Name: Methoden voor acute en subacute muizen achterbeen ischemie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-06-21T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 57 s
Description: Leer methoden voor acute en subacute achterbeenischemie bij muizen met ameroid-constrictoren. Deze techniek modelleert perifere vaatziekten en stelt onderzoekers in staat de ernst en timing van ischemie te controleren.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Deze studie werd ondersteund door NIH-subsidies R21HL118661, R56HL124444 en R01HL124444 aan CDK, en door NIH-subsidies R00HL103797 en R01HL125695 aan JMM.

Alle dierproeven werden uitgevoerd volgens protocol door de hertog Institutional Animal Care en gebruik Comite goedgekeurd. Mannelijke muizen werden in dit onderzoek, hoewel beide geslachten kan worden gebruikt als geïndiceerd voor de wetenschappelijk doel van de studie. 1. Ontharing <ol><li> Voorafgaand aan inductie van anesthesie, het opzetten van een pre-operatieve voorbereiding gebied dat bestaat uit een overdekte verwarmingselement ingesteld op 37 ° C en een neuskegel poort waarop continue stroom van isofluraan. </li><li> Plaats de muis in de anesthesie inductie kamer. Stel de O 2 flowmeter tot 1 l / min en isofluraan tot 1-3%. OPMERKING: Anesthesie wordt typisch geïnduceerd in een 25 g muis met 2% isofluraan. </li><li> Controleer de muis stimulus respons door zachtjes schommelen van de kamer en het observeren van het ontbreken van een oprichtende reflex. </li><li> Spoel de kamer met O 2 om de isofluraan voorafgaand aan de opening te wissen. Snel naar de muis om de verwarming pad en sluit deze aan isofluraan via de neuskegel. </li><li> Stel de isofluraan 1,5%. Controleer de stimulus reactie van pedaal reflex (teen knijpen). </li><li> Toepassen oftalmische smeermiddel royaal beide ogen te drogen tijdens de operatie te voorkomen. </li><li> Scheer het haar van beide achterpoten met behulp van een kleine elektrische trimmer. Houd de huid strak tijdens het scheren te voorkomen verscheurende de huid. </li><li> Solliciteer voorverwarmde ontharingscrème en laat zitten voor 1 min. Veeg weg met een vochtig gaasje. </li><li> Voor chirurgische procedure op een later tijdstip, schakelt u de isofluraan en beweeg de muis om een ​​lege papieren handdoek gevoerd herstel kooi om de muis te verzekeren niet te zuigen de kooi beddengoed. Monitor het dier totdat het in staat is borstligging handhaven. Zo niet, beweeg de muis om de chirurgische tafel. LET OP: De ontharing kan de huid irriteren en aantasten perfusie metingen. Het wordt aanbevolen om te wachten 1-2 dagen na het ontharen van het dier voordat performing een pre-operatieve perfusie scan of het uitvoeren van een operatie. </li></ol> 2. Pre-Surgical Voorbereiding <ol><li> Gebruik de volgende gereedschappen tijdens deze procedure; kleine rechte chirurgische schaar, 2 fijne punt schuine pincet, kleine Graefe pincet, naald driver tang, 3 oprolmechanismen, kleine lente schaar, en fine-tip wattenstaafjes. </li><li> Steriliseren alle gereedschappen met behulp van een autoclaaf voorafgaand aan de start van de operatie. Gebruik een hete kraal sterilisator voor en tussen elke chirurgische procedure tot 5 dieren. Steriliseren extra chirurgisch instrument pakketten voor operaties van de groepen groter dan 5. </li><li> Bereid een steriele chirurgische veld, bestaande uit een overdekte verwarming pad en een isofluraan poort. Voer alle werkzaamheden in het kader van een 10 stereo dissectie microscoop. </li><li> Verdoven en de voorbereiding van de muis, zoals beschreven in de stappen 1,1 tot 1,5. </li><li> Controleer of de muis is volledig verdoofd en plaats in een liggende positie op de chirurgische tafel. Secure beide benen met behulp van chirurgische tape. &lt;/ Li&gt; <li> Bij gebruik van een temperatuur-gecontroleerde verwarming pad, bevestig de temperatuursensor en zet hem aan de basis van de chirurgische platform met behulp van chirurgische tape om ervoor te zorgen dat het niet per ongeluk wordt uitgetrokken tijdens de procedure. </li><li> Reinig de incisie site met behulp van 3 afwisselend povidonjood en alcohol doekjes. Bedek het dier met een steriele chirurgische doek en een gat aan de incisie bloot. </li></ol> 3. Inductie van Limb ischemie <ol><li> Gebruik een scalpel een eerste insnijding langs het midden van de mediale dij, loopt vanaf de knie naar de buik, en verlengen de incisie ongeveer 1 cm met een fijne schaar (figuur 1A). </li></ol><img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/54166/54166fig1.jpg" /> Figuur 1. Chirurgische Site en Vasculaire anatomische oriëntatiepunten voor Mouse achterbeen ischemie Surgery. (A) Externe weergave vanhet achterbeen van een muis in rugligging. De gearceerde lijn geeft de incisie site om de achterbeen ischemie procedures behoren uit te voeren. (B) Uitzicht op de proximale muis achterbeen vaatstelsel. Het proximale uiteinde van de femorale arterie (FA) komt voort uit onder het inguinale ligament (IL). Het distale uiteinde van de FA zich op de vertakking in de popliteale arterie (PA) en saphena ader (SA). De belangrijkste collaterale arteriën off van de FA zijn de laterale circumflex dijbeenslagader (LCFA), het proximale caudale dijbeenslagader (PCFA), en de oppervlakkige caudale epigastrische slagader (SCEA). De femorale ader (FV) loopt naast de FA en veneuze takken parallel aan de grote arteriële vertakkingen zien. Sterretjes (*) geven de proximale en distale locaties voor plaatsing van ameroid constrictors of ligaturen, naargelang subacute of acute ischemie wordt veroorzaakt. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54166/54166fig1large.jpg" target="_blank">Gelieve cli</a>ck hier om een ​​grotere versie van deze figuur te bekijken. <ol start="2"><li> Met behulp van een tang, opent de incisie en bloot de membraan dat de lies vetweefsel (IFT). </li><li> Gebruik gesloten tang, doordringen door het membraan in de scheiding tussen de IFT en de buik. Voorzichtig de druk op de tang om de IFT scheiden van de buikspieren, waardoor de neurovasculaire bundel eronder. Let op de proximale en oppervlakkige staartvin takken zo belangrijk anatomische oriëntatiepunten (Figuur 1B). </li><li> Plaats een retractor en trek de buik weefsel proximaal aan de proximale ameroid constrictor of ligatie site, net proximaal van de laterale circumflex dijbeenslagader (Figuur 1B) bloot te leggen. De laterale circumflex slagader ligt ongeveer 5 mm proximaal van de proximale caudale en oppervlakkige bloedvaten. <ol><li> Plaats twee oprolmechanisme in het distale deel van de incisie, een mediale en een laterale, aan de IFT distaal van het trekkenoperatieplaats naar het operatiegebied te verbreden. </li></ol></li><li> Gebruik twee fijne tang om de buitenste membraan dat de neurovasculaire bundel te verwijderen. Steek de ene helft van de fijne tang tip tussen de ader en slagader, glijden de tang tip onder het membraan dat hen samenbindt. Sluit de tang en voorzichtig losrukken het membraan. </li><li> Steek de punt van een gesloten forceps tussen de ader en slagader en een spleet daartussen door het vrijgeven van de druk op de tang. Herhaal deze techniek om een ​​spleet tussen de slagader en zenuw creëren. </li><li> Voor subacute ischemie, plaats een ameroid constrictor op het proximale femorale slagader (figuur 2). <ol><li> De proximale ameroid constrictor installeren, schuift het uiteinde van een pincet onder de femorale slagader te isoleren van de neurovasculaire bundel. Gebruik een tweede set angled- tang om greep de rand van de constrictor en begeleiden onder de dijbeenslagader. </li><li> Leg de dijbeenslagader in de sveel in de constrictor. Herhaal de distale constrictor, positionering onmiddellijk proximaal van de vertakking van de femorale slagader naar de popliteale slagader en vena slagader (figuur 2). </li></ol></li></ol><img alt="Figuur 2" src="/files/ftp_upload/54166/54166fig2.jpg" /> Figuur 2. Plaatsing van ameroid Constrictors en Ligaturen. (A) Voorbeeld van twee ameroid constrictors geplaatst op de dij slagader naar subacute achterbeen ischemie induceren. Het proximale constrictor wordt geplaatst net proximaal van de laterale circumflex dijbeenslagader (LCFA). Het distale constrictor is geplaatst juist proximaal van de vertakking van de knieholte (PA) en vena slagaders (SA). Constrictors zijn geïnstalleerd met de gleuf naar boven om de slagader te verzekeren goed is ingesteld binnen de constrictor. (B) Voorbeeld van ligaturen van de dijbeenslagader tot acute achterbeen ischemie induceren. Ligatures (gele pijlen) zodanig geplaatst dat ze flankeren de positie van de constrictors in paneel (B), en de dij slagader wordt doorsneden tussen elke set van twee ligaturen (sterretjes). Bar, 1 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54166/54166fig2large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a> <ol start="8"><li> Voor acute ischemie van de ledematen, afbinden en doorsnijden het proximale dijbeen slagader. <ol><li> De femorale slagader doorsnijden, draad 7 - O hechtdraad onder de arterie proximaal van de positie van de proximale constrictor (zie stap 3,7) en ligeren. Bind een tweede ligatuur ongeveer 1 mm distaal van de eerste. </li><li> Gebruik de lente een schaar om de slagader tussen de twee ligaturen doorsnijden. Voor de distale arteriële doorsnijding Herhaal deze stappen, het plaatsen van twee ligaturen ongeveer 1 mm van elkaar, net proximaal van de splitsing van de femorale slagader in de arteria poplitea en de vena slagader, maar ervoor te zorgen dat ze zijn distale aan de oppervlakkige caudal epigastrische slagader (zie figuur 1) </li></ol></li><li> Sluit de incisie middels onderbroken 5 - O Vicryl hechtingen. </li></ol> 4. perfusie beeldvorming <ol><li> Verplaats de muis naar een 37 ° C verwarming pad ingesteld onder de laser doppler perfusie imager (LDPI) en sluit via een neuskegel aan de isofluraan bron. Indien geen temperatuurbewaking beschikbaar is, laat 5 minuten voor de muis opwarmen tot 37 ° C. </li><li> Schakel de imager en de lancering van het beeld capture software. </li><li> Klik op het pictogram &#39;Nieuwe single Image&#39; om het venster &#39;Scanner instellen&#39; te openen. Stel de &#39;Scanformaat&#39; naar &#39;groot&#39; en de &#39;Scan Speed&#39; naar &#39;4 ms / pixel&#39;. Stel de scan gebied door het veranderen van de x- en y-waarden onder de &#39;Scan Area (eenheden) &quot;ruit. </li><li> Klik op het tabblad &#39;Video en Distance&#39; om de video-feed te bekijken, en leg de muis aan te passen in de scan gebied aangegeven door een rode contour. Klik op &#39;Auto Distance&#39; te kalibrerende afstand van de laser aan de patiënt. Klik op &#39;Volgende&#39; om het venster &#39;Subject Details&#39; te openen. </li><li> Voer de vakinformatie en alle relevante opmerkingen. Klik op de knop &#39;Volgende&#39; om verder te gaan om het scannen venster. </li><li> Klik op de &#39;Start Measurement&#39; knop om de &#39;Bevestigen of Override Scan Distance&#39; opent dialoog. Klik op &#39;OK&#39; om de scan op afstand te bevestigen. Acht het scanproces starten en looptijd van 4-8 min afhankelijk van de grootte van het scangebied. </li><li> Nadat het scannen is voltooid, let op de &#39;Opslaan als&#39; venster. Noem het bestand en sla het op. </li><li> Schakel de isofluraan en beweeg de muis om een ​​lege herstel kooi en controleren totdat het dier in staat is om borstligging handhaven. Plaats nooit een muis te herstellen van anesthesie in een kooi met andere muizen. </li><li> Open de beeldanalyse software. Klik op het pictogram &#39;Open&#39; en blader naar en open het beeld voor analyse. Op het venster bestand, observeert de flux,foto en kleurenbeelden van de muis. </li><li> Om de regio van belang (ROI) op de flux afbeelding te markeren, klikt u op het pictogram &#39;Show ROI&#39;. Klik vervolgens op de &#39;Add Polygon&#39; ingedrukt en sleep de cursor over het niet-chirurgische ledematen om de ROI te trekken. Klik met de rechtermuisknop om de vorm te sluiten. Selecteer &#39;Add Polygon&#39; weer en trek een bijpassende ROI rond de chirurgische ledemaat. </li><li> Klik op de &#39;Statistics&#39; icoon te openen de &#39;Image ROI Statistiek Resultaten (PU)&#39; venster. Let op de procentuele verschil in beweging in de kolom &#39;Flux%&#39;. OPMERKING: De eerste ROI getrokken zal als referentie dienen. NB: Voorafgaand aan elke volgende perfusiescan volg de stappen in hoofdstuk 1 geschetst om de muis te verdoven en in stappen 4,1-4,11 het imago van de dieren. </li></ol>

<ol><li>Criqui, M. H., Aboyans, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+peripheral+artery+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of peripheral artery disease.</a> Circ. Res. 116, 1509-1526 (2015).</li>
<li>Thukkani, A. K., Kinlay, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endovascular+intervention+for+peripheral+artery+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Endovascular intervention for peripheral artery disease.</a> Circ. Res. 116, 1599-1613 (2015).</li>
<li>Vartanian, S. M., Conte, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+intervention+for+peripheral+arterial+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Surgical intervention for peripheral arterial disease.</a> Circ. Res. 116, 1614-1628 (2015).</li>
<li>Bonaca, M. P., Creager, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+treatment+and+current+management+of+peripheral+artery+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Pharmacological treatment and current management of peripheral artery disease.</a> Circ. Res. 116, 1579-1598 (2015).</li>
<li>Conte, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+and+rationale+of+the+PREVENT+III+clinical+trial%3A+edifoligide+for+the+prevention+of+infrainguinal+vein+graft+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Vasc+Endovascular+Surg%22%5BJournal%5D)">Design and rationale of the PREVENT III clinical trial: edifoligide for the prevention of infrainguinal vein graft failure.</a> Vasc Endovascular Surg. 39, 15-23 (2005).</li>
<li>Pomposelli, F. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+decade+of+experience+with+dorsalis+pedis+artery+bypass%3A+analysis+of+outcome+in+more+than+1000+cases%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vasc.+Surg%22%5BJournal%5D)">A decade of experience with dorsalis pedis artery bypass: analysis of outcome in more than 1000 cases.</a> J. Vasc. Surg. 37, 307-315 (2003).</li>
<li>Willigendael, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smoking+and+the+patency+of+lower+extremity+bypass+grafts%3A+a+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vasc.+Surg%22%5BJournal%5D)">Smoking and the patency of lower extremity bypass grafts: a meta-analysis.</a> J. Vasc. Surg. 42, 67-74 (2005).</li>
<li>Schillinger, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Balloon+angioplasty+versus+implantation+of+nitinol+stents+in+the+superficial+femoral+artery%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Balloon angioplasty versus implantation of nitinol stents in the superficial femoral artery.</a> N. Engl. J. Med. 354, 1879-1888 (2006).</li>
<li>Marmagkiolis, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((12-month+primary+patency+rates+of+contemporary+endovascular+device+therapy+for+femoro-popliteal+occlusive+disease+in+6%2C024+patients%3A+beyond+balloon+angioplasty%5BTitle%5D)+AND+%22Catheter.+Cardiovasc.+Interv%22%5BJournal%5D)">12-month primary patency rates of contemporary endovascular device therapy for femoro-popliteal occlusive disease in 6,024 patients: beyond balloon angioplasty.</a> Catheter. Cardiovasc. Interv. 84, 555-564 (2014).</li>
<li>Rosenfield, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trial+of+a+Paclitaxel-Coated+Balloon+for+Femoropopliteal+Artery+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Trial of a Paclitaxel-Coated Balloon for Femoropopliteal Artery Disease.</a> N. Engl. J. Med. 373, 145-153 (2015).</li>
<li>Tepe, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug-coated+balloon+versus+standard+percutaneous+transluminal+angioplasty+for+the+treatment+of+superficial+femoral+and+popliteal+peripheral+artery+disease%3A+12-month+results+from+the+IN.PACT+SFA+randomized+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Drug-coated balloon versus standard percutaneous transluminal angioplasty for the treatment of superficial femoral and popliteal peripheral artery disease: 12-month results from the IN.PACT SFA randomized trial.</a> Circulation. 131, 495-502 (2015).</li>
<li>Couffinhal, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+of+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Mouse model of angiogenesis.</a> Am. J. Pathol. 152, 1667-1679 (1998).</li>
<li>Niiyama, H., Huang, N. F., Rollins, M. D., Cooke, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+model+of+hindlimb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Murine model of hindlimb ischemia.</a> J Vis Exp. , (2009).</li>
<li>McClung, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skeletal+muscle-specific+genetic+determinants+contribute+to+the+differential+strain-dependent+effects+of+hindlimb+ischemia+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Skeletal muscle-specific genetic determinants contribute to the differential strain-dependent effects of hindlimb ischemia in mice.</a> Am. J. Pathol. 180, 2156-2169 (2012).</li>
<li>Dokun, A. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+quantitative+trait+locus+%28LSq-1%29+on+mouse+chromosome+7+is+linked+to+the+absence+of+tissue+loss+after+surgical+hindlimb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">A quantitative trait locus (LSq-1) on mouse chromosome 7 is linked to the absence of tissue loss after surgical hindlimb ischemia.</a> Circulation. 117, 1207-1215 (2008).</li>
<li>Rivard, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-dependent+impairment+of+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Age-dependent impairment of angiogenesis.</a> Circulation. 99, 111-120 (1999).</li>
<li>Hazarika, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+angiogenesis+after+hindlimb+ischemia+in+type+2+diabetes+mellitus%3A+differential+regulation+of+vascular+endothelial+growth+factor+receptor+1+and+soluble+vascular+endothelial+growth+factor+receptor+1%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Impaired angiogenesis after hindlimb ischemia in type 2 diabetes mellitus: differential regulation of vascular endothelial growth factor receptor 1 and soluble vascular endothelial growth factor receptor 1.</a> Circ. Res. 101, 948-956 (2007).</li>
<li>Couffinhal, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+collateral+vessel+development+associated+with+reduced+expression+of+vascular+endothelial+growth+factor+in+ApoE-%2F-+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Impaired collateral vessel development associated with reduced expression of vascular endothelial growth factor in ApoE-/- mice.</a> Circulation. 99, 3188-3198 (1999).</li>
<li>Tang, G. L., Chang, D. S., Sarkar, R., Wang, R., Messina, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+gradual+or+acute+arterial+occlusion+on+skeletal+muscle+blood+flow%2C+arteriogenesis%2C+and+inflammation+in+rat+hindlimb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vasc.+Surg%22%5BJournal%5D)">The effect of gradual or acute arterial occlusion on skeletal muscle blood flow, arteriogenesis, and inflammation in rat hindlimb ischemia.</a> J. Vasc. Surg. 41, 312-320 (2005).</li>
<li>Yang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+and+molecular+mechanism+regulating+blood+flow+recovery+in+acute+versus+gradual+femoral+artery+occlusion+are+distinct+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vasc.+Surg%22%5BJournal%5D)">Cellular and molecular mechanism regulating blood flow recovery in acute versus gradual femoral artery occlusion are distinct in the mouse.</a> J. Vasc. Surg. 48, 1546-1558 (2008).</li>
<li>Litvak, J., Siderides, L. E., Vineberg, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+experimental+production+of+coronary+artery+insufficiency+and+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+Heart+J%22%5BJournal%5D)">The experimental production of coronary artery insufficiency and occlusion.</a> Am. Heart J. 53, 505-518 (1957).</li>
<li>Bredee, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+ameroid+constrictor.+Preliminary+communication%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Surg.+Res%22%5BJournal%5D)">An improved ameroid constrictor. Preliminary communication.</a> J. Surg. Res. 9, 107-112 (1969).</li>
<li>McClung, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subacute+limb+ischemia+induces+skeletal+muscle+injury+in+genetically+susceptible+mice+independent+of+vascular+density%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vasc.+Surg%22%5BJournal%5D)">Subacute limb ischemia induces skeletal muscle injury in genetically susceptible mice independent of vascular density.</a> J. Vasc. Surg. , (2015).</li>
<li>Hellingman, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variations+in+surgical+procedures+for+hind+limb+ischaemia+mouse+models+result+in+differences+in+collateral+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Vasc.+Endovasc.+Surg%22%5BJournal%5D)">Variations in surgical procedures for hind limb ischaemia mouse models result in differences in collateral formation.</a> Eur. J. Vasc. Endovasc. Surg. 40, 796-803 (2010).</li>
<li>Kochi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+arterial+anatomy+of+the+murine+hindlimb%3A+functional+role+in+the+design+and+understanding+of+ischemia+models%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Characterization of the arterial anatomy of the murine hindlimb: functional role in the design and understanding of ischemia models.</a> PloS one. 8, e84047(2013).</li>
</ol>

De auteurs hebben geen belangenconflicten te melden.

Misschien wel de meest uitdagende stap in deze werkwijze is de scheiding van de dijbeenslagader van de femorale ader. De grotere diameter en dunnere wanden van de femorale ader vergeleken met die van de arterie de gevoeligheid voor doorboren en scheuren tijdens chirurgische manipulatie. De waarschijnlijkheid van het verstoren van de ader kan worden verminderd door het houden van de wond vochtig met een steriel wattenstaafje bevochtigd met PBS. Het is ook belangrijk dat alle tang worden geslepen, uitgelijnd en vrij van o...

Perifere slagaderziekte (PAD) is een belangrijke oorzaak van morbiditeit en mortaliteit in de ontwikkelde landen 1. PAD resultaten van atherosclerotische verstopping van de perifere slagaders die leidt tot ischemie met de daaruit voortvloeiende inspanning of rust pijn en soms niet-genezende zweren en gangreen dat amputatie noodzakelijk maken. Behandelingen die PAD is vooral gericht endovasculaire 2 of chirurgische revascularisatie 3, als in wezen geen effectieve medische behandelingen bestaan ​​4. Helaas, revascularisatie is vaak beperkt voordeel, zoals omleidingen hebben een hoge uitval (tot 50% binnen 5 jaar) 5 die zijn slechter in sommige populaties (bijvoorbeeld rokers, vrouwen, non-vene transplantaten) 6,7. Endovasculaire benaderingen, zoals angioplastie en stenting, worden eveneens aangetast door hoge restenose doses (meer dan 50% binnen 1 jaar), voornamelijk in femoropopliteale ziekte 8, hoewel het gebruik van drug-eluting ballonnen en stents resultaten 9-11 enigszins verbeterd. Om nieuwe behandelingen te ontwikkelen voor PAD is het essentieel om diermodellen die betrouwbaar de menselijke ziekte reproduceren ontwikkelen. Tot op heden het meest voorkomende type van PAD is de achterpoot ischemiemodel (HLI), dat meestal uitgevoerd bij muizen 12,13. In zijn meest algemene manifestatie model houdt chirurgische ligatie van de proximale en distale femorale slagader en de tussenliggende zijtakken gevolgd door excisie van het vaartuig, hetgeen resulteert in occlusie van de bloedstroom en inductie van acute ischemie van de ledematen. HLI wordt voornamelijk gebruikt om de angiogenese en arteriogenese responsen in perifere ledematen spierweefsel en de effecten van verschillende therapieën (bijvoorbeeld drugs, genafgifte, stamcellen) op deze reacties te bestuderen. Recentelijk heeft onze fractie dit model gebruikt om de rol van skeletspiercellen onderzoeken in de respons op ischemie en de effecten van genetische verschillen op de resultaten 14 ledematen. De HLI model huidige inzichten dat de vasculaire en spier respons op ischemie afhankelijk zijn genetica (dwz inteeltstam) 15, leeftijd 16, en de aanwezigheid of afwezigheid van andere ziekten of aandoeningen atherosclerose betrokken, waaronder diabetes mellitus 17 en gefaciliteerd hypercholesterolemie 18. Echter, een belangrijke zwakte van de traditionele HLI model is dat het een model van acute ischemie 12,13, terwijl menselijke PAD veroorzaakt chronische ischemie als gevolg van de geleidelijke ontwikkeling van occlusieve atherosclerotische laesies in de perifere slagaders. In een poging om deze zwakte te omzeilen, Tang en zijn collega&#39;s in eerste instantie ontwikkeld een rat model van geleidelijke dijbeen arteriële occlusie met behulp ameroid constrictors 19, en dezelfde groep die inmiddels developed een soortgelijke muismodel 20. Ameroid constrictors werden oorspronkelijk beschreven in 1950 in een hond model van chronische myocardiale ischemie 21,22. Deze toestellen hebben een buitenste metalen huls omhullen een binnenlaag van een hygroscopisch materiaal, gewoonlijk caseïne en, wanneer het om een ​​slagader induceren geleidelijk vatocclusie zij vocht uit de omringende weefsels. In de wijziging van het model, Yang et al. Constrictors geplaatst aan zowel de proximale en distale femorale slagader op plaatsen analoog aan de chirurgische ligatie plaatsen en ze geligeerd de zijtakken van de arteria femoralis, zoals in het traditionele model. In vergelijking met acute HLI, ameroid-constrictor geïnduceerde ischemie resulteerde in lagere expressie van inflammatoire en shear stress-afhankelijke genen, lagere bloeddoorstroming herstel 4-5 weken na de operatie, en minder spiernecrose 20. Op basis van deze observaties, was men van mening dat de geleidelijke arteriële occlusie zou een model van P biedenAD relevanter voor de menselijke ziekte. Met name in het oorspronkelijke rapport, effecten van ameroid-constrictor ischemie onderzocht alleen in C57BL / 6 muizen 19, die relatief resistent zijn tegen ischemie geïnduceerde spiernecrose 15 zijn. We hebben onlangs wijzigde de geleidelijke ischemie model verder en de gevolgen ervan in de meer ischemie-gevoelige BALB / c muizenstam 23 verkend. In de eerste manifestatie van het model plaatsten we constrictors zowel de proximale en distale femorale arterie maar liet al zijtakken intact. In een tweede, mildere wijziging, plaatsten we een enkele constrictor alleen op de proximale dij slagader en weer liet al kant-takken van de slagader intact. In beide modificaties van dit model hebben wij BALB / c-muizen, maar C57BL / 6 muizen, toonde aanzienlijke spiernecrose ondanks gelijke bloedstroom en vasculaire dichtheid. Vergelijkbaar met onze vorige studie 14, deze bevindingen blijkt dat ledematen spierenletsel wordt niet alleen beïnvloed door de bloedstroom, maar is voor een deel afhankelijk van de genetische achtergrond. Bovendien vonden we dat ledematen bloedstroom daalde tot het laagste punt binnen 3 dagen, waardoor het model lijkt meer een van &#39;subacute&#39; in plaats van een geleidelijke lidmaat ischemie. Op basis van deze eerdere studies, lijkt het duidelijk dat een werkwijze voor het induceren achterbeen ischemie niet in alle gevallen geschikt kunnen zijn. Omdat verschillende omstandigheden (bijvoorbeeld genetische verschillen en met of zonder comorbide omstandigheden) beïnvloeden zowel de vasculaire en skeletspier-specifieke responsen, onderzoekers kan het nodig om de chroniciteit en / of de ernst van achterpoot ischemie beste wijzigen passen hun doeleinden. Bovendien voorafgaande beschrijvingen van het model meestal ontbrak geschikte anatomische oriëntatiepunten om betrouwbare inter-onderzoeker reproduceerbaarheid van de techniek te vergemakkelijken. In dit document, werkwijzen voor het induceren van acute en subacute achterbeen ischemie in de muisworden beschreven, en nauwkeurige anatomische oriëntatiepunten zijn aanwezig.

<table><tbody><tr><td>Dumont #5/45 Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-35</td><td>Dumoxel</td></tr><tr><td>Dumont Style 5 Mini Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11200-14</td><td>Inox</td></tr><tr><td>Extra Fine Bonn Scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>14084-08</td><td></td></tr><tr><td>7 - 0 Silk Suture</td><td>Sharpoint</td><td>DA-2527N</td><td></td></tr><tr><td>5 - 0 Coated Vicryl Suture</td><td>Ethicon</td><td>J463G</td><td></td></tr><tr><td>Graefe Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11053-10</td><td></td></tr><tr><td>Vannas Spring Scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-03</td><td></td></tr><tr><td>Artifical Tears Ointment</td><td>Rugby Laboratories</td><td>0536-6550-91</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Tape</td><td>3M</td><td>1530-0</td><td></td></tr><tr><td>Fine Cotton Swabs</td><td>Contec</td><td>SC-4</td><td></td></tr><tr><td>Temperature Controller</td><td>Physitemp</td><td>TCAT-2DF</td><td></td></tr><tr><td>Ameroid Constrictors</td><td>Research Instruments SW</td><td>MMC-0.25 x 1.00-SS</td><td></td></tr><tr><td>Hot Bead Sterilizer</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Deltaphase Isothermal Pad</td><td>Braintree Scientific</td><td>39DP</td><td></td></tr><tr><td>Needle Driver</td><td>Fine Science Tools</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Phosphate Buffered Saline&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>Moor LDPI</td><td>Moor Instruments</td><td>moorLDI2</td><td></td></tr><tr><td>moorLDI Measurement software</td><td>Moor Instruments</td><td>v. 6.0</td><td></td></tr><tr><td>Hair Removal Cream</td><td>Nair</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

methoden voor acute en subacute muizen achterbeen ischemie

Methods for Acute and Subacute Murine Hindlimb Ischemia

Perifere slagaderziekte (PAD) is een belangrijke oorzaak van morbiditeit en mortaliteit in de ontwikkelde landen en diermodellen die betrouwbaar reproduceren menselijke ziekte zijn nodig om nieuwe therapieën te ontwikkelen voor deze ziekte. De muis achterbeen ischemie model is op grote schaal gebruikt voor dit doel, maar de standaardpraktijk induceren acute ischemie door ligatie van de femorale slagader kan aanzienlijke weefselnecrose, compromitteren vermogen onderzoekers om de vasculaire en skeletspier weefselreacties ischemie bestuderen . Een alternatieve benadering voor dijbeenslagader ligatie is de inductie van geleidelijke femorale arterie occlusie met behulp van ameroid constrictors. Wanneer geplaatst rondom de femorale slagader in dezelfde of verschillende locaties sites dijbeenslagader ligatie deze apparaten de slagader afsluiten dan 1-3 dagen, wat geleidelijker, subacute ischemie. Dit resulteert in minder groot skeletspier weefselnecrose, which kan beter na te bootsen de reacties te zien in de menselijke PAD. Omdat de genetische achtergrond invloeden uitkomsten in zowel de acute en subacute ischemie modellen, rekening houdend met de muis stam wordt bestudeerd is belangrijk bij het kiezen van het beste model. Dit artikel beschrijft de juiste procedure en anatomische plaatsing van ligaturen of ameroid constrictors op de muis femorale slagader subacute of acute ischemie achterbeen induceren in de muis.

Correcte identificatie van de muis achterbeen vasculatuur essentieel belang zijn voor de reproduceerbaarheid van de technieken voor het induceren van zowel acute en subacute achterbeen ischemie, zoals hier beschreven. Naast de variatie die inherent in dierstudies, kunnen andere factoren variabiliteit introduceren laser Doppler perfusie beeldvorming (LDPI), zoals het type anesthesie positie van het dier (rug vs. gevoelig) en lichaamstemperatuur (zie figuur 3). Bo...

Chirurgische inductie van hindlimbischemie bij muizen is nuttig om angiogenesis te onderzoeken, maar dit wordt bemoeilijkt bij bepaalde ingefokt muizenrassen die duidelijke ischemie-geïnduceerde weefsellethale schade vertonen. Er worden methoden beschreven om subacute ledemaatische ischemie te induceren met behulp van ameroïde constrictors om dit probleem te omzeilen door de inductie van geleidelijke arteriële occlusie.

Methoden voor acute en subacute muizen achterbeen ischemie

Peripheral artery disease (PAD) is a leading cause of cardiovascular morbidity and mortality in developed countries, and animal models that reliably ...

Het algemene doel van dit protocol is om menselijke perifere arterieziekte te modelleren door het plaatsen van hechtingen of ameroid constrictoren op de femorale arterie van de muis voor de inductie van respectievelijk acute of subacute ischemie van de achterpoot. Perifere arterieziekte is een belangrijk klinisch probleem, en deze technieken met gebruik van diermodellen zijn ontwikkeld om de menselijke ziekte beter weer te geven. Het primaire voordeel van deze technieken is dat de ernst en het tijdstip van het ontstaan van ledemaatischemie door de onderzoeker kunnen worden gecontroleerd.De procedure zal worden gedemonstreerd door Mike Padgett, een technicus uit mijn laboratorium. Bevestig één tot twee dagen voor de procedure of de muis volledig gesedeerd is door het gebrek aan reactie op een knijpreflex in de teen, en breng oogzalf aan. Gebruik vervolgens een kleine elektrische trimmer om het haar van beide achterpoten af te scheren.Wanneer al het haar is getrimd, brengt u voorverwarmde ontharingscrème aan. Veeg de crème na één minuut voorzichtig af met een bevochtigd gaasje. Plaats de muis vervolgens in een herstelkooi die is bekleed met papieren handdoeken totdat het dier in staa

methods-for-acute-and-subacute-murine-hindlimb-ischemia

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

De chirurgische procedure voor het induceren van eenzijdige achterbeen ischemie is aangetoond, met bevestiging van ischemie door een laser Doppler perfusie beeldvorming.

Muizenmodel van achterbeen ischemie

Tal van genetische manipulaties en / of intramyocardial injecties van genen, eiwitten, cellen en / of biomaterialen wordt toegevoegd aan de dimensie van de tijd in studies van de acute ischemie / reperfusie schade en chronische remodeling bij muizen. Deze video illustreert de microchirurgische procedures voor ischemie / reperfusie, permanent coronaire ligatie, en intramyocardial injectie studies.

Kransslagader Ligatie en Intramyocardial Injectie in een muizenmodel van Infarction

Osmotische Drug Delivery voor ischemische achterpoten en perfusie van vaatstelsel met Microfil voor Micro-Computed Tomography Imaging

We introduceren een chirurgische methode experimentele ischemie / reperfusie (I / R) letsel veroorzaken simuleren myocardiaal infarct (MI) in muismodellen die zorgt voor meer duidelijkheid in positionering van de ligatie van de LAD (LAD) om de reproduceerbaarheid te verhogen MI van experimenten in muizen.

Een muizenmodel van myocard ischemie-reperfusie schade door de eileiders van de LAD

Hier beschrijven we de gedetailleerde procedure van intestinale ischemie-reperfusie bij muizen waardoor reproduceerbaar letsel zonder sterfte aan de standaardisatie van deze techniek in het veld bevorderen. Dit model van intestinale ischemie-reperfusieschade kan worden gebruikt om de cellulaire en moleculaire mechanismen van schade en regeneratie te bestuderen.

Muizenmodel van Intestinale ischemie-reperfusie schade

We beschrijven een muismodel van een beroerte veroorzaakt door de occlusie van de middelste hersenslagader met behulp van een met siliconen omhulde naald. Het protocol kan worden toegepast om een permanente occlusie of een tijdelijke ischemie te induceren, gevolgd door reperfusion.

Inductie van ischemische beroerte en ischemie-reperfusie in Muizen met behulp van het Midden-slagader occlusie Techniek en Visualisatie van Infarct Area

Hier wordt een kritisch hindledemaat ischemie-experimentele model gepresenteerd, gevolgd door een batterij met functionele, histologische en moleculaire tests om de effectiviteit van angiogene therapieën te beoordelen.

Beoordeling van therapeutische angiogenese in een Muriene model van Hindledemaat ischemie

Hier presenteren we een protocol dat de techniek en noodzakelijke controles demonstreert voor Laser Doppler perfusiebeeldvorming om de bloedstroom in de achterpoten van de muis te meten.

Laser Doppler Perfusion Imaging in de hindlimb van de muis

Dit artikel demonstreert een efficiënte chirurgische aanpak om acute ischemie vast te stellen bij muizen met een kleine incisie. Deze aanpak kan door de meeste onderzoeksgroepen worden toegepast zonder laboratoriumupgrades.

Een gewijzigd chirurgisch model van ischemie van de achterpoten in ApoE-/- Muizen met behulp van een miniatuurincisie

Het huidige protocol beschrijft een uniek, klinisch relevant model van perifere arteriële ziekte dat femorale slagader en aderelektrocoagulatie combineert met de toediening van een stikstofmonoxidesynthaseremmer om hindlimb gangreen te induceren in FVB-muizen. Intracardiale DiI-perfusie wordt vervolgens gebruikt voor hoge resolutie, driedimensionale beeldvorming van de voetzool vasculatuur.

Driedimensionale beeldvorming met hoge resolutie van de voetzool vasculatuur in een Murine Hindlimb Gangreen model

Hier presenteren we een protocol om een distaal occlusiemodel van de middelste hersenslagader (dMCAO) op te stellen door middel van transcraniële elektrocoagulatie bij C57BL/6J-muizen en evalueren we het daaropvolgende neurologische gedrag en histopathologische kenmerken.

Inductie van acute ischemische beroerte bij muizen met behulp van de distale occlusietechniek van de middelste slagader

Leer methoden voor acute en subacute achterbeenischemie bij muizen met ameroid-constrictoren. Deze techniek modelleert perifere vaatziekten en stelt onderzoekers in staat de ernst en timing van ischemie te controleren.

Methoden voor acute en subacute muizen achterbeen ischemie

Meer video's verkennen