Name: Murine flexorpeesletsel en Repair Surgery (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 32 s
Description: Leer een chirurgische methode voor flexorpeesherstel bij muizen om celpopulaties en littekenvorming te bestuderen. Dit model helpt bij het identificeren van biologische doelwitten voor verbeterde genezing.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd gedeeltelijk ondersteund door de Amerikaanse Vereniging voor Heelkunde van het Hand Pilot Award en NIH / NIAMS 1K01AR068386-01 (naar AEL) en NIAMS / NIH P30AR061307.

De Universitaire Commissie Animal Research aan de Universiteit van Rochester keurden alle dierproeven. Ten-12 weken oude vrouwelijke C57BL / 6J muizen werden gebruikt. 1. Voorbereiding van de dieren voor flexorpees Surgery (~ 15 min) <ol><li> Autoclaaf chirurgische instrumenten te steriliseren, draag steriele handschoenen in, en handhaven van een steriele operatiekamer veld. </li><li> Verdoven de muis via intraperitoneale injectie (ip) met een volume van ketamine (80 mg / kg) en xylazine (10 mg / kg) gevonden volgens lichaamsgewicht. Bevestig diepte van sedatie via afwezigheid van teen-snuifje reflex. </li><li> Dien pre-emptieve analgesie (buprenorfine, 0,05-0,1 mg / kg) via subcutane injectie. Solliciteer oogzalf voor de ogen niet uitdrogen. </li><li> Bereid de chirurgische plaats door het knippen van de vacht op de gehele achterste ledematen. Steriliseren de huid door schrobben achtereenvolgens met povidonjood, gevolgd door 70% ethanol, en opnieuw met povidonjood. </li></ol><ol><li> Vind de flexor digitorum longus (FDL) pees, oppervlakkig gezien op de mediale zijde van het kalf. Met behulp van een scalpel een kleine 0,5-1 cm incisie in de huid met micro-schaar om de pees bloot. </li><li> Gebruik een tang om de FDL pees te scheiden van het omliggende weefsel en sporenelementen het aan de myotendinous kruising. Snijd de pees aan deze kruising met veer schaar om het vrij te geven, zorg ervoor dat de posterior tibialis voorkomen. </li><li> Sluit de huid met 5-0 nylon hechtingen. Opmerking: De FDL transsectie en reparatie (stap 2,4) worden uitgevoerd met behulp van een stereomicroscoop. </li><li> Maak een 3 mm incisie over de posterolaterale aspect van de achterpoot met behulp van de lente micro-schaar. Zachtjes trekken de omliggende zachte weefsel en spier met een pincet, en zorg ervoor dat weefselschade te minimaliseren, en identificeren van de FDL pees. <ol><li> Voorzichtig verhogen van de FDL pees en volledig doorsnijden met behulp van micro-schaar. Hecht de einden van de pees FDL samen in een gemodificeerde Kessler patroon met 8-0 hechtingen, vermijden drogen van de pees door periodiek bevochtigen met zoutoplossing. </li><li> Vervang zacht weefsel en spieren over de pees, sluit de incisie met 5-0 nylon hechtingen. </li></ol></li><li> Plaats muizen op een dia warmer set tot 37 ° C, om de lichaamstemperatuur te handhaven totdat uit narcose hersteld. </li><li> Monitor muizen post-operatief op tekenen van stoornissen of infectie, waaronder een verhoogde vocalizing en gegolfde vacht. Injecteer buprenorfine (50 ul / muis) als analgeticum elke 12 uur tot muizen tekenen van pijn of angst niet meer weergegeven. </li><li> Laten genezen muizen gedurende 10 dagen na de operatie over te gaan naar de volgende stappen. Opmerking: Cellen kunnen op elk tijdpunt postoperatieve worden geoogst. Hier worden 10 dagen gekozen deze representatieve experimenten gezien de relatief hoge cellulariteit van het weefsel op dit moment. </li></ol> 3. Labellng delende cellen (~ 10 min) <ol><li> Bereid EDU (5-ethynyl-2&#39;deoxyuridine) oplossing (10 mg / ml in steriel fosfaat gebufferde zoutoplossing [PBS] + 1% dimethylsulfoxide [DMSO] om de oplosbaarheid te verhogen). </li><li> Injecteer muizen met 100 gl edu (50 mg / kg) via ip injectie 24 uur voorafgaand aan offeren. </li></ol> 4. Harvest Cellen voor Cytologie centrifugeren (2,5 uur, ~ 30 min Hands-on Time) <ol><li> Bereid 3 mg / ml collagenase I in PBS. </li><li> Euthanaseren muis via kooldioxide stikken met een debiet van niet meer dan 3 l / min, en voeren cervicale dislocatie als secundaire maatregel. </li><li> Zoek de gerepareerde pees behulp stap 2.4 en isoleren peesweefsel door snijden ongeveer 2 mm aan weerszijden van de verwonding met micro-schaar. <ol><li> Gehakt weefsel met scalpel in een petrischaal met 1 ml 3 mg / ml collagenase, vervolgens doorgeven mengsel door een 18 G naald meerdere malen te breken van het weefsel. Verzamel mengsel in een 1,5 ml centrifugebuis. </li&gt; <li> Digest peesweefsel gedurende 1 uur bij 37 ° C onder schudden. </li><li> Spin weefsel beneden (300 xg gedurende 5 minuten), aspireren collagenase, dan resuspendeer cellen / weefsels met 500 pi 3% bovine serum albumine (BSA) in PBS en neer te pipetteren meerdere malen. </li><li> Filter celsuspensie door een 70 um cel zeef om puin en grote stukken van de pees en opzij gezet in een 37 ° C incubator te verwijderen. </li><li> Plaats peesweefsel in een andere 1,5 ml centrifugebuis en verfrissen met 1 ml collagenase oplossing pipetteren en om te mengen. </li><li> Incubeer weefsel nog een uur bij 37 ° C onder schudden. </li><li> Spin down gedigereerd peesweefsel (300 g gedurende 5 min), vervolgens resuspenderen in 500 pi 3% BSA in PBS en neer te pipetteren meerdere malen. </li><li> Filter celsuspensie door een 70 um cel zeef, te combineren met ophanging geïsoleerd in 4.3.3, tel dan cellen met een hemocytometer. </li><li> Was de cellen eenmaal met 3% BSA in PBS, vervolgens resuspenderen tot 3-610 x 4/100 ul. </li></ol></li><li> Bevestig een cytologie trechter om een ​​positief geladen glijbaan en vergrendelen in de slide carrier. Steek de gehele inrichting in een cytologie centrifuge en voeg 100 ul celsuspensie aan de trechter. Centrifugeer bij 300 xg gedurende 5 minuten om de cellen te dispergeren op de dia. </li></ol> 5. Immunocytochemie te detecteren Edu (2 uur, ~ 45 min Hands-on Time) Opmerking: Alle incubatie stappen moeten in het donker worden uitgevoerd om fotobleken van fluoroforen te beperken. <ol><li> cellen cirkel met een hydrofobe barrière pen oplossing nodig voor volgende stappen minimaliseren, dan onmiddellijk vast met 150 pi 3% paraformaldehyde in PBS 15 min bij kamertemperatuur (RT). <ol><li> Was tweemaal gedurende 5 minuten met 150 ul 3% BSA in PBS. </li><li> Doorlaatbaar cellen met 0,5% Triton X-100 in PBS 20 min bij kamertemperatuur. </li><li> Herhaal wasstap zoals in 5.1.1. </li></ol></li><li> Bereid EDU reactie cocktail volgens de kit instructies niet meer dan 30 minuten voor gebruik. <ol><li> Voeg 150 ul cocktail elke dia, incubeer 30 min bij kamertemperatuur. </li><li> Herhaal wasstap zoals in 5.1.1. </li></ol></li><li> Incuberen met 150 ui nucleaire tegenkleuring Hoechst33342 verdund 1: 2000 in PBS 30 min bij kamertemperatuur. <ol><li> Was tweemaal gedurende 5 minuten met 150 pl 1x PBS. </li></ol></li><li> Voeg 1-2 druppels anti-fade montage medium om cellen, dan langzaam lager dekglaasje om luchtbellen te voorkomen. <ol><li> Sta fixeermiddel een nacht uitharden in het donker bij kamertemperatuur. </li><li> Gebruik duidelijke nagellak aan de dekglaasje aan de dia af te dichten. </li></ol></li><li> Opname schuift 40x vergroting met behulp van een fluorescentiemicroscoop met excitatie / emissie filters kunnen detecteren DAPI (Hoeschst33342) en Texas Red (Alexa Fluor 594). </li></ol>

<ol><li>Lin, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomechanics+of+tendon+inury+and+repair%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomech%22%5BJournal%5D)">Biomechanics of tendon inury and repair.</a> J Biomech. 37, 865-877 (2004).</li>
<li>Strickland, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+flexor+tendon+surgery%3A+twenty-five+years+of+progress%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hand+Surg+%5BAm%5D%22%5BJournal%5D)">Development of flexor tendon surgery: twenty-five years of progress.</a> J Hand Surg [Am]. 25, 214-235 (2000).</li>
<li>Bunnell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repair+of+tendons+in+the+fingers+and+description+of+two+new+instruments%5BTitle%5D)+AND+%22Surg+Gynecol+Obstet%22%5BJournal%5D)">Repair of tendons in the fingers and description of two new instruments.</a> Surg Gynecol Obstet. 26, 103-110 (1918).</li>
<li>Aydin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-stage+flexor+tendoplasty+in+the+treatment+of+flexor+tendon+injuries%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Orthop+Traumatol+Turc%22%5BJournal%5D)">Single-stage flexor tendoplasty in the treatment of flexor tendon injuries.</a> Acta Orthop Traumatol Turc. 38, 54-59 (2004).</li>
<li>Gelberman, R. H., Steinberg, D., Amiel, D., Akeson, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibroblast+chemotaxis+after+tendon+repair%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hand+Surg+Am%22%5BJournal%5D)">Fibroblast chemotaxis after tendon repair.</a> J Hand Surg Am. 16, 686-693 (1991).</li>
<li>Lundborg, G., Rank, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+intrinsic+healing+of+flexor+tendons+based+upon+synovial+fluid+nutrition%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hand+Surg+Am%22%5BJournal%5D)">Experimental intrinsic healing of flexor tendons based upon synovial fluid nutrition.</a> J Hand Surg Am. 3, 21-31 (1978).</li>
<li>Aoki, M., Kubota, H., Pruitt, D. L., Manske, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomechanical+and+histologic+characteristics+of+canine+flexor+tendon+repair+using+early+postoperative+mobilization%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hand+Surg+Am%22%5BJournal%5D)">Biomechanical and histologic characteristics of canine flexor tendon repair using early postoperative mobilization.</a> J Hand Surg Am. 22, 107-114 (1997).</li>
<li>Kim, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technical+and+biological+modifications+for+enhanced+flexor+tendon+repair%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hand+Surg+Am%22%5BJournal%5D)">Technical and biological modifications for enhanced flexor tendon repair.</a> J Hand Surg Am. 35, 1031-1037 (2010).</li>
<li>Aoki, M., Manske, P. R., Pruitt, D. L., Kubota, H., Larson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Work+of+flexion+after+flexor+tendon+repair+according+to+the+placement+of+sutures%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Orthop+Relat+Res%22%5BJournal%5D)">Work of flexion after flexor tendon repair according to the placement of sutures.</a> Clin Orthop Relat Res. , 205-210 (1995).</li>
<li>Zhao, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Award+for+Outstanding+Orthopaedic+Research%3A+Engineering+flexor+tendon+repair+with+lubricant%2C+cells%2C+and+cytokines+in+a+canine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Orthop+Relat+Res%22%5BJournal%5D)">Award for Outstanding Orthopaedic Research: Engineering flexor tendon repair with lubricant, cells, and cytokines in a canine model.</a> Clin Orthop Relat Res. 472, 2569-2578 (2014).</li>
<li>Wong, J., Bennett, W., Ferguson, M. W., McGrouther, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microscopic+and+histological+examination+of+the+mouse+hindpaw+digit+and+flexor+tendon+arrangement+with+3D+reconstruction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Anat%22%5BJournal%5D)">Microscopic and histological examination of the mouse hindpaw digit and flexor tendon arrangement with 3D reconstruction.</a> J Anat. 209, 533-545 (2006).</li>
<li>Katzel, E. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+Smad3+loss+of+function+on+scarring+and+adhesion+formation+during+tendon+healing%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Orthop.+Res%22%5BJournal%5D)">Impact of Smad3 loss of function on scarring and adhesion formation during tendon healing.</a> J. Orthop. Res. 29, 684-693 (2011).</li>
<li>Loiselle, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+marrow-derived+matrix+metalloproteinase-9+is+associated+with+fibrous+adhesion+formation+after+murine+flexor+tendon+injury%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Bone marrow-derived matrix metalloproteinase-9 is associated with fibrous adhesion formation after murine flexor tendon injury.</a> PloS one. 7, e40602(2012).</li>
<li>Lee, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parathyroid+hormone+1-34+enhances+extracellular+matrix+deposition+and+organization+during+flexor+tendon+repair%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Res%22%5BJournal%5D)">Parathyroid hormone 1-34 enhances extracellular matrix deposition and organization during flexor tendon repair.</a> J Orthop Res. 33, 17-24 (2015).</li>
<li>Geary, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+EP4+Inhibition+Increases+Adhesion+Formation+in+a+Murine+Model+of+Flexor+Tendon+Repair%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Systemic EP4 Inhibition Increases Adhesion Formation in a Murine Model of Flexor Tendon Repair.</a> PloS one. 10, e0136351(2015).</li>
<li>Loiselle, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+antisense+oligonucleotide+%28ASO%29+technology+against+Tgf-beta+signaling+to+prevent+scarring+during+flexor+tendon+repair%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Res%22%5BJournal%5D)">Development of antisense oligonucleotide (ASO) technology against Tgf-beta signaling to prevent scarring during flexor tendon repair.</a> J Orthop Res. 33, 859-866 (2015).</li>
<li>Orner, C. A., Geary, M. B., Hammert, W. C., O'Keefe, R. J., Loiselle, A. E. Low-dose and short-duration Matrix Metalloproteinase 9 Inhibition does not affect adhesion formation during murine flexor tendon healing. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aOrner%2C+CA+%22Plast+Reconstr+Surg%22">Plast Reconstr Surg</a>. , (2016).</li>
<li>Loiselle, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Remodeling+of+murine+intrasynovial+tendon+adhesions+following+injury%3A+MMP+and+neotendon+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Res%22%5BJournal%5D)">Remodeling of murine intrasynovial tendon adhesions following injury: MMP and neotendon gene expression.</a> J Orthop Res. 27, 833-840 (2009).</li>
<li>Tsubone, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+TGF-beta+inducible+early+gene+deficiency+on+flexor+tendon+healing%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Res%22%5BJournal%5D)">Effect of TGF-beta inducible early gene deficiency on flexor tendon healing.</a> J Orthop Res. 24, 569-575 (2006).</li>
<li>Beason, D. P., Kuntz, A. F., Hsu, J. E., Miller, K. S., Soslowsky, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+evaluation+of+multiple+tendon+injury+models+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomech%22%5BJournal%5D)">Development and evaluation of multiple tendon injury models in the mouse.</a> J Biomech. 45, 1550-1553 (2012).</li>
<li>David, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tendon+repair+is+compromised+in+a+high+fat+diet-induced+mouse+model+of+obesity+and+type+2+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Tendon repair is compromised in a high fat diet-induced mouse model of obesity and type 2 diabetes.</a> PloS one. 9, e91234(2014).</li>
<li>Wong, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cellular+biology+of+flexor+tendon+adhesion+formation%3A+an+old+problem+in+a+new+paradigm%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">The cellular biology of flexor tendon adhesion formation: an old problem in a new paradigm.</a> Am J Pathol. 175, 1938-1951 (2009).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat ze geen concurrerende financiële belangen hebben

De chirurgische procedure voor een muizenmodel van volledige doorsnijding en reparatie van de flexor digitorum longus pees wordt in deze studie. Daarnaast een nieuwe toepassing van concentratie kleine celpopulaties met cytologie centrifuge blijkt, waardoor kwantitatieve immunocytochemische analyse van de cellulaire omgeving tijdens flexorpees genezing. Dit model van flexorpeesherstel toont een reproduceerbare genezende reactie, die kan worden gebruikt om wijzigingen in het genezingsproces behulp knockout modellen of far...

Flexor pezen in de hand werken samen met de flexor spieren van de onderarm en digitale omhulsels flexie van de cijfers en grijpfunctie van de hand mogelijk. Flexorpezen lopen langs de palmaire aspect van de hand; deze relatief oppervlakkige locatie resulteert vaak in verwondingen aan de flexorpezen tijdens trauma aan de kant. Pezen genezen door middel van een littekenweefsel respons in plaats van regeneratie van normaal peesweefsel 1. Hoewel dit littekenweefsel biedt continuïteit van de pees, wordt de functie drastisch afgenomen ten opzichte van een gezonde pees. Pees-littekenweefsel composieten worden gekenmerkt door een verminderde mechanische eigenschappen 1, waardoor het gerepareerde pezen meer kans op scheuren. Bovendien littekenweefsel mist de organisatie van het natieve collageen pees vezelstructuur, resulterend in een toename van de pees grootte en massa. Gezien de anatomische beperkingen van de pees-hulseenheid zelfs bescheiden toename pees grootte kunnen drastisch rodeUCE de glijdende functie van de pees, en dus digit bereik van de beweging en handfunctie. Voorafgaand aan de verwondingen 1960 om de pezen, met name in zone II van de hand, niet routinematig gerepareerd vanwege de ernstige complicaties bij de genezing die zich tijdens deze reparatie 2. Dit gebied van de hand werd aangeduid als &#39;niemandsland&#39; 3. Echter, zijn verbeteringen in chirurgische technieken, hechtdraad patronen en fysiotherapie revalidatie protocollen sterk verbeterde resultaten van flexorpees reparaties 2. Ondanks deze vooruitgang, tot 40% van reparaties leiden tot voldoende adhesie formatie handfunctie 4 belemmeren. Daarom is een biologische benadering bij genezing verbeteren. Helaas, zeer weinig bekend over de pees genezingsproces op cellulair en moleculair niveau. Derhalve was het doel een murine model dat kan worden gebruikt om de fundamentele understandin ontwikkelen ter verbeteringg de cellulaire en moleculaire componenten van buigpees genezing en littekenvorming respons, als middel om nieuwe therapeutische targets te identificeren om genezing te verbeteren. Grotere diermodellen zijn instrumenteel in het bevorderen van begrip van de flexorpees genezingsproces geweest. Honden en konijnen studies hebben aangetoond dat zowel de intrinsieke als extrinsieke herstellend vermogen van pezen 5,6, het belang van vroegtijdige gecontroleerde passieve beweging minimaliseren adhesies opzichte van immobilisatie 7, evenals de effecten van verschillende patronen op de hechtdraad genezingsproces 8 , 9. Bovendien heeft het hondenmodel bruikbaar bij testen translationele weefselmanipulatie benaderingen genezing 10 verbeteren. Er zijn echter een aantal belangrijke voordelen in het gebruik van een muizenmodel opzichte van een groot diermodel, zoals de relatieve kosten, beschikbaarheid van muis specifieke reagentia en het gemak van generating globaal Knock-outs of weefsel-specifieke schrapping / overexpressie constructen. Bovendien is de functionele overeenkomst tussen menselijk en muizen ten opzichte flexorpezen 11 geven de potentiële bruikbaarheid bij de ontwikkeling van een muismodel. Ontwikkeling van een muizenmodel van flexorpees doorsnijding en reparatie bootst vele aspecten van klinische genezing, met inbegrip van de vorming van overvloedige littekenweefsel en verminderde mechanische eigenschappen. De hier beschreven model is een echte herhaling van klinische praktijk door doorsnijden van de FDL de myotendinous knooppunt om de reparatieplaats beschermen. Bovendien heeft dit model geen rekening met de bijdrage van synoviale cellen huls wordt genezing, aangezien er geen synoviale schede die het middengedeelte van de pees waar de reparatie plaatsvindt. Ondanks deze beperkingen heeft dit model het voordeel van het genereren bereik van beweging te beperken adhesies, die nog moet worden aangetoond bij muizenmodellen die meer closely benaderen de klinische scenario. Dit model is gebruikt om knock-out muismodellen 12,13 beoordelen en om verschillende farmacologische benaderingen om de genezing 14-17 te verbeteren testen. Histologische analyses van dit model, middels immunohistochemie en in situ hybridisatie, kunnen belangrijke inzichten in de lokalisatie van belangrijke genen en eiwitten bieden tijdens de genezing. Echter, histologie geeft slechts een dwarsdoorsnede ruimtelijke analyse en maakt kwantificering niet mogelijk het gehele weefsel. Flowcytometrie is een meer kwantitatieve benadering, maar slechts een zeer beperkt aantal cellen kunnen worden geïsoleerd uit de genezing peesweefsel in het muismodel, en dit aantal verder af tijdens fixatie, permeabilisatie en wasstappen. Neemt dit in rekening flowcytometrie wordt een benadering onhaalbaar als gevolg van het aantal dieren dat nodig zou zijn. Een alternatieve methode moet de meerderheid van dit kleine celpopulatie behouden omverder karakteriseren genezing milieu. De methode die wordt gebruikt om dit te bereiken, hier afgebeeld, houdt de concentratie van de geïsoleerde cellen via cytologie centrifugeren op een glasplaatje, gevolgd door immunocytochemie. In de onderhavige studie EDU (5-ethynyl-2&#39;deoxyuridine een thymidine analoog) incorporatie en naderhand coderen werd gebruikt om de relatieve proliferatieve toestand van cellen te bepalen op de genezing plaats. Deze benadering kan worden toegepast om de effectiviteit van farmacologische behandelingen testen celproliferatie, gen knock-out of overexpressie, of verschillende celpopulaties identificeren en te kwantificeren.

<table><tbody><tr><td>Chirurgische voorbereiding</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J muizen&nbsp;</td><td>Jackson Laboratories</td><td>000664</td><td></td></tr><tr><td>Ketamine</td><td>Hospira</td><td>NDC# 0409-2051-05</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Lloyd Inc.</td><td>NDC# 61311-482-10</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfine</td><td>Par Pharmaceutical Inc.</td><td>NDC# 42023-179-10</td><td></td></tr><tr><td>0,9% natriumchloride irrigatie</td><td>Hospira</td><td>NDC# 0409-6138-03</td><td>Voor bereiding van ketamine/xylazine en buprenorfine oplossingen</td></tr><tr><td>1 ml spuit</td><td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>30 G naald</td><td>BD</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td>Povidon-jood-oplossing</td><td>Aplicare</td><td>82-226</td><td></td></tr><tr><td>70% ethanol</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Puralube veterinaire oftalmische zalf</td><td>Dechra Veterinary Products</td><td>NDC# 17033-211-38</td><td></td></tr><tr><td>Naam</td><td>Bedrijf</td><td>Catalogusnummer</td><td>Opmerkingen</td></tr><tr><td>Chirurgische gereedschappen</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Draagbare weegschaal 200 g</td><td>Ohaus</td><td>SP202</td><td></td></tr><tr><td>Verenschaar</td><td>Fine Science Tools</td><td>15124-12</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 pincet</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-30</td><td></td></tr><tr><td>Naaldhouders</td><td>Fine Science Tools</td><td>91201-13</td><td></td></tr><tr><td>Micro verenschaar</td><td>Fine Science Tools</td><td>15003-08</td><td></td></tr><tr><td>Micro naaldhouders</td><td>Fine Science Tools</td><td>12061-02</td><td></td></tr><tr><td>5-0 nylon hechtdraad</td><td>Ethicon</td><td>668G</td><td></td></tr><tr><td>8-0 microchirurgie nylon hechtdraad</td><td>Ethicon</td><td>2808G</td><td></td></tr><tr><td>Lab-Line histologie schuiflade-verwarmer</td><td>Barnstead International</td><td>26025</td><td></td></tr><tr><td>Naam</td><td>Bedrijf</td><td>Catalogusnummer</td><td>Opmerkingen</td></tr><tr><td>Cytospin-methode</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Collageenase Type I, gelyofiliseerd</td><td>Life Technologies&nbsp;</td><td>1700-017</td><td></td></tr><tr><td>Bovine Serum Albumine</td><td>Cell Signaling Technologies</td><td>9998S</td><td></td></tr><tr><td>1x PBS</td><td>Thermo Fisher</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>Cytologie trechters</td><td>Fisher HealthCare</td><td>10-354</td><td></td></tr><tr><td>HistoBond+ microscoopglazen</td><td>VWR</td><td>16005-110</td><td></td></tr><tr><td>Cytospin 2 centrifuge</td><td>Shandon</td><td>SH-CYTO2</td><td></td></tr><tr><td>Naam</td><td>Bedrijf</td><td>Catalogusnummer</td><td>Opmerkingen</td></tr><tr><td>Immunoctytochemie</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Glijden kleurenlade met zwart deksel</td><td>IHC World</td><td>M920-2</td><td></td></tr><tr><td>Click-iT Plus EdU Imaging Kit</td><td>Life Technologies&nbsp;</td><td>C10639</td><td>Bevat EdU en&nbsp; Hoeschst 33342</td></tr><tr><td>Immedge hydrofobe barrièrepen</td><td>Vector Laboratories</td><td>H-4000</td><td></td></tr><tr><td>ProLong Diamond montagemiddel</td><td>Thermo Fisher</td><td>P36970</td><td></td></tr><tr><td>Glazen deksels 24 x 50 mm #1.5</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Klare nagellak</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

murine flexorpeesletsel en repair surgery

Murine Flexor Tendon Injury and Repair Surgery

Pees verbindt het skelet spieren en botten, het vergemakkelijken van de beweging van bijna het hele lichaam. In de hand, flexorpezen (FTS) maken buiging van de vingers en de algemene handfunctie. Verwondingen aan de FTS komen vaak voor, en bevredigende genezing wordt vaak aangetast als gevolg van teveel littekenweefsel en verklevingen tussen de pees en het omringende weefsel. Er is echter weinig bekend over de moleculaire en cellulaire componenten van FT reparatie. Daartoe een muizenmodel van FT reparatie die vele aspecten van genezing bij de mens, waaronder verminderde beweeglijkheid recapituleert en verminderde mechanische eigenschappen, ontwikkeld en eerder beschreven. Hier een diepgaande demonstratie van deze chirurgische procedure verschaft, waarbij doorsnijding en daaropvolgende reparatie van de flexor digitorum longus (FDL) pees in de achterpoot van muizen. Deze techniek kan worden gebruikt om lineage analyse van verschillende celtypen te voeren, de effecten van gen winst of verlies-van-functie getest, en de effi testenciëntie van farmacologische interventies in het genezingsproces. Er zijn echter twee belangrijke beperkingen aan dit model: i) het FDL pees in het middengedeelte van het muizen achterpoot, waarbij de doorsnijding en reparatie optreden, wordt niet omgeven door een synoviale schede. Derhalve Dit model houdt geen rekening met de mogelijke bijdrage van de mantel om de littekenvorming proces. ii) Om de integriteit van de reparatieplaats beschermen, is de FT vrijgegeven op het myotendinous knooppunt, het verminderen van de mechanische krachten van de pees, waarschijnlijk bijdragen aan de grotere littekenvorming. Isolatie van voldoende cellen van het granulatieweefsel van de FT tijdens het genezingsproces voor flowcytometrische analyse moeilijk gebleken; cytologie centrifugatie aan deze cellen concentraat is een alternatieve methode, en zorgt voor het genereren van celpreparaten, waarop immunofluorescentie labeling kan worden uitgevoerd. Met deze methode kwantificering van cellen of eiwitten van belang tijdens FT genezing mogelijk.

Flexor digitorum longus (FDL) spieren in de kuit, werkt om de cijfers van de muis achterpoot buigen via de flexorpees (blauwe omtrek in figuur 1A en histologisch figuur 2A), die proximaal loopt van de myotendinous knooppunt en eindigt in de distale vingerkootjes. In dit model van flexorpees genezing, is de FDL pees doorgesneden en gerepareerd in het midden van de voet, proximaal van de vertakking in de cijfers van de achterpoot (rode pijlen, Figu...

Flexorpezen in de hand worden vaak gewond, wat leidt tot een verminderde handfunctie. Echter, het littekenweefsel genezende reactie niet goed gekarakteriseerd. Een muizenmodel van flexorpees genezing is hier gedemonstreerd. Dit model kan algemeen begrip van het genezingsproces te verbeteren en therapeutische benaderingen om de genezing te verbeteren beoordelen.

Murine flexorpeesletsel en Repair Surgery

Tendon connects skeletal muscle and bone, facilitating movement of nearly the entire body. In the hand, flexor tendons (FTs) enable flexion of the fingers ...

Het algemene doel van deze chirurgische procedure is om het begrip van de cellulaire en moleculaire processen van litteken- en adhesievorming tijdens de genezing van pezen van de flexoren te verbeteren. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen over het genezingsproces van de flexorpees, zoals welke celtypen bijdragen aan littekenvorming en herstel. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat transgene en knockout-muizen kunnen worden gebruikt om het genezingsproces beter te begrijpen.Deze techniek kan potentiële biologische doelwitten identificeren om de resultaten van de genezing van de buigpees te verbeteren, aangezien het onderzoek naar deze slecht gedefinieerde celpopulaties die bijdragen aan littekenvorming vergemakkelijkt. Nadat is vastgesteld dat er geen reactie is op het knijpen in de teen, brengt u een oogzalf aan op de ogen van de dieren en scheert u de vacht van het gehele achterpoot. Steriliseer de chirurgische plek met opeenvolgende scrubs van povidonjodium en 70% ethanol, en lokaliseer de musculus flexor digitorum longus, of de FDL-pees, in het mediale aspect van de kuit.Maak vervolgens een incisie van 0,5 tot 1 centimeter in de huid om de p

murine-flexor-tendon-injury-and-repair-surgery

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Source: Dalkin, W., et al. The Fibular Nerve Injury Method: A Reliable Assay to Identify and Test Factors That Repair Neuromuscular Junctions. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates a surgical procedure to induce fibular nerve injury in a mouse to study neuromuscular junction (NMJ) regeneration. The procedure involves exposing the fibular nerve, applying controlled pressure to induce injury, and ensuring the epineurium remains intact to support axonal regeneration. Over time, macrophages...

Inducing Fibular Nerve Injury in a Mouse to Study Neuromuscular Junction Regeneration

Dit protocol beschrijft een muismodel van de orthopedische chirurgie die is gebruikt voor het bestuderen van de mechanismen van postoperatieve neuroinflammation en gedragsveranderingen, en wanneer deze wordt gecombineerd met parabiosis, om te studeren weefselregeneratie tijdens veroudering.

Een muismodel van orthopedische chirurgie te bestuderen Weefselregeneratie en postoperatieve cognitieve dysfunctie

In dit artikel presenteren we een in vitro en in situ protocol om een peesspleet van maximaal 1,5 cm te herstellen door deze te vullen met gemanipuleerd collageentransplantaat. Dit werd uitgevoerd door een aangepaste hechttechniek te ontwikkelen om de mechanische belasting te nemen totdat het transplantaat in het gastheerweefsel rijpt.

Een nieuwe tenorrfaphy hechttechniek met weefselmanipulatie collageentransplantaat om grote peesdefecten te repareren

Hier presenteren we een protocol om een minimaal invasieve techniek voor knie gewrichts immobilisatie in een rat-model te beschrijven. Dit reproduceerbare protocol, dat zich baseert op de scheidings modus van de spier kloof en de mini-incisie vaardigheid, is geschikt voor het bestuderen van het onderliggende moleculaire mechanisme van verworven gewrichts contractuur.

Een mini-invasieve interne fixatie techniek voor het bestuderen van immobilisatie-geïnduceerde knie Flexion contractuur bij ratten

Hier presenteren we een "Q" hechtingstechniek die kan worden uitgevoerd bij peesreparatie en de effecten ervan op de hiaatvorming en treksterkte van de gerepareerde pezen. Q hechting is aangetoond dat efficiënt zijn in het verbeteren van de trekweerstand en pees reparatie sterkte.

Q-hechting gebruiken om de weerstand tegen gapvorming en treksterkte van gerepareerde Flexor-pezen te verbeteren

Dit protocol illustreert een methode voor de beoordeling van de biofysische eigenschappen van peesreparaties ex vivo. Een polytetrafluorethyleen (PTFE) hechtmateriaal werd met deze methode geëvalueerd en vergeleken met andere materialen onder verschillende omstandigheden.

Polytetrafluorethyleen (PTFE) als hechtmateriaal bij peeschirurgie

Het enkel-subtalair complex gewricht (ASCJ) is de kern van de voet en speelt een sleutelrol bij evenwichtscontrole bij dagelijkse activiteiten. Sportblessures leiden vaak tot instabiliteit in dit gewricht. Hier beschrijven we een muismodel van door ligamenten geïnduceerde instabiliteit van de ASCJ.

Een muismodel van enkel-subtalaire gewrichtsinstabiliteit

Deze studie beschrijft procedures voor het vaststellen van een chronisch vergelijkbaar letsel aan de rotator cuff (RC) van konijnen. In het bijzonder wordt de verwonding gecreëerd in de subscapularis (SSC) spierpees/myotendineuze eenheid om de menselijke RC-anatomie en pathofysiologie na te bootsen, inclusief ernstige spiervetdegeneratie (FD). Dit protocol kan worden toegepast om RC-letsels te bestuderen en regeneratieve therapieën te beoordelen.

Ontwikkeling van een chronisch model voor rotator cuff-letsel bij konijnen voor de studie van fibrose en spierdegeneratie

We presenteren een op maat gemaakt experimenteel platform en weefselkweekprotocol dat fibrokraakbeenachtige verandering nabootst die wordt aangedreven door impingement van de achillespeesinsertie in explantaten van de achterpoten van muizen met aanhoudende cellevensvatbaarheid, en biedt een model dat geschikt is voor het onderzoeken van de mechanobiologie van peesimpingement.

Muizen achterpoot explantatiemodel voor het bestuderen van de mechanobiologie van achillespees impingement

We beschrijven twee tactiele zintuiglijke testmethoden voor acute of chronische perioden van ruggenmergletsel bij ratten. Deze gevalideerde procedures kan detecteren de ontwikkeling en het onderhoud van allodynie-achtige sensaties.

Acute en chronische Tactile Sensory Testing na ruggenmergletsel bij ratten

Leer een chirurgische methode voor flexorpeesherstel bij muizen om celpopulaties en littekenvorming te bestuderen. Dit model helpt bij het identificeren van biologische doelwitten voor verbeterde genezing.

Murine flexorpeesletsel en Repair Surgery

Meer video's verkennen