Name: Isolatie en Cellulaire fenotypering van mesenchymale stamcellen afkomstig van de gewrichtsvloeistof en beenmerg van minivarkens (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-07-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 47 s
Description: Leer een niet-invasieve methode om mesenchymale stamcellen te isoleren uit gewrichtsvloeistof en beenmerg van minivarkens. Dit protocol ondersteunt regeneratieve geneeskunde en immunomodulatieonderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

We danken voor de financiële steun van het Next-Generation BioGreen 21 Program (nr. PJ007969), Rural Development Administration, en de National Research Foundation (subsidie nr. NRF-2015R1D1A1A01056639) van de Republiek Korea.

Dierproeven werden goedgekeurd door de Animal Center for Biomedical Experimentation aan Gyeongsang National University. 1. De voorbereidingen voor de Animal Procedure <ol><li> Bereid de volwassen vrouwelijke minivarkens voor de niet-invasieve verzameling MSCs uit beenmerg en synoviaal vocht. Voer het klinisch onderzoek van de minivarkens een dag voorafgaand aan de anesthesie en monstername. <ol><li> Zorg voor klinisch normale dieren voor lichamelijke onderzoeken, die de lichaamstemperatuur, ademhaling en hartslag, en voor de observatie van de varkens &#39;gedrag en hematologische status omvatten, met behulp van volledig bloedonderzoek testen. Opmerking: Parameter intervallen voor klinisch gezond minivarkens zijn 11-29 / min voor de ademhalingsfrequentie, 68-98 / min voor de hartslag en 37-38 ° C voor de lichaamstemperatuur. </li></ol></li><li> Verwijder al eetbaar strooisel uit de kooi tijdens de pre-operatieve periode van vasten van 6-12 uur prior aan de administratie van de anesthesie voor jonge en volwassen minivarkens, moeten 3 uur van vasten in acht worden genomen voor de pasgeborenen. Leveren drinkwater tot de tijd van de anesthesie. </li></ol> 2. Voorbereiding van de dieren voor Anesthesie <ol><li> Medicijnen de minivarkens voor toediening van anesthesie met acepromazine (0,1 mg / kg), medetomidine (0,03 mg / kg), en atropine (0,04 mg / kg). <ol><li> Injecteer medicatie intramusculair (IM) met een 21 G naald met een lengte van minimaal 30 mm voor volwassen varkens. Voer de IM injectie 1-3 cm achter het oor in de laterale cervicale spier of in de dijspier. Opmerking: Voer alle procedures zonder het opwekken van angst of stress bij de dieren of die ruwe behandeling om veilig te injecteren de premedicatie. </li></ol></li><li> Plaats de mini varkens in een dorsale-liggende positie. </li><li> Vijftien minuten na de toediening van de premedicatie, initiëren anesthesie met behulp van 1,5% isofluraan adminmeldden zich bij inademing. <ol><li> Verdere inademing van isofluraan (1,5%) door een endotracheale buis, gevolgd door een toename van de concentratie tot 2,5%, met zuurstof (1,5 l / min) als draaggas. </li></ol></li><li> Permanent toezicht op de hartslag, lichaamstemperatuur, en percutane bloed zuurstofverzadiging (SpO 2) van de minivarkens tijdens anesthesie. Gebruik een circulerende water deken bij een temperatuur van 38-39 ° C tot lichaamstemperatuur te handhaven. Breng een oogheelkundig zalf om de ogen te beschermen tegen uitdroging tijdens de anesthesie. </li><li> Volg Guedel&#39;s indeling om de diepte van de anesthesie 13 te beoordelen. </li></ol> 3. Voorbereidingen voor Cell Isolatie en Teelt <ol><li> De MSCs afgeleid van beenmerg en synoviaal vocht cultiveren, bereiden 500 ml advanced Dulbecco&#39;s gemodificeerd Eagle medium (ADMEM) aangevuld met 10% foetaal runderserum (FBS), 1% Glutamax, 10 ng / ml basische fibroblast growth factor (bFGF), en 1,0% penicilline-streptomycine (10.000 IE en 10.000 pg / ml, Pen-Strep). <ol><li> Incubeer de ADMEM bij 38,5 ° C in een bevochtigde atmosfeer van 5% CO2 in een CO2 incubator. </li></ol></li><li> Bereid 500 ml Dulbecco&#39;s fosfaat- gebufferde zoutoplossing (DPBS) volgens de instructies van de fabrikant voor celisolatie en wassen. </li></ol> 4. Het verzamelen van beenmerg van de minivarkens <ol><li> Selecteer een gebied van ongeveer 15 x 15 cm groot op het bekken (figuur 1) en verwijder het haar van dit gebied met behulp van gesteriliseerde veiligheid scheerapparaten of elektrische tondeuse. Zodra de minipig gepositioneerd, afwisselend scrub de procedure ter driemaal met de volgende sterilisatiemiddelen: povidon jodium en 70% ethanol. Nadat het gebied is goed droog, gelden steriele doeken. </li><li> Voorbekleding de 10 ml spuit met 100 U / ml heparine door spoelen met 3-4 ml heparine voor ejecting anti-coagulatiemiddel. Let op: Voer deze stap om stolling in de spuit tijdens beenmergpunctie te voorkomen. </li><li> Extract minstens 5 ml van beenmerg uit het bekken bot van de minipig onder anesthesie, met een beenmerg extractor (3,0 x 100 mm) stevig aan heparine voorbekleed 10 ml spuit. </li></ol> 5. Isolatie van cellen uit het beenmerg en in vitro Teelt <ol><li> Isoleer de cellen van de geëxtraheerde beenmerg. <ol><li> Verdun het beenmerg geëxtraheerd met een gelijk volume van DPBS in een 15 ml conische buis bij kamertemperatuur. </li><li> Voeg 3 ml dichtheidscentrifugatie media (Ficoll-Paque) aan de 15 ml conische buis. </li><li> Verdun een 4 ml laag van het beenmerg met DPBS, dat op de dichtheid centrifugatie medium zonder menging wordt geplaatst en Centrifugeer bij 400 xg gedurende 40 min bij kamertemperatuur. </li><li> Oogst de laag van mononucleaire cellen(MNC) van de bufferlaag tussen de twee lagen die de plasma (bovenlaag) en de dichtheid centrifugatie media (onderste laag) en breng de MNCs in een 15 ml conische buis. </li><li> Verdun het overgedragen MDL met 7-8 ml DPBS en centrifugeer ze bij 500 xg gedurende 10 min bij kamertemperatuur. Verwijder het supernatant en was de cellen tweemaal met DPBS. </li><li> Suspendeer de celpellet in 2 ml ADMEM en overbrengen naar een 35 mm weefselkweekplaat. Incubeer de kweekschaal bij 38,5 ° C in een bevochtigde atmosfeer van 5% CO2. </li></ol></li><li> In vitro kweken van cellen die zijn geïsoleerd uit beenmerg. <ol><li> Na 48 uur, zuig het medium met de cellen die niet aan de schaal en plaats 2 ml van de ADMEM en incubeer deze bij 38,5 ° C in een bevochtigde atmosfeer van 5% CO2. Verander het medium om de drie dagen. </li><li> Bij 70-80% confluentie was de cellen met DPBS, dissociëren ze met 1 ml 0,25%trypsine / EDTA en incubeer ze op 37 ° C gedurende 3-5 minuten totdat de cellen los. </li><li> Oogst de cellen met behulp van 10 ml ADMEM, overbrengen naar een 15 ml conische buis en centrifugeer ze bij 300 xg gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur. Verwijder het supernatant. </li><li> Suspendeer de cellen geoogst in 1 ml verse ADMEM en tellen met een hemocytometer. </li><li> Plaats de cellen in een 5-7,5 x 10 5 / 25T kolf met 4 ml ADMEM en incubeer ze op 38,5 ° C in een bevochtigde atmosfeer van 5% CO2. Verander het medium elke derde dag. </li></ol></li></ol> 6. Het verzamelen van de gewrichtsvloeistof uit de minivarkens <ol><li> Net als bij de procedure voor het beenmerg aspiratie, selecteert u de juiste oppervlakte van ongeveer 15 x 10 cm (lengte / breedte) over de femorale gewricht, en verwijder het haar met behulp van gesteriliseerde veiligheid scheerapparaten of elektrische tondeuse, te volgen door sanering procedures (stap 4.1). </li><li> Plaats een 3 ml spuit met een 23 Gnaald in het gewricht na de palpatie monumenten (knieschijf en scheenbeen kuif). <ol><li> Solliciteer zachte zuigkracht naar de spuiten voor het streven van de gewrichtsvloeistof in het gewricht. Het geschatte hoeveelheid gewrichtsvloeistof vanuit een gewricht 0,5-1 ml, maar afhankelijk van de grootte van de minipig of gewricht. Doorspoelen DPBS in de synoviale holte wanneer het verzamelde volume van de gewrichtsvloeistof te klein. </li><li> Onmiddellijk terug te trekken van de spuit om besmetting met bloed voorkomen. </li></ol></li></ol> 7. Cel Isolatie van de Verzamelde gewrichtsvloeistof en in vitro Teelt <ol><li> Isoleer de cellen van de synoviale vloeistof afgezogen. <ol><li> Verdun de afgezogen synoviale vloeistof met een gelijk volume van DPBS in een 15 ml conische buis bij kamertemperatuur. </li><li> Om vuil te verwijderen, filteren de verdunde gewrichtsvloeistof met behulp van een 40 pm nylon cel zeef. </li><li> Voeg 10 ml van DPBS om de buis met het gefilterde synovialevloeistof en Centrifugeer bij 400 xg gedurende 10 min bij kamertemperatuur. Verwijder het supernatant en was de cellen tweemaal met DPBS. </li><li> Suspendeer de celpellet in 2 ml ADMEM, plaatst de cellen op een 2-3 x 10 5 cellen / 35 mm weefselkweekplaat met 2 ml ADMEM en incubeer ze op 38,5 ° C in een bevochtigde atmosfeer van 5% CO2 . </li></ol></li><li> Herhaal stap 5.2 voor de in vitro kweek van geïsoleerde synoviale vloeistof afgeleide MSCs. </li></ol> 8. Post-procedure Onderhoud van de minivarkens <ol><li> Indien nodig, sluit de huid op het beenmerg extractor injectieplaats met een hechtdraad met een huid nietmachine, na beenmergafname. </li><li> Nadat de procedure is voltooid, bestuurt een intramusculaire injectie enrofloxacine (5 mg / kg) en meloxicam (0,2 mg / kg) aan de minivarkens keer per dag gedurende 3 dagen. </li><li> Nadat de procedure is voltooid, desinfecteren beenmerg en synoviaal vocht verzamelplaatsmet 0,1% povidonjodium eenmaal daags gedurende 3 dagen. Zorgvuldig te observeren dagelijks te controleren op tekenen van complicaties (zoals zwelling, pus of roodheid). </li></ol> 9. Cel Fenotypering Met behulp van flowcytometrie <ol><li> Wanneer de MSC&#39;s zijn 70-80% confluent bij passages 3-5, was de cellen met DPBS en te behandelen met 1 ml 0,25% (v / v) trypsine / EDTA. Dan, incubeer ze op 37 ° C gedurende 3-5 minuten totdat de cellen worden losgemaakt. </li><li> Oogst de cellen met behulp van 10 ml van DPBS, overbrengen naar een 15 ml conische buis en centrifugeer ze bij 300 xg gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur. Gooi de bovenstaande oplossing. </li><li> Om de cellen te bevestigen, schorsen de celpellet in 10 ml van een 3,7% formaldehyde-oplossing en bewaar ze bij 4 ° C gedurende één dag vóór de analyse. <ol><li> Een dag na de vaststelling, was de cellen met DPBS tweemaal met behulp van centrifugeren bij 300 x g gedurende 5 minuten per keer. Gooi de bovenstaande oplossing. </li><li> Suspendeer de celpellet in 4 mlDPBS, dat wordt aangevuld met 1% (w / v) runderserumalbumine (BSA), en incubeer de pellet gedurende 1 uur bij 4 ° C om niet-specifieke Fc-gemedieerde interacties te blokkeren. </li><li> Verdeel 500 ul aliquots van de celsuspensie in 1,5 ml buizen. </li><li> Voor niet-geconjugeerde antilichamen (CD29 en vimentine), was de cellen door centrifugatie bij 300 x g gedurende 3 minuten. Gooi de bovenstaande oplossing. </li><li> Suspendeer de celpellet in 500 ui van een 1: 100 verdunning van het primaire antilichaam en incubeer gedurende 1 uur bij 4 ° C. </li><li> Was de cellen tweemaal met 1% runderserumalbumine door centrifugatie bij 300 xg gedurende 5 minuten elke keer. Gooi de bovenstaande oplossing. </li><li> Suspendeer de celpellet in 500 ui van een 1: 100 verdunning van het fluoresceïne isothiocyanaat (FITC) geconjugeerd secundair antilichaam en incubeer gedurende 1 uur in het donker bij 4 ° C. </li></ol></li><li> Voor de FITC-geconjugeerde antilichamen (isotype, CD34, CD44 en CD45), was de cellen door centrifugaleking bij 300 x g gedurende 3 minuten. Gooi de bovenstaande oplossing. <ol><li> Suspendeer de celpellet in 500 ui van de 1: 100 FITC-geconjugeerd antilichaam en incubeer gedurende 1 uur in het donker bij 4 ° C. </li><li> Voor beide kleuring omstandigheden was de cellen tweemaal met DPBS door centrifugatie bij 300 xg gedurende 5 minuten elke keer. Gooi de bovenstaande oplossing. </li><li> Suspendeer de cellen in 500 gl DPBS, overbrengen naar een 5 ml rondbodem buis en analyseren van de resultaten met een flow cytometer 8. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Woodbury, D., Schwarz, E. J., Prockop, D. J., Black, I. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+rat+and+human+bone+marrow+stromal+cells+differentiate+into+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Adult rat and human bone marrow stromal cells differentiate into neurons.</a> J Neurosci Res. 61 (4), 364-370 (2000).</li>
<li>Sakaguchi, Y., Sekiya, I., Yagishita, K., Muneta, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+human+stem+cells+derived+from+various+mesenchymal+tissues%3A+Superiority+of+synovium+as+a+cell+source%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheum%22%5BJournal%5D)">Comparison of human stem cells derived from various mesenchymal tissues: Superiority of synovium as a cell source.</a> Arthritis Rheum. 52 (8), 2521-2529 (2005).</li>
<li>De Coppi, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amniotic+fluid+and+bone+marrow+derived+mesenchymal+stem+cells+can+be+converted+to+smooth+muscle+cells+in+the+cryo-injured+rat+bladder+and+prevent+compensatory+hypertrophy+of+surviving+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Amniotic fluid and bone marrow derived mesenchymal stem cells can be converted to smooth muscle cells in the cryo-injured rat bladder and prevent compensatory hypertrophy of surviving smooth muscle cells.</a> J Urol. 177 (1), 369-376 (2007).</li>
<li>Arufe, M. C., De la Fuente, A., Fuentes, I., de Toro, F. J., Blanco, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chondrogenic+potential+of+subpopulations+of+cells+expressing+mesenchymal+stem+cell+markers+derived+from+human+synovial+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biochem%22%5BJournal%5D)">Chondrogenic potential of subpopulations of cells expressing mesenchymal stem cell markers derived from human synovial membranes.</a> J Cell Biochem. 111 (4), 834-845 (2010).</li>
<li>Patil, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multilineage+potential+and+proteomic+profiling+of+human+dental+stem+cells+derived+from+a+single+donor%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Multilineage potential and proteomic profiling of human dental stem cells derived from a single donor.</a> Exp Cell Res. 320 (1), 92-107 (2013).</li>
<li>Hatsushika, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intra+articular+injection+of+synovial+stem+cells+promotes+meniscal+regeneration+in+a+rabbit+massive+meniscal+defect+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Res%22%5BJournal%5D)">Intra articular injection of synovial stem cells promotes meniscal regeneration in a rabbit massive meniscal defect model.</a> J Orthop Res. 31 (9), 1354-1359 (2013).</li>
<li>Hagmann, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+bone+marrow-+and+synovium-derived+mesenchymal+stromal+cells+from+osteoarthritis+patients+on+regulatory+T+cells+in+co-culture%5BTitle%5D)+AND+%22ClinExpImmunol%22%5BJournal%5D)">The influence of bone marrow- and synovium-derived mesenchymal stromal cells from osteoarthritis patients on regulatory T cells in co-culture.</a> ClinExpImmunol. 73 (3), 454-462 (2013).</li>
<li>Lee, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+source-dependent+in+vivo+immunosuppressive+properties+of+mesenchymal+stem+cells+derived+from+the+bone+marrow+and+synovial+fluid+of+minipigs%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Cell source-dependent in vivo immunosuppressive properties of mesenchymal stem cells derived from the bone marrow and synovial fluid of minipigs.</a> Exp Cell Res. 333 (2), 273-288 (2015).</li>
<li>Su, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phylogenetic+distinction+of+iNOS+and+IDO+function+in+mesenchymal+stem+cell-mediated+immunosuppression+in+mammalian+species%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Differ%22%5BJournal%5D)">Phylogenetic distinction of iNOS and IDO function in mesenchymal stem cell-mediated immunosuppression in mammalian species.</a> Cell Death Differ. 21 (3), 388-396 (2014).</li>
<li>Jones, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synovial+fluid+mesenchymal+stem+cells+in+health+and+early+osteoarthritis%3A+Detection+and+functional+evaluation+at+the+single-cell+level%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheum%22%5BJournal%5D)">Synovial fluid mesenchymal stem cells in health and early osteoarthritis: Detection and functional evaluation at the single-cell level.</a> Arthritis Rheum. 58 (6), 1731-1740 (2008).</li>
<li>Morito, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synovial+fluid-derived+mesenchymal+stem+cells+increase+after+intra-articular+ligament+injury+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Rheumatology+%28Oxford%29%22%5BJournal%5D)">Synovial fluid-derived mesenchymal stem cells increase after intra-articular ligament injury in humans.</a> Rheumatology (Oxford). 47 (8), 1137-1143 (2008).</li>
<li>Sekiya, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+mesenchymal+stem+cells+in+synovial+fluid+increase+in+the+knee+with+degenerated+cartilage+and+osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Res%22%5BJournal%5D)">Human mesenchymal stem cells in synovial fluid increase in the knee with degenerated cartilage and osteoarthritis.</a> J Orthop Res. 30 (6), 943-949 (2011).</li>
<li>John, T., Lerche, P. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aJohn%2C+T+%22Anesthesia+and+analgesia+for+veterinary+technicians%22">Anesthesia and analgesia for veterinary technicians</a>. , Mosby Elsevier press. St. Louis, Missouri. (2011).</li>
<li>Cooper, D. K., Gollackner, B., Sachs, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Will+the+pig+solve+the+transplantation+backlog%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Med%22%5BJournal%5D)">Will the pig solve the transplantation backlog.</a> Annu Rev Med. 53, 133-147 (2002).</li>
<li>Millard, A. L., Mueller, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+issues+related+to+porcine+xenograft+exposure+to+human+viruses%3A+Lessons+from+allotransplantation%5BTitle%5D)+AND+%22CurrOpin+Organ+Transplant%22%5BJournal%5D)">Critical issues related to porcine xenograft exposure to human viruses: Lessons from allotransplantation.</a> CurrOpin Organ Transplant. 15 (2), 230-235 (2010).</li>
<li>Ringe, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porcine+mesenchymal+stem+cells.+Induction+of+distinct+mesenchymal+cell+lineages%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Porcine mesenchymal stem cells. Induction of distinct mesenchymal cell lineages.</a> Cell Tissue Res. 307 (3), 321-327 (2002).</li>
<li>Petersen, B., Carnwath, J. W., Niemann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+perspectives+for+porcine-to-human+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Immunol+Micro+biol+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">The perspectives for porcine-to-human xenografts.</a> Comp Immunol Micro biol Infect Dis. 32 (2), 91-105 (2009).</li>
<li>Zeng, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multipotent+adult+progenitor+cells+from+swine+bone+marrow%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Multipotent adult progenitor cells from swine bone marrow.</a> Stem Cells. 24 (11), 2355-2366 (2006).</li>
<li>Zeng, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioenergetic+and+functional+consequences+of+bone+marrow-derived+multipotent+progenitor+cell+transplantation+in+hearts+with+postinfarction+left+ventricular+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Bioenergetic and functional consequences of bone marrow-derived multipotent progenitor cell transplantation in hearts with postinfarction left ventricular remodeling.</a> Circulation. 115 (14), 1866-1875 (2007).</li>
<li>Sekiya, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+mesenchymal+stem+cells+in+synovial+fluid+increase+in+the+knee+with+degenerated+cartilage+and+osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Res%22%5BJournal%5D)">Human mesenchymal stem cells in synovial fluid increase in the knee with degenerated cartilage and osteoarthritis.</a> J Orthop Res. 30 (6), 943-949 (2012).</li>
<li>Mochizuki, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Higher+chondrogenic+potential+of+fibrous+synovium-+and+adipose+synovium-derived+cells+compared+with+subcutaneous+fat-derived+cells%3A+Distinguishing+properties+of+mesenchymal+stem+cells+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheum%22%5BJournal%5D)">Higher chondrogenic potential of fibrous synovium- and adipose synovium-derived cells compared with subcutaneous fat-derived cells: Distinguishing properties of mesenchymal stem cells in humans.</a> Arthritis Rheum. 54 (3), 843-853 (2006).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat zij geen belangenconflict hebben.

Minivarkens werden gebruikt om MSC isolatie stellen uit beenmerg en synoviaal vocht. Om verschillende fysiologische omstandigheden, zoals leeftijd, geslacht en ziekte uit te roeien, minivarkens van isogene achtergrond donoren werden gekozen om de celbron afhankelijke karakterisering accuraat evalueren. Varkens is bekend dat anatomisch, fysiologisch en genetisch vergelijkbaar met de mens, in het bijzonder, kan minivarkens grootte aangepast organen te produceren; Daarom kunnen ze worden gebruikt als vervanging donor soort...

Multipotente mesenchymale stamcellen (MSC's) kunnen worden ingedeeld in mesenchymale celstammen en MSC's zijn gevestigd en geïsoleerd uit verschillende weefselbronnen, zoals beenmerg, navelsnoeren, placenta's, vetweefsel, dermale huid, skeletspieren, haarzakjes, synoviale membranen en tanden1-5. Momenteel is de aandacht uitgegaan naar synoviale MSC's omdat deze cellen kunnen helpen bij de behandeling van gewrichtsaandoeningen, zoals botfractuur, artrose en reumatoïde artritis (RA), en vanwege het regeneratieve potentieel van MSC's in beschadigd kraakbeen of bot, kunnen ze ook helpen bij de behandeling van immuunmodulatie of auto-immuunziekten6-8. De meeste onderzoeken naar MSC's afkomstig uit synoviale bronnen hebben gebruik gemaakt van MSC's van het synoviale membraan in plaats van uit synoviaalvocht2,9; dus het biologische begrip van uit synoviaalvocht afkomstige MSC's is beperkt.
Synoviaalvocht is een gemakkelijk toegankelijke bron van MSC's, die kan worden afgezogen tijdens de diagnose of behandeling van patiënten en tijdens diagnostische bevestigingen van verschillende artritisaandoeningen die geen invasieve procedures vereisen, zoals artrose of RA. De populatie van uit synoviaalvocht afkomstige MSC's in de gewrichtsholte is significant verhoogd bij artritispatiënten in vergelijking met niet-artritispatiënten10-12. Daarom is synoviaalvocht een uitstekende bronkandidaat voor MSC's, met name voor autologe stamceltherapie bij patiënten met ontstoken of gewonde gewrichten. Bovendien hebben uit synoviaalvocht afkomstige MSC's een chondrogene capaciteit, immunomodulerende eigenschappen en een hoge proliferatiesnelheid. Dit onderzoek heeft protocollen vastgesteld voor beenmergextractie en synoviaalvochtafzuiging van minivarkens met behulp van niet-invasieve methoden en voor de in vitro expansie van geïsoleerde cellen en analyse van celfenotypen.

<table><tbody><tr><td>Advanced Dulbecco&rsquo;s modified Eagle medium (ADMEM)</td><td>Gibco</td><td>12491-023</td><td>MSC cultuurmedium</td></tr><tr><td>Dulbecco&rsquo;s phosphate-buffered saline (DPBS)</td><td>Gibco</td><td>14190-144</td><td>Celwassingmedium, vrij van Ca2+/Mg2+</td></tr><tr><td>Fetal bovine serum (FBS)</td><td>Gibco</td><td>16000-044</td><td>Onderdeel van MSCs medium</td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>Gibco</td><td>35050-061</td><td>Onderdeel van MSCs medium</td></tr><tr><td>Penicillin/streptomycin</td><td>Gibco</td><td>10378-016</td><td>Onderdeel van MSCs medium</td></tr><tr><td>Basic fibroblast growth factor (bFGF)</td><td>Simga</td><td>F0291</td><td>Onderdeel van MSCs medium</td></tr><tr><td>Bovine serum albumin (BSA)</td><td>Sigma</td><td>A6003</td><td>Onderdeel van MSCs medium</td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA</td><td>Gibco</td><td>25200-072</td><td>Celdissociatiereagens&nbsp;</td></tr><tr><td>&beta;-mercaptoethanol</td><td>Sigma</td><td>M7522</td><td>Onderdeel van MSCs medium</td></tr><tr><td>Isotype antibody</td><td>BD Pharmingen</td><td>BD 550616</td><td>Isotype Controle</td></tr><tr><td>CD29 antibody</td><td>BD Pharmingen</td><td>BD 552369</td><td>Integrine beta-1 MSCs marker</td></tr><tr><td>CD44 antibody</td><td>BD Pharmingen</td><td>BD 553133</td><td>Celoppervlak glycoproteïne MSCs marker</td></tr><tr><td>CD45 antibody</td><td>BD Pharmingen</td><td>BD 340664</td><td>Hematopoëtische stamcellen marker</td></tr><tr><td>CD34 antibody</td><td>BD Pharmingen</td><td>BD 555821</td><td>Hematopoëtische stamcellen marker</td></tr><tr><td>CD90 antibody</td><td>BD Pharmingen</td><td>BD 555595</td><td>Thy-1 membraanglycoproteïne MSCs marker</td></tr><tr><td>MHC Class II antibody</td><td>Santa Cruz</td><td>SC-32247</td><td>Antigeenpresenterende cellen marker</td></tr><tr><td>Vimentin antibody</td><td>Sigma</td><td>Sigma-S6389</td><td>Type III intermediaire filament MSCs marker</td></tr><tr><td>Alkaline phosphatase</td><td>Promega</td><td>S3841</td><td>Mengsel van 5-broom-4-chloor-3-indolyl-fosfaat (BCIP) en nitro blauw tetrazoliium (NBT)</td></tr><tr><td>Ficoll-Paque</td><td>GE Healthcare</td><td>17-1440-02</td><td>Dichtheidsgradientencentrifugatie</td></tr><tr><td>Cell strainer</td><td>BD Falcon</td><td>352340</td><td>40 &micro;m nylon celfilter</td></tr><tr><td>15-ml polystyreen conische buis</td><td>BD Falcon</td><td>351095</td><td>Staalcollectie en celisolatie</td></tr><tr><td>35 mm schotels</td><td>Nunc</td><td>153066</td><td>Celcultuurschaal</td></tr><tr><td>Beenmerg extractor</td><td>GmbH Medizintechnologie, Germany</td><td>1145-1W010</td><td>TrokaBone, 3.0 x 100 mm</td></tr><tr><td>Hematocrietkamer</td><td>Marinfeld</td><td>640130</td><td>Celtellingskamer</td></tr><tr><td>Atropine</td><td>Jeil Pharmaceutical Co, South Korea</td><td></td><td>Atropine sulfaat Hydraat</td></tr><tr><td>Acepromazine</td><td>Samu Median, South Korea</td><td></td><td>Pre-anesthetisch kalmerend en anti-emetisch medicijn</td></tr><tr><td>Medetomidine</td><td>Pfizer</td><td></td><td>Anesthetisch en analgetisch medicijn</td></tr><tr><td>Enrofloxacin</td><td>Bayer Healthcare, Germany</td><td></td><td>Antibiotica</td></tr><tr><td>Meloxicam</td><td>Over Veterinary Medicine, Argentinië</td><td></td><td>Ontstekingsremmend en analgetisch medicijn</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Hana pharm, South Korea</td><td></td><td>Inhalatieanesthesie</td></tr><tr><td>Povidon jodium&nbsp;</td><td>Korea Pharma, South Korea</td><td></td><td>Steriliserend middel</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Sigma</td><td>E7023</td><td>Steriliserend middel</td></tr><tr><td>Heparine</td><td>Sigma</td><td>H3393</td><td>Antistollingsmiddel</td></tr><tr><td>Formaldehyde</td><td>Sigma</td><td>F8775</td><td>Celfixatiemiddel</td></tr><tr><td>Ophthalmologisch zalf&nbsp;</td><td>Pfizer</td><td></td><td>Oxytetracycline HCl met polymyxine B sulfaat</td></tr><tr><td>Circulerend waterdeken</td><td>Gaymar Industries</td><td></td><td>Verwarmingssysteem tijdens en na anesthesie</td></tr><tr><td>Huidnaaldapparaat</td><td>Covidien, USA</td><td></td><td>Hechting sluiting huid</td></tr><tr><td>CO2 Incubator</td><td>Thermo Forma</td><td>3111</td><td>Celcultuurapparatuur</td></tr><tr><td>Flow cytometer</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td>Celanalysator</td></tr><tr><td>Minipig</td><td>PWG Genetics Korea, Ltd.</td><td>T-type</td><td>Miniatuurvarken</td></tr></tbody></table>

isolatie en cellulaire fenotypering van mesenchymale stamcellen afkomstig van de gewrichtsvloeistof en beenmerg van minivarkens

Isolation and Cellular Phenotyping of Mesenchymal Stem Cells Derived from Synovial Fluid and Bone Marrow of Minipigs

Mesenchymale stamcellen (MSC's) zijn vastgesteld na isolatie uit verschillende weefselbronnen, waaronder beenmerg en synoviaal vocht. Onlangs werd gemeld dat uit synoviaal vocht afgeleide MSC's multi-lineage differentiatiepotentieel en immunomodulerende eigenschappen hebben, wat aangeeft dat deze cellen kunnen worden gebruikt voor weefselengineering en systemische behandelingen. Deze studie presenteert een protocol voor eenvoudige en niet-invasieve isolatie van MSC's afgeleid van het beenmerg en het synoviaal vocht van minivarkens om celoppervlaktemarkers te analyseren voor celfenotypering en in vitro cultivering. Met behulp van seksueel volwassen zes maanden oude minivarkens werd het beenmerg uit de iliacale kam van het bot geëxtraheerd met behulp van een beenmergextractor, en het synoviaal vocht werd afgezogen uit het femorotibiale gewricht. Procedures voor het verzamelen van monsters uit beide bronnen waren niet-invasief. De protocollen voor effectieve isolatie van MSC's uit geoogste celbronnen en voor het creëren van in vitro kweekomstandigheden om stabiele MSC's van minivarkens te expanderen en de toepassing van systemische autologe behandelingen worden geboden. Voor celfenotypering werden de celoppervlaktemarkers van beide cellen geanalyseerd met behulp van flowcytometrie. In de resultaten werden de MSC's geïsoleerd uit het synoviaal vocht van de minivarkens en bleek dat uit synoviaal vocht afgeleide MSC's een vergelijkbare morfologie en celfenotype hebben als uit beenmerg afgeleide MSC's. Daarom is niet-invasief verkregen synoviaal vocht een waardevolle bron van MSC's.

Oprichting van MSC&#39;s Afgeleid van het beenmerg en gewrichtsvloeistof van minivarkens MSCs werden succesvol geïsoleerd uit het beenmerg en articulaire synoviale gewrichten van de minivarkens en uitgebreid in vitro (figuur 2). Injectiespuit aspiratie van gewrichtsvloeistof is eenvoudig en is het mogelijk om voldoende hechtende cellen in in vitro kweek van de primaire cellen...

Een protocol dat mesenchymale stamcellen (MSC's) vaststelt die geïsoleerd zijn uit de synoviale vloeistof en het beenmerg van minivarkens en op niet-invasieve wijze verzameld worden met behulp van het afzuigapparaat van een spuit, wordt gepresenteerd. Cellulair fenotypen werd uitgevoerd met behulp van flowcytometrie na celisolatie en in vitro cultivatie van beenmerg en synoviale vloeistoffen afgeleid van MSC's.

Isolatie en Cellulaire fenotypering van mesenchymale stamcellen afkomstig van de gewrichtsvloeistof en beenmerg van minivarkens

Mesenchymal stem cells (MSCs) have been established after isolation from various tissue sources, including bone marrow and synovial fluid. Recently, ...

Het algemene doel van deze procedure is de niet-invasieve afname van synoviaal vocht en beenmerg bij minivarkens om mesenchymale stamcellen te verzamelen voor gebruik in regeneratie- en immunomodulatiestudies. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen binnen het vakgebied van MSC-therapie in de otologie, zoals het vaststellen van de aanwezigheid van MSC's in synoviaal vocht en hoe deze te karakteriseren in vergelijking met MSC's uit beenmerg. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat de sleuteleigenschappen van MSC's afgeleid van synoviaal vocht en beenmerg bij minivarkens effectief kunnen worden vastgesteld, wat nuttig zal zijn voor toepassingen bij patiënten.De implicaties van deze techniek strekken zich uit tot de therapie van diverse gewrichtsaandoeningen, aangezien de populatie van uit synoviaal vocht afgeleide MSC's in de gewrichtsholte bij atletische patiënten significant is toegenomen. Hoewel deze methode inzicht kan bieden in de regeneratieve geneeskunde, kan deze ook worden toegepast op andere studies, zoals onderzoek naar auto-immuunziekten. Omdat MSC's van minivarkens autoloog zijn, zou immunosuppressie van belang kunnen zijn voor mensen.Naast de andere wetenschappers zullen Hyeon-Jeong Lee en Won-Jae Lee uit mijn derde jaar de procedure demonstreren. Begin met het positioneren van een geanestheseerd minivarken om toegang te krijgen tot de crista iliaca. Onthaar vervolgens een gebied van 15 vierkante centimeter op de crista iliaca met een scheermes of trimmer.Schrob vervolgens de blootgestelde huid afwisselend drie keer met povidonjodium en 70% ethanol. Wanneer de huid volledig is opgedroogd, worden steriele doeken aangebracht. Voorbehandel nu een spuit van 10 mL met heparine, gebruikmakend van een spoeling van 3 tot 4 mL.Dit voorkomt dat het beenmerg stolt tijdens de extractie. Bevestig vervolgens, precies op de crista iliaca, een beenmergextractor stevig aan de met heparine gecoate spuit en extraheer ten minste 5 mL beenmerg. Om de cellen uit het geëxtraheerde beenmerg te isoleren, wordt dit eerst verdund met een gelijk volume DPBS in een conische buis van 15 mL bij kamertemperatuur.Breng vervolgens drie milliliter dichtheidscentrifugatiemedium over in een tweede conische buis van 15 milliliter. Breng daarna voorzichtig vier milliliter van het verdunde beenmerg over op het dichtheidscentrifugatiemedium om twee oplossingslagen te creëren. Centrifugeer de buis nu 40 minuten bij 400 Gs op kamertemperatuur.De gewenste MNC's worden verzameld in de centrale witte laag. Aspireer alleen deze laag. Breng de MNC-laag over in een conische buis van 15 milliliter en verdun deze met zeven tot acht milliliter DPBS.Centrifugeer de cellen vervolgens 10 minuten bij 500 Gs bij kamertemperatuur. Verwijder het supernatant en was de gecentrifugeerde cellen twee keer met 10 mL DPBS, waarbij de vorige centrifugeercyclus wordt herhaald. Na de twee wasbeurten suspenderen we de MNC's in 2 mL ADMEM.Breng de cellen vervolgens over naar een weefkweekschaaltje van 35 millimeter en incubeer ze bij 38,5 °C in een bevochtigde incubator met 5% koolstofdioxide. Aspireer na 48 uur het medium samen met de niet-gehechte MNC's. Voeg vervolgens twee milliliter vers ADMEM toe en zet de incubatie voort, waarbij het medium elke drie dagen wordt ververst.Wanneer de cellen een confluentie van 70 tot 80% bereiken, wordt de cultuur gewassen met verse DPBS. Dissocieer vervolgens de cellen met één milliliter 0,25% Trypsin-EDTA gedurende drie tot vijf minuten bij 37 °C. Verzamel de cellen in tien milliliter ADMEM en breng ze over naar een conische buis van 15 milliliter.Centrifuge de cellen vervolgens 5 minuten bij 300 Gs bij kamertemperatuur en verwijder het supernatant. Suspendeer de geoogste MNC's nu in één milliliter vers ADMEM en meet de dichtheid ervan. Sluit af door tussen de 1/2 en driekwart miljoen cellen uit te platen in T25-flasks met vier milliliter ADMEM.Incubeer de kolfjes op dezelfde wijze als de platen en ververs het medium elke drie dagen. Bereid een huidsectie van 15x10 centimeter over het femurgewricht voor, zoals is gedaan bij de voorbereiding voor de collectie van beenmerg. Palpeer vervolgens de patella en de tibiacresten onder de huid om het synoviale gewricht te identificeren, en breng een spuit van drie milliliter met een 23-gauge naald precies in het gewricht in.Onttrek met een zachte zuigkracht tussen 1/2 en één milliliter vloeistof en trek de naald onmiddellijk terug. Als het volume aan synoviaal vocht te klein is, spoel de holte dan met DPBS om synoviaal vocht samen met DPBS te verzamelen. Het te gebruiken volume DPBS varieert afhankelijk van de grootte van de synoviaalholte.Het optimale volume aan synoviaal vocht is beperkt in een gezond gewricht. Het volume varieert afhankelijk van de grootte en de pathologische toestand van het gewricht. Om de cellen uit het synoviaal vocht te isoleren, wordt het vocht bij kamertemperatuur verdund met een gelijk volume DPBS in een conische buis van 15 milliliter.Vervolgens verwijderen we het debris door de verdunning te filteren via een nylon cell strainer van 40 micron. Voeg daarna nog tien milliliter DPBS toe en centrifugeer de suspensie 10 minuten bij 400 Gs op kamertemperatuur. Verwijder vervolgens het supernatant en was de cellen twee keer met DPBS.We suspenderen het gewassen celpellet in twee milliliters ADMEM. Vervolgens gaan we over tot het kweken van de cellen zoals gedemonstreerd is met de MSC's. MSC's werden succesvol geïsoleerd uit het beenmerg en de gewrichtssynoviale gewrichten van de minivarkens en in vitro uitgebreid.De morfologie van MSC's afgeleid van synoviaal vocht is vergelijkbaar met die van MSC's afgeleid van beenmerg: beide hebben een fibroblastische spoelvorm en zijn homogeen adherent. De MSC's vertoonden een positieve expressie bij alkalische-fosfatasekleuring nadat de derde subcultuur was voltooid. Vervolgens werden de oppervlaktemarkers in beide culturen geanalyseerd.Zoals verwacht vertoonden beide typen MSC's een significante expressie van CD29, CD44 en Vimentine. Daarentegen waren de expressies van CD34 en CD45 negatief en laag. Deze resultaten waren identiek aan die verkregen uit verschillende MSC's, waaronder cellen geïsoleerd uit synoviaal vocht.Na het bekijken van deze video zou u een goed inzicht moeten hebben in hoe u op niet-invasieve wijze synoviaal vocht en beenmerg kunt aspireren om hun MSC's uit minivarkens te isoleren, en hoe u de vergelijking en fenotypering van deze MSC's kunt uitvoeren. Bij het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om het doelpunt op de crista iliaca en het synoviale gewricht te lokaliseren door middel van zorgvuldige palpatie. Na deze procedure kunnen andere methoden, zoals in modellen voor artrose of reumatoïde artritis, worden toegepast om aanvullende vragen te beantwoorden, zoals of niet alleen MSC's uit beenmerg, maar ook MSC's uit synoviaal vocht, een vergelijkbaar vermogen hebben voor kraakbeen- of botinitiatie en immunosuppressie.Na de ontwikkeling heeft deze techniek de autologe therapie van gewrichtsaandoeningen vooruitgeholpen door bij te dragen aan de karakterisering van MSC's afkomstig uit aangevallen of ontstoken gewrichten bij patiënten met artritis.

isolation-cellular-phenotyping-mesenchymal-stem-cells-derived-from

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Dit protocol beschrijft de isolatie van varkens-vetafkomstige stamcellen (pADSC) uit subcutaan vetweefsel met onderzoek van multipotentie. De multipotente pADSC worden gebruikt om processen van adipocytendifferentiatie te bepalen en transdifferentiatie in meerdere cellijnen van mesodermaal mesenchym of verdere lijnen van ectoderm en endoderm te bestuderen voor regeneratieve onderzoeken.

Isolatie en differentiatie van vetcellen afgeleide stamcellen uit Porcine Onderhuids vetweefsel

Dit artikel presenteert een eenvoudige en economische protocol voor het eenvoudig isolatie en zuivering van mesenchymale stamcellen uit Nieuw-Zeeland wit konijn gewrichtsvocht.

Magnetische-geactiveerde cel sorteren van strategieën om te isoleren en zuiveren van de synoviale vloeistof afkomstige mesenchymale stamcellen uit het Model van een konijn

Infrapatellaire vetkussen mesenchymale stamcellen (IFP-MSC's) kunnen gemakkelijk worden geïsoleerd uit de infrapatellaire vetschijf van het kniegewricht. Ze vermenigvuldigen zich goed in vitro, vormen CFU-F-kolonies en differentiëren in adipogene, chondrogene en osteogene afstammingslijnen. Hierin wordt de methodologie gegeven voor de isolatie, uitbreiding en differentiatie van IFP-MSC's van geitenstikselgewricht.

Isolatie, uitbreiding en differentiatie van mesenchymale stamcellen uit de infrapatellaire vetpad van de geitenstikkingsverbinding

De huidige studie biedt een aangepast protocol om synoviale macrofagen en fibroblasten te isoleren uit murine inflammatoire artritisweefsel.

Isolatie en kweek van primaire synoviale macrofagen en fibroblasten uit muizenartritisweefsel

Het vetweefsel is een uitstekende bron van mesenchymale stamcellen. Hier brengen we de stapsgewijze extractie, cultivatie en karakterisering van van vetweefsel afgeleide stamcellen (ADSC's) uit epididymaal vetweefsel van Zwitserse muizen.

Isolatie, in-vitro-expansie en karakterisering van mesenchymale stamcellen uit epididymaal vetweefsel van muizen

Mesenchymale stamcellen uit het beenmerg van de kaak hebben belangrijke functies bij diverse differentiatie, zelfvernieuwing en immuunmodulatie. Ze zijn naar voren gekomen als een cruciaal reservoir van voorlopercellen in gentherapie, weefselmanipulatie en regeneratieve geneeskunde. Hier presenteren we een unieke methode voor het isoleren van mesenchymale stamcellen van kaakbeenmerg bij ratten.

Techniek voor isolatie en kweek van mesenchymale stamcellen van rattenkaakbeenmerg

De isolatie van BAMBIhogeMFGE8hoge MSC's, een van de drie belangrijkste subgroepen die heterogene menselijke UC-MSC's vormen, is nuttig voor een volledig begrip van de kenmerken en functies van dit subtype voor de toekomstige toepassing ervan om de klinische werkzaamheid bij specifieke ziekten te verbeteren. Hier presenteren we een methode voor het sorteren van BAMBIhogeMFGE8hoge UC-MSC's.

Isolatie van menselijke BAMBIhogeMFGE8hoge navelstreng-afgeleide mesenchymale stromale cellen

De werkwijze beschreven isolatie en karakterisering van menselijke pulpa stamcellen (hDPSCs) door...

Isolatie, karakterisering en vergelijkende differentiatie van humane Dental Pulp stamcellen uit permanente tanden met behulp van twee verschillende methoden

Dit artikel beschrijft de bereiding van vers verkregen melanoomweefsel in primaire celculturen en hoe verontreinigingen van erytrocyten en fibroblasten uit de tumorcellen. Tot slot beschrijven we hoe...

Patiënt Derived Cell Cultuur en isolatie van CD133<sup&gt; +</sup&gt; Vermeende Cancer Stem Cells van Melanoom

Receptor tyrosine kinases worden ectopisch uitgedrukt in vele kanker en zijn geïdentificeerd als therapeutische doelwitten bij acute leukemie. Dit manuscript beschrijft een efficiënte strategie voor pre-klinische evaluatie van tyrosine kinase inhibitoren voor de behandeling van acute leukemie.

Pre-klinische evaluatie van tyrosinekinaseremmers voor de behandeling van acute leukemie

Leer een niet-invasieve methode om mesenchymale stamcellen te isoleren uit gewrichtsvloeistof en beenmerg van minivarkens. Dit protocol ondersteunt regeneratieve geneeskunde en immunomodulatieonderzoek.

Isolatie en Cellulaire fenotypering van mesenchymale stamcellen afkomstig van de gewrichtsvloeistof en beenmerg van minivarkens

Meer video's verkennen