Cutane Chirurgische denervatie: een methode voor de Eis Testen op Zenuwen in muismodellen van huidziekte

Het algemene doel van deze procedure is om de invloed van zenuwen op normale en pathologische huid te onderzoeken. Deze methode kan worden gebruikt om belangrijke vragen in de normale huidbiologie te beantwoorden, zoals of cutane zenuwen de homeostase en ziekte beïnvloeden. Het grote voordeel van deze techniek is dat je intacte en gedegenereerde huidmonsters van hetzelfde dier kunt vergelijken.

Visuele demonstratie van deze techniek is cruciaal, omdat zenuwen moeilijk te herkennen en te verwijderen kunnen zijn met minimale schade aan de omliggende weefsels. Eerst, verdoof het muisje en controleer of het de juiste sedatietoestand heeft bereikt met behulp van een teenprik. Bevestig ook dat het muisje normaal ademt en een normale hartslag heeft.

Plaats het dier nu op een verwarmingskussen in een aseptische chirurgische ruimte. Gebruik een elektrische scheermachine om voorzichtig het haar van de rugzijde te verwijderen waar de biopsie zal worden genomen. Veeg vervolgens het geschoren gebied schoon met Betadyne en alcoholdoekjes.

Zorg ervoor dat alle haarknipsels van de plaats zijn verwijderd. Markeer nu de biopsieplaats met een zwarte stift. Om longitudinale secties van haarzakjes te verkrijgen, moet de langere rand van de biopsie van voor naar achter lopen, parasetidaal aan de dorsale middenlijn.

Maak met behulp van een scalpel een excisie over de volledige dikte zonder de onderliggende spierfascie te beschadigen. Bloeding is meestal minimaal. Het biopsiemonster moet de epidermis, dermis, onderhuidse vetlaag en panniculus carnosus bevatten.

Leg het uitgesneden huidmonster plat op een droge papieren handdoek, dermiszijde omlaag. Snijd de overtollige papieren handdoek weg en bewaar het monster maximaal een uur in koude TBS als er nog andere monsters moeten worden verzameld. Ga terug naar de muis en naai de biopsieplaats dicht met 60 nylondraad, ongeveer drie millimeter uit elkaar.

Bewaak vervolgens de muis in een herstelkooi totdat het bijkomt. Gebruik pijnstillers in overeenstemming met de aangewezen institutionele dierenverzorging en volg hun richtlijnen als de muis zich bezorgd toont. Verwijder de hechtingen binnen zeven tot 10 dagen na de operatie.

Ga verder met het verwerken van de biopsies voor histologie of volledige bekledingskleuring. Verdoof het dier, scheer de gehele rughuid en maak het gebied schoon, vergelijkbaar met de biopsieprocedure. Maak nu een incisie met een steriel scalpel langs de dorsale middenlijn vanaf de basis van de nek tot ongeveer een halve centimeter boven de staart.

Gebruik steriele stompe tang om de huid aan de linkerkant voorzichtig weg van de flank te trekken om het onderliggende weefsel te visualiseren van de scapulaire vetkussens nabij de nek tot net boven het achterbeen. Identificeer nu de dorsale cutane zenuw onder een disserperend lichtmicroscoop. Deze verschijnen als witte strengen die caudaal door de transparante fascia van de rompwand reizen voordat ze scherpe bochten maken en het losse bindweefsel onder de huid binnengaan.

Vervolgens, gebruik ultrafijne tang om de zenuw exclusief van de linkerkant van het dier te verwijderen, gelegen op anatomische locaties T3 tot T12, door ze uit te plukken vanaf de plaats waar hun segmenten zich buigen bij de rompwand tot hun ingangspunten in de huid. Richt de tang verticaal en grijpt de zenuwen ongeveer een halve centimeter onder hun buigplaatsen. Eenmaal gepakt, trek omhoog om de zenuwen te laten rekken en te scheiden van het omliggende weefsel om ze te verwijderen.

Vermijd schade aan de aangrenzende bloedvaten. Zorg ervoor dat het weefsel tijdens de procedure vochtig blijft door periodiek druppels 0,9% steriel zoutoplossing aan te brengen. Blijf alle zenuwen verwijderen die zich uitstrekken van de rompwand tot de huid, maar verstoor de zenuwen niet in de dichte fascia van de rompwand.

Verwijder vervolgens alle zenuwen van de blootgestelde huidflap. Deze vezels bestaan uit de distale takken van de dorsale cutane zenuw en verschijnen als witte vertakte strengen die sporadisch in het bindweefsel aan de dermale kant van de huidflap zijn gelegen. Om deze fijne takken te verwijderen, plaats de tang ongeveer parallel aan het dermale oppervlak, grijpt de zenuw en trekt omhoog.

Verwijder alle zichtbare zenuwen op deze manier. Prik de bloedvaten en huid niet door. Tijdens deze stap is het belangrijk om het scheuren van naburige bloedvaten te voorkomen.

Als u een zenuw met een aangrenzend bloedvat vindt, volg deze uiteindelijk naar een gebied waar geen aangrenzend vat is en verwijder deze door uit te plukken. Maak nu de huid op de rechterkant van de dorsale middenlijn incisie los, maar verwijder geen zenuwen. Dit zal dienen als contralaterale schijnoperatieve controle.

Naai vervolgens het dier dicht en controleer postoperatief zoals eerder. Later, om de stabiele verlies van zenuwen te bevestigen, prikt u enkele weken na de operatie voorzichtig in het gedegenereerde gebied met een steriele hypodermische naald. Let op of het dier reageert, meestal door te trillen of zijn hoofd te draaien.

Als het huidgebied stabiel is gedegenereerd, zal het dier weinig of geen reactie vertonen. Haal huidbiopsies uit het gebied zonder reactie en de contralaterale schijnzijde voor bijpassende experimentele en controlemonsters. Uit de biopsies is het belangrijk om meerdere histologische secties te bemonsteren om mogelijke verschillen in de abundantie of morfologie van aanraakkoepels tussen de schijn- en gedegenereerde exemplaren te identificeren.

De glebe one cree ERT2 muisstam maakt het mogelijk om tamoxifen-geïnduceerde genetische recombinatie te richten op gebieden van de huid die hoge hedgehog-padwayactiviteit vertonen, zoals aanraakkoepelepithelia. Deze muizen zijn gekruist om abolaxi reporter muizen te induceren om de aanraakkoepelepithelia te visualiseren. Knopen zijn cruciaal voor het behoud van zowel normale aanraakkoepels als hun bijbehorende Merkel-cellen.

Dit wordt experimenteel aange