Name: Neurofarmacologische Manipulatie van ingetogen en vrij vliegende Honingbijen, Apis mellifera (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-11-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 8 s
Description: Leer neurofarmacologische manipulatie van ingetogen en vrij vliegende honingbijen, Apis mellifera. Deze methoden omvatten orale toediening en injecties in de thorax, ocellus of ocellaire tractus.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit project werd gefinancierd door ARC-subsidie DP0986021 en NHMRC-subsidie 585442. ABB wordt ondersteund door een ARC Future Fellowship (FT140100452). JAP wordt ondersteund door een iMQRES-beurs toegekend door Macquarie University en door een DAAD-Doktorandenstipendium toegekend door de German Academic Exchange Service. JMD wordt ondersteund door CNRS en University Paul Sabatier.

1. Drug Administration voor Uitgeruste Bees <ol><li> orale behandeling <ol><li> Bereid 1,5 M sucrose oplossing door het mengen van 257 g sucrose met 500 ml water (het is gemakkelijker om deze hoeveelheid sucrose oplossen in kokend water). Bewaar sucrose-oplossing bij 4 ° C tot gebruik. OPMERKING: Sucrose-oplossing biedt een zeer gastvrije omgeving voor bepaalde micro-organismen, en dus gemakkelijk verontreinigd raakt en onverteerbaar voor bijen. Bulk sucrose oplossing kan worden hoeveelheden verdeeld en opgeslagen bij -20 ° C tot gebruik. </li><li> Beslis over een geschikte dosis drug (hoe het te bereiken, komt aan bod in de discussie hieronder), en voor te bereiden een oplossing zodanig dat de dosis geprefereerde geneesmiddel wordt opgelost in 20 ui sucrose-oplossing (bijvoorbeeld om te leveren 20 ug, verdunnen drug in een verhouding van 1 mg / ml). Harness bijen volgens Felsenberg et al. (2011) 16. Doe deze stap ten minste 12 uur voor behandeling met geneesmiddelen om ervoor te zorgen dat de bijen niet meer gestresst out van gebruik te maken van wanneer het geneesmiddel oplossing wordt gepresenteerd. OPMERKING: Voor meer consistente resultaten, het beste bijen verhongeren (door ingezet bijen in een incubator bij 34 ° C en 70% luchtvochtigheid) O / N. </li><li> Met behulp van een micropipet, raakt een daling van 1,5 M sucrose water om de antenne van een benut bij. Als de snuit is verlengd, raakt een 20 ul druppel 1,5 M sucrose die het geneesmiddel rechtstreeks aan de slurf van de honingbij. Zorg ervoor dat de bijen verteert alles. Als controle voertuig te gebruiken 1,5 M sucrose oplossing zonder toegevoegde geneesmiddelen. LET OP: De hoeveelheid sucrose oplossing zou moeten worden aangepast op basis van experimentele plannen. Als appetitive conditioning is bedoeld, het voeden van de bijen gewoon voor de training zal bemoeien met responsiviteit bijen. </li><li> Gooi of terzijde bijen dat niet alle van de sucrose verbruiken. LET OP: Als een groot aantal bijen niet aan de sucrose-oplossing te drinken, moet het voederen schema aan te passen. </li></ol></li><li> Injectie in de thorax <ol><li> Bereid drug in honingbij de Bel 17 als volgt: <ol><li> Mix en autoclaaf 7,45 g NaCl, 0,448 g KCI, 0,812 g MgCl2, 0,735 g CaCl2, 54,72 g sucrose, 4,95 g D-glucose en 2,48 g HEPES in 1000 ml water. Wees voorzichtig bij het opslaan van de Bel als het gemakkelijk is besmet. Aliquot en bewaar Ringer bij -20 ° C tot gebruik. </li><li> Los het geneesmiddel in Ringer-oplossing en vervolgens verdund zodat de gewenste hoeveelheid aanwezig is 5 ul. Als voorbeeld, wanneer de bijen worden behandeld met 5 ug van een geneesmiddel, 1 g kan aanvankelijk worden opgelost in 1 ml Ringer, alvorens te worden verdund 1: 1000 in Ringer voor een definitieve oplossing van 1 ug / ul. OPMERKING: U handel verkrijgbaar PBS (fosfaat-gebufferd Salin) kan worden gebruikt in plaats van Ringer oplossing. </li></ol></li><li> Maak een microscalpel door het afbreken van de hoek van een tweesnijdend scheermesje meteen bladhouder. Bevestig het blad fragment van een mes houder, zodat het een mooi mes met een scherpe eindpunt. </li><li> Onder een stereomicroscoop, zorgvuldig gebruik microscalpel een 2 mm gat juist boven het schildje naast de achterste vleugel werkwijze thorax een bijen. Vermijd het snijden te diep, omdat dit zou kunnen verwonden vlucht spieren, en wees voorzichtig aan de vleugel scharnieren te voorkomen. Idealiter alleen knippen drie zijden, zodat de flap van cuticula later kan worden teruggevouwen naar de plaats van letsel te sluiten. </li><li> Met behulp van een micropipet, depot 5 μlL gekleurde (of PBS) die het geneesmiddel bovenop de opening in de thorax. nauwlettend onder de microscoop om ervoor te zorgen het hele druppel wordt geabsorbeerd in de hemolymfe. Gebruik van de Bel (of PBS) als een controle voertuig. </li><li> Indien mogelijk, bewegen de cuticula flap terug over het gat. Na 5-10 uur, zal het opnieuw te bevestigen en te verzegelen. Opmerking: Als alternatief voor deze techniek injecteren 1 pi rechtstreeks in de thorax met een glazen injectiespuit, na het openen van eell gat in het midden van de frenum (dwarslijn in het achterste gedeelte van het schildje) met een injectienaald (diameter: 0,6 mm, G: 23). Dit omzeilt de noodzaak om eerst de thorax gesneden met een scalpel en de injectieplaats kleiner, maar deze methode zal de injectieplaats blootgesteld verlaten. </li></ol></li><li> ocellus injectie LET OP: Dit is een methode geschikt is voor het leveren van moleculen in de hele kop capsule, in de hemolymfe. <ol><li> Bereid drugs zoals in 1.2.1, maar aan te passen geneesmiddel concentraties zodanig dat de gewenste dosis zullen worden opgenomen in 1 pl van Ringer of PBS (minder volume kan worden geabsorbeerd door de ocellus gat dan door de thorax). </li><li> Bereid een microscalpel als in 1.2.2. Onder een stereomicroscoop, blokkeer je de kop van een ingezet bij in plaats van het vullen van de nek spleet met was. Gebruik lage temperatuur smeltende was (bijvoorbeeld tandheelkundige wax) om schadelijke antennal olfactorische receptoren of andere cellen die ik kan voorkomenmportant voor de beoordeling van het gedrag (bijvoorbeeld, olfactorische leren). Dan voorzichtig de lens van de mediaan ocellus door de tip van de microscalpel onder de lens en de lens voorzichtig breken vrij van de kop capsule. LET OP: Het is ook mogelijk om de was zorgvuldig te plaatsen over de antennes om verplaatsing te voorkomen. </li><li> Voorzichtig pipet geneesmiddel op de ocellus gat. Wacht tot alle in de kop capsule wordt genomen. Verwijder tandheelkundige was van de antennes en laat de bijen om te rusten voor een tijdje voordat de voortzetting van de experimentele procedure. Gebruik van de Bel (of PBS) als een controle voertuig. </li></ol></li><li> Injectie in de ocellar darmkanaal NB: De ocellar darmkanaal bevat grote vezels, aan te sluiten op de meeste regio&#39;s van de centrale hersenen 18. Deze behandelmethode maakt aanbrengen verbindingen alleen de hersenen, maar niet gericht op specifieke subregio&#39;s van de hersenen. <ol><li> Bereid bijtje als in 1.3.2. en verwijder de lens van de mediaan ocellus met de tip van een microscalpel als in 1.3.3. LET OP: Dit kan worden gedaan om 2 uur voor de injectie. Op basis van onze ervaring, gevoed bijen zijn beter in staat om te gaan met deze operatie dan uitgehongerd bijen </li><li> Vul een 10 ul glazen injectiespuit met een kleine overdruk (bijvoorbeeld 33, diameter: 210 pm) naald met geneesmiddeloplossing bereid zoals in 1.3.1. </li><li> Met behulp van een handmatige micromanipulator, plaatst de spuittip door de ocellar netvlies in het hoofd capsule tot een diepte van 50 urn en injecteer 250 nl oplossing. </li><li> Spoel na gebruik de injectiespuit 3 maal met gedestilleerd water en 3 maal met 75% ethanol. </li></ol></li><li> Micro-injectie in bepaalde hersenstructuren OPMERKING: Naast de bovengenoemde systematische behandelingen, is het mogelijk om micro-injecties uitvoeren naar bepaalde hersenstructuren. Dit zorgt voor farmacologische manipulatie van één of meer hersenen, terwijl anderen beïnvloed. Dit werkthet beste met hersengebieden die gemakkelijk te herkennen uit de voorste hersenen oppervlak (bijv antennaal lobben, champignon lichaam calyces of verticale lobben, of de optische kwabben) zijn, maar ook andere regio&#39;s zijn gericht. Houd er rekening mee dat de oriëntatie (anterior / posterior, dorsale / ventrale) verwijst naar het lichaam as, in plaats van, dan naar de neuraxis 19. <ol><li> Bereid het geneesmiddel in Ringer of PBS op dezelfde wijze als in 1.2.1, toevoegen van een fluorescerend (bijvoorbeeld 0,5 mg / ml dextran, Alexa 546 of 568 fluor) of niet-fluorescerende kleurstof (bijvoorbeeld, 1 mM methyleenblauw). LET OP: De toevoeging van een fluorescerende kleurstof zal de verificatie van de injectie locatie kan worden na het experiment voorbij is (met behulp van confocale microscopie, volgende hersenen dissectie), terwijl niet-fluorescerende kleurstoffen mogelijk directe controle tijdens het experiment. </li><li> Om glazen pipetten voor injectie te maken, plaatst glas haarvaten van de juiste diameter in de houder klemmen van een elektrode trekker (1,0 mm voor de standaard holder opgenomen voor de in de lijst genoemde materialen microinjector). Pas pull en temperatuurinstellingen tot een ongeveer 0,5 cm lang tip produceren (instellingen verschillend voor elke trekker, zelfs als hetzelfde model wordt gebruikt). OPMERKING: Idealiter twee pipetten getrokken uit een glazen moet dezelfde lengte en vorm hebben, zodat beide kunnen worden gebruikt. </li><li> Onder een stereomicroscoop, breken de uiteinden een buitendiameter van ongeveer 10-15 urn, gebaseerd op visuele schatting met een weegschaal op een raster ingevoegd in het oculair. De stappen op de schaal worden bepaald door de fabrikant kan worden gecorrigeerd voor de vergroting gebruikt. </li><li> Vervolgens vul het glas pipetten met de oplossing te injecteren. Als glazen capillairen met filamenten worden gebruikt, vul de pipet door het plaatsen van de achterkant in de drug oplossing, anders tip te vullen met behulp van microloader tips. </li><li> Plaats de gevulde glazen pipet in de capillaire houder van een microinjectie, die wordt bestuurd door een handmatig of elektronisch micromanipulator. </li><li> Kalibreer de microinjector het gewenste volume te injecteren (0,5-2 nl, afhankelijk van de grootte van de hersenstructuur getarget). Hiervoor direct te injecteren in een kleine petrischaal met minerale olie en de diameter van de druppel met het raster. Wijzig instellingen totdat het gewenste volume is bereikt. </li><li> Bevestig de kop van een ingezet bij gebruik zachte tandheelkundige was zoals in 1.3.2, voor het snijden van een opening in het voorste deel van het hoofd capsule, met een microscalpel, met drie delen: een net onder de mediaan ocellus (ventrale), een voor de rand van de rechter- of linkeroog en boven de antenne stengels (dorsale). Gebruik een stuk van tandheelkundige wax aan de geopende klep op zijn plaats houden. </li><li> Duw klieren en de luchtpijp die bovenop de hersenen vernietigd met behulp van fijne pincet, vervolgens een kleine breuk in de neurilemma (zeer dun vlies rond de hersenen) boven de beoogde hersenstructuur. NB: Als er veel bijen in een keer worden behandeld, deze procedurekan eerder worden uitgevoerd; Maar wees voorzichtig om niet bijen in deze toestand te lang (niet meer dan 30 min) te verlaten, omdat hun hersenen zouden kunnen uitdrogen. </li><li> Steek de punt in het gewenste gebied van de hersenen, en pas de diepte loodrecht op de hersenen oppervlak (bijvoorbeeld 60 micrometer voor paddestoel lichaam kelken). Injecteer de vooraf ingestelde volume. Voor laterale gebieden van de hersenen, injecteren bilateraal (dwz u een injectie om elk halfrond). Als een niet-fluorescerende kleurstof wordt gebruikt, zorgen de injectie plaatsvond op de juiste regio van observatie tijdens het injecteren. Als een fluorescerende kleurstof wordt gebruikt hetzelfde doen bij tl-licht met behulp van een stereomicroscoop met een fluorescentie-viewing-systeem. </li><li> Daarna plaatst u de geopende klep terug over het hoofd van de bijen. Smelt een kristal van eicosaan, die ongeveer 1 mm in diameter, met een dunne draad rond het uiteinde van een micro soldeerbout (smelttemperatuur is 35-37 ° C) en sluit de sneden. Dit zal sterk verminderen van de sterfte. </li><li> Laat de ... Losbee van het harnas voor gedragsanalyse (maar zie bespreking), of te houden in het harnas voor experimenten op ingetogen bijen - bijvoorbeeld proboscis extensie reflex (PER) testen 20. </li><li> Als een fluorescerende kleurstof werd gebruikt, ervoor zorgen dat de injectie raakte het gebied van belang na het experiment is boven het gebruik van een confocale laser scanning microscoop (Fig. 1). LET OP: Dit is vooral handig wanneer de doelgroep diepere hersengebieden (waar het moeilijk zou zijn om niet-fluorescerende kleurstof te zien tijdens de injectie fase). </li></ol></li></ol> 2. Drug Administration Methoden voor Free-flying Bees <ol><li> orale behandeling <ol><li> Bereid geneesmiddel op dezelfde manier als in stappen 1.1.1-1.1.2. Voeg drug oplossing voor een feeder en plaats in de koelkast voor opslag. OPMERKING: Elke feeder zal doen, zoals een omgekeerde dop van de fles of een potje omgekeerd op vloeipapier. </li><li> Train bijen aan een zwaartekracht feeder met 1 M of 0,5M sucrose oplossing door een feeder dichtbij de korf. Zodra bijen beginnen fourageren op de feeder, geleidelijk verder weg, tot het op een comfortabele afstand om te voorkomen dat gestoken (minimum 5 m). </li><li> Paint-mark bijen om bij te houden van de individuele bijen te houden. Maak een lijst van alle kleurencombinaties die zullen worden gebruikt. Wanneer een honingbij landt op de feeder, zorgvuldig markeren haar buik met twee kleuren, en noteer op de lijst die de combinatie wordt genomen. </li><li> Wissel de zwaartekracht feeder voor een feeder die het geneesmiddel / sucrose-oplossing. Let op de gemarkeerde bijen die de feeder te bezoeken. Vang elke ongemarkeerde bij een bezoek aan de feeder als bijen zijn productief recruiters, en de nummers van de bijen een bezoek aan de gedrogeerde feeder kan snel uit de hand. Dit is vooral problematisch wanneer hetzelfde experiment wordt uitgevoerd op opeenvolgende dagen, naïef bijen niet langer naïef kunnen zijn. LET OP: Als een alternatief voor het trainen van individuele bijen aan een feeder, vorige auteurs hebben met succes fed-drug geregen sucrose water om een hele korf 21-23. </li></ol></li><li> plaatselijke behandeling Opmerking: Het doel is om de verbinding van belang te lossen in een oplosmiddel dat de wasachtige insect cuticula kunnen dringen. Verschillende oplosmiddelen kunnen worden gebruikt voor dit doel. De meest gebruikte omvatten aceton, dimethylformamide (DMF) en dimethylsulfoxide (DMSO). <ol><li> Beoordelen welke oplosmiddel het beste werkt voor de verbinding bij de hand. Als er een sterke fenotype wordt verwacht van overdosering (bijvoorbeeld verlamming of de dood), behandel bijen (stap 2.2.2) met een hoge dosis (bijvoorbeeld 20 ug cocaïne 7) opgelost in elk van de verschillende oplosmiddelen en nauwlettend totdat verlamming of de dood. </li><li> Met een 1 pi microcapillaire (of een injectiespuit, die op geschikte herhalende dispenser monteerbaar) en microcapillaire houder trekken 1 pl van de geneesmiddeloplossing (bijvoorbeeld 381, g / ul cocaïne) in de capillair. Verdrijf de druppel, en zorgvuldig schilderen op de thorax van een duidelijke bee. Bedek groot als van een gebied met een mogelijke oplossing, in plaats van het verlaten van een vaste druppel, als bij is dan waarschijnlijk te verzorgen af. Wees voorzichtig niet om de verbinding contact opnemen met de vleugel scharnieren, of dit kan het tekenen van de thorax en langs de vleugels, waar het zonder te worden opgenomen in de hemolymfe zal verdampen. OPMERKING: Afhankelijk van het onderzoeksdoel, kan deze methode ook gebruikt worden om medicijnen toe te dienen aan de buik van de bijen. Echter, drugs bereikt het CZS sneller en in grotere hoeveelheden wanneer toegepast op de thorax 24 .Het werkwijze werkt evengoed met ingezet als bij vrij vliegende bijen. </li></ol></li><li> verdampte behandeling <ol><li> Ontbinden drugs (voorheen deze methode is gebruikt om cocaïne leveren honingbijen 10) in 100% ethanol. Oplosbaarheid gen mag een hydrochloride of andere zoutvormen van het nietdrug indien mogelijk. Bij een verdunning te bereiden, zodat de hoeveelheid aan een bij te leveren is aanwezig in 100 pl. Gebruik pure ethanol als een controle voertuig. </li><li> Om een filament maken, gebruikt u dezelfde procedure als McClung en Hirsh 25. <ol><li> Kort toegelicht: liquideren nichroom draad strak om een ​​spijker en hechten aan twee elektrische draden (één aan elk uiteinde van de gloeidraad). Verwijder de nagel. De resterende nichroom spoel wordt aangeduid als de gloeidraad. </li><li> Leid de twee draden goed door gaten in het deksel van een 50 ml centrifugebuis, die resistent zijn tegen de gekozen temperatuur dient. Lijm de draden op zijn plaats met vloeibare siliconen. LET OP: Dit zal de buis luchtdicht te maken. Dit is essentieel om secundaire blootstelling aan het experiment en kunnen de bijen worden behandeld met het geschikte dosis. </li></ol></li><li> Bevestig de kabels van de gloeidraad op een voedingsbron. Met behulp van een thermokoppel om de temperatuur te meten vanhet filament, experimenteren met verschillende spanning / stroom combinatie totdat die resulteert in een geschikt temperatuurprofiel voor het geneesmiddel in kwestie, idealiter, die zorgt voor 10 sec verwarming of minder. Dit is zeer belangrijk, het relevante literatuur (bijvoorbeeld, zodat cocaïne vluchtig moet worden verwarmd tot ten minste 200 ° C, maar bij temperaturen boven 350 ° C wordt afgebroken tot secundaire verbindingen 26). </li><li> pipet zorgvuldig 100 pl geneesmiddel bevattende ethanol oplossing op de gloeidraad. Verdeel de vloeistof over zoveel filament oppervlak mogelijk, omdat dit de verdamping efficiency zal toenemen. Laat het filament bloot bij kamertemperatuur totdat alle ethanol verdampt. Opmerking: Als de ethanol onvoldoende is verdampt, zal bijen worden behandeld met zowel het middel van keuze en ethanol. Bijen zijn uiterst gevoelig voor ethanol en sommige geneesmiddelen hebben synergistische interacties met ethanol stellen die voorspanning experimental resultaten. </li><li> Zodra de ethanol volledig verdampt (drug neerslag kan meestal worden gezien op de droge vezel onder een microscoop), vang een vrij vliegende bij in een 50 ml buis. sluit voorzichtig het deksel met de gloeidraad. </li><li> Schakel de stroom gedurende 10 seconden, schakel de stroom uit en wacht nog eens 50 sec (zodat de vervluchtigde verbinding te koelen en daardoor condenseren of borg). Laat de bijen. OPMERKING: Hoewel deze behandeling methode werkt uitstekend voor free-vliegende bijen, kan het net zo goed met de bijen ingezet worden gebruikt. Eenvoudigweg de spande bijen in een 50 ml buis. Reload de gloeidraad, zoals beschreven in 2.3.4 tussen bijen. Voor hogere doorvoer kan meerdere filamenten parallel worden gebruikt. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Frisch, K. . von B. ees <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFrisch%2C+K.+von+Bees+%22Their+Vision%2C+Chemical+Senses%2C+and+Language%22">Their Vision, Chemical Senses, and Language</a>. , Cornell University Press. Itacha, NY. (1971).</li>
<li>Giurfa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+amazing+mini-brain%3A+lessons+from+a+honey+bee%5BTitle%5D)+AND+%22Bee+World%22%5BJournal%5D)">The amazing mini-brain: lessons from a honey bee.</a> Bee World. 84 (1), 5-18 (2003).</li>
<li>Giurfa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+and+neural+analysis+of+associative+learning+in+the+honeybee%3A+a+taste+from+the+magic+well%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Behavioral and neural analysis of associative learning in the honeybee: a taste from the magic well.</a> J. Comp. Physiol. 193 (8), 801-824 (2007).</li>
<li>Perry, C. J., Barron, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Honey+bees+selectively+avoid+difficult+choices%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Honey bees selectively avoid difficult choices.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 110 (47), 19155-19159 (2013).</li>
<li>Giurfa, M., Sandoz, J. -C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invertebrate+learning+and+memory%3A+Fifty+years+of+olfactory+conditioning+of+the+proboscis+extension+response+in+honeybees%5BTitle%5D)+AND+%22Learn.+Mem%22%5BJournal%5D)">Invertebrate learning and memory: Fifty years of olfactory conditioning of the proboscis extension response in honeybees.</a> Learn. Mem. 19 (2), 54-66 (2012).</li>
<li>Srinivasan, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Honey+bees+as+a+model+for+vision%2C+perception%2C+and+cognition%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Honey bees as a model for vision, perception, and cognition.</a> Annu. Rev. Entomol. 55, 267-284 (2010).</li>
<li>Søvik, E., Cornish, J. L., Barron, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cocaine+tolerance+in+honey+bees%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Cocaine tolerance in honey bees.</a> PLoS One. 8 (5), e64920(2013).</li>
<li>Søvik, E., Barron, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invertebrate+models+in+addiction+research%5BTitle%5D)+AND+%22Brain.+Behav.+Evol%22%5BJournal%5D)">Invertebrate models in addiction research.</a> Brain. Behav. Evol. 82 (3), 153-165 (2013).</li>
<li>Søvik, E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Reward+processing+and+responses+to+drugs+of+abuse+in+the+honey+bee%2C+Apis+mellifera%22">Reward processing and responses to drugs of abuse in the honey bee, Apis mellifera</a>. , Macquarie University. Australia. November (2013).</li>
<li>Søvik, E., Even, N., Radford, C. W., Barron, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cocaine+affects+foraging+behaviour+and+biogenic+amine+modulated+behavioural+reflexes+in+honey+bees%5BTitle%5D)+AND+%22Peer+J%22%5BJournal%5D)">Cocaine affects foraging behaviour and biogenic amine modulated behavioural reflexes in honey bees.</a> Peer J. 2, e662(2014).</li>
<li>Abramson, C. I., Stone, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+development+of+an+ethanol+model+using+social+insects+I%3A+behavior+studies+of+the+honey+bee+%28Apis+mellifera+L.%29%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol.+Clin.+Exp.+Res%22%5BJournal%5D)">The development of an ethanol model using social insects I: behavior studies of the honey bee (Apis mellifera L.).</a> Alcohol. Clin. Exp. Res. 24, 1153-1166 (2000).</li>
<li>Sauer, S., Kinkelin, M., Herrmann, E., Kaiser, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+dynamics+of+sleep-like+behaviour+in+honey+bees%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+A+Neuroethol.+Sensory%2C+Neural%2C+Behav.+Physiol%22%5BJournal%5D)">The dynamics of sleep-like behaviour in honey bees.</a> J. Comp. Physiol. A Neuroethol. Sensory, Neural, Behav. Physiol. 189 (8), 599-607 (2003).</li>
<li>Münch, D., Kreibich, C. D., Amdam, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+and+its+modulation+in+a+long-lived+worker+caste+of+the+honey+bee%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Aging and its modulation in a long-lived worker caste of the honey bee.</a> J. Exp. Biol. 216 (Pt 9), 1638-1649 (2013).</li>
<li>Cheeseman, J. F., Winnebeck, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((General+anesthesia+alters+time+perception+by+phase+shifting+the+circadian+clock%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">General anesthesia alters time perception by phase shifting the circadian clock.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. , (2012).</li>
<li>Schulte, C., Theilenberg, E., Müller-Borg, M., Gempe, T., Beye, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+efficient+integration+and+expression+of+piggyBac-derived+cassettes+in+the+honeybee+%28Apis+mellifera%29%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Highly efficient integration and expression of piggyBac-derived cassettes in the honeybee (Apis mellifera).</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 111 (24), 9003-9008 (2014).</li>
<li>Felsenberg, J., Gehring, K. B., Antemann, V., Eisenhardt, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioural+pharmacology+in+classical+conditioning+of+the+proboscis+extension+response+in+honeybees+%28Apis+mellifera%29%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Behavioural pharmacology in classical conditioning of the proboscis extension response in honeybees (Apis mellifera).</a> J. Vis. Exp. (47), e2282(2011).</li>
<li>Burger, H., Ayasse, M., Dötterl, S., Kreissl, S., Galizia, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perception+of+floral+volatiles+involved+in+host-plant+finding+behaviour%3A+Comparison+of+a+bee+specialist+and+generalist%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+A+Neuroethol.+Sensory%2C+Neural%2C+Behav.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Perception of floral volatiles involved in host-plant finding behaviour: Comparison of a bee specialist and generalist.</a> J. Comp. Physiol. A Neuroethol. Sensory, Neural, Behav. Physiol. 199 (9), 751-761 (2013).</li>
<li>Pan, K. C., Goodman, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ocellar+projections+within+the+central+nervous+system+of+the+worker+honey+bee%2C+Apis+mellifera%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Ocellar projections within the central nervous system of the worker honey bee, Apis mellifera.</a> Cell Tissue Res. 176 (4), 505-527 (1977).</li>
<li>Ito, K., Shinomiya, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+systematic+nomenclature+for+the+insect+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">A systematic nomenclature for the insect brain.</a> Neuron. 81, 755-765 (2014).</li>
<li>Bitterman, M. E., Menzel, R., Fietz, A., Schäfer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Classical+conditioning+of+proboscis+extension+in+honeybees+%28Apis+mellifera%29%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Psychol%22%5BJournal%5D)">Classical conditioning of proboscis extension in honeybees (Apis mellifera).</a> J. Comp. Psychol. 97 (2), 107-119 (1983).</li>
<li>Barron, A. B., Robinson, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+modulation+of+task+performance+by+octopamine+in+honey+bee+%28Apis+mellifera%29+division+of+labour%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+A+Neuroethol.+Sens.+Neural.+Behav.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Selective modulation of task performance by octopamine in honey bee (Apis mellifera) division of labour.</a> J. Comp. Physiol. A Neuroethol. Sens. Neural. Behav. Physiol. 191 (7), 659-668 (2005).</li>
<li>Schulz, D. J., Sullivan, J. P., Robinson, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Juvenile+Hormone+and+Octopamine+in+the+Regulation+of+Division+of+Labor+in+Honey+Bee+Colonies%5BTitle%5D)+AND+%22Horm.+Behav%22%5BJournal%5D)">Juvenile Hormone and Octopamine in the Regulation of Division of Labor in Honey Bee Colonies.</a> Horm. Behav. 42 (2), 222-231 (2002).</li>
<li>Schulz, D. J., Elekonich, M. M., Robinson, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biogenic+amines+in+the+antennal+lobes+and+the+initiation+and+maintenance+of+foraging+behavior+in+honey+bees%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Biogenic amines in the antennal lobes and the initiation and maintenance of foraging behavior in honey bees.</a> J. Neurobiol. 54 (2), 406-416 (2003).</li>
<li>Barron, A. B., Vander Meer, R. K., Maleszka, J., Robinson, G. E., Maleszka, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparing+injection%2C+feeding+and+topical+application+methods+for+treatment+of+honeybees+with+octopamine%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">Comparing injection, feeding and topical application methods for treatment of honeybees with octopamine.</a> J. Insect Physiol. 53 (2), 187-194 (2007).</li>
<li>McClung, C., Hirsh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stereotypic+behavioral+responses+to+free-base+cocaine+and+the+development+of+behavioral+sensitization+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Stereotypic behavioral responses to free-base cocaine and the development of behavioral sensitization in Drosophila.</a> Curr. Biol. 8 (2), 109-112 (1998).</li>
<li>Martin, B. R., Lue, L. P., Boni, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pyrolysis+and+volatilization+of+cocaine%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Anal.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Pyrolysis and volatilization of cocaine.</a> J. Anal. Toxicol. 13 (3), 158-162 (1989).</li>
<li>Lefer, D., Perisse, E., Hourcade, B., Sandoz, J. -C., Devaud, J. -M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+waves+of+transcription+are+required+for+long-term+memory+in+the+honeybee%5BTitle%5D)+AND+%22Learn.+Mem%22%5BJournal%5D)">Two waves of transcription are required for long-term memory in the honeybee.</a> Learn. Mem. 20 (1), 29-33 (2012).</li>
<li>Urlacher, E., Soustelle, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Honey+Bee+Allatostatins+Target+Galanin%2FSomatostatin-Like+Receptors+and+Modulate+Learning%3A+A+Conserved+Function%3F%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Honey Bee Allatostatins Target Galanin/Somatostatin-Like Receptors and Modulate Learning: A Conserved Function?</a> PLoS One. 11 (1), e0146248(2016).</li>
<li>Stollhoff, N., Menzel, R., Eisenhardt, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+recovery+from+extinction+depends+on+the+reconsolidation+of+the+acquisition+memory+in+an+appetitive+learning+paradigm+in+the+honeybee+%28Apis+mellifera%29%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Spontaneous recovery from extinction depends on the reconsolidation of the acquisition memory in an appetitive learning paradigm in the honeybee (Apis mellifera).</a> J. Neurosci. 25 (18), 4485-4492 (2005).</li>
<li>Barron, A. B., Maleszka, R., Helliwell, P. G., Robinson, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+cocaine+on+honey+bee+dance+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Effects of cocaine on honey bee dance behaviour.</a> J. Exp. Biol. 212 (2), 163-168 (2009).</li>
<li>Devaud, J. -M., Papouin, T., Carcaud, J., Sandoz, J. -C., Grünewald, B., Giurfa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+substrate+for+higher-order+learning+in+an+insect%3A+Mushroom+bodies+are+necessary+for+configural+discriminations%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">Neural substrate for higher-order learning in an insect: Mushroom bodies are necessary for configural discriminations.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. , 1-9 (2015).</li>
<li>Vergoz, V., Roussel, E., Sandoz, J. -C., Giurfa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aversive+learning+in+honeybees+revealed+by+the+olfactory+conditioning+of+the+sting+extension+reflex%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Aversive learning in honeybees revealed by the olfactory conditioning of the sting extension reflex.</a> PLoS One. 2 (3), e288(2007).</li>
<li>Henry, M., Béguin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+common+pesticide+decreases+foraging+success+and+survival+in+honey+bees%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">A common pesticide decreases foraging success and survival in honey bees.</a> Science. 336 (6079), 348-350 (2012).</li>
<li>Søvik, E., Perry, C. J., LaMora, A., Barron, A. B., Ben-Shahar, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Negative+impact+of+manganese+on+honeybee+foraging%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Lett%22%5BJournal%5D)">Negative impact of manganese on honeybee foraging.</a> Biol. Lett. 11 (3), 20140989(2015).</li>
<li>Farooqui, T., Vaessin, H., Smith, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Octopamine+receptors+in+the+honeybee+%28Apis+mellifera%29+brain+and+their+disruption+by+RNA-mediated+interference%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">Octopamine receptors in the honeybee (Apis mellifera) brain and their disruption by RNA-mediated interference.</a> J. Insect Physiol. 50 (8), 701-713 (2004).</li>
<li>Guo, X., Su, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recipe+for+a+Busy+Bee%3A+MicroRNAs+in+Honey+Bee+Caste+Determination%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Recipe for a Busy Bee: MicroRNAs in Honey Bee Caste Determination.</a> PLoS One. 8 (12), e81661(2013).</li>
<li>Cristino, A. S., Barchuk, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroligin-associated+microRNA-932+targets+actin+and+regulates+memory+in+the+honeybee%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Commun%22%5BJournal%5D)">Neuroligin-associated microRNA-932 targets actin and regulates memory in the honeybee.</a> Nat. Commun. 5, 5529(2014).</li>
<li>Vargaftig, B. B., Coignet, J. L., de Vos, C. J., Grijsen, H., Bonta, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mianserin+hydrochloride%3A+Peripheral+and+central+effects+in+relation+to+antagonism+against+5-hydroxytryptamine+and+tryptamine%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Mianserin hydrochloride: Peripheral and central effects in relation to antagonism against 5-hydroxytryptamine and tryptamine.</a> Eur. J. Pharmacol. 16 (3), 336-346 (1971).</li>
<li>Beggs, K. T., Tyndall, J. D. A., Mercer, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Honey+bee+dopamine+and+octopamine+receptors+linked+to+intracellular+calcium+signaling+have+a+close+phylogenetic+and+pharmacological+relationship%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Honey bee dopamine and octopamine receptors linked to intracellular calcium signaling have a close phylogenetic and pharmacological relationship.</a> PLoS One. 6 (11), (2011).</li>
<li>Matsumoto, Y., Menzel, R., Sandoz, J. -C., Giurfa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revisiting+olfactory+classical+conditioning+of+the+proboscis+extension+response+in+honey+bees%3A+a+step+toward+standardized+procedures%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Revisiting olfactory classical conditioning of the proboscis extension response in honey bees: a step toward standardized procedures.</a> J. Neurosci. Methods. 211 (1), 159-167 (2012).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

De hierboven beschreven methoden kunt eenvoudige, effectieve en robuuste behandeling van ofwel free-flying of benut honingbijen. Deze werkwijzen kunnen op tal experimentele paradigma en biologische bevat (Tabel 1). Alle free-flying werkwijzen kunnen eenvoudig worden toegepast op benut bijen. Het omgekeerde is minder succesvol, maar omdat tijdelijke beperking en invasieve behandelmethoden vaak compromis vliegende vermogen bijen. De methoden zijn gepresenteerd vanuit een brein...

Sinds Karl von Frisch toegelicht hun danstaal 1, hebben de bijen een populaire studie soort bleef voor onderzoekers in het gedrag van dieren en neurobiologie. In de afgelopen jaren een groot aantal nieuwe disciplines zijn ontstaan op de kruising van deze twee gebieden, en diverse andere disciplines (zoals moleculaire biologie, genomics, en informatica) hebben samen met hen ontstaan. Dit heeft geleid tot een snelle ontwikkeling van nieuwe modellen is te begrijpen hoe gedrag resulteert uit activiteit in het zenuwstelsel. Vanwege het unieke lifestyle, rijke gedragsrepertoire, en het gemak van de experimentele en farmacologische manipulatie, hebben de bijen in de voorhoede van deze revolutie bleef. Honingbijen worden gebruikt om fundamentele neurobiologische vragen zoals die ten grondslag liggen aan leren en geheugen 2,3, besluitvorming 4, olfactorische 5 of visuele verwerking 6 bestuderen. In de afgelopen jaren, de honey bee is zelfs gebruikt als een model voor de studie onderwerpen algemeen gereserveerd voor medisch onderzoek, zoals de effecten van verslavende drugs 7-11, slaap 12, 13 veroudering, of de onderliggende mechanismen narcose 14. In tegenstelling tot de klassieke genetische modelorganismen (bijvoorbeeld D. melanogaster, C. elegans, M. musculus), zijn er maar weinig genetische hulpmiddelen beschikbaar voor het manipuleren neurale functies honingbijen, hoewel dit nog verandert 15. In plaats daarvan hebben honingbij studies vooral vertrouwd op farmacologische manipulaties. Dit is zeer succesvol geweest; De diversiteit van bijenonderzoek zodanig dat verschillende werkwijzen voor farmacologische toediening nodig. Onderzoek met honingbijen behandelt de meest uiteenlopende vragen, wordt bestudeerd door onderzoekers uit verschillende disciplines en achtergronden, en maakt gebruik van een verscheidenheid aan experimentele benaderingen. veel reseboog vragen vereisen bijen ofwel vrij vliegen, vrij interactie in hun kolonie, of beide. Dit kan het moeilijk maken om bij te houden van de afzonderlijke proefdieren te houden, en maakt terughoudendheid of infusen onhaalbaar. Om de diversiteit van de honingbij onderzoek tegemoet te komen, een verscheidenheid van drug delivery methoden nodig, waardoor robuuste en flexibele administratie met dien verstande dat de farmacokinetische en farmacodynamische profielen, invasiviteit van de methode en de betrouwbaarheid, past het paradigma in kwestie. Vanwege deze uiteenlopende behoeften, hebben de meeste onderzoeksgroepen hun eigen unieke Drug Administration methoden ontwikkeld. Tot nu toe, dit is een sterkte van de bij onderzoeksgemeenschap; het heeft geleid tot de ontwikkeling van reeksen methoden waardoor toediening van hetzelfde geneesmiddel in verschillende omstandigheden. Ons doel is om geen enkele gestandaardiseerde methode voor farmacologische manipulatie van bijen te ontwikkelen, maar om methoden te benadrukken dathebben bewezen bijzonder succesvol te zijn, en helpen onderzoekers nemen deze. We bespreken de basisprincipes van hun werking en hun voordelen en nadelen.

<table><tbody><tr><td>Sucrose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S8501</td><td>Elke leverancier is voldoende</td></tr><tr><td>Sodium Chloride</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S7653</td><td></td></tr><tr><td>Potassium Chloride</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9333&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Magnesium Chloride hexahydrate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2670</td><td></td></tr><tr><td>Calcium Chloride dihydrate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C8106</td><td></td></tr><tr><td>Dextrose monohydrate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>49159</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate Buffer Saline (PBS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4417</td><td></td></tr><tr><td>Protection Wax</td><td>Dentaurum</td><td>124-305-00</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>dimethylformamide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D4551</td><td></td></tr><tr><td>95% Ethanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>493511</td><td></td></tr><tr><td>Glass capillary</td><td>WPI</td><td>1B100F-3</td><td></td></tr><tr><td>23 G NanoFil needle</td><td>WPI</td><td>NF33BV-2</td><td></td></tr><tr><td>Very fine forsceps</td><td>Dumont</td><td>0208-55-PO</td><td></td></tr><tr><td>Electrode puller</td><td>SRI</td><td>2001</td><td></td></tr><tr><td>FemtoJet Microinjector</td><td>Eppendorf</td><td>5247 000.01</td><td></td></tr><tr><td>Eicosane</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>219274</td><td></td></tr><tr><td>manual micromanipulator</td><td>Brinkmann Instrumentenbau</td><td>MM-33</td><td></td></tr><tr><td>electronic micromanipulator</td><td>Luigs &amp; Neumann Feinmechanik + Elektortechnik</td><td>Junior unit XYZ</td><td></td></tr><tr><td>stereomicroscope</td><td>Leica</td><td>M80</td><td></td></tr><tr><td>soldering iron</td><td>Weller</td><td>WESD51</td><td></td></tr><tr><td>Dextran, Alexa Fluor 546, 10,000 MW</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>D-22911</td><td></td></tr><tr><td>Dextran, Alexa Fluor 568, 10,000 MW</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>D-22912</td><td></td></tr><tr><td>small Petri dish</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5481</td><td></td></tr><tr><td>mineral oil</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5904</td><td></td></tr><tr><td>50 ml Centrifuge tube</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>339652</td><td></td></tr><tr><td>forceps</td><td>Australian Entomological Supplies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Blade holder and breaker</td><td>Australian Entomological Supplies</td><td>E130</td><td></td></tr><tr><td>Feather double edged razor blade</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>50-949-135</td><td></td></tr><tr><td>Nichrome wire</td><td></td><td></td><td>Elke leverancier is voldoende</td></tr><tr><td>Electrical wires</td><td></td><td></td><td>Elke leverancier is voldoende</td></tr><tr><td>Model paint</td><td>Tamiya USA</td><td>Afhankelijk van de kleur</td><td></td></tr><tr><td>Repeating dispenser</td><td>Hamilton company</td><td>PB-600-1</td><td></td></tr><tr><td>Glass syringe</td><td>WPI</td><td>NANOFIL</td><td></td></tr><tr><td>flourescence viewing system</td><td>Nightsea</td><td>SFR-GR</td><td></td></tr><tr><td>graticule</td><td>ProSciTech</td><td>S8014-24</td><td></td></tr><tr><td>microcapillary with holder</td><td>Drummond</td><td>1-000-0010</td><td></td></tr><tr><td>Liquid silicone</td><td></td><td></td><td>Elke leverancier is voldoende</td></tr><tr><td>Thermocouple</td><td>Digitech</td><td>QM-1324</td><td></td></tr><tr><td>Micropipette</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

neurofarmacologische manipulatie van ingetogen en vrij vliegende honingbijen,<em&gt; apis mellifera</em

Neuropharmacological Manipulation of Restrained and Free-flying Honey Bees, Apis mellifera

Honingbijen demonstreren verbazingwekkend leervermogen en geavanceerde sociaal gedrag en communicatie. Bovendien is hun hersenen is klein, eenvoudig te visualiseren en te bestuderen. Daarom hebben de bijen al lang een geliefd model onder neurobiologists en neuroethologists voor het bestuderen van de neurale basis van sociaal en natuurlijk gedrag. Het is echter belangrijk dat de experimentele technieken voor bijen studie niet interfereren met het gedrag bestudeerd. Hierdoor was het noodzakelijk om een ​​reeks van technieken voor farmacologische manipulatie van honingbijen ontwikkelen. In dit artikel tonen we aan methoden voor de behandeling van ingehouden of vrij vliegende honingbijen met een brede waaier van farmacologische middelen. Deze omvatten zowel niet-invasieve methoden zoals orale en topische behandelingen, evenals meer invasieve methoden maken het precies geneesmiddelafgifte in zowel systemische of gelokaliseerde wijze. Tot slot bespreken we de voor- en nadelen van elke methode en beschrijfvoorkomende hindernissen en de beste manier om te overwinnen hen. We sluiten af ​​met een discussie over het belang van het aanpassen van de experimentele methode om de biologische vragen in plaats van andersom.

Een selectie van representatieve resultaten van de hierboven beschreven werkwijzen zijn getoond, primair te tonen dat de werkwijzen maken farmacologische middelen naar de hersenen bereiken en beïnvloeden honingbij gedrag. Specifieke effecten op hersenen processen kunnen gemakkelijk worden verkregen na injectie thorax. Omdat farmacologische middelen geïnjecteerd door de...

Dit manuscript beschrijft meerdere protocollen voor het toedienen van farmacologische middelen aan de bijen, waaronder eenvoudige niet-invasieve methoden voor vrij vliegende bijen, evenals meer invasieve varianten die precies gelokaliseerde behandeling van ingehouden bijen mogelijk.

Neurofarmacologische Manipulatie van ingetogen en vrij vliegende Honingbijen,<em&gt; Apis mellifera</em

Honey bees demonstrate astonishing learning abilities and advanced social behavior and communication. In addition, their brain is small, easy to visualize ...

Het algemene doel van deze procedures is om farmacologische middelen op een betrouwbare en robuuste wijze toe te dienen aan het centraal zenuwstelsel van honingbijen of soortgelijke insecten. Deze methoden kunnen helpen bij het beantwoorden van kernvragen in de vakgebieden sociobiologie, neuro-ethologie en imkerij, zoals het onderzoeken van de neuromechanismen van sociaal gedrag. Het belangrijkste voordeel van deze technieken is dat ze het mogelijk maken om de neurobiologie te bestuderen in niet-modelorganismen, zoals de honingbij, waar genetische instrumenten momenteel beperkt zijn.De procedure zal worden gedemonstreerd door Jenny Plath, een promovendus van het Neuroethology Lab aan de Macquarie University. Geneesmiddelen kunnen oraal of via injectie worden toegediend. Injecties kunnen worden toegediend in de thorax, in de ocellus of in het ocellaire traject.Ocellus-injecties dienen medicijnen toe aan de gehele kop, terwijl injecties in het ocellaire traject gericht zijn op specifieke hersengebieden. Maak voor alle injecties een microscalpel door de hoek van een tweesnijdend scheermesje met een meshouder af te breken. Bevestig het mesfragment aan een meshouder zodanig dat er een goed mes ontstaat met een scherp uiteinde.Maak voor een thoracale injectie een gat van twee millimeter vlak boven het scutellum, naast het posterieure vleugeluitsteeksel van de thorax van een bij. Vermijd te diep snijden, omdat dit de vliegspieren kan beschadigen, en wees voorzichtig om de vleugelscharnieren te vermijden. Snijd idealiter slechts drie zijden, zodat de flap van de cuticula later kan worden teruggevouwen om de plek van de beschadiging te sluiten.Injecteer nu het geneesmiddel in de thorax. Plaats vervolgens de cuticula-flap terug over het gat; na tien uur zal deze opnieuw hechten en afsluiten. Om toegang te krijgen tot de hersenen, wordt de kop van een vastgezette bij gefixeerd door de nekholte te vullen met hand-opgewarmde tandheelkundige was, om beschadiging van de olfactorische receptoren van de antennes of andere cellen die belangrijk kunnen zijn voor het gedrag van de bij te voorkomen.De antenne kan ook worden vastgezet met tandheelkundige was. Verwijder vervolgens met het microscalpel voorzichtig de lens van de mediane ocellus door de punt van het microscalpel onder de lens te plaatsen en de lens voorzichtig los te breken van de kopkapsel. Om het middel in het gehele kopkapsel te laten trekken, wordt het middel voorzichtig met een pipet op het gat van de ocellus aangebracht; wacht vervolgens tot het is ingetrokken.Als alternatief kunnen subregio's van de hersenen worden getarget door injectie via het ocellaire tractus, bijvoorbeeld door 250 nanoliters van het middel te injecteren op een diepte van 50 microns om hersenstructuren naast de ocellus te targeten. Verwijder vervolgens de tandheelkundige was en laat de bij een tijdje rusten voordat de experimentele procedure wordt voortgezet. Om injectienaaldjes voor te bereiden, worden glazen buisjes van één millimeter uitgetrokken om een tip van ongeveer 0,5 centimeter lang te produceren.Breek vervolgens onder een stereomicroscoop de punten om een opening met een buitendiameter van ongeveer 10 tot 15 micron te maken. Dit kan worden gemeten met een schaal op een oculairmicrometer. Vul nu een injectienaald met de drugsolution.Bevestig vervolgens bij het injectiesysteem de geladen injectienaald aan de micromanipulator. Test het injectiesysteem in minerale olie en kalibreer het om een bolus van 0,5 tot twee nanoliter af te leveren, afhankelijk van de grootte van de beoogde hersenstructuur. Meet met een schaalverdeling de diameter van de druppels om hun volume te berekenen.Om de kop van een vastgezetten bij te fixeren, gebruikt u zoals voorheen zachte tandheelkundige was. Maak vervolgens met een microscalpel een opening in het voorste gedeelte van de kopcapsule door middel van drie sneden: één net onder de mediane ocellus, één op de rand van het rechter- of linkeroog en één boven de antennebases. Gebruik een stukje tandheelkundige was om de geopende flap op zijn plaats te houden.Schuif vervolgens de klieren en de trachea voorzichtig opzij met een fijne pincet en maak een kleine opening in het neurilemma boven de beoogde hersenstructuur. Voer nu de punt van de glazen pipet in de gewenste hersenregio in, bij voorkeur loodrecht op het harsenoppervlak tot de benodigde diepte om de doelstructuur te bereiken. Injecteer daarna de drugbolus.Bij het targeten van gepaarde hersengebieden wordt in elk hemisfeer één injectie uitgevoerd om beide hemisferen te beïnvloeden. Als er een fluorescerende kleurstof met de bolus wordt geïnjecteerd, kunnen de oppervlakkige hersengebieden worden bekeken met fluorescent licht. Andere gebieden kunnen later worden gecontroleerd met behulp van confocale microscopie.Vervang na de injectie de flap van de cuticula en dicht de snede door een eicosaan-kristal van ongeveer één millimeter diameter over de cuticula te smelten met een dunne draad die is bevestigd aan een microsoldeerbout. Dit zal de mortaliteit aanzienlijk verminderen. Om een medicijn toe te dienen dat zo vluchtig is dat het via een verhitte nichroomdraad wordt toegediend, dient het opgelost in pure ethanol te worden klaargemaakt.Om voorzichtig gaten in het dopje van een 50 millimeter buis te boren, voedt u de twee draden door de gaten. Om een gloeidraad te maken, wikkelt u nichrome-draad strak rond een spijker, bevestigt u de nichrome-draad aan twee elektrische draden en verwijdert u vervolgens de spijker. Bevestig daarna de draden en dicht de gaten af met siliconen.Sluit nu de draden aan op een stroombron. Gebruik een thermokoppel om de temperatuur van de gloeidraad te meten. Om het apparaat te kalibreren, pipetteert u voorzichtig 2 µL van de drugsolution op de gloeidraad en laat u de ethanol bij kamertemperatuur volledig verdampen.Varieer de huidige spanning zodat de drugbolus binnen tien seconden na het inschakelen van de stroom volatiliseert. De drug mag niet worden afgebroken door thermische decompositie. Neerslag is meestal zichtbaar op de droge filament indien deze zorgvuldig wordt geïnspecteerd.Om de geneesmiddelen aan een bij toe te dienen, plaatst u een vrijvliegende of vastgezette bij in de buis en bevestigt u voorzichtig het deksel met de draden naar buiten gericht. Zet vervolgens de stroombron 10 seconden aan en wacht nog 50 seconden tot de vervluchtigde verbinding volledig door de bij is opgenomen voordat u de bij verwijdert. Specifieke effecten op hersenprocessen kunnen eenvoudig worden verkregen na injectie in de thorax.Zo werden met deze techniek transcriptieblokkeerders toegediend om fasen van het geheugen te identificeren die genexpressie vereisten. Er werden selectieve en tijdsafhankelijke effecten op geheugentaken waargenomen. Diffusie van moleculen in de hemolymfe van de kop leidt tot snelle, dosisafhankelijke effecten die worden bereikt via ocellusinjectie.Bij bepaalde dosisconcentraties verminderden diffuus geconcentreerde allatostatinen de prestaties in een assay voor olfactorisch leren. Om de ruimtelijke en temporele eigenschappen van specifieke hersengebieden te testen, werden vastgezette bijen getraind in een olfactorisch PER-conditioneringsparadigma en vervolgens geïnjecteerd met procane in de calices van het mushroom body, of de verticale lobben. Wanneer de bijen daarna werden getest op herinnering, was de prestatie alleen verslechterd bij bijen die bilateraal waren geïnjecteerd.In een arena met meerdere voederstations werden bijen voorzichtig gevangen op het moment dat ze wilden landen bij een voederstation met één molar sucrose. De gevangen bijen werden behandeld met 100 microgram vervluchtigde cocaine freebase, wat resulteerde in verhoogd foerageren bij half molar voederstations, maar niet bij twee molar voederstations. Na het bekijken van deze video zou u een goed begrip moeten hebben van hoe u medicijnen dient toe te dienen aan vrijvliegende of vastgezette bijen, via injectie of vervluchting.Zodra deze technieken onder de knie zijn, kunnen ze in enkele uren gemakkelijk bij een groot aantal bijen worden uitgevoerd. Na deze procedure kunnen andere methoden, zoals proboscis extension conditioning, worden toegepast om aanvullende vragen over de neurobiologie van leren en geheugen te beantwoorden.

neuropharmacological-manipulation-restrained-free-flying-honey-bees

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

We laten zien hoe je een gedrags-farmacologie methode te implementeren in een appetitief olfactorische conditionering paradigma in de honingbijen (Apis mellifera) door systemische toediening van drugs. Deze methode maakt het mogelijk onderzoek naar de mechanismen die ten grondslag liggen aan leren en geheugen vorming in een eenvoudige en betrouwbare manier.

Behavioural Farmacologie in klassieke conditionering van de Proboscis Extension Response in Honingbijen ( Apis mellifera)

In dit protocol laten we zien hoe de conditie van de bijen aangewend om tactiele stimuli en de invoering van een 2D motion capture techniek voor het analyseren van de kinematica van gedetailleerde antennaal sampling patroon.

Tactiele Conditioning En Movement Analyse Van antennaal bemonsteringsstrategieën In Honey Bees (<em&gt; Apis mellifera</em&gt; L.)

In dit protocol beschrijven we twee strategieën die tegelijkertijd in honingbijen te onderdrukken twee genen (dubbel gen knockdown). Dan presenteren we hoe de proboscis extensie respons (PER) test om het effect van de dubbele gen knockdown op honingbij smaak perceptie bestuderen gebruiken.

RNAi-gemedieerde Dubbele Gene Knockdown en Smaak Perception Meting in Honingbijen (<em&gt; Apis mellifera</em&gt;)

Het Proboscis Extension Response (PER) conditioneringsprotocol, ontwikkeld voor de honingbij (Apis mellifera), biedt een ecologisch relevante en gemakkelijk kwantificeerbare manier om verschillende mechanismen van leren bij veel insectensoorten te bestuderen.

Een Proboscis Extension Response Protocol voor het onderzoeken van Behavioral Plasticiteit in Insecten: Toepassing op Basic, Biomedische en Landbouwkundig Onderzoek

Gelijktijdige extracellulaire langdurige opnames van twee verschillende hersengebieden neuropiles of twee verschillende anatomische traktaten werden opgericht in honingbijen. Deze opnamen kan de onderzoek temporele aspecten van neuronale verwerking in verschillende hersengebieden in het neuron en op het ensemble niveau in een dier gedragen.

Gelijktijdige Langdurige Recordings op Twee Neuronale Processing Fasen in Behaving Honingbijen

Een nieuwe gedragstest wordt beschreven voor het onderzoeken van de kortetermijn smaakgevoelens van de monddelen van vrij bewegende hommels (Bombus terrestris) ten opzichte van voedingsstoffen en gifstoffen in oplossing.

A Novel Behavioral Assay om Smaak reacties van individuele, vrij bewegende Bumble Bees Onderzoek (<em&gt; Bombus terrestris</em&gt;)

Hier beschrijven wij onze gedetailleerde protocol voor de voorbereiding van de single-cohort bijenvolken - een nuttig instrument voor het analyseren van de role-geassocieerde werknemer fysiologie. We beschrijven ook gedetailleerde protocollen voor de behandeling van werknemers met juveniele hormoon en ecdyson de betrokkenheid van deze hormonen in de regulatie van de werknemer gedrag en / of fysiologie te evalueren.

Voorbereiding van de Single-cohort Colonies and Hormoon Behandeling van werkbijen Analyseer Physiology geassocieerd met Rol en / of endocriene systeem

Het verlies van honingbijkolonies is een uitdaging om de bestuivingsdiensten te bestuderen. Huidige beschermingspraktijken van de bestuderende instanties garanderen een alternatieve aanpak om het contact van honingbijen tegen schadelijke pesticiden met behulp van afweermiddelen te beperken. Hier bieden we gedetailleerde methodes voor een visuele tracking protocol om afschermingen voor bijen te screenen.

Video Tracking Protocol voor Screen Deterrent Chemistries voor Honingbijen

Dit protocol worden de stappen beschreven voor het gebruik van de nieuwe software, SwarmSight, voor het bijhouden van de frame-voor-frame van insecten antenne en proboscis posities van conventionele web camera video's met behulp van conventionele computers. De gratis, open-source software verwerkt frames ongeveer 120 keer sneller dan mensen en presteert op beter dan menselijke nauwkeurigheid.

SwarmSight: Real-time Tracking van insecten antenne bewegingen en Proboscis extensie Reflex met een gemeenschappelijke voorbereiding en conventionele Hardware

Om te testen de remmende effecten van farmacologische agenten op phospholipase C (PLC) in verschillende gebieden van de hersenen van de honingbij, presenteren we een biochemische assay voor het meten van de PLC activiteit in die regio's. Deze bepaling zou kunnen zijn handig voor het vergelijken van PLC activiteit onder weefsels, alsook tussen de bijen verschillende gedragingen vertonen.

Detectie van Phospholipase C activiteit in de hersenen homogenaat van de honingbij

Hier gepresenteerd is een protocol om de CRISPR-Cas9 systeem te gebruiken voor het verminderen van de productie van een eiwit in de volwassen honingbij hersenen om antilichaam specificiteit te testen.

Anti-RDL en Anti-mGlutR1 Receptoren Antibody Testen in Honingbij Hersensecties met behulp van CRISPR-Cas9

Leer neurofarmacologische manipulatie van ingetogen en vrij vliegende honingbijen, Apis mellifera. Deze methoden omvatten orale toediening en injecties in de thorax, ocellus of ocellaire tractus.

Neurofarmacologische Manipulatie van ingetogen en vrij vliegende Honingbijen,

Meer video's verkennen