Name: Protocol voor het isoleren van de muis Cirkel van Willis (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-10-22T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 30 s
Description: Leer een reproduceerbaar protocol voor het isoleren van de Cirkel van Willis bij muizen voor cerebrovasculair onderzoek. Deze methode behoudt de vaatstructuur en ondersteunt studies naar genexpressie bij ziekten zoals Alzheimer.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door Paris VI University en een Pierre Fabre Innovatie subsidie.

Alle procedures werden uitgevoerd in overeenstemming met de Europese communautaire normen voor de verzorging en het gebruik van proefdieren, met goedkeuring van de lokale ethische commissie voor dierproeven (Ile de France-Paris-comité, Authorization 4270). 1. Anesthesie <ol><li> Infuseren een dodelijke dosis pentobarbital (1 mg / 10 g lichaamsgewicht) intraperitoneaal (27-gauge naald en 1-ml spuit) in volwassen muizen voor de operatie. </li></ol> 2. Vessel Perfusie Opmerking: Het is niet nodig om dierenarts zalf op de ogen tijdens het verblijf perfusie. Deze procedure is snel (5-10 minuten) en eindigt in de dood van het dier. Bevestigen het gebrek aan respons met een teen knijpen. <ol><li> Gebruik irisschaar, een insnijding, ongeveer 4 cm lang, in de buikwand en peritoneum, net onder de ribbenkast. </li><li> Maak een kleine incisie (een paar millimeter lang) in het middenrif en vervolgens continue de incisie van het membraan over de gehele lengte van de ribbenkast naar de borstholte bloot te leggen. </li><li> Til het borstbeen weg en klem de punt van het borstbeen met de hemostaat; Plaats de hemostaat op de hals. Zorgvuldig trim de vetweefsel aansluiten van het borstbeen naar het hart. </li><li> Leid de 15-gauge naald perfusie via de linker ventrikel in de apex van het hart. </li><li> Tenslotte, met een schaar op een van de lever lobben snijden naar een uitlaat te creëren. OPMERKING: Een afzetmogelijkheid kan worden gecreëerd door irisschaar een incisie aan het rechter atrium te maken. </li><li> Perfuseren het dier met 25 tot 50 ml met fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS) met een pomp die werkt bij een snelheid van 2,5 ml / min. De lever moet blancheer als het bloed wordt vervangen door PBS. </li><li> Na ongeveer vijf minuten nadat de vloeistof uit de lever volkomen helder, stop de perfusie. </li><li> Als immunokleuring of regelmatige kleuring gepland, perfuseren het dier met 50 ml paraformaldehyde(PFA, 4% in PBS) gedurende 15 min. LET OP: Let op, PFA dampen zijn giftig. Perfusie van het dier met PFA moet in een geventileerde zuurkast worden uitgevoerd. </li></ol> 3. Isolatie van de hersenen en de Cirkel van Willis <ol><li> Isolatie van de hersenen <ol><li> Verwijder het hoofd met een paar chirurgische schaar. </li><li> Maak een middellijn incisie met iris schaar, langs de huid van de hals aan de neus. </li><li> Snij de huid aan de schedel bloot te leggen en verwijder eventueel resterende spieren en vetweefsel met iris schaar. </li><li> Plaats de punt van de irisschaar in de foramen magnum enerzijds en schuift deze langs het binnenoppervlak van de schedel om de externe gehoorgang (ook bekend als de gehoorgang). </li><li> Reproduceren in 3.1.4 beschreven aan de contralaterale zijde incisie en een middellijn snede langs het binnenoppervlak van de inter-pariëtale bot om het begin van de pijlnaad. </li><li> Plant de irisschaar in de frontale bot, recht tussen de ogen, in de pijlnaad en open ze naar de schedel in tweeën gesplitst. </li><li> Til de hersenen, grijpen de olfactorische bollen en met behulp van de iris schaar om de zenuwverbindingen op zijn ventrale oppervlak af te snijden. </li><li> Verwijder de hersenen en plaats deze in een 60 mm petrischaal met ijskoude PBS voor CoW isolement. Volledig onder te dompelen de hersenen in de PBS. Als de hersenen gefixeerd met 4% PFA (voor volgende snijden en immunokleuring of regelmatige kleuring), houd het in een bad van 4% PFA bij 4 ° C gedurende 24 uur. </li></ol></li><li> Isolatie van de cirkel van Willis LET OP: Een dissectie microscoop nodig is voor CoW isolement. De hersenen moet bij 4 ° C gedurende de gehele procedure gehouden. <ol><li> Zet de hersens kraken (dat is op het dorsale oppervlak) de koe visualiseren. </li><li> Gebruik een kleine tang om de voorste cerebrale arteriën (ACA) bij de basis van de olfactorische kwabben grijpen ( <strong&gt; a, figuur 1) en druk uitoefenen om ze dissociëren uit het vat continuüm. Gebruik dezelfde procedure om de middelste cerebrale arteriën (MCA) in b (figuur 1) te snijden. </li><li> Gebruik de scherpe uiteinden van de tang te tillen en verwijder de grote slagaders vormen de koe uit de cortex. </li><li> Til de start van het achterste communicerende arteriën (PCA) om ze los te koppelen van de hersenen door het vastgrijpen van de middelste cerebrale arteriën (MCA) met de tang. Pak de voorste slagaders (ACA en MCA) en trek ze voorzichtig over de optische chiasma in een anterior-dorsale richting. Om verstoring van de koe te voorkomen, onderbreken de procedure te gaan met de andere slagaders. </li><li> Herhaal stap 3.2.2 en 3.2.3 voor de superieure en posterieure cerebellaire slagaders (SCA) / (PCA) (c, figuur 1) en voor de basilaris (BA) (d, figuur 1), trekken ze in een rug- anterieure richting. Stop aan het einde van de procedure beschreven in 3.2.4. </li><li> Verwijder de gehele Koe door zachtjes te trekken met de tang. Plaats de koe in een 60 mm petrischaal gevuld met ijskoude PBS en verwijder alle resterende bevestigd hersenweefsel met twee tang, die de koe in plaats met kleine pinnetjes. </li><li> Houd de geoogste CoW bij -80 ° C voor verdere verwerking voor RNA-zuivering (RNA uitmaling grote hoeveelheden RNA - ongeveer 500 ng) of eiwitextractie. Let op: de koe kan worden gehandhaafd ex vivo gedurende 24 uur door een aanpassing van het orgel bad systeem ontwikkeld voor geïsoleerde muis olfactorische slagader 7. </li></ol></li></ol><img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/54352/54352fig1.jpg" /> Figuur 1: Schematische weergave van een Ventraal aanzicht van de hersenen van muizen benadrukken de koe de koe wordt gevormd uit de twee interne halsslagaders (MCA), die zijn afgeleid van de twee voorste cerebrale arteriën (ACA). het basilairslagader (BA) takken in de achterste (PCA) en een superieure (SCA) cerebrale slagaders, en twee vertebrale slagaders (VA).

<ol><li>Beckmann, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-dependent+cerebrovascular+abnormalities+and+blood+flow+disturbances+in+APP23+mice+modeling+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Age-dependent cerebrovascular abnormalities and blood flow disturbances in APP23 mice modeling Alzheimer's disease.</a> J Neurosci. 23 (24), 8453-8459 (2003).</li>
<li>Sadasivan, C., Fiorella, D. J., Woo, H. H., Lieber, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physical+factors+effecting+cerebral+aneurysm+pathophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Physical factors effecting cerebral aneurysm pathophysiology.</a> Ann Biomed Eng. 41 (7), 1347-1365 (2013).</li>
<li>Ritz, K., Denswil, N., Stam, O., van Lieshout, J., Daemen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cause+and+mechanisms+of+intracranial+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Cause and mechanisms of intracranial atherosclerosis.</a> Circulation. 130 (16), 1407-1414 (2014).</li>
<li>Tulamo, R., Frösen, J., Hernesniemi, J., Niemelä, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+changes+in+the+aneurysm+wall%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurointerv+Surg%22%5BJournal%5D)">Inflammatory changes in the aneurysm wall: a review.</a> J Neurointerv Surg. 2 (2), 120-130 (2009).</li>
<li>Yamada, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+amyloid+angiopathy%3A+emerging+concepts%5BTitle%5D)+AND+%22J+Stroke%22%5BJournal%5D)">Cerebral amyloid angiopathy: emerging concepts.</a> J Stroke. 17 (1), 17-30 (2015).</li>
<li>Oy, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracranial+atherosclerotic+stroke%3A+specific+focus+on+the+metabolic+syndrome+and+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Atheroscler+Rep%22%5BJournal%5D)">Intracranial atherosclerotic stroke: specific focus on the metabolic syndrome and inflammation.</a> Curr Atheroscler Rep. 8 (4), 330-336 (2006).</li>
<li>Lee, H. J., Dietrich, H. H., Han, B. H., Zipfel, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+ex+vivo+model+for+the+study+of+cerebrovascular+function+utilizing+isolated+mouse+olfactory+artery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Korean+Neurosurg+Soc%22%5BJournal%5D)">Development of an ex vivo model for the study of cerebrovascular function utilizing isolated mouse olfactory artery.</a> J Korean Neurosurg Soc. 57 (1), 1-5 (2015).</li>
<li>Hosaka, K., Downes, D. P., Nowicki, K. W., Hoh, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modified+murine+intracranial+aneurysm+model%3A+aneurysm+formation+and+rupture+by+elastase+and+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurointerv+Surg%22%5BJournal%5D)">Modified murine intracranial aneurysm model: aneurysm formation and rupture by elastase and hypertension.</a> J Neurointerv Surg. 6 (6), 474-479 (2013).</li>
<li>Gauthier, S. A., Sahoo, S., Jung, S. S., Levy, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+cerebrovascular+cells+as+a+cell+culture+model+for+cerebral+amyloid+angiopathy%3A+isolation+of+smooth+muscle+and+endothelial+cells+from+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Murine cerebrovascular cells as a cell culture model for cerebral amyloid angiopathy: isolation of smooth muscle and endothelial cells from mouse brain.</a> Methods Mol Biol. 849, 261-274 (2012).</li>
<li>Choi, S., Kim, J., Kim, K., Suh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+in+vitro+culture+of+vascular+endothelial+cells+from+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Korean+J+Physiol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Isolation and in vitro culture of vascular endothelial cells from mice.</a> Korean J Physiol Pharmacol. 19 (1), 35-42 (2015).</li>
<li>Peters, D. G., Kassam, A. B., Yonas, H., O'Hare, E. H., Ferrell, R. E., Brufsky, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+transcript+analysis+in+small+quantitiesof+mRNA+by+SAGE-Lite%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Comprehensive transcript analysis in small quantitiesof mRNA by SAGE-Lite.</a> Nucleic Acids Res. 27 (24), (1999).</li>
<li>Badhwar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stanimirovic%2C+Hamel%2C+%26+Haqqani+The+proteome+of+mouse+cerebral+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Stanimirovic, Hamel, & Haqqani The proteome of mouse cerebral arteries.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 34 (6), 1033-1046 (2014).</li>
<li>Castro, L., Brito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Striatal+neurones+have+a+specific+ability+to+respond+to+phasic+dopamine+release%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Striatal neurones have a specific ability to respond to phasic dopamine release.</a> J Physiol. 591 (13), 3197-3214 (2013).</li>
<li>Hübscher, D., Nikolaev, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+transgenic+mice+expressing+FRET+biosensors%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Generation of transgenic mice expressing FRET biosensors.</a> Methods Mol Biol. 1294, 117-129 (2015).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

We beschrijven hier een reproduceerbare protocol voor de isolatie van de cirkel van Willis. De meest voorkomende cerebrovasculaire aandoeningen van CoW worden met CAA geassocieerde vasculopathieën, intracraniële atherosclerose en intracraniële aneurysma, die allemaal invloed op de wanden van slagaders. De risicofactoren zijn bekend, maar de moleculaire pathogenese van deze hersenaandoeningen steeds slecht begrepen en specifieke biologische merkers voor het voorspellen van het optreden daarvan ontbreken. Er bestaat grote...

De cerebrale arteriële cirkel (circulus arteriosus cerebri), ook bekend als de cirkel van Willis (CoW), lus van Willisor veelhoek Willis) werd eerst beschreven door Thomas Willis in 1664. Het is een anastomose circulatie rond de optische chiasma en de hypothalamus dat kan worden beschouwd als een centrale naaf die bloed naar de hersenen en de omliggende structuren. Bloed in deze structuur via de interne halsslagader en vertebrale slagaders en stroomt uit de cirkel via het interieur middelste en achterste cerebrale slagaders. Elk van deze slagaders heeft links en rechts takken ter weerszijden van de cirkel. De basilaire, post communiceren, en de voorste communiceren slagaders compleet de cirkel (figuur 1 en figuur 2). Het risico van verminderde bloedstroom in een van de uitstroming slagaders wordt geminimaliseerd door de samenvoeging van bloed die de cirkel van de hals- en cerebrale slagaders, teneinde te garanderen dat voldoende bloed wordt toegevoerd aan de bregen. Deze structuur dient ook als de beste methode om collaterale bloedstroom in ernstige occlusieve aandoeningen van de interne halsslagader. Verschillende soorten cerebrovasculaire aandoeningen vinden hun oorsprong in de koe. De meest voorkomende zijn cerebrale amyloïde angiopathie (CAA) geassocieerde vasculopathieën, intracraniële atherosclerose en aneurysma&#39;s. 1, 2, 3 Deze aandoeningen kunnen leiden tot hypoperfusie door vaatverwijding en intracerebrale en / of subarachnoïdale bloeding uiteindelijk vertalen in ischemische of hemorragische beroertes of , in het beste geval een transient ischemic attack. Recente ontwikkelingen in diagnostische procedures, waaronder neuroimaging, eventueel gecombineerd met angiografie, hebben het mogelijk gemaakt om belangrijke cerebrovasculaire ziekten klinisch diagnosticeren, zonder dat een hersenbiopsie. Toch zijn effectieve en specifieke behandelingen (farmacologische of endovasculaire) momenteel ontbreekt en er is dus een noodzaak om te definiëren nieuwemoleculaire doelen. De identificatie van nieuwe targets voor de preventie van deze ziekten bij mensen zal diermodellen en manieren isoleren de cerebro-vasculatuur zoals de koe vereist. Dergelijke modellen moeten bewijzen en aanwijzingen geven aan de specifieke veranderingen, waaronder inflammatoire veranderingen, die zich in de wanden van de grote vaten in diermodellen van intracraniële aneurysma, CAA of intracraniële atherosclerose. 4, 5, 6 We hebben een methode voor muizen CoW isolatie vastgestelde studies vaartuig ontsteking bij de ziekte van Alzheimer (AD) en gerelateerde ziekten zoals CAA vergemakkelijken. Deze methode voor het isoleren van de muis CoW werd ontwikkeld voor de beoordeling van inflammatoire cerebrovasculaire genexpressie tijdens ziekteprogressie. Samen met de detectie van amyloïde beta afzetting op de wanden van de leptomeningiale en pial slagaders, zou deze werkwijze gemakkelijker te ontmoedigenmine de mogelijke relatie tussen inflammatoire genexpressie in de cerebro-vaatstelsel muur en Ap-peptide accumulatie. Het vasculaire netwerk van de hersenen, waaronder de leptomeningiale en pial in de subarachnoïdale ruimte, is een uitbreiding van de grote slagaders die de cirkel van Willis. De hier beschreven methode kan worden gebruikt om de koe van elke muis lineage isoleren en kan worden gebruikt voor alle soorten screening (bijvoorbeeld genexpressie, eiwitproductie en posttranslationele eiwit modificaties) op de grote vaten van de muis cerebro-vasculatuur.

<table><tbody><tr><td>Dulbecco&rsquo;s Phosphate Buffered Saline</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #55 Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11295-51</td><td></td></tr><tr><td>Hardened Fine Iris Scissors&nbsp;</td><td>Fine Science Tools</td><td>14090-11</td><td></td></tr><tr><td>Scissors - Straight / Sharp / Sharp&nbsp;&nbsp; 16.5 cm</td><td>Fine Science Tools</td><td>14002-16</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #7b Forceps&nbsp;</td><td>Fine Science Tools</td><td>11270-20</td><td></td></tr><tr><td>Stereoscopic Zoom Microscope</td><td>Nikon</td><td>SMZ745T</td><td></td></tr><tr><td>CellBIND Surface 60mm Culture Dish</td><td>Corning</td><td>#3295</td><td></td></tr><tr><td>Peristaltic Pump - MINIPULS 3</td><td>Gilson</td><td>M312</td><td></td></tr><tr><td>Pentobarbital Sodique</td><td>Ceva Sant&eacute; Animale</td><td>FR/V/2770465 3/1992</td><td></td></tr></tbody></table>

protocol voor het isoleren van de muis cirkel van willis

Protocol for Isolating the Mouse Circle of Willis

De cerebrale arteriële cirkel (circulus arteriosus cerebri) of een cirkel van Willis (Cow) is een van de bloedsomloop anastomose rond de optische chiasma en de hypothalamus die bloed naar de hersenen en de omliggende structuren. Het is betrokken bij verscheidene cerebrovasculaire aandoeningen zoals cerebrale amyloïde angiopathie (CAA) geassocieerde vasculopathieën, intracraniële atherosclerose en aneurysma&#39;s. Onderzoek naar de moleculaire mechanismen die ten grondslag liggen aan deze ziekten voor de identificatie van nieuwe drug targets voor de preventie nodig diermodellen. Sommige van deze modellen kan transgeen zijn, terwijl andere isolatie van de cerebro-vasculatuur, inclusief CoW.The hier beschreven methode is geschikt voor CoW isolatie in een muis afstamming en aanzienlijke mogelijkheden voor het screenen (expressie van genen, eiwitproductie zal betrekken, posttranslationele eiwit modificaties, secretoom analyse, enz.) onderzoek naar de grote schepen van de muis cerebrovaatstelsel. Het kan ook worden gebruikt voor ex vivo studies, door aanpassing van het orgaanbad ontwikkeld voor geïsoleerde muis olfactorische slagaders.

<html> De PBS-doorbloed muis is gedood en de koe wordt geïsoleerd zoals beschreven in paragraaf 3.2 van het protocol. Wanneer de dissectie correct wordt uitgevoerd, dient de koe in één stuk zijn en lichtjes transparant zijn door de afwezigheid van resterende bloed in de vasculatuur. <img alt="Figuur 2" src="/files/ftp_upload/54352/54352fig2.jpg" /> Figuur 2: De muis CoW na isolatie. (A) Ov...

We beschrijven hier een reproduceerbaar protocol voor het isoleren van de muis cirkel van Willis.

Protocol voor het isoleren van de muis Cirkel van Willis

The cerebral arterial circle (circulus arteriosus cerebri) or circle of Willis (CoW) is a circulatory anastomosis surrounding the optic chiasma and ...

Het algemene doel van deze dissectieprocedure is om de circle van Willis bij de muis te isoleren om de studie van de grote vaten van de cerebrale vasculatuur van de muis te vergemakkelijken. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen in het onderzoek naar cerebrovasculaire genexpressie bij diverse ziekten die de cerebrale vaten beïnvloeden, zoals de ziekte van Alzheimer en cerebrale amyloïde angiopathie. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat de grote vaten snel en eenvoudig kunnen worden geïsoleerd zonder de vaatstructuur te wijzigen.Begin met het maken van een incisie van vier centimeter in de buikwand en het peritoneum van een letaal geanestheseerde muis, net onder de ribbenkast, met behulp van een irisschaar. Maak vervolgens een incisie van enkele millimeters in het diafragma en zet deze incisie voort over de gehele lengte van de ribbenkast om de pleurale holte bloot te leggen. Til het sternum op en klem de punt vast met een hemostat, waarbij de hemostat op de nek wordt geplaatst.Trim vervolgens voorzichtig het vetweefsel dat het borstbeen met het hart verbindt. Breng nu een perfusienaald van 15-gauge door de linker ventrikel in de apex van het hart, en gebruik een schaar om een van de leverlobben door te snijden om een uitlaat voor het perfusaat te creëren. Perfundeer het dier met 25 tot 50 milliliters PBS met een pompsnelheid van 2,5 milliliters per minuut gedurende ongeveer tien minuten.De lever moet bleker worden naarmate het bloed wordt vervangen door PBS. Stop de perfusie wanneer het vloeistof uit de lever volledig helder is. Om de hersenen te isoleren, gebruikt u irisscharen om een midline-incisie in de huid te maken van de nek tot de neus.Trim de huid weg met de Iris-schaar om de schedel bloot te leggen en eventuele resterende spier- en vetweefsels te verwijderen. Plaats vervolgens de punten van de Iris-schaar aan één zijde van het foramen magnum en schuif de punten voorzichtig langs het binnenoppervlak van de schedel naar de meatus acusticus externa. Maak een soortgelijke incisie aan de andere zijde van het foramen magnum, gevolgd door een snede in de middellijn langs het binnenoppervlak van het os interparietale tot aan het begin van de sutura sagittalis.Plaats de gesloten Iris-schaar in het frontale bot tussen de ogen in de sagittale naad en open de bladen om de schedel in tweeën te splitsen. Pak met een pincet de bulbi olfactorii vast en gebruik de Iris-schaar om de zenuwverbindingen aan het ventrale oppervlak van de hersenen door te knippen. Dompel de hersenen vervolgens onder in een Petri-schaal van 60 millimeter met ijskoude PBS.Om de cirkel van Willis te isoleren, plaatst u de schaal op een koelelement onder een dissectiemicroscoop en draait u de hersenen op het dorsale oppervlak om de cirkel van Willis zichtbaar te maken. Gebruik de kleine pincet om de arteriae cerebri anteriores aan de basis van de bulbi olfactorii vast te pakken en oefen druk uit om de arteriën van het vaatcontinuüm te scheiden. Snijd de arteriae cerebri mediae op dezelfde wijze door.Gebruik vervolgens de scherpe uiteinden van de pincet om de arteriae cerebri mediae vast te pakken en til het begin van de arteriae communicantes posteriores op, zodat beide sets arteriën van de hersenen worden losgekoppeld. Til daarna de anterieure arteriën op en trek deze voorzichtig over het chiasma opticum in een anterio-dorsale richting. Verwijder op dezelfde wijze de arteriae cerebelli superioris en posterior, gevolgd door de verplaatsing van de arteria basilaris.Gebruik tot slot de pincet om de volledige cirkel van Willis voorzichtig over te brengen naar een Petri-schaal van 60 millimeter met ijskoud PBS, en fixeer de vaten op hun plaats met kleine speldjes, waarbij twee pincetten worden gebruikt om eventueel resterend hersenweefsel zorgvuldig te verwijderen. De cirkel van Willis moet in één stuk vrijkomen en zou licht transparant moeten zijn vanwege de afwezigheid van residueel bloed in de vasculatuur. De schone cirkel van Willis moet specifiek markers voor vasculaire gladde spiercellen tot expressie brengen, zoals Smooth Muscle Actin, Smooth Muscle-Myosin Heavy Chain en Smoothelin.Neurale markers, zoals myelin oligodendrocyte glycoprotein of microtubule-associated protein 2, zouden daarentegen nauwelijks detecteerbaar moeten zijn in de cirkel van Willis. Bovendien is de expressie van de endotheliale marker, E-Selectine, in neuraal weefsel buiten de cirkel van Willis zeer vergelijkbaar met die van monsters uit de cirkel van Willis, wat mogelijk wijst op het bestaan van een hersencapillair netwerk. Zodra de techniek onder de knie is, kan deze binnen twee uur worden voltooid mits correct uitgevoerd.Bij het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om te onthouden dat de cerebrale vaten van muizen zeer fijn zijn en gemakkelijk breken. Daarom moet de dissectie zeer zorgvuldig en zonder haast worden uitgevoerd, om ervoor te zorgen dat de gehele structuur in één stuk wordt geoogst. Na de ontwikkeling van deze techniek kunnen onderzoekers op het gebied van inflammatoire neurologische aandoeningen cerebrale vasculaire stoornissen onderzoeken in muismodellen voor de ziekte van Alzheimer en aanverwante aandoeningen, zoals cerebrale amyloïde angiopathie.Na het bekijken van deze video zou u een goed begrip moeten hebben van hoe u de cirkel van Willis uit een muis isoleert.

protocol-for-isolating-the-mouse-circle-of-willis

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

This video demonstrates the procedure of isolating immune cells from mouse choroid plexuses. This procedure is used in neuroimmunology research to understand how immune cells in the choroid plexuses impact brain health and various neurological diseases.

Isolating Immune Cells from Mouse Choroid Plexuses

We introduceren een chirurgische methode experimentele ischemie / reperfusie (I / R) letsel veroorzaken simuleren myocardiaal infarct (MI) in muismodellen die zorgt voor meer duidelijkheid in positionering van de ligatie van de LAD (LAD) om de reproduceerbaarheid te verhogen MI van experimenten in muizen.

Een muizenmodel van myocard ischemie-reperfusie schade door de eileiders van de LAD

Ontsteking speelt een centrale rol in de pathogenese van ischemische beroerte. Toenemend bewijs suggereert dat het als een tweesnijdend zwaard werkt, wat vroege hersenschade verergert, maar ook bijdraagt aan later herstel. Dit protocol beschrijft de isolatie van immuuncellen uit de ischemische hersenen en hun daaropvolgende flowcytometrische fenotypering.

Isolatie en Flow cytometrische analyse van de immuuncellen van de ischemische hersenen van muizen

Het doel van dit protocol is de isolatie en kweektechnieken van murine primaire vasculaire gladde spiercellen (VSMC's) van de coronaire circulatie demonstreren. Zodra VSMC's werden geïsoleerd, kunnen ze worden gebruikt voor vele standaard kweektechnieken.

Isolatie van muizen coronaire vasculaire gladde spiercellen

Een procedure voor het maken van een gezichtspreparatie van de muizencarotisarterie en aorta wordt beschreven. Dergelijke preparaten, wanneer immunofluorescent gekleurd met specifieke antilichamen, ons in staat stellen om lokalisatie van eiwitten en identificatie van celtypen in de gehele vaatwand door confocale microscopie te bestuderen.

En Voorbereiding van Muis Bloedvaten

Hier presenteren we een protocol voor de isolatie van gezonde en functionele primaire muisknop hepatocyten. Instructies voor het opsporen van hepatische ontluikende eiwitsynthese door niet-radioactieve labeling substraat werden verstrekt om te helpen begrijpen van de mechanismen die ten grondslag liggen aan de eiwitsynthese in het kader van de homeostase van de energie-metabolisme in de lever.

Isolatie van primaire muisknop hepatocyten door niet-radioactieve L-azidohomoalanine Labeling methode p.a. ontluikende eiwit synthese

Hier wordt een protocol gepresenteerd voor de isolatie en versterking van aerobe en facultatieve anaerobe muisconjunctivale commensale bacteriën met behulp van een uniek oogswab en op cultuur gebaseerde verrijkingsstap met daaropvolgende identificatie door microbiologische methoden en MALDI-TOF massaspectrometrie.

Conjunctivale commensale isolatie en identificatie bij muizen

De gouden standaard in de cardiologie voor cellulaire en moleculaire functionele experimenten zijn cardiomyocyten. Dit artikel beschrijft aanpassingen aan de niet-Langendorff-techniek om cardiomyocyten bij muizen te isoleren.

Een eenvoudige en effectieve methode om cardiomyocyten van muizen consequent te isoleren

Hier schetsen en demonstreren we een protocol voor primaire muis lever sinusoïdale endotheelcel (LSEC) isolatie. Het protocol is gebaseerd op levercollageaseperfusie, niet-parenchymale celzuivering door centrifugeren met lage snelheid en CD146 magnetische kraalselectie. We fenotyperen en karakteriseren deze geïsoleerde LSEC's ook met behulp van flowcytometrie en scanning elektronenmicroscopie.

Isolatie en karakterisering van primaire leverbijholteelcellen van muizen

Dit artikel beschrijft een methode voor magnetische isolatie op basis van kralen van endotheelcellen van muizen uit dermale lymfatische capillairen. De geïsoleerde lymfatische endotheelcellen kunnen worden gebruikt voor stroomafwaartse in-vitro-experimenten en eiwitexpressie-analyse.

Isolatie van dermale lymfatische endotheelcellen bij muizen

Leer een reproduceerbaar protocol voor het isoleren van de Cirkel van Willis bij muizen voor cerebrovasculair onderzoek. Deze methode behoudt de vaatstructuur en ondersteunt studies naar genexpressie bij ziekten zoals Alzheimer.

Protocol voor het isoleren van de muis Cirkel van Willis

Meer video's verkennen