Dissection en Flat-montage van de driedoornige stekelbaars branchial Skeleton

Het algemene doel van deze procedure is om het branchiale skelet van de stekelbaars te dissecteren en plat te monteren. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen op het gebied van ontwikkeling, genetica en evolutie. Bijvoorbeeld hoe dieren zich aanpassen aan nieuwe omgevingen en hoe variatie in de morfologie van volwassenen tijdens de ontwikkeling ontstaat.

Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat door het dissecteren en plat leggen van het branchiale skelet, een verscheidenheid aan trofisch kenmerken kan worden gevisualiseerd die niet in het geheel kan worden bestudeerd. Als voorbereiding, bekijk de relevante hoofdskeletmorfologie van de driedoornige stekelbaars. Nadat de vis voor de dissectie is voorbereid, begint u door scherpe nummer vijf forceps in de zijkant van het oog in te brengen, onder een hoek van 45 graden om het membraan dat het oog bedekt te doorboren.

Pel vervolgens de ooglid van het oog, zoals het deksel van een yoghurtpot. Plaats vervolgens open forceps achter het oog, pak de oogzenuw vast en verwijder het oog. Wees voorzichtig om het oog niet te doorboren, anders zal het melanine lekken.

Herhaal dit proces met het oog aan de andere kant. Plaats vervolgens de kling van een kleine schaar onder de achterste zijde van de operculumflap en snij door het zachte weefsel dorsolaal boven het operculum, richting het oogkas. Snijd vervolgens door het frontale bot, dat dorsolaal van de oogkas is.

Snijd vervolgens door het middenlijnparasfenoïde bot, rond het midden van de oogkas. Herhaal de operculumsnede aan de andere kant. Voor de volgende stappen kunnen de bekkenstekels als handgrepen worden gebruikt.

Ze vouwen uit door ze voorzichtig van het lichaam weg te trekken. Plaats nu de forceps onder het operculum en pel het gezicht langzaam van het lichaam af. Trim om al het zachte weefsel dat nog steeds is bevestigd in het proces weg te snijden.

Wees voorzichtig rond de kieuwbogen en zorg ervoor dat u ze niet verstoort. Het is gemakkelijk om per ongeluk het eerste ceratobranchiale bot te grijpen, samen met de percoll bij het verwijderen van het gezichtsskelet. Kijk onder hun percoll terwijl u het naar voren pelt om er zeker van te zijn dat u niets extra vasthoudt.

Los nu met behulp van forceps de ceratohyals van beide zijden van de middenlijn basihyal los, terwijl u het voorste craniale gezichtsskelet wegtrekt en verwijdert. Herhaal dit aan de andere kant. Het voorste craniale gezichtsskelet omvat de hele kaak, het gehele hyoïdskelet, de onderliggende dorsale en enchondrale elementen en het voorste deel van de schedel.

Plaats vervolgens gesloten forceps net onder de darmbuis en trek ze naar voren. Trek de resterende spieren en ligamenten los die aan het branchiale skelet zijn bevestigd. Gebruik vervolgens de punt van de gesloten forceps om de spieren te schrabben die het dorsale branchiale skelet met de ventrale hersenpan verbinden.

Schraap met een beweging van achter naar voren. Herhaal het spierverwijderingsproces aan de andere kant van de stekelbaars. Verwijder vervolgens het branchiale skelet door de basis van de darmbuis vast te grijpen en naar voren te trekken.

Separeer de darmbuis met een loodrechte snede, achter de vijfde ceratobranchial. Een veelgemaakte fout is om de darmbuis te ver vooraan te grijpen, waardoor de ventrale frontale buis ver achterblijft. Zorg ervoor dat u diep in het achterste deel van de borstholte grijpt en u kunt de overtollige darmbuis later altijd verwijderen.

Na het verwijderen van eventuele resterende botfragmenten van de hersenpan aan de dorsale kant van het branchiale skelet. Plaats de schaar in de branchiale mand en maak een dorsale snede tussen de bi-laterale sets van dorsale tandenplaten. Houd deze snede gecentreerd om schade aan de dorsale tandenplaten te voorkomen.

Maak vervolgens twee ondiepe laterale sneden in het rubberachtige darmlumen aan het achterste uiteinde van het branchiale skelet. Aan het anterieure uiteinde van de darmbuis. Om het openen van het branchiale skelet te vergemakkelijken.

Breng nu het skelet over in een microcentrifugebuis gevuld met 50 procent glycerol, nul punt twee vijf procent kaliumhydroxide voor voorzichtig opruimen. Of breng het in plaats daarvan over in zuiver glycerol als er geen verdere opruiming nodig is. Als opnieuw kleuring nodig is, worden de details in het tekstprotocol gegeven.

Om te monteren, verander de oplossing in zuiver glycerol en schud de buis gedurende minimaal vijf minuten. Verwijder vervolgens het branchiale skelet en plaats het nabij de onderkant van een 22 bij 60 millimeter glazen dekselglas met de dorsale kant omhoog. Breng nu een paar druppels glycerol op het skelet aan.

Rol vervolgens twee kleine ballen modelleerklei uit en speel er een aan elk uiteinde van het dekselglas, ze fungeren als afstandhouders. Plaats vervolgens losjes een tweede dekselglas over de voorbereiding, met voldoende druk om het anterieure branchiale skelet plat te maken. Pel nu de linkerdorsale flap open, inclusief de dorsale tandenplaten, en schuif de flap tussen de dekselglazen.

Doe vervolgens hetzelfde met de rechterdorsale flap. En duw het hele branchiale skelet weg van de rand van het dekselglas. Om de procedure te voltooien, drukt u licht op het bovenste dekselglas om de kleibollen plat te drukken.

Net genoeg om het branchiale skelet plat te houden. Maar niet zo veel dat het wordt verpletterd. Als tijdens het proces een rij rakers wordt verduisterd, schuift u forceps tussen de dekselglazen en oriënteert u de ceratobranchial of de hele voorbereiding opnieuw.

Wanneer plat gemonteerd in zuiver glycerol, kan de voorbereiding plat worden bewaard bij kamertemperatuur gedurende ten minste een decennium. Dit protocol resulteert in een gedissecteerd en plat gemonteerd branchiaal skelet. Waar een verscheidenheid aan belangrijke trofisch kenmerken kan worden gechronificeerd.

Vanaf een