Name: Generatie van onrijpe, Ouder en tolerogene dendritische cellen met verschillende Metabolic Phenotypes (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-06-22T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 9 s
Description: Leer een protocol om tolerogene en rijpe dendritische cellen te genereren uit monocyt voor immunologisch onderzoek. Deze methode maakt in-vitro-productie van hoge aantallen cellen met verschillende metabole fenotypes mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit werk werd ondersteund door Agentschap voor Wetenschap, Technologie en Reasearch basisfinanciering (tot JEC).

<ol><li>Jolles, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paul+Langerhans%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Pathol%22%5BJournal%5D)">Paul Langerhans.</a> J Clin Pathol. 55 (4), 243-24 (2002).</li>
<li>Steinman, R. M., Cohn, Z. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+novel+cell+type+in+peripheral+lymphoid+organs+of+mice.+I.+Morphology%2C+quantitation%2C+tissue+distribution%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Identification of a novel cell type in peripheral lymphoid organs of mice. I. Morphology, quantitation, tissue distribution.</a> J Exp Med. 137 (5), 1142-1162 (1973).</li>
<li>Steinman, R. M., Swanson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+endocytic+activity+of+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">The endocytic activity of dendritic cells.</a> J Exp Med. 182 (2), 283-288 (1995).</li>
<li>Hemmi, H., Akira, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TLR+signalling+and+the+function+of+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Immunol+Allergy%22%5BJournal%5D)">TLR signalling and the function of dendritic cells.</a> Chem Immunol Allergy. 86, 120-135 (2005).</li>
<li>Mueller, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+maintaining+peripheral+tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Mechanisms maintaining peripheral tolerance.</a> Nat Immunol. 11 (1), 21-27 (2010).</li>
<li>Inaba, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+presentation+of+phagocytosed+cellular+fragments+on+the+major+histocompatibility+complex+class+II+products+of+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Efficient presentation of phagocytosed cellular fragments on the major histocompatibility complex class II products of dendritic cells.</a> J Exp Med. 188 (11), 2163-2173 (1998).</li>
<li>Caux, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B70%2FB7-2+is+identical+to+CD86+and+is+the+major+functional+ligand+for+CD28+expressed+on+human+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">B70/B7-2 is identical to CD86 and is the major functional ligand for CD28 expressed on human dendritic cells.</a> J Exp Med. 180 (5), 1841-1847 (1994).</li>
<li>Paavonen, J., Lehtinen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+between+human+papillomavirus+and+other+sexually+transmitted+agents+in+the+etiology+of+cervical+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Interactions between human papillomavirus and other sexually transmitted agents in the etiology of cervical cancer.</a> Curr Opin Infect Dis. 12 (1), 67-71 (1999).</li>
<li>Ohtani, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mammalian+target+of+rapamycin+and+glycogen+synthase+kinase+3+differentially+regulate+lipopolysaccharide-induced+interleukin-12+production+in+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Mammalian target of rapamycin and glycogen synthase kinase 3 differentially regulate lipopolysaccharide-induced interleukin-12 production in dendritic cells.</a> Blood. 112 (3), 635-643 (2008).</li>
<li>Wilde, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+cells+in+renal+biopsies+of+patients+with+ANCA-associated+vasculitis%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrol+Dial+Transplant%22%5BJournal%5D)">Dendritic cells in renal biopsies of patients with ANCA-associated vasculitis.</a> Nephrol Dial Transplant. 24 (7), 2151-2156 (2009).</li>
<li>Al-Hello, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+enterovirus+strain+isolated+from+diabetic+child+belongs+to+a+genetic+subcluster+of+echovirus+11%2C+but+is+also+neutralised+with+monotypic+antisera+to+coxsackievirus+A9%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gen+Virol%22%5BJournal%5D)">An enterovirus strain isolated from diabetic child belongs to a genetic subcluster of echovirus 11, but is also neutralised with monotypic antisera to coxsackievirus A9.</a> J Gen Virol. 89, 1949-1959 (2008).</li>
<li>Ziegler-Heitbrock, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nomenclature+of+monocytes+and+dendritic+cells+in+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Nomenclature of monocytes and dendritic cells in blood.</a> Blood. 116 (16), 74-80 (2010).</li>
<li>Osugi, Y., Vuckovic, S., Hart, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myeloid+blood+CD11c%28%2B%29+dendritic+cells+and+monocyte-derived+dendritic+cells+differ+in+their+ability+to+stimulate+T+lymphocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Myeloid blood CD11c(+) dendritic cells and monocyte-derived dendritic cells differ in their ability to stimulate T lymphocytes.</a> Blood. 100 (8), 2858-2866 (2002).</li>
<li>Reynolds, G., Haniffa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+and+Mouse+Mononuclear+Phagocyte+Networks%3A+A+Tale+of+Two+Species%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Human and Mouse Mononuclear Phagocyte Networks: A Tale of Two Species.</a> Front Immunol. 6, (2015).</li>
<li>Jefford, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+comparison+of+DCs+generated+in+vivo+with+Flt3+ligand+or+in+vitro+from+blood+monocytes%3A+differential+regulation+of+function+by+specific+classes+of+physiologic+stimuli%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Functional comparison of DCs generated in vivo with Flt3 ligand or in vitro from blood monocytes: differential regulation of function by specific classes of physiologic stimuli.</a> Blood. 102 (5), 1753-1763 (2003).</li>
<li>Menck, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+human+monocytes+by+double+gradient+centrifugation+and+their+differentiation+to+macrophages+in+teflon-coated+cell+culture+bags%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of human monocytes by double gradient centrifugation and their differentiation to macrophages in teflon-coated cell culture bags.</a> J Vis Exp. (91), (2014).</li>
<li>Zhou, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+human+granulocyte+and+monocyte+isolation+procedures+on+functional+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Vaccine+Immunol%22%5BJournal%5D)">Impact of human granulocyte and monocyte isolation procedures on functional studies.</a> Clin Vaccine Immunol. 19 (7), 1065-1074 (2012).</li>
<li>Menon, V., Thomas, R., Ghale, A. R., Reinhard, C., Pruszak, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometry+protocols+for+surface+and+intracellular+antigen+analyses+of+neural+cell+types%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Flow cytometry protocols for surface and intracellular antigen analyses of neural cell types.</a> J Vis Exp. (94), (2014).</li>
<li>Faresjo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+useful+guide+for+analysis+of+immune+markers+by+fluorochrome+%28Luminex%29+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">A useful guide for analysis of immune markers by fluorochrome (Luminex) technique.</a> Methods Mol Biol. 1172, 87-96 (2014).</li>
<li>Baker, H. N., Murphy, R., Lopez, E., Garcia, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conversion+of+a+capture+ELISA+to+a+Luminex+xMAP+assay+using+a+multiplex+antibody+screening+method%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Conversion of a capture ELISA to a Luminex xMAP assay using a multiplex antibody screening method.</a> J Vis Exp. (65), (2012).</li>
<li>Defawe, O. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+and+qualification+of+a+multiplex+bead+array+to+assess+cytokine+and+chemokine+production+by+vaccine-specific+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Optimization and qualification of a multiplex bead array to assess cytokine and chemokine production by vaccine-specific cells.</a> J Immunol Methods. 382 (1-2), 117-128 (2012).</li>
<li>Nicholls, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioenergetic+profile+experiment+using+C2C12+myoblast+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Bioenergetic profile experiment using C2C12 myoblast cells.</a> J Vis Exp. (46), (2010).</li>
<li>Chunharas, A., Pabunruang, W., Hongeng, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Congenital+self-healing+Langerhans+cell+histiocytosis+with+pulmonary+involvement%3A+spontaneous+regression%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Assoc+Thai%22%5BJournal%5D)">Congenital self-healing Langerhans cell histiocytosis with pulmonary involvement: spontaneous regression.</a> J Med Assoc Thai. 85, 1309-1313 (2002).</li>
<li>Bai, L., Feuerer, M., Beckhove, P., Umansky, V., Schirrmacher, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+dendritic+cells+from+human+bone+marrow+mononuclear+cells%3A+advantages+for+clinical+application+in+comparison+to+peripheral+blood+monocyte+derived+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Oncol%22%5BJournal%5D)">Generation of dendritic cells from human bone marrow mononuclear cells: advantages for clinical application in comparison to peripheral blood monocyte derived cells.</a> Int J Oncol. 20 (2), 247-253 (2002).</li>
<li>Felzmann, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monocyte+enrichment+from+leukapharesis+products+for+the+generation+of+DCs+by+plastic+adherence%2C+or+by+positive+or+negative+selection%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Monocyte enrichment from leukapharesis products for the generation of DCs by plastic adherence, or by positive or negative selection.</a> Cytotherapy. 5 (5), 391-398 (2003).</li>
<li>Berger, T. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+elutriation+of+monocytes+within+a+closed+system+%28Elutra%29+for+clinical-scale+generation+of+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Efficient elutriation of monocytes within a closed system (Elutra) for clinical-scale generation of dendritic cells.</a> J Immunol Methods. 298 (1-2), 1-2 (2005).</li>
<li>Sallusto, F., Lanzavecchia, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+presentation+of+soluble+antigen+by+cultured+human+dendritic+cells+is+maintained+by+granulocyte%2Fmacrophage+colony-stimulating+factor+plus+interleukin+4+and+downregulated+by+tumor+necrosis+factor+alpha%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Efficient presentation of soluble antigen by cultured human dendritic cells is maintained by granulocyte/macrophage colony-stimulating factor plus interleukin 4 and downregulated by tumor necrosis factor alpha.</a> J Exp Med. 179 (4), 1109-1118 (1994).</li>
<li>Pace, S. T., Gelman, B. B., Wong, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+Langerhans+cell+histiocytosis+of+the+lacrimal+gland+in+an+adult%5BTitle%5D)+AND+%22Can+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Primary Langerhans cell histiocytosis of the lacrimal gland in an adult.</a> Can J Ophthalmol. 50 (3), 40-43 (2015).</li>
<li>Ravanfar, P., Wallace, J. S., Pace, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diaper+dermatitis%3A+a+review+and+update%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Pediatr%22%5BJournal%5D)">Diaper dermatitis: a review and update.</a> Curr Opin Pediatr. 24 (4), 472-479 (2012).</li>
<li>Gebhardt, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+case+of+cutaneous+Rosai-Dorfman+disease+refractory+to+imatinib+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Dermatol%22%5BJournal%5D)">A case of cutaneous Rosai-Dorfman disease refractory to imatinib therapy.</a> Arch Dermatol. 145 (5), 571-574 (2009).</li>
<li>Vazquez, P., Robles, A. M., de Pablo, F., Hernandez-Sanchez, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-neural+tyrosine+hydroxylase%2C+via+modulation+of+endocrine+pancreatic+precursors%2C+is+required+for+normal+development+of+beta+cells+in+the+mouse+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetologia%22%5BJournal%5D)">Non-neural tyrosine hydroxylase, via modulation of endocrine pancreatic precursors, is required for normal development of beta cells in the mouse pancreas.</a> Diabetologia. 57 (11), 2339-2347 (2014).</li>
<li>Pellacani, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+melanoma+types+based+on+reflectance+confocal+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Distinct melanoma types based on reflectance confocal microscopy.</a> Exp Dermatol. 23 (6), 414-418 (2014).</li>
<li>Shi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatic+involvement+of+Langerhans+cell+histiocytosis+in+children--imaging+findings+of+computed+tomography%2C+magnetic+resonance+imaging+and+magnetic+resonance+cholangiopancreatography%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Radiol%22%5BJournal%5D)">Hepatic involvement of Langerhans cell histiocytosis in children--imaging findings of computed tomography, magnetic resonance imaging and magnetic resonance cholangiopancreatography.</a> Pediatr Radiol. 44 (6), 713-718 (2014).</li>
<li>Haustein, M., Terai, N., Pablik, J., Pillunat, L. E., Sommer, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapy-resistant+swelling+of+the+upper+eyelid+in+childhood%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmologe%22%5BJournal%5D)">Therapy-resistant swelling of the upper eyelid in childhood.</a> Ophthalmologe. 111 (1), 53-57 (2014).</li>
<li>Haidinger, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+versatile+role+of+mammalian+target+of+rapamycin+in+human+dendritic+cell+function+and+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">A versatile role of mammalian target of rapamycin in human dendritic cell function and differentiation.</a> J Immunol. 185 (7), 3919-3931 (2010).</li>
<li>Macedo, C., Turquist, H., Metes, D., Thomson, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunoregulatory+properties+of+rapamycin-conditioned+monocyte-derived+dendritic+cells+and+their+role+in+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Res%22%5BJournal%5D)">Immunoregulatory properties of rapamycin-conditioned monocyte-derived dendritic cells and their role in transplantation.</a> Transplant Res. 1 (1), 16(2012).</li>
<li>Fischer, R., Turnquist, H. R., Taner, T., Thomson, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+rapamycin+in+the+induction+of+tolerogenic+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Handb+Exp+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Use of rapamycin in the induction of tolerogenic dendritic cells.</a> Handb Exp Pharmacol. 188 (188), 215-232 (2009).</li>
<li>Nicolette, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+cells+for+active+immunotherapy%3A+optimizing+design+and+manufacture+in+order+to+develop+commercially+and+clinically+viable+products%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Dendritic cells for active immunotherapy: optimizing design and manufacture in order to develop commercially and clinically viable products.</a> Vaccine. 25, 47-60 (2007).</li>
<li>Han, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+3+clinical+dendritic+cell+maturation+protocols+containing+lipopolysaccharide+and+interferon-gamma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunother%22%5BJournal%5D)">Evaluation of 3 clinical dendritic cell maturation protocols containing lipopolysaccharide and interferon-gamma.</a> J Immunother. 32 (4), 399-407 (2009).</li>
<li>Paananen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+and+biological+analysis+of+echovirus+9+strain+isolated+from+a+diabetic+child%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Virol%22%5BJournal%5D)">Molecular and biological analysis of echovirus 9 strain isolated from a diabetic child.</a> J Med Virol. 69 (4), 529-537 (2003).</li>
<li>HC, O. N., Wilson, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limitations+with+in+vitro+production+of+dendritic+cells+using+cytokines%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">Limitations with in vitro production of dendritic cells using cytokines.</a> J Leukoc Biol. 75 (4), 600-603 (2004).</li>
<li>Mest, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose-induced+insulin+secretion+is+potentiated+by+a+new+imidazoline+compound%5BTitle%5D)+AND+%22Naunyn+Schmiedebergs+Arch+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Glucose-induced insulin secretion is potentiated by a new imidazoline compound.</a> Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 364 (1), 47-52 (2001).</li>
<li>Puc, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+activity+after+cold+preservation+of+pancreatic+islet+cells+treated+with+pefloxacin+%28PFX%29%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Transplant%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial activity after cold preservation of pancreatic islet cells treated with pefloxacin (PFX).</a> Ann Transplant. 3 (1), 38-41 (1998).</li>
<li>Alarcon, C., Serna, J., Perez-Villamil, B., de Pablo, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+and+differentially+regulated+processing+of+proinsulin+in+developing+chick+pancreas%2C+liver+and+neuroretina%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Letters%22%5BJournal%5D)">Synthesis and differentially regulated processing of proinsulin in developing chick pancreas, liver and neuroretina.</a> FEBS Letters. 436 (3), 361-366 (1998).</li>
<li>Jekunen, A. P., Kairemo, K. J., Paavonen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+of+Hand-Schuller-Christian+syndrome+by+a+monoclonal+antibody%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">Imaging of Hand-Schuller-Christian syndrome by a monoclonal antibody.</a> Clin Nucl Med. 22 (11), 771-774 (1997).</li>
<li>Pearce, E. J., Everts, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+cell+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Dendritic cell metabolism.</a> Nat Rev Immunol. 15 (1), 18-29 (2015).</li>
</ol>

De open access-kosten voor dit artikel werden gedekt door Agilent Technologies.

Dit document beschrijft een methode om te genereren uit monocyten onvolwassen moDCs, tolerogene moDCs en volwassen moDCs. De belangrijke stappen in dit protocol worden in detail besproken in de volgende paragrafen. Het is belangrijk op te merken dat humaan perifeer bloed wordt gebruikt als uitgangsmateriaal in dit protocol en universele voorzorgen in acht menselijk bloed worden toegepast. Hoewel het technisch mogelijk DC uit beenmerg afleiden bij de mens 24, wordt de in vitro DC differentiatie van cellen in perifeer bloed voorkeur vanwege de beschikbaarheid van perifere bloed in vergelijking met beenmerg. Onder de cellen in perifeer bloed, worden hematopoietische CD34 + stamcellen en monocyten gewoonlijk gebruikt voor de in vitro generatie van DCs. CD34 + hematopoietische stamcellen gekweekt met GM-CSF en TNF-α te CD1a + en CD14 + subsets die dan verder worden onderverdeeld in Langerhans leidenachtige cellen en dendritische cellen. Omgekeerd, monocyten gekweekt in GM-CSF en IL-4 tot onrijpe moDCs genereren. Verschillende protocollen gebruikt voor de verrijking van monocyten uit perifeer bloed; bijvoorbeeld door hechting aan plastic schaaltjes, elutriatie en isolatie kits 25, 26 De voordelen van de hechting protocol zijn minimale schade aan cellen en relatief kosteneffectief echter cel zuiverheid kan worden ondermijnd.; en een extra stap nodig is om de cellen los voor verdere experimenten. Elutriatie is een techniek die cellen op basis van hun grootte en dichtheid scheidt. De voordelen van elutriatie zijn levensvatbaarheid van de cellen en monocyten kunnen gemakkelijk worden gebruikt voor verdere experimenten; Maar deze techniek wordt beperkt door de beschikbaarheid van een afslibinrichting en het onvermogen om verschillende populaties van cellen (T-cellen en monocyten) met gelijke sedimentatie parameters scheiden. In de handel verkrijgbare isolatie kits gebruik maken van magnetische microbolletjes om ofwel kiezen positief ofnegatief selecteert u de monocytische bevolking. Sommige protocollen zijn vooral gericht op monocyten isolatie met behulp van de negatieve selectie zoals het geïsoleerde monocyten &quot;onaangeroerd&quot; (niet gebonden door markers of microbolletjes) blijven. In dit protocol werden CD14 beads gebruikt om positieve selecteren humane monocyten uit PBMC. CD14 ontbreekt een cytoplasmatisch domein en de binding van antilichaam aan CD14 leidt niet tot signaaltransductie. Bovendien zal de microkralen losmaken van monocyten na kweken en dus niet het differentiatieproces belemmeren. Bovendien is CD14 sterk tot expressie gebracht op de meeste monocyten en zwak op neutrofielen en sommige myeloïde dendritische cellen, vandaar deze isolatiemethode tot hogere cel zuiverheid dan de andere methoden 17. Bloedmonocyten kunnen worden onderscheiden in DCs of macrofagen en het lot van monocyten sterk afhankelijk van de cytokine milieu. In dit artikel worden moDCs gegenereerd door toevoeging van granulocyt-macrofaag-koloniestimulerende factor (GM-CSF) En interleukine 4 (IL-4) menselijke perifere bloedmonocyten. GM-CSF is vereist voor monocyten overleving en IL-4 oefent een remmende werking op macrofaag differentiatie; en combinatoriële toevoeging van GM-SCSF en IL-4 op monocyten leveren een hoger percentage onrijpe moDCs vergelijking met individuele cytokine 27. Er zijn andere protocols die moDCs genereren door het toevoegen van tumornecrosefactor alfa (TNF-α), interferon alfa (IFN-α) en interleukine 13 (IL-13) perifere bloedmonocyten 28, 29, 30. De combinatie van GM-CSF en IL-4 werd geoptimaliseerd in de jaren 1990 en nu een geaccepteerd protocol dat plastic onrijpe DCs gedifferentieerd in immunogene of tolerogene moDCs en gepolariseerd in Th1, Th2 of Th17 bevorderen moDCs genereert. Onrijpe moDCs worden onderverdeeld in tolerogene moDCs door toevoeging van vitamine D3 en dexamethason. Er zijn verschillende protocollen tolerogene DCs bijvoorbeeld genereren, vianuclear factor-kappa B (NF-kB) remming, β-catenine activering, vitamine D3, Dexamethason en Rapamycine 31, 32, 33, 34, 35, 9, 36, 37. Hoewel zowel vitamine D3 en dexamethason alleen gemeld een tolerogene effect op DCs, de combinatie van vitamine D3 en dexamethason leiden tot een mate onderdrukt alloproliferation dan wanneer afzonderlijke geneesmiddelen worden gebruikt induceren. Hiervoor wordt het bestaande protocol voor het genereren van tolerogene DC&#39;s werd gemodificeerd om een ​​combinatie van vitamine D3 en dexamethason. Deze werkwijze wordt momenteel als een model voor humane tolerogene DCs met een therapeutisch nut geaccepteerd. Het is ook belangrijk op te merken dat de gereconstitueerde vitamine D3 en dexamethason hebben een korte houdbaarheid. In dit protocol Lipopolysacchariden (LPS) werd toegevoegd als een DC rijping inductor. Onrijpe moDCs kan ook veroorzaakt worden om rijping met behulp van pro-inflammatoire cocktail:(TNF-α), interleukine 1 bèta (IL-1β), interleukine 6 (IL-6) en prostaglandine E2) of pro-inflammatoire cytokinen (TNF-α en interferon gamma (IFN-Γ)). Pro-inflammatoire cocktail genereert volwassen moDCs met een hoge co-stimulerende en trekkende functies, maar ze produceren relatief lage niveaus van IL-12 38. TNF-α of IFN-Γ alleen niet in staat om een stabiele dendritische fenotype 39 induceren. LPS stimuleert Toll-like receptor 4 (TLR4), medieert de activering van NF-kB en mitogeen geactiveerde eiwitkinasen (MAPK&#39;s) naar DC rijping te induceren. DC rijping geïnduceerd door LPS toont een opregulatie van DC rijping merkers (CD83, CD86, HLA-DR) en leidde tot de productie van IL-12p70. Bovendien kan deze verder worden gemodificeerd LPS met TLR3 agonisten paren met rijpe DC voor klinische kanker vaccins. In dit artikel worden tolerogene DCs getoond resistent tegen rijping na LPS behandeling. Deze semi-rijpe achtige DCs zijn niet immunogeen is en niet release pro-inflammatoire cytokines 40. De beperkingen van dit protocol liggen in het differentiatieproces. Het proces duurt 8 dagen vanaf dag 0 tot dag 7 die een probleem worden aangepast in high throughput analyse vormt. Wijziging van het protocol is vereist om de differentiatie te verkorten nog op grote aantallen levensvatbare DCs in de verschillende staten. Ten tweede worden de DCs gegenereerd door toevoeging van cytokinen in dit protocol en deze cytokinen niet DC populatie in stand gedurende langere tijd. Bovendien zijn cytokinen in concentraties veel hoger dan in vivo en kan leiden tot vertekende ontwikkeling van paden die niet fysiologisch identiek in vivo DCs. Bijvoorbeeld in vitro kweken van DC precursoren is aangetoond reactie op GM-CSF, die niet essentieel voor normale cytokine DC differentiatie in vivo 41. Niettemin kan cytokinestimulatie een bruikbare methode genwaardeert grote aantallen DC in vitro experimenten. Het vermogen om deze cellen gegenereerd uit dit protocol andere analyses zoals immunofluorescentie kleuring onderworpen, flowcytometrie, allo reactiestudies en metabole studies verhoogt de bruikbaarheid van deze methode. Deze in vitro DCs dienen als een goed model om de kennis van DC ontwikkeling, rijping en antigeenpresentatie die voorheen moeilijk te maken met de zeldzame aantallen DCs in vivo te verbeteren. DCs vermogen van immunologische tolerantie tegen immuniteit reguleren daardoor aantrekkelijk kandidaten therapieën tegen kanker en auto-immuunziekten 42, 43, 44, 45. Immunogene DC gegenereerd in dit protocol kan worden gebruikt voor vaccinatie werkzaamheid tegen infectieziekten en tumoren te verbeteren; terwijl tolerogene DCs kan worden gebruikt om ongewenste T-cel responsen te controleren en afstoting na transplantatie te voorkomen. de ingewikkeldebalans tussen immuniteit en tolerantie is afhankelijk enorm op DC differentiatie status. DC differentiatie is een gecoördineerd cellulaire programma dat wordt beheerst door meerdere signaalwegen en metabolisme. Verschillende differentiatie staten van DC verschillen in bio-energetische en biosynthese behoeften; bijvoorbeeld geactiveerde DCs vereisen meer energie metabole aanpassingen belangrijk voor de overleving en migratie in vergelijking met DC&#39;s in rusttoestand. Het is belangrijk op te merken dat vitamine D3, dexamethason en rapamycine zijn bekend om hun vermogen om tolerogene DCs induceren, zijn beschreven DC metabolisme beïnvloeden. In deze paper, de energieke metabolisme van moDCs uit verschillende differentiatie staten werden gekarakteriseerd met behulp van extracellulaire flux analyzers en tolerogene moDCs tentoongesteld de hoogste metabole plasticiteit en LPS-geïnduceerde rijping daalde deze plasticiteit. Anabole stofwisseling ondersteunt DC rijping terwijl katabole metabolisme invloeden tolerogene DC functioneert 46. de DCSgegenereerd uit dit protocol kan worden beoordeeld of het veranderen van de metabole toestand van DCs de sleutel tot het wijzigen immuniteit en tolerantie in therapeutica. Tot slot, presenteerden we een protocol voor het genereren van onvolwassen, tolerogene en volwassen moDCs van cruciaal belang voor het bestuderen van immuunregulatorische functies DC&#39;s &#39;.

DC werd voor het eerst beschreven door Paul Langerhans (Langerhans-cellen) in de late negentiende eeuw als verwezen door Jolles 1 en gekenmerkt door Ralph Steinman en Zanvil Cohn in 1973, die ze als professionele antigeen presenterende cellen 2 herkend. DCs worden gevonden in perifeer bloed en in de meeste weefsels van het lichaam, vooral overvloedig in weefsels die worden blootgesteld aan de externe omgeving zoals de huid (aanwezig als Langerhans cellen) en in de voeringen van de neus, longen, maag en darmen werkelijk kunnen ze extrinsieke antigenen tegenkomen. Onrijpe DC hebben endocytische mogelijkheid, maar relatief lage capaciteit om T-cellen 3 te stimuleren. Onrijpe DC te uiten verschillende patroonherkenning receptoren (PRRS) die capture-pathogeen geassocieerde moleculaire patronen (PAMPs) of schade in verband moleculaire patronen (gedempt) 4. Het activeren van gevaar signalen rijden rijping richting immunogeen DCs terwijl self-moleculen leidt tot T-cel unresponsiveness en apoptose 5. Immunogene DCs worden gekenmerkt door de verhoogde expressie van MHC moleculen en co-stimulerende moleculen van het oppervlak en hun vermogen om naïeve T-cellen prime 6,7. Onrijpe DC kan ook worden gerijpt in de richting van een Treg-inducerende of tolerogene staat in antwoord op vitamine D3 metaboliet 1a, 25 (O) 2 D 3 en bepaalde immunosuppressiva, zoals interleukine-10 (IL-10), dexamethason en rapamycine 8-9. Tolerogene DC&#39;s worden gekenmerkt door hun expressie van immunoreceptor tyrosine-gebaseerd remmend motief (ITIMs) bevattende oppervlak receptoren en liganden. Signaaltransductie van ITIMs met ILT familieleden, ILT3 en ILT4 in tolerogene DCs te remmen alloproliferation en rijden Foxp3 + Treg expansie 10,11. Deze unieke eigenschappen van tolerogene DC&#39;s tot hun diepe potentie in vivo, namelijk het kunnen duurzame induceren om getransplanteerde allogene transplantaten en suppress de ontwikkeling van auto-immuunziekten. Tolerogene DCs kunnen derhalve worden beschouwd als een subtype van rijpe DC-gepolariseerde maatregelen die op remming van immuunactivatie. Momenteel zijn er twee algemene subsets van dendritische cellen in menselijk perifeer bloed plasmacytoïde DCs en myeloide DCs 12. Circulerende DCs zijn zeldzaam samenstellende minder dan 2% van de leukocyten in menselijk bloed en dit vormt een probleem voor de isolatie van een geschikt aantal DCs hun immuunregulerende functies te bestuderen. Om dit probleem te verhelpen, zijn monocyt gedifferentieerd DCs gebruikt als een in vitro model voor de studie van dendritische celfunctie. Deze in vitro DCs vergelijkbare receptoren en functies ten opzichte van in vivo DCs. Gedetailleerde vergelijking van DCs in vivo en in vitro gegenereerde monocyten afgeleide DCs (moDCs) onderzocht door andere laboratoria 13, 14, 15. Het is ook gemeld dat moDCs en CD1c + DCs waren gelijkwaardig aan antigeen presenterende en het induceren van T-cel-functie 15. In dit artikel beschrijven we een werkwijze voor het genereren onrijpe moDCs uit perifere bloedmonocyten en differentiëren ze in immunogene en tolerogene DCs. Deze monocyten afgeleide dendritische cellen (moDCs) worden gekenmerkt door hun oppervlakte markers, cytokine profiel, immuunregulerende functies en metabolische toestanden. Immunogene en tolerogene dendritische cellen verschillende cytokinen die leiden tot groei van beide allogene T-cellen of regulerende T-cellen. In dit artikel wordt cytokine profiling uitgevoerd met systemen met behulp van multiplex-technologie. Groeimedium van cellen geïncubeerd met antilichaam geïmmobiliseerd gekleurde kralen en afgelezen in een compacte analyzer. Metabole staten van DCs worden geanalyseerd met behulp van extracellulaire flux analyzers dat zuurstof verbruik, een indicator van cellulaire ademhaling, en extracellulaire verzuring tarief dat glycolytische weerspiegelt metenflux in dendritische cellen. Meting van deze bioenergetica tarieven verschaft een middel om de veranderingen in de cellulaire stofwisseling die essentieel dendritische celontwikkeling en functie volgen.

<table><tbody><tr><td>Ficoll</td><td>GE Healthcare</td><td>17-1440-03</td><td>PBMC isolatie</td></tr><tr><td>Spuit</td><td>Becton, Dickinson</td><td>302832</td><td>PBMC isolatie</td></tr><tr><td>1,5 ml centrifugebuisje</td><td>Axygen</td><td>MCT-150-C</td><td>PBMC isolatie</td></tr><tr><td>15 ml falconbuis</td><td>Falcon</td><td>352096</td><td>PBMC isolatie</td></tr><tr><td>50 ml falconbuis</td><td>Falcon</td><td>352070</td><td>PBMC isolatie</td></tr><tr><td>Centrifuge</td><td>Eppendorf</td><td>5810R</td><td>PBMC isolatie</td></tr><tr><td>0,2 &micro;m filter</td><td>Sartorius stedim biotech</td><td>17597</td><td>PBMC isolatie</td></tr><tr><td>MACs kit</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-042-201</td><td>Monocyte verrijking</td></tr><tr><td>MiniMACS Separator</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-042-102</td><td>Monocyte verrijking</td></tr><tr><td>Celcultuur kwaliteit water</td><td>Invitrogen, Life Technologies</td><td></td><td>Celcultuur</td></tr><tr><td>RPMI</td><td>Gibco, Life Technologies</td><td>11875-093</td><td>Celcultuur</td></tr><tr><td>FBS</td><td>Hyclone</td><td>SH30070103</td><td>Celcultuur</td></tr><tr><td>Penicilline-streptomycine</td><td>Gibco, Life Technologies</td><td>15140</td><td>Celcultuur</td></tr><tr><td>Fosfaat Gebufferd zoutwater</td><td>Gibco, Life Technologies</td><td>10010-031</td><td>Celcultuur</td></tr><tr><td>NEAA</td><td>Gibco, Life Technologies</td><td>11140-040</td><td>Celcultuur</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Gibco, Life Technologies</td><td>15575</td><td>Celcultuur</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Gibco, Life Technologies</td><td>15630-080</td><td>Celcultuur</td></tr><tr><td>Natrium Pyruvaat</td><td>Gibco, Life Technologies</td><td>11360-070</td><td>Celcultuur</td></tr><tr><td>GM-CSF</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-093-868</td><td>Celcultuur</td></tr><tr><td>IL-4</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-093-924</td><td>Celcultuur</td></tr><tr><td>Vitamine D3</td><td>Sigma</td><td>D1530</td><td>Celcultuur</td></tr><tr><td>Dexamethason</td><td>Sigma</td><td>D2915</td><td>Celcultuur</td></tr><tr><td>LPS</td><td>Sigma</td><td>l2755</td><td>Celcultuur</td></tr><tr><td>Trypan blauw</td><td>Gibco, Life Technologies</td><td>15250-061</td><td>Celcultuur</td></tr><tr><td>PerCP-geconjugeerd HLADR&nbsp;</td><td>BioLegend</td><td>307628</td><td>Cytometrie</td></tr><tr><td>PE-geconjugeerd CD80</td><td>BD Biosciences</td><td>557227</td><td>Cytometrie</td></tr><tr><td>PE-geconjugeerd CD83&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td>556855</td><td>Cytometrie</td></tr><tr><td>PE-geconjugeerd CD86&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td>555665</td><td>Cytometrie</td></tr><tr><td>APC-geconjugeerd CD11c</td><td>BD Biosciences</td><td>340544</td><td>Cytometrie</td></tr><tr><td>PE-geconjugeerd CD14&nbsp;</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-091-242</td><td>Cytometrie</td></tr><tr><td>PE-geconjugeerd BDCA3&nbsp;</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-090-514</td><td>Cytometrie</td></tr><tr><td>APC-geconjugeerd ILT3&nbsp;</td><td>eBioscience</td><td>12-5139-73</td><td>Cytometrie</td></tr><tr><td>Isotype aangepast PerCP- geconjugeerd Mab</td><td>BioLegend</td><td>400250</td><td>Cytometrie</td></tr><tr><td>Isotype aangepast PE- geconjugeerd Mab</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-091-835</td><td>Cytometrie</td></tr><tr><td>Isotype aangepast APC- geconjugeerd Mab</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-091-836</td><td>Cytometrie</td></tr><tr><td>BD LSR II Flow Cytometer</td><td>BD Pharmingen</td><td>BD LSR II&nbsp;</td><td>Cytometrie</td></tr><tr><td>cytofix/cytoperm</td><td>BD Biosciences</td><td>554714</td><td>Cytometrie</td></tr><tr><td>APC/CY7-geconjugeerd CD25</td><td>BD pharmingen</td><td>557753</td><td>Cytometrie</td></tr><tr><td>PE/CY7-geconjugeerd CD4</td><td>Biolegend</td><td>300512</td><td>Cytometrie</td></tr><tr><td>PerCP-geconjugeerd CD3</td><td>Biolegend</td><td>300428</td><td>Cytometrie</td></tr><tr><td>EasySep Human CD4+ T cel verrijkingskit</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>19052</td><td>Alloreactie studie</td></tr><tr><td>EasySep magneet&nbsp;</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>18000</td><td>Alloreactie studie</td></tr><tr><td>Cell Trace CFSE celproliferatie kit</td><td>Molecular probes</td><td>C34554</td><td>Alloreactie studie</td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Gibco, Life Technologies</td><td>14025092</td><td>Alloreactie studie</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647-geconjugeerd FoxP3</td><td>BD Biosciences</td><td>560889</td><td></td></tr><tr><td>Milliplex MAP Human Cytokine/Chemokine magnetische parelketting</td><td>Millipore</td><td>HCYTOMAG-60K</td><td>Cytokine analyse</td></tr><tr><td>5 ml Polystyreen buis</td><td>Falcon</td><td>352058</td><td>Cytokine analyse</td></tr><tr><td>Luminex Sheath Fluid&nbsp;</td><td>Millipore</td><td>SHEATHFLUID</td><td>Cytokine analyse</td></tr><tr><td>FLEXMAP 3D systeem met xPONENT software</td><td>Luminex Corporation</td><td>FLEXMAP 3D</td><td>Cytokine analyse</td></tr><tr><td>MitoTracker Red CMXRos</td><td>Cell Signalling</td><td>9082</td><td>Mitochondriale activiteit</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D2650</td><td>Mitochondriale activiteit</td></tr><tr><td>XF Assay Medium (OCR)</td><td>Seahorse Bioscience</td><td>102352-000</td><td>Metabolische aanpassing</td></tr><tr><td>Glucose&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G8769</td><td>Metabolische aanpassing</td></tr><tr><td>XF Base Medium (ECAR)</td><td>Seahorse Bioscience</td><td>102353-100</td><td>Metabolische aanpassing</td></tr><tr><td>L-glutamine</td><td>Gibco, Life Technologies</td><td>25030-081</td><td>Metabolische aanpassing</td></tr><tr><td>Calibrant</td><td>Seahorse Bioscience</td><td>100840-000&nbsp;</td><td>Metabolische aanpassing</td></tr><tr><td>XF Cell Mito Stress kit</td><td>Seahorse Bioscience</td><td>103015-100</td><td>Metabolische aanpassing</td></tr><tr><td>XF Glycolysis Stress kit</td><td>Seahorse Bioscience</td><td>103020-100</td><td>Metabolische aanpassing</td></tr><tr><td>Seahorse&nbsp;</td><td>Seahorse Bioscience</td><td>XFe96</td><td>Metabolische aanpassing</td></tr></tbody></table>

generatie van onrijpe, ouder en tolerogene dendritische cellen met verschillende metabolic phenotypes

Generation of Immature, Mature and Tolerogenic Dendritic Cells with Differing Metabolic Phenotypes

Immuunrespons veroorzaakt door een complexe interactie tussen het antigeen niet-specifieke aangeboren immuunsysteem en de antigeenspecifieke adaptieve immuunsysteem. Het immuunsysteem is een constant evenwicht handhaven van tolerantie tegen zelf-moleculen en snelle reactie op pathogenen. Dendritische cellen (DC) zijn krachtige professionele antigeen presenterende cellen die het aangeboren immuunsysteem koppelen aan het adaptieve immuunsysteem en de balans van de adaptieve respons tussen zelf en niet-zelf. Afhankelijk van de rijping signalen kunnen ongerijpte dendritische cellen selectief worden gestimuleerd om te differentiëren in immunogene of tolerogene DCs. Immunogene dendritische cellen proliferatie signalen antigeen-specifieke T cellen voor klonale expansie; terwijl tolerogene dendritische cellen reguleren tolerantie door antigenspecifieke T-cellen deletie of klonale vermeerdering van regulerende T-cellen. Als gevolg van dit unieke pand, worden dendritische cellen zeer gewild als therapeutische middelen voor kanker en auto-Diseases. Dendritische cellen kunnen worden geladen met specifieke antigenen in vitro en geïnjecteerd in het menselijk lichaam om een specifieke immuunrespons zowel immunogene en tolerogene monteren. Dit werk geeft een middel voor het genereren van in vitro uit monocyten, onrijpe monocyten afgeleide dendritische cellen (moDCs), tolerogene en volwassen moDCs die verschillen in oppervlakte marker expressie, functie en metabole fenotypes.

Monocyten Zuivering en dendritische cel differentiatie Monocyten werden gezuiverd uit PBMC door dichtheidscentrifugatie van perifeer bloed (figuur 1A), gevolgd door CD14 + positieve selectie magnetische scheiding (Figuur 1B) en gekweekt in compleet medium in aanwezigheid van GM-CSF en IL-4 tot onrijpe dendritische cellen te verkrijgen ( figuur 2A). Toevoeging van vitamine D3 en dexamethason na GM-CSF en IL-4 resulteerde in de differentiatie van onrijpe moDCs in tolerogene moDCs (figuur 2B). LPS werd toegevoegd aan de rijping van onrijpe moDCs bewegen om moDCs (figuur 2C) en tolerogene moDCs volwassen werden gestimuleerd met LPS om resistentie tegen rijping (figuur 2D) te controleren. De bloedmonsters die in dit werk werden verkregen van gezonde donoren met eerdere kennistoestemming. moDC karakterisering Surface Marker karakterisering door flowcytometrie Analyse van DC oppervlaktemerkers gebleken dat volwassen moDCs expressie de hoogste niveaus van rijping markers HLA-DR, CD83 en CD86 in vergelijking met LPS behandelde tolerogene moDCs, tolerogene moDCs en onvolwassen moDCs (figuur 3). Deze resultaten toonden dat tolerogene moDCs waren resistent tegen rijping vergelijking met onrijpe moDCs na LPS stimulatie. Bovendien, LPS-behandelde tolerogene moDCs en tolerogene moDCs weergegeven verhoogde expressie van CD14, BDCA3 (CD141) en immunoglobuline-achtige transcript (ILT) 3 ten opzichte van onvolwassen en volwassen moDCs. De tolerogene moDCs dat we hier gegenereerd is met eerdere verslagen 23. Functionele karakterisering van moDCs moDCs geïnduceerde rijping worden immunogeen en laat cytokinen die de proliferatie van CD4 + T-cellen te bevorderen. Onderzochten wij de immunogeniciteit van de verschillende subtypes moDC door het meten van de proliferatie van co-gekweekte T-cellen. Tolerogene moDCs waren slecht immunogeen in vergelijking met volwassen moDCs, zoals blijkt uit lage alloproliferation van CD4 + T-cellen (Figuur 4A). Tolerogene moDCs worden gekenmerkt door hun lage IFN-Γ lage IL-12p40 en IL-10 high cytokineproductie in alloreaction co-kweken met CD4 + T-cellen (Figuur 4B). Door de toename van het aantal tolerogene moDCs in co-culturen van volwassen moDCs allospecifieke geïnduceerde CD4 + T-cellen verhoogde frequentie van CD25 high Foxp3 + regulerende T-cellen (Figuur 4C). <pclass = &quot;jove_content&quot; fo: keep-together.within-page = &quot;1&quot;&gt; De rol van mitochondriale activiteit Rode CMXRos wordt gebruikt om de mitochondriale activiteit weerspiegelen de mitochondriale membraanpotentiaal niveaus moDCs analyseren. Tolerogene moDCs waargenomen hogere mitochondriale activiteit in vergelijking met de andere moDC onderscheiden subtypen (Figuur 5A). Vervolgens wordt de mate van mitochondriale zuurstofverbruik (OCR) beoordeeld om de verschillende subtypen moDC met een bioanalyzer. OCR metingen laten hoge resolutie inzichten in het metabolische profiel, informatie waaronder maar niet beperkt tot basale ademhaling, extra ademhalingscapaciteit, proton lek en non-mitochondriale ademhaling. De meting van OCR verschaft een middel om het vermogen van cellen om te reageren op stress beoordelen. De cellen metabolisch verstoord door de toevoeging van drie verschillende verbindingen na elkaar. De eerste injectie is Oligomycin (ATP Koppeling), die complex V van het elektron transport keten (ETC) remt, remmen ATP-synthese. Deze stap onderscheidt het percentage zuurstof verbruikt voor ATP synthese en het percentage zuurstof verbruikt om proton lek in het binnenste mitochondriale membraan overwonnen. De tweede injectie is FCCP (ETC versneller) die ATP-synthese verstoort door het vervoer van waterstofionen over de mitochondriale membraan in plaats van door het proton kanaal van Complex V. De ineenstorting van de mitochondriale membraanpotentiaal leidt tot een snelle verbruik van energie en zuurstof, zonder dat de vorming van ATP. FCCP behandeling kan worden gebruikt om het reservewiel ademhalingscapaciteit cellen te berekenen. Onderhoud van reserveonderdelen ademhalingscapaciteit onder stressomstandigheden is essentieel voor celoverleving. Dit vermogen wordt bepaald door verschillende factoren, zoals de beschikbaarheid van substraat en de functionele capaciteit van de bij de ETC enzymen De derde injectie is een combinatie van Rotenon een Complex I-remmer, en Antimycin A, een complex III-remmer. Deze combinatie wordt afgesloten mitochondriale respiratie en OCR waargenomen afnemen als gevolg van verminderde mitochondriale functie (figuur 5C). Tolerogene moDCs weergegeven hogere basale OCR niveaus dan volwassen moDCs (figuur 5D). Daarnaast tolerogene, LPS-tolerogene, en onvolwassen moDCs toonde verhoogde reservecapaciteit respiratoire capaciteit in vergelijking met volwassen moDCs (Figuur 5E). Metabole karakterisering van moDCs Omdat melkzuur en protonen zijn vrijgemaakt uit cellen gedurende glycolyse, de glycolytische activiteit van moDCs analyseerden we door het uitvoeren van een real-time analyse van het percentage van extracellulaire aanzuring (ECAR) (Figuur 6B). In aanwezigheid van glucose, de glycolytische snelheid van moDCs toegenomen in vergelijking met de basale stadium, metvolwassen moDCs vertonen hoger glycolytische tarief dan onvolwassen moDCs (figuur 6D). Tolerogene en onvolwassen moDCs hadden hogere maximale glycolyse (geïnduceerd door oligomycin in aanwezigheid van glucose) in vergelijking met LPS behandelde moDCs (figuur 6B). De glycolytische capaciteit van tolerogene en onvolwassen moDCs was hoger dan volwassen moDCs (figuur 6E). In tegenstelling tot hun hoge glycolytische tarief, glycolytische reserve was de laagste in de volgroeide moDCs (figuur 6F). <img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/54128/54128fig1.jpg" /> Figuur 1:. Zuivering monocyten uit perifeer bloed (A) 25 ml bloed wordt zorgvuldig laag aangebracht op 15 ml Ficoll per 50 ml tube vóór centrifugatie. PBMC&#39;s worden geconcentreerd in een laag onder het plasma na dichtheidscentrifugatie. (B) PBMC geïncubeerd met microkralen die conj<html> ugated menselijke CD14-antilichamen (isotype: muis IgG2a) monoklonale. en vervolgens geladen op een kolom die is geplaatst in het magnetische veld van een Separator om CD14 + monocyten te isoleren <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54128/54128fig1large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a> <img alt="Figuur 2" src="/files/ftp_upload/54128/54128fig2.jpg" /> Figuur 2: morfologische analyse van moDCs. (A) 200 ng / ml GM-CSF en IL-4 wordt toegevoegd aan gezuiverde CD14 + monocyten op dag 0, 4 en 6 onvolgroeide moDCs genereren; en (B) een bijkomende stap van stimulering met 100 nM vitamine D3 en 10 nM dexamethason op dag 5 genereert tolerogene moDCs. Onrijpe moDCs en tolerogene moDCs zijn gestimuleerd met 1 ug / ml LPS op dag 6 genereren (C) mature moDCs en (D) LPS-tolerogene moDCs.TTP&#39;s: //www.jove.com/files/ftp_upload/54128/54128fig2large.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; Klik hier om een ​​grotere versie van deze figuur te bekijken. <img alt="figuur 3" src="/files/ftp_upload/54128/54128fig3.jpg" /> Figuur 3:. Surface Marker Karakterisering door Flowcytometrie Expressie niveaus van oppervlaktemerkers HLA-DR, CD80, CD83, CD86, CD11, CD14, BDCA3 en LT3 in tolerogene (groen), LPS-tolerogene (zwart), onrijpe (rood), mature (blauw) moDCs. Isotype controles worden grijs weergegeven. Individuele histogram voor elk type cel is uitgezet met Y-as celgetal tegen X-as log van fluorofoor intensiteit en bedekt. Alle histogrammen zijn representatief voor vier onafhankelijke experimenten. Dit cijfer is gewijzigd ten opzichte van J Immunol 194 (11), 5174-5186, doi: 10,4049 / jimmunol.1303316 (1 juni 2015). Gereproduceerd en gepubliceerd met auteursrechtelijke toestemming. Copyright 2015. De Amerikaanse Vereniging vanImmunologen, Inc. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54128/54128fig3large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a> <img alt="figuur 4" src="/files/ftp_upload/54128/54128fig4.jpg" /> Figuur 4: Functionele karakterisering van moDCs. (A) Kwantificering van alloproliferation frequentie van CD4 + T-cellen geïnduceerd door co-kweek met steeds tolerogene (TOL en groen), LPS-tolerogene (L-TOL, zwart), onrijpe (IMM, rood) en volwassen (MAT ; blauw) moDCs. De gegevens werden verzameld uit vier onafhankelijke experimenten; bedoel + SEM Statistische verschillen tussen alle moDCs versus volwassen moDCs werden geanalyseerd door twee-weg ANOVA met Dunnett meervoudige vergelijking post-test. (B) Cytokine analyse van IFN-Γ (linker paneel), IL-12p40 (middelste paneel) en Il- 10 (rechtervensterl) in supernatanten van alloreactions tussen CD4 + T-cellen co-gekweekt met toenemende aantallen of tolerogene (groen), onrijpe (rood) of volwassen (blauw) moDCs. Gegevens werden verzameld van zes onafhankelijke experimenten; gemiddelde ± SEM (C) CD4 + T-cellen alloproliferation en regulerende T-cellen geïnduceerd door uitbreiding co-cultuur met volwassen moDCs bij aanwezigheid van steeds tolerogene moDCs. Linker Y-as frequentie van CD4 + T-celproliferatie. Rechter Y-as frequentie van CD25 high Foxp3 + cellen gated op proliferatieve CD4 + T-cellen. De gegevens werden verzameld uit drie onafhankelijke experimenten; gemiddelde ± SEM Statistische verschillen tussen aanwezigheid versus afwezigheid van tolerogene moDCs werden geanalyseerd door one-way ANOVA met Dunnett meervoudige vergelijkingstest nameting. (D) CD4 + T-cellen alloproliferation (links) en frequentie van CD25highFoxP3 + cellen (rechts) geïnduceerd door co- cultuur met tolerogene moDCsin de aanwezigheid van toenemende aantallen rijpe moDCs. De gegevens werden verzameld van twee naar drie onafhankelijke experimenten; gemiddelde ± SEM Statistische verschillen tussen de aanwezigheid versus afwezigheid van volwassen moDCs door twee-weg ANOVA werden geanalyseerd met Dunnett meervoudige vergelijking post-test. Dit cijfer is gewijzigd ten opzichte van J Immunol 194 (11), 5174-5186, doi: 10,4049 / jimmunol.1303316 (1 juni 2015). Gereproduceerd en gepubliceerd met auteursrechtelijke toestemming. Copyright 2015. De Amerikaanse Vereniging van immunologen, Inc. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54128/54128fig4large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a> <img alt="figuur 5" src="/files/ftp_upload/54128/54128fig5.jpg" /> Figuur 5: Analyse van mitochondriale activiteit van moDCs. (A) Niveaus van mitochondriale membraanpotentiaal (Red CMXRos) in moDCs werden verkregen door flage cytometrische analyse. De gegevens van vier onafhankelijke experimenten werden samengevoegd. De gemiddelde ± SEM (B) Schematische weergave van een real-time mitochondriale ademhaling. OCR ze vanuit basale ademhaling en na toevoeging van oligomycin (complex V remming), FCCP (maximale ademhaling inductie) en rotenon / antimycin Een mengsel (elektronentransportketen [ETC] inhibitie). De mitochondriale SRC (maximale basale afgetrokken maximale ademhaling) is afgeleid van de OCR kromme. (C) Representatieve kinetisch onderzoek van mitochondria OCR (pmol / min) in tolerogene (TOL, groen), LPS-tolerogene (L-TOL, zwart) , onvolwassen (IMM, rood) en volwassen (MAT, blauw) moDCs door achtereenvolgende toevoeging van oligomycin (Olig), FCCP en rotenon / antimycin A (Rot-AA). (D) OCR kwantificering van basale ademhaling van moDCs en ( E) te sparen respiratoire capaciteit van moDCs. De gegevens werden verzameld van vijf onafhankelijke experimenten. Gemiddelde ± SEM. Dit cijfer is gewijzigd ten opzichte van J Immunol 194 (11), 5174-5186, doi: 10,4049 / jimmunol.1303316 (1 juni 2015). Gereproduceerd en gepubliceerd met auteursrechtelijke toestemming. Copyright 2015. De Amerikaanse Vereniging van immunologen, Inc. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54128/54128fig5large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a> <img alt="figuur 6" src="/files/ftp_upload/54128/54128fig6.jpg" /> Figuur 6: Metabolic Karakterisering van moDCs. (A) Schematische weergave van real-time glycolyse. ECAR obv basale ECAR, waarbij de cellen in glucose-vrij medium, gevolgd door de toevoeging van glucose (glycolyse inductie) geïncubeerd, oligomycin (welke maximale cell glycolyse en complexe V remming induceert) en tenslotte 2-deoxy-D- glucose(Glycolyse remming). Glycolytische rate (glycolyse inductie afgetrokken voor basale ECAR), glycolytische capaciteit (maximale glycolyse afgetrokken voor basale ECAR) en glycolytische reserve (maximale glycolyse afgetrokken voor glycolyse inductie) zijn afgeleid van de ECAR curve. (B) Vertegenwoordiger kinetische studie van de glycolyse-afhankelijke ECAR (mijl / min) in tolerogene (TOL, groen), LPS-tolerogene (L-TOL, zwart), onvolwassen (IMM, rood), en volwassen (MAT, blauw) moDCs door achtereenvolgende toevoeging van glucose (Gluc), oligomycin (Olig), en 2-DG. (C) Bars tonen basale ECAR niveaus (D) glycolytische rate (E) glycolytische capaciteit en glycolytische reserve van moDCs (F). De gegevens werden verzameld uit drie onafhankelijke experimenten; bedoel 6 SEM. Statistische verschillen werden geanalyseerd door one-way ANOVA met Tukey meervoudige vergelijking na de test. Dit cijfer is gewijzigd ten opzichte van J Immunol 194 (11), 5174-5186, doi: 10,4049 / jimmunol.1303316 (1 juni 2015). Gereproduceerd en gepubliceerd met auteursrechtelijke toestemming. Copyright 2015. De Amerikaanse Vereniging van immunologen, Inc. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54128/54128fig6large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>

Immature dendritische cellen kunnen selectief worden gedifferentieerd in tolerogeen of rijpe dendritische cellen om het evenwicht tussen immuniteit en tolerantie te reguleren. Dit werk presenteert een manier om vanuit onrijpe, uit monocyten afgeleide dendritische cellen (moDC's) in vitro tolerogeen en rijpe moDC's te genereren die verschillen in metabolische fenotypen.

Generatie van onrijpe, Ouder en tolerogene dendritische cellen met verschillende Metabolic Phenotypes

Immune response results from a complex interplay between the antigen non-specific innate immune system and the antigen specific adaptive immune system. ...

Het algemene doel van dit protocol is om tolerogeen en volwassen dendritische cellen uit monocyten te genereren voor experimenten of vaccinontwikkeling. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen op het gebied van immunologie door een model te bieden om de ontwikkeling, rijping en antigeenpresentatie van dendritische cellen te bestuderen. Het grote voordeel van deze techniek is dat het de generatie van grote aantallen dendritische cellen in vitro voor experimenten mogelijk maakt.Begin met monocytenverrijking door 20 microliters van eerder bereide perifere mononucleaire bloedcellen, of PBMC-celsuspensie, te mengen met 20 microliters tripan blauw, om het aantal levende cellen te tellen met behulp van een cytometer. Centrifugeer vervolgens de celsuspensie. Zuig de supernatant volledig af en suspendeer het celpellet opnieuw in een concentratie van 80 microliters kleuringsbuffer voor 10 tot de zevende cellen.Voeg 20 microliters CD-4 microkralen toe per 10 tot de zevende cellen. Meng goed en incubeer de cellen gedurende 15 minuten bij vier graden Celsius. Was de cellen met één milliliter kleuringsbuffer per 10 tot de zevende cellen en centrifugeer de cellen.Zuig de supernatant volledig af en suspendeer het celpellet opnieuw. Verkrijg een mediumkolom voor maximaal twee keer 10 tot de achtste totaal aantal cellen en plaats de kolom in het magnetische veld van de separator. Spoel vervolgens de kolom met 500 microliters kleuringsbuffer.Pipetteer de celsuspensie op de kolom en verzamel de ongelabelde cellen die door de kolom gaan in een 15-milliliter buis. Vervang een nieuwe 15-milliliter buis onder de kolom en was de kolom drie keer met 500 microliters kleuringsbuffer. Zorg ervoor dat de kolomreservoir leeg is voordat u nieuwe kleuringsbuffer tussen de wasbeurten toevoegt.Verwijder de kolom uit de separator en plaats deze op een verse 15-milliliter buis. Pipetteer één milliliter kleuringsbuffer op de kolom en spoel onmiddellijk de magnetisch gelabelde cellen uit door de plunjer stevig in de kolom te duwen. Herhaal vervolgens de magnetische scheidingsstappen met de illudeerde fractie in een nieuwe kolom om de zuiverheid van de CD14 plus cellen te verhogen.Zaai vier sets CD14 plus monocyten in een concentratie van nul punt drie tot nul punt vijf keer 10 tot de zesde per milliliter celcultuurmedium van IL-4 in zes welbplaten. Incubeer de cellen in een weefselkweekincubator bij 37 graden Celsius met vijf procent CO2. Op dag vier verwijdert u 850 microliters medium uit de cultuur en centrifugeert u.Zuig de supernatant af en suspendeer het pellet in één milliliter celcultuurmedium. Voeg het cellenmengsel terug toe aan de cultuur. Op dag vijf voegt u één microliter vitamine D3-voorraad en één microliter dexamethazon-voorraad per één liter medium toe aan twee van de sets, om tolerogeen moDCs te genereren.Op dag zes voegt u 200 nanogram per milliliter GMCSF en 200 nanogram per milliliter IL-4 toe aan alle sets. Voeg één microgram per milliliter LPS toe aan een van de sets behandeld met alleen GMCSF en IL-4 om volwassen moDCs te genereren. Voeg één microgram per milliliter LPS toe aan een set van de tolerogeen moDCs om LPS tolerogeen moDCs te genereren.Ten slotte, op dag zeven, oogst u de verschillende soorten moDCs door de kweekschaal te spoelen met PVS EDTA. De onvolgroeide moDCs werden gegenereerd door GMCSF en IL-4 toe te voegen aan gezuiverde CD-14 plus monocyten op dagen nul, vier en zes. Toevoeging van vitamine D3 en dexamethazon na GMCSF en IL-4 resulteerde in de differentiatie van onvolgroeide moDCs in tolerogeen moDCs.LPS werd toegevoegd om de rijping van onvolgroeide moDCs tot volwassen moDCs te induceren. En tolerogeen moDCs werden gestimuleerd met LPS om weerstand tegen rijping te verifiëren. Een analyse van DC-oppervlaktemarkers onthulde dat volwassen moDCs de hoogste niveaus van rijpingsmarkers HLA-DR, CD80, CD83 en CD86 tot expressie brengen.Omgekeerd vertoonden tolerogeen moDCs een verhoogde expressie van CD14, BDCA3 en immunoglobuline-achtige transcripten in vergelijking met onvolgroeide en volwassen moDCs. Met behulp van rood CMXRos om de mitochondriale activiteit weer te geven, werd waargenomen dat tolerogeen moDCs een hogere mitochondriale activiteit hadden in vergelijking met de andere moDC-gedifferentieerde subtypes. Na de ontwikkeling van deze techniek werd de weg vrijgemaakt voor onderzoekers op het gebied van immunologie om metabolische kenmerken in dendritische cellen te verkennen voor de ontwikkeling van vaccins en immunotherapie.

generation-immature-mature-tolerogenic-dendritic-cells-with-differing

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Deze video toont de procedure voor de differentiatie van myeloïde dendritische cellen van de muis beenmerg. Isolatie van de muis scheenbeen en dijbeen, en verwerking van het beenmerg worden aangetoond. Foto's tonen celmorfologie voor en na de differentiatie, en figuren afbeelden cel fenotype en IL-12 productie na rijping met behulp van CpG worden weergegeven.

Cultuur van myeloïde dendritische cellen uit beenmerg precursors

Antigeen presentatie in secundaire lymfoïde organen door de dendritische cellen is cruciaal voor de opening van het T-cel gemedieerde adaptieve immuunrespons. Hier laten we zien de cultuur van beenmerg afgeleide dendritische cellen van muizen, activering, en de etikettering voor 2-photon imaging.

Generatie van beenmerg afgeleide Murine dendritische cellen voor gebruik in twee-foton Imaging

This video demonstrates the generation of immature, mature, and tolerogenic dendritic cells, or DCs, from human monocytes. The incubation of monocytes with growth factors and cytokines leads to the production of immature DCs. In response to immune regulatory molecules, immature DCs differentiate into tolerogenic and mature DCs.

Generation of Immature, Mature, and Tolerogenic Dendritic Cells from Monocytes

This video demonstrates a method of converting dendritic cells (DCs) to tolerogenic DCs (TolDCs) using an immunomodulatory pharmacological agent. This conversion is confirmed by evaluating the TolDC function through their immunosuppressive effect on CD4+ T cells.

Effect of an Immunomodulatory Pharmacological Agent on the Interaction Between Dendritic Cells and CD4+ T Cells

De meest gebruikte methode voor het genereren van grote aantallen autologe dendritische cellen (DCs) voor gebruik bij tumor immunotherapie beschreven. De methode maakt gebruik van IL-4 en GM-CSF om DCs te onderscheiden van monocyten. De onrijpe DCs worden gestimuleerd om te rijpen en daarna beladen met antigenen voordat ze geïnjecteerd terug in de patiënt.

Voorbereiding van de Tumor antigenen opgeladen Mature dendritische cellen voor immunotherapie

Beendermergcellen gekweekt met granulocyte macrophage colony stimulerende factor (GM-CSF) genereren een heterogene cultuur die macrofagen en dendritische cellen (DC's) bevat. Deze methode benadrukt het gebruik van MHCII en hyaluronan (HA) binding om macrofagen te onderscheiden van de DC's in de GM-CSF cultuur. Macrofagen in deze cultuur hebben veel overeenkomsten met alveolaire macrofagen.

Generatie en identificatie van GM-CSF Afgeleide alveolaire-achtige macrofagen en dendritische cellen van de muis beenmerg

Hier bieden we een methode voor het vaststellen en isoleren van grote aantallen van GM-CSF gedreven myeloïde cellen met hoge snelheid cel sorteren. Vijf verschillende populaties (gemeenschappelijk myeloïde voorlopercellen, granulocyt/macrofaag progenitoren monocyten, monocyt-afgeleide macrofagen en monocyt-afgeleide DCs) kunnen worden geïdentificeerd op basis van Ly6C en CD115 expressie.

Generatie van grote aantallen van myeloïde voorlopercellen en dendritische cel precursoren uit lymfkliertest beenmerg met behulp van een nieuwe cel sorteren van strategie

Hier presenteren we een protocol te ontwikkelen en karakteriseren van tolerogenic dendritische cellen (TolDCs) en evalueren van hun immunotherapeutische nut.

Ontwikkeling en functionele karakterisering van lymfkliertest Tolerogenic dendritische cellen

Hier bieden we een protocol voor het screenen van potentiële transcriptiefactoren die betrokken zijn bij de ontwikkeling van dendritische cel (DC) met behulp van lentivirale transductie van shRNA om stabiele knockdown-cellijnen te verkrijgen voor in vitro DC-differentiatie.

Studie van dendritische celontwikkeling door korte haarspeld RNA-gemedieerde gen knockdown in een hematopoëtische stam en voorlopercellijn in vitro

Er wordt een uniek, uitgebreid protocol gepresenteerd voor het genereren van gedesialyleerde humane monocyt-afgeleide dendritische cellen (mo-DC's) uit geïsoleerde perifere mononucleaire bloedcellen (PBMC's) met behulp van een sialidasebehandeling. Verder worden methoden beschreven om de fenotypische en functionele karakterisering van mo-DC's te beoordelen en te evalueren hoe behandeling met sialidase het rijpingsniveau van mo-DC's verbetert.

Generatie van monocyt-afgeleide dendritische cellen met verschillende gesialyleerde fenotypes

We beschrijven een procedure om het vermogen van farmacologische middelen te beoordelen om tolerogene dendritische cellen te genereren uit naïeve van monocyten afgeleide dendritische cellen in vitro en om hun potentie te valideren door autologe regulerende T-celgeneratie te genereren.

Een eenvoudige en efficiënte methode voor het testen van immunomodulerende middelen voor het genereren van tolerogene dendritische cellen uit menselijke CD14+ -monocyten

Leer een protocol om tolerogene en rijpe dendritische cellen te genereren uit monocyt voor immunologisch onderzoek. Deze methode maakt in-vitro-productie van hoge aantallen cellen met verschillende metabole fenotypes mogelijk.

Generatie van onrijpe, Ouder en tolerogene dendritische cellen met verschillende Metabolic Phenotypes

Meer video's verkennen