Snelle Moleculaire detectie en differentiatie influenzavirussen A en B
30 januari 2017
We beschrijven een snelle, moleculair-gebaseerde Influenza A en B assay. De Influenza test detecteert elk doel binnen 15 minuten door het gebruik van isotherme amplificatie met influenza-specifieke primers, gevolgd door detectie van targets met moleculaire beacon sondes. De Influenza A en B test is gebruiksvriendelijk en vereist een minimale hands-on tijd om te presteren.
Het algemene doel van deze test is om influenzavirusinfectie te diagnosticeren of uit te sluiten bij patiënten met ademhalingsproblemen. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen op het gebied van klinische diagnostiek, zoals het diagnosticeren van belangrijke oorzaken van ademhalingsinfecties. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het een snelle methode is die kan worden gebruikt in een afspraakgebonden zorgsetting.
De procedure wordt gedemonstreerd door Sam Kaplan, een technicus uit ons laboratorium. Om een neusborstelmonster te verzamelen, steek je de borstel in de neusgat met de meest zichtbare afscheiding of dat het meest verstopt is. Met zachte rotatie duwt u de borstel in de neusgat totdat er weerstand ontstaat en roteert u deze vervolgens meerdere keren tegen de neusholte voordat u deze langzaam uit het neusgat verwijdert.
Bewaar vervolgens de borstel en vervoer deze in een flesje met drie milliliter virustransportmedium. Breng vervolgens het monster en de blauwe monsteropnemer op kamertemperatuur voordat u gaat testen. De oranje testbasis kan worden getest zonder dat u het hoeft op te warmen tot kamertemperatuur.
Laat alle testonderdelen in de folie tot direct voor gebruik. Schakel vervolgens het apparaat in, voer de gebruikers-ID in en druk op OK. Om het testproces te starten, raakt u Test uitvoeren aan op het scherm van het apparaat. Voer vervolgens de patiënt-ID in door het schermtoetsenbord of de barcodescanner te gebruiken en druk op OK. Open vervolgens het deksel en steek de oranje testbasisbuis in de houder van de oranje testbasis.
Bevestig dat de juiste test op het scherm wordt weergegeven en druk op OK. Plaats vervolgens de blauwe monsteropnemer in de houder van de blauwe monsteropnemer en wacht tot de monsteropnemer is opgewarmd. Verwijder vervolgens de verzegeling door twee vingers op de rand van de monsteropnemer te plaatsen om ervoor te zorgen dat deze op zijn plaats blijft. Plaats vervolgens de te testen neusborstel van de patiënt in de monsteropnemer.
Meng krachtig de borstel en de vloeistof gedurende 10 seconden en druk de borstelkop tegen de zijkant van de monsteropnemer om het monster van de borstel te helpen losmaken. Als de testborstels in virustransportmedium worden bewaard, moet u het virustransportmedium 10 seconden in een vortex draaien en vervolgens 200 microliters hiervan toevoegen aan de monsteropnemer. Druk vervolgens op OK om door te gaan.
Druk vervolgens de witte overdrachtscartridge in de blauwe monsteropnemer. Blijf op de monsteropnemer drukken totdat de oranje indicator omhoog komt. Til vervolgens op en sluit de overdrachtscartridge op de testbasis.
De oranje indicator moet dalen zodra de cartridgeoverdracht correct is bevestigd. Sluit het deksel en open het niet voordat het scherm Resultaten verschijnt. Raak nu QC-test uitvoeren aan op het startscherm.
Selecteer de QC-test die moet worden uitgevoerd. Bevestig vervolgens het testtype om het overeen te laten komen met het QC-monster dat bedoeld is voor het testen door op OK te klikken en de instructies op het scherm te volgen om de test te voltooien. Observeer na voltooiing van de testrun de resultaten van de test die op het scherm worden weergegeven met interpretaties voor de aanwezigheid van influenza A, B of onbekende subtypes en herhaal de test voor ongeldige resultaten.
Nadat u dit hebt gedaan, moet u het instrument en de omliggende werkbankruimte schoonmaken met 70% ethanol of 10% bleekmiddeloplossing. Deze figuur toont de gemiddelde CT-waarden die zijn bepaald door de RP-test voor de positieve en negatieve monsters voor elke influenza-subtype. De resultaten laten zien dat de vals-negatieve monsters die zijn bepaald door de influenza A- en B-test te wijten waren aan monsters met een lage virale lading.
Nadat deze techniek eenmaal onder de knie is, kan deze in 15 minuten worden uitgevoerd als deze correct wordt uitgevoerd. Bij het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om te onthouden dat bij het instellen van de test, de overdrachtscartridge totdat deze klikt op zijn plaats moet worden aangesloten op de testbasis. Als deze twee onderdelen niet goed zijn bevestigd, zal de uitvoering mislukken en moet deze vanaf het begin worden herhaald.
Na het bekijken van deze video zou u een goed begrip moeten hebben van hoe u deze diagnostische test voor influenza uitvoert. Vergeet niet dat het werken met monsters van patiënten die mogelijk besmet zijn met influenza uiterst gevaarlijk kan zijn en dat voorzorgsmaatregelen, zoals het dragen van geschikte persoonlijke beschermingsmiddelen, altijd moeten worden genomen tijdens het uitvoeren van deze procedure.
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's
Overzicht
Dit artikel beschrijft een snelle, moleculaire assay voor het detecteren van Influenza A- en B-virussen. De assay maakt gebruik van isotherme amplificatie en molecular beacon-probes, waardoor resultaten binnen slechts 15 minuten beschikbaar zijn.
Belangrijkste componenten van de studie
Wetenschapsgebied
- Klinische diagnostiek
- Moleculaire biologie
- Infectieziekten
Achtergrond
- Influenzavirussen zijn belangrijke veroorzakers van luchtweginfecties.
- Een snelle diagnose is cruciaal voor een effectieve patiëntenzorg.
- Huidige methoden kunnen langere verwerkingstijden vereisen.
- Deze assay heeft tot doel snelle resultaten te leveren in een gebruiksvriendelijk formaat.
Doel van de studie
- Om een snelle assay te ontwikkelen voor het diagnosticeren van influenzavirusinfecties.
- Om de efficiëntie van klinische diagnostiek bij respiratoire aandoeningen te verbeteren.
- Om tijdige behandelbeslissingen in de gezondheidszorg te faciliteren.
Gebruikte methoden
- Isotherme amplificatie met influenza-specifieke primers.
- Detectie van targets met behulp van molecular beacon-probes.
- Monstername via een neusswab.
- Minimale actieve tijd vereist voor de assay.
Belangrijkste resultaten
- De assay geeft binnen 15 minuten resultaten.
- Gebruiksvriendelijke procedure die geschikt is voor klinische omgevingen.
- Detecteert effectief zowel Influenza A- als B-virussen.
- Gedemonstreerd door een laboratoriumtechnicus.
Conclusies
- De assay is een snel en efficiënt instrument voor de diagnose van influenza.
- Het kan de patiëntenzorg bij luchtweginfecties aanzienlijk verbeteren.
- Verdere studies kunnen de toepassing ervan in de klinische diagnostiek uitbreiden.
Veelgestelde vragen
Industriële Relevantie voor Management
Snelle moleculaire detectie van influenzavirussen ondersteunt vroege diagnostische besluitvorming bij het beheer van luchtweginfecties. De doorlooptijd van 15 minuten van de assay maakt tijdige triage mogelijk in point-of-care-omgevingen, waardoor de diagnostische latentie wordt verminderd. Deze mogelijkheid helpt bij het verminderen van risico's in de vroege fase van antivirale ontwikkeling door betrouwbare gegevens over de infectiestatus te verschaffen.
Strategische toepassingen in BioPharma R&D
Vroege ontdekking & targetvalidatie
- Wetenschappelijke waarde: Maakt bevestiging van de influenzainfectiestatus in preklinische modellen mogelijk, ter ondersteuning van studies naar targetvalidatie.
- Operationele waarde: Biedt een snelle readout in een gesloten systeem, waardoor de handmatige verwerkingstijd en het risico op contaminatie worden verminderd.
Screening & Assayontwikkeling
- Wetenschappelijke waarde: Genereert kwantitatieve detectiesignalen via molecular beacon-probes voor assay-optimalisatie.
- Operationele waarde: Levert reproduceerbare resultaten over bevroren, gearchiveerde nasofaryngeale monsters, wat de robuustheid van de assay ondersteunt.
Translationeel & Preklinisch Onderzoek
- Wetenschappelijke waarde: Vergemakkelijkt longitudinale monitoring van de virale load in ziekterelevante systemen, wat bijdraagt aan mechanische risicoreductie.
- Operationele waarde: Maakt crossfunctionele afstemming tussen virologie- en toxicologieteams mogelijk door middel van gestandaardiseerde output.
Integratie van Pijplijn & Workflow
De assay past binnen workflows voor vroege ontdekking waarbij een snelle bevestiging van de infectiestatus vereist is voordat men overgaat tot lead-optimalisatie.
- Discovery Biology: Ondersteunt hypothesetoetsing door onderscheid te maken tussen influenza A- en B-infecties in experimentele cohorten.
- Screening: Maakt de bereiding van gestandaardiseerde biologische monsters mogelijk voor downstream antivirale screening.
- Analytics: Levert kwalitatieve en semi-kwantitatieve resultaten die helpen bij het vergelijken van de antivirale effectiviteit onder verschillende omstandigheden.
- Translationeel onderzoek: Verbindt vroege infectiedetectie met preklinische continuïteit door middel van consistente virale detectie.
- Enterprise-hergebruik: Vormt een herbruikbare diagnostische module voor studies naar respiratoire virussen over meerdere projecten heen.
Operationele & Bedrijfsimpact
- Wetenschappelijke waarde: Vermindert mechanistische ambiguïteit in infectiemodellen door een duidelijke differentiatie van influenzasubtypen te bieden.
- Operationele waarde: Waarborgt standaardisatie en reproduceerbaarheid door een pipette-vrije werking in een gesloten systeem.
- Strategische waarde: Verbetert go/no-go-beslissingen in antivirale programma's door snelle bevestiging van de infectie mogelijk te maken.
- Impact op portfolio: Ondersteunt risico-gecorrigeerde prioritering van verbindingen op basis van tijdige gegevens over target engagement.
Overwegingen voor de implementatie
- Vereist training in het afnemen van nasofaryngeale swabs en de behandeling van monsters in viraal transportmedium.
- Is afhankelijk van instrumentonderhoud en reagensstabiliteit voor consistente prestaties.
- Vereist afstemming van protocollen tussen teams voor monsterbewaking en resultaatinterpretatie.
- Moet rekening houden met een verminderde sensitiviteit bij monsters met een lage virale load, zoals waargenomen bij vergelijkingen met bevroren monsters.
- Profiteert van omgevingscontroles om amplicon-contaminatie te voorkomen in high-throughput omgevingen.
