Name: Inducerende Compleet Poliep Regeneration van de aboral Physa van de Starlet Zeeanemoon Nematostella vectensis (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-01-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 17 s
Description: Leer volledige poliepregeneratie induceren bij de sterretjeszeeanemoon Nematostella vectensis. Deze methode maakt regeneratieonderzoek aan de aborale kant mogelijk voor ontwikkelingsbiologen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door een New York Stem Cell Science (NYSTEM C028107) Subsidie ​​voor GHT.

1. Conditionering van dieren voor de temperatuur, voeding en licht / donker-cyclus <ol><li> Verkrijgen Nematostella vectensis volwassenen uit een van de vele Nematostella laboratoria over de hele wereld, of een non-profit leverancier (tabel 1) </li><li> Handhaaf Nematostella bij constante temperatuur (meestal tussen 18 en 21 ° C) in het donker, in &quot;1 / 3x&quot; kunstmatige zeewater (ASW) bij een zoutgehalte van 12 delen per duizend (ppt). Handhaaf culturen in eenvoudige natronkalkglas cultuur gerechten, typisch 250 ml of 1,5 liter capaciteit 11. Let op: Deze eenvoudige kweekomstandigheden worden vaak gebruikt onder de labs die Nematostella studeren, maar de cultuur zorg kan ook worden geautomatiseerd 19. </li><li> Feed Nematostella vers uitgekomen Artemia naupliën 2 - 4x per week. Hatch Artemia cysten in volle sterkte (36 ppt) of 1 / 3x ASW bij 30 ° C, in een ondiepe rechthoekige glazen schaal 20 ofelk van een aantal kleine schaal, commerciële of zelfgemaakte pekelgarnalen broederijen. Als een incubator niet beschikbaar is, zal garnalen uitkomen bij kamertemperatuur maar doen dat langzamer. Opmerking: Dit vereist vaak meer dan 24 uur voltooid. </li><li> Vervang anemoon cultuur water minstens een keer per week. Voor de beste volwassen gezondheid, grondig te reinigen (zonder zeep) de cultuur kommen een keer per week van de geaccumuleerde slijm afscheidingen, die de vacht van de kom en val niet opgegeten voedsel en afval, en kan verwarren de dieren. </li></ol> 2. Selectie en Ontspanning van nutritioneel Geconditioneerd Dieren <ol><li> Select-maat aangepast poliepen van ongeveer dezelfde lengte (3-5 cm, wanneer natuurlijke, ontspannen) en plaats ze in een kom gescheiden van de kolonie gedurende drie dagen voor amputatie. Opmerking: Het aantal dieren geselecteerd voor het snijden wordt bepaald door het experiment wordt uitgevoerd, natuurlijk, maar in het algemeen er minimaal vijf dieren per monsterpunt zes replicaties. aldusin een typisch experiment minste 30 dieren worden voorgeselecteerd. In het algemeen is het verstandig om meer dan het minimum aantal (30) sinds amputaties die onregelmatig (zie hieronder) kan later van invloed scoren zijn te selecteren. </li><li> Verwijder de schotel van geselecteerde dieren uit de incubator naar kunstlicht ten minste één uur voor amputatie. Opmerking: Blootstelling aan licht en trillingen van de behandeling zal waarschijnlijk leiden tot de dieren te contracteren, dus ze moeten worden aangepast of &quot;relaxed&quot; door incubatie op de labtafel. Dieren zullen vuurvaste aan te raken en blootstelling aan licht te worden en op dat punt kan worden verplaatst door zachte pipetteren. </li><li> Optioneel: Verdoven van de dieren door het toevoegen van 7,5% MgCl2 (in 1 / 3x ASW). Voorzichtig voeg de MgCl2-oplossing in de kom met een standaard kunststof 5 ml pipet. Opmerking: Hoewel de dieren uiteindelijk gewend zal worden om het licht en de fysieke manipulatie, kan het voordelig zijn om dieren te verdoven te handhaven of &quot;fix&quot; thij ontspannen toestand nadat ze langwerpige 16,21,22 zijn geworden. </li><li> Gebruik een brede boring (&gt; 0,5 cm) plastic pipet over te dragen (in 1 / 3x ASW) vijf dieren van het zwembad worden geamputeerd, in de bodem van een steriele glazen snijden schotel van 100 mm diameter met 12 ppt ASW. Plaats de schotel op het podium van een stereomicroscoop met variabele vergroting tussen 10 - 40X. Opmerking: Als de dieren niet verdoofd en ontspannen voor het snijden, kunnen ze nog steeds reageren op aanraking en stereoscoop verlichting en daarmee kan het nodig zijn een paar minuten om weer ontspannen te worden. </li></ol> 3. Amputatie <ol><li> Met een steriele scalpel, amputeren de aboral Physa uit elke poliep, met als doel een deel van de Physa die ongeveer zo lang als breed en met niet mesenterium verkrijgen. Opmerking: de ideale cut site is gewoon aboral de beëindiging van het mesenterium. Op het vlak van snijden er een overgang van mesenterium goede dunne lines overeenkomstig elke mesenteriale insertie (zie figuur 1, pijlen). Afwezigheid van mesenterium is van cruciaal belang, omdat het slijm dat kan vergemakkelijken &#39;inpluggen&#39; het gat 17,30 produceert. <ol><li> Plaats de scalpel in contact met het dier op de gewenste plaats van amputatie. Doe dit hetzij zonder hulp (vrije hand) of door voorzichtig grijpen lichaam van het dier met een # 5 pincet (Dumont stijl of soortgelijke). </li><li> Snij door het weefsel door gebruik te maken van de gebogen blad van de scalpel in een &#39;rockende&#39; beweging over het lichaam. Opmerking: Het weefsel moet netjes te snijden als de scalpel wordt gewiegd en te bevrijden van het gewenste gedeelte van Physa van de donor. Echter, als een klein stukje weefsel nog steeds het lichaam en de Physa verbindt, snijd het met de scalpel. Probeer niet om de aangesloten stukken te scheiden door te trekken, omdat dit de Physa kan beschadigen. </li></ol></li><li> Verwijder elke geamputeerde &#39;donor&#39; poliep van het gerecht en terug te sturen naar een SEPArate kom met label &#39;gepoolde geamputeerden&#39;; dateren de kom en terug te sturen naar de stam. Opmerking: geamputeerde poliepen zal de aboral wond binnen een dag te genezen en dan kan normaal worden gevoed. Zij zullen een normaal uitziende Physa binnen twee weken waarna het Physa opnieuw kan worden geamputeerd indien gewenst regenereren. </li><li> Spoel de uitgesneden Physa dat de snij schotel 12 ppt ASW blijven, vervolgens over elk Physa een afzonderlijk steriel putje in een multi-well celcultuur plaat die al 10 ml 12 ppt ASW in elk putje. Opmerking: Dit voorbeeld maakt gebruik van een zes goed plaat, met elk putje die 10 ml van zeewater en vijf uitgesneden Physa. In het algemeen zeewater moet het Physa voldoende dekking om de blootstelling aan lucht te voorkomen als gevolg van beweging in de behandeling en de potentiële verdamping. De plaat of putten moet een deksel hebben. </li><li> Herhaal stap 3,1-3,3 ten minste 5 Physa te verzamelen in elk putje gereserveerd voor elke experimentele behandeling. </li><li> Incubeer de Physa bij een temperatuur die provide het beste tarief van de wedergeboorte van de geplande experimentele ondervragingen. Plaats de plaat met de Physa in een incubator temperatuur gebracht, bij een vaste temperatuur bepaald door de gewenste snelheid van regeneratie. Opmerking: De Physa zal ontbrekende weefsels regenereren en vormen een volledige poliep bij incubatie bij temperaturen tussen 15 en 27 ° C. De snelheid van regeneratie temperatuurafhankelijk is, behalve voor de eerste twee fasen. De gemiddelde dag voor het bereiken Fase 4 voor alle temperaturen 7 d na het uitsnijden en dit valt ook samen met regeneratie bij 21 ° C. Bij 27 ° C, wordt Fase 4 ongeveer 3 dagen eerder bereikt en bij 15 ° C, wordt Fase 4 vertraagd met ongeveer 3 d tegenover regeneratie bij 21 ° C (zie eveneens referentie 10). </li></ol> 4. Het beoordelen van Regeneratie met de Nematostella Regeneration Staging System (NRSS) <ol><li> De score van de Physa met behulp van een stereo-samengestelde microscoop met een variabele magnificatie (10 - 80X). De score van de vers gesneden Nematostella Physa Fase 0 en blijven scoren op hetzelfde tijdstip iedere dag na de amputatie (dpa) met behulp van de NRSS 10. Opmerking: Voor key staging criteria en details verwijzen Reference 10. <ol><li> Score Physa Fase 0 (open wond) indien een vers gesneden Physa verschijnt als een beker- vormige massa die lijkt op een slappe ballon, met een open wond is waarschijnlijk zichtbaar is. Opmerking: De wondranden Ook elkaar blijven vanaf het begin, maar het weefsel nog ingeklapt en stijfheid ontberen. De randen van de open wonde kunnen worden waargenomen radiale contractie van de wond geneest ondergaan. </li><li> Score Physa Fase 1 (Wound Closed) als de amputatie wonde lijkt gesloten. Let op: de wond locatie komt overeen met de toekomst mondelinge paal. Het buitenoppervlak rondom de toekomst orale paal kunnen gaan verschillende bogen die overeenkomt met de onderliggende stervormig symmetrisch endodermale mesenteriale inserties geven. </li><li> score physa Fase 2 (Radial bogen) indien het oppervlak van de orale paal verschijnt opgeblazen, onthullen acht verhoogde bogen gerangschikt in een stervormig symmetrisch patroon en van elkaar gescheiden door groeven. Observeren kleine, halfbolvormige blebs aan de top van de bogen. Ze zal ongeveer zo groot als breed, waarschijnlijk van voorbijgaande aard, en bestond aanvankelijk uit door een enkele ectodermale cellaag. Let op: In sommige gevallen kan dubbellaags blebs stabiliseren. Opmerking: In dit of een latere fase een slijmlaag lijken de Physa (figuur 2) in een membraneuze &#39;omhulsel&#39; kapselen. Het inkapselend materiaal moet worden verwijderd een doelpunt te vergemakkelijken. </li><li> Score Physa Fase 3 (tentakel) als de toppen van de tentakels bevattende mesodermale en ectodermale weefsels lagen stabiel worden gevormd aan de orale einde van ten minste enkele radiale bogen. Opmerking: De tentakels zijn langer dan breed zijn en minimaal beweeglijk. De Physa zal tonen gestegen, maar variabele inflatie, zodat mesenterium rudimenten kan worden visbaar uitstrekt vanaf de mesenteriale inbrengen in de lichaamsholte (coelenteron). </li><li> Score Physa Fase 4 (Linear mesenteria) indien het Physa bevat acht verschillende, zichtbare mesenteria dat in het lichaam muur tot in de coelenteron van toevoegingen, met orale-aboral lengtes die meer dan twee keer de radiale breedte gemeten van waar ze lijken aan te sluiten zijn de keelholte aboral aan zijn uiteinde (enterostome). Opmerking: vier of minder mesenteria hebben &quot;geplooide&quot; interne vrije randen. De keelholte zichtbaar. Meer dan acht tentakels zichtbaar, beweeglijk en soms rechtstreeks zij in het lichaam. </li><li> Score Physa Fase 5 (voornamelijk geplooide mesenteria) indien de Physa heeft meer dan vier mesenteria met plooien en de plooien is voller en bochtige dan in fase 4. Het dier heeft een bijna &quot;normale&quot; volwassen uitstraling, maar er zijn geen zichtbare gonadale cellen. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Lenhoff, S. G., Lenhoff, H. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLenhoff%2C+SG+%22Hydra+and+the+Birth+of+Experimental+Biology%3A+Abraham+Trembley%27s+Memoirs+Concerning+the+Natural+History+of+a+Type+of+Freshwater+Polyp+with+Arms+Shaped+like+Horns%22">Hydra and the Birth of Experimental Biology: Abraham Trembley's Memoirs Concerning the Natural History of a Type of Freshwater Polyp with Arms Shaped like Horns</a>. , The Boxwood Press. (1986).</li>
<li>Trembley, A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aTrembley%2C+A+%22M%C3%A9moires+pour+servir+%C3%A0+l%27histoire+d%27un+genre+de+polypes+d%27eau+douce%2C+%C3%A0+bras+en+forme+de+cornes%22">Mémoires pour servir à l'histoire d'un genre de polypes d'eau douce, à bras en forme de cornes</a>. , Jean & Herman Verbeek. (1744).</li>
<li>Poss, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+understanding+tissue+regenerative+capacity+and+mechanisms+in+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Advances in understanding tissue regenerative capacity and mechanisms in animals.</a> Nat Rev Genet. 11 (10), 710-722 (2010).</li>
<li>Galliot, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydra%2C+a+fruitful+model+system+for+270+years%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Hydra, a fruitful model system for 270 years.</a> Int J Dev Biol. 56 (6-8), 411-423 (2012).</li>
<li>Gold, D. A., Jacobs, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell+dynamics+in+Cnidaria%3A+are+there+unifying+principles%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Genes+Evol%22%5BJournal%5D)">Stem cell dynamics in Cnidaria: are there unifying principles?</a> Dev Genes Evol. 233 (1-2), 53-66 (2013).</li>
<li>Holstein, T. W., Hobmayer, E., Technau, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cnidarians%3A+an+evolutionarily+conserved+model+system+for+regeneration%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Cnidarians: an evolutionarily conserved model system for regeneration?</a> Dev Dyn. 226 (2), 257-267 (2003).</li>
<li>Amiel, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+Morphological+and+Cellular+Events+Underlying+Oral+Regeneration+in+the+Sea+Anemone%2C+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Characterization of Morphological and Cellular Events Underlying Oral Regeneration in the Sea Anemone, Nematostella vectensis.</a> Int J Mol Sci. 16 (12), 28449-28471 (2015).</li>
<li>Warren, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+the+perlecan%2FHSPG2+gene+and+its+activation+in+regenerating+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Evolution of the perlecan/HSPG2 gene and its activation in regenerating Nematostella vectensis.</a> PLoS One. 10 (4), e0124578(2015).</li>
<li>Gong, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrins+of+the+starlet+sea+anemone+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Bull%22%5BJournal%5D)">Integrins of the starlet sea anemone Nematostella vectensis.</a> Biol Bull. 227 (3), 211-220 (2014).</li>
<li>Bossert, P. E., Dunn, M. P., Thomsen, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+staging+system+for+the+regeneration+of+a+polyp+from+the+aboral+physa+of+the+anthozoan+Cnidarian+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">A staging system for the regeneration of a polyp from the aboral physa of the anthozoan Cnidarian Nematostella vectensis.</a> Dev Dyn. 242 (11), 1320-1331 (2013).</li>
<li>Stefanik, D. J., Friedman, L. E., Finnerty, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collecting%2C+rearing%2C+spawning+and+inducing+regeneration+of+the+starlet+sea+anemone%2C+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Collecting, rearing, spawning and inducing regeneration of the starlet sea anemone, Nematostella vectensis.</a> Nat Protoc. 8 (5), 916-923 (2013).</li>
<li>Tucker, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+thrombospondin+in+the+anthozoan+Nematostella+vectensis+is+associated+with+the+nervous+system+and+upregulated+during+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Open%22%5BJournal%5D)">A thrombospondin in the anthozoan Nematostella vectensis is associated with the nervous system and upregulated during regeneration.</a> Biol Open. 2 (2), 217-226 (2013).</li>
<li>Passamaneck, Y. J., Martindale, M. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+proliferation+is+necessary+for+the+regeneration+of+oral+structures+in+the+anthozoan+cnidarian+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Cell proliferation is necessary for the regeneration of oral structures in the anthozoan cnidarian Nematostella vectensis.</a> BMC Dev Biol. 12, (2012).</li>
<li>Trevino, M., Stefanik, D. J., Rodriguez, R., Harmon, S., Burton, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+canonical+Wnt+signaling+by+alsterpaullone+is+sufficient+for+oral+tissue+fate+during+regeneration+and+embryogenesis+in+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Induction of canonical Wnt signaling by alsterpaullone is sufficient for oral tissue fate during regeneration and embryogenesis in Nematostella vectensis.</a> Dev Dyn. 240 (12), 2673-2679 (2011).</li>
<li>Renfer, E., Amon-Hassenzahl, A., Steinmetz, P. R., Technau, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+muscle-specific+transgenic+reporter+line+of+the+sea+anemone%2C+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">A muscle-specific transgenic reporter line of the sea anemone, Nematostella vectensis.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (1), 104-108 (2010).</li>
<li>Burton, P. M., Finnerty, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conserved+and+novel+gene+expression+between+regeneration+and+asexual+fission+in+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Genes+Evol%22%5BJournal%5D)">Conserved and novel gene expression between regeneration and asexual fission in Nematostella vectensis.</a> Dev Genes Evol. 219 (2), 79-87 (2009).</li>
<li>DuBuc, T. Q., Traylor-Knowles, N., Martindale, M. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Initiating+a+regenerative+response%3B+cellular+and+molecular+features+of+wound+healing+in+the+cnidarian+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biol%22%5BJournal%5D)">Initiating a regenerative response; cellular and molecular features of wound healing in the cnidarian Nematostella vectensis.</a> BMC Biol. 12, (2014).</li>
<li>Hand, C., Uhlinger, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Asexual+reproduction+by+transverse+fission+and+some+anomalies+in+the+sea+anemone+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22Invert+Biol%22%5BJournal%5D)">Asexual reproduction by transverse fission and some anomalies in the sea anemone Nematostella vectensis.</a> Invert Biol. 114, 9-18 (1995).</li>
<li>Fritzenwanker, J. H., Technau, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+gametogenesis+in+the+basal+cnidarian+Nematostella+vectensis%28Anthozoa%29%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Genes+Evol%22%5BJournal%5D)">Induction of gametogenesis in the basal cnidarian Nematostella vectensis(Anthozoa).</a> Dev Genes Evol. 212 (2), 99-103 (2002).</li>
<li>Magie, C., Bossert, P., Aramli, L., Thomsen, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Science%27s+super+star%3A+The+starlet+sea+anemone+is+an+ideal+tool+for+student+inquiry%5BTitle%5D)+AND+%22The+Science+Teacher%22%5BJournal%5D)">Science's super star: The starlet sea anemone is an ideal tool for student inquiry.</a> The Science Teacher. 83 (3), 33-40 (2016).</li>
<li>Genikhovich, G., Technau, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+hybridization+of+starlet+sea+anemone+%28Nematostella+vectensis%29+embryos%2C+larvae%2C+and+polyps%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">In situ hybridization of starlet sea anemone (Nematostella vectensis) embryos, larvae, and polyps.</a> Cold Spring Harb Protoc. (9), (2009).</li>
<li>Magie, C. R., Pang, K., Martindale, M. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+inventory+and+expression+of+Sox+and+Fox+genes+in+the+cnidarian+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Genes+Evol%22%5BJournal%5D)">Genomic inventory and expression of Sox and Fox genes in the cnidarian Nematostella vectensis.</a> Dev Genes Evol. 215 (12), 618-630 (2005).</li>
<li>Chera, S., Kaloulis, K., Galliot, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cAMP+response+element+binding+protein+%28CREB%29+as+an+integrative+HUB+selector+in+metazoans%3A+clues+from+the+hydra+model+system%5BTitle%5D)+AND+%22Biosystems%22%5BJournal%5D)">The cAMP response element binding protein (CREB) as an integrative HUB selector in metazoans: clues from the hydra model system.</a> Biosystems. 87 (2-3), 191-203 (2007).</li>
<li>Reitzel, A. M., Burton, P. M., Krone, C., Finnerty, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+developmental+trajectories+in+the+starlet+sea+anemone+Nematostella+vectensis%3A+embryogenesis%2C+regeneration%2C+and+two+forms+of+asexual+fission%5BTitle%5D)+AND+%22Invertebr+Biol%22%5BJournal%5D)">Comparison of developmental trajectories in the starlet sea anemone Nematostella vectensis: embryogenesis, regeneration, and two forms of asexual fission.</a> Invertebr Biol. 126, 99-112 (2007).</li>
<li>Ikmi, A., McKinney, S. A., Delventhal, K. M., Gibson, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TALEN+and+CRISPR%2FCas9-mediated+genome+editing+in+the+early-branching+metazoan+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">TALEN and CRISPR/Cas9-mediated genome editing in the early-branching metazoan Nematostella vectensis.</a> Nat Commun. 5, 5486(2014).</li>
<li>Jahnel, S. M., Walzl, M., Technau, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+epithelial+organisation+of+muscle+cells+in+the+sea+anemone+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Zool%22%5BJournal%5D)">Development and epithelial organisation of muscle cells in the sea anemone Nematostella vectensis.</a> Front Zool. 11, 44(2014).</li>
<li>Kelava, I., Rentzsch, F., Technau, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+eumetazoan+nervous+systems%3A+insights+from+cnidarians%5BTitle%5D)+AND+%22Philos+Trans+R+Soc+Lond+B+Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">Evolution of eumetazoan nervous systems: insights from cnidarians.</a> Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 370 (1684), (2015).</li>
<li>Nakanishi, N., Renfer, E., Technau, U., Rentzsch, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nervous+systems+of+the+sea+anemone+Nematostella+vectensis+are+generated+by+ectoderm+and+endoderm+and+shaped+by+distinct+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Nervous systems of the sea anemone Nematostella vectensis are generated by ectoderm and endoderm and shaped by distinct mechanisms.</a> Development. 139 (2), 347-357 (2012).</li>
<li>Richards, G. S., Rentzsch, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+analysis+of+a+SoxB+gene+reveals+neural+progenitor+cells+in+the+cnidarian+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Transgenic analysis of a SoxB gene reveals neural progenitor cells in the cnidarian Nematostella vectensis.</a> Development. 141 (24), 4681-4689 (2014).</li>
<li>DuBuc, T. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+Nematostella+vectensis+embryogenesis+and+late+development+using+fluorescent+probes%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of Nematostella vectensis embryogenesis and late development using fluorescent probes.</a> BMC Cell Biol. 15, (2014).</li>
<li>Kaur, J., Debnath, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+at+the+crossroads+of+catabolism+and+anabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Autophagy at the crossroads of catabolism and anabolism.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 16 (8), 461-472 (2015).</li>
<li>Carroll, B., Korolchuk, V. I., Sarkar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amino+acids+and+autophagy%3A+cross-talk+and+co-operation+to+control+cellular+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Amino+Acids%22%5BJournal%5D)">Amino acids and autophagy: cross-talk and co-operation to control cellular homeostasis.</a> Amino Acids. 47 (10), 2065-2088 (2015).</li>
<li>Glick, D., Barth, S., Macleod, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy%3A+cellular+and+molecular+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Autophagy: cellular and molecular mechanisms.</a> J Pathol. 221 (1), 3-12 (2010).</li>
<li>Rodolfo, C., Di Bartolomeo, S., Cecconi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+in+stem+and+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Autophagy in stem and progenitor cells.</a> Cell Mol Life Sci. 73 (3), 475-496 (2016).</li>
<li>Guan, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+in+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Autophagy%22%5BJournal%5D)">Autophagy in stem cells.</a> Autophagy. 9 (6), 830-849 (2013).</li>
<li>Phadwal, K., Watson, A. S., Simon, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tightrope+act%3A+autophagy+in+stem+cell+renewal%2C+differentiation%2C+proliferation%2C+and+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Tightrope act: autophagy in stem cell renewal, differentiation, proliferation, and aging.</a> Cell Mol Life Sci. 70 (1), 89-103 (2013).</li>
<li>Varga, M., Fodor, E., Vellai, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Autophagy in zebrafish.</a> Methods. 75, 172-180 (2015).</li>
<li>Varga, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+is+required+for+zebrafish+caudal+fin+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Differ%22%5BJournal%5D)">Autophagy is required for zebrafish caudal fin regeneration.</a> Cell Death Differ. 21 (4), 547-556 (2014).</li>
<li>Gonzalez-Estevez, C., Salo, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+and+apoptosis+in+planarians%5BTitle%5D)+AND+%22Apoptosis%22%5BJournal%5D)">Autophagy and apoptosis in planarians.</a> Apoptosis. 15 (3), 279-292 (2010).</li>
<li>Buzgariu, W., Chera, S., Galliot, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+to+investigate+autophagy+during+starvation+and+regeneration+in+hydra%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Methods to investigate autophagy during starvation and regeneration in hydra.</a> Methods Enzymol. 451, 409-437 (2008).</li>
<li>Tettamanti, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+in+invertebrates%3A+insights+into+development%2C+regeneration+and+body+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Pharm+Des%22%5BJournal%5D)">Autophagy in invertebrates: insights into development, regeneration and body remodeling.</a> Curr Pharm Des. 14 (2), 116-125 (2008).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Gebruik van Nematostella als model voor wondgenezing en regeneratie wordt steeds populairder. Aldus is het belangrijk om te kunnen de morfologische patroon van een bepaald protocol zien voordat effectieve cellulaire en moleculaire analyses kunnen worden toegewezen en vergeleken. Nematostella een hoge regeneratieve &quot;flexibiliteit&quot;, in staat om bijna hervormen ontbrekende structuur afgezet op elke locatie, op post-planula levensstadia. Zo hebben verschillende onderzoekers onderzocht regeneratie...

De waarneming van de wedergeboorte in één hydra was het rudimentaire gebeurtenis in de komst van de biologie als een experimentele wetenschap 1,2. Regeneration blijft een fenomeen van buitengewoon brede aantrekkingskracht te bioloog en leg persoon gelijk. Het potentieel voor ontwikkelingsstoornissen biologen, artsen, biomedische wetenschappers en ingenieurs weefsel te begrijpen en het overwinnen van de beperkingen op de menselijke regeneratie maakt regeneratie biologie meer dan de op zich interessant. Nu, met het gebruik van nieuwe technologieën zoals genome sequencing en winst en verlies van functie gereedschap, het veld is klaar om uit elkaar regeneratieve mechanismen plagen en om uiteindelijk te begrijpen hoe de verschillende soorten kunnen regenereren, terwijl anderen dat niet kunnen. De mate van gemeenschappelijkheid in de moleculaire, cellulaire en morfologische reacties nog worden opgehelderd, maar tot nu toe lijkt het erop dat de fundamentele reacties onder dieren die kan regenereren meer lijkt dan zijn Imagi zou hebbenned slechts tien jaar geleden 3. Cnidarians in het bijzonder gemakkelijk op bijna al hun lichaamsdelen regenereren midden van een breed spectrum van morfologische diversiteit. Van de eenzame zoetwater poliep, Hydra samen met de kleine mariene poliepen die immense koraalriffen te bouwen, om de complexe koloniale siphonophoren, zoals de Portugese Man-O-War, regeneratie is vaak een manier van voortplanting, in aanvulling op een mechanisme voor het repareren of de hervorming van beschadigde of verloren lichaamsdelen als gevolg van een blessure en predatie. Of de diverse soorten Cnidaria gebruiken dezelfde of verschillende mechanismen voor de regeneratie is een fundamenteel interessante vraag 4-6. Wij, en anderen zijn het ontwikkelen van de anthozoan, Nematostella vectensis als een model voor regeneratie 7-17. We hebben onlangs ontwikkelde een staging-systeem voor het beschrijven van de regeneratie van een hele lichaam van een morfologisch uniform stukje weefsel doorsneden uit de Aboral einde van de poliep 10. Terwijl Nematostella poliepen kan regenereren wanneer doorsneden op elk niveau, hebben we gekozen om volwassenen te snijden op een aboral positie in de meest morfologisch eenvoudige regio, de Physa, mede omdat deze dicht bij de normale vlak van natuurlijke aseksueel kernsplijting 18, en ook omdat het vergunningen observatie en moleculaire analyse van hoe een hele lichaam in elkaar zetten van de eenvoudigste morfologische componenten. De Nematostella Regeneration Staging System (NRSS) voorziet in een relatief eenvoudige set van morfologische benchmarks die kunnen worden gebruikt om de voortgang van elk aspect van de wedergeboorte scoren door een geamputeerde Physa, onder normale kweekomstandigheden of experimenteel verstoorde situaties zoals kleine molecule behandelingen, genetische manipulatie of milieu-wijziging. Zoals verwacht, is de NRSS steeds aangenomen morfologisch stellage waarop de cellulaire en moleculaire gebeurtenissen regeneratie kan worden verwezen10. Tenslotte onze manier van snijden produceert een gapend gat verschillende ordes van grootte hoger dan de pin punt lek gebruikt in een recent onderzoek 17, maar beide wonden te helen in ongeveer 6 uur. Documenteren visueel arrestatie en verschillende fasen van wondsluiting moet voorstellen experimentele benaderingen om de schijnbare onafhankelijkheid van de grootte van een wond en de tijd die nodig is om te sluiten leggen. Zo kan een dieper visuele begrip van de aboral amputatie proces, die door dit protocol, zal verder onderzoek helpen in dit model regeneratie systeem en de toepassing van deze enscenering systeem met behulp van Nematostella vectensis verbreden.

<table><tbody><tr><td>Nematostella vectensis, volwassenen</td><td>Marine Biological Lab (MBL)</td><td></td><td>non-profit leverancier</td></tr><tr><td>Glazen kweekbakje, 250 mL</td><td>Carolina Biological Supply</td><td>741004</td><td>250 mL</td></tr><tr><td>Glazen kweekbakje, 1.500 mL</td><td>Carolina Biological Supply</td><td>741006</td><td>1.500 mL</td></tr><tr><td>Polyethyleen overdrachtspijp, 5&nbsp;mL</td><td>USA Scientific&nbsp;</td><td>1022-2500</td><td>smalle boring, gegradueerd</td></tr><tr><td>Polyethyleen overdrachtspijp, taps toelopend</td><td>Samco</td><td>202-205</td><td>snijd 1 inch van de punt af om een brede boring te maken</td></tr><tr><td>Wegwerp scalpel</td><td>Feather Safety Razor Co. Ltd</td><td>nr. 10</td><td>mesje moet gebogen zijn</td></tr><tr><td>#5 Dumont fijne punttang</td><td>Roboz</td><td>RS5045</td><td>alternatieve leveranciers beschikbaar</td></tr><tr><td>Pyrex petrischaal, 100 mm diameter</td><td>Corning</td><td>3160</td><td>kan worden vervangen door andere glazen petrischalen</td></tr><tr><td>Steriele 6-well plaat</td><td>Corning Falcon&nbsp;</td><td>353046</td><td>of soortgelijk van andere fabrikant</td></tr><tr><td>Steriele 12-well plaat</td><td>Nunc&nbsp;</td><td>150628</td><td>of soortgelijk van andere fabrikant</td></tr><tr><td>Steriele 24-well plaat</td><td>Cellstar, Greiner bio-one</td><td>662-160</td><td>of soortgelijk van andere fabrikant</td></tr><tr><td>Brineeuw kweekset</td><td>San Francisco Bay; drsfostersmith.com</td><td>CD-154005</td><td>optie voor het kweken van brineeuw</td></tr><tr><td>pyrex bakvorm</td><td>gewoon in supermarkten</td><td></td><td>optie voor het kweken van brineeuw</td></tr><tr><td>kunstmatig zeewater mix 50 gal of meer&nbsp;</td><td>Instant Ocean; drsfoster-smith.com</td><td>CD-116528</td><td>andere merken kunnen volstaan</td></tr><tr><td>Kunststof emmer voor voorraad ASW bereiding</td><td>diverse</td><td></td><td>gewone 25 gallon plastic vuilnisbak OK</td></tr><tr><td>Polypropyleen Carboy</td><td>Carolina Biological Supply</td><td>716391</td><td>Voor werkende voorraad ASW bij 12 ppt</td></tr><tr><td>Meetbeker, 4.000 mL</td><td>PhytoTechnology Laboratories</td><td>B199</td><td>Voor verdunning van 36 ppt ASW naar 12 ppt</td></tr><tr><td>Stereomicroscoop en lichtbron</td><td>diverse&nbsp;</td><td></td><td>met continue 1 - 40X vergroting</td></tr></tbody></table>

inducerende compleet poliep regeneration van de aboral physa van de starlet zeeanemoon nematostella vectensis

Inducing Complete Polyp Regeneration from the Aboral Physa of the Starlet Sea Anemone Nematostella vectensis

Cnidarians, en in het bijzonder Hydra, werden de eerste dieren getoond om beschadigde of doorgesneden structuren, en inderdaad dergelijke studies aantoonbaar gelanceerd moderne biologische onderzoek door het werk van Trembley meer dan 250 jaar geleden te regenereren. Momenteel de studie van regeneratie een opleving waarbij zowel &quot;klassieke&quot; regeneratief organismen, zoals de Hydra, planaria en Urodeles, alsook een verbreding spectrum van soorten verspreid over het gebied metazoen uit sponzen tot zoogdieren gezien. Naast haar intrinsieke belangstelling als een biologisch fenomeen, begrijpen hoe regeneratie werkt in een verscheidenheid van soorten zullen ons te informeren over de vraag of regeneratieve processen delen gemeenschappelijke kenmerken en / of soorten of context-specifieke cellulaire en moleculaire mechanismen. De starlet zeeanemoon, Nematostella vectensis, is een opkomende modelorganisme voor het regenereren. Net als Hydra, Nematostella is een lid van de oude stam, Cnidaria, maar binnen tHij klasse Anthozoa, een zuster clade de hydrozoa dat is evolutionair meer basaal. Zo aspecten van de wedergeboorte in Nematostella zal interessant zijn om te vergelijken en het contrast met die van de Hydra en andere cnidarians. In dit artikel presenteren we een methode te halveren, observeren en classificeren regeneratie van het aborale uiteinde van de Nematostella volwassene die Physa genoemd. De Physa ondergaat splijting natuurlijk als middel ongeslachtelijke voortplanting, en hetzij natuurlijke splijting of handmatig amputatie van de Physa triggers hergroei en hervorming van complexe morfologie. Hier hebben we deze eenvoudige morfologische veranderingen in een Nematostella Regeneration Staging System (de NRSS) gecodificeerd. We gebruiken de NRSS de effecten van chloroquine, een remmer van lysosomale functie blokkeert autofagie testen. De resultaten laten zien dat de regeneratie van poliep structuren, met name de mesenteria, abnormaal wanneer autofagie wordt geremd.

De voortgang van morfologische gebeurtenissen tijdens regeneratie afgesneden Physa wordt getoond in Figuur 1A, die representatief uitzicht Physa in elke NRSS fase omvat. De typische Physa cut site is aangegeven op de volwassen (pijlpunten). De foto&#39;s in figuur 1A tonen geleidelijke herstel van mondelinge en anatomische eigenschappen van vers gesneden Physa door middel van volledig gevormd poliep. Figuur 1B, C de inrichting van intern...

Hier demonstreren we hoe we regeneratie kunnen induceren en monitoren in de Starlet Zeeanemoon Nematostella vectensis, een model cnidarian anthozoan. We laten zien hoe we kunnen amputeren en regeneratie categoriseren met behulp van een morfologisch stadiasysteem, en we gebruiken dit systeem om een vereiste voor autofagie in regenererende poliepstructuren te onthullen.

Inducerende Compleet Poliep Regeneration van de aboral Physa van de Starlet Zeeanemoon Nematostella vectensis

Cnidarians, and specifically Hydra, were the first animals shown to regenerate damaged or severed structures, and indeed such studies arguably launched ...

Het algemene doel van deze procedure is om de voorspelbare reeks morfologische veranderingen te illustreren die zich voordeden tijdens de regeneratie van een complete poliep uit een klein weefselsegment dat werd verwijderd van de aborale punt van nematostella vectensis. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen in de regeneratiebiologie, zoals hoe cellen op de plaats van een wond zich reorganiseren en inzetten om de ontbrekende structuren opnieuw te maken. Ik had voor het eerst het idee voor deze methode omdat ik wilde zien hoe een relatief complexe poliep zichzelf weer kon samenstellen, beginnend met de minste hoeveelheid morfologische informatie. Visuele demonstratie van deze methode is cruciaal omdat de voortgang van het stadium na de initiële verwonding soms wordt verduisterd door een slijmlaag.Over het algemeen zullen personen die nieuw zijn met deze methode moeite hebben om een volledige scheiding van het weefsel op de plaats van de wond te verkrijgen, vanwege de zachte, plakkerige, gelatineachtige aard van de poliep. Begin deze procedure met het conditioneren van nematostella vectensis zoals beschreven in het tekstprotocol. Het is vooral belangrijk bij het gebruik van deze techniek dat de geselecteerde dieren dezelfde grootte hebben en dezelfde kweekgeschiedenis hebben, zoals identieke voeding en andere conditieparameters.Verwijder de schaal met geselecteerde dieren uit de incubator in kamerlicht minstens een uur voorafgaand aan de amputatie. Gebruik een plastic pipet met een grote opening om de vijf dieren van de te amputeren groep over te brengen naar de bodem van een steriele glazen snijschotel met een diameter van 100 millimeter, bevattende kunstzeewater met een saliniteit van 12 delen per duizend. Plaats de schaal op de draaischijf van een stereomicroscoop met variabele vergroting tussen 10 tot 40x.Selecteer poliepen van ongeveer dezelfde lengte en plaats ze gedurende drie dagen vóór de amputatie in een kom, gescheiden van de kolonie. Amputeer met een steriele scalpel de aborale physa van elke poliep om een sectie van de physa te verkrijgen die ongeveer zo lang is als breed en geen mesenterium bevat. Om dit te bereiken, plaatst u de mesklauw in contact met het dier op de gewenste amputatieplaats.Dit gebeurt onverzorgd of door het lichaam van het dier voorzichtig vast te grijpen met een tang van nummer vijf. Snijd door het weefsel door de gebogen kling van de scalpel in een schommelende beweging over het lichaam te heffen. Verwijder elke geamputeerde donorpoliep uit de schaal en plaats deze terug in een aparte kom gelabeld als 'verzamelde amputees'.Na het dateren van de kom, plaats deze terug in de voorraadcultuur. Spoel de uitgesneden physa die in de snijschaal achterblijven in kunstzeewater met een saliniteit van 12 delen per 1.000. Breng vervolgens elke physa over naar een afzonderlijke steriele put in een celcultuurplaat met meerdere putten die 10 milliliter kunstzeewater bevat met een saliniteit van 12 delen per 1.000 in elke put.Herhaal deze stappen om minstens vijf physa in elke put te verzamelen die gereserveerd zullen worden voor elke experimentele behandeling. Plaats de plaat met de physa in een temperatuurgeregelde incubator op een vaste temperatuur bepaald door de gewenste regeneratiesnelheid. Score de physa met behulp van een stereo compound microscoop met variabele vergroting.Score de vers gesneden nematostella physa als stadium nul, en blijf scoren op dezelfde tijd elk dag na de amputatie, of DPA, met behulp van de NRSS. Score de physa als stadium nul als een vers gesneden physa eruitziet als een komvormige massa die lijkt op een slappe ballon met een open wondsite die waarschijnlijk zichtbaar is. Score een physa als stadium een als de amputatiewond gesloten lijkt.Score een physa als stadium twee als het oppervlak van de aurale pool opgeblazen lijkt, met acht verhoogde bogen gerangschikt in een radiaal symmetrisch patroon en gescheiden door groeven. In stadium twee, observeer kleine hemi-sferische blaren op de top van de bogen die ongeveer even hoog als breed zijn, waarschijnlijk tijdelijk en in eerste instantie bestaande uit een enkele ectodermale cel laag. Naarmate de physa veroudert, kan deze worden omhuld door slijm, wat voorzichtig met een pincet moet worden verwijderd.Score een physa als stadium drie als de knoppen van de tentakels die endoderm- en ectodermweefsellagen bevatten stabiel zijn gevormd aan het aurale uiteinde van ten minste enkele radiale bogen. Score een physa als stadium vier als de physa acht verschillende zichtbare mesenteriën bevat die zich uitstrekken in een coelenteron vanaf invoegingen in de lichaamswand met aurale aborale lengtes die meer dan tweemaal hun radiale breedte zijn, gemeten vanaf waar ze lijken te verbinden met de farynx aan het aborale uiteinde, of enterostome. Ten slotte, score een physa als stadium vijf als de physa meer dan vier mesenteriën met plooien heeft, en de plooien zijn voller en kronkelige dan in stadium vier.In stadium vijf heeft het dier een bijna normale volwassen uiterlijk, maar er zijn geen zichtbare gonadale cellen. Deze groep controle nematostella physa behandeld met 0,1 procent DMSO is volledig geregenereerd tot stadium vijf. Physa behandeld met chloroquine, faalde echter om volledig gevormde mesenteriën te vormen.Een close-up toont zowel de aanwezigheid als het ontbreken van plooien in de mesenteriën in een physa die werd geïncubeerd in chloroquine. Deze grafiek illustreert de totale resultaten van chloroquine behandeling. Elke behandeling tussen 10 en 50 micromolar veroorzaakte vergelijkbare defecten, meestal het ontbreken van volledige hervorming van mesenteriën, aangezien de mesenteriën geen plooien hebben.Eenmaal onder de knie, kan deze techniek in minder dan een uur worden uitgevoerd voor elke zes-putten plaat met 30 gesneden physa. Scoren is snel, misschien een half uur vereist voor elke replicaatplaat. Na het bekijken van deze video, zou u een goed begrip moeten hebben van hoe de physa te amputeren om de morfologische veranderingen te visualiseren die optreden tijdens de regeneratie van een complete poliep uit

inducing-complete-polyp-regeneration-from-aboral-physa-starlet-sea

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Ontwikkelingsbiologie

Methoden die morphant embryo's zijn essentieel voor ontwikkelingsstoornissen mechanismen en gen-regulatorische netwerken te bestuderen. De zee ster Patiria miniata is een opkomende modelsysteem voor deze studies. Hier presenteren we een protocol voor het verkrijgen van gameten, producerende culturen van embryo's, en snelle micro-injectie van zygoten van deze soort.

Een methode voor micro-injectie van Patiria Minata Zygotes

De planarian Schmidtea mediterranea is een uitstekend model voor het bestuderen van stamcellen en weefselregeneratie. Deze publicatie beschrijft een methode om selectief verwijderen van één orgaan, de keelholte, door dieren naar de chemische natriumazide bloot te leggen. Dit protocol wordt ook uitgelegd welke methoden voor de controle van de keelholte regeneratie.

Chemische amputatie en regeneratie van de keelholte in de Planarian Schmidtea mediterranea

De reus Ciliophora, Stentor coeruleus, is een uitstekend systeem voor studeren regeneratie en wondgenezing. We presenteren procedures voor de vaststelling van de Stentor celculturen van afzonderlijke cellen of cel fragmenten, inducerende regeneratie door snijden cellen, chemisch inducerende de regeneratie van de membranellar band en mondelinge toestellen, imaging en analyse van cel regeneratie weer gecontroleerd.

Methoden voor de studie van regeneratie in de Stentor

Het doel van dit protocol is het genotype van de zeeanemonen Nematostella vectensis tijdens de gastrulatie zonder het embryo op te offeren.

Genotypering van zeeanemonen tijdens de vroege ontwikkeling

Hier beschrijven we een protocol om ruw gifextract uit zeeanemoon te verkrijgen en de hemolytische en fosfolipase-activiteit ervan te detecteren.

Identificatie van hemolytische en fosfolipase-activiteit in ruwe extracten van zeeanemonen door Eenvoudige Bioassays

Poliep bail-out is een proces dat wordt veroorzaakt door acute stress, waarbij koraalpoliepen het weefsel verteren dat hen verbindt met hun kolonie en zich ervan losmaken om als individuen te leven. Het huidige protocol beschrijft hoe koraalmicropropagatie kan worden geïnduceerd door bail-out met behulp van hypersaline of calciumvrije zeewaterbehandelingen.

Het induceren van poliep bail-out in koraalkolonies om geïndividualiseerde micropropagates te verkrijgen voor laboratoriumexperimenteel gebruik

Dit artikel beschrijft een methode om wonden te creëren in het epitheel van een levende Clytia hemisphaerica medusa en wondgenezing in beeld te brengen met een hoge resolutie in vivo. Daarnaast wordt een techniek gepresenteerd om kleurstoffen en medicijnen te introduceren om signaalprocessen in de epitheelcellen en extracellulaire matrix tijdens wondgenezing te verstoren.

Karakterisering van epitheliale wondgenezing in vivo met behulp van het Cnidarische modelorganisme Clytia hemisphaerica

We beschrijven een eenvoudig protocol voor het verwijderen van de statocyst en bijbehorende weefsels in de ctenofoor Mnemiopsis leidyi, die vatbaar is voor live beeldvorming.

Chirurgische verwijdering van een complex sensorisch orgaan bij sterk regeneratieve ctenoforen

Drosophila bloedcellen, of hemocyten, circuleren tussen residente locaties en circulatie.  In de larve lokaliseren residente (sessile) hemocyten zich in inductief micro-omgevingen, de hematopoietische zakken, terwijl circulerende hemocyten vrij bewegen in de hemolymf. Het doel van dit protocol is de gestandaardiseerde isolatie en kwantificering van deze twee, gedragsmatig verschillende maar onderling uitwisselbare, hemocytpopulaties.

Testen Bloedcel Populaties van de<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Larva

Hier schetsen we de workflow voor het gebruik van het TetON-systeem om weefselspecifieke genregulatie te bereiken in de regenererende staartvin van een volwassen zebravis.

Gebruik van de Teton systeem om te studeren moleculaire mechanismen van zebravis Regeneratie

Leer volledige poliepregeneratie induceren bij de sterretjeszeeanemoon Nematostella vectensis. Deze methode maakt regeneratieonderzoek aan de aborale kant mogelijk voor ontwikkelingsbiologen.

Inducerende Compleet Poliep Regeneration van de aboral Physa van de Starlet Zeeanemoon Nematostella vectensis

Meer video's verkennen