foto&#39;s van verwerkingsstappen voor zowel vaste als geperfundeerd surrogaten na het kweken. Links: beeld van de cryomold met specimen verwerking gel en surrogaat; Midden: beeld van een paraffine blok met een vast en verwerkt surrogaat; Rechts:. Beeld van een glasplaatje met een H &amp; E-gekleurde histologische doorsnede van een surrogaat <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54004/54004fig1large.jpg" target="_blank">Klik hier om te bekijken</a>grotere versie van dit cijfer.

<table><tbody><tr><td>Dulbecco's Modified Eagel Medium 1x (DMEM)</td><td>Corning CellGro</td><td>10-014-CV</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>S11150</td><td></td></tr><tr><td>0.25% Trypsin + 2.21&nbsp;mM EDTA 1x</td><td>Corning</td><td>25-053-CI</td><td></td></tr><tr><td>Tissuc Cultuur platen, 100&nbsp;mm</td><td>CellTreat Scientific Products</td><td>229620</td><td>Steriele</td></tr><tr><td>Tissuc Cultuur platen, 35&nbsp;mm</td><td>CellTreat Scientific Products</td><td>229638</td><td>Voor PDMS schuim vorming&nbsp;</td></tr><tr><td>9" Glass pijpjes</td><td>Fisher&nbsp;</td><td>13-678-20D</td><td>Steriele</td></tr><tr><td>10 ml pijpjes</td><td>CellTreat Scientific Products</td><td>229210B</td><td>Steriele</td></tr><tr><td>1,000 &micro;l pijpjes tips</td><td>FisherBrand</td><td>02-717-166</td><td>Steriele Gefilterd</td></tr><tr><td>200 &micro;l pijpjes tips</td><td>FisherBrand</td><td>02-717-141</td><td>Steriele Gefilterd</td></tr><tr><td>10 &micro;l pijpjes tips</td><td>FisherBrand</td><td>02-717-158</td><td>Steriele Gefilterd</td></tr><tr><td>15 ml conische buisjes</td><td>CellTreat Scientific Products</td><td>229410</td><td>Steriele</td></tr><tr><td>50 ml conische buisjes</td><td>CellTreat Scientific Products</td><td>229422</td><td>Steriele</td></tr><tr><td>1.5 ml microcentrifugebuisjes</td><td>FisherBrand</td><td>05-408-129</td><td>Steriele</td></tr><tr><td>Trypan blauw</td><td>Corning Cellgro</td><td>25-900-CI</td><td>Steriele</td></tr><tr><td>Sylgard 184</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>24236-10</td><td>PDMS elastomer en verhardingsmiddel. Gebruikt voor onze in-house bioreactor.</td></tr><tr><td>PDMS Foam</td><td></td><td></td><td>Gemaakt in huis voor gebruik in onze in-house bioreactor.</td></tr><tr><td>High Concentration Bovine Collagen Type I</td><td>Advanced Biomatrix</td><td>5133-A</td><td>FibriCol ~10 mg/ml</td></tr><tr><td>Growth Factor Reduced Matrigel (Basement Membrane)</td><td>Corning</td><td>354230</td><td>Basement membrane materiaal</td></tr><tr><td>Sodium Bicarbonate</td><td>Sigma</td><td>S8761</td><td></td></tr><tr><td>Molecular Biology Grade Water</td><td>Fisher</td><td>BP2819-1</td><td></td></tr><tr><td>DMEM 10x&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2429</td><td></td></tr><tr><td>Nunc Lab-Tek Chamber Slide System&nbsp;</td><td>Thermo Scientific</td><td>177402</td><td>8-well</td></tr><tr><td>Bioreactor</td><td></td><td></td><td>Gemaakt in huis.</td></tr><tr><td>Spring-Back 304 roestvrij staal&mdash;Gecoat met PTFE polymeer</td><td>McMaster-Carr</td><td>1749T19</td><td>Roestvrijstalen draden om microkanalen te genereren in ons in-house&nbsp; bioreactorsysteem. 0,016" Diameter</td></tr><tr><td>BioPharm Plus platina-gecureerde siliconen pompbuis, L/S 14</td><td>Masterflex</td><td>EW-96440-14</td><td>Voor gebruik in ons in-house bioreactorsysteem. Buis ID: 1,6 mm, Slang draad scherm grootte: 1/16 in.</td></tr><tr><td>2-Stop Tubing Sets, niet-verflensd PVC, 1.52&nbsp;mm ID</td><td>Cole-Parmer&nbsp;</td><td>EW-74906-36</td><td>Voor gebruik in ons in-house bioreactorsysteem (met microperistaltische pomp).&nbsp;</td></tr><tr><td>Six Channel precision micro peristaltic pomp</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-74906-04</td><td>Voor gebruik met ons in-house bioreactorsysteem</td></tr><tr><td>Tuberculin Spritzen</td><td>BD Medical</td><td>309625</td><td>26 gauge 3/8 in. naald; Steriele</td></tr><tr><td>Dissecting Tissue Forceps</td><td>FisherBrand</td><td>13-812-36</td><td>5,5 inch</td></tr><tr><td>Mini Tube Rotator</td><td>Boekel Scientific</td><td>260750</td><td>Apparatuuroptie voor surrogaat rotatie. Gebruikt met carrousel voor 50 ml buisjes (modelnummer 260753)</td></tr><tr><td>50 ml buisje carrousel</td><td>Boekel Scientific</td><td>260753</td><td>Gebruikt met mini tube rotator</td></tr><tr><td>Bambino&nbsp; Hybridisatieoven</td><td>Boekel Scientific</td><td>230301</td><td>Apparatuuroptie voor surrogaat rotatie</td></tr><tr><td>HistoGel Specimen Processing Gel</td><td>Thermo Scientific</td><td>HG-4000-012</td><td>Specimen Processing Gel beschreven in Stap 5.2</td></tr><tr><td>Cryomold</td><td>Andwin Scientific</td><td>4566</td><td>15 mm x 15 mm x 5 mm</td></tr><tr><td>Tissu Marking Dye</td><td>Cancer Diagnostics, inc.&nbsp;</td><td>03000P</td><td>Kan worden gebruikt om surrogaten te markeren,&nbsp; waardoor meerdere monsters in één weefsel cassette kunnen worden opgenomen&nbsp;</td></tr><tr><td>Hinged tissue cassettes&nbsp;</td><td>FisherBrand</td><td>22-272-416</td><td></td></tr><tr><td>Formalin</td><td>Fisher</td><td>23-245-685</td><td></td></tr><tr><td>GoldSeal Plain Glass Slides</td><td>Thermo Scientific</td><td>3048-002</td><td></td></tr><tr><td>Xylene</td><td>Fisher</td><td>X3P-1GAL</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol, 200 proof (100%), USP</td><td>Decon Laboratories, Inc.</td><td>2805M</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylin</td><td>Thermo Scientific Richard-Allan Scientific</td><td>7211</td><td></td></tr><tr><td>Clarifier</td><td>Thermo Scientific Richard-Allan Scientific</td><td>7401</td><td></td></tr><tr><td>Bluing Solution</td><td>Thermo Scientific Richard-Allan Scientific</td><td>7301</td><td></td></tr><tr><td>Eosin Y</td><td>Thermo Scientific Richard-Allan Scientific</td><td>7111</td><td></td></tr><tr><td>Cytoseal XYL mounting media</td><td>Thermo Scientific Richard-Allan Scientific</td><td>83124</td><td></td></tr><tr><td>Coverslips</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-548-5G</td><td></td></tr></tbody></table>

voorbereiding en analyse van<em&gt; in vitro</em&gt; three dimensional mammacarcinoom surrogates

Preparation and Analysis of In Vitro Three Dimensional Breast Carcinoma Surrogates

Driedimensionale (3D) cultuur is een meer fysiologisch relevante manier naar cel gedrag te modelleren in vitro dan tweedimensionale cultuur. Carcinomen waaronder borst- carcinomen, zijn complexe 3D weefsels samengesteld kanker epitheelcellen en stromale componenten, waaronder fibroblasten en extracellulaire matrix (ECM). Maar de meeste in vitro modellen van borstcarcinoom uitsluitend bestaan ​​kanker epitheelcellen, weglaten van het stroma en derhalve de 3D ​​architectuur van een tumor in vivo. Geschikte 3D modelleren van carcinoom is belangrijk voor het juist begrip van de tumor biologie, gedrag, en de respons op de behandeling. Echter, wanneer de duur van de cultuur en het volume van 3D-modellen beperkt door de beschikbaarheid van zuurstof en voedingsstoffen in de cultuur. Hierin tonen we een werkwijze waarin borstcarcinoom epitheliale cellen en stromale fibroblasten worden geïncorporeerd in ECM een 3D borstkanker surrogaat dat stroma bevat en kan worden gekweekt als genererenvaste 3D-structuur of door een perfusie bioreactorsysteem om zuurstof en voedingsstoffen leveren. Na installatie en een eerste groeiperiode, kan surrogaten worden gebruikt voor geneesmiddelen in preklinische testen. Als alternatief kan de cellulaire en matrixcomponenten van het surrogaat worden gemodificeerd om een ​​verscheidenheid van biologische vragen te beantwoorden. Na het kweken, worden surrogaten gefixeerd en verwerkt voor paraffine, op een wijze vergelijkbaar met de behandeling van borstcarcinoom klinische monsters voor evaluatie van parameters plaats. De evaluatie van een dergelijke parameter, de dichtheid van de cellen aanwezig is uiteengezet, waarbij ImageJ en CellProfiler beeldanalyse software kunnen worden toegepast op microfoto van histologische secties van alternatieve methoden om het aantal kernhoudende cellen per gebied kwantificeren. Dit kan worden gebruikt als een indicator van de verandering van het aantal cellen in de tijd of de verandering in celaantal gevolg van wisselende groeiomstandigheden en behandelingen.

Volle en geperfuseerd 3D borstkanker surrogaten werden bereid zoals boven beschreven en gedurende 7 dagen. Vervolgens werden surrogaten vastgesteld, verwerkt tot paraffine, in secties verdeeld en gekleurd met hematoxyline en eosine, zoals hierboven beschreven. Het aantal kernhoudende cellen per gebied (zowel 231 cellen en CAF) van elk surrogaat werd gemeten. Zoals te zien in figuur 12, representatieve microfoto van het H &amp; E gekleurde secties tonen een hogere concent...

We demonstreren een methode om 3D-surrogaten voor borstkanker te genereren, die kunnen worden gekweekt met behulp van een perfusiebioreactorsysteem om zuurstof en voedingsstoffen af te geven. Na de groei worden surrogaten gefixeerd en verwerkt tot paraffine voor evaluatie van parameters van belang. De evaluatie van één van deze parameters, celdichtheid, wordt uitgelegd.

Voorbereiding en analyse van<em&gt; In Vitro</em&gt; Three Dimensional mammacarcinoom Surrogates

Three dimensional (3D) culture is a more physiologically relevant method to model cell behavior in vitro than two dimensional culture. Carcinomas, ...

Het algemene doel van deze reeks procedures is het genereren van driedimensionale celculturen die fungeren als in vitro surrogaat voor borstkanker, en het presenteren van een methode voor het meten van celgroei in histologische coupes van deze surrogaten. Driedimensionale celcultuur is een fysiologisch relevantere methode voor het modelleren van celgedrag in vitro dan tweedimensionale celcultuur. Door de cellulaire samenstelling in experimentele condities te wijzigen, kan deze reeks procedures worden aangepast om diverse biologische vragen te beantwoorden en de effectiviteit van kandidaat-therapeutica te beoordelen.Om de cellen in de ECM te incorporeren, voegt u op ijs de cellen en de eerste vier bijbehorende componenten uit tabel één in het bijbehorende manuscript toe aan een microcentrifugebuis van twee millimeter. Meng deze vervolgens voorzichtig door te pipetteren en vermijd de vorming van luchtbellen. Controleer de pH-waarde aan de hand van het fenolrood in het 10XD MEM om er zeker van te zijn dat het mengsel een oranje-roze kleur vertoont, wat duidt op een pH van zeven.Als het mengsel geel kleurt en de pH te laag is, voeg dan langzaam 7,5 procent natriumbicarbonaat toe, druppel voor druppel, totdat de juiste kleur is bereikt. Denk eraan om het mengsel op ijs te bewaren en snel te werken om voortijdige ECM-polymerisatie te voorkomen. Houd voor vaste 3D-culturen het kamerslide op ijs om voortijdige ECM-polymerisatie te voorkomen.Pipette langzaam 100 µL van het cellen-ECM-mengsel in elke put van de chamber slide met acht putten, en pipette het cellen-ECM-mengsel langs de randen van de put om het mengsel beter te verspreiden. Incubeer vervolgens de surrogaten bij 37 °C en 5% CO2 gedurende 45 minuten om de polymerisatie van de ECM mogelijk te maken. Voeg na vijfenvijftig minuten 100 µL kweekmedium toe aan elke put en incubeer bij 37 °C en 5% CO2 voor de duur van het experiment.Vervang het kweekmedium elke twee dagen. Een beperking van 3D-cultuur is dat de diffusie van zuurstof en voedingsstoffen in het volume mogelijk onvoldoende is om de levensvatbaarheid van de cellen te ondersteunen. De toevoeging van een bioreactorsysteem kan helpen om deze beperking te overwinnen en de groei te bevorderen.Om 3D-culturen te perfunderen in een bioreactorsysteem, bereid en assembleer steriel het deel van het bioreactorsysteem waarin de surrogaten worden geplaatst. Injecteer in een cellenkweekkast, met behulp van een spuit met een naald van 26 gauge, het cellen-ECM-mengsel in het gebied van de perfusiebioreactor dat bestemd is voor de cellen, en ga direct over naar de volgende stap. Om een gelijkmatigere distributie van cellen binnen de surrogaten te garanderen, plaatst u het bioreactorcomponent waarin de surrogaten zich bevinden in een conische buis van 50 milliliter.Roteer de surrogaten continu met 18 rpm terwijl ze 45 minuten lang worden geïncubeerd bij 37 graden Celsius in een in situ hybridisatie-oven of een incubator om polymerisatie van de ECM mogelijk te maken. Sluit na de polymerisatie en de toevoeging van medium de bioreactor-assemblage aan op de pomp. Start de perfusie van het medium in een incubator bij 37 graden Celsius en vijf procent CO2.Zet de perfusie van het medium voort gedurende de looptijd van het experiment en vervang het kweekmedium indien nodig, afhankelijk van het specifieke experimentele ontwerp. Omhull de surrogaten aan het einde van het experiment in specimen-verwerkingsgel om de surrogaten tijdens de verwerking intact te houden en de histologische doorsneden te vergemakkelijken. Smelt hiervoor de specimen-verwerkingsgel in een waterbad van 60 °C tot deze klaar is voor gebruik.Pipette vervolgens ongeveer 300 µL monsterverwerkingsgel in de bodem van een gelabelde cryovorm. Verwijder met een scalpelblad en een pincet voorzichtig een surrogaat uit de bioreactor of uit de put van een chamber slide met acht putten, en plaats dit in de cryovormen met monsterverwerkingsgel. Pipette ongeveer 300 µL monsterverwerkingsgel om het surrogaat in de cryovorm te bedekken.Incubeer het vervolgens 30 minuten bij vier graden Celsius. Zodra de gel voor monsterverwerking is gestold, wordt de gel met het surrogaat uit de cryovorm verwijderd en in een weefselcassette geplaatst. Als er meer dan één surrogaat in dezelfde weefselcassette moet worden geplaatst, kunnen weefselmarkeeringskleurstoffen worden gebruikt om de monsters na fixatie en verwerking te onderscheiden.Plaats vervolgens de weefselcassette met het surrogaat gedurende tien tot twaalf uur bij kamertemperatuur in een neutrale gebufferde fixatievloeistof van 10% voor een volledige fixatie. Breng na de fixatie de weefselcassette met het surrogaat over naar 70% ethanol. Het gefixeerde surrogaat is nu gereed voor inbedding in paraffine en daaropvolgende histologische coupesnijding.Om de celdichtheid te meten en fotomicroscopische beelden van met H&amp;E gekleurde coupes te analyseren, opent u een afbeeldingsbestand van het surrogaat. Omtrek het gebied van het surrogaat met de Polygon-tool in ImageJ, waarbij u de randen van de ECM als leidraad gebruikt door de muis te verslepen en te klikken om ankerpunten te plaatsen. Selecteer na het omtrekken de optie Measure onder het tabblad Analyze.Upload vervolgens de afbeeldingsbestanden die gebruikt zijn om het surrogaatarea te meten naar Cell Profiler door de afbeeldingsbestanden naar de bestandslijst te slepen. Ken daarna in de module Names and Types Import een naam toe aan elk geïmporteerd beeld en selecteer het beeldtype. Nadat de analysepijplijn is gegenereerd, start u de Test Mode en klikt u in Cell Profiler op Run.Evalueer de gefilterde objecten om er zeker van te zijn dat de meerderheid van de kernen in het testbeeld correct is geïdentificeerd en dat de optimale parameters zijn gekozen om de cellen te identificeren. De geselecteerde kernen worden met een groene cirkel gemarkeerd. Sla vervolgens het project op, verlaat de testmodus en klik op Analyze Images.Hier is een representatieve afbeelding te zien van de met H&amp;E gekleurde sectie van een geperfuseerde surrogaat die zeven dagen is gegroeid. En dit is een representatieve afbeelding van de met H&amp;E gekleurde sectie van een solide surrogaat die zeven dagen is gegroeid, waarbij het medium elke twee dagen is ververst. De cellulariteit is veel lager in de solide surrogaten.Deze grafiek toont de vergelijking van het gemiddelde aantal gekernde cellen per oppervlakte na zeven dagen groei. Een geperfuseerd en een solide surrogaat. Deze numerieke gegevens bevestigen de cellulariteit in de fotomicrografieën van de H&amp;E-gekleurde coupes.En deze grafiek toont de vergelijking van de Ki-67-labelingsindex, wat de maat is voor celproliferatie na zeven dagen groei van geperfuseerde en solide surrogaten. Deze gegevens ondersteunen opnieuw de grotere groei in geperfuseerde surrogaten. Na deze procedure kunnen andere methoden, zoals in situ hybridisatie en immunohistochemie, worden uitgevoerd op histologische coupes van de surrogaten om vragen te beantwoorden over RNA- en eiwitexpressie.Na het bekijken van deze video zou u een goed begrip moeten hebben van hoe u driedimensionale in vitro weefselsurrogaten bereidt en verwerkt, en hoe u surrogate-analyses uitvoert op H&amp;E-gekleurde histologische coupes.

preparation-analysis-vitro-three-dimensional-breast-carcinoma

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bio-engineering

Met behulp van kwantitatieve PCR, we zien hoe de gevestigde chick CAM-model kan worden gebruikt om kwantitatief analyseren van de uitzaaiing van menselijke tumorcellen naar verre organen.

Kwantitatieve analyse van kanker metastase met behulp van een Avian Embryo Model

Op lange termijn Cultuur van menselijke borstkankercellen Monsters en hun analyse met behulp van optische projectie Tomografie

In this video, we describe the method to co-culture dorsal root ganglia and cancer cells on chick chorioallantoic membrane or CAM to study perineural invasion.

Chick Chorioallantoic Membrane or CAM Tumor Model: An In Ovo Method to Simulate Perineural Invasion of Tumor Cells

Dit artikel geeft gedetailleerde methodologieën voor het gebruik van driedimensionale (3D) assays om borstkanker cel invasie kwantificeren. Concreet bespreken we het nodig om dergelijke assays procedures, kwantificering en gegevensanalyse, alsook werkwijzen voor het verlies van membraan integriteit die ontstaat wanneer cellen binnendringen onderzoeken.

Kwantificering van de Breast Cancer Cell Invasiviteit met een drie-dimensionale (3D) Model

Invasie van omliggende normale weefsels is een typerend kenmerk van kwaadaardige tumoren. We bieden hier een eenvoudige, semi-geautomatiseerde microplaattest van invasie in een natuurlijke 3D biomatrix die met een aantal modellen van gevorderde menselijke kankers is geëxemplifeerd.

Driedimensionale (3D) Tumor Spheroid Invasion Assay

Hier beschrijven we een driedimensionale cultuur-methode voor het analyseren van de morfologie van primaire borstkankercellen, alsmede over de studie van hun directe/indirecte interacties met monocyten en de resultaten zoals de aantasting van het collageen, immuun cel aanwerving, cel invasie, en bevordering van kanker-gerelateerde ontsteking.

Analyseren van de communicatie tussen monocyten en primaire borstkankercellen in een extracellulaire Matrix extraheren (ECME)-gebaseerde driedimensionaal systeem

Dit werk presets een geavanceerd protocol om nauwkeurig te beoordelen tumor laden door detectie van groene fluorescerende eiwitten en bioluminescentie signalen, alsmede de integratie van kwantitatieve moleculaire detectie techniek.

Studeren Triple Negatieve Borstkanker met behulp van Orthotopische Borstkanker Model

Driedimensionale culturen van patiënt BMPC-specimens en xenografts van botgemetastaseerde prostaatkanker behouden de functionele heterogeniteit van hun oorspronkelijke tumoren, wat resulteert in cysten, sferoïden en complexe, tumorachtige organoïden. Dit manuscript biedt een optimalisatiestrategie en protocol voor de 3D-cultuur van heterogene patiëntafgeleide monsters en hun analyse met behulp van IFC.

Oprichting en analyse van driedimensionale (3D) organoïden afgeleid van patiënt prostaatkanker Bot metastase Specimens en hun Xenografts

Dit artikel somt de stappen op die nodig zijn om neuroblastoomcellijnen te zaaien op eerder beschreven driedimensionale op collageen gebaseerde steigers, de celgroei gedurende een vooraf bepaald tijdsbestek te behouden en steigers op te halen voor verschillende celgroei- en celgedragsanalyses en stroomafwaartse toepassingen, aanpasbaar om te voldoen aan een reeks experimentele doelen.

Driedimensionaal in vitro biomimetisch model van neuroblastoom met behulp van op collageen gebaseerde steigers

Kruisverwijzing tussen borstepitheelcellen en endotheelcellen draagt belangrijk bij aan de progressie van borstkanker, tumorgroei en metastase. In deze studie zijn sferoïden gemaakt van borstkankercellen samen met vasculaire en / of lymfatische endotheelcellen en tonen hun toepasbaarheid aan als een in vitro systeem voor borstkankeronderzoek.

Mammary Epitheliale en Endotheelcel Sferoïden als een potentieel functioneel in vitro model voor borstkankeronderzoek

Dit protocol schetst methoden voor het kweken, manipuleren en analyseren van muizen CAF's, inclusief in vitro/in vivo functionele assays, transcriptomics en computationele analyse. Bovendien beschrijft het een webgebaseerd platform dat is ontwikkeld om de openbaar beschikbare transcriptomen van laseropname van micro-ontlede stromale en epitheliale componenten uit een verzameling menselijke borstkankertumoren te analyseren.

Kanker-geassocieerde fibroblasten van borsttumoren bij muizen als hulpmiddelen voor moleculaire en computationele studies

Leer hoe u driedimensionale borstkankersurrogaten genereert met een perfusiebioreactorsysteem en celgroei analyseert in histologische secties. Deze methode verbetert in vitro-modellering voor therapeutisch onderzoek.

Voorbereiding en analyse van

Meer video's verkennen