Name: De dimethylnitrosamine geïnduceerde leverfibrose Model in het Rat (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-06-17T14:15:00.000+00:00
Duration: 9 min 27 s
Description: Leer een betrouwbaar ratmodel van leverfibrose maken met DMN-inductie en histologische analyse. Deze methode ondersteunt onderzoek naar ziekteprogressie en het testen van anti-fibrotische middelen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

De auteurs erkennen de financieringssteun van het Ministerie van Onderwijs, Singapore, subsidienummer MOE2010-IF-1-025.

Alle dierproeven werden goedgekeurd door de Animal Care en gebruik commissie van de School of Applied Science, Temasek Polytechnic. 1. Bereiding van DMN <ol><li> Pipetteer 200 ul van DMN (1 g / ml voorraadoplossing) en voeg 19,8 ml PBS tot 10 mg / ml DMN oplossing voor injectie te bereiden. Let op: DMN is kankerverwekkend. Gebruik een zuurkast aan de DMN voorbereiden en uitvoeren van het dier injecties. </li></ol> 2. intraperitoneale injectie van DMN <ol><li> Gebruik mannelijke Wistar ratten met een gemiddeld gewicht van 150-200 g. Acclimatiseren ratten gedurende 4-7 dagen voor het begin van het experiment. </li><li> Handhaaf ratten bij kamertemperatuur van 22 ± 1 ° C met 12 uur licht en 12 uur donker cycli. Zorg voor rat chow en water ad libitum. </li><li> Meet voedsel en water inname per dag. Meet lichaamsgewicht per week. </li><li> Bereken de hoeveelheid DMN voor elke rat op basis van een dosis van 10 mg / kg lichaamsgewicht. Gebruik een 1 ml spuit met een 25 gauge naald to trekken het berekende volume van DMN oplossing in de spuit. </li><li> Restrain de rat voor intraperitoneale injectie 21. </li><li> Met de rat behoorlijk ingetogen, introduceren de naald in de onderste rechter kwadrant van de buik, trek terug op de zuiger van de spuit (niets moet worden opgezogen) om te controleren op de juiste plaatsing van de naald in de buikholte en injecteer langzaam DMN oplossing. </li><li> Wanneer de dosis van DMN is toegediend, langzaam terug te trekken van de naald en gooi in de daarvoor bestemde container. </li><li> Voer de intraperitoneale injecties van DMN gedurende 3 opeenvolgende dagen per week gedurende 4 weken. Dien de injecties op hetzelfde tijdstip van de dag. Opnieuw berekenen van de dosering op basis van het lichaamsgewicht bij het begin van elke week injecties. </li><li> Verzamel bloed uit de staart ader wekelijks naar biochemische parameters te meten: alanineaminotransferase (ALT) en aspartaataminotransferase (AST) 22. </li><li> Meet serum ALT en AST het gebruik van een commerciële VetTest Chemistry Analyzer. </li></ol> 3. Bruto Onderzoek en Harvest of Liver <ol><li> Euthanaseren de ratten door intraperitoneale injectie van pentobarbital met een dosis van 100 mg / kg lichaamsgewicht. Verzekeren dood door te controleren op het gebrek aan hartslag. </li><li> Bereid je voor op de post mortem en de conditie van het dier te evalueren zoals beschreven door Parkinson et al. 23 Place dode ratten op het ontleden van boord in dorsale decubitus met de buik naar boven. </li><li> Ontsmet en bevochtig de huid met 70% ethanol. </li><li> Met een schaar, incise de huid van de volledige lengte van de ventrum van de anus tot de kin en weerspiegelen de huid. Met de schaar, incise de buikwand van de anus naar de zwaardvormig kraakbeen, de ingewanden bloot te leggen. </li><li> Onderzoek de buikorganen in situ te controleren op eventuele afwijkingen. Let op eventuele veranderingen in kleur, grootte, locatie van organen en de aanwezigheid van vocht in de buikholte. Onderzoekende consistentie van organen en let op de aanwezigheid van geuren. </li><li> Met een schaar en een tang, ontleden de gehele lever vrij van zijn ligamenten en bijlagen. <ol><li> Begin bij de hilus, waar het aan het membraan is bevestigd en werken om alle lever lobben van de bijlagen te bevrijden. Knip voorzichtig alle ligamenten en bloedvaten. </li></ol></li><li> Overdracht van de lever op een petrischaal en wegen van de lever. </li><li> Met behulp van een scalpel, knip 2-5 mm dikke delen van de lever lobben. Voor consistentie, neem altijd monsters van dezelfde lever kwab. Neem een wig ongeveer 5 mm dikte, de rechter laterale lob 24 ongeveer 1 cm van de rand van de lobe.Immediately plaats in 10% gebufferde formaline voor fixatie. Verzekeren het weefsel formaline volume 1:10 of meer. </li><li> Oogst onmiddellijk bevriezen porties (met vloeibare stikstof) van leverlobben op dit punt desgewenst andere studies. Voor (3,8), monster van dezelfde leverkwab consistentie. </li></ol><ol><li> Bevestig de levermonsters in 10% gebufferde formaline gedurende minimaal 24 uur. </li><li> Na fixatie, trim de lever, te plaatsen in cassettes en plaats ze in de mand van de geautomatiseerde weefsel processor. </li><li> Plaats de mand met cassettes in het eerste station dat 10% gebufferde formaline bevat. Zorg ervoor dat de cassettes zijn volledig ondergedompeld. Ze kunnen in deze kamer gedurende maximum 12 uur totdat de cyclus. </li><li> Programmeer de weefselprocessor de cassettes draaien gedurende 1 uur elk bij opeenvolgende stations met de volgende oplossingen: ethanol bij concentraties van 50%, 70%, 90%, 100% (2 stations), xyleen (2 stations) en vloeibare paraffine ( 2 stations). </li><li> Breng de monsters lever in de was bad van de inbedding station. Waarborgen dat het inbedden ingeschakelde machine ten minste één uur minder. </li><li> Met behulp van voorverwarmde pincet (65 ° C), verwijder elke cassette uit de wbijl bad en de plaats op de warme plaat (65 ° C) van de inbedding machine. Doseer voldoende hoeveelheid vloeibare paraffine in de roestvrij stalen basis mal (voorverwarmd tot 65 ° C) tot half vol. Breng de sectie van lever van de cassette in de mal. Controleer het monster wordt geplaatst met het uiteinde vlak (microscopisch onderzocht) op de bodem van de vorm. </li><li> Vult de mal volledig met vloeibare paraffine, zet de lege cassette geplaatst en plaats de mal op de 4 ° C plaat van de inbedding machine afkoelen gedurende minstens 30 minuten. </li><li> Controleer of de was is afgekoeld en gestold, en verwijder de paraffine blok van de mal. Het blok moet gemakkelijk pop uit en niet plakken of barsten. Als dit gebeurt, smelt het blok en herhaal deze stap. De paraffine blok kan worden doorgesneden wanneer het stolt. Blokken kunnen worden bewaard bij kamertemperatuur gedurende vele jaren. </li><li> Plaats de paraffine blok in de microtoom en sectie bij 10 micrometer dik, totdat de waslaagvoldoende verwijderd van de ingebedde leverweefsel zichtbaar zijn. </li><li> Verander de instelling op de microtoom op 5 micrometer dik te snijden. Met behulp van een tang, pick-up een goed gesneden sectie door vast te houden aan de rand en zorgvuldig drijven de sectie in het waterbad bij een temperatuur van 40 ° C. </li><li> Plaats voorzichtig een schone glasplaatje onder de drijvende sectie en tillen deze op het oppervlak van het glasplaatje. Plaats het preparaat op een dia warmer bij 37 ° C overnacht. </li></ol> 5. Masson trichroomkleuring <ol><li> Voor het aanbrengen van de vlekken, de behandeling van de dia&#39;s om de was te verwijderen en hydrateren de weefsels als volgt: <ol><li> Dompel de secties in xyleen gedurende 5 minuten. Herhaal 2x. </li><li> Dompel de secties in 100% ethanol gedurende 3 minuten. 1x herhalen. </li><li> Dompel de secties gedurende 1 min elk in de volgende oplossingen van ethanol: 90%, 80% en 70%. </li></ol></li><li> Spoel de dia onder kraanwater aan bestaande ethanol op de dia te verwijderen. </li><li> Dompel de objectglaasjes in Iron hematoxyline gedurende 10 minuten aan de kern vlekken. </li><li> Spoel de glaasjes met water om de overmaat kleuring van de glijbaan te verwijderen. </li><li> Dompel de dia&#39;s in Biebrich Scarlet-Acid Fuchsin gedurende 2 minuten naar het cytoplasma vlekken. </li><li> Spoel de dia&#39;s met water. </li><li> Plaats de objectglaasjes in fosfo- / fosfomolybdeenzuur oplossing gedurende 10 min om de opname van Aniline blauw bevorderen. Verander de fosfotungstisch / fosfomolybdeenzuur Solution na 2 rondes van gebruik. </li><li> Plaats de objectglaasjes in aniline blauw gedurende 10 min om de collageenvezels vlekken. </li><li> Spoel de overtollige vlek met water en plaats de objectglaasjes in 1% azijnzuur gedurende 1 min om differentiatie plaats om de kleur van de schuif fijnere en transparanter te maken nemen. </li><li> Spoel de dia&#39;s met water en ga verder met het weefsel secties dehydrateren. De dehydratie stappen zijn als volgt: </li><li> Dompel de objectglaasjes achtereenvolgens gedurende 10 seconden telkens op de volgende concentrations ethanol: 70%, 80%, 95% en 100%. </li><li> Dompel de objectglaasjes gedurende 30 sec in 100% ethanol. 1x herhalen. </li><li> Spoel de dia&#39;s door 3 stations van xyleen gedurende 5 minuten elk te verwijderen ethanol. </li><li> Monteer een glazen afdekplaat slip op het monster met montage media (bijvoorbeeld DPX inbedmiddel) en laten drogen. Let op: DPX is een synthetische hars die snel droogt, bewaart vlek en beschermt het gedeelte weefsel. </li></ol> 6. Fibrosis Scoren op Masson Trichome gekleurde coupes van Liver <ol><li> Heeft u een veterinair patholoog beoordeelt de ernst van fibrose volgens de fibrose te scoren 25. Het zou optimaal zijn als de fibrose scoring onafhankelijk uitgevoerd door twee of drie pathologen op een blinde wijze. In een dergelijk scenario, het verkrijgen van een uiteindelijke score na discussie en peer review om eventuele verschillen in het scoren. </li></ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td> partituur </td><td> Beschrijving </td></tr><tr><td> 0 </td><td> geen fibrosis </td></tr><tr><td> 1 </td><td> Vezelige uitbreiding van enkele portal gebieden, met of zonder korte vezelige septa </td></tr><tr><td> 2 </td><td> Vezelige uitbreiding van de meeste portal gebieden, met of zonder korte vezelige septa </td></tr><tr><td> 3 </td><td> Vezelige uitbreiding van de meeste portal gebieden, af en toe een portaal naar portaal (PP) overbruggen </td></tr><tr><td> 4 </td><td> Vezelige uitbreiding van de portal gebieden met een gemarkeerde overbruggen (portaal naar portaal (PP) als poort naar de centrale (PC) </td></tr><tr><td> 5 </td><td> Gemarkeerd overbruggen (PP en / of PC) met af en toe knobbeltjes (onvolledige cirrose) </td></tr><tr><td> 6 </td><td> Cirrose, waarschijnlijk of definitief </td></tr></tbody></table> Tabel 1: fibrosescore gebruikt voor het lezen van de Masson&#39;s Trichome Stained Liver secties 25.

<ol><li>Magee, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxic+liver+injury%3B+the+metabolism+of+dimethylnitrosamine%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+J%22%5BJournal%5D)">Toxic liver injury; the metabolism of dimethylnitrosamine.</a> Biochem J. 64 (4), 676-682 (1956).</li>
<li>Pritchard, D. J., Butler, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis-the+mechanism+of+cell+death+in+dimethylnitrosamine-induced+hepatotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Apoptosis-the mechanism of cell death in dimethylnitrosamine-induced hepatotoxicity.</a> J Pathol. 158 (3), 253-260 (1989).</li>
<li>Madden, J. W., Gertman, P. M., Peacock, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dimethylnitrosamine-induced+hepatic+cirrhosis%3A+a+new+canine+model+of+an+ancient+human+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Dimethylnitrosamine-induced hepatic cirrhosis: a new canine model of an ancient human disease.</a> Surgery. 68 (1), 260-267 (1970).</li>
<li>Jenkins, S. A., Grandison, A., Baxter, J. N., Day, D. W., Taylor, I., Shields, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dimethylnitrosamine-induced+model+of+cirrhosis+and+portal+hypertension+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hepatol%22%5BJournal%5D)">A dimethylnitrosamine-induced model of cirrhosis and portal hypertension in the rat.</a> J Hepatol. 1 (5), 489-499 (1985).</li>
<li>Jézéquel, A. M., Mancini, R., Rinaldesi, M. L., Macarri, G., Venturini, C., Orlandi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+morphological+study+of+the+early+stages+of+hepatic+fibrosis+induced+by+low+doses+of+dimethylnitrosamine+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hepatol%22%5BJournal%5D)">A morphological study of the early stages of hepatic fibrosis induced by low doses of dimethylnitrosamine in the rat.</a> J Hepatol. 5 (2), 174-181 (1987).</li>
<li>George, J., Chandrakasan, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+characteristics+of+dimethylnitrosamine+induced+fibrotic+liver+collagen%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%2C+Protein+Struct+Mol+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Molecular characteristics of dimethylnitrosamine induced fibrotic liver collagen.</a> Biochim Biophys Acta, Protein Struct Mol Enzymol. 1292 (2), 215-222 (1996).</li>
<li>Winwood, P. J., Arthur, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kupffer+cells%3A+their+activation+and+role+in+animal+models+of+liver+injury+and+human+liver+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Liver+Dis%22%5BJournal%5D)">Kupffer cells: their activation and role in animal models of liver injury and human liver disease.</a> Semin Liver Dis. 13 (1), 50-59 (1993).</li>
<li>Nakamura, T., Sakata, R., Ueno, T., Sata, M., Ueno, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+transforming+growth+factor%CE%B2+prevents+progression+of+liver+fibrosis+and+enhances+hepatocyte+regeneration+in+dimethylnitrosamine-treated+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Inhibition of transforming growth factorβ prevents progression of liver fibrosis and enhances hepatocyte regeneration in dimethylnitrosamine-treated rats.</a> Hepatology. 32 (2), 247-255 (2000).</li>
<li>Shek, F. W., Benyon, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+can+transforming+growth+factor+beta+be+targeted+usefully+to+combat+liver+fibrosis%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">How can transforming growth factor beta be targeted usefully to combat liver fibrosis?</a> Eur J Gastroenterol Hepatol. 16 (2), 123-126 (2004).</li>
<li>Wang, J. H., Shin, J. W., Son, J. Y., Cho, J. H., Son, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antifibrotic+effects+of+CGX%2C+a+traditional+herbal+formula%2C+and+its+mechanisms+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ethnopharmacol%22%5BJournal%5D)">Antifibrotic effects of CGX, a traditional herbal formula, and its mechanisms in rats.</a> J Ethnopharmacol. 127 (2), 534-542 (2010).</li>
<li>Su, L. J., Hsu, S. L., Yang, J. S., Tseng, H. H., Huang, S. F., Huang, C. Y. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+gene+expression+profiling+of+dimethylnitrosamine-induced+liver+fibrosis%3A+from+pathological+and+biochemical+data+to+microarray+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Expr%22%5BJournal%5D)">Global gene expression profiling of dimethylnitrosamine-induced liver fibrosis: from pathological and biochemical data to microarray analysis.</a> Gene Expr. 13 (2), 107-132 (2006).</li>
<li>Müller, A., Machnik, F., Zimmermann, T., Schubert, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thioacetamide-induced+cirrhosis-like+liver+lesions+in+rats+usefulness+and+reliability+of+this+animal+model%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Pathol%22%5BJournal%5D)">Thioacetamide-induced cirrhosis-like liver lesions in rats usefulness and reliability of this animal model.</a> Exp Pathol. 34 (4), 229-236 (1988).</li>
<li>Martinez-Hernandez, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hepatic+extracellular+matrix.+II.+Electron+immunohistochemical+studies+in+rats+with+CCl4-induced+cirrhosis%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">The hepatic extracellular matrix. II. Electron immunohistochemical studies in rats with CCl4-induced cirrhosis.</a> Lab Invest. 53 (2), 
 <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/3894794">http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/3894794</a> 166-186 (1985).</li>
<li>Pritchard, M. T., Apte, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Models+to+Study+Liver+Regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Regeneration%22%5BJournal%5D)">Models to Study Liver Regeneration.</a> Liver Regeneration. , 15-40 (2015).</li>
<li>Kountouras, J., Billing, B. H., Scheuer, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prolonged+bile+duct+obstruction%3A+a+new+experimental+model+for+cirrhosis+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Exp+Pathol%22%5BJournal%5D)">Prolonged bile duct obstruction: a new experimental model for cirrhosis in the rat.</a> Br J Exp Pathol. 65 (3), 305-311 (1984).</li>
<li>Marques, T. G., Chaib, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+of+experimental+models+for+inducing+hepatic+cirrhosis+by+bile+duct+ligation+and+carbon+tetrachloride+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Cir+Bras%22%5BJournal%5D)">Review of experimental models for inducing hepatic cirrhosis by bile duct ligation and carbon tetrachloride injection.</a> Acta Cir Bras. 27 (8), 589-594 (2012).</li>
<li>Wasser, S., Tan, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+models+of+hepatic+fibrosis+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Acad+Med+Singapore%22%5BJournal%5D)">Experimental models of hepatic fibrosis in the rat.</a> Ann Acad Med Singapore. 28 (1), 109-111 (1999).</li>
<li>George, J., Chandrakasan, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biochemical+abnormalities+during+the+progression+of+hepatic+fibrosis+induced+by+dimethylnitrosamine%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Biochem%22%5BJournal%5D)">Biochemical abnormalities during the progression of hepatic fibrosis induced by dimethylnitrosamine.</a> Clin Biochem. 33 (7), 563-570 (2000).</li>
<li>Shimizu, I., Ma, Y. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Sho-saiko-to%2C+a+Japanese+herbal+medicine%2C+on+hepatic+fibrosis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Effects of Sho-saiko-to, a Japanese herbal medicine, on hepatic fibrosis in rats.</a> Hepatology. 29 (1), 149-160 (1999).</li>
<li>Wang, Y., Gao, J., Zhang, D., Zhang, J., Ma, J., Jiang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+insights+into+the+antifibrotic+effects+of+sorafenib+on+hepatic+stellate+cells+and+liver+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hepatol%22%5BJournal%5D)">New insights into the antifibrotic effects of sorafenib on hepatic stellate cells and liver fibrosis.</a> J Hepatol. 53 (1), 132-144 (2010).</li>
<li>Machholz, E., Mulder, G., Ruiz, C., Corning, B. F., Pritchett-Corning, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manual+Restraint+and+Common+Compound+Administration+Routes+in+Mice+and+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Manual Restraint and Common Compound Administration Routes in Mice and Rats.</a> J Vis Exp. (67), (2012).</li>
<li>Lee, G., Goosens, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sampling+Blood+from+the+Lateral+Tail+Vein+of+the+Rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Sampling Blood from the Lateral Tail Vein of the Rat.</a> J Vis Exp. (99), (2015).</li>
<li>Parkinson, C. M., O'Brien, A., Albers, T. M., Simon, M. A., Clifford, C. B., Pritchett-Corning, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnostic+Necropsy+and+Selected+Tissue+and+Sample+Collection+in+Rats+and+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Diagnostic Necropsy and Selected Tissue and Sample Collection in Rats and Mice.</a> J Vis Exp. (54), (2011).</li>
<li>Ruehl-Fehlert, C., Kittel, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revised+guides+for+organ+sampling+and+trimming+in+rats+and+mice--part+1%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Toxicol+Pathol%22%5BJournal%5D)">Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice--part 1.</a> Exp Toxicol Pathol. 55 (2-3), 91-106 (2003).</li>
<li>Ishak, K., Baptista, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histological+grading+and+staging+of+chronic+hepatitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Histological grading and staging of chronic hepatitis.</a> J Hepatol. 22 (6), 696-699 (1995).</li>
<li>Sant'Anna, L. B., Sant'Anna, N., Parolini, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+computer+assisted+image+analysis+for+identifying+and+quantifying+liver+fibrosis+in+a+experimental+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comput+Interdiscip+Sci%22%5BJournal%5D)">Application of computer assisted image analysis for identifying and quantifying liver fibrosis in a experimental model.</a> J Comput Interdiscip Sci. 2 (2), 139-148 (2011).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat ze geen concurrerende financiële belangen.

We hebben een werkwijze beschreven om een ​​diermodel van leverfibrose maken en de ernst van leverziekten. Het is belangrijk om de juiste dosis DMN leveren en zich aan het schema van wekelijkse intraperitoneale injecties. Naarmate het experiment vordert, is het cruciaal om de ratten te wegen en opnieuw berekenen van de dosis aan het begin van elke week van DMN injecties. Houd in gedachten dat DMN is giftig en moet in de zuurkast te worden behandeld. Wij voeren de intraperitoneale injecties in de zuurkast ook. De noodzaa...

DMN is een potente leverspecifieke toxine. Zijn metabolisme, distributie weefsel, en het vermogen om letsel aan lever van ratten werd gemeld door Magee 1, en ​​het mechanisme van hepatocyte schade en celdood door apoptose werd beschreven door Pritchard en Butler 2. Periodieke toediening van deze verbinding werd gemeld leverfibrose bij honden en ratten 3,4 induceren. De mechanismen en morfologische veranderingen van leverfibrose zijn uitgebreid onderzocht met behulp van dit model. In het begin van studies met behulp van de rat, 3 weken durende behandeling met DMN geproduceerd centrilobulaire hemorragische necrose gevolgd door micronodulaire cirrose zonder steatose 5. Er werd aangetoond dat begin fibrose, het collageen gevormd was verknoopt met type III wordt prominenter dan type I 6. Evenals andere oorzaken werden DMN-geïnduceerde fibrotische veranderingen gepaard met een toename in Kupffer cellen; lever macrofagen dat ik wonenn de sinusoïden. Deze cellen veranderen in myofibroblasten en meer dan normale hoeveelheden extracellulaire matrix die het voornaamste probleem fibrose 7. In termen van cellulaire signaaltransductie, Nakamura et al. Aangetoond dat TGF-β een cruciale rol in de progressie van leverfibrose 8 speelt. Ze gebruikten een adenovirus een afgeknot type II TGF-β receptor, specifiek remt TGF-β signalering. Leverfibrose bij deze ratten werd spectaculair stopgezet tijdens DMN behandeling in vergelijking met controlegroepen. Andere studies hebben bevestigd dat onderdrukking van TGF-β leidt tot verlichting van leverfibrose ontwikkeling 9,10. Het model werd ook gebruikt in een globale gen profilering studie andere fibrose markers en eiwitten die als drug targets kunnen worden gebruikt voor anti-fibrotische therapie 11 identificeren. Andere chemische stoffen die worden gebruikt om leverfibrose te induceren omvatten thioaceetamide (TAA) en cArbon tetrachloride (CCl4). TAA werd eerst gebruikt in ratten en later bij muizen 12. Voordelen van dit model zijn: het gemak van chemische toediening in drinkwater, de reproduceerbaarheid van het model met karakteristieke micronodulaire cirrose en biochemische veranderingen. De nadelen zijn: de lange periode van 3 maanden leverfibrose ontwikkelen en het gebrek aan begrip van het moleculaire mechanisme voor de inductie van leverfibrose. Zoals voor CCl4, heeft het gebruik ervan afgenomen om de volgende redenen: het maakt niet leverziekte mens na te bootsen, schadelijke effecten heeft op de ozonlaag, veroorzaakt pijn en leed bij dieren, is zeer giftig voor de mens en vereist extra voorzorgsmaatregelen in de behandeling en verwijdering 13,14. Langdurige galwegobstructie (door chirurgische interventie) als een experimenteel model voor levercirrose werd voor het eerst gemeld door Kountouras et al. 15. Deze methode is niet toxisch voor mensen en dieren. HHof toevoegde, de tijd die leverfibrose ontwikkelen varieert. Een overzicht van 30 verslagen Marques et al. 16, blijkt dat het duurde zeven dagen tot vier weken na operatie bij leverfibrose ontwikkelen. De pathologische veranderingen beschreven lijken op die van de menselijke chronische biliaire fibrose en het model zou meer geschikt voor onderzoekers die geïnteresseerd zijn in dit gebied. Samengevat, de intermitterende toediening van een constante dosis van DMN in de rat dan 4 weken produceert leverfibrose dat de menselijke ziekte nabootst. Gedoseerde ratten geleidelijke ontwikkeling van leverschade en parenchymale fibrose 4,17. Ziekteprogressie en ernst kunnen worden bewaakt via bloedmonsters of opoffering van dieren op specifieke tijdstippen en het effect is zeer reproduceerbaar 18. Waardoor het model op grote schaal gebruikt om de mechanismen van leverfibrose en cirrose bestuderen en te screenen op potentiële anti- fibrotische middelen 10,19,20.

<table><tbody><tr><td>Dimethylnitrosamine</td><td>Wako</td><td>147-03781</td><td></td></tr><tr><td>Formalin</td><td>Sinopharm chemicals</td><td>F63257009</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Sigma</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>Xyleen</td><td>Fisher</td><td>1330-20-7</td><td></td></tr><tr><td>Masson trichome stains</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aniline Blue</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>#42755</td><td></td></tr><tr><td>Acid Fuschin</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>RT42685</td><td></td></tr><tr><td>Scarlet Red</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>#26905</td><td></td></tr><tr><td>Phosphotungstic Acid Hydrate</td><td>ALFA AESAR</td><td>ALFA40116.4</td><td></td></tr><tr><td>Phosphomolybdic Acid Hydrate</td><td>Sigma SG</td><td>221856-25G</td><td></td></tr><tr><td>Weigert's Iron Hematoxilyn</td><td>Merck</td><td>1.15973.0002</td><td></td></tr><tr><td>DPX Mounting Medium</td><td>Merck</td><td>HX066873</td><td></td></tr><tr><td>Weefselprocessor</td><td>Leica</td><td>Leica TP 1020</td><td></td></tr><tr><td>Inbeddingsmachine</td><td>Sakura</td><td>&nbsp;Sakura Tissue Tek TEC5 Inbedding System</td><td></td></tr><tr><td>Microtoom</td><td>Leica</td><td>Leica RM 2235</td><td></td></tr><tr><td>Vet Test Analyzer</td><td>Idexx</td><td>Vet Test 8008</td><td></td></tr></tbody></table>

de dimethylnitrosamine geïnduceerde leverfibrose model in het rat

The Dimethylnitrosamine Induced Liver Fibrosis Model in the Rat

Vier tot zes weken oude mannelijke Wistar-ratten werden gebruikt om diermodellen van leverfibrose produceren. De werkwijze vereist vier weken van toediening van 10 mg / kg dimethylnitrosamine (DMN), intraperitoneaal gedurende drie opeenvolgende dagen per week. Intraperitoneale injecties werden uitgevoerd in de zuurkast als DMN is een bekende hepatoxin en kankerverwekkend. Het model heeft verschillende voordelen. Ten eerste kan veranderingen in de lever na elkaar of op bepaalde stadia van belang worden bestudeerd. Ten tweede kan het stadium van leverziekte worden gecontroleerd door het meten van serum alanine aminotransferase (ALT) en aspartaat aminotransferase (AST) enzymen. Ten derde kan de ernst van de schade aan de lever in verschillende fasen worden bevestigd door het offeren van dieren op aangewezen tijdstippen, gevolgd door histologisch onderzoek van Trichome bevlekte lever weefsels Masson. Na vier weken van DMN dosering, de typische fibrosis score is 5-6 op de Ishak schaal. Het model kan consistent worden gereproduceerd en is geweestwijd gebruikt om de efficiëntie van anti-fibrotische geneesmiddelen te beoordelen.

DMN behandelde ratten gewicht te verliezen en minder krachtig met verstoorde vacht. Er is significant verlies van gemiddelde lichaamsgewichten van DMN behandelde ratten; eerste detecteerbaar na 2 weken behandeling DMN, en dit verschil blijft tot 3 weken en na 4 DMN behandeling (figuur 1a). Als de ratten ontvangt DMN over opeenvolgende weken, schade aan de lever veroorzaakt dat kleiner worden. De lever index; dat het percentage lever gewicht eindlichaamsgewicht was signif...

We beschrijven een methode om een diermodel van leverfibrose bij de rat te produceren, en evalueren de mate van fibrose door histologisch onderzoek van de lever. Het model kan worden gebruikt om de ontwikkeling van leverziekten te bestuderen, evenals om de werkzaamheid van potentiële antifibrotische middelen te testen.

De dimethylnitrosamine geïnduceerde leverfibrose Model in het Rat

Four to six week old, male Wistar rats were used to produce animal models of liver fibrosis. The process requires four weeks of administration of 10 mg/kg ...

Het algemene doel van deze procedure is het produceren van een diermodel voor leverfibrose dat gebruikt kan worden om de werkzaamheid van potentiële antifibrotische middelen te beoordelen. Dit diermodel kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen over de aard en ontwikkeling van fibrose in de lever en hoe antifibrotische middelen het fibrotische proces verminderen. Bovendien bootst dit model de complexe fysiologische processen van humane leverziekten na, van vroege tot late stadia van fibrose, en kan op elk gewenst punt van de ziekte worden bestudeerd.Personen die nieuw zijn met deze methode moeten de workflow plannen, aangezien het den-glis-nov diermodel ten minste vijf weken in beslag neemt. Nadat de lever is geoogst, is er één tot twee weken verwerkingstijd nodig voordat speciaal gekleurde coupes klaar zijn voor onderzoek door de patholoog. DMN moet vanuit een voorraadoplossing worden verdund tot 10 mg/mL in PBS.Werk bij het uitvoeren van deze verdunning in een zuurkast, aangezien de stof carcinogeen is. Selecteer voor het experiment mannelijke Wistar-ratten met een gewicht tussen 150 en 200 gram. Laat de ratten gedurende ten minste vier dagen acclimatiseren in een huisvestin

the-dimethylnitrosamine-induced-liver-fibrosis-model-in-the-rat

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Verstoring van de galstroom resulteert in ernstige inflammatoire cholestatische leverbeschadiging met een karakteristieke tijdsafhankelijke sequentie van morfologische veranderingen. Hier presenteren we een protocol voor de chirurgische ligatie van de gemeenschappelijke galgang bij muizen die het mogelijk maakt om een sterke fibrotische respons te induceren na 21 tot 28 dagen.

Bile-duct Ligatie in Muizen: Inductie van Inflammatoire leverschade en Fibrosis door Obstructive Cholestase

Aanhoudende fibrose met afzetting van overmatige extracellulaire matrix-eiwitten leidt tot cirrose. Alcoholmisbruik is een van de belangrijkste oorzaken van ernstige leverziekten. We hebben een ethanol-geïnduceerde zebravis model van een fibrotische lever opgezet om de mechanismen en strategieën van het bevorderen van hepatocytenregeneratie bij alcohol-geïnduceerde schade te bestuderen.

Ontwikkeling van een ethanol-geïnduceerde fibrotische lever Model in zebravis om te studeren Progenitor Cell-gemedieerde Hepatocyt Regeneration

Hier beschrijven we een gemeenschappelijke methode om chronische lever schade in muizen door het eten van een dieet van choline-deficiënte en ethionine-aangevuld (CDE). We tonen gezondheidsmonitoring, lever perfusie, isolatie en behoud. Een tijdsverloop van zes weken kan informeren over de lever schade, pathohistology, fibrose, inflammatoire, en lever progenitor cel reacties.

De lymfkliertest Choline-deficiënte, Ethionine-aangevuld (COB) dieet Model van chronische lever schade

Beschrijven we een niet-invasieve multimodale aanpak op basis van Micro-CT en fluorescentie moleculaire tomografie voor longitudinale beoordelingvan de muismodel van lung fibrosis geïnduceerd door dubbele intratracheale instillatietest van bleomycine imaging.

Een multimodale Imaging aanpak op basis van Micro-CT en fluorescentie moleculaire tomografie voor longitudinale beoordeling van bleomycine-geïnduceerde Lung Fibrosis in muizen

De acute leverfalen diermodel ontwikkeld in de huidige studie presenteert een haalbaar alternatief voor de studie van mogelijke therapieën. Het huidige model maakt gebruik van het gecombineerde effect van fysieke en drug-geïnduceerde leverschade en biedt een geschikte tijdvenster om het potentieel van nieuwe therapieën te bestuderen.

Generatie van een rat model van acuut leverfalen door het combineren van 70% partiële Hepatectomie en Acetaminophen

Dit protocol biedt een eenvoudige en betrouwbare methode voor de productie van levensvatbare precisiegesneden leverschijfjes van muizen. De ex vivo weefselmonsters kunnen meerdere dagen onder laboratoriumweefselkweekomstandigheden worden bewaard, wat een flexibel model biedt om leverpathobiologie te onderzoeken.

Murine Precision-Cut Lever Plakjes als een Ex Vivo Model van leverbiologie

We hebben een muismodel van chronische leverfibrose opgesteld, dat een geschikt diermodel biedt voor de virus-geïnduceerde leverfibrose mechanistische studie van galatresie (BA) en een platform voor toekomstige BA-behandelingen.

Een muismodel van chronische leverfibrose voor de studie van galatresie

Hier wordt de methode geïntroduceerd voor het induceren van pulmonale arteriële hypertensie geassocieerd met longfibrose (PF-PH) rattenmodel door bleomycine in de luchtwegen te injecteren. We bieden ook een stapsgewijze aanpak om dit diermodel te valideren.

Opstelling en validatie van een rattenmodel van pulmonale arteriële hypertensie geassocieerd met longfibrose

Muismodel van metabole disfunctie-geassocieerde steatotische leverziekte (MASLD) met metabole disfunctie, veranderingen in levergenexpressie en histopathologische veranderingen in de lever die lijken op menselijke MASLD, waaronder fibrose die evolueert naar gevorderd fibrose stadium 3. Dit model kan worden gebruikt in studies naar de pathofysiologie van MASLD en in preklinische studies van nieuwe therapieën.

Muismodel van metabole disfunctie-geassocieerde steatotische leverziekte met fibrose

Een unieke rattenlever hilaire clamp model ontwikkeld voor het bestuderen van de effecten van farmacologische moleculen bij het verbeteren van ischemie-reperfusieletsel. Dit model omvat directe canulatie van het portaal toevoer naar het segment ischemische lever via een tak van de poortader, zodat hij direct hepatische afgifte.

Wijze van Direct Segmentale Intra-lever Delivery Met behulp van een Rat Liver Hilar Clamp Model

Leer een betrouwbaar ratmodel van leverfibrose maken met DMN-inductie en histologische analyse. Deze methode ondersteunt onderzoek naar ziekteprogressie en het testen van anti-fibrotische middelen.

De dimethylnitrosamine geïnduceerde leverfibrose Model in het Rat

Meer video's verkennen