Name: Dissection en Flat-montage van de driedoornige stekelbaars branchial Skeleton (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-05-07T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 2 s
Description: Leer de dissectie en flat-mounting van het branchiale skelet van driedoornige stekelbaars. Deze methode maakt gedetailleerde visualisatie van trofische kenmerken mogelijk voor onderzoek naar ontwikkelings- en evolutionaire biologie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd gedeeltelijk gefinancierd door NIH R01 #DE021475 aan CTM en een NSF Graduate Research Fellowship aan NAE. Dank aan Miles Johnson voor hulp bij beeldvorming en Priscilla Erickson voor het kritiek lezen van het manuscript.

Alle vis werk werd goedgekeurd door de Institutional Animal Care en gebruik Comite van de University of California-Berkeley (protocol nummer R330). Euthanasie werd uitgevoerd middels onderdompeling in 0,025% tricaïne-S gebufferd met 0,1% natriumbicarbonaat 39. Alle stappen worden uitgevoerd bij kamertemperatuur. 1. Voorbereiding Opmerking: Voer de stappen 1,1-1,5 in conische buizen of scintillatieflesjes die goed kunnen dichten en horizontaal gelegd. Vis hoeven niet voortdurend worden geschud, maar proberen om de oplossing te mengen zoveel mogelijk door voorzichtig omkeren of schudden van het rek met buisjes of flesjes naar alle kanten van de vis blootstelt aan de kleuroplossing en laat vlek het weefsel gelijkmatig doordringen. Plaats geen grote partij van de vis op een platform shaker, zoals het zware gewicht van de vloeistof de shaker zal breken. <ol><li> Fix ofwel vers gedood vis of vis opgeslagen in ethanol met 10% neutraal gebufferde formaline (NBF) gedurende de nacht. U kunt ook gebruik maken van 4% Paraformaldehyde in 1 x PBS-oplossing in plaats van 10% NBF. Opmerking: als het extraheren van DNA, clip een klein deel van de staart of borstvinnen voorafgaand aan de fixatie en op te slaan in ethanol. </li><li> Gooi fix behoren in een chemische kap en vervang met leidingwater (dat wil zeggen ~ pH 7,0) gedurende 2 uur. Vermijd het gebruik van de-geïoniseerd water als het vaak zuur kan zijn en kan bot ontkalken. </li><li> Verwijder water en vlek vis met 0,008% alizarinerood S in 1% KOH in water gedurende 24 uur. Voor vis minder dan 20 mm standaard lengte, gebruiken 0,004% alizarinerood S. (Voeg een 100x (0,8%) stock oplossing van alizarinerood S, die vervolgens kunnen worden verdund). </li><li> Verwijder vlek (het opzetten van de juiste afvalcontainer in kap) en plaats vis in leidingwater voor een paar uur. Ververs het water indien nodig tot het water spoelen is meestal duidelijk. </li><li> Verwijder water en plaats vis in 50% glycerol, 0,25% KOH voor milde clearing en de daaropvolgende dissectie. Opmerking: Deze kleuring protocol wordt gewijzigd ten opzichte van eerder beschreven methoden 40,41. </li></ol><pclass = &quot;jove_title&quot;&gt; 2. ontleding Let op: Zie figuur 1 voor een overzicht van relevante hoofd van het skelet morfologie. <img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/54056/54056fig1.jpg" /> Figuur 1:. Stickleback hoofd skelet morfologie alizarinerood gekleurd driedoornige stekelbaars hoofd afgebeeld met fluorescentie onder een rhodamine B-filter set. Bruikbare morfologie is gelabeld: Op = opercle, Subop = subopercle, BSRS = branchiostegal stralen, Preop = preopercle, Infraorb 1-3 = infraorbitale 1-3 (ook wel circumorbitals of suborbitals), Dent = dentary, Premax = premaxilla, Max = bovenkaak , Nas = neus, Lat. ETHM = laterale ethmoid, Psph = parasphenoid, Fron = frontale bot. Voor een meer gedetailleerde beschrijving van de stekelbaars hoofd skelet, zie Anker (1974) 31. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54056/54056fig1large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie te bekijken</a>dit figuur. <ol><li> Leg de vissen vlak (Figuur 2A) en plaats tang scherpe # 5 horlogemaker in de zijkant van het oog op een ~ 45 ° hoek ten opzichte van de membraan dat het oog te prikken. </li><li> Schil de membraan van het oog, vergelijkbaar met een peeling yoghurt deksel (figuur 2B). </li><li> Inbouw open pincet achter het oog, greep van de oogzenuw achter het oog te grijpen, en verwijder het oog (figuur 2C). Laat de ogen niet prikken als het melanine zal lekken. Als doorboord, melanine kan worden verwijderd tijdens de latere stappen gewassen. </li><li> Herhaal dit aan de andere kant. </li><li> Vanaf de achterste, plaats een kleine dissectie schaar mes onder de opercle flap, drag scissor blade dorsaal boven opercle en snijd zacht weefsel door de oogkas (figuur 2D). Snijd dorsale de opercle bot. </li><li> Snijd de frontale bot (dorsale aan de oogkas) (Figuur 2E). </li><li> Snijd de middellijn parasphenoid bot rondom thij midden van de oogkassen (figuur 2F). </li><li> Herhaal opercle bezuinigen op de tegenoverliggende kant. </li><li> Steek tang onder de opercle en schil langzaam het gezicht van het lichaam af, trimmen ander zacht weefsel nog steeds verbonden (figuur 2G - H). Let er dan op de eerste rij van de kieuw Rakers verstoren. <ol><li> Met een pincet, verwijder de ceratohyals aan beide zijden van de middellijn basihyal terwijl pellen en het verwijderen van de voorste craniofaciale skelet (het hele kaak inclusief de dentary, premaxilla en bovenkaak, het hele tongbeen skelet met inbegrip van de buitenkant van de huid opercle, preopercle, subopercle, en branchiostegal stralen en de onderliggende dorsale en ventrale endochondrale elementen, en het voorste deel van de schedel, inclusief de neus, laterale ethmoid en infraorbitale botten, zie figuren 1 en 2I). </li><li> Bekken stekels kan worden uitgevouwen uit het lichaam, en kan als een handvat voor tang greep o grijpen dienenf indien aanwezig. Stekels vastklikken. Om te ontgrendelen, trek rug met een pincet direct uit de buurt van vis lichaam, dan buig naar achteren aan rug plat tegen vis op. </li></ol></li><li> Steek gesloten tang posterior en ventrale naar de branchial skelet (net onder darm buis) en sleep tang naar voren, plagen elkaar de resterende spieren en ligamenten aan de branchial skelet (figuur 2J - K). </li><li> Met behulp van de tips van de gesloten tang, schraap de spieren het bevestigen van de dorsale branchial skelet aan de ventrale hersenpan in een posterior naar anterior richting (figuur 2L). </li><li> Herhaal 2.9 en 2.10 op de tegenoverliggende kant. </li><li> Pak de onderkant van de darm buis en trek naar voren om de branchial skelet en de darmen buis (figuur 2 M - N) te verwijderen. </li><li> Scheid de darm buis door een snede loodrecht op het achterste einde van de vijfde ceratobranchial (Figuur 2O </strong&gt;). </li><li> Na het verwijderen van alle resterende botfragmenten van de hersenpan aan de rugzijde van de branchial skelet, plaatst een schaar in de branchial korf een dorsale snede (cutting anterior naar posterior) tussen de bilaterale stellen dorsale tandplaten (Figuur 3A - D) te maken. Zorg ervoor dat gesneden is gecentreerd om te voorkomen dat schade aan de dorsale tand platen. </li><li> Maak twee ondiepe zijdelingse sneden in de rubberachtige darmlumen aan het achterste uiteinde van de branchial skelet (voorste uiteinde van buis darm) om te helpen bij het ​​openen van de branchial skelet (figuur 3E). </li><li> Plaats vis en alle weefselstukken in een pot en plaats de branchial skelet in een microcentrifuge buis met 50% glycerol, 0,25% KOH tot zachtjes clearing of 100% glycerol blijven indien geen verdere opheldering nodig. Label potjes en tubes met een unieke identifier, zodat ze kunnen worden gevolgd. De hoeveelheid clearing vereist is grotendeels een functie van de grootte van de vis, grote volwassen vissen (meer dan 40 mm in standaardlengte) vergen doorgaans extra clearing. </li></ol><img alt="Figuur 2" src="/files/ftp_upload/54056/54056fig2.jpg" /> Figuur 2:. Stickleback branchial skelet dissectie alizarinerood gekleurd driedoornige stekelbaars vis klaar voor dissectie. Het oog wordt gepigmenteerd van het uitgebreide clearing. Blauwe pijlen geven de bewegingsrichting. (A) Zij mening van stekelbaars hoofd, anterior is aan de rechterkant. (B) verwijdering van membraan dat het oog. (C) Verwijdering van het oog. (D) Dorsale snijden boven de opercle. (E) Frontale bot cut. (F) Parasphenoid gesneden. (G - I) Verwijdering van het gezicht skelet. (J) Verwijdering van ventrale branchial skelet zacht weefsel verbindingen. (K - L) Verwijdering van dorsale branchial skelet verbindingen. (&lt;strong&gt; M - N) Verwijdering van de branchial skelet. (O) Scheid de darm buis uit het branchial skelet. Zie stappen 2.1 tot 2.16 voor meer informatie. Schaal bar = 5 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54056/54056fig2large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a> 3. branchial Skeleton Re-kleuring (indien nodig) <ol><li> Om de branchial skelet donkerder of duidelijke weefsel meer vlekken, verwijderen 50% glycerol, 0,25% KOH-oplossing en was met 1% KOH twee keer (een vijf minuten wassen gevolgd door een tweede 24-uurs wassen terwijl horizontaal schudden op een platform shaker). </li><li> Verwijderen 1% KOH en re-vlek met 0,008% alizarinerood S in 1% KOH gedurende 24 uur. </li><li> Verwijderen vlek en vervangen door 1% KOH gedurende 24 uur. </li><li> Verwijder KOH-oplossing en te vervangen door 50% glycerol, 0,25% KOH. </li></ol> 4. Montage branchial Skeleton <ol><li> Verwijder branchial skeletvan 50% glycerol, 0,25% KOH of 100% glycerol en plaats dichtbij de bodem van een 22 mm x 60 mm dekglaasje met de dorsale zijde naar boven (Figuur 3F). Voeg enkele druppels 50% glycerol, 0,25% KOH of 100% glycerol bovenop branchial skelet. Als de overgang van 50% glycerol, 0,25% KOH tot 100% glycerol, verandering oplossing in een microcentrifugebuis en schud&gt; 5 min voorafgaand aan de montage van het weefsel in evenwicht. </li><li> Uitrol twee kleine balletjes van boetseerklei en plaats aan beide zijden van het deksel slip op te treden als afstandhouders. </li><li> Losjes plaats een tweede dekglaasje op de top met voldoende druk om de voorste branchial skelet (Figuur 3G) plat. </li><li> Schil open de linker dorsale flap inclusief dorsale tand platen, plat, en schuif tussen de dekglaasjes (Figuur 3H). </li><li> Herhaal de techniek met de juiste dorsale klep en duw hele branchial skelet uit de buurt van de rand van het dekglaasje (figuur 3I). <ol><li> Wijzigennative, houd beide dorsale flappen geopend met een pincet en zorgvuldig plaats het dekglaasje op, afvlakking van de branchial skelet in een vloeiende beweging. </li><li> Als alternatief, zet de branchial skelet ondersteboven op een dekglas, wijd te spreiden elke dorsale zijde zijdelings zodat de zwaartekracht niet toestaan ​​dat de branchial skelet om een ​​back-up te sluiten. Bedek met een tweede 22 mm x 60 mm glazen afdekplaat slip en omkeren prep. Opmerking: Verschillende montage technieken hebben de neiging om beter of slechter voor elke individuele werken. Probeer elke en zien wat voelt zich het meest comfortabel. </li></ol></li><li> Zachtjes druk op de top dekglaasje klei ballen genoeg om de branchial skelet te houden plat gemonteerde flatscreen, maar zorg het monster niet te verpletteren. <ol><li> Tijdens de montage-proces, kan ceratobranchials draaien en obscure een rij van Rakers. Verhelpen dit door te schuiven tang tussen de dekglaasjes en opnieuw oriënteren van de ceratobranchials of hele branchial skelet. </li></ol></li><li> Store preps flat in slide trays op roOM temperatuur. Gemonteerd in 100% glycerol, kunnen bereidingen worden bewaard tussen overbrugd dekglaasjes minstens tien jaar. Schone pincet en een schaar met isopropanol of ethanol en dekking tips. </li></ol><img alt="figuur 3" src="/files/ftp_upload/54056/54056fig3.jpg" /> Figuur 3:. Vlak monteren van de branchial skelet Manipulatie en montage van de branchial skelet weergegeven. Blauwe pijlen geven de bewegingsrichting. (A) branchial skelet dorsale kant naar boven. (B - D) Rotatie en incisie tussen de dorsale tand platen. (E) lateraal gesneden in zacht weefsel aan de basis van de darm buis verder te openen. (F) branchial skelet geplaatst op de bodem van een dekglaasje klaar voor montage. (G) tweede dekglaasje geplaatst op de voorste helft van de branchial skelet (hierboven dorsale tandplaten). (H - I)Vlakke montage van de branchial skelet door het openen van dorsale tand plaat kleppen en schuiven tussen twee dekglaasjes. Zie stappen 4.1 tot 4.6 voor meer informatie. Schaal bar = 5 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54056/54056fig3large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>

<ol><li>Cooper, W. J., Westneat, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Form+and+function+of+damselfish+skulls%3A+rapid+and+repeated+evolution+into+a+limited+number+of+trophic+niches%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Evol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Form and function of damselfish skulls: rapid and repeated evolution into a limited number of trophic niches.</a> BMC Evol. Biol. 9 (24), (2009).</li>
<li>Albertson, R. C., Kocher, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+and+developmental+basis+of+cichlid+trophic+diversity%5BTitle%5D)+AND+%22Heredity%22%5BJournal%5D)">Genetic and developmental basis of cichlid trophic diversity.</a> Heredity. 97 (3), 211-221 (2006).</li>
<li>Martin, C. H., Wainwright, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trophic+novelty+is+linked+to+exceptional+rates+of+morphological+diversification+in+two+adaptive+radiations+of+cyprinodon+pupfish%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">Trophic novelty is linked to exceptional rates of morphological diversification in two adaptive radiations of cyprinodon pupfish.</a> Evolution. 65 (8), 2197-2212 (2011).</li>
<li>Wainwright, P. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+evolution+of+pharyngognathy%3A+A+phylogenetic+and+functional+appraisal+of+the+pharyngeal+jaw+key+innovation+in+labroid+fishes+and+beyond%5BTitle%5D)+AND+%22Syst.+Biol%22%5BJournal%5D)">The evolution of pharyngognathy: A phylogenetic and functional appraisal of the pharyngeal jaw key innovation in labroid fishes and beyond.</a> Syst. Biol. 61 (6), 1001-1027 (2012).</li>
<li>Sibbing, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Food+capture+and+oral+processing%5BTitle%5D)+AND+%22Cyprinid+Fishes%22%5BJournal%5D)">Food capture and oral processing.</a> Cyprinid Fishes. , 377-412 (1991).</li>
<li>Bell, M., Foster, S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBell%2C+M+%22The+Evolutionary+Biology+of+the+Threespine+Stickleback%22">The Evolutionary Biology of the Threespine Stickleback</a>. , Oxford University Press. New York. (1994).</li>
<li>Kimmel, C. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+and+development+of+facial+bone+morphology+in+threespine+sticklebacks%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Evolution and development of facial bone morphology in threespine sticklebacks.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 102 (16), 5791-5796 (2005).</li>
<li>Mcgee, M. D., Wainwright, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Convergent+evolution+as+a+generator+of+phenotypic+diversity+in+threespine+stickleback%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">Convergent evolution as a generator of phenotypic diversity in threespine stickleback.</a> Evolution. 67 (4), 1204-1208 (2013).</li>
<li>McGee, M. D., Schluter, D., Wainwright, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+basis+of+ecological+divergence+in+sympatric+stickleback%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Evol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Functional basis of ecological divergence in sympatric stickleback.</a> BMC Evol. Biol. 13, 277(2013).</li>
<li>McGuigan, K., Nishimura, N., Currey, M., Hurwit, D., Cresko, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+genetic+variation+in+static+allometry+in+the+threespine+stickleback%5BTitle%5D)+AND+%22Integr.+Comp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Quantitative genetic variation in static allometry in the threespine stickleback.</a> Integr. Comp. Biol. 50 (6), 1067-1080 (2010).</li>
<li>Caldecutt, W. J., Bell, M. A., Buckland-Nicks, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sexual+dimorphism+and+geographic+variation+in+dentition+of+threespine+stickleback%2C+Gasterosteus+aculeatus%5BTitle%5D)+AND+%22Copeia%22%5BJournal%5D)">Sexual dimorphism and geographic variation in dentition of threespine stickleback, Gasterosteus aculeatus.</a> Copeia. 2001 (4), 936-944 (2001).</li>
<li>Berner, D., Moser, D., Roesti, M., Buescher, H., Salzburger, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+architecture+of+skeletal+evolution+in+european+lake+and+stream+stickleback%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">Genetic architecture of skeletal evolution in european lake and stream stickleback.</a> Evolution. 68 (6), 1792-1805 (2014).</li>
<li>Jamniczky, H. a, Barry, T. N., Rogers, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eco-evo-devo+in+the+study+of+adaptive+divergence%3A+examples+from+threespine+stickleback+%28Gasterosteus+aculeatus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Integr.+Comp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Eco-evo-devo in the study of adaptive divergence: examples from threespine stickleback (Gasterosteus aculeatus).</a> Integr. Comp. Biol. 55 (1), 166-178 (2015).</li>
<li>Magnuson, J., Heitz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gill+raker+apparatus+and+food+selectivity+among+mackerels%2C+tunas%2C+and+dolphins%5BTitle%5D)+AND+%22Fish.+Bull%22%5BJournal%5D)">Gill raker apparatus and food selectivity among mackerels, tunas, and dolphins.</a> Fish. Bull. 69 (2), 361-370 (1971).</li>
<li>Kahilainen, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+gill+raker+number+variability+in+adaptive+radiation+of+coregonid+fish%5BTitle%5D)+AND+%22Evol.+Ecol%22%5BJournal%5D)">The role of gill raker number variability in adaptive radiation of coregonid fish.</a> Evol. Ecol. 25 (3), 573-588 (2011).</li>
<li>Arnegard, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetics+of+ecological+divergence+during+speciation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Genetics of ecological divergence during speciation.</a> Nature. 511 (7509), 307-311 (2014).</li>
<li>Gross, H. P., Anderson, J. M., Gross, H. P., Anderson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Geographic+variation+in+the+gillrakers+and+diet+of+European+threespine+sticklebacks%2C+Gasterosteus+aculeatus%5BTitle%5D)+AND+%22Copeia%22%5BJournal%5D)">Geographic variation in the gillrakers and diet of European threespine sticklebacks, Gasterosteus aculeatus.</a> Copeia. 1984 (1), 87-97 (1984).</li>
<li>Hagen, D., Gilbertson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Geographic+variation+and+environmental+selection+in+Gasterosteus+aculeatus+L+in+the+Pacific+Northwest%2C+America%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">Geographic variation and environmental selection in Gasterosteus aculeatus L in the Pacific Northwest, America.</a> Evolution. 26 (1), 32-51 (1972).</li>
<li>McPhail, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ecology+and+evolution+of+sympatric+sticklebacks+%28Gasterosteus%29%3A+morphological+and+genetic+evidence+for+a+species+pair+in+Enos+Lake%2C+British+Columbia%5BTitle%5D)+AND+%22Can.+J.+Zool%22%5BJournal%5D)">Ecology and evolution of sympatric sticklebacks (Gasterosteus): morphological and genetic evidence for a species pair in Enos Lake, British Columbia.</a> Can. J. Zool. 62 (7), 1402-1408 (1984).</li>
<li>Schluter, D., McPhail, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ecological+character+displacement+and+speciation+in+sticklebacks%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+Nat%22%5BJournal%5D)">Ecological character displacement and speciation in sticklebacks.</a> Am. Nat. 140 (1), 85-108 (1992).</li>
<li>Robinson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trade+offs+in+Habitat-specific+foraging+efficiency+and+the+nascent+adaptive+divergence+of+sticklebacks+in+lakes%5BTitle%5D)+AND+%22Behaviour%22%5BJournal%5D)">Trade offs in Habitat-specific foraging efficiency and the nascent adaptive divergence of sticklebacks in lakes.</a> Behaviour. 137 (7), 865-888 (2000).</li>
<li>Glazer, A. M., Cleves, P. A., Erickson, P. A., Lam, A. Y., Miller, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parallel+developmental+genetic+features+underlie+stickleback+gill+raker+evolution%5BTitle%5D)+AND+%22Evodevo%22%5BJournal%5D)">Parallel developmental genetic features underlie stickleback gill raker evolution.</a> Evodevo. 5 (1), (2014).</li>
<li>Miller, C. T., Glazer, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modular+skeletal+evolution+in+sticklebacks+is+controlled+by+additive+and+clustered+quantitative+trait+loci%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Modular skeletal evolution in sticklebacks is controlled by additive and clustered quantitative trait loci.</a> Genetics. 197 (1), 405-420 (2014).</li>
<li>Glazer, A. M., Killingbeck, E. E., Mitros, T., Rokhsar, D. S., Miller, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome+assembly+improvement+and+mapping+convergently+evolved+skeletal+traits+in+sticklebacks+with+Genotyping-by-Sequencing%5BTitle%5D)+AND+%22G3%22%5BJournal%5D)">Genome assembly improvement and mapping convergently evolved skeletal traits in sticklebacks with Genotyping-by-Sequencing.</a> G3. 5, 1463-1472 (2015).</li>
<li>Wainwright, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+morphology+of+the+pharyngeal+jaw+apparatus%5BTitle%5D)+AND+%22Fish+Physiol.+Fish+Biomech%22%5BJournal%5D)">Functional morphology of the pharyngeal jaw apparatus.</a> Fish Physiol. Fish Biomech. , 77-102 (2006).</li>
<li>Hulsey, C. D., Fraser, G. J., Streelman, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+and+development+of+complex+biomechanical+systems%3A+300+million+years+of+fish+jaws%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">Evolution and development of complex biomechanical systems: 300 million years of fish jaws.</a> Zebrafish. 2 (4), 243-257 (2005).</li>
<li>Lauder, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+design+and+evolution+of+the+pharyngeal+jaw+apparatus+in+euteleostean+fishes%5BTitle%5D)+AND+%22Zool.+J.+Linn.+Soc%22%5BJournal%5D)">Functional design and evolution of the pharyngeal jaw apparatus in euteleostean fishes.</a> Zool. J. Linn. Soc. 77, 1-38 (1983).</li>
<li>Fraser, G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+ancient+gene+network+is+co-opted+for+teeth+on+old+and+new+jaws%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">An ancient gene network is co-opted for teeth on old and new jaws.</a> PLoS Biol. 7 (2), e1000031(2009).</li>
<li>Stock, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+dentition+in+comparative+context%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Zool.+B.+Mol.+Dev.+Evol%22%5BJournal%5D)">Zebrafish dentition in comparative context.</a> J. Exp. Zool. B. Mol. Dev. Evol. 308, 523-549 (2007).</li>
<li>Liem, K., Greenwood, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+functional+approach+to+the+phylogeny+of+the+pharyngognath+teleosts%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+Zool%22%5BJournal%5D)">A functional approach to the phylogeny of the pharyngognath teleosts.</a> Am. Zool. 21 (1), 83-101 (1981).</li>
<li>Anker, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphology+and+kinetics+of+the+head+of+the+stickleback%2C+Gasterosteus+aculeatus%5BTitle%5D)+AND+%22Trans.+Zool.+Soc.+London%22%5BJournal%5D)">Morphology and kinetics of the head of the stickleback, Gasterosteus aculeatus.</a> Trans. Zool. Soc. London. 32 (5), 311-416 (1974).</li>
<li>Meyer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphometrics+and+allometry+in+the+trophically+polymorphic+cichlid+fish%2C+Cichlusomu+citrinelfum%3A+Alternative+adaptations+and+ontogenetic+changes+in+shape%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Zool.%2C+Lond%22%5BJournal%5D)">Morphometrics and allometry in the trophically polymorphic cichlid fish, Cichlusomu citrinelfum: Alternative adaptations and ontogenetic changes in shape.</a> J. Zool., Lond. 221, 237-260 (1990).</li>
<li>Huysseune, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+plasticity+in+the+lower+pharyngeal+jaw+dentition+of+Astatoreochromis+alluaudi+%28Teleostei%3A+Cichlidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Oral+Biol%22%5BJournal%5D)">Phenotypic plasticity in the lower pharyngeal jaw dentition of Astatoreochromis alluaudi (Teleostei: Cichlidae).</a> Arch. Oral Biol. 40 (11), 1005-1014 (1995).</li>
<li>Muschick, M., Indermaur, A., Salzburger, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Convergent+Evolution+within+an+adaptive+radiation+of+cichlid+fishes%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Convergent Evolution within an adaptive radiation of cichlid fishes.</a> Curr. Biol. 22 (24), 2362-2368 (2012).</li>
<li>Cleves, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolved+tooth+gain+in+sticklebacks+is+associated+with+a+cis-regulatory+allele+of+Bmp6%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">Evolved tooth gain in sticklebacks is associated with a cis-regulatory allele of Bmp6.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 111 (38), 13912-13917 (2014).</li>
<li>Ellis, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+developmental+and+genetic+mechanisms+underlie+convergently+evolved+tooth+gain+in+sticklebacks%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Distinct developmental and genetic mechanisms underlie convergently evolved tooth gain in sticklebacks.</a> Development. (142), 2442-2451 (2015).</li>
<li>Tucker, A. S., Fraser, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+and+developmental+diversity+of+tooth+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Semin.+Cell+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Evolution and developmental diversity of tooth regeneration.</a> Semin. Cell Dev. Biol. 25-26, 71-80 (2014).</li>
<li>Erickson, P. A., Glazer, A. M., Cleves, P. A., Smith, A. S., Miller, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+developmentally+temporal+quantitative+trait+loci+underlie+convergent+evolution+of+increased+branchial+bone+length+in+sticklebacks%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+R.+Soc.+B%22%5BJournal%5D)">Two developmentally temporal quantitative trait loci underlie convergent evolution of increased branchial bone length in sticklebacks.</a> Proc. R. Soc. B. 281, (2014).</li>
<li>Leary, S., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLeary%2C+S+%22AVMA+Guidelines+for+the+Euthanasia+of+Animals%22">AVMA Guidelines for the Euthanasia of Animals</a>. , American Veterinary Medical Association. Schaumburg, IL. (2013).</li>
<li>Bell, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolutionary+phenetics+and+genetics%5BTitle%5D)+AND+%22Evol.+Genet.+Fishes%22%5BJournal%5D)">Evolutionary phenetics and genetics.</a> Evol. Genet. Fishes. , 431-528 (1984).</li>
<li>Taylor, W. R., Van Dyke, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revised+procedures+for+staining+and+clearing+small+fishes+and+other+vertebrates+for+bone+and+cartilage+study%5BTitle%5D)+AND+%22Cybium%22%5BJournal%5D)">Revised procedures for staining and clearing small fishes and other vertebrates for bone and cartilage study.</a> Cybium. 9 (2), 107-119 (1985).</li>
<li>Erickson, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+190+base+pair%2C+TGF-%CE%B2+responsive+tooth+and+fin+enhancer+is+required+for+stickleback+Bmp6+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">A 190 base pair, TGF-β responsive tooth and fin enhancer is required for stickleback Bmp6 expression.</a> Dev. Biol. 401 (2), 310-323 (2015).</li>
<li>Miller, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((cis-Regulatory+changes+in+Kit+ligand+expression+and+parallel+evolution+of+pigmentation+in+sticklebacks+and+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">cis-Regulatory changes in Kit ligand expression and parallel evolution of pigmentation in sticklebacks and humans.</a> Cell. 131 (6), 1179-1189 (2007).</li>
<li>Aigler, S. R., Jandzik, D., Hatta, K., Uesugi, K., Stock, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selection+and+constraint+underlie+irreversibility+of+tooth+loss+in+cypriniform+fishes%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Selection and constraint underlie irreversibility of tooth loss in cypriniform fishes.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 111 (21), 7707-7712 (2014).</li>
<li>Pasco-Viel, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolutionary+trends+of+the+pharyngeal+dentition+in+Cypriniformes+%28Actinopterygii+Ostariophysi%29%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Evolutionary trends of the pharyngeal dentition in Cypriniformes (Actinopterygii Ostariophysi).</a> PLoS One. 5 (6), e11293(2010).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Het branchiale skelet is een complexe set botten in de keel van een vis die voedselitems manipuleert, filtert en vermalen op hun weg naar de slokdarm. Veel interessante trofische eigenschappen, waaronder de patronen van kieuwbogen, faryngeale tanden en branchiale botten, variëren tussen en binnen soorten. Het merendeel van deze kenmerken is moeilijk tot bijna onmogelijk om nauwkeurig te meten met het branchiale skelet in situ (bijv.. lengte van de kieuwbogen, lengte van de branchiale botten). Dit protoc...

Een ongelooflijke hoeveelheid diversiteit bestaat in het hoofd skelet onder de gewervelde dieren, vooral bij vissen. In veel gevallen faciliteert deze diversiteit verschillende voerstrategieën 1-4, en kan grote veranderingen voor zowel externe als interne craniofaciale patronen te betrekken. De branchial skelet wordt intern in de keel van een vis en omringt de meeste van de mondholte. De branchial skelet bestaat uit 5 serie homologe segmenten, de voorste vier waarvan ondersteunen de kieuwen. Samen vormen deze vijf segmenten fungeren als een interface tussen vissen en hun eten 5. Variatie in een veelheid van eigenschappen, waaronder kieuw rakers, keelholte tanden en botten branchial bijdragen aan efficiënte foerageren op verschillende soorten voedsel. Stekelbaarsjes hebben een adaptieve radiatie na voorouderlijke oceanische vormen gekoloniseerd zoetwatermeren en kreken in het hele noordelijk halfrond ondergaan. De verschuiving in het dieetvan kleine zoöplankton in de oceaan om grotere prooi in zoet water heeft geleid tot een dramatische trofische variatie in verscheidene craniofaciale 6 trekken. Hoewel veel studies hebben zich gericht op externe craniofaciale verschillen in stekelbaars 7-13, belangrijk craniofaciale veranderingen evolueren herhaaldelijk in de interne branchial skelet. De mogelijkheid om vruchtbare hybriden te creëren tussen morfologisch verschillende stekelbaars populatie biedt een uitstekende gelegenheid om de genetische basis van geëvolueerd wijzigingen in de branchial skelet in kaart. Een trofische kenmerk van ecologische betekenis is de patroonvorming van kieuw Rakers, periodieke huid botten die de voorste en achterste vlakken van de branchial botten lijn en worden gebruikt om prooidieren te filteren. Vis die meestal voeden met kleine prooien hebben de neiging om langer en dichter afstand kieuw Rakers in vergelijking met vissen die zich voeden met grotere prooi 14,15 te hebben. Variatie in kieuw rakers is gemeld zowel within en tussen soorten 14-19, en aspecten van kieuw raker patroonvorming bijdragen aan trofische niches en fitness 16. Decennia van onderzoek hebben uitvoerig gedocumenteerd kieuw asfaltwerker aantal en de lengte variatie in threespine stekelbaars 17-21; Echter, deze studies meestal richten zich op de eerste rij van de kieuw Rakers. Recent onderzoek heeft aangetoond modulariteit in de genetische controle van de kieuw asfaltwerker nummer over de branchial skelet 22,23 en over een enkele rij in kieuw asfaltwerker spatiëring 23 en de lengte 24 nadruk op het belang van het bestuderen van meer dan één rij of een enkele kieuw asfaltwerker naar het begrijpen ontwikkelingsstoornissen genetische basis van kieuw asfaltwerker reductie. Een tweede trofische eigenschap van zowel de ecologische en biomedische betekenis is de patroonvorming van de keelholte tanden. Tanden bij vissen kan worden in zowel de orale kaak en de branchial skelet, bekend als faryngeale tanden. Orale tanden worden voornamelijk gebruikt voor prey vast te leggen terwijl de keelholte tanden worden gebruikt voor het kauwen en prooi manipulatie 25-27. Beide sets vormen via gedeelde ontwikkelingsstoornissen mechanismen en zijn ontwikkelingsgebied homoloog 28 beschouwd. Interessante modulariteit voordoet waarbij sommige soorten, zoals de zebravis, gebrek mondelinge en dorsale keelholte tanden 29, terwijl andere soorten hebben meerdere getande ceratobranchials, pharyngobranchials, en soms basihyal getande en hypobranchials 30. In stekelbaarsjes zijn keelholte tanden ventraal op de vijfde ceratobranchial en dorsaal op de voorste en achterste gevonden pharyngobranchials 31. Kinematica op stekelbaars voeden tonen de orale kaak wordt voornamelijk gebruikt voor hun prooi vangen en te vergemakkelijken zuigvoeding 9 verlaten van het kauwen op de keelholte kaak. In cichliden, lagere keelkaak morfologie varieert enorm 32,33 en is aangetoond dat adaptieve en gecorreleerd met trofische niche 34 te zijn. Multiple zoetwater stekelbaars populaties dramatische toename in ventrale keelholte tand nummer 23,35,36 geëvolueerd. Recent onderzoek heeft aangetoond dat de ontwikkelingsstoornis genetische basis van deze geëvolueerd tand winst is grotendeels onderscheiden in twee onafhankelijk afgeleid populaties van zoetwater stekelbaarsjes 36. In tegenstelling tot zoogdieren tanden, vis regenereren hun tanden continu tijdens het volwassen leven 37. Beide eerder beschreven hoge getande zoetwater bevolkingsgroepen hebben een versneld tand replacement rate geëvolueerd, waardoor een zeldzame gewervelde systeem om de genetische basis van de regeneratie 36 te bestuderen. Een derde trofische eigenschap die herhaaldelijk in zoet water stekelbaars is geëvolueerd is langer epibranchial en ceratobranchial botten, de branchial boog gesegmenteerde homologen van de boven- en onderkaak, respectievelijk 38. Langere branchial botten verlenen een grotere mondholte en waarschijnlijk zijn adaptieve voor het toestaan ​​van grotere prooien naar c te zijnonsumed. Bovendien in andere vissen, epibranchial botten zijn belangrijk voor depressie van de dorsale faryngeale tandplaten 25. Net als kieuw Rakers en keelholte tanden, de branchial botten zijn interne en dus moeilijk om gemakkelijk te visualiseren en te kwantificeren. Hier presenteren we een gedetailleerd protocol te ontleden en een flatscreen-monteer de branchial skelet, zodat u gemakkelijk visualisatie en kwantificering van een aantal belangrijke craniofaciale eigenschappen. Hoewel dit protocol beschrijft een stekelbaars dissectie, dezelfde methode werkt op een verscheidenheid van andere vissen.

<table><tbody><tr><td>Kaliumhydroxide (KOH)</td><td>EMD</td><td>PX1480-1</td><td></td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7893-4L</td><td></td></tr><tr><td>10% Neutraal Gebufferd Formaline (NBF)</td><td>Azer Scientific</td><td>NBF-4-G</td><td></td></tr><tr><td>Alizarine Rood S</td><td>EMD</td><td>AX0485-3</td><td></td></tr><tr><td>Microscoopdekglazen 22 mm x 60 mm</td><td>VWR</td><td>16004-350</td><td></td></tr><tr><td>100 mm x 10 mm glazen petrischaal</td><td>Kimble Chase</td><td>23064-10010</td><td>Om monsters te dissekeren op</td></tr><tr><td>Sylgard 184 Siliconen Elastomer Kit</td><td>Ellsworth Adhesives</td><td>184 SIL ELAST KIT 0.5KG</td><td>Kan in glazen of plastic petrischalen worden gegoten om dissectieplaten te maken</td></tr><tr><td>Modelleerklei</td><td>Sargent Art</td><td>22-4000</td><td>1 lb roomkleur</td></tr><tr><td>Scintillatiebuisjes (doos van 500)</td><td>Wheaton</td><td>986586</td><td>Borosilicaatglas met schroefdop</td></tr><tr><td>Forceps-Dumont #5 Inox (Biologie tip)</td><td>FST</td><td>11252-20</td><td>Dumostars zijn een alternatief</td></tr><tr><td>Dissectie schaar&nbsp;</td><td>FST</td><td>15003-08</td><td>Alternatieve maten zijn beschikbaar, afhankelijk van de grootte van het monster</td></tr><tr><td>Dissectiemicroscoop</td><td>Leica</td><td>S6E met KL300 LED</td><td>Veel andere modellen werken ook goed, een platte basis helpt</td></tr><tr><td>Microcentrifugebuisjes 1,7 ml</td><td>Denville</td><td>C2170</td><td></td></tr><tr><td>Karton glijplaat</td><td>Fisher</td><td>12-587-10</td><td></td></tr></tbody></table>

dissection en flat-montage van de driedoornige stekelbaars branchial skeleton

Dissection and Flat-mounting of the Threespine Stickleback Branchial Skeleton

De achterste faryngeale segmenten van het kopgedeelte van gewervelde dieren geven aanleiding tot het branchiale skelet, de primaire plaats voor voedselverwerking bij vissen. De morfologie van het branchiale skelet van vissen is aangepast aan het dieet van een soort. Driedoornige stekelbaarsvissen (Gasterosteus aculeatus) zijn uitgekomen als een modelsysteem om de genetische en ontwikkelingsbasis van geëvolueerde verschillen in een verscheidenheid aan eigenschappen te bestuderen. Mariene populaties van stekelbaarzen hebben herhaaldelijk talloze nieuwe zoetwatermeren en beken gekoloniseerd. Aanpassing aan het nieuwe dieet in deze zoetwateromgevingen ligt waarschijnlijk ten grondslag aan een reeks craniofaciale veranderingen die herhaaldelijk zijn geëvolueerd in onafhankelijk afgeleide zoetwaterpopulaties. Deze omvatten drie belangrijke patroneringsveranderingen aan het branchiale skelet: verminderingen in het aantal en de lengte van kieuwrasterbeenderen, toenames in het aantal faryngeale tanden en verhoogde lengte van branchiale botten. Hier beschrijven we een gedetailleerd protocol om het interne branchiale skelet in driedoornige stekelbaarsvissen te dissecteren en plat te monteren. Dissecto van het volledige driedimensionale branchiale skelet en het plat monteren in een grotendeels tweedimensionale voorbereiding, maakt het gemakkelijk om de morfologie van het branchiale skelet te visualiseren en te kwantificeren. Deze dissectiemethode is goedkoop, snel, relatief eenvoudig en toepasbaar op een grote verscheidenheid aan vissoorten. Bij stekelbaarzen maakt deze efficiënte methode de kwantificering van skeletmorfologie mogelijk in genetische kruisingen om genomische regio's te kaarten die craniofaciale patronering controleren.

<html> Dit protocol leidt tot een uitgesneden en vlak gemonteerd branchial skelet (figuur 4) waarbij een aantal verschillende belangrijke trofische eigenschappen kunnen worden gekwantificeerd. Vanuit een dorsale weergave kunt alle rijen van kieuw Rakers, alle keelholte tand platen, en bijna alle branchial beenderen gemakkelijk worden gevisualiseerd en gekwantificeerd 22 - 24,35,36,38,42. Alizarine rood fluoresceert ook een rhodamine en der...

Het branchiale skelet, inclusief kieuwbogen, keeltanden en branchiale botten, dient als de primaire plaats voor voedselverwerking bij de meeste vissen. Hier beschrijven we een protocol om dit interne skelet in drie-stekelige stekelbaarzen te dissecteren en plat te monteren. Deze methode is ook toepasbaar op een verscheidenheid aan andere vissoorten.

Dissection en Flat-montage van de driedoornige stekelbaars branchial Skeleton

The posterior pharyngeal segments of the vertebrate head give rise to the branchial skeleton, the primary site of food processing in fish. The morphology ...

Het algemene doel van deze procedure is het dissekeren en platmonteren van het kieuwskelet van de prikspiering. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen op het gebied van ontwikkeling, genetica en evolutie, zoals de wijze waarop dieren zich aanpassen aan nieuwe omgevingen en hoe variatie in de morfologie van volwassen dieren tijdens de ontwikkeling ontstaat.Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat men door het uitdissecteren en plat mounten van het branchiale skelet diverse trofische kenmerken kan visualiseren die niet in een whole-mount bestudeerd kunnen worden. Bestudeer ter voorbereiding de relevante morfologie van het schedelskelet van de drieporingstiekbaars. Nadat de vis is voorbereid voor de dissectie, begint u met het inbrengen van scherpe nummer vijf pincetten in de zijkant van het oog, in een hoek van 45 graden, om het membraan dat het oog bedekt door te prikken.Pel vervolgens het oogvlies weg, zoals het deksel van een yoghurtbeker. Voer daarna een open pincet achter het oog in, pak de oogzenuw vast en verwijder het oog. Wees voorzichtig om te voorkomen dat het oog wordt doorboord, anders lekt er melanine uit.Herhaal dit proces bij het oog aan de tegenovergestelde zijde. Plaats vervolgens het blad van een kleine schaar onder de posterieure zijde van de operculumflap en knip door het zachte weefsel dorsaal boven het operculum, in de richting van de oogkas. Knip daarna door het frontale bot, dat zich dorsaal van de oogkas bevindt.Snijd vervolgens door het parasfenoïde bot in de middellijn, rond het centrum van de oogkas. Herhaal de snede van het operculum aan de tegenovergestelde zijde. Voor de volgende stappen kunnen de bekkenstekels als handvatten worden gebruikt.Deze worden uitgevouwen door ze voorzichtig rechtstreeks van het lichaam af te trekken. Plaats nu de pincet onder het operculum en pel langzaam het gelaat van het lichaam af, waarbij eventueel nog vastzittend zacht weefsel tijdens dit proces wordt weggesneden.Wees voorzichtig rond de kieuwharken en zorg dat u deze niet beschadigt. Het is gemakkelijk om per ongeluk het eerste ceratobranchiaalbeen samen met het percoll vast te pakken bij het verwijderen van het gelaatsskelet. Kijk onder het percoll terwijl u dit naar voren pelt om er zeker van te zijn dat u niets extra's vasthebt.Los nu met een pincet de ceratohyalia aan beide zijden van het midline basihyal los, terwijl u het anterieure craniofaciale skelet afpelt en verwijdert. Herhaal dit aan de tegenoverliggende zijde. Het anterieure craniofaciale skelet omvat de gehele kaak, het volledige tongbeenskelet, de onderliggende dorsale en endochondrale elementen en het voorste gedeelte van de schedel.Breng vervolgens gesloten pincetten net onder de darmbuis in en trek deze anterior richting. Scheid hierbij de overgebleven spieren en ligamenten die aan het branchiale skelet vastzitten. Gebruik daarna de punt van de gesloten pincetten om de spieren die het dorsale branchiale skelet met de ventrale schedelbasis verbinden weg te schrapen.Schraap met een beweging van posterieur naar anterieur. Herhaal het proces van spierverwijdering aan de tegenovergestelde zijde van de prikrug. Verwijder vervolgens het kieuwskelet door de basis van de darmbuis vast te pakken en deze naar voren te trekken.Scheid de darmbuis met een loodrechte snede, posterieur aan de vijfde ceratobranchiaal. Een veelgemaakte fout is om de darmbuis te anterieur vast te pakken, waardoor de ventrale frontale buis ver achterblijft. Zorg ervoor dat u diep posterieur in de borstholte vastpakt; overtollige darmbuis kan later altijd worden verwijderd.Verwijder alle resterende botfragmenten uit de schedel aan de dorsale zijde van het kieuwskelet. Steek een schaar in de kieuwmand en maak een dorsale incisie tussen de bilaterale sets dorsale tandplaten. Houd deze snede gecentreerd om beschadiging aan de dorsale tandplaten te voorkomen.Maak vervolgens twee ondiepe laterale insneden in het rubberachtige lumen van het darmkanaal aan het posterieure uiteinde van het kieuwskelet. Aan het anterieure uiteinde van de darmbuis. Om het openen van het kieuwskelet te vergemakkelijken.Breng het skelet nu over naar een microcentrifugebuis gevuld met 50 procent glycerol en 0,25 procent kaliumhydroxide voor een milde opklaring. Of breng het in plaats daarvan over naar pure glycerol als verdere opklaring niet nodig is. Indien herkleuring vereist is, vindt u de details in het tekstprotocol.Ter voorbereiding op het inklissen wordt de oplossing vervangen door puur glycerol en de buis gedurende ten minste vijf minuten geschud. Verwijder vervolgens het kieuwskelet en plaats het met de dorsale zijde naar boven nabij de onderzijde van een glazen dekglas van 22 bij 60 millimeter. Breng nu enkele druppels glycerol aan op het skelet.Rol vervolgens twee kleine balletjes boetseerklei uit en plaats er één aan elk uiteinde van het dekglas; deze dienen als afstandhouders. Plaats daarna voorzichtig een tweede dekglas over de preparatie, met voldoende druk om het anterieure kieuwskelet plat te drukken. Pel nu de linker dorsale flap open, inclusief de dorsale tandplaten, en schuif de flap tussen de dekglazen.Doe vervolgens hetzelfde met de rechter dorsale flap. Schuif het gehele kieuwskelet weg van de rand van het dekglas. Om de procedure te voltooien, drukt u lichtjes op het bovenste dekglas om de kleiballetjes plat te drukken.Net genoeg zodat het kieuwskelet plat blijft liggen, maar niet zoveel dat het wordt geplet. Als tijdens het proces een rij zeefkieuwen wordt afgeschermd, schuif dan een pincet tussen de dekglasjes en heroriënteer de ceratobranchiaal of de gehele preparatie.Wanneer plat gemonteerd in zuiver glycerol, kan het preparaat gedurende ten minste een decennium plat worden bewaard bij kamertemperatuur. Dit protocol resulteert in een gedissecteerd en plat gemonteerd branchiaal skelet, waarbij een verscheidenheid aan belangrijke trofische kenmerken chronologisch in kaart kan worden gebracht.Vanuit een dorsaal aanzicht kunnen alle rijen kieuwharken, alle faryngeale tandenplaten en bijna alle branchiale beenderen gemakkelijk worden gevisualiseerd en geteld. Alizarin red S fluoresceert ook bij een rhodamine- of soortgelijk rood filter, wat dubbele labeling met andere markers en alternatieve visualisatiemethoden mogelijk maakt. In deze afbeelding zijn de kieuwharken gemarkeerd met haakjes.Tanden zijn gemarkeerd met pijlpuntjes en botten zijn gemarkeerd met asterisken. Zodra de techniek onder de knie is, kan de dissectie in enkele minuten worden voltooid en relatief snel bij honderden dieren worden uitgevoerd. Hoewel we een dissectie van het kieuwskelet van een prikspierling hebben gedemonstreerd, hopen we dat deze procedure als leidraad kan dienen voor diverse vissoorten.Door het kieuwskelet te dissekeren, kunnen we snel en eenvoudig verschillende belangrijke trofische kenmerken visualiseren die in hele preparaten niet zichtbaar zijn. Dit maakt een beter begrip mogelijk van de ontwikkeling en evolutie van het craniofaciale skelet.

dissection-flat-mounting-threespine-stickleback-branchial

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Visualiseren individuele cellen in dicht opeengepakte weefsels, zoals terminal Schwann-cellen (SC) op neuromusculaire verbindingen (NMS), is een uitdaging. "Sequential foto-bleken" laat de afbakening van een enkele terminal SC's, bijvoorbeeld in de triangularis sterni spier explantatie, een handige zenuw-spier voorbereid, indien sequentiële bleken kan worden gecombineerd met time-lapse imaging...

Sequential Photo-bleken om Single Schwann cellen afbakenen op de neuromusculaire junctie

Deze video beschrijft een techniek om het hart te isoleren van een zebravis in meerdere ontwikkelingsstadia om hartontwikkeling, rijping en veroudering te bestuderen.

Hartdissectie: een methode om zebravis hartontwikkeling te observeren

Processen als proliferatie, patroon, differentiatie en axon begeleiding kan gemakkelijk worden gemodelleerd in de zebravis ruggenmerg. In dit artikel beschrijven we een montageprocedure voor zebravis embryo's die visualisatie van deze gebeurtenissen optimaliseert.

Dissectie en horizontale bevestiging van de zebravis embryo&#39;s: Analyse van Spinal Cord Development

Prikken herstellen motoriek na een complete dwarslaesie. Sommige spinale-projecterende neuronen goed regeneratoren en andere niet. Dit document illustreert de technieken voor huisvesting zeeprik larven (en onlangs omgebouwd volwassenen), het produceren van volledige ruggenmerg doorsnijdingen en het voorbereiden wholemount hersenen en ruggenmerg voor in situ hybridisatie.

Compleet ruggenmergletsel en Brain Dissection Protocol voor Latere Wholemount<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisatie in Larvale Overzeese Lamprei

Dit document presenteert de voor sonderen ruimtelijk gecorreleerde chemische, structurele en mechanische eigenschappen van het meerlagige omvang van Atractosteus spatel (A. spatel) met nanoindentation methoden Fourier transformatie infrarood (FTIR) spectroscopie, scanning elektronen microscopie (SEM), en X- ray tomografie (X-ray CT). De experimentele resultaten zijn gebruikt om de ontwerpprincipes beschermende biologisch materiaal onderzocht.

Karakterisering van Multi-layered Fish Scales (<em&gt; Atractosteus spatel</em&gt;) Met behulp Nanoindentation, röntgen-CT, FTIR en SEM

De zebravis embryo is een uitstekend model voor ontwikkelingsbiologie onderzoek. Tijdens de embryogenese, zebravissen ontwikkelen met een dooier massa, die driedimensionale uitdagingen voor monster observatie en analyse presenteert. Dit protocol beschrijft hoe twee-dimensionale platte mount voorbereidingen van ganse berg in situ (WISH) gekleurd zebravis embryo exemplaren maken.

Flat Mount Voorbereiding voor observatie en analyse van de zebravis embryo Exemplaren gekleurd door Whole Mount<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisatie

Transgene manipulaties en genoom editing zijn van cruciaal belang voor het functioneel testen van de rol van genen en cis van regelgevende elementen. Hier kunt u een gedetailleerde micro-injectie protocol voor het genereren van genomische modificaties (inclusief Tol2-gemedieerde fluorescerende reporter transgene constructen, Talens en CRISPRs) wordt gepresenteerd voor de opkomende model vis, de driedoornige stekelbaars.

Micro-injectie voor Transgenese en Genome Bewerken in Threespine Stekelbaarzen

Finite Element Analysis is een veelgebruikt hulpmiddel om de mechanische prestaties van structuren onder belasting te onderzoeken. Hier passen we het toe op het modelleren van de biomechanica van de bek van de zebravis.

Het bouwen van Finite Element modellen te onderzoeken zebravis Jaw biomechanica

Hier presenteren we het protocol voor 3D-weefselkweek van de achterste lichaamsas van zebravissen, waardoor live studie van gewervelde segmentatie mogelijk is. Dit explantmodel biedt controle over de verlenging van de as, wijziging van morfogene bronnen en live beeldvorming op weefselniveau op subcellulair resolutieniveau.

Een 3D Tail Explant-cultuur om gewervelde segmentatie bij zebravissen te bestuderen

Hier beschrijven we computationele hulpmiddelen en methoden die visualisatie en analyse van drie- en vierdimensionale beeldgegevens van muizenembryo's mogelijk maken in de context van axiale elongatie en segmentatie, verkregen door into optische projectietomografie en door live beeldvorming en whole-mount immunofluorescentiekleuring met behulp van multifotonenmicroscopie.

Drie- en vierdimensionale visualisatie- en analysebenaderingen om gewervelde axiale rek en segmentatie te bestuderen

Leer de dissectie en flat-mounting van het branchiale skelet van driedoornige stekelbaars. Deze methode maakt gedetailleerde visualisatie van trofische kenmerken mogelijk voor onderzoek naar ontwikkelings- en evolutionaire biologie.

Dissection en Flat-montage van de driedoornige stekelbaars branchial Skeleton

Meer video's verkennen