Name: Bepaling van de Zeta Potentiële via nanodeeltjes Translocation Snelheden door een Tunable Nanopore: Met behulp van DNA-gemodificeerde deeltjes als een voorbeeld (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-10-26T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 42 s
Description: Leer de zetapotentiaal bepalen van DNA-gemodificeerde nanodeeltjes met behulp van TRPS-technologie. Deze methode biedt deeltje-voor-deeltje analyse voor karakterisering van oppervlaktechemie in nanomaterialen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs danken Izon Science Ltd voor hun steun. Het werk werd gesteund door de Europese Commissie voor onderzoek (PCIG11-GA-2012-321836 Nano4Bio).

1. Het maken van de fosfaat gebufferde zoutoplossing met Tween-20 (PBST) Buffer <ol><li> Ontbinden één tablet PBS (0,01 M fosfaatbuffer, 0,0027 M kaliumchloride, 0,137 M natriumchloride, pH 7,4) in 200 ml gedeïoniseerd water (18,2 MQ cm). </li><li> Voeg 100 ul (0,05 (v / v)%) Tween-20 aan de 200 ml bufferoplossing als surfactant. </li></ol> 2. De voorbereiding van de Carboxyl polystyreen Particle Standards <ol><li> Vortex de kalibratie deeltjes gedurende 30 seconden voordat sonicatie gedurende 2 minuten bij 80 watt monodispersiteit van de deeltjes te creëren. </li><li> Verdun de kalibratie deeltjes 1 in 100 tot een concentratie van 1x10 10 deeltjes / ml in PBST buffer en vortex gedurende 30 seconden. </li></ol> 3. Voorbereiden van Streptavidine gecoate deeltjes <ol><li> Vortex de deeltjes gedurende 30 seconden voordat sonicatie gedurende 2 minuten bij 80 Watt monodispersiteit waarborgen. </li><li> Verdun de streptavidine beklede deeltjes 1 in 100 in PBST buffer achieve een resulterende concentratie van 1x10 9 deeltjes / ml en vortex gedurende 30 seconden. Opmerking: Een typische monstervolume is 200 pi. Wanneer bijvoorbeeld vijf onderzoeken DNA concentraties te bereiden 1 ml verdunde streptavidine beklede deeltjes. </li></ol> 4. Bereiding van Oligonucleotiden <ol><li> Reconstitueren oligonucleotiden met gedeïoniseerd water tot een resulterende concentratie van 100 uM. </li></ol> 5. Toevoeging van vangprobe (CP) DNA aan de streptavidine beklede deeltjes <ol><li> Voorafgaand aan DNA binden, vortex streptavidine gecoate deeltjes (200 pi monstervolume) gedurende 30 seconden gevolgd door een 2 minuten sonicatie bij 80 watt. </li><li> Gebaseerd op de bindingscapaciteit van de leverancier (4352 pmol / mg), voeg de juiste concentratie van DNA aan de deeltjes voor resulterende concentraties van 10, 20, 30, 40, 47, 95, 140 en 210 nM DNA. </li><li> Vortex de monsters gedurende 10 seconden en leg ze op een roterend wiel bij kamertemperatuurgedurende 30 minuten om het DNA via een streptavidine-biotine interactie binden aan het deeltjesoppervlak. </li><li> Zodra de capture DNA werd toegevoegd en geïncubeerd met streptavidine beklede deeltjes, het overtollige DNA in oplossing via magnetische scheiding door het plaatsen van de monsters op een magnetische rek voor 30 min. </li><li> Verwijder het supernatant, verzorgen de nieuw gevormde cluster deeltjes dichtste bij de magneet niet te verstoren, en vervangen door hetzelfde volume van nieuwe PBST buffer. </li></ol> 6. Hybridiserende Complementair DNA aan de CP-deeltjes <ol><li> Voeg de vereiste hoeveelheid doel-DNA (meer dan 500 nM) bij het optimaliseren doelwitbindingsgebied bereikt waarborgen. </li><li> Vortex de monsters gedurende 10 sec en plaats op een roterend wiel bij kamertemperatuur gedurende 30 min. </li><li> Zodra de hybridisatie voltooid is, het overtollige target DNA via magnetische scheiding door het plaatsen van de monsters op een magnetische rek voor 30 min. </li><li> Verwijder het supernatant, Zorg ervoor dat u de nieuw gevormde cluster van deeltjes die het dichtst bij de magneet te verstoren, en te vervangen door hetzelfde volume van de nieuwe PBST buffer. </li><li> Herhaal stap 6,1-6,4 voor duplo monsters en plaats deze monsters op een roterend wiel bij kamertemperatuur gedurende 16 uur aan DNA hybridisatie keer te onderzoeken. </li></ol> 7. TRPS Setup <ol><li> Steek de stekker in het instrument in een computer-systeem met software op zijn plaats. </li><li> IJk de eerste stuk met behulp van een schuifmaat. <ol><li> Meet de afstand tussen de buitenzijde van twee parallelle bekken. </li><li> Input in de software door het intikken van de rek in het veld &#39;stretch&#39; in het tabblad &#39;Instrument Settings&#39; en te klikken op &#39;kalibreren stretch&#39; onder het tabblad. </li></ol></li><li> Zijdelings past een polyurethaan nanogaatje membraan van de juiste maatvoering voor analyse op de kaken van de nanogaatje ID-nummer naar boven. Vervolgens strekken de kaken de rek die nodig is voor analyse met behulp vanstretch aanpassingshandvat aan de zijkant van het apparaat. Strek de kaken tussen de 43 en 48 mm. Opmerking: De exacte waarde van de rek bepaald langs aangelegde spanning zodat kalibratie deeltjes blokkades tenminste 0,3 nA groot. Het traject is al ingevoerd in de software in stap 7.2 en zal automatisch aan te passen als de kaken worden uitgerekt. </li><li> Plaats 80 ul van PBST buffer in de onderste vloeistof cel, onder de nanogaatje, zodat er geen luchtbellen aanwezig zijn die de meting kunnen beïnvloeden. Als er luchtbellen te zien, verwijderen en vervangen van de buffer. </li><li> Klik op de bovenste vloeistof cel op zijn plaats en plaats 40 pi buffer erin, weer zodat er geen luchtbellen aanwezig zijn. Indien luchtbellen aanwezig in de bovenste vloeistof cel zijn, verwijder ze door het vervangen van de vloeistof. </li><li> Wanneer een reproduceerbare stroom basislijn is bereikt door het vervangen van de bovenste fluïdumcel met buffer, voeg 40 ul van het monster op de bovenste fluïdumcel en meet de pagina &#39;stkunst &#39;in het tabblad&#39; Data Acquisition &#39;van de software het scherm. Opmerking: De data acquisitie is afgerond met een frequentie van 50 kHz met een blokkade magnitude ondergrens van 0,05 nA, hoewel dit kan worden veranderd met behulp van de software via het tabblad Analyse Data &#39;(onder&#39; Analyse Settings &#39;en&#39; resistief Blokkades) . </li><li> Plaats een kooi van Faraday over de bovenkant van het fluïdum celsysteem elektrische ruis op de metingen te reduceren. </li><li> Gebruik een variabele drukmodule (VPM) een druk of vacuüm toegepast op de monsters. <ol><li> Voor het aanvragen van een externe druk sluit het pijpje in de bovenste vloeistof cel en draai de druk arm en vastklikken (afhankelijk van de vraag of een positieve druk (PRE) of een vacuüm (VAC) zal worden toegepast). </li><li> Toepassen druk in een &quot;cm&quot; of &quot;mm&quot; schaalconstructie volgens de druktrap knop gelegen bovenop de VPM. Druk op de knop omlaag om druk uit te oefenen op de &#39;cm&#39; schaal en trek hem omhoog to toe te passen druk op de &#39;mm&#39; schaal. </li></ol></li></ol> 8. Voorbereiding Monsters voor TRPS Analyse <ol><li> Vortex monsters voor 30 sec en ultrasone trillingen gedurende 2 minuten bij 80 Watt vóór TRPS analyse. </li></ol> 9. Het kalibreren van de Nanopore voor Zeta Analyse <ol><li> Na het plaatsen van 40 ui kalibratie deeltjes (1x10 10 deeltjes / ml) in de bovenste vloeistof cel, compleet een TRPS meting (opstelling als in hoofdstuk 7) op 3 aangelegde spanningen. Verander de spanning door te klikken op de &#39;+&#39; en &#39;-&#39; knoppen op het voltage schaal op het tabblad &#39;Instrument Settings&#39; op de software. </li><li> Controleer of de 3 spanningen terug achtergrond stromingen van ongeveer 140, 110 en 80 nA. Zorg ervoor dat op het middenspanning de kalibratie deeltjes produceren een gemiddelde blokkade magnitude van ten minste 0,3 nA. </li><li> Breng een druk zodat de gemiddelde maximale volle breedte de helft (FWHM) duur van de kalibratie deeltjes ten minste0,15 msec. Doe dit handmatig met de drukarm aan de variabele drukmodule. Select druk (PRE) of vacuüm (VAC) door het draaien van de arm tot het vastklikt in de gewenste positie en overeenkomstige toepassing volgende set-up instructies in stap 7.8.2. Zodra deze voorwaarden zijn bereikt, start de run door te klikken op &#39;start&#39; van de software in het tabblad &#39;Data Acquisition&#39;. </li><li> Voltooi de gerund door in het tabblad &#39;Data Acquisition&#39; op &#39;stop&#39; als ten minste 500 deeltjes zijn gemeten (zie &#39;Particle Count&#39; aan de onderkant van de software het scherm tijdens de meting) en de run is 30 sec overschreden (zie &#39; Run Time &#39;ook naar de onderkant van het scherm). </li><li> Kalibreer het systeem door het invullen van een kalibratie run zoals beschreven elke keer een nieuw nanogaatje wordt geïntroduceerd of voor elke nieuwe dag van de analyse door het invullen stap 9,1-9,4. </li></ol> 10. Het runnen van een steekproef <ol><li> Run de monsters bij de hoogste ofna hoogste spanning als de kalibratie monsters die een vergelijkbare (± 10 nA), indien verschillend, basislijn stroom. <ol><li> Zodra aan de basislijn stroom bereikt, vervangt de elektrolyt in de bovenste fluïdumcel met 40 pl monster. Wanneer een monster wordt ingebracht, wordt blokkades te zien op het signaal traceren. Start het monster gerund door te klikken op &#39;Start&#39; in het tabblad &#39;Data Acquisition&#39; en een minimum van 500 deeltjes op te nemen (check &#39;Particle Count&#39; gelegen onder het signaal sporen) en zorgen voor de looptijd is een minimum van 30 sec (zie &#39;Run Time &#39;ook gelegen onder het signaal sporen). </li><li> Om de meting te voltooien, klikt u op &#39;stop&#39; in het &#39;Data Acquisition tab&#39; en sla het bestand. </li></ol></li><li> Om het bestand, het invoeren van de file informatie in de volgende indeling op te slaan; &#39;Onderzoek&#39; is de map het bestand wordt opgeslagen in, &#39;Nanopore ID&#39; is het serienummer van de porie wordt gebruikt, &#39;Part #&#39; iis de aard van de poriën (dat wil zeggen, NP150 / NP200), &#39;Sample ID&#39; is de naam van het monster, &quot;Calibration of sample gegevens van of het een kalibratie of monster meting, &#39;verdunning&#39; wordt gebruikt wanneer het monster werd verdund ( type 100 als het monster werd 100-voudig verdund), &quot;Pressure is de uitgeoefende druk op het monster (in cm - zie paragraaf 7.8),&quot; Elektrolyt ID &quot;is de naam van de buffer het monster bereid in, en &#39; Notes &#39;zijn geen persoonlijke opmerkingen over het monster of lopen. </li><li> Tussen elk monster run, was het systeem door het plaatsen van 40 ul van PBST buffer in de bovenste vloeistof cel meerdere malen en het toepassen van verschillende drukken (meestal op -10, -5 cm (vacuüm), en 5 en 10 cm (positieve druk)) tot niet meer blokkade evenementen aanwezig, zodat er geen achtergebleven deeltjes blijven in het systeem waardoor geen kruisbesmetting tussen monsters. Run monsters in drievoud met deze wasstap voltooid tussen elke herhaling monster lopen als well als tussen de verschillende monsters. </li></ol>

<ol><li>Alexander, C. M., Maye, M. M., Dabrowiak, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA-capped+nanoparticles+designed+for+doxorubicin+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Commun%22%5BJournal%5D)">DNA-capped nanoparticles designed for doxorubicin drug delivery.</a> Chem Commun. 47 (12), 3418-3420 (2011).</li>
<li>Billinge, E. R., Platt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aptamer+based+dispersion+assay+using+tunable+resistive+pulse+sensing+%28TRPS%29%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Methods%22%5BJournal%5D)">Aptamer based dispersion assay using tunable resistive pulse sensing (TRPS).</a> Anal Methods. 7 (20), 8534-8538 (2015).</li>
<li>Bulyk, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+Binding+Microarrays+for+the+Characterization+of+Protein-DNA+Interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Biochem+Eng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Protein Binding Microarrays for the Characterization of Protein-DNA Interactions.</a> Adv Biochem Eng Biotechnol. 104, 65-85 (2007).</li>
<li>Platt, M., Rowe, W., Knowles, J., Day, P. J., Kell, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+aptamer+sequence+activity+relationships%5BTitle%5D)+AND+%22Integr+Biol%22%5BJournal%5D)">Analysis of aptamer sequence activity relationships.</a> Integr Biol. 1 (1), 116-122 (2009).</li>
<li>Ruiz-Hernández, E., Baeza, A., Vallet-Regí, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smart+Drug+Delivery+through+DNA%2FMagnetic+Nanoparticle+Gates%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Smart Drug Delivery through DNA/Magnetic Nanoparticle Gates.</a> ACS Nano. 5 (2), 1259-1266 (2011).</li>
<li>Murdock, R. C., Braydich-stolle, L., Schrand, A. M., Schlager, J. J., Hussain, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+Nanomaterial+Dispersion+in+Solution+Prior+to+In+Vitro+Exposure+Using+Dynamic+Light+Scattering+Technique%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Sci%22%5BJournal%5D)">Characterization of Nanomaterial Dispersion in Solution Prior to In Vitro Exposure Using Dynamic Light Scattering Technique.</a> Toxicol Sci. 101 (2), 239-253 (2008).</li>
<li>Hupfield, S., Holsaeter, A. M., Skar, M., Frantzen, C. B., Brandl, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liposome+size+analysis+by+dynamic%2Fstatic+light+scattering+upon+size+exclusion-%2Ffield+flow+fractionation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nanosci+Nanotechnol%22%5BJournal%5D)">Liposome size analysis by dynamic/static light scattering upon size exclusion-/field flow fractionation.</a> J Nanosci Nanotechnol. 6 (7), 3025-3031 (2006).</li>
<li>Roberts, G. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tunable+pores+for+measuring+concentrations+of+synthetic+and+biological+nanoparticle+dispersions%5BTitle%5D)+AND+%22Biosens+Bioelectron%22%5BJournal%5D)">Tunable pores for measuring concentrations of synthetic and biological nanoparticle dispersions.</a> Biosens Bioelectron. 31 (1), 17-25 (2012).</li>
<li>Roberts, G. S., Kozak, D., Anderson, W., Broom, M. F., Vogel, R., Trau, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tunable+nano%2Fmicropores+for+particle+detection+and+discrimination%3A+scanning+ion+occlusion+spectroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Tunable nano/micropores for particle detection and discrimination: scanning ion occlusion spectroscopy.</a> Small. 6 (23), 2653-2658 (2010).</li>
<li>Vogel, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+sizing+of+nano%2Fmicroparticles+with+a+tunable+elastomeric+pore+sensor%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Quantitative sizing of nano/microparticles with a tunable elastomeric pore sensor.</a> Anal Chem. 83 (9), 3499-3506 (2011).</li>
<li>Booth, M. A., Vogel, R., Curran, J. M., Harbison, S., Travas-Sejdic, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+target-probe+oligonucleotide+hybridization+using+synthetic+nanopore+resistive+pulse+sensing%5BTitle%5D)+AND+%22Biosens+Bioelectron%22%5BJournal%5D)">Detection of target-probe oligonucleotide hybridization using synthetic nanopore resistive pulse sensing.</a> Biosens Bioelectron. 45, 136-140 (2013).</li>
<li>Kozak, D., Anderson, W., Vogel, R., Chen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+size+and+%CE%B6-potential+measurements+of+individual+nanoparticles+in+dispersion+using+size-tunable+pore+sensors%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Simultaneous size and ζ-potential measurements of individual nanoparticles in dispersion using size-tunable pore sensors.</a> ACS Nano. 6 (8), 6990-6997 (2012).</li>
<li>Kozak, D., Anderson, W., Vogel, R., Trau, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+Resistive+Pulse+Sensors%3A+Devices+bridging+the+void+between+molecular+and+microscopic+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Today%22%5BJournal%5D)">Advances in Resistive Pulse Sensors: Devices bridging the void between molecular and microscopic detection.</a> Nano Today. 6 (5), 531-545 (2011).</li>
<li>Weatherall, E., Willmott, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+tunable+resistive+pulse+sensing%5BTitle%5D)+AND+%22Analyst%22%5BJournal%5D)">Applications of tunable resistive pulse sensing.</a> Analyst. 140, 3318-3334 (2015).</li>
<li>Willmott, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+tunable+nanopore+blockade+rates+to+investigate+colloidal+dispersions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Phys+Condens+Matter%22%5BJournal%5D)">Use of tunable nanopore blockade rates to investigate colloidal dispersions.</a> J Phys Condens Matter. 22 (45), 454116(2010).</li>
<li>Blundell, E. L. C. J., Mayne, L. J., Billinge, E. R., Platt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emergence+of+tunable+resistive+pulse+sensing+as+a+biosensor%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Methods%22%5BJournal%5D)">Emergence of tunable resistive pulse sensing as a biosensor.</a> Anal Methods. 7, 7055-7066 (2015).</li>
<li>Platt, M., Willmott, G. R., Lee, G. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resistive+Pulse+Sensing+of+Analyte-Induced+Multicomponent+Rod+Aggregation+Using+Tunable+Pores%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Resistive Pulse Sensing of Analyte-Induced Multicomponent Rod Aggregation Using Tunable Pores.</a> Small. 8 (15), 2436-2444 (2012).</li>
<li>Vogel, R., Anderson, W., Eldridge, J., Glossop, B., Willmott, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+variable+pressure+method+for+characterizing+nanoparticle+surface+charge+using+pore+sensors%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">A variable pressure method for characterizing nanoparticle surface charge using pore sensors.</a> Anal Chem. 84 (7), 3125-3131 (2012).</li>
<li>Blundell, E. L. C. J., Vogel, R., Platt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Particle-by-Particle+Charge+Analysis+of+DNA-Modified+Nanoparticles+Using+Tunable+Resistive+Pulse+Sensing%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Particle-by-Particle Charge Analysis of DNA-Modified Nanoparticles Using Tunable Resistive Pulse Sensing.</a> Langmuir. 32 (4), (2016).</li>
<li>Hunter, R. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHunter%2C+RJ+%22Zeta+Potential+in+Colloid+Science%3A+Principles+and+Applications%22">Zeta Potential in Colloid Science: Principles and Applications</a>. , Academic Press. New York. (1981).</li>
<li>Arjmandi, N., Van Roy, W., Lagae, L., Borghs, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+the+electric+charge+and+zeta+potential+of+nanometer-sized+objects+using+pyramidal-shaped+nanopores%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Measuring the electric charge and zeta potential of nanometer-sized objects using pyramidal-shaped nanopores.</a> Anal Chem. 84 (20), 8490-8496 (2012).</li>
<li>Bacri, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+colloids+in+single+solid-state+nanopores%5BTitle%5D)+AND+%22J+Phys+Chem+B%22%5BJournal%5D)">Dynamics of colloids in single solid-state nanopores.</a> J Phys Chem B. 115 (12), 2890-2898 (2011).</li>
<li>Cabello-Aguilar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+polymer+nanoparticles+through+a+single+artificial+nanopore+with+a+high-aspect-ratio%5BTitle%5D)+AND+%22Soft+Matter%22%5BJournal%5D)">Dynamics of polymer nanoparticles through a single artificial nanopore with a high-aspect-ratio.</a> Soft Matter. 10 (42), 8413-8419 (2014).</li>
<li>Billinge, E. R., Muzard, J., Platt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tunable+resistive+pulse+sensing+as+a+tool+to+monitor+analyte+induced+particle+aggregation%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomater+Nanosci%22%5BJournal%5D)">Tunable resistive pulse sensing as a tool to monitor analyte induced particle aggregation.</a> Nanomater Nanosci. 1 (1), 11(2013).</li>
<li>Li, J., Fan, C., Pei, H., Shi, J., Huang, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smart+Drug+Delivery+Nanocarriers+with+Self-Assembled+DNA+Nanostructures%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Mater%22%5BJournal%5D)">Smart Drug Delivery Nanocarriers with Self-Assembled DNA Nanostructures.</a> Adv Mater. 25 (32), 4386-4396 (2013).</li>
<li>Billinge, E. R., Broom, M., Platt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+aptamer-protein+interactions+using+tunable+resistive+pulse+sensing%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Monitoring aptamer-protein interactions using tunable resistive pulse sensing.</a> Anal Chem. 86 (2), 1030-1037 (2014).</li>
<li>Gold, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aptamer-Based+Multiplexed+Proteomic+Technology+for+Biomarker+Discovery%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Aptamer-Based Multiplexed Proteomic Technology for Biomarker Discovery.</a> PLoS One. 5 (12), e15004(2010).</li>
<li>Park, S. -J., Taton, T. A., Mirkin, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Array-Based+Electrical+Detection+of+DNA+with+Nanoparticle+Probes%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Array-Based Electrical Detection of DNA with Nanoparticle Probes.</a> Science. 295 (5559), 1503-1506 (2002).</li>
</ol>

ELCJB wordt ondersteund door Izon Science Ltd.

<html> De berekening van de zeta potentiaal gebruikt kalibratie gebaseerde methode gerelateerd werk door Arjmandi et al. 21. De duur van de translocatie deeltjes zijn bij het doorkruisen een nanopore wordt gemeten als een functie van aangelegde spanning, met een gemiddelde elektrisch veld en deeltjessnelheden op het geheel van een regelmatige conische porie. De elektroforetische mobiliteit is de afgeleide van 1 / T (waarin T de duur blokkade) ten opzichte van spanning, vermenigvuldigd met het kwadraat...

Gefunctionaliseerde nanodeeltjes worden steeds populairder als biosensoren zowel medische en milieu velden. Het vermogen om een nanodeeltje de oppervlaktechemie te veranderen, met DNA, bijvoorbeeld, is nuttig voor gerichte geneesmiddelafgiftesystemen 1 en controle DNA-eiwit interacties 2-4 blijkt. Een steeds vaker voorkomende nanodeeltjes pand wordt gebruikt in bioassays en in de levering van geneesmiddelen is superparamagnetisme 5. Superparamagnetische deeltjes (POD) zijn zeer bruikbaar bij het identificeren en verwijderen van specifieke analyten uit complexe mengsels en kan dit met de eenvoudige bediening van een enkele magneet. De verwijderde de analyt gebonden deeltjes kunnen worden gekarakteriseerd en geanalyseerd geschikt voor het doel. Vorige methoden voor de detectie en karakterisering van nanodeeltjes omvatten optische technieken zoals dynamische lichtverstrooiing (DLS), alias fotoncorrelatiespectroscopie. Hoewel een high throughput techniek DLS beperkt tot zijnde een gemiddelde gebaseerde techniek en bij de analyse van multimodale monsters zonder toevoeging van gespecialiseerde software, zal de grotere deeltjes een meer dominante signaal te produceren, waardoor sommige van de kleinere deeltjes volledig onopgemerkt 6,7. Particle-by-deeltjes karakterisering technieken zijn daarom veel gunstiger voor nanodeeltjes en gefunctionaliseerde nanodeeltjes te analyseren. RPS gebaseerde technologieën zijn gebaseerd op het aanleggen van een elektrisch veld aan een monster en controle op de transportmechanisme van de deeltjes door een synthetisch of biologisch nanopore. Een relatief recente nanodeeltjes detectie en typering techniek op basis van RPS is instelbaar resistieve pulse sensing (TRPS) 8-16. TRPS Twee-elektrodensysteem gescheiden door een elastomeer, afstembare membraan poriën. Afstembaar porie werkwijze maakt analyten verschillende vorm 17 en afmetingen te meten via de transpoort mechanismen door de porie. Afstembare poriën zijn eerder gebruikt voor de detectie van kleine deeltjes (70-95 nm diameter) produceren vergelijkbare resultaten met andere technieken zoals transmissie elektronen spectroscopie (TEM) 10. Wanneer een elektrisch veld wordt toegepast, wordt een ionenstroom waargenomen en als deeltjes / moleculen door de poriën passeren, zij tijdelijk de poriën blokkeren, waardoor een verlaging van de stroom die kan worden gedefinieerd als een &quot;blokkade event. Elke blokkade gebeurtenis representeert een enkel deeltje zodat elk deeltje in een monster afzonderlijk kenmerk kan worden gebaseerd op de blokkade magnitude, Δ <img alt="vergelijking 1" src="/files/ftp_upload/54577/54577eq1.jpg" /> En volle breedte half maximum, FWHM, evenals andere eigenschappen blokkade. Het analyseren van individuele deeltjes als ze door een nanogaatje passeren is voordelig voor multimodaal monsters als TRPS succesvol en effectief een bereik kan onderscheiden van deeltjesgrootte AmonGST een enkel monster. Tunable resistieve pulse sensing voltooit maat 10, zetapotentiaal 12,18 en concentratie 15 metingen tegelijk in een enkele run en kan dus nog differentiëren monsters van soortgelijke, zo niet dezelfde grootte van hun oppervlakte lading 19; een voordeel ten opzichte van alternatieve dimensionering technieken. Zeta potentieel wordt gedefinieerd als de elektrostatische potentiaal op het vlak van afschuiving 20, en wordt berekend uit deeltjessnelheden mocht steken een porie 19. Zeta potentiaal metingen van afzonderlijke geeft dus inzicht in de mechanismen translocatie en het gedrag van nanodeeltjes systemen in oplossing waardevolle informatie voor de toekomst van nanodeeltjes test ontwerpen voor verschillende toepassingen. Deeltje per deeltje analyse van dergelijke aard maakt ook de verspreiding en verspreiding van zeta potentiaal waarden bij een steekproef worden onderzocht, waardoor meer informatie on reactiekinetiek (enkelstrengs aan dubbelstrengs DNA, bijvoorbeeld) en deeltjes stabiliteiten in oplossing te bereiken. We beschrijven een techniek die detecteert en kenmerkend zowel ongemodificeerde en gemodificeerde DNA-SPP oppervlakken. De hierin beschreven protocol is toepasbaar op een reeks van anorganische en biologische nanodeeltjes, maar we tonen de procedure via DNA-gemodificeerde oppervlakken vanwege hun breed toepassingsgebied. De techniek kan de gebruiker onderscheid tussen enkelstrengs en dubbelstrengs DNA doelen op een nanodeeltje oppervlak, gebaseerd op deeltjes translocatie snelheden door een poriënsysteem en zo hun zeta potentieel.

<table><tbody><tr><td>Fosfaat gebufferde Saline (PBS)</td><td>Sigma Aldrich, UK</td><td>P4417</td><td>1 tablet opgelost in 200&nbsp;ml gedeïoniseerd water om bufferoplossing te maken.</td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Sigma Aldrich, UK</td><td>P1379</td><td>0,05% (v/v) in PBS-buffer als oppervlakteactieve stof</td></tr><tr><td>Carboxyl polystyreen nanodeeltjes</td><td>Bangs Laboratories, VS</td><td>CPC200</td><td>Nominale diameter van 220&nbsp;nm, ruwe concentratie van 1 x 1012 deeltjes/ml, specifieke oppervlaktelading van 86 &micro;eq/g (gelijkwaardig aan een oppervlakteladingsdichtheid van 3,2 x 1019 C/nm2.</td></tr><tr><td>Streptavidine gecoate nanodeeltjes</td><td>Ademtech, Frankrijk</td><td>3121</td><td>Batch had een bindingscapaciteit van 4.352 pmol/mg (188 nM theoretische DNA-bindingscapaciteit) bij een ruwe concentratie van 1,1 x 1011 deeltjes/ml.</td></tr><tr><td>Biotinyleerde oligonucleotiden</td><td>Sigma Aldrich, UK</td><td>VC00001</td><td>Leverancier specificatie: Reverse Phase 1-zuivering (0,05 schaal); Biotine modificatie aan 3' einde; Gelyofiliseerd poeder gereconstitueerd tot 100&nbsp;&micro;M met behulp van gedeïoniseerd water, en verdund zoals vereist. Sequences: CP 5'ATGGTTAAACCTCACTAC
GCGTGGC[Btn]3'</td></tr><tr><td>Standaard olignonucleotiden</td><td>Sigma Aldrich, UK</td><td>VC00001</td><td>Leverancier specificatie: Reverse Phase 1-zuivering (0,05 schaal); Gelyofiliseerd poeder gereconstitueerd tot 100 &micro;M met behulp van gedeïoniseerd water, en verdund zoals vereist. Sequences van DNA-doelen: Volledig complementair - 5'GCCACGCGTAGTGA
GGTTTAACCAT3', Midden binding - 5'GTAGTGAGGT3', Eind binding - 5'GTTTAACCAT3', Gedeeltelijk complementair overhangend - 5'GTGAGGTTTAACCAT
TTTTTTTTTTTTTTT3'.</td></tr><tr><td>Izon qNano</td><td>Izon Science, NZ</td><td></td><td>Inherente druk op het systeem van 47&nbsp;Pa</td></tr><tr><td>Izon Variabele Drukmodule (VPM)</td><td>Izon Science, NZ</td><td></td><td>Elke 'cm' druk is gelijk aan ongeveer 100 Pa.</td></tr><tr><td>Polyurethaan nanopore membranen</td><td>Izon Science, NZ</td><td>NP150</td><td>Analyt groottebereik 60-480 nm, poriediameter berekend op 799 nm bij een rek van 45 mm.&nbsp;</td></tr><tr><td>Magrack 6</td><td>GE Healthcare, UK</td><td>28-9489-64</td><td></td></tr><tr><td>Sonische bad</td><td>Fisher Scientific, UK</td><td>10692353</td><td>80 Watt</td></tr><tr><td>Vortexer</td><td>IKA, Duitsland</td><td>0003365000</td><td></td></tr><tr><td>Roterende wiel&nbsp;</td><td>Labnet International, VS</td><td>H5500-230 V</td><td></td></tr></tbody></table>

bepaling van de zeta potentiële via nanodeeltjes translocation snelheden door een tunable nanopore: met behulp van dna-gemodificeerde deeltjes als een voorbeeld

Determination of Zeta Potential via Nanoparticle Translocation Velocities through a Tunable Nanopore: Using DNA-modified Particles as an Example

Nanopore technologieën, gezamenlijk bekend als resistieve pulssensoren (RPS), worden gebruikt voor het detecteren, kwantificeren en karakteriseren van eiwitten, moleculen en nanodeeltjes. Afstembare resistieve pulse sensing (TRPS) is een relatief recente aanpassing RPT dat een afstembare porie die kunnen worden gewijzigd in real time opgenomen. We gebruiken hier TRPS de translocatie tijden van DNA-gemodificeerde nanodeeltjes bewaken zijn bij het doorkruisen de afstembare porie membraan als functie van de DNA-concentratie en de structuur (dat wil zeggen enkelstrengs aan dubbelstrengs DNA). TRPS is gebaseerd op twee Ag / AgCl-elektroden gescheiden door een elastomeer membraan porie dat een stabiele ionenstroom op een aangelegd elektrisch veld bepaalt. In tegenstelling tot diverse optische gebaseerde deeltjes karakterisering technologieën, kunnen TRPS individuele deeltjes te karakteriseren onder een steekproef bevolking, waardoor voor multimodaal monsters worden geanalyseerd met gemak. Hier tonen we zetapotentiaal metingendeeltje via translocatie snelheden van bekende standaarden en toepassen op analyt translocatie maal monster, hetgeen resulteert in de meting van de zeta-potentiaal van deze analyten. Te verschaffen, om gemiddelde zeta potentiaal waarden worden de monsters allemaal gemeten onder toepassing van een deeltje per deeltje perspectief vertoont meer informatie over een bepaald monster door monster populatieverdelingen bijvoorbeeld. Van een dergelijke, deze methode toont potentieel binnen sensing toepassingen zowel medische en milieugebied voor.

<img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/54577/54577fig1.jpg" /> Figuur 1. Schematische weergave van het proces van zuivering en een magnetische TRPS meting. A) Voorbeeld van magnetische zuivering van het monster te beginnen met een monster dat teveel, ongebonden vangprobe DNA. B) TRP meet bijvoorbeeld i) Deeltjes die door de nanogaatje en ii) Blockade event geproduceerd uit deeltjes tijdelijk occlusie ionen in de porie veroorzaak...

Hier gebruiken we een polyurethaan afstembare nanopore geïntegreerd in een weerstandsbelasting puls detectie techniek nanodeeltjes oppervlaktechemie gekenmerkt via de meting van het translocatie snelheden, die kunnen worden gebruikt om het zeta potentieel van individuele nanodeeltjes bepalen.

Bepaling van de Zeta Potentiële via nanodeeltjes Translocation Snelheden door een Tunable Nanopore: Met behulp van DNA-gemodificeerde deeltjes als een voorbeeld

Nanopore technologies, known collectively as Resistive Pulse Sensors (RPS), are being used to detect, quantify and characterize proteins, molecules and ...

Het algemene doel van deze procedure is om de oppervlaktechemie van nanodeeltjes te karakteriseren met behulp van tunable resistent post sensing, of TRPS, en de zetapotentiaal van het materiaal te bepalen. Dit wordt gedemonstreerd door het karakteriseren van DNA-gemodificeerde nanodeeltjes. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van cruciale vragen bij de karakterisering van nanomaterialen en de ontwikkeling van bioassays.Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat u een analyse per individueel deeltje kunt uitvoeren. Elk signaal van een DNA-deeltje wordt vertaald naar een meting van het zetapotentieel, waardoor een volledig beeld wordt verkregen van het geanalyseerde monster. De oudste methode kon inzicht bieden in de karakterisering van materialen.Het kan ook worden toegepast op andere toepassingen, zoals de ontwikkeling van bioassays voor de detectie van cellen, virussen, DNA en eiwitten. Over het algemeen zullen personen die nog niet bekend zijn met deze methode moeite hebben, omdat het niet simpelweg een kwestie is van het monster injecteren en vervolgens op het antwoord wachten. Er is een zekere mate van input van de wetenschapper vereist.Om deze procedure te starten, vortex de met streptavidine gecoate deeltjes gedurende 30 seconden en Sonicate deze vervolgens twee minuten bij 80 watt om monodispersiteit te waarborgen. Verdun de met streptavidine gecoate deeltjes één op honderd in PBST-buffer om een uiteindelijke concentratie van 1 × 10⁹ deeltjes per milliliter te verkrijgen. Vortex de deeltjes daarna gedurende 30 seconden.Op basis van een bindingscapaciteit van 4.352 picomols per milligram bij de juiste concentratie DNA ten opzichte van de particles voor resulterende concentraties van 10, 20, 30, 40, 47, 95, 140 en 210 nanomolar. Nadat de monsters 10 seconden zijn gevortext, worden deze gedurende 30 minuten op een rotatiewiel bij kamertemperatuur geplaatst om het DNA via een streptavidine-biotine-interactie aan de oppervlakken van de particles te laten binden. Zodra het gevangen DNA is toegevoegd en is geïncubeerd met de particles, wordt het overtollige DNA en de oplossing verwijderd via magnetische scheiding door de monsters gedurende 30 minuten op een magneetrek te plaatsen.Verwijder vervolgens het supernatant, waarbij u voorzichtig bent om de nieuw gevormde cluster van partikels, die zich het dichtst bij de magneet bevindt, niet te verstoren. Vervang het supernatant daarna door hetzelfde volume verse PBST-buffer. Voeg nu de benodigde hoeveelheid target-DNA aan elk monster toe om ervoor te zorgen dat de maximaal mogelijke binding van het target is bereikt.Vortex de monsters gedurende 10 seconden. Plaats ze vervolgens 30 minuten bij kamertemperatuur op het rotatiewiel. Zodra de hybridisatie is voltooid, wordt het overtollige target-DNA verwijderd via magnetische scheiding door de monsters 30 minuten op het magnetische rek te plaatsen.Verwijder vervolgens het supernatant, waarbij u er op let dat u de nieuw gevormde cluster van deeltjes, die zich het dichtst bij de magneet bevindt, niet verstoort. Vervang daarna het supernatant door hetzelfde volume verse PBST-buffer. Nadat de voorgaande stappen voor dubbele monsters zijn herhaald, worden de monsters gedurende 16 uur op een rotatiewiel bij kamertemperatuur geplaatst om de hybridisatietijden van DNA te onderzoeken.Sluit op dit punt een TRPS-instrument aan op een computersysteem met de geïnstalleerde software. Meet met een schuifmaatschroef de afstand tussen de buitenkant van twee parallelle kaken. Typ de afstand in het veld 'stretch' in het tabblad instrumentinstellingen en klik onder het tabblad op 'calibrate stretch'.Plaats vervolgens zijdelings een polyurethaan nanoporemembraan van de juiste maat voor analyse in de klemmen, met het nanopore-ID-nummer naar boven gericht. Rek vervolgens de klemmen uit tot de voor de analyse vereiste rekmeting met behulp van de rekinstelhendel aan de zijkast van het instrument. Plaats 80 µL PBST-buffer in de onderste vloeistofcel onder de nanopore en zorg ervoor dat er geen luchtbellen aanwezig zijn die de meting kunnen beïnvloeden.Klik nu de bovenste vloeistofcel op zijn plaats en voeg 40 µL buffer toe, waarbij u er zeker van bent dat er geen luchtbellen aanwezig zijn. Plaats vervolgens een kooi van Faraday over het systeem en breng een externe druk aan zoals beschreven in het tekstprotocol. Nadat er 40 µL van de kalibratiepartikels in de bovenste vloeistofcel zijn geplaatst, voert u een TRPS-meting uit bij drie toegepaste voltages.Pas de spanning aan door op de plus- en minknoppen op de spanningsschaal in het tabblad instrumentinstellingen van de software te klikken. Controleer of de drie spanningen de juiste achtergrondstromen opleveren. Controleer daarnaast of de kalibratiepartikels bij de gemiddelde spanning een gemiddelde blokkadergrootte van ten minste 0,3 nanoamperes produceren.Zodra de in het tekstprotocol beschreven condities zijn bereikt, start u de run door op start te klikken in het tabblad voor gegevensverwerving van de software. Klik om de meting te voltooien op stop in het tabblad voor gegevensverwerving en sla het gegevensbestand op. Spoel het systeem door de kalibratiepartikels meerdere keren te vervangen door 40 µL PBST-buffer in de bovenste vloeistofcellen.Pas vervolgens verschillende drukken toe totdat er geen blokkadegebeurtenissen meer voorkomen, om er zeker van te zijn dat er geen resterende deeltjes en geen kruiscontaminatie aanwezig zijn. Zodra de juiste basisstroom is bereikt, vervangt u het elektrolyt in de bovenste vloeistofcel door 40 µL monster. Start de monsteranalyse door op start te klikken in het tabblad voor gegevensverwerving.Registreer minimaal 500 deeltjes en zorg dat de looptijd minimaal 30 seconden bedraagt. Klik om de meting te voltooien op stop in het tabblad voor gegevensacquisitie en sla het gegevensbestand op. Hier wordt een voorbeeld getoond van de analyse van de grootte en het zeta-potentieel van streptavidine-gecoate deeltjes zonder modificaties en streptavidine-gecoate deeltjes waarvan het oppervlak is verzadigd met enkelstrengs DNA.Hoewel beide monsters een vergelijkbare grootte hadden, was het zetapotentieel significant verschillend en veel groter wanneer DNA op het partikeloppervlak was gefunctionaliseerd. De grootte- en zetapotentieelgegevens voor monsters met de laagste en hoogste concentraties DNA die gehybridiseerd waren aan de streptavidine-gecoate partikels worden hier weergegeven. Er is een grotere waarde voor het zetapotentieel geregistreerd voor partikels die gehybridiseerd waren met een hogere DNA-concentratie.Hier wordt de verandering in zetapotentieel weergegeven die is gemeten voor alleen de capture probe DNA, een volledig complementair DNA-doelwit, een DNA-doelwit met binding in het midden, een DNA-doelwit met binding aan het uiteinde en een DNA-doelwit met een overhang. Zodra men deze techniek beheerst, kan deze in 20 minuten worden uitgevoerd, mits dit correct gebeurt. Tijdens het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om eraan te denken een nanopore grondig te wassen tussen elke kalibratie en elk monster om kruiscontaminatie tussen monsters te voorkomen en verstopping van de nanopore te vermijden.Na de ontwikkeling heeft deze techniek de weg vrijgemaakt voor onderzoekers op het gebied van biosensoren om eiwit-eiwit- en eiwit-DNA-interacties in multiplex-assays te onderzoeken. Na het bekijken van deze video zou u een goed begrip moeten hebben van hoe u het zetapotentieel kunt bepalen met behulp van TRPS en hoe u DNA-gemodificeerde deeltjes voor bioassays kunt prepareren.

determination-zeta-potential-via-nanoparticle-translocation

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bio-engineering

Een methode van het gebruik van solid-state nanoporiën om de niet-specifieke adsorptie van eiwitten te controleren op een anorganisch oppervlak is beschreven. De methode maakt gebruik van de resistieve-puls principe, waardoor de adsorptie aan gezocht worden in real-time en op de single-molecule-niveau. Omdat het proces van enkel eiwit-adsorptie wordt ver van evenwicht, stellen wij de werkgelegenheid van parallelle arrays van synthetische nanoporiën, waardoor voor de kwantitatieve bepaling van...

Monitoring eiwitadsorptie met Solid-state Nanoporiën

Een protocol voor de nanodeeltjes tracking analyse (NTA) en high-throughput flowcytometrie om polymere genafgifte nanodeeltjes evalueren beschreven. NTA wordt gebruikt om de nanodeeltjes deeltjesgrootteverdeling en het plasmide per deeltjesverdeling karakteriseren. High-throughput flowcytometrie in staat stelt kwantitatieve transfectie efficiëntie evaluatie voor een bibliotheek van gen delivery biomaterialen.

Evaluatie van polymere Gene Delivery Nanodeeltjes door Nanodeeltje Tracking Analyse en High-throughput Flow cytometrie

Een methodologie voor het bereiden van solid-state nanoporiën in oplossing voor biomoleculaire translocatie experimenten wordt gepresenteerd. Door het toepassen van korte pulsen van hoge elektrische velden kan de nanopore diameter beheersbaar worden uitgebreid met subnanometer precisie en zijn elektrische ruis kenmerken aanzienlijk verbeterd. Deze procedure wordt uitgevoerd in situ met behulp van standaard laboratoriumapparatuur onder experimentele omstandigheden.

Fine-tuning van de grootte en het minimaliseren van de Noise van Solid-state Nanoporiën

Het gepresenteerde protocol beschrijft de analyse van membraaneiwitgemedieerde transport op het niveau van enkelvoudige transporteurs met behulp van porie-overspande, oplosmiddelvrije lipide dubbellagen. Dit wordt bereikt door de creatie van in grote aantallen geproduceerde nanopore-arraychips, gecombineerd met zeer parallelle dataverwerving en analyse, waardoor de toekomstige vestiging van membraaneiwiteffectorscreenings mogelijk wordt.

Membraan transportprocessen geanalyseerd door een Highly Parallel Nanopore Chip System aan Single Protein Resolution

We stellen een eenvoudige zelfassemblerende techniek voor van silica colloïdale nanodeeltjes om een nanofluïdische kruising te creëren tussen twee microkanalen in polydimethylsiloxaan (PDMS). Met behulp van deze techniek werd een nanoporeuze parelmembraan met een poriegrootte tot ~45 nm gebouwd binnen een microkanaal en toegepast op elektrokinetische preconcentratie van DNA-monsters.

Het creëren van Sub-50 Nm nanofluidic Knooppunten in PDMS microfluïdische chip via Self-assemblageproces van colloïdale deeltjes

Semiflexible polymeren weer unieke mechanische eigenschappen die uitgebreid door levende systemen worden toegepast. Systematische studies over biopolymeren zijn echter beperkt omdat eigenschappen zoals polymeer rigiditeit niet toegankelijk zijn. Dit manuscript wordt beschreven hoe is deze beperking omzeild door programmeerbare DNA nanobuisjes, waardoor experimentele studies over de gevolgen van de stijfheid van de gloeidraad.

DNA Nanotubes als een veelzijdig instrument om te studeren van Semiflexible polymeren

Dit protocol beschrijft de synthese van magnetische deeltjes en evaluatie van hun DNA-bindende eigenschappen via dynamische en elektroforetische lichtverstrooiing. Deze methode richt zich op het volgen van veranderingen in de grootte van de deeltjes, hun polydispersiteit en zeta potentieel van deeltje oppervlak die spelen belangrijke rol bij het binden van materialen zoals DNA.

DNA-magnetische deeltjes analyse door dynamische en elektroforetische lichtverstrooiing bindend

Hier presenteren we een protocol voor het detecteren van discrete metalen zuurstof clusters, polyoxometalates (POMs), bij de enkelvoudige molecuul limiet met behulp van een biologisch nano-gebaseerd elektronisch platform. De methode biedt een complementaire benadering van traditionele analytische chemie instrumenten die worden gebruikt in de studie van deze moleculen.

Fysische karakterisering van enkele metallische nanodeeltjes in hoge resolutie

Hier presenteren we een protocol voor de fabricage van een gesloten type draadloze nanopore-elektrode en latere elektrochemische waardering voor één nanoparticle botsingen.

Een gesloten Type draadloze Nanopore-elektrode voor het analyseren van interne nanodeeltjes

Hier beschrijven we een snelle magnetische pincetopstelling die nanomechanische metingen uitvoert op krachtgevoelige biomoleculen met de maximale snelheid van 1,2 kHz. We introduceren de toepassing ervan op DNA-haarspelden en SNARE-complexen als modelsystemen, maar het zal ook van toepassing zijn op andere moleculen die betrokken zijn bij mechanobiologische gebeurtenissen.

High-speed magnetisch pincet voor nanomechanische metingen aan krachtgevoelige elementen

Plasmonische nanopincetten gebruiken gelokaliseerde oppervlakteplasmonresonantie in gouden nanostructuren om afzonderlijke nanodeeltjes, waaronder eiwitten, op te vangen in een optisch veld op nanometerschaal. Veranderingen in het verstrooide signaal onthullen de aanwezigheid van eiwitten en de conformationele dynamiek, waardoor monitoring mogelijk is zonder fluorofoormodificaties of oppervlaktetethering.

Monitoring van conformationele dynamica van enkelvoudige ongemodificeerde eiwitten met behulp van plasmonische nanopincetten

Leer de zetapotentiaal bepalen van DNA-gemodificeerde nanodeeltjes met behulp van TRPS-technologie. Deze methode biedt deeltje-voor-deeltje analyse voor karakterisering van oppervlaktechemie in nanomaterialen.

Bepaling van de Zeta Potentiële via nanodeeltjes Translocation Snelheden door een Tunable Nanopore: Met behulp van DNA-gemodificeerde deeltjes als een voorbeeld (Video) | JoVE Journal

Bepaling van de Zeta Potentiële via nanodeeltjes Translocation Snelheden door een Tunable Nanopore: Met behulp van DNA-gemodificeerde deeltjes als een voorbeeld

Meer video's verkennen