Name: Chirurgische Aanpak voor midden cerebrale slagader occlusie en reperfusie Induced Stroke in Muizen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-10-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 30 s
Description: Leer de Longa-methode voor midden cerebrale slagader occlusie bij muizen om ischemie te reproduceren. Deze techniek biedt hogere overlevingskansen en helpt bij het identificeren van therapeutische doelen voor beroertebehandeling.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit werk werd gefinancierd door het National Institute of Health, het National Heart Lung and Blood Institute (NIH en NHLBI; HL125572-01A1) en het LSUHSC-S start up-fonds voor F.N.E. Gavins.

Dit protocol en de experimenten gerapporteerd in de video werden goedgekeurd door de LSUHSC-S Institutional Animal Care en gebruik Comite en zijn in overeenstemming met de richtlijnen van de NIH. OPMERKING: Mannelijke C57BL / 6 muizen met een gewicht 25-29 g werden gebruikt in deze studie. De muizen werden gehandhaafd op een standaard chow pellet dieet met vrije toegang tot water, onder een 12 uur licht / donker-cyclus in individueel geventileerde kooien. De procedure zal worden uitgevoerd onder steriele omstandigheden met behulp van steriele technieken (bijvoorbeeld, steriele handschoenen, steriele instrumenten). 1. Pre-operatieve Voorbereidingen <ol><li> Induceren anesthesie met een combinatie van ketamine (150 mg / kg) en xylazine (10 mg / kg) intraperitoneaal geïnjecteerd (ip). Monitor diepte van de anesthesie te voet pinch in eerste instantie om de 3 - 5 minuten en elke 10 min als de verdoving eenmaal is bereikt. Terwijl het dier onder narcose toedienen een steriele oculaire zalf tot droog voorkomen. De initiële dosis van ketamine / xylazine duurt meestal about 30-40 minuten. Een extra dosis kan worden toegediend als dat nodig is, die wordt gecontroleerd door de reactie van het dier om een ​​voet snuifje. </li><li> Plaats muizen in een liggende positie op een temperatuur gebracht verwarmingsmat en handhaven lichaamstemperatuur bij 36,5 ± 0,1 ° C, die geverifieerd wordt met een rectale sonde. </li><li> Scheer de nek en desinfecteren van de huid met 70% ethanol. </li></ol> 2. Occlusie van de MCA (figuur 1) <ol><li> Maak een middellijn hals incisie met behulp van Iris rechte schaar en trekken (met behulp van oprolmechanismen) de zachte weefsels naar de schepen bloot te leggen. </li><li> Ontleden de CCA en de Rekenkamer uit de omliggende weefsel met behulp van Dumont tang zonder schade aan de nervus vagus. </li><li> Maak een tijdelijke hechting door koppelverkoop een losse knoop rond de CCA met behulp van 6-0 zijde. </li><li> Maak een permanente hechting rond de Rekenkamer en de kleinere schepen die zich uitstrekt van door strak ligeren van de vaten (distaal van de splitsing van de CCA). </li><li> Maak een hechting around de Rekenkamer proximale naar de CCA bifurcatie. </li><li> Plaats een microvaatje clip rond de interne halsslagader (ICA) en de pterygopalatine slagader (PPA). </li><li> Maak een kleine incisie in de ECA met behulp van micro ontleden voorjaar schaar en plaats een 180 pm-silicium getipt monofilament. De ketting zo dicht mogelijk bij de permanente hechting mogelijk gemakkelijker manipuleren van het filament. </li><li> Draai de tijdelijke hechting rond de Europese Rekenkamer met de gloeidraad geplaatst en verwijder het microvaatje clip. </li><li> Snijd de Rekenkamer tussen de permanente, distale hechtdraad en de ingang van het filament met behulp van micro ontleden voorjaar schaar. </li><li> Leid de draad door de ICA tot u weerstand voelt (ongeveer 9 -. 10 urn voorbij de splitsing van de CCA) in het MCA. LET OP: In het geval te veel weerstand wordt gevoeld, terwijl de meerderheid van de gloeidraad is nog steeds zichtbaar is, kan het filament de PPA hebben gesloten. Als dit gebeurt, trek de draad terug naar de splitsing, voorzichtig push naar voren in de ICA met behulp van Dumont tang, en voortgang van het filament tot het kan worden gevisualiseerd in de ICA. </li></ol> 3. reperfusie <ol><li> Na een 30-min occlusie periode, verwijder de gloeidraad door voorzichtig terug te trekken met behulp van Dumont tang en zet de hechtdraad rond het open einde van de Europese Rekenkamer. </li><li> Verwijder de tijdelijke hechting rond de CCA door voorzichtig losmaken van de ligatuur met behulp van Dumont pincet en de bloedstroom wordt hervat door de CCA. </li><li> Sluit de incisie met een continue chirurgisch hechtmateriaal. Sluiting van de huid kan worden bereikt door continue of onderbroken hechtingen. Huid nietjes zijn ook een aanvaardbare methode. </li><li> Injecteer muizen met 1 ml zoutoplossing subcutaan als volume aanvullen en de analgetische carprofen (5 mg / kg, sc) voor de verlichting van pijn en ongemak van de chirurgische procedure, tekens dat ook aanvullende pijnverlichting nodig onder terug gebogen, ungroomed laag, verminderde activiteit, abnormalehouding en verminderde eetlust. </li><li> Acht muizen gedurende het herstel van de anesthesie bij een verwarmd 30 ° C kooi met een warmtelamp geregeld met een temperatuurregelaar en plaats fijngestampt Chow in een petrischaal op de vloer van de kooi te eten te stimuleren. De muizen zal men per kooi worden gehuisvest tijdens de reperfusie periode. </li></ol> 4. Sham Surgery <ol><li> Muizen onderworpen aan dezelfde procedure zonder monofilament inbrengen. </li></ol> 5. Postoperatieve Neurological Scores (tabel 1; figuur 2) <ol><li> Neurologisch evalueren muizen na de juiste reperfusie periode met behulp van een 18-puntensysteem beoordelen van de Algemene; Motor; Sensory; Proprioceptie. Een hogere neurologische score komt overeen met verminderde neurologische functie. LET OP: Muizen die niet reageert en niet in staat om te lopen worden beoordeeld zullen worden gedood. Andere criteria voor humane euthanasie zal een gewichtsverlies van meer dan 20%, respiratoir distress en infectie rond het operatiegebied. A CO 2 kamer wordt gebruikt voor euthanasie en de fysische methode gedood bevestigen cervicale dislocatie of thoracotomie zijn. </li></ol> 6. Meting van herseninfarct Volume (figuur 3) <ol><li> Induceren anesthesie met een combinatie van ketamine (150 mg / kg) en xylazine (10 mg / kg) geïnjecteerd ip Monitor anesthesiediepte voet pinch aanvankelijk iedere 3-5 minuten en elke 10 minuten na verdoving is bereikt. </li><li> Plaats muizen in een liggende positie en snijd de huid van de buik naar de hals gevolgd door het peritoneum behulp rechte iris scharen. </li><li> Til het borstbeen met behulp van Dumont pincet en snijd de ribben naar het hart bloot te leggen. </li><li> Open de linker- en rechterzijde van de borstkas en twee paren hemostats, waardoor de hart. </li><li> Plaats een 26 G naald bevestigd aan een 5 ml spuit in de linker hartkamer en snijd de rechter atrium. Perfuseren met kamertemperatuur fysiologische zoutoplossing of fbsfate gebufferde zoutoplossing (PBS) tot het vloeibaar wordt duidelijk (gewoonlijk 3-5 min). </li><li> Verwijder de schedel voorzichtig weg van de hersenen met behulp van iris rechte schaar en Dumont tang. </li><li> Snijd de reukkwabben en cerebellum met behulp van een scheermesje zodat de hersenen past in de matrix. Gebruik deze matrix aan de hersenen snijden in gelijke segmenten. Chill de matrix voor gebruik om het weefsel koel te houden. Plaats de hersenen in de matrix en zet deze op het ijs. </li><li> Snijd de hersenen in het 2 mm coronale segmenten met behulp van twee scheermesjes. Maak de eerste snede met behulp van een scheermesje beginnend 2 mm van de bovenkant en laat dit scheermesje in zijn plaats. Voeg een 2 mm achter de eerste snede. Verwijder het eerste scheermesje met het weefsel verbonden. Herhaal dit proces tot alle weefsel is gesneden. NB: Er moeten 4-5 segmenten als u klaar bent. </li><li> Plaats de segmenten in 24-wells plaat met 2% 2,3,5-triphenyltetrazalium chloride (TTC), die vervolgens in een ondiep waterbad geplaatst eent 37 ° C gedurende 20 min. Plaatsen van elk segment een individuele put helpt in de volgorde waarin ze werden gesneden houden. Zorg ervoor dat de TTC oplossing volledig bedekt het weefsel segmenten. Na 10 minuten zet alle plakjes over. </li><li> Plaats een kleine hoeveelheid 10% formaline in de putjes van een nieuwe plaat met 24 putjes en de segmenten dragen aan deze plaat in de volgorde waarin ze werden gesneden. </li><li> Scan de segmenten in de computer en analyseren van de infarctgrootte uitgedrukt als percentage van de gehele hersenen segment 6 gebruikt ImageJ analysesoftware (NIH Image 1.57 software) 6. <ol><li> Schets de infarctgebied een oppervlaktemeting te genereren. Naast het meten van de gehele contralaterale halfrond om het gebied te bepalen. Verdeel het infarct gebied van het gebied van de contralaterale hemisfeer en vermenigvuldig met 100 tot het infarct volume bepalen. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Go, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+disease+and+stroke+statistics-2014+update%3A+a+report+from+the+American+Heart+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Heart disease and stroke statistics-2014 update: a report from the American Heart Association.</a> Circulation. 129 (3), e28-e292 (2014).</li>
<li>Marks, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patients+with+acute+stroke+trated+with+intravenous+tPS+3-6+hours+after+stroke+onset%3A+correlations+between+MR+angiography+findings+and+perfusion-+and+diffusion-weighted+imaging+in+the+DEFUSE+study%5BTitle%5D)+AND+%22Radiology%22%5BJournal%5D)">Patients with acute stroke trated with intravenous tPS 3-6 hours after stroke onset: correlations between MR angiography findings and perfusion- and diffusion-weighted imaging in the DEFUSE study.</a> Radiology. 249 (2), 614-623 (2008).</li>
<li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).</li>
<li>Koizumi, J., Yoshida, Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+studies+of+ischemic+brain+edema%2C+I%3A+a+new+experimnetal+model+of+cerebral+embolism+in+rats+in+which+recirculation+can+be+introduced+in+the+ischemic+area%5BTitle%5D)+AND+%22Jpn+J+Stroke%22%5BJournal%5D)">Experimental studies of ischemic brain edema, I: a new experimnetal model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area.</a> Jpn J Stroke. (8), 1-8 (1986).</li>
<li>Smith, H. K., Russell, J. M., Granger, D. N., Gavins, F. N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+differences+between+two+classical+surgical+approaches+for+middle+cerebral+artery+occlusion-induced+stroke+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Meth%22%5BJournal%5D)">Critical differences between two classical surgical approaches for middle cerebral artery occlusion-induced stroke in mice.</a> J Neurosci Meth. 249, 99-105 (2015).</li>
<li>Gavins, F. N., Dalli, J., Flower, R. J., Granger, D. N., Perretti, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+the+annexin+1+counter-regulatory+circuit+affords+protection+in+the+mouse+brain+microcirculation%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Activation of the annexin 1 counter-regulatory circuit affords protection in the mouse brain microcirculation.</a> FASEB J. 21 (8), 1751-1758 (2007).</li>
<li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atorvastain+induction+of+VEGF+and+BDNF+promotes+brain+plasticity+after+stroke+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Atorvastain induction of VEGF and BDNF promotes brain plasticity after stroke in mice.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 25 (2), 281-290 (2005).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrastriatal+transplantation+of+bone+marrow+nonhematopoietic+cells+improves+functional+recovery+after+stroke+in+adult+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Intrastriatal transplantation of bone marrow nonhematopoietic cells improves functional recovery after stroke in adult mice.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 20 (9), 1311-1319 (2000).</li>
<li>Liesz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+spectrum+of+systemic+immune+alterations+after+murine+focal+ischemia%3B+the+immunodepression+versus+immunomodulation%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">The spectrum of systemic immune alterations after murine focal ischemia; the immunodepression versus immunomodulation.</a> Stroke. 40 (8), 2849-2858 (2009).</li>
<li>Beckmann, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+resolution+magnetic+resonance+angiography+non-invasively+reveals+mouse+strain+differences+in+the+cerebrovascular+anatomy+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Magn+Reson+Med%22%5BJournal%5D)">High resolution magnetic resonance angiography non-invasively reveals mouse strain differences in the cerebrovascular anatomy in vivo.</a> Magn Reson Med. 44 (2), 252-258 (2000).</li>
<li>Barone, F. C., Knudsen, D. J., Nelson, A. H., Feuerstein, G. Z., Willette, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+strain+differences+in+susceptibility+to+cerebral+ischemia+are+related+to+cerebral+vascular+anatomy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Mouse strain differences in susceptibility to cerebral ischemia are related to cerebral vascular anatomy.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 13 (4), 683-692 (1993).</li>
<li>Burk, J., Burggraf, D., Vosko, M., Dichgans, M., Hamann, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protection+of+cerebral+microvasculature+after+moderate+hypothermia+following+experimental+focal+cerebral+ischemia+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Protection of cerebral microvasculature after moderate hypothermia following experimental focal cerebral ischemia in mice.</a> Brain Res. (1226), 248-255 (2008).</li>
<li>Noor, R., Wang, C. X., Shuaib, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+hyperthemia+on+infarct+volume+in+focal+embolic+model+of+cerebral+ischemia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Effects of hyperthemia on infarct volume in focal embolic model of cerebral ischemia in rats.</a> Neurosci Lett. 349 (2), 130-132 (2003).</li>
<li>Shin, H. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mild+induced+hypertension+improves+blood+flow+and+oxygen+metabolism+in+transient+focal+cerebral+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Mild induced hypertension improves blood flow and oxygen metabolism in transient focal cerebral ischemia.</a> Stroke. 39 (5), 1548-1555 (2008).</li>
<li>Richter, S. H., Garner, J. P., Würbel, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+standardization%3A+cure+or+cause+of+poor+reproducibility+in+animal+experiments%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Environmental standardization: cure or cause of poor reproducibility in animal experiments?</a> Nat Methods. 6 (4), 257-261 (2009).</li>
<li>Holloway, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Both+MC1+and+MC3+receptors+provide+protection+from+cerebral+ischemia-reperfusion-induced+neutrophil+recruitment%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Both MC1 and MC3 receptors provide protection from cerebral ischemia-reperfusion-induced neutrophil recruitment.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 35, (2015).</li>
<li>Vandeputte, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+inflammatory+response+in+a+photothrombotic+stroke+model+by+MRI%3A+implications+for+stem+cell+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Imaging+Biol%22%5BJournal%5D)">Characterization of the inflammatory response in a photothrombotic stroke model by MRI: implications for stem cell transplantation.</a> Mol Imaging Biol. 13 (4), 663-671 (2010).</li>
<li>Iwae, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glial+cell-mediated+deterioration+and+repair+of+the+nervous+system+after+traumatic+brain+injury+in+a+rat+model+as+assessed+by+positron+emission+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Glial cell-mediated deterioration and repair of the nervous system after traumatic brain injury in a rat model as assessed by positron emission tomography.</a> J Neurotrauma. 27 (8), 1463-1475 (2010).</li>
<li>Morris, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developments+of+a+water-maze+procedure+for+studying+spatial+learning+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Developments of a water-maze procedure for studying spatial learning in the rat.</a> J Neurosci Methods. 11 (1), 47-60 (1984).</li>
<li>Mouzon, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repetitive+mild+traumatic+brain+injury+in+a+mouse+model+produces+learning+and+memory+deficits+accompanied+by+histological+changes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Repetitive mild traumatic brain injury in a mouse model produces learning and memory deficits accompanied by histological changes.</a> J Neurotrauma. 29 (18), 2761-2773 (2012).</li>
<li>Fleming, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+and+progressive+sensorimotor+anomalies+in+mice+overexpressing+wild-type+human+%CE%B1-synuclein%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Early and progressive sensorimotor anomalies in mice overexpressing wild-type human α-synuclein.</a> J Neurosci. 24 (42), 9434-9440 (2004).</li>
<li>Sedelis, M., Schwarting, R. K. W., Huston, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+phenotyping+of+the+MPTP+mouse+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Behavioral phenotyping of the MPTP mouse model of Parkinson's disease.</a> Behav Brain Res. 125 (1-2), 109-125 (2001).</li>
<li>Toon, L., Silva, M., D'Hooge, R., Aerts, J. M., Berckmans, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+gait+analysis+in+the+open-field+test+for+laboratory+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Res+Methods%22%5BJournal%5D)">Automated gait analysis in the open-field test for laboratory mice.</a> Behav Res Methods. 41 (1), 148-153 (2009).</li>
<li>Lubjuhn, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+testing+in+a+mouse+stroke+model+induced+by+occlusion+of+the+distal+middle+cerebral+artery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Functional testing in a mouse stroke model induced by occlusion of the distal middle cerebral artery.</a> J Neurosci Methods. 184 (1), 95-103 (2009).</li>
<li>Bouët, V., Freret, T., Toutain, J., Divoux, D., Boulouard, M., Schumann-Bard, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensorimotor+and+cognitive+deficits+after+transient+middle+cerebral+artery+occlusion+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Sensorimotor and cognitive deficits after transient middle cerebral artery occlusion in the mouse.</a> Exp Neurol. 203 (2), 555-567 (2007).</li>
<li>Freret, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+deficits+after+distal+focal+cerebral+ischemia+in+mice%3A+usefulness+of+adhesive+removal+test%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Behavioral deficits after distal focal cerebral ischemia in mice: usefulness of adhesive removal test.</a> Behav Neurosci. 123 (1), 224-230 (2009).</li>
<li>Zhan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deficient+neuron-microglia+signaling+results+in+impaired+functional+brain+connectivity+and+social+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Deficient neuron-microglia signaling results in impaired functional brain connectivity and social behavior.</a> Nature Neurosci. 17, 400-406 (2013).</li>
<li>Balkaya, M., Kröber, J. M., Rex, A., Endres, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+post-stroke+behavior+in+mouse+models+of+focal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow%22%5BJournal%5D)">Assessing post-stroke behavior in mouse models of focal ischemia.</a> J Cereb Blood Flow. 33, 330-338 (2012).</li>
<li>Wiessner, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-nogo-a+antibody+infusion+24+hours+after+experimental+stroke+imporved+behavioral+outcome+and+corticospinal+plasticity+in+normotensive+and+spontaneously+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Anti-nogo-a antibody infusion 24 hours after experimental stroke imporved behavioral outcome and corticospinal plasticity in normotensive and spontaneously hypertensive rats.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 23, 154-165 (2003).</li>
<li>Schaar, K. L., Brenneman, M. M., Savitz, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+assessments+in+the+rodent+stroke+model%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Transl+Stroke+Med%22%5BJournal%5D)">Functional assessments in the rodent stroke model.</a> Exp Transl Stroke Med. 2 (13), (2010).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Sinds dat 20 jaar geleden, is de MCAo model voor humane slag met inbrengen van een filament gebruikt in een groot aantal studies. Dit is voornamelijk te wijten aan het feit dat het bootst wat klinisch gebeurt in de meest voorkomende vorm van een beroerte (dat wil zeggen, ischemische beroerte). Het striatum is gevoeliger voor ischemie dan de cerebrale cortex, en als zodanig zal de lengte van ischemische tijd vertalen in of zowel het striatum en de dorsolaterale cortex worden beïnvloed, of alleen het striatum. Zo...

Beroerte is de vijfde belangrijkste doodsoorzaak ter wereld, met een persoon de ziekte sterven elke 4 minuten. Meer dan 800.000 Amerikanen lijden aan een beroerte elk jaar, die niet alleen is verwoestend voor de patiënt, maar ook voor hun families. Beroerte is de belangrijkste oorzaak van volwassen gehandicapten en de jaarlijkse uitgaven worden geraamd op in de orde van 36500000000 $ 1, ondanks zeer weinig behandeling opties beschikbaar zijn. Tissue (tPA) is de enige Food and Drug Administration (FDA) een licentie drug voor ischemische beroerte. Het is echter alleen effectief indien toegediend aan patiënten binnen 3-6 uur na het begin van de slag, en in deze gevallen profiteert slechts 4% van de patiënten 2. Daarom is het noodzakelijk dat reproduceerbaar klinisch relevante diermodellen beroerte worden gebruikt om te helpen bij de ontwikkeling van mogelijke therapeutische strategieën en behandelingen voor deze ziekte. Het is belangrijk op te merken dat in vitro </em&gt; modellen, terwijl nuttig bij het modelleren van bepaalde aspecten van cerebrale stoornissen, niet kunnen recapituleren de complexe fysiologische interacties die optreden in de hersenen en periferie na een beroerte. Derhalve in vivo methoden zijn noodzakelijk. De meest voorkomende vorm van een beroerte is ischemische oorsprong, goed voor 87% van de totale beroertes. Andere bewegingen zijn intracerebrale bloeding (9%) en subarachnoïdale bloeding (4%), en worden meestal veroorzaakt door een emboli naar de middelste cerebrale arterie (MCA). Dit is toe te schrijven aan de prominente curve aan de wortel van MCA, die laminaire bloedstroom invoeren van de hersenen veroorzaakt te worden verstoord. De MCA komt voort uit de interne halsslagader (ICA) en de routes langs de laterale sulcus, waar ze takken en projecten om de basale ganglia en de zijvlakken van de frontale, pariëtale en temporale kwabben, met inbegrip van de primaire motorische en sensorische cortex. De cirkel van Willis wordt gecreëerd door posterieure cerebrale slagaders zijnverbonden met de cerebrale arteriën en de achterste communicerende arteriën. De intraluminale filament of hechting model van MCAo is een van de meest gebruikte beroerte onderzoek. Er zijn echter een paar verschillende variaties op dit model, en deze zijn op basis van of de gloeidraad in de externe halsslagader wordt gestoken (ECA, de zogenoemde Longa methode) 3, of dat in de ICA ingebracht (aangeduid als de Koizumi methode) 4. Bij methode Koizumi, moet de carotis communis (CCA) aan de zijde van de operatie permanent gekoppeld indien het filament verwijderd om te voorkomen bloeden uit de incisie in de CCA, terwijl in de werkwijze Longa&#39;s is de ERK die permanent moet worden gekoppeld 5 . Hier de Longa methode zal gebruikt worden als we het gevoel dat dit is een veel betere en een meer klinisch relevante chirurgische model van ischemische beroerte. Bovendien is het gebruik van een silicium getipt monofilament, vooral met de Longa werkwijze produceert zeerreproduceerbaar MCAo tegenover de vlam stomp monofilamenten, die vaak produceren onvolledige occlusie en / of subarachnoïdale bloeding 6. De intraluminale filament methode kan worden gebruikt als een model van permanente of transiënte occlusie 4,6. Om de vluchtige model voeren, wordt het filament verwijderd na een periode van ischemie (bijvoorbeeld, 30 minuten, 60 minuten of 2 uur) en reperfusie mag gebeuren. Dit model, enigszins, simuleert het herstel van de bloedstroom na spontane of therapeutische interventie (bijvoorbeeld tPA toediening) een trombo-embolische stolsel bij mensen lyseren. Voor de vaste model wordt het filament eenvoudigweg in plaats gelaten gedurende een periode (bijvoorbeeld 24 uur), dus geen reperfusie plaatsvindt. Een ander voordeel van de intraluminale filament methode is dat een craniotomie niet hoeft te worden uitgevoerd, zodat de schedel intact worden gelaten en wijzigingen intracraniële druk en temperatuur voorkomen. <p class = &quot;jove_content&quot;&gt; In deze video laten we zien hoe de Longa intraluminale filament methode om MCAo en reperfusie induceren uit te voeren. We laten ook zien hoe de 18-point neurologische score uit te voeren en het bepalen van het infarct volume met 2,3,5-triphenyltetrazalium chloride (TTC) kleuring.

<table><tbody><tr><td>Male C57BL/6 muizen</td><td>Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME</td><td>#000664</td><td></td></tr><tr><td>Ketamine Hydrochloride</td><td>Morris &amp; Dickson, Shreveport, LA</td><td>67457-108-10</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Akorn, Inc, Lake Forest, IL</td><td>NADA# 139-236</td><td></td></tr><tr><td>DC temperatuurregelsysteem</td><td>FHC, Bowdoin, ME</td><td>40-90-8D</td><td></td></tr><tr><td>Mini rectale thermistor sonde</td><td>FHC, Bowdoin, ME</td><td>40-80-5D-02</td><td></td></tr><tr><td>Verwarmingskussentjes</td><td>FHC, Bowdoin, ME</td><td>40-90-2-06</td><td></td></tr><tr><td>Scheerapparaten</td><td>Amazon, Bellevue, WA</td><td>#64800</td><td></td></tr><tr><td>70% ethanol</td><td>Worldwide Medical Products, Bristol, PA</td><td>#51011023</td><td></td></tr><tr><td>Dissectiemicroscoop</td><td>Olympus, Center Valley, PA</td><td>SZ40</td><td></td></tr><tr><td>Iris schaar (recht)</td><td>Fine Science Tools, Foster City, CA</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>Dumont pincetten (45&deg; gebogen punt)</td><td>Fine Science Tools, Foster City, CA</td><td>11297-00</td><td></td></tr><tr><td>Microvatclip</td><td>Fine Science Tools, Foster City, CA</td><td>18055-05</td><td></td></tr><tr><td>Micro dissectieschaartjes (recht)</td><td>Fine Science Tools, Foster City, CA</td><td>14088-10</td><td></td></tr><tr><td>Retractoren (blunt)</td><td>Fine Science Tools, Foster City, CA</td><td>18200-11 (Helen gebruikte 17022-13)</td><td></td></tr><tr><td>Wattenstaafjes met katoen</td><td>Fisher Scientific, Waltham, MA</td><td>23-400-100</td><td></td></tr><tr><td>Gaasjes</td><td>Covidien, Mansfield, MA</td><td>#9023</td><td></td></tr><tr><td>7-0 zijde gevlochten chirurgische hechtdraad</td><td>Braintree Scientific, Braintree, MA</td><td>SUT-S103</td><td></td></tr><tr><td>0,9% natriumchloride</td><td>Morris &amp; Dickson, Lake Forest, IL</td><td>0409-4888-20</td><td></td></tr><tr><td>6-0 medium MCAO hechtdraad (met siliconenrubber gecoat monofilament)</td><td>Doccol Corporation, Sharon, MA</td><td>6023PKRe</td><td></td></tr><tr><td>Sofsilk 6-0 siliconen gecoate gevlochten zijde</td><td>Covidien, Mansfield, MA</td><td>SUT-14-1</td><td></td></tr><tr><td>Carprofen</td><td>Pfizer, New York, NY</td><td>NADA# 141-199</td><td></td></tr><tr><td>Puralube</td><td>Dechra, Norwich, UK</td><td>NDC 17033-211-38</td><td></td></tr><tr><td>Physitemp temperatuurregelaar</td><td>Harvard Apparatus, Holliston, MA</td><td>TCAT-2AC</td><td></td></tr><tr><td>Warmtelamp</td><td>Harvard Apparatus, Holliston, MA</td><td>HL-1</td><td></td></tr><tr><td>Laser doppler sonde</td><td>AD Instruments, Colorado Springs, CO</td><td>MSP100XP</td><td></td></tr><tr><td>24-wells platen</td><td>Fisher Scientific, Waltham, MA</td><td>#353226</td><td></td></tr><tr><td>Fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS)</td><td>Life Technologies, Carlsbad, CA</td><td>20012-050</td><td></td></tr><tr><td>Eenzijdige scheermesjes</td><td>Fisher Scientific, Waltham, MA</td><td>12-640</td><td></td></tr><tr><td>2,3,5-trifenyltetrazaliumchloride (TTC)</td><td>Sigma Aldrich, St. Louis, MO</td><td>T8877-50G</td><td></td></tr><tr><td>Muis hersenmatrix slicer</td><td>Braintree Scientific, Braintree, MA</td><td>BS-A 5000C</td><td></td></tr><tr><td>Waterbad</td><td>VWR, Radnor, PA</td><td>#182</td><td></td></tr><tr><td>10% formaline</td><td>Sigma Aldrich, St. Louis, MO</td><td>HT501128-4L</td><td></td></tr><tr><td>ImageJ analysesoftware</td><td>NIH, Bethesda, MD</td><td>gratis download</td><td></td></tr><tr><td>Retractor</td><td>Medical Device Purchase, Newcastle, CA</td><td>MP-740</td><td></td></tr></tbody></table>

chirurgische aanpak voor midden cerebrale slagader occlusie en reperfusie induced stroke in muizen

Surgical Approach for Middle Cerebral Artery Occlusion and Reperfusion Induced Stroke in Mice

Beroerte is een belangrijke doodsoorzaak wereldwijd en blijft een van de belangrijkste oorzaken van langdurige volwassene handicap. Ongeveer 87% van de beroertes zijn ischemisch oorsprong en komen op het grondgebied van de middelste cerebrale slagader (MCA). Momenteel is de enige Food and Drug Administration (FDA) goedgekeurde geneesmiddel voor de behandeling van deze verwoestende ziekte is weefselplasminogeenactivator (tPA). Echter, tPA heeft een klein therapeutisch venster voor toediening (3-6 uur) en is alleen effectief in 4% van de patiënten die daadwerkelijk ontvangen. Huidige onderzoek richt zich op het begrijpen van de pathofysiologie van een beroerte om potentiële therapeutische targets te vinden. Zo betrouwbare modellen zijn van cruciaal belang, en de MCA occlusie (MCAo) model (ook aangeduid als de intraluminale filament of hechtdraad model) wordt beschouwd als de meest klinisch relevante chirurgische model van ischemische beroerte, en is vrij niet-invasieve en gemakkelijk reproduceerbaar. Typisch de MCAo model wordt gebruikt bij knaagdieren, vooral muizen wijtenalle genetische varianten voor deze species. Hier beschrijven wij (en aanwezig in de video) hoe de MCAo model (met reperfusie) in muizen met succes uit te voeren om betrouwbare en reproduceerbare gegevens te genereren.

Muizen ondergingen 30-min MCAo geïnduceerde hersenischemie (figuur 1), gevolgd door een periode van reperfusie (24 uur en 1 week worden hier voorgesteld, maar de lengte van reperfusie kan worden gevarieerd). De mortaliteit gedurende MCAo was minimaal (ongeveer 2%). Bericht ischemie, het sterftecijfer (binnen de eerste 24 uur) was ongeveer 26%. Laser Doppler flowmetrie werd gebruikt om de bloedstroom perfusie i...

Om de pathofysiologie van beroerte te begrijpen, is het belangrijk betrouwbare modellen. Dit document zal een van de meest gebruikte takt modellen beschrijven in muizen, genaamd de middelste cerebrale slagader occlusie (MCAo) model (ook aangeduid als de intraluminale filament of hechtdraad model) met reperfusie.

Chirurgische Aanpak voor midden cerebrale slagader occlusie en reperfusie Induced Stroke in Muizen

Stroke is a leading cause of death worldwide and continues to be one of the major causes of long-term adult disabilities. About 87% of strokes are ...

Het algemene doel van de Longa-methode is het reproduceren van ischemie bij de wortel van de middelste cerebrale arterie, of MCA, aangezien ischemische beroertes bij mensen meestal optreden door de occlusie van de MCA. Deze methode kan ons helpen bij het beantwoorden van cruciale vragen in het vakgebied van beroertes, zoals het vinden van een geschikt therapeutisch doelwit voor de behandeling van deze ziekte. Het belangrijkste voordeel van de Longa-methode ten opzichte van alternatieve technieken is de overlevingskans.Er is bij deze techniek ook sprake van een toename in leukocyt-endotheelcelinteracties en het infarctvolume. Deze procedure zal worden gedemonstreerd door Shantel Vital, de manager van mijn laboratorium. Nadat anesthesie is geïnduceerd bij een mannelijke C57 black six muis volgens het tekstprotocol, dient de diepte van de anesthesie te worden gecontroleerd via een voetknijprespons en moet een steriele oogzalf worden aangebracht om uitdroging te voorkomen.Scheer vervolgens de nek van het dier. Plaats de muis in rugligging op een temperatuurgecontroleerde mat en voer een rectale probe in om een lichaamstemperatuur van 36,5 plus of minus 0,1 °C te monitoren en te handhav

surgical-approach-for-middle-cerebral-artery-occlusion-reperfusion

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Filamenteuze occlusie van het Midden-cerebrale slagader is een gemeenschappelijk model voor het bestuderen van ischemische beroerte in muizen.

Modellering Stroke in Muizen - midden cerebrale slagader occlusie met de gloeidraad Model

We zien in de video een methode voor het produceren van een midden cerebrale slagader occlusie bij volwassen muizen met behulp van een intraluminale monofilament. We laten ook zien hoe de omvang van herseninfarct beoordelen door 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) kleuring.

Muis model van de midden cerebrale slagader Occlusion

We beschrijven een muismodel van een beroerte veroorzaakt door de occlusie van de middelste hersenslagader met behulp van een met siliconen omhulde naald. Het protocol kan worden toegepast om een permanente occlusie of een tijdelijke ischemie te induceren, gevolgd door reperfusion.

Inductie van ischemische beroerte en ischemie-reperfusie in Muizen met behulp van het Midden-slagader occlusie Techniek en Visualisatie van Infarct Area

Intraluminale gloeidraad occlusie van de middelste cerebrale slagader is het meest gebruikte in vivo model van experimentele beroerte in knaagdieren. Een alternatieve chirurgische benadering om gemeenschappelijke halsslagader reparatie gebeurt hier, waardoor de reperfusie van de gemeenschappelijke halsslagader en een volledige reperfusie naar het grondgebied van de middelste cerebrale slagader.

Occlusie van de middelste cerebrale slagader waardoor reperfusie via gemeenschappelijke halsslagader reparatie in muizen

Een muismodel van cerebrale ischemie-reperfusie is gevestigd te onderzoeken de pathofysiologie van een beroerte. We distally de rechts midden cerebrale slagader en rechts gemeenschappelijke halsslagader afbinden en bloedstroom herstellen na 10 of 40 min van ischemie.

Muismodel van twee-schip occlusie van cerebrale ischemie-reperfusie

Het protocol heeft tot doel methoden te bieden voor encefalomyosynangiose - enting van een vasculaire temporalis-spierflap op het piale oppervlak van ischemisch hersenweefsel - voor de behandeling van niet-moyamoya acute ischemische beroerte. De werkzaamheid van de aanpak bij het verhogen van angiogenese wordt geëvalueerd met behulp van een voorbijgaand midden-hersenslagader occlusiemodel bij muizen.

Een model voor encefalomyosynangiose behandeling na middelste cerebrale arterie occlusie-geïnduceerde beroerte bij muizen

Dit protocol demonstreert een uniek muizenslagmodel met een middelgroot infarct en een uitstekende overlevingskans. Dit model stelt preklinische beroerte-onderzoekers in staat om de duur van de ischemie te verlengen, verouderde muizen te gebruiken en functionele resultaten op lange termijn te beoordelen.

Een aangepast transcraniaal occlusiemodel voor de middelste cerebrale slagader om de uitkomsten van een beroerte bij oudere muizen te bestuderen

Dit protocol beschrijft het model van voorbijgaande focale cerebrale ischemie bij muizen door intraluminale occlusie van de middelste hersenslagader. Daarnaast worden voorbeelden van uitkomstbeoordeling getoond met behulp van magnetische resonantiebeeldvorming en gedragstests.

Voorbijgaand occlusiemodel van de middelste cerebrale slagader van een beroerte

Hier presenteren we een protocol om een distaal occlusiemodel van de middelste hersenslagader (dMCAO) op te stellen door middel van transcraniële elektrocoagulatie bij C57BL/6J-muizen en evalueren we het daaropvolgende neurologische gedrag en histopathologische kenmerken.

Inductie van acute ischemische beroerte bij muizen met behulp van de distale occlusietechniek van de middelste slagader

Dit protocol beschrijft het proces van voorbereiding op reperfusie van occlusie van de middelste hersenslagader via de gemeenschappelijke halsslagader.

Een gemodificeerd modelpreparaat voor reperfusie van occlusie van de middelste cerebrale slagader

Leer de Longa-methode voor midden cerebrale slagader occlusie bij muizen om ischemie te reproduceren. Deze techniek biedt hogere overlevingskansen en helpt bij het identificeren van therapeutische doelen voor beroertebehandeling.

Chirurgische Aanpak voor midden cerebrale slagader occlusie en reperfusie Induced Stroke in Muizen

Meer video's verkennen