Name: Experimentele infectie met Listeria monocytogenes Als een model voor de studie Host Interferon-γ Responses (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-11-16T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 10 s
Description: Leer experimentele infectie met Listeria monocytogenes in muizen om interferon-gamma-responsen en overleving na bacteriële infectie te meten. Dit model helpt bij het screenen van agentia die de immuniteit beïnvloeden.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De ontwikkeling van dit protocol werd ondersteund door een subsidie van CIHR (MOP97807) aan SED.

<ol><li>Pamer, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+responses+to+Listeria+monocytogenes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immune responses to Listeria monocytogenes.</a> Nat Rev Immunol. 4 (10), 812-823 (2004).</li>
<li>Ranson, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invariant+V+alpha+14%2B+NKT+cells+participate+in+the+early+response+to+enteric+Listeria+monocytogenes+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Invariant V alpha 14+ NKT cells participate in the early response to enteric Listeria monocytogenes infection.</a> J Immunol. 175 (2), 1137-1144 (2005).</li>
<li>Bancroft, G. J., Schreiber, R. D., Unanue, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+immunity%3A+a+T-cell-independent+pathway+of+macrophage+activation%2C+defined+in+the+scid+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Rev%22%5BJournal%5D)">Natural immunity: a T-cell-independent pathway of macrophage activation, defined in the scid mouse.</a> Immunol Rev. 124, 5-24 (1991).</li>
<li>Soudja, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Memory-T-cell-derived+interferon-gamma+instructs+potent+innate+cell+activation+for+protective+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Memory-T-cell-derived interferon-gamma instructs potent innate cell activation for protective immunity.</a> Immunity. 40 (6), 974-988 (2014).</li>
<li>Schoenborn, J. R., Wilson, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+interferon-gamma+during+innate+and+adaptive+immune+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Immunol%22%5BJournal%5D)">Regulation of interferon-gamma during innate and adaptive immune responses.</a> Adv Immunol. 96, 41-101 (2007).</li>
<li>Filipe-Santos, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inborn+errors+of+IL-12%2F23-+and+IFN-gamma-mediated+immunity%3A+molecular%2C+cellular%2C+and+clinical+features%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Inborn errors of IL-12/23- and IFN-gamma-mediated immunity: molecular, cellular, and clinical features.</a> Semin Immunol. 18 (6), 347-361 (2006).</li>
<li>Flynn, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+essential+role+for+interferon+gamma+in+resistance+to+Mycobacterium+tuberculosis+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">An essential role for interferon gamma in resistance to Mycobacterium tuberculosis infection.</a> J Exp Med. 178 (6), 2249-2254 (1993).</li>
<li>Cooper, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disseminated+tuberculosis+in+interferon+gamma+gene-disrupted+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Disseminated tuberculosis in interferon gamma gene-disrupted mice.</a> J Exp Med. 178 (6), 2243-2247 (1993).</li>
<li>Dalton, D. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+defects+of+immune+cell+function+in+mice+with+disrupted+interferon-gamma+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Multiple defects of immune cell function in mice with disrupted interferon-gamma genes.</a> Science. 259 (5102), 1739-1742 (1993).</li>
<li>Harty, J. T., Bevan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+immunity+to+Listeria+monocytogenes+in+the+absence+of+IFN+gamma%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Specific immunity to Listeria monocytogenes in the absence of IFN gamma.</a> Immunity. 3 (1), 109-117 (1995).</li>
<li>Huang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+response+in+mice+that+lack+the+interferon-gamma+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Immune response in mice that lack the interferon-gamma receptor.</a> Science. 259 (5102), 1742-1745 (1993).</li>
<li>Wang, Z. E., Reiner, S. L., Zheng, S., Dalton, D. K., Locksley, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4%2B+effector+cells+default+to+the+Th2+pathway+in+interferon+gamma-deficient+mice+infected+with+Leishmania+major%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">CD4+ effector cells default to the Th2 pathway in interferon gamma-deficient mice infected with Leishmania major.</a> J Exp Med. 179 (4), 1367-1371 (1994).</li>
<li>Hess, J., Ladel, C., Miko, D., Kaufmann, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salmonella+typhimurium+aroA-+infection+in+gene-targeted+immunodeficient+mice%3A+major+role+of+CD4%2B+TCR-alpha+beta+cells+and+IFN-gamma+in+bacterial+clearance+independent+of+intracellular+location%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Salmonella typhimurium aroA- infection in gene-targeted immunodeficient mice: major role of CD4+ TCR-alpha beta cells and IFN-gamma in bacterial clearance independent of intracellular location.</a> J Immunol. 156 (9), 3321-3326 (1996).</li>
<li>Ikeda, H., Old, L. J., Schreiber, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+roles+of+IFN+gamma+in+protection+against+tumor+development+and+cancer+immunoediting%5BTitle%5D)+AND+%22Cytokine+Growth+Factor+Rev%22%5BJournal%5D)">The roles of IFN gamma in protection against tumor development and cancer immunoediting.</a> Cytokine Growth Factor Rev. 13 (2), 95-109 (2002).</li>
<li>Hodge, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IFN-gamma+AU-rich+element+removal+promotes+chronic+IFN-gamma+expression+and+autoimmunity+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Autoimmun%22%5BJournal%5D)">IFN-gamma AU-rich element removal promotes chronic IFN-gamma expression and autoimmunity in mice.</a> J Autoimmun. 53, 33-45 (2014).</li>
<li>Seery, J. P., Carroll, J. M., Cattell, V., Watt, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antinuclear+autoantibodies+and+lupus+nephritis+in+transgenic+mice+expressing+interferon+gamma+in+the+epidermis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Antinuclear autoantibodies and lupus nephritis in transgenic mice expressing interferon gamma in the epidermis.</a> J Exp Med. 186 (9), 1451-1459 (1997).</li>
<li>Peng, S. L., Moslehi, J., Craft, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+interferon-gamma+and+interleukin-4+in+murine+lupus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Roles of interferon-gamma and interleukin-4 in murine lupus.</a> J Clin Invest. 99 (8), 1936-1946 (1997).</li>
<li>Savinov, A. Y., Wong, F. S., Chervonsky, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IFN-gamma+affects+homing+of+diabetogenic+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">IFN-gamma affects homing of diabetogenic T cells.</a> J Immunol. 167 (11), 6637-6643 (2001).</li>
<li>Miller, C. H., Maher, S. G., Young, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+Use+of+Interferon-gamma%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+N+Y+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Clinical Use of Interferon-gamma.</a> Ann N Y Acad Sci. 1182, 69-79 (2009).</li>
<li>Paget, C., Chow, M. T., Duret, H., Mattarollo, S. R., Smyth, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+gammadelta+T+cells+in+alpha-galactosylceramide-mediated+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Role of gammadelta T cells in alpha-galactosylceramide-mediated immunity.</a> J Immunol. 188 (8), 3928-3939 (2012).</li>
<li>Leonard, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+single-dose+interleukin-12+exposure+on+interleukin-12-associated+toxicity+and+interferon-gamma+production%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Effects of single-dose interleukin-12 exposure on interleukin-12-associated toxicity and interferon-gamma production.</a> Blood. 90 (7), 2541-2548 (1997).</li>
<li>Zenewicz, L. A., Shen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+and+adaptive+immune+responses+to+Listeria+monocytogenes%3A+a+short+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Microbes+Infect%22%5BJournal%5D)">Innate and adaptive immune responses to Listeria monocytogenes: a short overview.</a> Microbes Infect. 9 (10), 1208-1215 (2007).</li>
<li>Viegas, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IFN-gamma+production+by+CD27%28%2B%29+NK+cells+exacerbates+Listeria+monocytogenes+infection+in+mice+by+inhibiting+granulocyte+mobilization%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">IFN-gamma production by CD27(+) NK cells exacerbates Listeria monocytogenes infection in mice by inhibiting granulocyte mobilization.</a> Eur J Immunol. 43 (10), 2626-2637 (2013).</li>
<li>Selvanantham, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nod1+and+Nod2+enhance+TLR-mediated+invariant+NKT+cell+activation+during+bacterial+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Nod1 and Nod2 enhance TLR-mediated invariant NKT cell activation during bacterial infection.</a> J Immunol. 191 (11), 5646-5654 (2013).</li>
<li>Becavin, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+widely+used+Listeria+monocytogenes+strains+EGD%2C+10403S%2C+and+EGD-e+highlights+genomic+variations+underlying+differences+in+pathogenicity%5BTitle%5D)+AND+%22MBio%22%5BJournal%5D)">Comparison of widely used Listeria monocytogenes strains EGD, 10403S, and EGD-e highlights genomic variations underlying differences in pathogenicity.</a> MBio. 5 (2), e00969-e00914 (2014).</li>
<li>Jones, G. S., D'Orazio, S. E. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unit+9B.2+Listeria+monocytogenes%3A+cultivation+and+laboratory+maintenance%2C+Chapter+31B%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Unit 9B.2 Listeria monocytogenes: cultivation and laboratory maintenance, Chapter 31B.</a> Curr Protoc Microbiol. , (2013).</li>
<li>Conour, L. A., Murray, K. A., Brown, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+animals+for+research--issues+to+consider+for+rodents+and+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Preparation of animals for research--issues to consider for rodents and rabbits.</a> ILAR J. 47 (4), 283-293 (2006).</li>
<li>Obernier, J. A., Baldwin, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+an+appropriate+period+of+acclimatization+following+transportation+of+laboratory+animals%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Establishing an appropriate period of acclimatization following transportation of laboratory animals.</a> ILAR J. 47 (4), 364-369 (2006).</li>
<li>BD LSR II User's Guide. , download from bdbiosciences.com. 
 <a target="_blank" href="http://flowcytometry.sysbio.med.harvard.edu/documents/BD%20LSRII%20User's%20Guide.pdf">http://flowcytometry.sysbio.med.harvard.edu/documents/BD%20LSRII%20User's%20Guide.pdf</a> (2007).</li>
<li>Flowjo Tutorial. , download from bdbiosciences.com. 
 <a target="_blank" href="http://www.flowjo.com/tutorials">http://www.flowjo.com/tutorials</a> (2016).</li>
<li>Zhang, M. A., Ahn, J. J., Zhao, F. L., Selvanantham, T., Mallevaey, T., Stock, N., Correa, L., Clark, R., Spaner, D., Dunn, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antagonizing+peroxisome+proliferator-activated+receptor+alpha+%28PPARalpha%29+activity+enhances+Th1+immunity+in+male+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Antagonizing peroxisome proliferator-activated receptor alpha (PPARalpha) activity enhances Th1 immunity in male mice.</a> J. Immunol. , (2015).</li>
<li>Kaplan, E. L., Meier, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonparametric+estimation+from+incomplete+observations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Amer+Stat+Assoc%22%5BJournal%5D)">Nonparametric estimation from incomplete observations.</a> J Amer Stat Assoc. 53, 457-481 (1958).</li>
<li>Brown, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limited+role+of+CD28-mediated+signals+in+T+helper+subset+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Limited role of CD28-mediated signals in T helper subset differentiation.</a> J Exp Med. 184 (3), 803-810 (1996).</li>
<li>Czuprynski, C. J., Brown, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+relative+difference+in+anti-Listeria+resistance+of+C57BL%2F6+and+A%2FJ+mice+is+not+eliminated+by+active+immunization+or+by+transfer+of+Listeria-immune+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology%22%5BJournal%5D)">The relative difference in anti-Listeria resistance of C57BL/6 and A/J mice is not eliminated by active immunization or by transfer of Listeria-immune T cells.</a> Immunology. 58 (3), 437-443 (1986).</li>
<li>Busch, D. H., Vijh, S., Pamer, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+model+for+infection+with+Listeria+monocytogenes%2C++Chapter+19%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Immunol%22%5BJournal%5D)">Animal model for infection with Listeria monocytogenes, Chapter 19.</a> Curr Protoc Immunol. , (2001).</li>
<li>Mekada, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+differences+among+C57BL%2F6+substrains%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Anim%22%5BJournal%5D)">Genetic differences among C57BL/6 substrains.</a> Exp Anim. 58 (2), 141-149 (2009).</li>
<li>Ivanov, I. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+microbiota+direct+the+differentiation+of+IL-17-producing+T-helper+cells+in+the+mucosa+of+the+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+Microbe%22%5BJournal%5D)">Specific microbiota direct the differentiation of IL-17-producing T-helper cells in the mucosa of the small intestine.</a> Cell Host Microbe. 4 (4), 337-349 (2008).</li>
<li>Bou Ghanem, N. E., Myers-Morales, T., Jones, G. S., D'Orazio, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+transmission+of+Listeria+monocytogenes+in+mice+via+ingestion+of+contaminated+food%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Oral transmission of Listeria monocytogenes in mice via ingestion of contaminated food.</a> J Vis Exp. (75), e50381(2013).</li>
<li>Lecuit, M., Dramsi, S., Gottardi, C., Fedor-Chaiken, M., Gumbiner, B., Cossart, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+amino+acid+in+E-cadherin+responsible+for+host+specificity+towards+the+human+pathogen+Listeria+monocytogenes%5BTitle%5D)+AND+%22Embo+J%22%5BJournal%5D)">A single amino acid in E-cadherin responsible for host specificity towards the human pathogen Listeria monocytogenes.</a> Embo J. 18 (14), 3956-3963 (1999).</li>
<li>Wollert, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extending+the+host+range+of+Listeria+monocytogenes+by+rational+protein+design%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Extending the host range of Listeria monocytogenes by rational protein design.</a> Cell. 129 (5), 891-902 (2007).</li>
<li>Brunt, L. M., Portnoy, D. A., Unanue, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presentation+of+Listeria+monocytogenes+to+CD8%2B+T+cells+requires+secretion+of+hemolysin+and+intracellular+bacterial+growth%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Presentation of Listeria monocytogenes to CD8+ T cells requires secretion of hemolysin and intracellular bacterial growth.</a> J Immunol. 145 (11), 3540-3546 (1990).</li>
<li>Muraille, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+in+vivo+dendritic+cell+activation+by+live+versus+killed+Listeria+monocytogenes%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Distinct in vivo dendritic cell activation by live versus killed Listeria monocytogenes.</a> Eur J Immunol. 35 (5), 1463-1471 (2005).</li>
<li>Datta, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vaccination+with+irradiated+Listeria+induces+protective+T+cell+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Vaccination with irradiated Listeria induces protective T cell immunity.</a> Immunity. 25 (1), 143-152 (2006).</li>
<li>Geginat, G., Schenk, S., Skoberne, M., Goebel, W., Hof, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+approach+of+direct+ex+vivo+epitope+mapping+identifies+dominant+and+subdominant+CD4+and+CD8+T+cell+epitopes+from+Listeria+monocytogenes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">A novel approach of direct ex vivo epitope mapping identifies dominant and subdominant CD4 and CD8 T cell epitopes from Listeria monocytogenes.</a> J Immunol. 166 (3), 1877-1884 (2001).</li>
<li>Shen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recombinant+Listeria+monocytogenes+as+a+live+vaccine+vehicle+for+the+induction+of+protective+anti-viral+cell-mediated+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Recombinant Listeria monocytogenes as a live vaccine vehicle for the induction of protective anti-viral cell-mediated immunity.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 92 (9), 3987-3991 (1995).</li>
<li>Foulds, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutting+edge%3A+CD4+and+CD8+T+cells+are+intrinsically+different+in+their+proliferative+responses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Cutting edge: CD4 and CD8 T cells are intrinsically different in their proliferative responses.</a> J Immunol. 168 (4), 1528-1532 (2002).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten om bekend te maken.

Hier beschrijven we een protocol van hoe een eenvoudige experimentele besmetting uit te voeren met de EGD stam van L. monocytogenes 25 in mannelijke of vrouwelijke C57BL / 6J muizen. Dit protocol werd opgezet met het oog op het bestuderen van het effect van een unieke chemische IS001 IFN-γ productie door aangeboren en adaptieve lymfocyten in vivo 31. Door het monitoren bacteriële verwijdering en overleving na infectie werden inzichten in hoe deze veranderingen in IFN-γ beïnvloed v...

IFN-γ is een cytokine die cruciaal is voor het mediëren van immuniteit tegen intracellulaire pathogenen en voor het regelen tumorgroei 5. Het belang van deze cytokine in bacteriële resistentie blijkt uit de observatie dat de mens met mutaties in de IFN-γ signaalweg zijn zeer gevoelig voor infectie met mycobacteriën en Salmonella 6. Evenzo muizen die zowel IFN-γ of IFN-γ receptor vertonen defecten in weerstand tegen mycobacteriën 7-9 en andere intracellulaire pathogenen waaronder L. monocytogenes 10,11, Leishmania major 12, Salmonella typhimurium 13 en 11 bepaalde virussen. Naast bestrijding pathogenen, IFN-γ speelt een cruciale rol in gastheer-afweer tegen tumoren 14. Hoewel hogere productie van IFN-γ gunstig in verband met infectie of kanker is langdurige productie van dit cytokine verbonden to de ontwikkeling van systemische auto-immuniteit 15-17 en de versnelling van diabetes type I in de niet-obese diabetische muismodel 18. De belangrijkste bronnen van IFN-γ omvatten NK-cellen, NKT-cellen, γδ T-cellen, T helper 1 (Th1) cellen en cytotoxische T-lymfocyten (CTL) 5,19,20. IFN-γ verhoogt zowel aangeboren als adaptieve immuniteit door: (1) opreguleren major histocompatibility complex (MHC) klasse I en II expressie, (2) het verhogen van de expressie van co-stimulatoire moleculen op antigeen presenterende cellen, (3) verbetering macrofaag fagocytose en de productie van pro-inflammatoire cytokines en microbiële factoren (bijvoorbeeld stikstofoxide en reactieve zuurstofsoorten), (4) het bevorderen van de differentiatie van naïeve CD4 + T-cellen in Th1 effectorcellen, (5) het bevorderen antilichaamklasse omschakeling immunoglobuline ( ig) 2a en IgG3 (in muizen), (6) het induceren van de productie van chemokinen immuuncellen rekruteren naar sites infection, en (7) verbetering van NK-cellen en CTL-reacties 5,19. Gezien het grote belang van IFN-γ in de gastheer respons op pathogenen en tumoren is recombinant IFN-γ getest voor de behandeling van verschillende infecties en maligniteiten (besproken in 19). Vanwege systemische toediening van IFN-γ of Th1 bevorderen cytokine interleukine-12 (IL-12) is geassocieerd met bijwerkingen en dosis-gerelateerde toxiciteit 19,21 is er belangstelling voor de ontwikkeling van alternatieve strategieën voor IFN-γ-productie door verhogen immuuncellen. Ontwikkeling van nieuwe biologische middelen en kleine moleculen nodig vivo screening hulpmiddelen om te testen of dergelijke middelen verhogen IFN-γ productie tijdens een immuunrespons en of dit neer zinvolle biologische effecten, zoals toename in overleving van dieren. Experimentele infectie van muizen met de gram-positieve bacterie L. monocytogenes is een instrumentale model geweestontcijferen van de rol van IFN-γ in gastheer-immuniteit tegen intracellulaire pathogenen 1,22. Infectie van muizen met het pathogeen intraveneus of intraperitoneaal (ip) leidt tot de snelle verspreiding van de bacteriën aan de milt en lever, waar ze raken geïnternaliseerd door macrofagen en hepatocyten met piek bacteriële belasting in de milt die tussen 3 en 4 dagen na de infectie 1,3,22. Productie van IFN-γ NK-cellen is belangrijk voor macrofaagactivering en vroege resistentie tegen het pathogeen 3; echter bij hoge infectieuze doses productie van IFN-γ kan ook schadelijk pathogeen speling 23 zijn. NKT cellen zijn ook een bron van IFN-γ in de milt en lever tijdens de vroege beheersing van pathogenen 2,24 en deze productie is aangetoond dat amplificeren IFN-γ productie door andere celtypen, waaronder NK-cellen 2. Anderzijds, later werkende adaptieve T-lymfocyten, CD8 + T-cellen in partiname op, zijn belangrijk voor het bemiddelen van de goedkeuring van de ziekteverwekker en bescherming tegen herinfectie 1,4,22. Deze infectie model voor onderzoekers om een aantal redenen (besproken in 1) is. Eerste infectie met het pathogeen is zeer reproduceerbaar en induceert een sterke Th1 en cellulaire immuunrespons. Anderzijds in subletale infecties, bacteriële verontreiniging wordt geconcentreerd in de lever en milt die gemakkelijk kan worden gemeten. Ten derde kan de ziekteverwekker veilig worden behandeld onder Biosafety Level 2 (BSL2) omstandigheden. Ten vierde, het organisme en de immuunrespons die wordt gegenereerd zijn uitgebreid gekarakteriseerd. Tenslotte zijn verschillende mutant en genetisch gemodificeerde stammen ontwikkeld die beschikbaar zijn voor gebruik. Hier beschreven is een eenvoudig protocol voor inoculatie van C57BL / 6J muizen met de EGD stam van L. monocytogenes en 25 voor het meten van IFN - γ reresponsies door NK, NKT en adaptieve lymfocyten na infectie. Ook beschreven is hoe bacteriële verontreiniging in de milt en lever meten nadat subletale infectie en overleving studies na infectie uit te voeren met een gewijzigde LD 50 dosis van de ziekteverwekker. Tenslotte zijn representatieve gegevens weergegeven hoe dit protocol kan worden gebruikt om het effect van nieuwe behandelingen IFN-γ reacties en muis overleving screenen van L. monocytogenes infectie.

<table><tbody><tr><td>Brain Heart Infusion Broth, Modified</td><td>BD</td><td>299070</td><td>elke merk zou geschikt moeten zijn</td></tr><tr><td>Agar</td><td>BD</td><td>214010</td><td>elke merk zou geschikt moeten zijn</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>X100</td><td>elke merk zou geschikt moeten zijn</td></tr><tr><td>1x PBS</td><td>Sigma</td><td>D8537</td><td>elke merk zou geschikt moeten zijn</td></tr><tr><td>TissueLyser II</td><td>Qiagen</td><td>85300</td><td>elke merk zou geschikt moeten zijn</td></tr><tr><td>Ammonium Chloride (NH3Cl)</td><td></td><td></td><td>elke merk zou geschikt moeten zijn</td></tr><tr><td>KHCO3</td><td></td><td></td><td>elke merk zou geschikt moeten zijn</td></tr><tr><td>Na2EDTA</td><td></td><td></td><td>elke merk zou geschikt moeten zijn</td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>Gibco</td><td>22400089</td><td>elke merk zou geschikt moeten zijn</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>12483</td><td>Voor gebruik, inactief maken door verhitting op 56 &deg;C gedurende 30 min</td></tr><tr><td>L-glutamine</td><td>Gibco</td><td>25030</td><td>elke merk zou geschikt moeten zijn</td></tr><tr><td>Non-essential amino acids</td><td>Gibco</td><td>11140</td><td>elke merk zou geschikt moeten zijn</td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin</td><td>Gibco</td><td>15140</td><td>elke merk zou geschikt moeten zijn</td></tr><tr><td>GolgiStop Protein Transport Inhibitor (containing Monensin)</td><td>BD</td><td>554724</td><td>Gebruik 4 &mu;l in 6 ml celcultuur</td></tr><tr><td>16% Paraformaldehye</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>15710</td><td>Verdun tot 4% PFA in ddH2O of 1x PBS</td></tr><tr><td>10x Perm/Wash buffer</td><td>BD</td><td>554723</td><td>Verdun 1x in ddH2O</td></tr><tr><td>Fc block, Anti-Mouse CD16/CD32 Purified</td><td>eBioscience</td><td>14-0161</td><td>Verdun 1:50</td></tr><tr><td>Fixable Viability Dye eFluor 506</td><td>eBioscience</td><td>65-0866</td><td>Verdun 1:1.000 (we hebben ook gebruik gemaakt van vitaliteitskleuren van Molecular Probes)</td></tr><tr><td>anti-Mouse CD4-PE-Cy5 (GK1.5)</td><td>eBioscience</td><td>15-0041</td><td>De fabrikant raadt een bepaalde testgrootte aan; deze moet echter worden getitreerd voor gebruik.</td></tr><tr><td>anti-Mouse CD8-FITC (53-6.7)</td><td>eBioscience</td><td>11-0081</td><td>De fabrikant raadt een bepaalde testgrootte aan; deze moet echter worden getitreerd voor gebruik.</td></tr><tr><td>PBS57/mCD1d tetramer-APC</td><td>NIH Tetramer Core Facility</td><td>N/A</td><td>Ontvangen als een geschenk van de faciliteit</td></tr><tr><td>anti-Mouse TCR&beta;-PE-Cy7 (H56-597)</td><td>eBioscience</td><td>25-5961</td><td>De fabrikant raadt een bepaalde testgrootte aan; deze moet echter worden getitreerd voor gebruik.</td></tr><tr><td>anti-Mouse NKp46-APC-eFluor780 (29A1.4)</td><td>eBioscience</td><td>47-3351</td><td>De fabrikant raadt een bepaalde testgrootte aan; deze moet echter worden getitreerd voor gebruik.</td></tr><tr><td>anti-Mouse CD45 PE-Cyanine7 (30-F11)</td><td>eBioscience</td><td>25-0451</td><td>De fabrikant raadt een bepaalde testgrootte aan; deze moet echter worden getitreerd voor gebruik.</td></tr><tr><td>anti-Mouse IFN gamma-PE (XMG1.2)</td><td>eBioscience</td><td>12-7311</td><td>De fabrikant raadt een bepaalde testgrootte aan; deze moet echter worden getitreerd voor gebruik.</td></tr><tr><td>OneComp eBeads</td><td>eBioscience</td><td>01-1111</td><td>Gebruik een druppel per kleuring</td></tr><tr><td>Mouse IFN gamma ELISA kit</td><td>eBioscience</td><td>88-7314</td><td>Gebruikt voor het meten van het interferon gamma in het cultuursupernatant</td></tr><tr><td>50 ml geventileerde buizen voor cultuur</td><td></td><td></td><td>Gebruikt voor het kweken van de bacteriën, elk merk zou geschikt moeten zijn</td></tr><tr><td>1,5 ml microcentrifugebuizen</td><td></td><td></td><td>elke merk zou geschikt moeten zijn</td></tr><tr><td>bacteriële petrischalen</td><td></td><td></td><td>elke merk zou geschikt moeten zijn</td></tr><tr><td>2 ml cryobuisjes</td><td></td><td></td><td>elke merk zou geschikt moeten zijn</td></tr><tr><td>UV-spectrometer</td><td></td><td></td><td>elke merk zou geschikt moeten zijn</td></tr><tr><td>veiligheidstechnisch ontworpen naalden</td><td></td><td></td><td>elke merk zou geschikt moeten zijn</td></tr><tr><td>C57BL/6J</td><td>Jackson laboratories</td><td>Stock#000664</td><td>Bestel voor aankomst op 7 weken</td></tr><tr><td>Bleach</td><td></td><td></td><td>Voor ontsmetting</td></tr><tr><td>70% Ethanol</td><td></td><td></td><td>Voor ontsmetting</td></tr><tr><td>Glaspebbeltjes</td><td></td><td></td><td>elke merk zou geschikt moeten zijn</td></tr><tr><td>Centrifuge</td><td></td><td></td><td>rotor, emmers, emmerdeksels.</td></tr><tr><td>Microcentrifuge</td><td></td><td></td><td>elke merk zou geschikt moeten zijn</td></tr><tr><td>Steriele Glycerol</td><td></td><td></td><td>elke merk zou geschikt moeten zijn</td></tr><tr><td>Pipettips</td><td></td><td></td><td>elke merk zou geschikt moeten zijn</td></tr><tr><td>Pipet</td><td></td><td></td><td>elke merk zou geschikt moeten zijn</td></tr><tr><td>Chirurgische instrumenten</td><td></td><td></td><td>elke merk zou geschikt moeten zijn</td></tr><tr><td>70 micron zeefjes</td><td></td><td></td><td>elke merk zou geschikt moeten zijn</td></tr><tr><td>3 ml injectiespuit</td><td></td><td></td><td>elke merk zou geschikt moeten zijn</td></tr><tr><td>Pipetpistool</td><td></td><td></td><td>elke merk zou geschikt moeten zijn</td></tr><tr><td>Filtratie-eenheden</td><td></td><td></td><td>elke merk zou geschikt moeten zijn</td></tr><tr><td>Trypanblauw</td><td></td><td></td><td>Verdun 1 op 9 in ddH2O, elke merk zou geschikt moeten zijn</td></tr><tr><td>Hemocytometers</td><td></td><td></td><td>elke merk zou geschikt moeten zijn</td></tr><tr><td>Platen met ronde bodem</td><td></td><td></td><td>elke merk zou geschikt moeten zijn</td></tr><tr><td>FACs-buizen</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-959-5</td><td></td></tr><tr><td>BD LSR II</td><td>BD</td><td></td><td>Elke flowcytometer kan worden gebruikt voor acquisitie die een geschikte laserconfiguratie en filterset heeft om de fluorochormen te onderscheiden</td></tr><tr><td>Flowjo-software</td><td>Treestar

experimentele infectie met<em&gt; listeria monocytogenes</em&gt; als een model voor de studie host interferon-γ responses

Experimental Infection with Listeria monocytogenes as a Model for Studying Host Interferon-&#947; Responses

L. monocytogenes is een gram-positieve bacterie die een oorzaak van voedsel overgedragen ziekte bij mensen. Experimentele infectie van muizen met deze ziekteverwekker zeer informatief over de rol van het aangeboren en adaptieve immuunsysteem cellen en specifieke cytokinen in gastheer immuniteit tegen intracellulaire pathogenen zijn. Productie van IFN-γ door aangeboren cellen tijdens subletale infectie met L. monocytogenes is belangrijk voor het activeren van macrofagen en snelle bestrijding van het pathogeen 1-3. Bovendien, IFN-γ productie door adaptieve geheugen lymfocyten is belangrijk voor het vullen van de activering van het aangeboren cellen na 4 herinfectie. L. monocytogenes infectie model vormt dus een groot hulpmiddel voor het onderzoeken of er nieuwe therapieën die zijn ontworpen om IFN-γ verhogen van invloed zijn op IFN-γ responsen in vivo en zijn productieve biologische effecten zoals het verhogen van bacteriële verwijdering en overleving verbeteren muis vaninfectie. Hier beschreven is een eenvoudig protocol voor hoe intraperitoneale infectie van C57BL / 6J muizen met de EGD stam van L. monocytogenes te voeren en IFN-γ productie door NK-cellen, NKT-cellen en adaptieve lymfocyten door flowcytometrie gemeten. Bovendien worden procedures beschreven: (1) groeien en voorbereiden van de bacteriën voor inoculatie (2) meten bacteriële verontreiniging in de milt en lever, en (3) overleving maatregel dier eindpunten. Representatieve gegevens worden ook verschaft om te illustreren hoe deze infectie model kan worden gebruikt om het effect van specifieke middelen die IFN-γ reacties op L. monocytogenes en overleving van muizen uit deze infectie te testen.

Figuur 3 toont enkele typische flowcytometrie kleuring van IFN-γ in milt NK en NKT cellen op 24 uur na infectie met 10 5 CFU van het pathogeen. Deze figuur illustreert ook de gating strategie voor de kleuring paneel in Tabel 2 beschreven. Figuur 4 toont enkele representatieve gegevens die in een experiment waarbij mannelijke muizen werden behandeld met de PPARa antagonist IS001 of dragercontrole verkregen, geïnfecteerd met 10 ...

Dit protocol beschrijft het enten van C57BL / 6J muizen met de EGD stam van Listeria monocytogenes (L. monocytogenes) en interferon-γ (IFN-γ) responsen door natuurlijke killer (NK) cellen, natuurlijke killercellen (NKT) cellen te meten, en adaptieve T-lymfocyten na de infectie. Dit protocol beschrijft ook hoe om te overleven onderzoek bij muizen na infectie met een aangepaste LD 50 dosis van de ziekteverwekker.

Experimentele infectie met<em&gt; Listeria monocytogenes</em&gt; Als een model voor de studie Host Interferon-γ Responses

L. monocytogenes is a gram-positive bacterium that is a cause of food borne disease in humans. Experimental infection of mice with this pathogen has been ...

De algemene doelen van dit protocol zijn het kweken van en infecteren van C57 blacksix-muizen met de EGG-stam van listeria monocytogenes en het meten van de bacteriële load, interferon gamma-responsen, en de overleving en respons op infectie door dit pathogeen. Dit protocol kan onderzoekers helpen bij het screenen naar middelen of genen die een impact hebben op interferon gamma-responsen en op de overleving van dieren na een bacteriële infectie. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat deze relatief eenvoudig op te zetten is in het laboratorium.Zelfs voor degenen met weinig ervaring in het kweken van bacteriën. Jennifer Ahn, een promovendus uit mijn laboratorium, zal de procedure ook demonstreren. Begin met het dompelen van een steriele pipetpunt in een op kamertemperatuur ontdooide glycerolstock van de L monocytogenes EGG-stam.Strijk de punt vervolgens onmiddellijk heen en weer over een gedeelte van een brain heart infusion- of BHI-plaat. Dit is de primaire uitstrijk. Draai de plaat 90 graden en trek een nieuwe pipetpunt door de eerste uitstrijk om de stok te verspreiden naar het volgende kwart van de plaat.Dit is de secundaire uitstrijk. Draai vervolgens de plaat en verspreid de secundaire uitstrijk naar een derde kwadrant van de plaat om de tertiaire uitstrijk te maken. Plaats de plaat nu ondersteboven bij 37 degrees celsius voor een incubatie gedurende één nacht.Enkelvoudige uniforme kolonies zouden na 16 tot 24 uur zichtbaar moeten zijn in de laatste set uitstrijkjes. Zodra de kolonies verschijnen, worden 10 milliliters steriele BHI-bouillon in een steriele, geventileerde 50 milliliter buis gedispengeerd en wordt met een steriele pipetpunt één L. monocytogenes-kolonie van de plaat naar de bouillon overgebracht. De geïnoculeerde bouillon wordt gedurende de nacht gekweekt in een orbitale schudincubator bij 37 degrees celsius en 225 rotations per minute, totdat de OD600 gelijk is aan één.Voor de bereiding van het inoculum voor de experimentele L monocytogenes-infectie wordt in een veiligheidskast een buis met BHI-medium geïnoculeerd met 100 µL van de overnight-cultuur. Na een verdere incubatie bij 37 °C, onder schudcondities tot de gewenste OD600 is bereikt, wordt de inhoud van de cultuur overgebracht naar een steriele centrifugebuis voor centrifugatie. Gebruik vervolgens een vacuüm dat is aangesloten op een opvangfles met bleekmiddel om het supernatant af te zuigen.Was de pellet twee keer met PBS onder dezelfde centrifugeringscondities. Resuspendeer de bacteriën na de tweede wasbeurt in PBS en verdun deze tot de juiste concentratie, zodat het gewenste aantal CFU in een volume van 200 microliter aan elke muis kan worden toegediend.Meng vervolgens de suspensie grondig met een steriele pipetpunt om ervoor te zorgen dat de bacteriën homogeen verdeeld zijn. Trek daarna 200 µL inoculum op in een safety-spuit van 1 ml, voorzien van een naald met een gauge van 25. Neem nu een muis in de nek met de niet-dominante hand door de losse huid rond de schouders vast te pakken.Inject vervolgens alle 200 µL van het inoculum in het onderste kwadrant van de buik, net lateraal van de middellijn om de blaas te vermijden, waarbij voor elk dier een nieuwe naald en spuit wordt gebruikt. Om de bacteriële load tijdens de piek van de infectie te meten, worden op dag drie na de infectie de ledematen van een experimenteel dier in rugligging op een dissectieplank gefixeerd. Desinfecteer vervolgens de huid met 70% ethanol.Maak met steriele scharen voor harde weefsels een incisie van de borst naar de liezen. Maak vervolgens een incisie van het midden van de liezen richting elke knie en van het midden van de borst richting elke elleboog. Disseceer het weefsel stomp en klap de huid terug, waarna deze met naalden van 25 gauge wordt vastgezet.Desinfecteer de spierlaag met meer 70 procent ethanol. Maak vervolgens met steriele fijne scharen een incisie in de middellijn van de peritoneumwand. Gebruik een pincet om het xiphoïde proces vast te pakken.Maak incisies in de peritoneale wand, beginnend bij het xiphoïdproces en bewegend naar lateraal aan beide zijden. Volg de ribbenkast tot net onder het diafragma. Hierdoor wordt de lever zichtbaar.Gebruik vervolgens een steriele schaar om een stukje van ongeveer 100 milligram uit één lob te knippen. Plaats het weefsel in een vooraf gewogen 1,5 milliliter microcentrifugebuisje met 0,2 tot 0,3 gram zuurgewassen steriele glasperltjes van 1,5 tot 2 millimeter. Gebruik daarna de pincet om de organen aan de linkerzijde van de peritoneale holte voorzichtig opzij te duwen om de milt zichtbaar te maken.Gebruik de pincet om de milt voorzichtig vast te pakken en snijd het omringende bindweefsel weg om het orgaan uit de peritoneumholte te bevrijden. Plaats de milt in een andere buis dan de lever en transporteer de weefsels naar het laboratorium in een lekvrije container met ijs. Schud de buizen gedurende drie minuten met een bead mill homogenisator bij een frequentie van 30 hertz.Stel vervolgens een tienvoudige verdunningsreeks van de homogenaten op in 0,1 procent Triton X 100 in PBS. Gebruik daarna een steriele spreider om 100 µL van elk verdund homogenaat uit te strijken over een BHI-agarplaat. Plaats de platen vervolgens in een incubator bij 37 °C voor een incubatie gedurende één nacht.Bewaar de platen die tot 300 kolonies per plaat bevatten. Tel de kolonies op elke plaat. Om CD4 te meten in CT8 t-cel interferon gamma-responsen, oogst de milten van muizen die zijn geïnfecteerd met twee tiende tot de vierde CFU van het pathogeen zoals zojuist gedemonstreerd.Verwerk de milten tot één enkele suspensie van rode bloedcellen. Resuspendeer het pellet in compleet RPMI-medium met FCS tot een concentratie van 4 × 10⁶ cellen per milliliter. Zaai vervolgens per put één milliliter cellen in een 24-wells plaat, samen met een gelijk volume aan ontdooide, hitte-gedode L. monocytogenes, en plaats de koude culturen in een incubator bij 37 °C.Voeg na 20 uur 0,66 µL per ml proteintransportremmer toe aan de wells. Plaats de plaat vervolgens terug in de incubator. Verzamel vier uur later, in een veiligheidskast, 500 µL van het cultuursupernatans en vries de monsters in bij -80 °C voor de latere meting van interferon gamma via ELISA.Breng de cellen vervolgens over naar één enkele steriele buis van 15 milliliter, waarbij de wells worden gewassen met PBS en het wasmiddel wordt samengevoegd met de verzamelde cellen voor flowcytometrische kleuring en analyse. De piek van de bacteriële belasting treedt twee tot drie dagen na infectie op in de milt. Deze wordt drastisch verminderd door de toevoeging van een PPAR Alpha-antagonist voorafgaand aan de infectie.Zeven dagen na infectie roept de x vivo restimulatie van milt-CD4-positieve en CD8-positieve T-cellen met hitte-gedode pathogenen een positieve interferon gamma-respons op van CD4-positieve en CD8-positieve cellen, zoals gedetecteerd door flowcytometrie. Behandeling met de PPAR alfa-antagonist vóór infectie versterkt de interferon gamma-responsen van CD4- en CD8-cellen. Bovendien verhoogt behandeling met de PPAR alfa-antagonist de overleving na infectie met de LD50-dosis van het pathogeen, wat de geschiktheid van dit model illustreert voor het onderzoeken van de impact van nieuwe geneesmiddelen die interferon gamma-responsen moduleren op de overleving van dieren na infectie.Zodra ze onder de knie zijn, kunnen alle procedures in dit protocol in enkele weken de gewenste gegevens genereren, mits ze correct worden uitgevoerd. De techniek kan verder worden aangepast door muizen te infecteren met stammen van listeria monocytogenes die modelantigenen tot expressie brengen en door het gebruik van MHC-klasse I- en II-tetrameermiddelen die specifiek zijn voor deze antigenen. Hiermee kan de T-celexpansie na infectie worden gemeten.Na de ontwikkeling werd deze techniek een instrumenteel model voor het ontcijferen van de rol van interferon gamma bij de immuniteit van de gastheer tegen intracellulaire pathogenen. Na het bekijken van deze video zou u een goed begrip moeten hebben van hoe u C57 blacksix-muizen moet kweken en infecteren met listeria monocytogenes, en hoe u de bacteriële belasting en de interferon gamma-responsen op de infectie moet meten.Vergeet niet dat werken met listeria monocytogenes gevaarlijk kan zijn voor immuungecompromitteerde personen, zoals zwangere vrouwen, zeer jonge kinderen of ouderen. Daarom mag het pathogeen alleen worden gehanteerd door immuuncompetente personen onder biosafety level two-omstandigheden.

experimental-infection-with-listeria-monocytogenes-as-model-for

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Listeria monocytogenes is een modelorganisme voor het bestuderen van immuunreacties en de genetische gevoeligheid voor bacteriën intracellulaire bij muizen. Deze methode stelt je in staat om bacteriële lading te meten en single-cell suspensies van de lever en de milt van de muizen voor het genereren van FACS-analyse van veranderingen in het immuunsysteem van cellen als gevolg van Listeria-infectie te bepalen.

Het meten van bacteriën en immuunresponsen bij muizen geïnfecteerd met Listeria monocytogenes</em

Source: Seman, B. G., et al. A Neonatal Imaging Model of Gram-Negative Bacterial Sepsis. J. Vis. Exp. (2020)The video demonstrates a neonatal mouse model for studying systemic infection using encapsulated bioluminescent bacteria. Neonatal pups are injected with high- or low-dose bacterial suspensions and returned to their mother for postnatal care. The encapsulated bacteria evade early immune detection, spread systemically, and are visualized over time using luminescence imaging. This model...

Modeling Infection in Neonatal Mice Using Encapsulated Bioluminescent Bacteria

Source: Radulovic, K., et al. Injections of Lipopolysaccharide into Mice to Mimic Entrance of Microbial-derived Products After Intestinal Barrier Breach. J. Vis. Exp. (2018)This video demonstrates a step-by-step procedure for injecting lipopolysaccharide (LPS) into mice intraperitoneally to induce systemic inflammation.

Intraperitoneal Injection of Bacterial Lipopolysaccharide in Mice to Study Systemic Immune Responses

Source: Ahn, J. J., et al., Experimental Infection with Listeria monocytogenes as a Model for Studying Host Interferon-γ Responses. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates the preparation of mouse splenocyte cultures from Listeria monocytogenes-infected mice for downstream cytokine analysis. It includes ex vivo bacteria-derived antigen stimulation and sample processing to study T cell responses.

In Vitro Stimulation of Mouse Splenocytes with Heat-Killed Listeria monocytogenes

This video demonstrates an imaging method to visualize in situ interferon-gamma (IFN-γ) secretion in the mouse spleen. Following bacterial infection and the induction of IFN-γ accumulation inside T cells and natural killer cells, the spleen is harvested from the mouse. Upon obtaining tissue sections, immunostaining is performed to visualize IFN-γ inside the cells.

Assay for the Identification of Interferon-Gamma Secretion in Murine Lymphoid Organs

This video demonstrates the quantification of the infective bacterial load from the perfused mouse brain infected with Listeria monocytogenes.

Assessing Bacterial Colonization in a Mouse Brain following Listeria monocytogenes Infection

Dit document beschrijft een nieuwe werkwijze voor orale infectie van muizen...

Mondelinge transmissie van<em&gt; Listeria monocytogenes</em&gt; In Muizen via inname van besmet voedsel

Listeria monocytogenes is een Gram-positieve bacteriële pathogenen vaak gebruikt als een belangrijk model voor de studie van intracellulaire parasieten. Beeldvorming laat L. monocytogenes infectie fasen in het kader van kleine interfererende RNA schermen maakt de globale studie van cellulaire mechanismen vereist voor bacteriële infectie van target gastheercellen.

Beeldvorming InlC Afscheiding to Cellular Infectie Onderzoek door de bacteriële pathogenen<em&gt; Listeria monocytogenes</em

We beschrijven beide tests in vitro en in vivo infectie die kunnen worden gebruikt voor het analyseren van de activiteiten van host-encoding factoren.

Met behulp van een bacteriële ziekteverwekker sonde voor Cellulair en Organismic niveau Host Reacties

Hier beschrijven we een eenvoudige confocale beeldvormings methode om de in-situ lokalisatie van cellen die het cytokine interferon gamma in Murine secundaire lymfoïde organen afscheidende te visualiseren. Dit protocol kan worden uitgebreid voor de visualisatie van andere cytokines in diverse weefsels.

Beeldvorming van in situ interferon gamma productie in de muis milt na Listeria monocytogenes infectie

Leer experimentele infectie met Listeria monocytogenes in muizen om interferon-gamma-responsen en overleving na bacteriële infectie te meten. Dit model helpt bij het screenen van agentia die de immuniteit beïnvloeden.

Experimentele infectie met

Meer video's verkennen