Name: Taste Voorkeur Assay voor Volwassenenonderwijs Drosophila (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-08T12:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 31 s
Description: Leer een smaakvoorkeurassay voor volwassen Drosophila om chemische preferenties te bepalen. Deze methode onderzoekt genetische mechanismen van smaak zonder gespecialiseerde apparatuur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

We willen de leden van het Tessier-lab bedanken voor het kritisch lezen van dit manuscript en de nuttige suggesties tijdens de voorbereiding van dit protocol.

1. Honger <ol><li> Bereid je honger flesjes vliegen verzadigen een katoenen bal met 18,2 MQ water op de bodem van een standaard vlieg flacon. Als alternatief, net verzadigen een smalle strook filterpapier met 18,2 MQ water en plaats onder een hoek binnen het flesje. </li><li> Verzamel vliegt in sets van ~ 100 dieren op een CO 2 pad en voeg vervolgens de vliegen om een voorbereide flacon. Opmerking: De beste resultaten worden bereikt met dieren die minder dan 5 dagen oud zijn. Echter, de exacte leeftijd van de dieren worden bestuurd als een experimentele variabele smaakveranderingen voorkeur boven te bepalen. </li><li> Gebruik een watje of schuim stop te beveiligen de flesjes gesloten. Plaats flesjes op hun kant op een milieuvriendelijke gecontroleerde incubator. Handhaaf de temperatuur bij 25 ° C en de vochtigheid boven 70%. Laat flacons onaangeroerd gedurende 24 uur. </li></ol> 2. Taste Voorkeur Assay <ol><li> Bereid alle tastants de assay op dezelfde dag eens testen. Opmerking: De exacte tastants om gebruikt te worden zal variëren afhankelijk van de experimentele vraag wordt gesteld. De volgende voorbeeld tastants gebruikt in dit protocol. Zie hoofdstuk 4 voor optimalisaties. <ol><li> Bereid controle tastant (1 mM sucrose) door het combineren van 10 pi van 100 mM sucrose-oplossing, 13 ul van rode kleurstof, en 977 ul van 18,2 MQ water. </li><li> Bereid experimentele tastant (5 mM sucrose) door het combineren van 50 pi van 100 mM sucrose-oplossing, 10 ul van blauwe kleurstof, en 940 ul van 18,2 MQ water. </li></ol></li><li> Voeg assay kamers met een standaard 100 mm x 15 mm plastic petrischaal bereid op de volgende wijze: <ol><li> Plaats drie 10 ul druppels controle tastant dichtst bij de rand van de plaat bij 00:00 en nog 3 druppels op 06:00. Waarborgen dat de afstand tussen de druppels vergelijkbaar. </li><li> Plaats drie 10 ul druppels experimentele tastant dichtst bij de rand van de plaat bij 03:00 en eenandere 3 druppels op 9:00. Waarborgen dat de afstand tussen de druppels vergelijkbaar. </li><li> Herhaal stap 2.2.1 en 2.2.2 voor zo veel herhalingen als gewenst. </li></ol></li><li> Lege 1 flesje van ~ 100 uitgehongerd vliegt op een CO 2 pad net lang genoeg om alle dieren (ongeveer 10 sec) verdoven. Borstel de dieren in het midden van een voorbereide test kamer en dek af met de schotel deksel. Opmerking: Langere periodes van CO 2 blootstelling moet worden vermeden om de hersteltijd en te beperken verstoring van het eetgedrag te verbeteren. Blootstelling aan ijs (~ 5 min) worden gebruikt voor het verdoven van CO 2 gedragseffecten die zich bij zelfs beperkte blootstelling vermijden. </li><li> Plaats de analysekamer in een ondoorzichtige kartonnen doos. Zorg ervoor dat de buitenkant van de doos label met de aandoening en genotype wordt getest. </li><li> Plaats de volledige setup (analysekamer opgenomen in kartonnen doos uit stap 2.4) in een 25 ° C incubator met ten minste 70% vochtigheid gedurende 2 uur. </li&gt; <li> Herhaal stap 2,3 tot 2,5 voor alle replicaten. </li><li> Na 2 uur, plaats de assay kamers, nog steeds verspreid kartonnen dozen, rechtstreeks in een -20 ° C vriezer tot klaar voor kwantificering. </li></ol> 3. Taste Voorkeur Assay kwantificering <ol><li> Sta een analysekamer opwarmen tot kamertemperatuur (ongeveer 5 min). </li><li> Onder een dissectie microscoop, met een kwast of tang, groep dieren basis van de kleur van de buik: rood, blauw, paars of duidelijk (figuur 1). </li><li> Noteer het aantal dieren in elke groep. Overweeg duidelijk dieren die niet hebben deelgenomen aan de test en dus ze niet op in berekeningen. </li><li> Bereken de voorkeur index volgens een van de volgende vergelijkingen: <ol><li> Als de experimentele tastant van de rente wordt toegevoegd aan de rode kleurstof, gebruik dan (N rood + 0,5 N paars) / (N + N rood blauw + N purple). </li><li> Als de experimentele tastant wordt toegevoegd aan de blauwe kleurstof, pas dan de vergelijking (N blauw + 0,5 N paars) / (N blauw + N rood + N paars). </li></ol></li><li> Herhaal de berekeningen voor alle experimentele condities en herhalingen. </li></ol> 4. Optimalisering van de Smaak voorkeur Assay <ol><li> Empirisch bepalen van de concentratie van de kleurstof indicatoren die moeten worden gebruikt, zodat kleurstof heeft geen invloed op de uitkomst van de smaak test, als volgt: <ol><li> Bereid 4 tastants met dezelfde base verbinding (bijvoorbeeld 5 mM sucrose) zoals aangegeven in stap 2.1, maar laat de kleurstof. </li><li> Voeg 1,3% rode kleurstof aan één van de tastants. Voeg de resterende 3 tastants met blauwe kleurstof van variërende concentraties in elke buis (bijvoorbeeld 0,6%, 1% en 1,3%). </li><li> Compleet protocol stappen 2.2 tot 3.4 voor elke tastant pair: 1,3% versus 0,6% rood blauw; 1,3% red vs. 1% blauw en1,3% rode vs. 1,3% blauw. </li><li> Herhaal stap 4.1.1-4.1.3 met verschillende percentages van blauwe kleurstof totdat de index voorkeur gemiddeld een waarde van 0 (figuur 2). Let op: Als uitgangspunt, 1,3% rode kleurstof in combinatie met 1% blauwe kleurstof meestal goede resultaten oplevert. Indien geen bevredigende concentratie van blauwe kleurstof kan worden aangepast aan 1,3% kleurstof, dan stap 4.1.1 tot 4.1.3 kan worden herhaald met verschillende concentraties van rode kleur en een constante concentratie van blauwe kleurstof. </li><li> Analyseren van alle voorwaarden waaraan moet worden getest met dezelfde geoptimaliseerde kleurstof concentraties. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Herrero, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fruit+fly+behavior+in+response+to+chemosensory+signals%5BTitle%5D)+AND+%22Peptides%22%5BJournal%5D)">Fruit fly behavior in response to chemosensory signals.</a> Peptides. 38 (2), 228-237 (2012).</li>
<li>Vosshall, L. B., Stocker, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+architecture+of+smell+and+taste+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Molecular architecture of smell and taste in Drosophila.</a> Annu Rev Neurosci. 30, 505-533 (2007).</li>
<li>Harris, D. T., Kallman, B. R., Mullaney, B. C., Scott, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Representations+of+Taste+Modality+in+the+Drosophila+Brain%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Representations of Taste Modality in the Drosophila Brain.</a> Neuron. 86 (6), 1449-1460 (2015).</li>
<li>Hong, E. J., Wilson, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+encoding+of+odors+by+channels+with+diverse+sensitivity+to+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Simultaneous encoding of odors by channels with diverse sensitivity to inhibition.</a> Neuron. 85 (3), 573-589 (2015).</li>
<li>Kain, P., Dahanukar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secondary+taste+neurons+that+convey+sweet+taste+and+starvation+in+the+Drosophila+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Secondary taste neurons that convey sweet taste and starvation in the Drosophila brain.</a> Neuron. 85 (4), 819-832 (2015).</li>
<li>Masek, P., Worden, K., Aso, Y., Rubin, G. M., Keene, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dopamine-modulated+neural+circuit+regulating+aversive+taste+memory+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">A dopamine-modulated neural circuit regulating aversive taste memory in Drosophila.</a> Curr Biol. 25 (11), 1535-1541 (2015).</li>
<li>Charlu, S., Wisotsky, Z., Medina, A., Dahanukar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acid+sensing+by+sweet+and+bitter+taste+neurons+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Acid sensing by sweet and bitter taste neurons in Drosophila melanogaster.</a> Nat Commun. 4, 2042(2013).</li>
<li>Clyne, P. J., Warr, C. G., Carlson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candidate+taste+receptors+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Candidate taste receptors in Drosophila.</a> Science. 287 (5459), 1830-1834 (2000).</li>
<li>Scott, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+chemosensory+gene+family+encoding+candidate+gustatory+and+olfactory+receptors+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A chemosensory gene family encoding candidate gustatory and olfactory receptors in Drosophila.</a> Cell. 104 (5), 661-673 (2001).</li>
<li>Kim, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+TRPA1+channel+mediates+chemical+avoidance+in+gustatory+receptor+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Drosophila TRPA1 channel mediates chemical avoidance in gustatory receptor neurons.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (18), 8440-8445 (2010).</li>
<li>Koh, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+IR20a+clade+of+ionotropic+receptors+are+candidate+taste+and+pheromone+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">The Drosophila IR20a clade of ionotropic receptors are candidate taste and pheromone receptors.</a> Neuron. 83 (4), 850-865 (2014).</li>
<li>Zhang, Y. V., Ni, J., Montell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+basis+for+attractive+salt-taste+coding+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The molecular basis for attractive salt-taste coding in Drosophila.</a> Science. 340 (6138), 1334-1338 (2013).</li>
<li>Zhang, Y. V., Raghuwanshi, R. P., Shen, W. L., Montell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Food+experience-induced+taste+desensitization+modulated+by+the+Drosophila+TRPL+channel%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Food experience-induced taste desensitization modulated by the Drosophila TRPL channel.</a> Nat Neurosci. 16 (10), 1468-1476 (2013).</li>
<li>Liman, E. R., Zhang, Y. V., Montell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+coding+of+taste%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Peripheral coding of taste.</a> Neuron. 81 (5), 984-1000 (2014).</li>
<li>Rodrigues, V., Cheah, P. Y., Ray, K., Chia, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((malvolio%2C+the+Drosophila+homologue+of+mouse+NRAMP-1+%28Bcg%29%2C+is+expressed+in+macrophages+and+in+the+nervous+system+and+is+required+for+normal+taste+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">malvolio, the Drosophila homologue of mouse NRAMP-1 (Bcg), is expressed in macrophages and in the nervous system and is required for normal taste behaviour.</a> EMBO J. 14 (13), 3007-3020 (1995).</li>
<li>Tanimura, T., Isono, K., Yamamoto, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Taste+sensitivity+to+trehalose+and+its+alteration+by+gene+dosage+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Taste sensitivity to trehalose and its alteration by gene dosage in Drosophila melanogaster.</a> Genetics. 119 (2), 399-406 (1988).</li>
<li>Weiss, L. A., Dahanukar, A., Kwon, J. Y., Banerjee, D., Carlson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+and+cellular+basis+of+bitter+taste+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">The molecular and cellular basis of bitter taste in Drosophila.</a> Neuron. 69 (2), 258-272 (2011).</li>
<li>French, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dual+mechanism+for+bitter+avoidance+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Dual mechanism for bitter avoidance in Drosophila.</a> J Neurosci. 35 (9), 3990-4004 (2015).</li>
<li>Deshpande, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+Drosophila+food+intake%3A+comparative+analysis+of+current+methodology%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Quantifying Drosophila food intake: comparative analysis of current methodology.</a> Nat Methods. 11 (5), 535-540 (2014).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat ze geen concurrerende financiële belangen hebben.

We hebben beschreven een eenvoudige maar effectieve protocol voor het bepalen van de smaak voorkeur in Drosophila. Versies van deze test worden routinematig gebruikt in experimenten om de bijdragen van smaak receptoren (GR) vast te stellen in het waarnemen van de verschillende kwaliteiten (bitter, zoet, zuur, zout en umami) van smaak verbindingen. De Drosophila genoom bevat ongeveer 60 genen die 68 geïdentificeerde smaak receptoren coderen door alternatieve splicing 8,9. Echter, andere eiwit...

Dieren gebruiken chemosensation om gunstige voorwaarden uit elkaar te onderscheiden van ongunstige omstandigheden. Deze waarneming kan cruciaal voor zaken als de bepaling van de beste voedselbron, het vermijden van giftige stoffen en het bepalen van de beste paring partner 1 zijn. Chemosensation is vaak verdeeld in twee zintuiglijke componenten: reukzin en smaak zintuigen. Een belangrijk kenmerk van deze zinnen is dat olfactie (reuk) wordt gebruikt om de omringende gasvormige chemische omgeving tijdens proeven gustation (smaak) fysiek contact met een niet-vluchtig substraat vereist. Zowel sensorische modaliteiten stimuleren neurologische reacties die worden verwerkt en gedecodeerd in de hersenen om de juiste aantrekkelijk of afstotende gedrag 2 produceren. Deze zintuigen zijn daarom van cruciaal belang voor de overleving van dieren. De vrucht Drosophila melanogaster is een model organisme dat groeit in populariteit voor gebruik in begrijpening hoe insecten waarnemen geur en smaak. Fruitvliegen bieden enorme voordelen boven andere modelsystemen te wijten aan de rijkdom van genetische hulpmiddelen beschikbaar voor de dissectie van de moleculaire, cellulaire en gedrags paden. Het werk van de afgelopen 15 jaar heeft vooral instrumenteel in het karakteriseren van de specifieke cellulaire identiteiten, neuronale receptoren en signalering mechanismen die betrokken zijn bij zowel de geur en smaak zijn. Nu wordt het vermogen van Drosophila genetica worden gebruikt om verder te ontrafelen hoe deze processen worden gecodeerd op één neuron en enkel circuit niveau 3-6. Daarom testen die voorzien gemakkelijk scoorde uitlezingen van wijzigingen aan de sensorische wegen zijn van vitaal belang voor de aanhoudende opmars van deze gebieden. Hoewel veel bekend over hoe olfactorische signalen worden gecodeerd en verwerkt in de hersenen, is veel minder begrepen land dezelfde mechanismen in de smaak route. We beschrijven hier een protocol dat kan worden gebruikt om smaak preferen vernemence in Drosophila. Drosophila, zoals zoogdieren, in het algemeen de voorkeur aan zoete smaak verbindingen in tegenstelling tot bitter smakende verbindingen. Elke combinatie van deze voedselbronnen kunnen worden gebruikt in deze proefopzet te bepalen hoe bekende genetische veranderingen beïnvloeden smaak keuze. Bovendien kunnen farmacologische interventiestrategieën eveneens worden beoordeeld op hun effect op smaak dieren voorkeur. Het gemak en flexibiliteit van deze test maakt het een nuttig model voor het begrijpen van de aard van smaak- perceptie bij Drosophila.

<table><tbody><tr><td>Blauwe voedselkleurstof (Water, Propyleenglycol, FD&amp;C Blue 1 en Red 40, Propylparaben)</td><td>McCormick</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Cryo/Vriesdozen zonder Verdelers</td><td>Fisher</td><td>03-395-455</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>Glazuur Azijnzuur</td><td>Fisher</td><td>BP2401-500</td><td></td></tr><tr><td>Leica S6 E Stereozoom 0.63X-4.0X microscoop</td><td>W. Nuhsbaum, Inc.</td><td>10446294</td><td></td></tr><tr><td>Petrischaal (100 mm x 15 mm)</td><td>BD Falcon</td><td>351029</td><td>Herbruikbaar indien grondig gewassen en gedroogd</td></tr><tr><td>Quick-Snap Microtubes</td><td>Alkali Scientific Inc.</td><td>C3017</td><td></td></tr><tr><td>Rode voedselkleurstof (Water, Propyleenglycol, FD&amp;C Reds 40 en 3, Propylparaben)</td><td>McCormick</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>IBI Scientific</td><td>IB37160</td><td></td></tr></tbody></table>

taste voorkeur assay voor volwassenenonderwijs<em&gt; drosophila</em

Taste Preference Assay for Adult Drosophila

Reuk- en smaakzintuigen van de omgeving zijn essentieel voor het overleven van dieren. De meest voor de hand liggende toepassing van deze chemosenses is het onderscheid kunnen maken tussen goede voedselbronnen en mogelijk gevaarlijke voedselbronnen. Smaakvermogen vereist fysiek contact met een chemische verbinding die in staat is om signalen te geven via smaakreceptoren die op het oppervlak van neuronen worden uitgedrukt. Bij insecten kunnen deze smaakgewrichten over het hele lichaam van het dier worden gevonden, waardoor smaak een belangrijke rol kan spelen in vele verschillende gedragingen. Insecten hebben meestal de voorkeur voor verbindingen die suikers bevatten, terwijl verbindingen die als bitter van smaak worden beschouwd, worden vermeden. Gezien de fundamentele biologische betekenis van smaak, is er een intense belangstelling voor het begrijpen van de moleculaire mechanismen die ten grondslag liggen aan deze sensorische modaliteit. We beschrijven een smaakkeuring bij volwassen Drosophila die de voorkeur van de dieren voor een bepaalde smakende verbinding weerspiegelt. Deze test kan worden toegepast op dieren van elke genetische achtergrond om de smaakvoorkeur voor een gewenste oplosbare verbinding te onderzoeken.

Enkele typische resultaten van smaak voorkeur assays worden hieronder weergegeven. In de meeste experimenten enige variatie in de intensiteit van abdominale kleuring wordt waargenomen (figuur 1). Elke kleurstof in de buik of intens of zwak wordt als positief inslikken. Het verdient daarom aanbeveling dat onderzoekers dieren, terwijl blind voor de experimentele conditiescore teneinde mogelijke vertekeningen beperken. <p class="jove_content" fo:keep-together.within-pag...

Smaak is een belangrijk sensorisch proces dat de aantrekking tot heilzame stoffen en het vermijden van giftige stoffen vergemakkelijkt. Dit protocol beschrijft een eenvoudige innametest voor het bepalen van de Drosophila smaakpreferentie voor een bepaalde chemische verbinding.

Taste Voorkeur Assay voor Volwassenenonderwijs<em&gt; Drosophila</em

Olfactory and gustatory perception of the environment is vital for animal survival.  The most obvious application of these chemosenses is to be able to ...

Het algemene doel van deze procedure is om de relatieve voorkeur van volwassen Drosophila voor de ene chemische smaakstof boven een andere vast te stellen. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen in het vakgebied van de Drosophila-smaak, zoals welke genen noodzakelijk zijn voor het selecteren tussen zoete verbindingen of potentieel toxische, bittere verbindingen.Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat deze eenvoudig is en geen gespecialiseerde instrumentatie vereist. De procedure zal worden gedemonstreerd door Andrew Bantel, een technicus uit mijn laboratorium. Om het experiment te beginnen, verzadigt u een wattenbol met water onderin een standaard vliegenbuisje.Verzamel vervolgens de vliegen in groepen van 100 dieren op een CO2-kussen en voeg de vliegen daarna toe aan een voorbereid flacon. Gebruik een wattenprop om de flacons stevig af te sluiten. Plaats de flacons vervolgens op hun zij in een incubator met gecontroleerde omgevingsomstandigheden.Bereid de gecontroleerde tastant van 1 millimolaire sucrose voor door 10 µL van een 100 millimolaire sucrose-oplossing, 13 µL rode voedingskleurstof en 977 µL water te combineren. Bereid vervolgens de experimentele tastant van 5 millimolaire sucrose voor. Maak daarna de assaykamers door een plastic petrischaal van 100 mm bij 15 mm te nemen en druppels van 3 µL gecontroleerde tastant zo dicht mogelijk bij de rand van de schaal op de 12-uurpositie te plaatsen.Plaats op de positie van drie uur drie druppels van 10 µL van de experimentele smaakstof zo dicht mogelijk bij de rand van de plaat. Plaats op de positie van zes uur nog eens drie druppels van de gecontroleerde smaakstof. Plaats vervolgens op de positie van negen uur opnieuw drie druppels van de experimentele smaakstof.Leeg vervolgens één flacon met 100 uitgehongerde vliegen op een CO2-kussen, net lang genoeg om alle dieren te anesthetiseren. Borstel de dieren naar het midden van een voorbereide assaykamer en dek deze af met het schoteltje. Plaats de assaykamer in een ondoorzichtig kartonnen doosje.Label vervolgens de buitenkant van de doos met de geteste conditie en het genotype. Plaats de gehele opstelling in een incubator. Plaats de assaykamers na twee uur, terwijl ze nog in de kartonnen dozen zitten, direct in een vriezer van -20 °C tot ze klaar zijn voor kwantificering.Laat een enkele assaykamer opwarmen tot kamertemperatuur. Gebruik onder een dissectiemicroscoop een penseel om de dieren te groeperen op basis van de kleur van hun abdomen: rood, blauw of paars.Noteer het aantal dieren in elke groep. Deze grafiek toont de effecten van variërende concentraties blauwe kleurstof, terwijl een constante concentratie rode kleurstof wordt gehandhaafd, wat een optimale combinatie onthult van 1,3% rood en 1,0% blauw. Drosophila worden van nature aangetrokken door hoge sucroseconcentraties, wat blijkt uit een preferentie-indexwaarde nabij één wanneer zij kunnen kiezen tussen vijf millimolaire sucrose en één millimolaire sucrose.Deze voorkeur werd omgekeerd met zuur, waardoor de voorkeursindex tot bijna nul daalde. Tijdens het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om te onthouden de voedselkleurstofadditieven te testen: was er effect op de voorkeursassay? De concentraties van elke kleurstof zouden geen invloed mogen hebben op de prestatie-index.

taste-preference-assay-for-adult-drosophila

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

Drosophila larven zijn in staat om geur stimuli associëren met smaak beloning. Hier beschrijven we een eenvoudige gedragsmatige paradigma dat de analyse van appetitieve associatief olfactorische leren mogelijk maakt.

Appetitieve Associatieve Olfactorische Learning in<em&gt; Drosophila</em&gt; Larven

Deze video beschrijft een voedingstest voor fruitvliegen waarbij gekleurd voedsel wordt gebruikt om de voeding te controleren en het effect dat toegevoegde verbindingen kunnen hebben op de voedingsactiviteit. Het voorbeeldprotocol test de effecten van verschillende hormoonontregelende chemicaliën (EDC).

Voedingstest: Beoordeling van voedingsvoorkeuren in Drosophila melanogaster

Deze video beschrijft de smaakvoorkeurstest, een gedragsmethode die wordt gebruikt om aantrekkingskracht of vermijding te meten voor gekleurde oplossingen die anders smaken door de buikkleuring van de vlieg na inname van de voorkeursstof te beoordelen. Het aanbevolen protocol toont de procedure aan die wordt gebruikt om de voorkeur van vliegen te meten voor oplossingen van verschillende sacharoseconcentraties.

Smaakvoorkeurstest: een methode voor het meten van voedingsgedrag in Drosophila

Deze video beschrijft de CApillary FEeder, of CAFE, assay, een gedragsmethode die de voedselinname en voorkeur van ongeremde fruitvliegen meet. Het aanbevolen protocol laat zien hoe u de test kunt uitvoeren met minimale verdamping van de met vloeistof gevulde haarvaten die worden gebruikt om het voedsel te leveren en de inname ervan bij te houden.

De CApillary FEeder (CAFE) Assay: Een methode om voedselconsumptie en voorkeur in Drosophila te volgen

Drosophila-vrouwtjes kiezen tussen substraten en selecteren locaties die aantrekkelijk zijn voor het leggen van eieren. Deze video beschrijft een gedragstest die hun besluitvorming test, de zogenaamde eierleggingsvoorkeurstest. De aanbevolen clip demonstreert de procedure met een op maat gemaakte opstelling, waarmee onderzoekers niet alleen het gedrag van veel vrouwen tegelijkertijd kunnen testen, maar ook compatibel zijn met video-opname en optogenetische opstellingen.

Drosophila Egg-Laying Preference Assay: een methode om besluitvorming bij vliegen te testen

In deze video artikel beschrijven we een geautomatiseerde test om het effect van honger of verzadiging op olfactorische afhankelijke voedsel zoekgedrag meten de volwassen fruitvlieg Drosophila melanogaster.

A Single-fly test voor foerageergedrag in Drosophila

Wij stellen een keuze test om de invloed van geurstoffen op Drosophila gedrag via een Y-doolhof test onthullen.

Testen<em&gt; Drosophila</em&gt; Reukzin met een Y-doolhof Assay

Dit protocol beschrijft een hoogdoorlaattest voor het testen van ei-legvoorkeuren van Drosophila melanogaster met een nauwkeurigheid per enkel dier. Deze test biedt een eenvoudige, efficiënte en schaalbare platform om genen en circuitonderdelen te identificeren die een eenvoudig besluitvormingsproces controleren.

High Throughput Assay to-eierleggende Voorkeuren van de individuele onderzoeken<em&gt; Drosophila melanogaster</em

We beschrijven een protocol voor het induceren van belonen en nonrewarding ervaringen in fruitvliegjes (Drosophila melanogaster) met behulp van vrijwillige ethanol consumptie als maat voor veranderingen in de beloning staten.

Een eenvoudige manier om Veranderingen Meet in Reward-zoekend gedrag Met behulp<em&gt; Drosophila melanogaster</em

De CApillary FEeder (CAFE) test is een eenvoudige, budgetvriendelijke en zeer betrouwbare methode voor het onderzoeken van mechanismen die ten grondslag liggen aan voedselinname. Gebruikt met het zeer veelzijdige genetische modelorganisme Drosophila melanogaster, biedt het een krachtig middel om nieuwe inzichten te verkrijgen in de regulerende mechanismen van voedselinname.

De capillaire Feeder test meet voedselinname bij<em&gt; Drosophila melanogaster</em

We presenteren een protocol voor een tweekeuze voertest voor vliegen. Deze voertest is snel en gemakkelijk te uitvoeren en is niet alleen geschikt voor kleinschalig laboratoriumonderzoek, maar ook voor gedragsschermen met hoge doorvoer bij vliegen.

Een snelle voedselvoorkeurtest in Drosophila

Leer een smaakvoorkeurassay voor volwassen Drosophila om chemische preferenties te bepalen. Deze methode onderzoekt genetische mechanismen van smaak zonder gespecialiseerde apparatuur.

Taste Voorkeur Assay voor Volwassenenonderwijs

Meer video's verkennen