Name: Symmetrische Bihemispheric postmortaal Brain snijden om gezond en pathologisch Brain Voorwaarden-studie bij mensen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-18T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 29 s
Description: Leer symmetrische bihemisferische hersensnijding bij postmortaal menselijk weefsel om ziekte-ernst en hemisferische verdeling van neuropathologische processen te beoordelen. Deze methode levert kwalitatieve en kwantitatieve gegevens voor klinische en beeldvormende correlaties.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

We danken de duizenden hersendonoren, patiënten, families en neurowetenschappers over de hele wereld die, gedurende de afgelopen twee eeuwen en door hun genereuze giften en intellectuele inspanningen, hebben geholpen om te ontdekken hoe de menselijke hersenen werken, om verwoestende hersenziekten te begrijpen en daarvan behandelingen te ontwikkelen. We danken in het bijzonder mevrouw Cecilia V. Feltis voor het redigeren en beoordelen van dit manuscript.

Procedures waarbij postmortem menselijke weefsels zijn beoordeeld door de institutionele review board en vrijgesteld onder 45 CFR (Code of Federal Regulations). LET OP: Het protocol beschrijft een symmetrische bihemispheric hersenen snijden procedure voor postmortem assessment hersenen afgerond voor neuropathologische studies bij mensen. Gedetailleerde beschrijvingen van de inrichtingen, instrumenten, materialen, en inzet van menselijke hersenen snijden uitgevoerd worden uitgesloten. Materialen en benodigdheden voor de hersenen dissecties worden geselecteerd naar het oordeel van de enkele onderzoeker en zijn gebaseerd op de autopsie instrumenten toegestaan ​​of bij elke onderzoeksinstelling goedgekeurd. De minimale set van gereedschappen en materialen die nodig zijn voor deze procedure wordt beschreven in de Material / Equipment Table. Specifieke snij- procedures en voorzorgen bij vermoedelijke besmettelijke hersenziekten, zoals humane CJD, buiten de doelstellingen van dit manuscript en zijn verkrijgbaar bij andere bronnen 7. 1. Symmetrische Bihemisferische Brain Cutting Opmerking: Controleer of de hersenen de benodigde weefsel bevestiging heeft ontvangen (met gebruikmaking van bijvoorbeeld neutrale gebufferde 10% formaline) gedurende 2-3 weken, afhankelijk van de periagonal, metabolische (bijvoorbeeld pH), en weefsel conservering ( dat wil zeggen, temperatuur) omstandigheden. Echter, voor imaging-pathologie correlatie studies, een langere periode met vaste rente (&gt; 5,4 weken) is gesuggereerd 8. <ol><li> Plaats de hersenen op een plat vlak naar de onderzoeker, de frontale polen gericht in de tegengestelde richting ten opzichte van de onderzoeker. </li><li> Plaats de hersenen op een zodanige wijze dat het toestaan van een volledige en duidelijke visualisatie van alle corticale gyri en sulci van de gehele hersenen (figuur 1a). </li><li> Eerste blik voor meningeale anomalieën, macroscopische hemisferische asymmetrie (mogelijke indicatoren van focale, dementie, of algemene hemisferische verschijnselen van atrofie), macroscopische tissutal laesies (dat wil zeggen, Tumors of hernia), aangeboren afwijkingen, schip afwijkingen, en andere mogelijke afwijkingen of ongewone presentaties van de cerebrale oppervlak. LET OP: Voor gedetailleerde beschrijvingen over hoe een menselijk brein te beoordelen, hebben betrekking op de handel verkrijgbare neuropathologie leerboeken en autopsie handleidingen 9,10. </li></ol> 2. Protocol Sequence <ol><li> Gezicht frontale palen uit de buurt van de onderzoeker, met de oppervlakkige aspecten van de hemisferen (telencephalon) naar de onderzoeker. Neem zoveel digitale foto&#39;s als nodig is in elk afzonderlijk geval van mogelijke macro-anomalieën te documenteren en om rekening te houden voor mogelijke clinico-neuroanatomische en post-cutting overwegingen. Hebben onderzoeksassistent nemen digitale foto&#39;s loodrecht op de hersenen om het gehele corticale oppervlak vast te leggen (figuur 1a - c). </li><li> Mark pre en postcentralis corticale gyri met inkt of gekleurde naalden voor het snijden van de hersenen (Figuur 1b </strong&gt;). OPMERKING: Deze procedure maakt een onmiddellijke erkenning van de motor en somatosensorische cortex primaire na het snijden. </li><li> Draai de hersenen van 180 graden, terwijl het houden van het in dezelfde richting (dat wil zeggen, de frontale polen afgekeerd van de onderzoeker). Inspecteer de basis van de hersenen. Bijzondere aandacht besteden aan de voorwaarden van de cerebrovasculaire systemen (dwz basilaire en vertebrale slagaders en de cirkel van Willis) en hersenzenuwen hun hersenstam afrit / entree niveaus. Beheer de olfactorische bollen en traktaten met speciale zorg te tissutal scheuren te voorkomen, als gevolg van hun extreme kwetsbaarheid. <ol><li> Neem zoveel digitale foto&#39;s als nodig is in elk afzonderlijk geval van mogelijke macro-anomalieën te documenteren en om rekening te houden voor mogelijke clinico-neuroanatomische en post-cutting overwegingen. Heeft u een onderzoeksassistent te nemen digitale foto&#39;s loodrecht op de hersenen om het geheel van de corticale en hersenstam oppervlakken vast te leggen. </li&gt; </ol></li><li> Tegenover de basis van de hersenen en met een scalpel, snijd de hersenstam dwars op het niveau van het bovenste gedeelte van de pons (zo dicht mogelijk bij de bodem van hersenen). Inspecteer zorgvuldig de SN (dat wil zeggen, voor bleekheid) 11 en andere naburige structuren 12. Let, dat zich op een audiorecorder inrichting van elke ongewone verschijning van de hersenen in vergelijking met normale hersenen 13. </li><li> Opnieuw draaien de hersenen van 180 graden en met een scherp mes, scheiden de twee hersenhelften met centraal het snijden van de corpus callosum door de mediale longitudinale spleet en na een fronto-occipital richting. Inspecteer weerskanten van elke hersenhelft op mogelijke afwijkingen (bijvoorbeeld ventriculaire vergrotingen, misvormingen, weefsel verzachtende, tumoren, enz.) 13. Zie figuur 2a. <ol><li> Neem zoveel digitale foto&#39;s als nodig is in elk afzonderlijk geval van mogelijke macro-afwijkingen te documenteren enom rekening te houden voor mogelijke clinico-neuroanatomische en post-cutting overwegingen. Heeft u een onderzoeksassistent te nemen digitale foto&#39;s loodrecht op de hersenen om het gehele corticale oppervlak vast te leggen. Dan ook de eventuele ongewone functie van de hersenen in vergelijking met een normale hersenen. </li></ol></li><li> Zet de twee hemisferen vlakke, liggend op de mediale aspecten van de frontale kwabben afgekeerd van de onderzoeker, zie figuur 2b. Leg ze op een zodanige wijze dat hun centra raken (ook in het geval van gemarkeerde hemisferische asymmetrie). </li><li> Met een scherp mes, handmatig afsnijden door beide hersenhelften, beginnend bij het frontale polen en richting de occipitale polen over de gehele lengte van de hemisferen. Het verkrijgen van twee series van 1 cm dikke blokken van hersenweefsel (ongeveer 18 platen per halfrond). </li><li> Plaats de hersenen platen in een anatomisch georganiseerd (fronto-occipitale richting) volgorde op een aparte vlakke ondergrond. Gebruik een witte surface met een liniaal afgedrukt op het voor een beter contrast bij het fotograferen. Geef de twee series van cerebrale platen in een anatomisch symmetrische wijze (fronto-occipitale richting), om ervoor te zorgen dat hun coronale oppervlakken zijn toegankelijk voor directe oog inspectie en digitale fotografie (Figuur 3a). Gebruik snijvlakken met gedrukte millimeter roosters aan beide zijden van de hersenen structuren, formaten en mogelijke afwijkingen te lokaliseren in een meer nauwkeurige manier. <ol><li> Neem zoveel digitale foto&#39;s als nodig is in elk afzonderlijk geval van mogelijke macro-anomalieën te documenteren en om rekening te houden voor mogelijke clinico-neuroanatomische en post-cutting overwegingen. Heeft u een onderzoeksassistent te nemen digitale foto&#39;s loodrecht op de hersenen om het gehele corticale oppervlak vast te leggen. Maak notities (eventueel met behulp van een audiorecorder apparaat), van elke ongebruikelijke aspect van de hersenen in vergelijking met een normale hersenen. </li></ol></li><li> Met behulp van een scherpe scalpel, handmatig kleinere rechthoekige blokken van ontledenhersenweefsel voor elke gevestigde cerebrale regio. Volg de voorgestelde cerebrale regio inzamelingssysteem in tabel 1 beschreven. <ol><li> Leg elk weefsel blok in apart gelabeld histocassettes. OPMERKING: Elk blok van hersenweefsel te worden op maat gesneden, zoveel mogelijk, de standaard histocassette maximale volume (30 x 20 x 4 mm 3). </li><li> Label de histocassettes met een-de identificatiecode voor iedere zaak met specifieke neuroanatomisch identifiers (gebruik geen willekeurige letters of cijfers voor verschillende hersenen, maar eerder altijd dezelfde regionale anatomische namen en bijbehorende nummers, zie tabel 1). Maak de-identificatiecodes, bijvoorbeeld door het genereren van willekeurige of semi-willekeurige getallen voor elk geval (bijv BRC 130, waarbij B verblijft Brain, R verblijft Resource, C verblijft Center en 130 is een progressieve toetreding of AD160001, wanneer AD staat voor &quot;ziekte van Alzheimer studie,&quot; 16 is dejaar waarin de autopsie werd uitgevoerd (2016) en 0001 een progressieve toetreding exemplaar nummer). OPMERKING: Deze stap is zeer nuttig voor toekomstige onderzoekers; houdt een legende, en geef de hemisfeer (L = linker hersenhelft, R = rechter hersenhelft). Gebruik twee verschillende kleuren van histocassettes, de oprichting van een specifieke kleur voor elk halfrond. </li><li> Neem zoveel digitale foto&#39;s als nodig is in elk afzonderlijk geval mogelijk macroanomalies documenteren en om rekening te houden voor mogelijke clinico-neuroanatomische en post-cutting overwegingen. Heeft u een onderzoeksassistent te nemen digitale foto&#39;s loodrecht op de hersenen om het gehele corticale oppervlak vast te leggen. Dan ook de eventuele ongewone functie van de hersenen in vergelijking met een normale hersenen. </li></ol></li><li> Digitale foto (zoveel als nodig of gewenst) van de gehele hersenen uitgesneden en de bijbehorende histocassettes. </li><li> Punch (bijvoorbeeld door Accu-punch) kleine stukjes weefsel voor DNA-extractie en genetische analyses. Gebruikeneen stempel van 2-5 mm in diameter. LET OP: Voor het hoge gehalte aan genomic materiaal, de kleine hersenen is de voorkeur; Echter, andere regio&#39;s is prima. </li><li> Opnieuw onderdompelen alle histocassettes met hersenweefsel blokken hetzelfde type fixatief (bijvoorbeeld 10% neutraal gebufferde formaline) zoals eerder gebruikt tot de volgende stap van weefselverwerking. </li><li> Volg de standaardprocedures voor menselijk formaline gefixeerde weefsel verwerking 14. </li></ol> 3. een speciale aanpak: Wisselende Bevroren en Vaste Symmetric Bihemispheric Cutting LET OP: De symmetrische bihemispheric hersenen snijden protocol in punt 2 beschreven biedt de mogelijkheid om te snijden weefsel platen van niet vastgelegde, verse hersenen (indien beschikbaar) in dezelfde systematische en symmetrische wijze. <ol><li> Leg de hele verse hersenen ondersteboven (bij voorkeur op een half bolvormige kom-achtige kunststof oppervlak) voor 8 - 10 min in een -80 ° C vriezer om het hersenweefsel te harden without provoceren biochemische schade en om de handleiding te snijden te vergemakkelijken. </li><li> Met behulp van een scherp mes, sneed beide halfronden in een alternatieve en opeenvolgende wijze, naar aanleiding van de hersenen snijden protocol in hoofdstuk 2 beschreven, maar bevriezen en op te lossen om de andere plaat (van beide hersenhelften en langs een fronto-occipital anatomische richting). <ol><li> Op dit punt, niet proberen om elke cerebrale regio te snijden, zoals beschreven in Tabel 1. Snijd specifieke verse hersengebieden alleen indien nodig voor onmiddellijke RNA of eiwit-extractie (dwz voor genoom- of proteoom studies) 15. </li></ol></li><li> Na het snijden, onmiddellijk te bevriezen, label, en het nummer elk vers weefsel. Neem digitale foto&#39;s van de hele plaat reeks; verpakken elk plaat in één plastic zak; verzamelen van de platen in een apart, one-brain-only houder; en opslaan van de houder in een speciale -80 ° C vriezer. Attentie: de vriezer moet worden gewijd aan alleen menselijk hersenweefsel. Pas later zal zingenle bevroren hersengebieden in te korten voor elke specifieke experiment. </li><li> Dompel elke plak weefsel gekozen fixatie (10% neutraal gebufferde formaline of een fixeermiddel) in afzonderlijke zakken met een voldoende hoeveelheid fixeermiddel (3/1 volume fixatief / weefsel-blokverhouding). Label elke zak door ze opeenvolgend nummeren na een fronto-occipitale volgorde. Seal elke zak, digitale foto&#39;s, en bewaar ze in een plastic container. </li><li> Open het fixeermiddel bevattende zakken na 2 weken weefsel fixatie en snijd elke cerebrale regio als beschreven in tabel 1. </li></ol> 4. Histostain en Immunohistochemie LET OP: De set van cerebrale regio&#39;s gesneden op basis van de voorgestelde regeling (tabel 1) toereikend zijn om de meeste, zo niet alle, op dit moment gevestigd consensus gebaseerde pathologische criteria voor AD 16, PD 17, dementie met Lewy Bodies (DLB) 18, frontotemporale dementie (FTD / MND) <sup&gt; 19, Progressief Suprabulbar Palsy (PSP) 20, Multiple Systeem Atrofie (MSA) 21, chronische traumatische encefalopathie (CTE) 22, enz. <ol><li> Voor elke hersenen regio en voor beide halfronden, voert u de volgende minimumpakket van histostains: hematoxyline en eosine (H &amp; E), cresylviolet (CV, als kwantitatieve morfometrische studies zijn gepland, bijvoorbeeld), en zilverkleuring (als &quot;verkennend&quot; analyses nodig). </li><li> Voor elke hersenen regio en voor beide halfronden, voert u de volgende minimumpakket van immunohistochemie protocollen: p amyloïde (β A), gefosforyleerd-Tau (Ptau), gefosforyleerd α-synucleïne (pα-syn) en gefosforyleerd-TDP43 (pTDP43) zoals beschreven 14. NB: Het totale aantal weefselcoupes om elke hersenen als gevolg van dit protocol ter 46 is (wanneer alle cerebrale gebieden van beide hemisferen beschikbaar). </li></ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Deze hersenen snijden methode kan worden aangepast aan de specifieke behoeften van elk neuropathologie lab (bijvoorbeeld door vermindering van het aantal cerebrale gebieden te beoordelen per halfrond) terwijl de bihemispheric symmetrische snijprocedure behouden als één van de belangrijkste kenmerken. Voorgestelde protocol kan worden gebruikt voor routinematige procedures (onderzoeksgerichte neuropathologische centra) of alleen wanneer nodig (specifieke klinische studies uit). Het kan selectief worden gebruikt voor speci...

Neuropathologen hebben de wetenschappelijke voorrecht, intellectuele eer, en diagnostische verplichting om menselijke hersenen te beoordelen. Voor vele decennia, uitgebreide klinische beschrijvingen van hersenziekten en grote inspanningen te individualiseren hun mogelijke neurohistological correlaten in menselijke postmortem hersenen zijn ondernomen. Historisch gezien, die inspanningen vertegenwoordigd de meest productieve modaliteit waarmee de medische wetenschappen, en neurologie in het bijzonder, gevorderd in de moderne tijd. Dankzij vorige eminente neuropathologen en hun toewijding, vastberadenheid, beurs, en verbazingwekkende vermogen om onderscheid te maken tussen normale en abnormale hersenweefsel (vaak met behulp van zeer rudimentaire gereedschappen), kunnen we nu onderzoeken en het doel zoals de ziekte van Alzheimer-Perusini&#39;s (ten onrechte alleen opgeroepen de ziekte van Alzheimer ziekten; APD / AD) 1, ziekte van Parkinson (PD) 2, de ziekte van Creutzfeldt-Jakob (CJD) 3, de ziekte van Lou Gehrig-/ Amyotrofische Laterale Sclerosis (ALS) 4, en Guam ziekte 5, een paar te noemen. Geavanceerde technieken van neuroimaging, zoals high-definition gecomputeriseerde tomografie (dat wil zeggen, multisection spiraal CT-scan, CT-angiografie), functionele en morfologische magnetic resonance imaging (dwz, fMRI, diffusie MRI, tractografie-MRI, enz.), Positron Emissie Tomografie (PET), ultrasound-gebaseerde beeldvorming, en anderen, hebben zeker veranderd onze algemene aanpak over hoe te diagnosticeren en te genezen neurologische en psychiatrische patiënten. Niettemin, hoewel neuroimagingtechnieken kunnen visualiseren hersenen van een persoon tijdens zijn leven, zij niet de mogelijkheid bieden bij de optredende moment de zeer complexe cellulaire en subcellulaire structuren van cellen, zoals neuronen rechtstreeks te analyseren; of te visualiseren, mark, en kwantificeren van specifieke soorten intracellulaire letsels; of om precies aan te geven hun neuroanatomische of subregionale lokalisatie bij circuital en sub-circuital anatomische niveaus. Bijvoorbeeld, neuroimaging technieken kunnen niet Lewy Bodies (LB) in gepigmenteerde neuronen van de substantia nigra (SN), een gemeenschappelijke pathologische functie geassocieerd met PD, of tangles (NFT) in de entorinale schors identificeren of lokaliseren, een klassiek kenmerk van AD en andere hersenen pathologieën. Neuropathologische onderzoek gecombineerd met geavanceerde digitale microscopie nog unreplaceable gedetailleerde klinikopathologische correlaties en daarmee voor definitieve diagnose. Door de bijzondere anatomisch-functionele eigenschappen van het menselijk brein, en vooral aan de anatomische lokalisatie (dat wil zeggen in de schedel, een natuurlijke beschermende systeem dat niet rechtstreeks onderzoek van de inhoud toelaat), de invoering van in vivo neuroimagingtechnieken hebben buitengewoon geholpen clinici en onderzoekers om de eerste antwoorden op enkele van de mysteries van dit complex weefsel te vinden. Er is echter geen klinische of neuroimaging methodologie die de unieke kans om hersenweefsel direct analyseren tijdens een autopsie kan vervangen. Alleen de georganiseerde verzamelen, bewaren en categoriseren van menselijke hersenen kunnen direct en systematisch onderzoek naar neuronale en niet-neuronale cellen, de subcellulaire bestanddelen intracellulaire en extracellulaire pathologische laesies mogelijk en elk type afwijking in de hersenen te bevestigen, wijzigen of herdefiniëren klinische diagnoses en om nieuwe klinisch-pathologische correlaties te ontdekken. Een van de schijnbare beperkingen betreffende de beoordeling van de hersenen bij de autopsie heeft dat deze procedure een dwarsdoorsnede methodologie. Er zal altijd een vertraging tussen een continu proces neuropathologische (klinisch gemanifesteerd of niet) en de kans eventueel te definiëren op neurohistological niveau. Dit is voornamelijk te wijten aan het onvermogen van het menselijk brein om zichzelf te regenereren. Het is momenteel niet mogelijk om hersenweefsel te verkrijgen in vivo zonder dat permanent schade. Bijgevolg is het niet mogelijk om longitudinaal en neuropathologisch dezelfde hersenen / persoon te beoordelen. Er kon echter gestandaardiseerde hersenen banking procedures en een toegenomen bewustzijn voor de hersenen donatie bij het grote publiek een grote bijdrage leveren aan de oplossing van de hersenen-autopsie timing kwesties door consequent het aantal gevallen te verzamelen en te analyseren toeneemt. Op deze wijze kan meer adequate aantallen postmortem hersenen worden verkregen constante patronen van pathologische oorsprong en progressie definiëren voor elk specifiek type hersenletsel geassocieerd met ieder mens hersenziekte. Dit zou donatie en verzamelen van zoveel mogelijk hersenen van patiënten die aan elke neuropsychiatrische stoornis, en van gezonde controlepersonen voor alle leeftijden vereisen. Een mogelijke methode zou het verzamelen van zoveel postmortem hersenen mogelijk van algemene en gespecialiseerde medische centra als een standaard routine. De behoefte aan hersenen donaties is onlangs geuitdoor hen die bestuderen dementie en normale veroudering 6. Dezelfde noodzaak moet worden uitgedrukt door de neuropsychiatrische veld als geheel. Voor de bovengenoemde en om andere redenen, een update van de lopende hersenen snijden procedures noodzakelijk. Bovendien moeten de hersenen snijden procedures universeel gestandaardiseerd over verschillende neuropathologie onderzoekscentra over de hele wereld, ook rekening houdend met de mogelijkheid om de huidige en toekomstige biotechnologische technieken gebruiken om beter te onderzoeken en, hopelijk, om definitief te begrijpen, de oorzaken en mechanismen van hersenziekten in mens. Hier, voornamelijk voor onderzoeksdoeleinden beschrijven we een symmetrische methode voor postmortem hersenen snijden bij de mens. Deze procedure stelt het verzamelen van meer cerebrale regio&#39;s dan normaal gedaan en zowel cerebrale en cerebellaire hemisferen. Een symmetrische bi-hemisferische hersenen snijden procedure past veel beter met onze huidige kennis van de menselijkeneuroanatomy, neurochemie, en neurofysiologie. Deze methode maakt het ook mogelijk om neuropathologisch analyseren van de unieke kenmerken van de menselijke hersenen, zoals hemisferische specialisatie en lateralisatie die zijn geassocieerd met hogere cognitieve en niet-cognitieve functies meestal of uitsluitend aanwezig in onze soort. Of er specifieke pathogene relaties tussen hemisferische specialisatie / lateralisatie en specifieke vormen van hersenletsels, dan wel of een bijzondere neuropsychiatrische pathogene evenement is in eerste instantie, overwegend, of uitsluitend gekoppeld aan een specifieke halfrond en de functie is op dit moment niet bekend. Door het beschrijven van deze symmetrische hersenen snijden procedure, willen we een bijgewerkte methode van menselijke hersenen dissectie die kunnen helpen om beter te begrijpen normale en pathologische omstandigheden in een zeer gespecialiseerd weefsel, de hersenen voor te stellen. Deze methode wordt ook rekening gehouden met die morfo-functionele hemisferische aspecten die bestaan ​​alleen bij de mens.

<table><tbody><tr><td>Copy of signed informed consent allowing autopsy and brain donation for research use.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gedetailleerde klinische geschiedenis van de proefpersoon die een gedetailleerde beschrijving van alle neurologische en psychiatrische symptomen en tekenen moet bevatten.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Medische of niet-medische video-opnamen indien beschikbaar (vooral nuttig in het veld van bewegingsstoornissen). Toestemming van naaste familieleden vereist.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Neuroimaging, neurofysiologie, neuropsychiatrie en beoordelings- of klinometrische schalen.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Genetische en familiegeschiedenisgegevens. Genetica rapporten overzicht, indien neurogenetische ziekten werden gediagnosticeerd.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Histologie Container</td><td>ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES</td><td>64233-24</td><td></td></tr><tr><td>Histologie Cassettes</td><td>VWR</td><td>18000-142 (oranje)</td><td></td></tr><tr><td>Histologie Cassettes</td><td>VWR</td><td>18000-132 (donkerblauw)</td><td></td></tr><tr><td>Meshandvatten en wegwerpmessen</td><td>ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES</td><td>62560-04</td><td></td></tr><tr><td>Lange mesjes</td><td>ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES</td><td>62561-20</td><td></td></tr><tr><td>Wegweerp mesjes</td><td>ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES</td><td>72040-08</td><td></td></tr><tr><td>Scalpel mesjes</td><td>ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES</td><td>72049-22</td><td></td></tr><tr><td>Accu-Punch 2 mm</td><td>ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES</td><td>69038-02&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Polystyreen Containers &ndash; Sterile</td><td>ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES</td><td>64240-12</td><td></td></tr><tr><td>Dissectiebord</td><td>ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES</td><td>63307-30</td><td></td></tr><tr><td>Formaline oplossing, neutraal gebufferd, 10%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT501128 SIGMA</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxyline Oplossing, Gill No. 2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>GHS280&nbsp;SIGMA</td><td></td></tr><tr><td>Eosine Y oplossing, waterig</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT1102128&nbsp;SIGMA</td><td></td></tr><tr><td>anti-beta-amyloïde</td><td>Covance, Princeton, NJ</td><td>SIG-39220</td><td>1:500</td></tr><tr><td>anti-tau</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>MN1020</td><td>1:500</td></tr><tr><td>anti-alpha-synucleïne</td><td>Abcam</td><td>ab27766</td><td>1:500</td></tr><tr><td>anti-fosfo-TDP43</td><td>Cosmo Bio Co.</td><td>TIP-PTD-P02</td><td>1:2000</td></tr><tr><td>Digitale Camera</td><td>Elk</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Head Impulse Sealing machine&nbsp;</td><td>Grainger</td><td>5ZZ35</td><td></td></tr></tbody></table>

symmetrische bihemispheric postmortaal brain snijden om gezond en pathologisch brain voorwaarden-studie bij mensen

Symmetric Bihemispheric Postmortem Brain Cutting to Study Healthy and Pathological Brain Conditions in Humans

Neuropathologists, soms, voelen zich geïntimideerd door de hoeveelheid kennis die nodig is om definitieve diagnoses voor complexe neuropsychiatrische verschijnselen bij patiënten voor wie een brain autopsie is aangevraagd beschreven te genereren. Hoewel de vooruitgang van de biomedische wetenschappen en neuroimaging de neuropsychiatrische veld een revolutie, hebben ze ook gegenereerd de misleidende idee dat hersenen autopsies slechts een bevestigende waarde. Deze valse idee creëerde een drastische vermindering van autopsie prijzen en bijgevolg een verminderde mogelijkheid om meer gedetailleerde neuropathologische en uitgebreide onderzoeken die nodig zijn talrijke normale en pathologische aspecten nog niet bekend of de menselijke hersenen bevatten zijn uitgevoerd. De traditionele inferentiële methode correlatie tussen waargenomen neuropsychiatrische verschijnselen en de bijbehorende lokalisatie / karakterisering van hun mogelijke neurohistological correleert blijft een onmiskenbare waarde. In de context van neuropsychitrische ziekten, de traditionele clinicopathologische methode blijft de beste mogelijke methode (en vaak de enige beschikbare) unieke neuropsychiatrische kenmerken verwijzen naar de bijbehorende neuropathologische substraten, aangezien het betrekking heeft berust op de directe fysieke beoordeling van hersenweefsel. De beoordeling van postmortem hersenen is gebaseerd op de hersenen snijden procedures die uiteenlopen neuropathologie centra. Brain stekken worden uitgevoerd in een relatief omvangrijke en systematische wijze op basis van de verschillende klinische en academische onvoorziene aanwezig in elke instelling. Een anatomisch inclusieve en symmetrische bi-hemisferische hersenen snijden methode moet in ieder geval worden gebruikt voor onderzoeksdoeleinden in de menselijke neuropathologie coherent te onderzoeken, in de diepte, normale en pathologische omstandigheden met de eigenaardigheden van de menselijke hersenen (dat wil zeggen, hemisferische specialisatie en lateralisatie voor specifieke functies). Een dergelijke methode zou een meer uitgebreide colle biedenctie van neuropathologisch goed gekarakteriseerde hersenen beschikbaar zijn voor de huidige en toekomstige biotechnologische en neuroimaging technieken. We beschrijven een symmetrische bi-hemisferische hersenen snijden procedure voor het onderzoek van de hemisferische verschillen in de menselijke hersenen pathologieën en voor gebruik met de huidige en toekomstige biomoleculaire / neuroimaging technieken.

Protocol Lengte De tijd voor een enkele symmetrische bihemispheric vaste hersenen snijden procedure wordt geschat op 1 uur (met uitzondering van de tijd besteed het opzetten van de dissectie tafel, gereedschappen en snijvlakken, etikettering, enz.) Die. De tijd die nodig is voor een enkele symmetrische bi-hemisferische afwisselend ingevroren hersenen vaste snij procedure wordt geschat op 2 uur duren. 6 weken tot definiti...

Georganiseerd hersenen snijden procedures zijn noodzakelijk om specifieke neuropsychiatrische verschijnselen met definitieve neuropathologische diagnoses te correleren. Brain stekken worden anders uitgevoerd op basis van diverse clinico-academische onvoorziene uitgaven. Dit protocol beschrijft een symmetrische bihemispheric hersenen snijden procedure hemisferische verschillen in de menselijke hersenen pathologieën te onderzoeken en de huidige en toekomstige biomoleculaire / neuroimaging technieken te maximaliseren.

Symmetrische Bihemispheric postmortaal Brain snijden om gezond en pathologisch Brain Voorwaarden-studie bij mensen

Neuropathologists, at times, feel intimidated by the amount of knowledge needed to generate definitive diagnoses for complex neuropsychiatric phenomena ...

Het algemene doel van deze procedure is om systematisch een constante reeks cerebrale regio's te verzamelen en te analyseren, die symmetrisch zijn gedisseceerd uit beide hemisferen van het menselijk brein, om de ernst, klinisch-pathologische stagering en hemisferische distributie van diverse hersenziekten te beoordelen. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen in het veld van de neuropathologie door een systematisch georganiseerde collectie van kwalitatieve en kwantitatieve neuropathologische gegevens te leveren voor gedetailleerde klinisch-pathologische en beeldvormend-pathologische correlaties. Het belangrijkste voordeel van deze techniek bestaat uit het verkrijgen van relevante gegevens met betrekking tot de pathologische processen op zich, cũng als het histofunctionele gespecialiseerde aspect van elke cerebrale hemisfeer.Nadat het post-mortem menselijke hersenweefsel volgens het tekstprotocol is gefixeerd, wordt het brein op een vlak oppervlak geplaatst met de frontale polen van de onderzoeker afgekeerd. Orienteer het brein zodanig dat alle corticale gyri en sulci van het gehele cerebrum volledig en duidelijk zichtbaar zijn. Inspecteer het weefsel op meningea

symmetric-bihemispheric-postmortem-brain-cutting-to-study-healthy

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

This video demonstrates a technique for preparing free-floating slice cultures from the adult human brain. Thin slices are generated from a brain section using a vibratome. These slices are then suspended in a culture medium supplemented with growth factors to maintain tissue viability.

Preparing Free-Floating Slice Cultures from an Adult Human Brain

The video demonstrates a step-by-step procedure for symmetrically dissecting a fixed postmortem human brain, preparing smaller tissue blocks for further analysis.

Symmetric Bihemispheric Sectioning of the Human Postmortem Brain

Primaire gedissocieerde embryonale hippocampale neuronale culturen zijn nuttig voor het onderzoeken van de signaalmechanismen die betrokken zijn bij neurondood. Het bepalen van het geslacht van de embryo's vóór de isolatie en dissociatie van de hippocampus maakt de voorbereiding van afzonderlijke mannelijke en vrouwelijke culturen mogelijk, waardoor de onderzoeker geslachtsspecifieke celsignalering kan identificeren en onderzoeken.

Sex Stratified neuronale kweken om ischemische Cell Death Pathways Studie

Met behulp van MRI-scans (menselijk), 3D-beeldvormingssoftware en immunohistologische analyse documenteren we veranderingen in de laterale ventrikels van de hersenen. Longitudinaal 3D-mapping van veranderingen in het volume van de laterale ventrikels en de karakterisering van periventriculaire cellulaire veranderingen die optreden in de menselijke hersenen als gevolg van veroudering of ziekte worden vervolgens gemodelleerd bij muizen.

3D modellering van de laterale ventrikels en histologische karakterisering van periventriculaire Tissue bij de mens en muis

Hier presenteren we een protocol om het minimale aantal beelden te bepalen dat geregistreerd en gemiddeld moest worden om subcorticale structuren op te lossen en te testen of de individuele lagen van de LGN op te lossen waren bij afwezigheid van fysiologische ruis.

Hoge-resolutie structurele Magnetic Resonance Imaging van de Human subcortex<I&gt; In Vivo</I&gt; En Postmortem

We beschrijven het gebruik van laser vangt microdissection te verkrijgen van monsters van afzonderlijke cel populaties van verschillende hersengebieden gen en microRNA p.a.. Deze techniek maakt het mogelijk de studie van Differentiele effecten van traumatische hersenenverwonding in bepaalde gebieden van de hersenen van de rat.

Stereotactische Atlas-geleide Laser vangt Microdissection van hersengebieden beïnvloed door traumatisch letsel

Deze paper toont het effectieve gebruik van een fiber dissectie methode te onthullen van de oppervlakkige witte stof traktaten en periventricular structuren van de menselijke hersenen, in de driedimensionale ruimte, om te helpen student begrip van ventriculaire morfologie.

Verkennen van Deep Space - blootleggen van de anatomie van de Periventricular structuren te onthullen van de laterale ventrikels van het menselijk brein

Dit artikel beschrijft een gedetailleerde methodologie voor het verkrijgen van afgevlakte tangentiële secties van zoogdieren afkomstig cortices en visualiseren van corticale modules met behulp van histochemische en immunohistochemische methoden.

Visualisatie van corticale Modules in afgeplatte zoogdieren Cortices

Multiple sclerose is een inflammatoire demyelinerende ziekte zonder genezing. Analyse van hersenweefsel biedt belangrijke aanwijzingen om de pathogenese van de ziekte te begrijpen. Hier bespreken we de methodologie en downstreamanalyse van MS hersenweefsel verzameld via een uniek snel autopsie programma in werking in de Cleveland Clinic.

Uitgebreid autopsie programma voor individuen met multiple sclerose

Dit protocol beschrijft een methode om individuele hersenverouderingstrajecten te volgen via een hersendonatieprogramma en de juiste karakterisering van hersenen. Hersendonoren zijn betrokken bij een langdurige longitudinale studie met inbegrip van seriële multi-dimensionale beoordelingen. Het protocol bevat een gedetailleerde beschrijving van de verwerking van de hersenen en een nauwkeurige diagnostische methodologie.

Abbiategrasso Brain Bank Protocol voor het verzamelen, verwerken en karakteriseren van veroudering hersenen

We presenteren een hands-on, stap-voor-stap, snel protocol voor het verwijderen en ontleden van discrete gebieden van vers hersenweefsel bij muizen. Het verkrijgen van hersengebieden voor moleculaire analyse is routine geworden in veel neurowetenschappelijke laboratoria. Deze hersengebieden worden onmiddellijk bevroren om transcriptomische gegevens van hoge kwaliteit te verkrijgen voor analyse op systeemniveau.

Microdissectie van muizenhersenen in functioneel en anatomisch verschillende regio's

Leer symmetrische bihemisferische hersensnijding bij postmortaal menselijk weefsel om ziekte-ernst en hemisferische verdeling van neuropathologische processen te beoordelen. Deze methode levert kwalitatieve en kwantitatieve gegevens voor klinische en beeldvormende correlaties.

Symmetrische Bihemispheric postmortaal Brain snijden om gezond en pathologisch Brain Voorwaarden-studie bij mensen

Meer video's verkennen