Name: Tissue Engineering door Intrinsic Vascularisatie in een In Vivo Tissue Engineering Chamber (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-05-30T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 55 s
Description: Leer hoe je vasculair weefsel genereert met een arterioveneuze lus in een in vivo-kamer. Deze microchirurgische techniek ondersteunt orgaanregeneratie en weefselherstel.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door subsidies van NHMRC en Stafford Fox Medical Foundation. De auteurs erkennen de chirurgische hulp van Sue McKay, Liliana Pepe, Anna Deftereos en Amanda Rixon van de experimentele medische en chirurgische Unit, St. Vincent&#39;s Hospital, Melbourne. Ondersteuning wordt ook verstrekt door Ministerie van innovatie, industrie de Victoriaanse staat regering en de operationele infrastructuur Support Program voor Regionale Ontwikkeling.

De hier beschreven protocollen zijn goedgekeurd door de Animal Ethics Committee van St. Vincent&#39;s Hospital in Melbourne, Australië, en werden uitgevoerd onder strikte naleving van de Australian richtsnoeren van de Raad National Health en Medical Research. OPMERKING: tweekamer protocollen worden hieronder beschreven. De twee verschillende modellen en hun specifieke kamer ontwerpen zijn aangegeven in figuur 1. Kamer (1) is gemaakt van polycarbonaat (voor rat arterioveneuze lus kamermodel). Het is cilindrisch met een inwendige diameter van 13 mm en 4 mm. Een venster op een punt in de muur maakt onbelemmerde toegang voor de pedikel. In het tweede model (voor de rat doorstroming pedikel kamer model), wordt de kamer gemaakt van polyacryl en is rechthoekig (10 x 8 x 4 mm 3 inwendige afmetingen). Het heeft twee openingen 1,5 mm aan weerszijden aan de femorale slagader en ader geschikt aangezien zij de kamer overtreden. 1. Rat Arterioveneuze Loop Chamber Model (One Chamber per dier) NB: Voorafgaand aan het starten van de operatie, zorg ervoor dat alle instrumenten naar behoren zijn gesteriliseerd. Ook zorgen voor de instrumenten rust op steriele handdoeken en op een redelijke afstand van het chirurgische veld om besmetting tijdens de procedure te voorkomen. <ol><li> Voorbereiding van de Animal voor Heelkunde <ol><li> Gebruik ratten met een gewicht van ten minste 250 gram voor hun grote omvang van de schepen voor de oprichting van de arterioveneuze lus. </li><li> Verdoven het dier met 4% isofluraan inhalatie. Bevestigen voldoende diepte van de anesthesie door het beoordelen van ongevoeligheid tot teen-snuifje. Na verdoving, houdt het dier voldoende verdoofd gedurende de procedure met 2% isofluraan. </li><li> Plaats het dier in liggende positie op een verwarmingskussen en steriel smeermiddel op de ogen om uitdroging te voorkomen tijdens de operatie. </li><li> Met behulp van een elektrisch scheerapparaat, scheren beide liezen en verwijder haar met een stuk vochtig gaas. </li><li> Prep de chirurgische sites met chloorhexidine/ 70% ethanoloplossing en draperen het dier met steriele handdoeken. Dien één dosis Carprofen (5 mg / kg, subcutaan) als analgeticum. </li></ol></li><li> Harvest of lies Graft <ol><li> Met behulp van een # 15 blad, maak een 4 cm lange incisie aan de linker lies parallel aan het inguinale ligament. Dit onthult de lies vet pad. </li><li> Snijd door de vet pad langs de omtrek met een schaar maar laat ze op haar vaatsteel op basis van de epigastrische vaten. </li><li> Met behulp van micro-schaar, vrij de wazige bindweefsel verklevingen tussen de buikwand en de onderliggende femorale schepen. </li><li> Plaats een oprolmechanisme aan de buikwand en trek mediaal. Dit onthult de inguinale ligament en de gehele lengte van de femorale vaten. </li><li> Met behulp van micro tang en gebogen schaar ontleden de epigastrische ader en te isoleren uit de omliggende vet door het zachtjes te trekken en snijden. Deze geest werkt als een tuier de geconstrueerde lus. </li><li> usinG Micro pincet en gebogen micro schaar open de perivasculaire omhulsel met daarin de femorale schepen en zenuwen helemaal uit de lies ligament om zijn bifurcatie distaal van de epigastrische tak. </li><li> Met behulp van micro-tang, pak de lies door zijn adventitia en voorzichtig scheiden van de omliggende weefsels en bijbehorende slagader. Doe dit met micro pincet en gebogen ronde wees micro schaar door het weefsel uit elkaar te trekken en te snijden doorheen. OPMERKING: grijp nooit de gehele dikte van de aderwand als dit trauma zou kunnen veroorzaken aan de intima waardoor het gevoelig voor trombose. </li><li> Ligeer zijtakken gevonden tijdens de dissectie met 10/0 nylon hechtdraad of stollen ze met een bipolaire coagulator. </li><li> De femorale ader volledig vrij, ligeren zijn proximale en distale uiteinden met 4/0 zijden hechtdraden. Zorg ervoor dat een veneuze graft lengte ten minste 10 mm te verkrijgen en omvatten ongeveer 0,5 cm lengte van de epigastrische tak te gebruiken als scheerlijn kettingom de lus geopend in de kamer te houden. </li><li> Met behulp van micro tang en rechte micro schaar, knip de adventitia van de uiteinden van het transplantaat door zachtjes te trekken en snijden. Dit kan ook later worden gedaan, voordat microchirurgische anastomosen. </li><li> Spoel de ader graft met gehepariniseerde zoutoplossing (10 U / ml heparine) en laat het rusten in de oplossing. Sluit de wond met behulp van continu draaiende 4/0 zijden hechtdraad plus twee of drie extra eenvoudige onderbroken steken. </li></ol></li><li> Creatie van Arterioveneuze Loop en Implantatie van Chamber <ol><li> Herhaal de stappen 1.2.1 tot en met 1.2.4 in de exact dezelfde manier op het contralaterale ledemaat. </li><li> Met behulp van micro-tang, ontleden en te isoleren zowel de epigastrische slagader en ader van de omliggende vet pad te vormen. Doe dit door zachtjes te trekken van het weefsel uit de buurt van de vaten </li><li> Met behulp van micro-tang, pak de dij slagader door zijn adventitia en vrij uit de omliggende weefsels. Doe dit met micro pincet en gebogen round-puntige micro schaar door het weefsel elkaar te trekken en snijden doorheen. Afbinden of coaguleren haar zijtakken. </li><li> Afbinden de femorale slagader en ader distale tot de opkomst van de epigastrische vaartuigen die 4/0 zijden hechtdraad. </li><li> Plaats één klem proximaal op elk van de femorale slagader en ader. Met behulp van een scherpe rechte micro schaar, maken een schone dwarsrichting in elk vat distale gesneden om de opkomst van de epigastrische takken. Plaats een steriele plastic contrast achtergrond onder de schepen. </li><li> Spoel de schepen hevig met royale hoeveelheden gehepariniseerde zoutoplossing totdat al het bloed uit het lumen wordt verwijderd. </li><li> Breng de ader graft in het operatiegebied en verwijder alle overbodige adventitia van de uiteinden van de schepen &#39;, zoals per stap 1.2.10, indien nodig. </li><li> Voer beide microchirurgische anastomosen met 10/0 nylon hechtdraad. Anastomose het proximale uiteinde van de bypass aan de femorale ader en het distale uiteinde op de femorale slagader. Hierdoor kan het bloed te laten stromen fROM De arteriële de veneuze kant zonder verzet van de kleppen in de ader graft. OPMERKING: Zorg ervoor dat de femorale schepen en de ader graft rust in hun natuurlijke houding, zonder enige wendingen. </li><li> Controleer op lekkage bij beide anastomotische sites. Resolve kleine lekken, die er uitzien als niet-pulserende bloed uit de anastomose site, door het plaatsen van een klein stukje vet op de top en voorzichtig te comprimeren voor 5-10 min. Grotere pulserende lekken die het hele veld snel overspoelen zal extra hechtingen nodig. </li><li> Controleer doorgankelijkheid van de arterioveneuze lus. Gentle occlusie van de femorale slagader moet het krimpen terwijl hetzelfde in de femorale ader dient snel te vullen. </li><li> Bevestig de onderkant van de tissue engineering kamer onder arterioveneuze lus met laatstgenoemde rust in zijn natuurlijke positie zonder draaien of knikken. </li><li> Bevestig de basis van de kamer naar de lies ligament en de onderliggende spier fascia met 6/0 nylon hechtingen. </li><li> Plaats het deksel over debasis, zodat de femorale vaten voer de kamer door een inkeping (venster in de zijde van de kamer). Bij het sluiten van de klep, zorg ervoor dat het vangt de epigastrische takken, tussen de kamer basis en deksel, die fungeren als aanbinden om de arterioveneuze lus te houden in de juiste positie. </li><li> Sluit de wond met behulp van continu draaiende 4/0 zijden hechtdraad plus twee of drie extra eenvoudige onderbroken steken. </li><li> Laat het dier om te herstellen van narcose op een warming pad. </li><li> Laat de dieren niet onbeheerd achter te laten tot het voldoende bewustzijn heeft herwonnen om borstligging handhaven. Ook niet een dier dat een operatie heeft ondergaan om het gezelschap van andere dieren tot volledig hersteld terugkeren. 24 uur later, bestuurt een enkelvoudige dosis Carprofen (5 mg / kg, subcutaan) als analgeticum. </li><li> Behandel de wond met actuele antibiotische zalf voor 5 dagen. Als de wond wordt geopend, verdoven van het dier in stap 1.1.2 tot 1.1.5 en sluit de wond in 1,30,14. Controleer de gezondheid van dieren dagelijks. Inslapen het dier met een dodelijke dosis lethabarb intraperitoneale injectie (163 mg / kg in 0,25 ml van 23 G naald) indien het dier toont meerdere matige tekenen van inacitivity, slechte eetlust, gewichtsverlies en kleurverlies. </li></ol></li></ol> 2. Flow-through Pedicle Chamber (twee kamers per dier) <ol><li> Voorbereiding van de Animal voor Heelkunde <ol><li> Herhaal de stappen 1.1.1 tot 1.1.4. Twee kamers kunnen worden geïmplanteerd in beide lies gebieden van een rat. </li></ol></li><li> Isolatie van Femorale schepen en het inbrengen van de Kamer <ol><li> Herhaal de stappen 1.2.1 tot 1.2.8. </li><li> Met zowel slagader en ader volledig bevrijd van de omliggende weefsels en hun filialen afgebonden, brengen de kamer in het operatiegebied. </li><li> Plaats elk van de intacte femorale schepen op de overeenkomstige gleuf van de kamer basis om ervoor te zorgen dat er geen wendingen of knikken. </li><li> Sluit de kamer door attaching het deksel op de basis. Sluiting van de wond met een continue draaiende 4/0 zijden hechtdraad plus twee à drie eenvoudige onderbroken hechtingen en dat de dieren herstellen zoals eerder beschreven. </li></ol></li></ol> 3. Oogst van Chambers en Tissue Processing <ol><li> Zodra het experiment tijdstippen (4-6 weken na implantatie) worden bereikt, verdoven het dier als in stap 1.1.2 en herhaal stappen 1.1.3 tot 1.1.5. </li><li> Open de wond met een # 15 blad en doorsnijden van de weefsels met een schaar tot de kamer geheel is blootgesteld. </li><li> Expose de femorale vaten proximale naar het construct en test voor vasculaire doorgankelijkheid: voorzichtig af te sluiten van het schip met twee microforceps, dan is melk het bloed in een distale richting en tenslotte de proximale tang los. Als het vat vult met bloed opnieuw, dit bevestigt doorgankelijkheid. Ligeren de femorale vaten proximaal bij de arterioveneuze lus en zowel proximaal als distaal bij The doorstroom configuratie, en verwijder de kamers met die weefsel en bloc. </li><li> Na afloop van het experiment inslapen het dier met een dodelijke dosis lethobarb intraperitoneale injectie (163 mg / kg in 0,25 ml van 23 G naald). </li><li> Fix weefsels in 4% paraformaldehyde bij kamertemperatuur gedurende 24 uur. Verdeel weefsels in meerdere dwarsprofielen (1-2 mm dik) en insluiten in paraffine of optimale snij-temperatuur compound voor paraffine secties (5 pm) of bevroren secties (10 pm), respectievelijk. 3,4,8,17,22, 24 </li><li> Routinematige histologische kleuring zoals hematoxyline en eosine de algemene morfologie van weefsel te onderzoeken. Voer immunohistochemische kleuring met een specifiek antilichaam tegen celtype van belang, 3,4,8,17,22,24,29 identificeren bijvoorbeeld troponine T immunokleuring voor hartspiercellen. </li></ol>

<ol><li>Spiliopoulos, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+status+of+mechanical+circulatory+support%3A+A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiol+Res+Pract%22%5BJournal%5D)">Current status of mechanical circulatory support: A systematic review.</a> Cardiol Res Pract. , 574198(2012).</li>
<li>Hsu, P. L., Parker, J., Egger, C., Autschbach, R., Schmitz-Rode, T., Steinseifer, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+circulatory+support+for+right+heart+failure%3A+Current+technology+and+future+outlook%5BTitle%5D)+AND+%22Artif+Organs%22%5BJournal%5D)">Mechanical circulatory support for right heart failure: Current technology and future outlook.</a> Artif Organs. 36 (4), 332-347 (2012).</li>
<li>Lokmic, Z., Stillaert, F., Morrison, W. A., Thompson, E. W., Mitchell, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+arteriovenous+loop+in+a+protected+space+generates+a+permanent%2C+highly+vascular%2C+tissue-engineered+construct%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">An arteriovenous loop in a protected space generates a permanent, highly vascular, tissue-engineered construct.</a> FASEB J. 21 (2), 511-522 (2007).</li>
<li>Morritt, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+tissue+engineering+in+an+in+vivo+vascularized+chamber%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Cardiac tissue engineering in an in vivo vascularized chamber.</a> Circulation. 115 (3), 353-360 (2007).</li>
<li>Tanaka, Y., Tsutsumi, A., Crowe, D. M., Tajima, S., Morrison, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+an+autologous+tissue+%28matrix%29+flap+by+combining+an+arteriovenous+shunt+loop+with+artificial+skin+in+rats%3A+preliminary+report%5BTitle%5D)+AND+%22B+J+Plast+Surg%22%5BJournal%5D)">Generation of an autologous tissue (matrix) flap by combining an arteriovenous shunt loop with artificial skin in rats: preliminary report.</a> B J Plast Surg. 53 (1), 51-57 (2000).</li>
<li>Cronin, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+murine+model+of+spontaneous+autologous+tissue+engineering%2C+combining+an+arteriovenous+pedicle+with+matrix+materials%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">New murine model of spontaneous autologous tissue engineering, combining an arteriovenous pedicle with matrix materials.</a> Plast Reconstr Surg. 113 (1), 260-269 (2004).</li>
<li>Forster, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+prevascularized+tissue+engineering+chamber+supports+growth+and+function+of+islets+and+progenitor+cells+in+diabetic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Islets%22%5BJournal%5D)">A prevascularized tissue engineering chamber supports growth and function of islets and progenitor cells in diabetic mice.</a> Islets. 3 (5), 271-283 (2011).</li>
<li>Choi, Y. S., Matsuda, K., Dusting, G. J., Morrison, W. A., Dilley, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+cardiac+tissue+in+vivo+from+human+adipose-derived+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Engineering cardiac tissue in vivo from human adipose-derived stem cells.</a> Biomaterials. 31 (8), 2236-2242 (2010).</li>
<li>Jeyaraj, R., G, N., Kirby, G., Rajadas, J., Mosahebi, A., Seifalian, A. M., Tan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascularisation+in+regenerative+therapeutics+and+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Mater+Sci+Eng+C+Mater+Biol+Appl%22%5BJournal%5D)">Vascularisation in regenerative therapeutics and surgery.</a> Mater Sci Eng C Mater Biol Appl. 54, 225-238 (2015).</li>
<li>Dew, L., Macneil, S., Chong, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascularization+strategies+for+tissue+engineers%5BTitle%5D)+AND+%22Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Vascularization strategies for tissue engineers.</a> Regen Med. 10 (2), 211-224 (2015).</li>
<li>Weigand, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acceleration+of+vascularized+bone+tissue-engineered+constructs+in+a+large+animal+model+combining+intrinsic+and+extrinsic+vascularization%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+A%22%5BJournal%5D)">Acceleration of vascularized bone tissue-engineered constructs in a large animal model combining intrinsic and extrinsic vascularization.</a> Tissue Eng Part A. 21 (9-10), 1680-1694 (2015).</li>
<li>Vacanti, J. P., Langer, R., Upton, J., Marler, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+cells+in+matrices+for+tissue+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Drug+Deliv+Rev%22%5BJournal%5D)">Transplantation of cells in matrices for tissue regeneration.</a> Adv Drug Deliv Rev. 33 (1-2), 165-182 (1998).</li>
<li>Beahm, E. K., Walton, R. L., Patrick, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+in+adipose+tissue+construct+development%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Plast+Surg%22%5BJournal%5D)">Progress in adipose tissue construct development.</a> Clin Plast Surg. 30 (4), 547-558 (2003).</li>
<li>Vunjak-Novakovic, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Challenges+in+cardiac+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+B+Rev%22%5BJournal%5D)">Challenges in cardiac tissue engineering.</a> Tissue Eng Part B Rev. 16 (2), 169-187 (2010).</li>
<li>Garcia, J. R., Garcia, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomaterial-mediated+strategies+targeting+vascularization+for+bone+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Deliv+Transl+Res%22%5BJournal%5D)">Biomaterial-mediated strategies targeting vascularization for bone repair.</a> Drug Deliv Transl Res. , (2015).</li>
<li>Forster, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expansion+and+hepatocytic+differentiation+of+liver+progenitor+cells+in+vivo+using+a+vascularized+tissue+engineering+chamber+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+C+Methods%22%5BJournal%5D)">Expansion and hepatocytic differentiation of liver progenitor cells in vivo using a vascularized tissue engineering chamber in mice.</a> Tissue Eng Part C Methods. 17 (3), 359-366 (2011).</li>
<li>Tilkorn, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implanted+myoblast+survival+is+dependent+on+the+degree+of+vascularization+in+a+novel+delayed+implantation%2Fprevascularization+tissue+engineering+model%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+A%22%5BJournal%5D)">Implanted myoblast survival is dependent on the degree of vascularization in a novel delayed implantation/prevascularization tissue engineering model.</a> Tissue Eng Part A. 16 (1), 165-178 (2010).</li>
<li>Chang, Q., Lu, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+strategy+for+creating+a+large+amount+of+engineered+fat+tissue+with+an+axial+vascular+pedicle+and+a+prefabricated+scaffold%5BTitle%5D)+AND+%22Med+hypotheses%22%5BJournal%5D)">A novel strategy for creating a large amount of engineered fat tissue with an axial vascular pedicle and a prefabricated scaffold.</a> Med hypotheses. 79 (2), 267-270 (2012).</li>
<li>Walton, R. L., Beahm, E. K., Wu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((De+novo+adipose+formation+in+a+vascularized+engineered+construct%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurg%22%5BJournal%5D)">De novo adipose formation in a vascularized engineered construct.</a> Microsurg. 24 (5), 378-384 (2004).</li>
<li>Debels, H., Gerrand, Y. W., Poon, C. J., Abberton, K. M., Morrison, W. A., Mitchell, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+adipogenic+gel+for+surgical+reconstruction+of+the+subcutaneous+fat+layer+in+a+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Tissue+Eng+Regen+Med%22%5BJournal%5D)">An adipogenic gel for surgical reconstruction of the subcutaneous fat layer in a rat model.</a> J Tissue Eng Regen Med. , (2015).</li>
<li>Lokmic, Z., Mitchell, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+the+microcirculation%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+B+Rev%22%5BJournal%5D)">Engineering the microcirculation.</a> Tissue Eng Part B Rev. 14 (1), 87-103 (2008).</li>
<li>Yap, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+liver+progenitor+cell+survival+and+differentiation+in+vivo+by+spheroid+implantation+in+a+vascularized+tissue+engineering+chamber%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Enhanced liver progenitor cell survival and differentiation in vivo by spheroid implantation in a vascularized tissue engineering chamber.</a> Biomaterials. 34 (16), 3992-4001 (2013).</li>
<li>Findlay, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-engineered+breast+reconstruction%3A+Bridging+the+gap+toward+large-volume+tissue+engineering+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">Tissue-engineered breast reconstruction: Bridging the gap toward large-volume tissue engineering in humans.</a> Plast Reconstr Surg. 128 (6), 1206-1215 (2011).</li>
<li>Tee, R., Morrison, W. A., Dusting, G. J., Liu, G. S., Choi, Y. S., Hsiao, S. T., Dilley, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+engineered+cardiac+muscle+flaps+in+syngeneic+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+A%22%5BJournal%5D)">Transplantation of engineered cardiac muscle flaps in syngeneic rats.</a> Tissue Eng Part A. 18 (19-20), 1992-1999 (2012).</li>
<li>Dolderer, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+stability+of+adipose+tissue+generated+from+a+vascularized+pedicled+fat+flap+inside+a+chamber%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">Long-term stability of adipose tissue generated from a vascularized pedicled fat flap inside a chamber.</a> Plast Reconstr Surg. 127 (6), 2283-2292 (2011).</li>
<li>Sekine, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cell+coculture+within+tissue-engineered+cardiomyocyte+sheets+enhances+neovascularization+and+improves+cardiac+function+of+ischemic+hearts%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Endothelial cell coculture within tissue-engineered cardiomyocyte sheets enhances neovascularization and improves cardiac function of ischemic hearts.</a> Circulation. 118, (14 Suppl) 145-152 (2008).</li>
<li>Ting, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+adipogenic+potential+of+various+extracellular+matrices+under+the+influence+of+an+angiogenic+growth+factor+combination+in+a+mouse+tissue+engineering+chamber%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">The adipogenic potential of various extracellular matrices under the influence of an angiogenic growth factor combination in a mouse tissue engineering chamber.</a> Acta Biomater. 10 (5), 1907-1918 (2014).</li>
<li>Zhan, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-synthesized+extracellular+matrix+contributes+to+mature+adipose+tissue+regeneration+in+a+tissue+engineering+chamber%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+Regen%22%5BJournal%5D)">Self-synthesized extracellular matrix contributes to mature adipose tissue regeneration in a tissue engineering chamber.</a> Wound Repair Regen. 23 (3), 443-452 (2015).</li>
<li>Messina, A., Bortolotto, S. K., Cassell, O. C., Kelly, J., Abberton, K. M., Morrison, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+a+vascularized+organoid+using+skeletal+muscle+as+the+inductive+source%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Generation of a vascularized organoid using skeletal muscle as the inductive source.</a> FASEB J. 19 (11), 1570-1572 (2005).</li>
<li>Lim, S. Y., Hernández, D., Dusting, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growing+vascularized+heart+tissue+from+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cardiovasc+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Growing vascularized heart tissue from stem cells.</a> J Cardiovasc Pharmacol. 62 (2), 122-129 (2013).</li>
<li>Poon, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+an+adipogenic+hydrogel+from+subcutaneous+adipose+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">Preparation of an adipogenic hydrogel from subcutaneous adipose tissue.</a> Acta Biomater. 9 (3), 5609-5620 (2013).</li>
<li>Dilley, R. J., Morrison, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascularisation+to+improve+translational+potential+of+tissue+engineering+systems+for+cardiac+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Vascularisation to improve translational potential of tissue engineering systems for cardiac repair.</a> Int J Biochem Cell Biol. 56, 38-46 (2014).</li>
<li>Lesman, A., Koffler, J., Atlas, R., Blinder, Y. J., Kam, Z., Levenberg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+vessel-like+networks+within+multicellular+fibrin-based+constructs%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Engineering vessel-like networks within multicellular fibrin-based constructs.</a> Biomaterials. 32 (31), 7856-7869 (2011).</li>
<li>Hussey, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seeding+of+pancreatic+islets+into+prevascularized+tissue+engineering+chambers%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+A%22%5BJournal%5D)">Seeding of pancreatic islets into prevascularized tissue engineering chambers.</a> Tissue Eng Part A. 15 (12), 3823-3833 (2009).</li>
<li>Chen, X., Aledia, A. S., Popson, S. A., Him, L., Hughes, C. C., George, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+anastomosis+of+endothelial+progenitor+cell-derived+vessels+with+host+vasculature+is+promoted+by+a+high+density+of+cotransplanted+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+A%22%5BJournal%5D)">Rapid anastomosis of endothelial progenitor cell-derived vessels with host vasculature is promoted by a high density of cotransplanted fibroblasts.</a> Tissue Eng Part A. 16 (2), 585-594 (2010).</li>
<li>Lin, R. Z., Melero-Martin, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibroblast+growth+factor-2+facilitates+rapid+anastomosis+formation+between+bioengineered+human+vascular+networks+and+living+vasculature%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Fibroblast growth factor-2 facilitates rapid anastomosis formation between bioengineered human vascular networks and living vasculature.</a> Methods. 56 (3), 440-451 (2012).</li>
<li>Dolderer, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+large+volume+adipose+tissue+generation+from+a+vascularized+pedicled+fat+flap+inside+a+chamber+space%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng%22%5BJournal%5D)">Spontaneous large volume adipose tissue generation from a vascularized pedicled fat flap inside a chamber space.</a> Tissue Eng. 13 (4), 673-681 (2007).</li>
<li>Wei, F. C., Lin Tay, S. K. Principles and techniques of microvascular surgery. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWei%2C+FC+%22Plastic+Surgery.+Volume+1%22">Plastic Surgery. Volume 1</a>. Neligan, P. C., Gurtner, G. C. , Elsevier. Chapter 26 587-620 (2013).</li>
<li>Sekine, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+fabrication+of+functional+three-dimensional+tissues+with+perfusable+blood+vessels%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.Comm%22%5BJournal%5D)">In vitro fabrication of functional three-dimensional tissues with perfusable blood vessels.</a> Nat.Comm. 4 (1399), 1-10 (2013).</li>
<li>Lim, S. Y., Sivakumaran, P., Crombie, D. E., Dusting, G. J., Pébay, A., Dilley, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trichostatin+A+enhances+differentiation+of+human+induced+pluripotent+stem+cells+to+cardiogenic+cells+for+cardiac+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Trichostatin A enhances differentiation of human induced pluripotent stem cells to cardiogenic cells for cardiac tissue engineering.</a> Stem Cells Transl Med. 2 (9), 715-725 (2013).</li>
<li>Lim, S. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+tissue+engineering+chamber+supports+human+induced+pluripotent+stem+cell+survival+and+rapid+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">In vivo tissue engineering chamber supports human induced pluripotent stem cell survival and rapid differentiation.</a> Biochem Biophys Res Commun. 422 (1), 75-79 (2012).</li>
<li>Piao, Y., Hung, S. S., Lim, S. Y., Wong, R. C., Ko, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+generation+of+integration-free+human+induced+pluripotent+stem+cells+from+keratinocytes+by+simple+transfection+of+episomal+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Efficient generation of integration-free human induced pluripotent stem cells from keratinocytes by simple transfection of episomal vectors.</a> Stem Cells Transl Med. 3 (7), 787-791 (2014).</li>
</ol>

De auteurs verklaren geen concurrerende belangen.

Engineering van de microcirculatie wordt momenteel hoofdzakelijk wordt onderzocht door middel van twee benaderingen. De eerste omvat de ontwikkeling van een sterk onderling verbonden vasculaire netwerk binnen het construct in vitro zodat wanneer geïmplanteerd, capillairen van de gastheer vaatbed verbinden met die van de getransplanteerde construeren door een proces genaamd inoculatie, waardoor de levering van voedingsstoffen niet alleen de omtrek maar ook de kern. 21,32,33 Dit wordt pre-vascularisati...

Vervaardigen van functionele doorbloed weefsel met behulp van een tissue engineering aanpak is een opkomende paradigma in de regeneratieve geneeskunde. 1,2 Veel benaderingen van nieuwe en gezond weefsel ingenieur voor de vervanging van beschadigd weefsel of defecte organen zijn ontwikkeld, 3-6 experimenteel in kleine dierlijke modellen met veelbelovende klinische potentieel. 7,8 Toch vascularisatie blijft een van de grote uitdagingen voor de tissue engineering beperken van de mogelijkheden om weefsels van klinisch relevante omvang groeien. 9 De huidige aanpak om weefsel vascularizeren volgen ofwel een extrinsieke route waar nieuwe schepen groeien vanuit de ontvanger vasculaire bed en binnen te dringen in de hele geïmplanteerde weefsel construeert 10 of een intrinsieke vascularisatie route, waar het vaatstelsel groeit en breidt uit in harmonie met de nieuw te ontwikkelen weefsel. 11 De extrinsieke benadering traditioneel omvat zaaien cellen op een steigerin vitro en implanteren van de volledige construct in het levende dier met de verwachting dat voedingsstoffen, eerder door kweekmedia geleverd, wordt aangeleverd door circulatie. 12,13 Het concept is simpel vasculaire ingroei te langzaam en slechts zeer dunne implantaten (&lt; 1-2 mm dik) zal levensvatbaar blijven. Verschaffen van voedingsstoffen en zuurstof door middel van een voldoende snelle en vascularisatie is de kern van elke succesvolle pogingen om complexere en grotere weefselengineering substituten zoals bot, spier, vet en vaste organen groeien. 14,15 Intrinsieke vascularisatie sector stelt grotere constructies te ontwikkelen door progressieve groei van weefsel in verhouding met zijn uitbreiden bloedtoevoer. Een ontwerp is de in vivo implantatie in een kamer van een vaatsteel met of zonder cellen geënte scaffold. 5,6 Dit heeft de weg naar nieuwe procedures voor het genereren van dikkere intrinsiek gevasculariseerde weefsels vrijgemaakt. 16,17 &lt;/ P&gt; Recenter hebben strategieën ontwikkeld om vooraf vasculariseren weefseltransplantaten, vóór implantatie. Deze opgenomen bloedvat netwerken zijn erop gericht om te doen vergroeien met de ontvangende schepen op implantatie waardoor de snelle levering van een compleet bloedtoevoer naar de overleving van alle onderdelen van een getransplanteerd dikke weefsel graft te verbeteren. 18 We zijn voorlopers een in vivo doorbloed tissue engineering model in kleine dieren die een subcutaan geïmplanteerd halfharde omsloten ruimte met daarin een perfusie vaatsteel en-cel met biomaterialen gaat. De kamer creëert een ischemische omgeving die angiogene ontspruit uit de geïmplanteerde vaten stimuleert. 3 De vaatsteel kan ofwel een gereconstrueerd arterioveneuze lus of een intacte doorstroming slagader en ader zijn. 3-6,19 Deze vaatsteel spruiten een goed functionerende en uitgebreide arterio -capillary-veneuze netwerk dat verbindt aan beide arteriole en veneuze eindigt met de vaatsteel. 3,20 Bovendien, de omliggende holle hulpkamer beschermt de ontwikkeling van weefsel van potentieel vervormen mechanische krachten en verlengt de ischemische drive om vascularisatie te verbeteren. 3,21,22 Als het schip uitloper eenvoudig in is geïmplanteerd normaal weefsel en niet in de beschermde ruimte van de kamer, angiogenese houdt langs dezelfde tijdlijn als een normale wond en geen nieuw weefsel ophopen rond de pedikel. Onderzoekers hebben deze in vivo configuratie gebruikt om driedimensionale functionele gevasculariseerde weefselconstructen met ondersteunende vasculatuur en klinisch relevante afmetingen produceren. 4,23 Voorts gevasculariseerde de gemanipuleerde weefselconstructen met intacte vaatsteel kunnen worden geoogst voor latere transplantatie in de beschadigde plaats . 24,25 Een klinisch haalbaar scenario zou zijn het creëren van de kamer bij de definitieve locatie voor de wederopbouw such de borst. Aldus zou het de novo tissue engineering aanpak klinische potentie om een nieuwe bron van functionele doelweefsel voor reconstructieve chirurgie hebben. 26-28 Het volgende protocol wordt een algemene handleiding een in vivo gevasculariseerde weefselmanipulatie kamer construct in de rat, die kunnen worden aangepast in verschillende diermodellen en toegepast om de complexe processen van angiogenese, matrixproductie, en cellulaire migratie en differentiatie te onderzoeken.

<table><tbody><tr><td>15-blad scalpel</td><td>Braun</td><td>BB515</td><td></td></tr><tr><td>1 Getande Adson-pincet</td><td>Braun</td><td>BD527R</td><td></td></tr><tr><td>1 Naaldvoerder</td><td>Braun</td><td>BM201R</td><td></td></tr><tr><td>1 Bipolaire coagulator&amp;nbsp;</td><td>Braun</td><td>US335</td><td></td></tr><tr><td>1 Micronaaldhouder B-15-8.3</td><td>S &amp;amp; T</td><td>00763</td><td></td></tr><tr><td>1 Micro-dilatatietang D-5a.2</td><td>S &amp;amp; T</td><td>00125</td><td></td></tr><tr><td>1 Micro-juwelierspincet JF-5</td><td>S &amp;amp; T</td><td>00108</td><td></td></tr><tr><td>1 Microschaar - recht SAS-11</td><td>S &amp;amp; T</td><td>00098</td><td></td></tr><tr><td>1 Microschaar - gebogen SDC-11</td><td>S &amp;amp; T</td><td>00090</td><td></td></tr><tr><td>2 enkele klemmen B-3</td><td>S &amp;amp; T</td><td>00400</td><td></td></tr><tr><td>2 10/0 nylon hechtdraad</td><td>S &amp;amp; T</td><td>03199</td><td></td></tr><tr><td>1 nylon hechtdraad 6/0</td><td>Braun</td><td>G2095469</td><td></td></tr><tr><td>2 4/0 zijden hechtingen</td><td>Braun</td><td>C0760145</td><td></td></tr><tr><td>Xylocaïne 1%</td><td>Dealmed</td><td>150733</td><td>10 mg/ml</td></tr><tr><td>Natriumheparine</td><td>Dealmed</td><td>272301</td><td>5.000 IE/ml</td></tr><tr><td>Ringerlactaat</td><td>Baxter</td><td>JB2323</td><td>500 ml</td></tr><tr><td>1 koepelvormige kamer voor weefselkweek</td><td>op maat gemaakt</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 flow-through kamer</td><td>op maat gemaakt</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lectine I, Griffonia simplicifolia&amp;nbsp;</td><td>Vector Laboratories</td><td>B-1105</td><td>1.67 &amp;mu;g/ml</td></tr><tr><td>Troponine T-antilichaam</td><td>Abcam</td><td>Ab8295</td><td>4 &amp;mu;g/ml</td></tr><tr><td>Mensspecifiek Ku80-antilichaam</td><td>Abcam</td><td>Ab80592</td><td>0.06 &amp;mu;g/ml</td></tr><tr><td>Desmine-antilichaam</td><td>Dako</td><td>M0760</td><td>2.55 &amp;mu;g/ml</td></tr><tr><td>Cell Tracker CM-DiI-kleurstof</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>C-7000</td><td>3 mg/10&lt;sup&gt;6&lt;/sup&gt; cellen</td></tr><tr><td>Lethabarb (natriumpentobarbital)*</td><td><a href="www.virbac.com.au" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Virbac Animal Health</a></td><td>LETHA450</td><td>325 mg/ml</td></tr><tr><td>Flexibel warmtekussen</td><td><a href="http://www.redzoneheating.com.au" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Redzone-verwarming</a></td><td>RZ/Medium</td><td></td></tr></tbody></table>

tissue engineering door intrinsic vascularisatie in een<em&gt; in vivo</em&gt; tissue engineering chamber

Tissue Engineering by Intrinsic Vascularization in an In Vivo Tissue Engineering Chamber

In reconstructieve chirurgie, is een klinische behoefte aan een alternatief voor de huidige methoden van autologe reconstructie die ingewikkeld en duur en handel een defect voor een ander zijn. Tissue engineering houdt de belofte om deze toenemende vraag te pakken. Echter, de meeste tissue engineering strategieën falen om een ​​stabiele en functionele weefsel vervangers vanwege de slechte vascularisatie te genereren. Dit artikel richt zich op een in vivo tissue engineering kamer model van de intrinsieke vascularisatie waarbij een perfusie slagader en een ader ofwel als een arterioveneuze lus of een flow-through uitloper configuratie is gericht in een beschermde holle kamer. In deze kamer-gebaseerde systeem optreedt angiogene ontspruit uit de arterioveneuze schepen en dit systeem trekt ischemische en inflammatoire gedreven endogeen celmigratie die geleidelijk vult de kamer ruimte met fibro-vasculair weefsel. Exogene cel / matrix implantatie ten tijde van de kamer bouw verbetert cel survival en bepaalt specificiteit van de gemanipuleerde weefsels die zich ontwikkelen. Onze studies hebben aangetoond dat deze kamer model succesvol genereren verschillende weefsels zoals vet, hartspier, lever en anderen. Echter, modificaties en verfijningen moeten doelweefsel vorming consistent en reproduceerbaar te waarborgen. Dit artikel beschrijft een gestandaardiseerd protocol voor de productie van twee verschillende gevasculariseerde weefselmanipulatie kamermodellen in vivo.

De microchirurgische creatie van tissue engineering kamers werd uitgevoerd zoals beschreven in het protocol hierboven. Weefsels gegenereerd in de kamers kunnen histologisch worden onderzocht beschrijven protocol stap 3. De diverse weefseltypen zijn met succes geconstrueerd met behulp van de in vivo gevasculariseerde kamer (figuur 2). Deze omvatten hartweefsel neonatale cardiomyocyten van de rat (Figuur 2A), spierweefsel rat skeletmyoblasten <str...

Dit is een richtlijn voor het construeren van in vivo vasculair weefsel met behulp van een microchirurgische arterioveneuze lus of een doorstromende pedikkelconfiguratie binnen een weefselengineeringkamer. De gegenereerde vasculaire weefsels kunnen worden gebruikt voor orgaanregeneratie en vervanging van weefselderven, evenals voor medicijntesten en ziektemodellering.

Tissue Engineering door Intrinsic Vascularisatie in een<em&gt; In Vivo</em&gt; Tissue Engineering Chamber

In reconstructive surgery, there is a clinical need for an alternative to the current methods of autologous reconstruction which are complex, costly and ...

Het algemene doel van deze procedure is het creëren van een ruimte waarin weefsel kan groeien en uitbreiden gelijktijdig met de ontwikkeling van een robuuste bloedvoorziening, wat uiteindelijk leidt tot de generatie van een gevasculariseerd, groot, driedimensionaal weefselblok. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van cruciale vragen in de engineering van gevasculariseerd weefsel voor reconstructieve doeleinden, alsook voor orgaanvervanging en -herstel. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het nieuw gegenereerde weefsel intrinsiek wordt voorzien door zijn eigen vasculair netwerk, zonder afhankelijk te zijn van diffusie vanuit de omgeving voor overleving.De procedure wordt gedemonstreerd door Sue McKay en Liliana Pepe. Anestheseer een rat met een gewicht van ten minste 250 gram en beoordeel de diepte van de anesthesie met een teenknijptest. Als de rat geen reactie vertoont, houdt u de sedatie gedurende de gehele procedure in stand met 2% isoflurane.Breng vervolgens epsomongzalf aan op de ogen. Scheer daarna de liezen van de rat in rugligging met elektrische scheermachines en verwijder de haren met vochtig gaas. Reinig vervolgens de chirurgische plaatsen met een chloorhexidine-oplossing met 70% ethanol.Bedek het dier ten slotte met steriele handdoeken en begin met de operatie. Maak met een mesje nr. 15 een vier centimeter lange huidincisie in de linkerlies, parallel aan het ligamentum inguinale. Snijd vervolgens met een schaar rondom door het blootgelegde inguinale vetkussen, waarbij dit verbonden blijft met de vasculaire pedikel op basis van de epigastrische vaten.Maak nu met microschaartjes de vliesachtige bindweefseladhesies tussen de buikwand en de onderliggende femorale vaten los. Plaats vervolgens een retractor op de buikwand en trek deze mediaal om het ligamentum inguinale en de gehele lengte van de femorale vaten bloot te leggen. Disseceer daarna met micro-pincetten en gebogen scharen de vena epigastrica en isoleer deze van het omringende vet.Deze ader zal dienen als bevestigingspunt. Ga verder door de perivasculaire schede te openen waarin de femorale vaten en de zenuw zich bevinden. Open deze volledig, vanaf het ligamentum inguinale tot aan de bifurcatie distaal van de epigastrische aftakking.Op dit punt, en gedurende de gehele procedure, is een voorzichtige behandeling van de femorale vaten van cruciaal belang. Beschadiging hiervan kan leiden tot trombose en het mislukken van het gehele experiment. Pak vervolgens met micropincetten de vena femoralis vast bij de adventitia en scheid deze voorzichtig van het omringende weefsel en de bijbehorende arterie.Pak tijdens deze stap niet de volledige dikte van de vene-wand vast, omdat dit trauma aan de intima kan veroorzaken, waardoor de vene gevoelig wordt voor trombose. Ligeer tijdens deze stap tevens de zijtakken met 10-0 nylonhechtdraad, of coageer deze met een bipolaire coagulator. Wanneer de vena femoralis volledig is vrijgelegd, wordt deze proximaal en distaal geligeerd met 4-0 zijdehechtdraad om een vene-transplantaat van ten minste 10 millimeters lengte te verkrijgen, inclusief ongeveer een halve centimeter van de epigastrische tak.De tak fungeert als een spankabel om de lus in de kamer open te houden. Trim vervolgens de adventitia van de uiteinden van het transplantaat. Indien nodig kan deze stap worden uitgesteld tot vlak voor de microchirurgische anastomosen.Voltooi de preparatie van het veneuze transplantaat door het door te spoelen met hepariniseerde zoutoplossing en het te laten rusten terwijl het gevuld blijft met hepariniseerde zoutoplossing. Sluit vervolgens de wond met een continue 4-0 zijden hechting en twee of drie aanvullende enkelvoudige onderbroken hechtingen. Begin hiermee door het ligamentum inguinale en de gehele lengte van het femorale vat van het contralaterale ledemaat bloot te leggen, zoals eerder gedemonstreerd.Disseceer en isoleer vervolgens met micro-pincetten zowel de arteria epigastrica als de vena epigastrica van het omringende vetkussen. Wees voorzichtig bij het wegtrekken van het weefsel van de vaten. Ga verder door de arteria femoralis bij de adventitia op te pakken en deze te bevrijden van het omringende weefsel.Ligeer of coáguleer in dit proces de zijtakken van de slagader. Plaats vervolgens een klem proximaal op zowel de femorale arterie als de vene. Ligeer nu, met behulp van 4-0 zijden hechtdraad, de femorale arterie en vene distaal van de uitmonding van de epigastrische vaten.Plaats nu een steriele plastic contrastachtergrond onder de vaten en gebruik een scherpe, rechte microschaar om elk vat transversaal door te snijden. Spoel de vaten na het doorsnijden krachtig door met royale hoeveelheden gehepariniseerde zoutoplossing totdat al het bloed uit het lumen is verwijderd. Breng vervolgens het vene-transplantaat in het operatieveld.Positioneer het veneuze transplantaat zodanig dat het proximale uiteinde van het transplantaat gereed is om te worden geanastomoseerd met de ontvangende vena femoralis, en het distale uiteinde met de ontvangende arteria femoralis. Hierdoor kan het bloed van de arteriële naar de veneuze zijde stromen zonder weerstand van de kleppen in het veneuze transplantaat. Zorg ervoor dat de femorale vaten en het veneuze transplantaat in hun natuurlijke positie rusten zonder enige draaiing.Voer aan beide zijden een chirurgische anastomose uit met 10-0 nylon hechtdraad. Een goede en atraumatische microschirurgische anastomose is essentieel. Beschadiging van de intima van het vat, uitdroging van de vaten of onjuist geplaatste hechtingen maken de anastomoseplaats gevoelig voor trombusvorming.Controleer vervolgens beide anastomoseplaatsen op lekken. Kleine lekken, die eruitzien als niet-pulserend bloed dat uit de anastomoseplaats komt, kunnen worden verholpen door een klein stukje vet of een spons erop te plaatsen en dit gedurende vijf tot 10 minuten zachtjes samen te drukken. Grotere pulserende lekken die het gehele veld snel vullen, vereisen aanvullende hechtingen.Controleer vervolgens de doorgankelijkheid van de arterioveneuze lus. Voorzichtige occlusie van de arteria femoralis zou ervoor moeten zorgen dat deze inkrimpt. Omgekeerd zou occlusie van de vena femoralis de lus moeten doen opzwellen.Plaats nu de basis van de tissue engineering-kamer onder de arterioveneuze lus. Zorg ervoor dat de lus in zijn natuurlijke positie rust, zonder verdraaiingen of knikken. Zet vervolgens de basis van de kamer met 6-0 nylon hechtingen vast aan het ligamentum inguinale en de onderliggende spierfascia.Plaats vervolgens het deksel over de basis van de kamer. Knijp de epigastrische takken onder het deksel samen om de lus op zijn plaats te houden. Sluit daarna de wond met een continue lopende 4-0 zijden hechting, aangevuld met twee of drie extra enkelvoudige onderbroken hechtingen.Laat het dier tot slot in een individuele kooi herstellen van de anesthesie en dien subcutaan een enkele dosis carprofen toe als analgeticum. Bereid het dier voor op de operatie zoals voorheen. Twee kamers kunnen in één rat worden geïmplanteerd, één in elke lies.Isoleer vervolgens het femorale vat zoals eerder beschreven. Wanneer zowel de slagader als de ader volledig zijn vrijgemaakt van het omringende weefsel en hun zijtakken zijn afgebonden, brengt u de kamer in het operatieveld. Plaats vervolgens elk van de intacte femorale vaten in de overeenkomstige sleuven van de bodem van de kamer.Zorg ervoor dat geen van beide gedraaid of geknikt is. Sluit vervolgens de kamer door het deksel aan de basis te bevestigen. Sluit daarna de wond en laat het dier herstellen zoals eerder beschreven.De microsurgische creatie van tissue engineering-kamers werd uitgevoerd zoals beschreven. Verschillende weefseltypen zijn succesvol ontwikkeld met behulp van de in vivo gevasculariseerde kamer, waaronder hartweefsel met neonatale ratcardiomyocyten, spierweefsel met skeletmyoblasten van ratten en vetweefsel met hydrogel afgeleid van de extracellulaire matrix van vetweefsel. Het stereologiesysteem maakt een onbevooroordeelde kwantificering van het specifieke weefselvolume mogelijk.Bijvoorbeeld, met lectine gekleurde endotheelcellen in dwarsdoorsneden werden gebruikt om vasculaire volumes te schatten. Na in vivo implantatie van cellen die zijn gelabeld met fluorescente kleurstoffen, kan hun lot worden gevolgd. Zo werden neonatale rat-cardiomyocyten, gelabeld met kleurstof i, aangetroffen in de weefselconstructen drie dagen na implantatie.Als alternatief kunnen soortspecifieke antilichamen worden gebruikt om geïmplanteerde cellen in xenotransplantatiestudies te identificeren. Bijvoorbeeld, menselijke geïnduceerde pluripotente stamcellen die zijn geïmplanteerd in immuungecompromitteerde ratten kunnen worden geïdentificeerd in het weefsel dat uit de kamer is geoogst. Eenmaal beheerst, kunnen de flow-through kamer en de arterioveneuze lus in respectievelijk ongeveer 20 en 90 minuten worden geïmplanteerd.Tijdens het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om te allen tijde steriliteit te handhaven en de nodige maatregelen te nemen indien er contaminatie optreedt. Vergeet niet dat een voorzichtige behandeling van de bloedvaten en een atraumatische microchirurgische anastomose essentieel zijn voor het succes. In dit opzicht raden wij een basisopleiding in de microchirurgie aan voordat men deze procedure uitvoert, in het bijzonder voor de constructie van de arterioveneuze loop.

tissue-engineering-intrinsic-vascularization-an-vivo-tissue

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bio-engineering

Onze groep heeft een bioreactor cultuur systeem dat bootst de fysiologische pulserende stress van het cardiovasculaire systeem te regenereren implanteerbare kleine diameter vaattransplantaten.

Techniek Biologisch-Based vaattransplantaten Met behulp van een Pulsatiele Bioreactor

Hier beschrijven we een methode om menselijk navelstrengbloed afgeleide endotheel kolonie-vormende cellen (ECFCs) en beenmerg-afgeleide mesenchymale stamcellen (MSC's), ingebed in een collageen / fibronectine gel, subcutaan in immunodeficiënte muizen. Te leveren Deze cel / gel combinatie genereert een humane vasculaire netwerk dat verbindt met de muis vaatstelsel.

Bioengineering Human Microvasculaire Netwerken in immunodeficiënte muizen

Methoden om menselijke 3D tumorweefsels maken als testsystemen worden beschreven. Deze technologieën zijn gebaseerd op een van cellen ontdane biologische Gevasculariseerd Steiger (BioVaSc), primaire humane cellen en tumor cellijn, die kan worden gekweekt in statische als onder dynamische omstandigheden in een stroom bioreactor.

Tissue Engineering van een Menselijke 3D<em&gt; In vitro</em&gt; Tumor Test System

Vascularisatie is de sleutel tot een succesvolle aanpak in de tissue engineering. Daarom zijn betrouwbare technologieën die voor de ontwikkeling van vasculaire netwerken in weefsel-constructen evalueren. Hier presenteren we een eenvoudige en kosteneffectieve manier te visualiseren en kwantificeren vascularisatie in vivo.

Een Full Skin Defect model te evalueren Vascularisatie Biomaterialen<em&gt; In Vivo</em

Een stap-voor-stap protocol voor de inter-positionele plaatsing van weefselengineering Vessels (Tevs) in de halsslagader van een schaap met end-to-end anastomose en real-time digitale evaluatie in vivo tot dierenoffers.

Chirurgische techniek voor de inplanting van Tissue Engineered vaattransplantaten en de daaropvolgende<em&gt; In Vivo</em&gt; Monitoring

Hier presenteren we een protocol om tissue engineered vaartuig enten die functioneel zijn voor het enten in muizen door dubbel zaaien gedeeltelijk geïnduceerde pluripotente stamcellen genereren (PiPSC) - afgeleide gladde spiercellen en PiPSC - afgeleide endotheelcellen op een gedecellulariseerde schip steiger bioreactor.

Generatie en enten van-Weefselmanipulatieproducten Schepen in een muismodel

In dit werk presenteren we een techniek voor de snelle fabricage van levend vasculair weefsel door directe cultivatie van collageen, gladde spiercellen en endotheelcellen. Daarnaast wordt een nieuw protocol beschreven voor de mechanische karakterisering van gefabriceerd vasculair weefsel.

Engineering 3D Cellularized Collageen Gel voor Vasculaire Tissue Regeneration

Dit manuscript bevat een spuitgiet methode om microvaten dat fysiologische eigenschappen van endotheel recapituleren ingenieur. De microfluïdische-based proces creëert patent 3D vasculaire netwerken met tailorable omstandigheden, zoals stroom, cellulaire samenstelling, geometrie, en biochemische hellingen. Het fabricageproces en voorbeelden van mogelijke toepassingen worden beschreven.

Micropatterning en montage van 3D microvaten

We beschrijven een microchirurgische benadering voor het genereren van een arterioveneuze (AV) -lus als model voor het analyseren van vascularisatie in vivo in een geïsoleerd en goed gekarakteriseerd omgeving. Dit model is niet alleen nuttig voor het onderzoek naar angiogenese, maar ook optimaal geschikt voor engineering axiaal gevasculariseerd en transplantable weefsels.

De arterioveneuze (AV) Loop in een klein proefdiermodel voor Angiogenese en Gevasculariseerd Tissue Engineering Studie

Gemanipuleerde weefsels zijn sterk afhankelijk van de juiste vasculaire netwerken om vitale voedingsstoffen en gassen te leveren en metabolisch afval te verwijderen. In dit werk creëert een stapsgewijs zaaiprotocol van endotheelcellen en ondersteunende cellen sterk georganiseerde vasculaire netwerken in een platform met hoge doorvoer voor het bestuderen van het ontwikkelen van vesselgedrag in een gecontroleerde 3D-omgeving.

Stapsgewijs cel zaaien opssellated steigers om ontkiemende bloedvaten te bestuderen

Dit protocol presenteert een fysiologisch relevant tumor-on-a-chip-model om basis- en translationeel kankeronderzoek bij mensen met een hoge doorvoer uit te voeren, het screenen van geneesmiddelen, ziektemodellering en gepersonaliseerde geneeskundebenaderingen te bevorderen met een beschrijving van laad-, onderhouds- en evaluatieprocedures.

Opzetten van een fysiologisch menselijk gevasculariseerd microtumormodel voor kankeronderzoek

Leer hoe je vasculair weefsel genereert met een arterioveneuze lus in een in vivo-kamer. Deze microchirurgische techniek ondersteunt orgaanregeneratie en weefselherstel.

Tissue Engineering door Intrinsic Vascularisatie in een

Meer video's verkennen