Name: Het knaagdier Model van nonarteritic anterior ischemische optische neuropathie (rNAION) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-11-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 49 s
Description: Leer een pijnloze laserprocedure om een knaagdiermodel van ischemische opticusneuropathie te creëren. Deze techniek isoleert ischemische schade aan de voorste opticuszenuw zonder chirurgie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Wij danken de vele studenten en fellows die hebben gewerkt aan dit model om de effectiviteit ervan te verbeteren, en om de mechanismen te begrijpen. Speciale dank gaat uit naar dr&#39;s. Mary Johnson (Universiteit van Maryland-Baltimore), Nitza Goldenberg-Cohen (Schneiderman Childrens Hospital, Petah-Tikva, Israël), Charles Zhang (Einstein Medical College, Bronx, NY) en Valerie Touitou (Hopital Salpetrie, Parijs, Frankrijk). Deze studie werd gefinancierd in het kader van RO1 EY015304 te SLB.

Dit protocol werd goedgekeurd door de Universiteit van Maryland Institutional Animal Care en Ingebruikname Comité (IACUC, Baltimore, MD, USA) 1. Experimental Set-up <ol><li> Wordt maat ontworpen contactlens van een heldere optische kwaliteit cirkelvormige 7 mm diameter plexiglas, dikte 3 mm. Snijd de ronde lenzen met een kolomboormachine. Gebruik een standaard boorbeitel aan de binnenbocht maken, en ten slotte polijsten de buitenste en binnenste weer door middel van een contactlens polijstmachine ultrafijne korrel (1000/3000). </li><li> Bereid 2,5 mM Rose Bengal (RB) in pH 7,4 fosfaatbuffer zoutoplossing (PBS) vooraf filter steriliseren met een 0,45 micron spuitfilter en opslaan 1 ml aliquots van -20 ° C in een lichtdichte verpakking tot 6 maanden. Opmerking: Het gebruik van inteelt mannelijke albino dieren, zoals Sprague Dawley minimaliseert de spanning afhankelijke respons verschillen, zodat vergroot het inductie en vermindert de variabiliteit die kan optreden bij oestrus cycling vrouw. </li><li> Stel de frequentie verdubbeld Neodymium-yttrium aluminium-granaat (Fd-YAG) oogheelkundige medische laser, die een 532 nm laserlicht genereert. Monteer de laser op een Haag-Streit oogheelkundige spleetlamp met een standaard oogheelkundige laser adapter. Deze in de handel verkrijgbaar apparaat maakt gelijktijdige visualisatie van ogen en laser spot toepassing van het dier. De medische laser heeft ook een streven beam voor een goede scherpstelling en centrering met behulp van dezelfde plek grootte als laser inductie. Laservermogen parameters zijn: <ol><li> Voor rat rNAION inductie: gebruik maken van 500 pm spot grootte / 50 mW laservermogen / 1000 msec duur / 1000 msec interval. </li><li> Voor muizen rNAION inductie: wijzig de vlekgrootte tot 300 pm voor kleinere optische disk en laat andere parameters hetzelfde als de rat instelling. </li><li> Routinematig gebruik van een laser power meter aan de laser vermogen te verzekeren. </li></ol></li></ol> 2. Experimentele procedure <ol><li> Zet de laservermogenen het opzetten van de juiste laser parameter. Verwarm de laser gedurende ten minste vijf minuten voor gebruik. </li><li> Weeg het dier om de juiste dosis voor ketamine / xylazine en RB kleurstof te bepalen. Verdoven het dier door intraperitoneale injectie van 1 ml / kg mengsel van 80 mg / ml ketamine en 4 mg / ml xylazine. </li><li> Laat het dier in een verwarmde kooi tot ze volledig verdoofd. Controleer of er geen reactie op aversieve stimuli (staart of teen knijpen). Controleer dieren anesthesiediepte elke 10 min. </li><li> Pupillen verwijden van het dier met 1% tropicamide en verdoven het oppervlak van het oog met 0,5% proparacaine. Bij gebruik van gepigmenteerde dieren, zoals Long Evans, een 2,5% neosynephrine oogdruppels pupilverwijding verhogen. </li><li> Gebruik een schaar te knippen de snorharen in de buurt van de snuit aan de kant te worden geïnduceerd om te voorkomen dat het blokkeren van het uitzicht. </li><li> Een druppel 1% methylcellulose of andere oftalmische koppeling druppel aan de binnenzijde van de op maat gemaakte contactlens, en vervolgens de lens op tHij rat oog. </li><li> Plaats het dier op een platform aangepast aan de hoogte van de spleetlamp. Stel hoofd van het dier bij een 45 ° hoek, zodat het oog loodrecht op de spleet lamp en laser beam. </li><li> Visualiseer het oog door de oogheelkundige spleetlamp. Zorg ervoor dat het richten bundel is de juiste maat, evenals gericht en gecentreerd direct aan de gevisualiseerde oogzenuw. Fotograferen de retinale fundus met een digitale camera met een hoge ASA (1200 - 2000) Snelheid aangebracht op één van de oculairen van de spleetlamp met een op maat gemaakte adapter. OPMERKING: De mogelijkheid om de choroïdale vaten zien onthult de transparantie van het netvlies. Dit is een belangrijk signaal om te kunnen later retinale ischemie te detecteren, wat de interpretatie kan verwarren als het zich voordoet. rNAION is oogzenuw ischemie, waardoor geïsoleerde RGC verlies, terwijl retinale ischemie leidt tot beschadiging van het netvlies alle cellen van de binnenste retinale lagen beïnvloeden. </li><li> Eventueel verder beeld het netvlies enoogzenuw met behulp van een spectrale domein-optical coherence Tomografie (SD-8 oktober) aan de niet-geïnduceerde oog te evalueren. Scannen en face (Figuur 3B) en 7 doorsnede scant de retina (Figuur 3C). De SD-oktober beeldvorming maakt gebruik van dezelfde contactlens gebruikt voor laser inductie. </li><li> Injecteer 1 ml / kg RB intraveneus door middel van staartader, en wacht 30 seconden, dan is het laservermogen te activeren. Deze timer kan de RB gelijkmatig verdelen door de circulatie. We maken gebruik van een 50 mW laserpuls op één sec / puls. Greater energieën (≥ 60 mW) kan het netvlies beschadigen of retinale vasculaire ischemie. Let op: Zorg ervoor dat iedereen heeft een paar laserveiligheid filtering glazen van de juiste golflengte blokkering te voorkomen dat er ongewenste laserlicht invoeren oog onderzoeker. LET OP: De laser administratie moet snel worden gegeven na de IV RB injectie, omdat de kleurstof snel wordt geëlimineerd uit de circulatie. Hoe langer de laser inductie, hoe ernstiger de oogzenuw ischemie. In het algemeen worden dieren die 7-12 sec pulsen in snelle opeenvolging. Het contact van het laserlicht met de circulerende kleurstof geeft de oogzenuw schepen een mooie gouden gloed die kan worden gezien door de spleetlamp (Figuur 4B). Dit bewijst dat de kleurstof werd systemisch geïnjecteerd en verspreid in de bloedbaan. Als de gloed is zwak, of helemaal geen (figuur 4A), is de kleurstof niet intraveneus ingespoten. In dit geval, geen tweede injectie onmiddellijk te geven, omdat de dieren moeten herstellen gedurende ten minste twee dagen voor herinjectie. </li><li> Onmiddellijk na inductie, verwijder de contactlens. Bedek beide ogen met oogheelkundige triple antibioticum (Neosporin / polymyxine / bacitracine) zalf met dexamethason, en plaats het dier op een 37 ° C opwarming pad in één kooi gehuisvest onder strikte observatie tot volledig herstel. <ol><li> Maak de contactlens met gedestilleerd water en wrijf droog met een niet-schurend reinigingsdoekje voor toekomstig gebruik. </li><li> Twee dagen na de inductie evalueren van de oogzenuw oedeem door beide fundus kleur fotografie en SD-oktober analyse 8. Opmerking: Het vergelijken van de mate van oedeem oogzenuw geeft een schatting van de ernst van de oogzenuw ischemie. Op twee dagen, is de oogzenuw schijf marge wazig, en de retinale aderen enigszins verwijd, in vergelijking met de contralaterale (-un-geïnduceerde) oog. Voer Electroretinografie (ERG) en flash-visuele evoked potential (VEP 11) op twee en vier weken na de inductie voor de elektrofysiologie analyse. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Banik, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonarteritic+Anterior+Ischemic+Optic+Neuropathy%3A+An+Update+on+Demographics%2C+Clinical+Presentation%2C+Pathophysiology%2C+Animal+Models%2C+Prognosis%2C+and+Treatment%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Experimental+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Nonarteritic Anterior Ischemic Optic Neuropathy: An Update on Demographics, Clinical Presentation, Pathophysiology, Animal Models, Prognosis, and Treatment.</a> J. Clin. Experimental Ophthalmol. 10, 1-5 (2013).</li>
<li>IONDT study group. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characteristics+of+patients+with+nonarteritic+anterior+ischemic+optic+neuropathy+eligible+for+the+Ischemic+Optic+Neuropathy+Decompression+Trial%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Characteristics of patients with nonarteritic anterior ischemic optic neuropathy eligible for the Ischemic Optic Neuropathy Decompression Trial.</a> Arch Ophthalmol. 114, 1366-1374 (1996).</li>
<li>Tesser, R. A., Niendorf, E. R., Levin, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+morphology+of+an+infarct+in+nonarteritic+anterior+ischemic+optic+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">The morphology of an infarct in nonarteritic anterior ischemic optic neuropathy.</a> Ophthalmology. 110, 2031-2035 (2003).</li>
<li>Bernstein, S. L., Johnson, M. A., Miller, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonarteritic+anterior+ischemic+optic+neuropathy+%28NAION%29+and+its+experimental+models%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Nonarteritic anterior ischemic optic neuropathy (NAION) and its experimental models.</a> Prog Retin Eye Res. 30, 167-187 (2011).</li>
<li>Nicholson, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PGJ2+Provides+Prolonged+CNS+Stroke+Protection+by+Reducing+White+Matter+Edema%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">PGJ2 Provides Prolonged CNS Stroke Protection by Reducing White Matter Edema.</a> PLoS One. 7 (12), (2012).</li>
<li>Goldenberg-Cohen, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oligodendrocyte+Dysfunction+Following+Induction+of+Experimental+Anterior+Optic+Nerve+Ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Oligodendrocyte Dysfunction Following Induction of Experimental Anterior Optic Nerve Ischemia.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 46, 2716-2725 (2005).</li>
<li>Bernstein, S. L., Guo, Y., Kelman, S. E., Flower, R. W., Johnson, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+and+cellular+responses+in+a+novel+rodent+model+of+anterior+ischemic+optic+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Functional and cellular responses in a novel rodent model of anterior ischemic optic neuropathy.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 44, 4153-4162 (2003).</li>
<li>Berger, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spectral-Domain+Optical+Coherence+Tomography+of+the+Rodent+Eye%3A+Highlighting+Layers+of+the+Outer+Retina+Using+Signal+Averaging+and+Comparison+with+Histology%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Spectral-Domain Optical Coherence Tomography of the Rodent Eye: Highlighting Layers of the Outer Retina Using Signal Averaging and Comparison with Histology.</a> PLoS One. 9 (5), (2014).</li>
<li>Huang, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effects+of+systemic+treatment+with+methylprednisolone+in+a+rodent+model+of+non-arteritic+anterior+ischemic+optic+neuropathy+%28rNAION%29%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Protective effects of systemic treatment with methylprednisolone in a rodent model of non-arteritic anterior ischemic optic neuropathy (rNAION).</a> Exp Eye Res. 131, 69-76 (2015).</li>
<li>Mantopoulos, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Experimental+Model+of+Optic+Nerve+Head+Injury%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">An Experimental Model of Optic Nerve Head Injury.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 57, 6222(2014).</li>
<li>You, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visual+Evoked+Potential+Recording+in+a+Rat+Model+of+Experimental+Optic+Nerve+Demyelination%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Visual Evoked Potential Recording in a Rat Model of Experimental Optic Nerve Demyelination.</a> J. Vis. Exp. (101), e52934(2015).</li>
<li>Templeton, J. P., Geisert, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+practical+approach+to+optic+nerve+crush+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">A practical approach to optic nerve crush in the mouse.</a> Mol Vis. 18, 2147-2152 (2012).</li>
<li>Magharious, M. M., D'Onofrio, P. M., Koeberle, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optic+Nerve+Transection%3A+A+Model+of+Adult+Neuron+Apoptosis+in+the+Central+Nervous+System%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Optic Nerve Transection: A Model of Adult Neuron Apoptosis in the Central Nervous System.</a> J Vis Exp. (51), e2241(2011).</li>
<li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Rodent+Model+of+Posterior+Ischemic+Optic+Neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">A Novel Rodent Model of Posterior Ischemic Optic Neuropathy.</a> JAMA Ophthalmol. 131 (2), 194-204 (2013).</li>
<li>Huang, T. L., Chang, C. H., Chang, S. W., Lin, K. H., Tsai, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+Intravitreal+Injections+of+Antivascular+Endothelial+Growth+Factor+Agents+in+a+Rat+Model+of+Anterior+Ischemic+Optic+Neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22IOVS%22%5BJournal%5D)">Efficacy of Intravitreal Injections of Antivascular Endothelial Growth Factor Agents in a Rat Model of Anterior Ischemic Optic Neuropathy.</a> IOVS. 56, 2290-2296 (2015).</li>
</ol>

Auteurs hebben niets te onthullen.

Hoewel er een aantal modellen van de schade aan de oogzenuw (oogzenuw verpletteren 12, oogzenuw doorsnijding 13, en PION 14), de rNAION model humaan is, aan te passen aan zowel ratten en muizen. Het lijkt beter de menselijke klinische toestand van NAION. Deze voorwaarde omvat progressieve anterior oogzenuw oedeem, een anterieure oogzenuw compartiment syndroom, focale axonale ischemie, geïsoleerde retinale ganglion cel axonen schade en verlies over een langere tijdsverloop. Dit verslag le...

Nonarteritic anterior ischemische optische neuropathie (NAION) is een focale ischemische letsel van het voorste gedeelte van de oogzenuw (ON) 1. NAION is de meest voorkomende oorzaak van plotselinge oogzenuw gerelateerde gezichtsverlies bij personen ouder dan 50 2. Het mechanisme wordt aangenomen dat een compartiment syndroom dat resulteert in intraneurale oedeem en compressie veroorzaakt van de capillairen leveren axons in de oogzenuw 3. Aangezien de ON eigenlijk een centraal zenuwstelsel (CZS) kanaal, kan het knaagdier NAION (rNAION) model worden gebruikt om de mechanismen te bestuderen en reacties op geïsoleerde CZS witte stof beroertes. De rNAION model kan daarom nuttig zijn bij het ontleden van vele problemen in verband met een beroerte in verband schade aan witte stof zijn. Het kan worden gebruikt om verschillende strategieën en neuroprotectieve middelen in witte stof beroerte evalueren. Een van de aantrekkelijke kenmerken van het model is dat heteen pijnloze, niet-invasieve procedure. Het laservermogen kan worden aangepast aan verschillende mate van ischemische schade veroorzaken. Een ander kenmerk is doordat het op laser geïnduceerde superoxide radicalen de capillaire endotheel beschadigen, een progressieve capillaire disfunctie. Hierdoor disfunctie en vooruitstrevende oedeem dat wordt verondersteld opmerkelijk vergelijkbaar met het mechanisme dat NAION veroorzaakt worden. Onderzoek heeft aangetoond dat het niet direct capillaire stolling veroorzaakt, maar werkt door ten minste twee mechanismen: superoxide geïnduceerde dood en strippen van enkele capillaire endotheelcellen 4 en NFkB (nuclear factor kappa-lichte-keten-enhancer van geactiveerde B-cellen ) geassocieerd inflammatoire up regelgeving in de resterende endotheel, met een verhoogde vloeistof transport over de celmembranen in het interstitium 5. De sluiting van de oogzenuw haarvaten en compressie veroorzaakt door interstitiële vochtophoping resultaat in de oogzenuw hoofd ischemie. Een schematische afbeelding weergegeven inFiguur 2. De rNAION model kan worden gebruikt in zowel ratten en muizen species 6,7, en kan het niveau van de ernst variëren, van een milde laesie volledig, maar pijnloze vernietiging van de oogzenuw en het netvlies, zoals als centrale retinale arterie occlusie (CRAO).

<table><tbody><tr><td>50 mW 532 nm laser</td><td>Iridex</td><td></td><td>Standaard oogheelkundige laser</td></tr><tr><td>0 - 100 mW 532 nm laser</td><td>Laserglow technologies</td><td></td><td>Vervanger voor iridex</td></tr><tr><td>Laser spleetlamp adapter</td><td>Iridex</td><td></td><td>SMA gekoppelde adapter voor laseruitgang</td></tr><tr><td>Coherent Fieldmate lasermeter met thermopijlsensor</td><td>Coherent</td><td></td><td>anderen ook geschikt</td></tr><tr><td>Oogheelkundig onderzoekende spleetlamp biomicroscoop</td><td>Verschillende</td><td></td><td>Haag-Streit is de beste; goedkopere versies verkrijgbaar op ebay</td></tr><tr><td>Rose Bengal</td><td>Sigma</td><td>330000-1G</td><td>Foto-inducerend middel</td></tr><tr><td>Fundus contactlens of glazen deksel</td><td>custom/Cantor en Nissel (UK)</td><td></td><td>Op maat gemaakte planoconvexe plastic lens voor oogonderzoek en inductie</td></tr><tr><td>Tropicamide 1%</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tamiya polijstpasta</td><td>Tamiya, INC</td><td>87068</td><td>contactlens polijsten</td></tr><tr><td>2,5% Hypromellose (Goniovisc)/1% Methycellulose</td><td>HUB Pharmaceuticals</td><td></td><td>contactlens koppelingsmiddel</td></tr><tr><td>2,5% Neosynephrine oogdruppels</td><td>Alcon labs</td><td></td><td>pupilverwijdend middel</td></tr><tr><td>Tropicamide 1%</td><td>Alcon labs</td><td></td><td>pupilverwijdend middel</td></tr><tr><td>0,5% Proparacaine</td><td>Alcon labs</td><td></td><td>topisch verdovingsmiddel</td></tr><tr><td>30 G versmolten naald insulinespuit</td><td>Verschillende</td><td>Verschillende</td><td>voor intraveneuze injectie van rose bengal</td></tr><tr><td>Oogheelkundig antibioticumzalf met toegevoegd dexamethason (drivoudige antibioticumzalf)</td><td>Verschillende</td><td>Verschillende</td><td>Aanbrengen na inductie om hoornvlieslittekens te minimaliseren</td></tr><tr><td>Heidelberg Corporation Spectral domein-Optische Coherenstomograaf</td><td>Heidelberg Corporation</td><td></td><td>Voor optische coherentiemetingen baseline en post-inductie; niet essentieel voor inductie</td></tr></tbody></table>

het knaagdier model van nonarteritic anterior ischemische optische neuropathie (rnaion)

The Rodent Model of Nonarteritic Anterior Ischemic Optic Neuropathy (rNAION)

Non-arteriettische anterieure ischemische optische neuropathie (NAION) is een focale ischemische laesie van de oogzenuw die 1 op de 700 personen gedurende hun leven treft. NAION resulteert in oogontzending, selectieve verliezen van de retinale ganglioncelneuronen (RGC's) en atrofie van de oogzenuw. Er is een knaagdiermodel van NAION ontwikkeld dat de meeste kenmerken en gevolgen van NAION vertoont en dat zowel op ratten als op muizen van toepassing is. Dit model maakt gebruik van een focale lasertoepassing met een golflengte van 532 nm om een fotoactieve kleurstof, Rose Bengal (RB), te belichten en hierdoor capillaire schade en lekkage te veroorzaken in de beoogde voorste oogzenuw (de laminaire regio). Na inductie van rNAION is er een vroege oogzenuwishemie, oogontzending en intraneurale ontsteking, gevolgd door selectieve RGC- en axonalverliezen. Omdat de oogzenuw een witte stofbaan van het centrale zenuwstelsel is, is het rNAION-model toepasbaar voor mechanistische studies van selectieve ischemische witte stof, evenals voor neuroprotectieve analyses en korte en lange termijn mechanismen van gliale en neuronale reacties op ischemische aandoeningen.

<html> De contactlens ingeschakeld centrale retina visualiseren (figuur 1). Het brandpunt laserspot belicht de optische schijf aan de achterkant van de retina (Figuur 2). De normale-un geïnduceerde retina wordt afgebeeld door spleetlamp bio-microscoop (figuur 3A) en SD-oktober (Figuur 3B en 3C). Tijdens laser inductie, als er geen kleurstof aanwezig in de circulatie, laserlicht niet tot vat en schijf fluorescentie <strong...

Het volgende rapport beschrijft hoe je het knaagdiermodel van nonarteritic anterior ischemic optic neuropathy (rNAION) kunt repliceren, met behulp van de juiste kleurstof, contactlens en laserparameters. We onthullen ook de juiste stappen voor het evalueren van de rNAION-laesie in vivo.

Het knaagdier Model van nonarteritic anterior ischemische optische neuropathie (rNAION)

Nonarteritic anterior ischemic optic neuropathy (NAION) is a focal ischemic lesion of the optic nerve that affects 1/700 individuals throughout their ...

Het algemene doel van deze procedure is het produceren van een knaagdiermodel van anterior ischemische opticusneuropathie, voor gebruik bij het karakteriseren van responsmechanismen bij beroertes en voor het analyseren van de effectiviteit van neuroprotectieve middelen bij de behandeling van een beroerte van de oogzenuw. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen op het gebied van beroertes van de oogzenuw.Inclusief mechanismen van oedeem, post-stroke inflammatie en routes voor bescherming en herstel. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat de ischemische schade beperkt blijft tot het anterieure gedeelte van de oogzenuw. Zonder chirurgie is de techniek pijnloos.Bovendien kan de ernst van de beschadiging reproduceerbaar naar wens worden gevarieerd. Deze methode vermijdt de pijn die gepaard gaat met veel zenuwbeschadigingsmodellen, waaronder het pletten of doorsnijden van de oogzenuw.Het maakt daarnaast een gedetailleerde analyse mogelijk van de effecten van geïsoleerde exo-ischemie, in een enkele neuronklasse, in vivo. Begin met het verkrijgen van een op maat gemaakte contactlens, ontworpen volgens de getoonde specificaties. Bereid daarnaast 2,5 millimolair rosebengal voor in fosfaatgebufferde zoutoplossing met een pH 7,4.De vloeistoffen worden gesteriliseerd met een spuitfilter van 0,5 micron. Bereid aliquoten van één milliliter, plaats de aliquoten in een lichtdichte container en bewaar deze bij -20 °C gedurende maximaal zes maanden. Zet op de dag van de procedure de frequentieverdubbelde neodymium-yttrium-aluminium-granaat (Nd:YAG) oogheelkundige medische laser klaar.Dit genereert laserlicht van 532 nanometer. Monteer de laser op een Haag-Streit spleetlamp voor oogheelkundig onderzoek, met behulp van een standaard oogheelkundige laseradapter, om gelijktijdige visualisatie van het oog van het dier en de applicatie van de laserspot mogelijk te maken. Zet de laser aan en laat deze ten minste vijf minuten opwarmen voor gebruik.Stel de juiste laservermogensparameters in voor het gebruikte proefdier. Monteer een digitale camera met een hoge ASA-snelheid op een van de oculairs van de spleetlamp met behulp van een op maat gemaakte adapter. Anestheseer het proefdier op de juiste wijze en bevestig dat het juiste niveau van anesthesie is bereikt door het uitblijven van een reactie op een knijpreflex in de teen.Verwijden de pupillen van de dieren met één procent tropicamide. Anestheseer vervolgens het oogoppervlak met 0,5 procent proparacaïne. Gebruik daarna de schaar om de snorharen dicht bij de snuit aan de zijde van de inductie weg te knippen, zodat het oog goed zichtbaar is.Breng vervolgens een druppel één procent methylcellulose, of een andere ooghechtingsdruppel, aan op de binnenzijde van de op maat gemaakte contactlens. Plaats daarna de lens op het oog van de rat. Plaats het dier op een platform dat is aangepast aan de hoogte van de spleetlamp.Plaats de kop van het dier in een hoek van 45 graden, zodat het oog loodrecht op de spleetlamp en de laserstraal staat. Visualiseer vervolgens het oog via de oogheelkundige spleetlamp. Bij een gezond oog heeft de papil een duidelijke begrenzing en een roodachtige omgeving Q. Bovendien zijn de retinaalvaten dun en gelijkmatig verdeeld.Zorg ervoor dat de richtstraal de juiste grootte heeft, en dat deze gefocust en direct gecentreerd is op de gevisualiseerde nervus opticus. Fotografeer vervolgens het retinaal fundus met de digitale camera.Inject vervolgens één milligram per kilogram rose bengal intraveneus via de staartvene. Wacht vervolgens 30 seconden. Een gladde, continue intraveneuze injectie van rose bengal moet na 30 seconden worden gevolgd door laserbestraling van de papil van de oogzenuw.Variatie in de tijd tussen deze twee stappen resulteert in een toegenomen variabiliteit in de mate van schade door het optische zenuwinfarct, wat uw resultaten kan beïnvloeden. Activeer na 30 seconden het laservermogen.De oogzenuw vertoont een gouden gloed binnen de vaten, die vanuit de papil op de plek van de laserstraal naar voren komen. Dit duidt op de aanwezigheid van rose bengal in de bloedbaan, verlicht door het groene laserlicht. Verwijder direct na inductie de contactlens en bedek beide ogen met een oftalmische triple antibiotische zalf, dexamethason.Huisvest het dier individueel in een kooi op een verwarmingsmat van 37 °C, onder nauwlettende observatie tot het volledige herstel is bereikt. Deze kleurenfoto van het fundus toont zwelling van de oogzenuw en bleekheid van de oogzenuwpapil, met verlies van de omliggende choroïdale flush.De aderen zijn vergroot en gebogen. Deze n-face SDOCT-afbeelding, na inductie, laat oedeem van de papil en veneuze dilatatie zien. De scanrichting wordt aangegeven met een groene pijl; de dwarsdoorsnede in de volgende afbeelding is gegenereerd vanuit het groene kader.Hier is een dwarsdoorsnede te zien die oedeem van de papil van de oogzenuw vertoont, wat blijkt uit een verminderde grijswaarde-intensiteit en een toegenomen dikte van de zenuwvezellaag van het netvlies. Dit is consistent met een hoger watergehalte. De diameter van de intraretinale oogzenuw, aangegeven tussen de zwarte pijlen, is vergroot.Bij het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om te zorgen voor een schone, gepolijste contactlens of dekglas, zodat de zenuw goed zichtbaar is en het laserlicht nauwkeurig op de zenuw kan worden gefocust. Na deze procedure kunnen andere methoden, zoals immunohistochemie, cytokinea-analyse of genexpressieanalyse, worden uitgevoerd om aanvullende vragen te beantwoorden.Zoals ontstekingsreacties na een beroerte, of veranderingen in de doelweefsels.

the-rodent-model-nonarteritic-anterior-ischemic-optic-neuropathy

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Dit protocol laat zien hoe retrogradely label retinale ganglioncellen, en hoe nadien tot een oogzenuw crush om retinale ganglion cel overleving en apoptose te analyseren. Het is een experimenteel ziekte model voor verschillende typen van optische neuropathie, zoals glaucoom.

Een Optic Nerve Crush letsel muismodel om retinale ganglion cel Survival Study

Het doel van dit protocol is ischemische letsel fotochemisch ertoe te bewegen de achterste oogzenuw in de rat. Dit model is kritisch voor onderzoek van de pathofysiologie van posterieure ischemische optische neuropathie, en therapeutische toepassingen voor deze en andere optische neuropathieën, evenals andere CNS ischemische ziekten.

Rat model van fotochemisch geïnduceerde posterior ischemische optische neuropathie

Hier presenteren we het protocol voor laser-geïnduceerde choroïdale neovascularisatie (CNV) bij muizen, een experimenteel model dat de vasculaire kenmerken van neovasculaire leeftijdsgebonden maculaire degeneratie (AMD) nastreeft. Eenmaal onder de knie, kan het op betrouwbare en effectieve wijze CNV induceren als modelsysteem om verschillende experimentele maatregelen te testen.

Een muismodel voor Laser-geïnduceerde Choroïdale Neovascularisatie

Glaucoom wordt gekenmerkt door schade aan retinale ganglioncellen. Het induceren van glaucoom in diermodellen kan inzicht geven in de studie van deze ziekte. Hier schetsen we een procedure die verlies van RGC's induceert in een in vivo rattenmodel en de voorbereiding van gehele netvliezen voor analyse demonstreert.

Glaucoom-inducerende Procedure in een<em&gt; In Vivo</em&gt; Rat Model en Whole-mount Retina Voorbereiding

Secundaire degeneratie van het netvlies peesknoopcellen (RGCs) komt vaak voor bij glaucoom. Deze studie beschrijft een innovatieve operationele aanpak voor gedeeltelijke oogzenuw transect. Het gebruik van deze ruimtebesparende operationele aanpak strekt zich uit de modellenreeks van de toepassing en kunt verkenning van secundaire schade mechanismen in RGCs op een nieuwe manier.

Gedeeltelijke oogzenuw transect bij ratten: een Model tot stand gebracht met een nieuwe operationele aanpak om te beoordelen van secundaire degeneratie van het netvlies peesknoopcellen

Hier presenteren we een protocol voor het opwekken van oculaire hypertensie en glaucomateuze neurodegeneratie in muis ogen door intracamerale injectie van siliconenolie en de procedure voor het verwijderen van siliconenolie uit de voorste kamer om verhoogde intraoculaire druk terug te Normale.

Een omkeerbare silicium olie-geïnduceerde oculaire hypertensie model in muizen

Zuurstofgeïnduceerde retinopathie (OIR) kan worden gebruikt om ischemische netvliesaandoeningen zoals retinopathie van prematuriteit en proliferatieve diabetische retinopathie te modelleren en om te dienen als model voor proof-of-concept studies bij het evalueren van antiangiogene geneesmiddelen voor neovasculaire ziekten. OIR induceert robuuste en reproduceerbare neovascularisatie in het netvlies die kan worden gekwantificeerd.

Zuurstofgeïnduceerde retinopathiemodel voor ischemische netvliesziekten bij knaagdieren

Hier beschrijven we een muismodel van retinale ischemie door voorbijgaande bilaterale gemeenschappelijke halsslagader occlusie met behulp van eenvoudige hechtingen en een klem. Dit model kan nuttig zijn voor het begrijpen van de pathologische mechanismen van retinale ischemie veroorzaakt door cardiovasculaire afwijkingen.

Een Murine-model van ischemisch netvliesletsel veroorzaakt door voorbijgaande bilaterale gemeenschappelijke halsslagader Occlusie

Dit artikel bevat gedetailleerde instructies voor het uitvoeren van oogzenuwverbrijzeling in een konijnenmodel met behulp van standaard oogheelkundige chirurgische technieken.

Een chirurgische benadering voor oogzenuwverbrijzeling in een konijnenmodel

Dit protocol beschrijft een unieke techniek waarbij gebruik wordt gemaakt van een transconjunctivale benadering om toegang te krijgen tot de oogzenuw van de rat voor injecties.

Transconjunctivale benadering voor injectie in de oogzenuw van de rat

Leer een pijnloze laserprocedure om een knaagdiermodel van ischemische opticusneuropathie te creëren. Deze techniek isoleert ischemische schade aan de voorste opticuszenuw zonder chirurgie.

Het knaagdier Model van nonarteritic anterior ischemische optische neuropathie (rNAION)

Meer video's verkennen